Agilent Poroshell 2 色谱柱应用文集 用于 HPLC 和 UHPLC 的 Agilent Poroshell 2 色谱柱
Agilent Poroshell 2 色谱柱 使实验室中的每一台 LC 和 LC/MS 工作更出色 我们因为它的耐用性能 而选择了 Poroshell 2 色 谱柱 Poroshell 2 色谱柱为普通的 HPLC 提供非凡的分析效率 并且显著提升 6 bar 和 2 bar UHPLC 的分析性能 该色谱柱在我们早期推出的 Poroshell 3 色谱柱的技术基础上更进一步 在对范围更广的小 分子和肽进行分析时 您可以获得比以往更高的通量和更好的分离度 它们的卓越性能如下 卓越的批次间重现性 Poroshell 2 色谱柱是由专利的一步多孔壳层工艺制造而 成 这极大地减少了色谱柱之间和批次之间的细微差异 Poroshell 2 色 谱 柱 拥 有 可 靠 的 卓 越 性 能 它已经成为我们实验室的 新 标准 对于我经常遇到的最复杂 的样品 Poroshell 2 色谱 柱为我节省了很多时间 Poroshell 2 就 是 我 要 找的色谱柱 来自 Poroshell 2 使用者的评论 与亚二微米色谱柱相媲美的分析速度和分离度 反压却较之降低了 5% 使 HPLC 和 UHPLC 的灵活性和效率达到新的水平 优异的峰形 尤其是在 ph 6-7 间 可获得更快 更准确的结果 较长的柱寿命 Poroshell 2 色谱柱使用标准的 2 µm 滤芯 可防止脏样品堵塞 多种键合相 C8 柱 C8 柱 苯基-己基柱等众多种类 不断增加的键合相系列实 现了方法开发的灵活性 查阅我们的网站获取最新信息 简单的方法转换及可扩展性 可扩展至 ZRBAX 键合相 实现世界各地实验室间 的高效率方法转换 UHPLC 保护柱通过延长 Poroshell 2 色谱柱寿命减少您的运行费用
目 录 前言...5 持久 快速的液相色谱 您的信心之选...6 食品安全 采用 Poroshell 2 色谱柱快速分析运动饮料中的水溶性维生素...36 采用 Poroshell 2 色谱柱快速分析鸡肉中的磺胺类药物残留...4 采用 Poroshell 2 色谱柱研究邓老凉茶颗粒的指纹图谱...45 蜂蜜中呋喃唑酮代谢物的液质联用技术确证方法优化 应用新型液相色谱柱去除基质干扰...48 使用 Poroshell 2 色谱柱同时测定食品中苯甲酸 山梨酸 脱氢乙酸 糖精钠的方法研究...52 Identification and determination of the major constituents in Deng's herbal teagranules by rapid resolution liquid chromatography coupled with mass spectrometry...56 使用配备 Agilent Poroshell 2 EC-C8 色谱柱的 Agilent 系列液相色谱快速分析磺胺类药物...6 采用配备 UV/Vis 二级管陈列和荧光检测器的 Agilent 29 Infinity LC 系统和 Agilent ZRBAX Poroshell 2 2.7 μm 色谱柱分析辛辣食物和食品中的辣椒碱类物质...68 Poroshell 2 SB-C8 管柱搭配 LC/MS, 快速分析茶饮...7 采用安捷伦 Bond Elut Plexa 萃取柱和 Poroshell 2 色谱柱结合 LC/MS/MS 分析苹果汁中的杀菌剂及其代谢物...8 采用安捷伦 Bond Elut PCX 固相萃取柱和 Poroshell 2 色谱柱对鱼肉中的孔雀石绿和结晶紫进行 LC/MS/MS 分析...87 Fast Separation of Synthetic/Artificial Food Colors on Agilent Poroshell 2 EC-C8...93 Aminoglycosides in Bovine Muscle Using Agilent Bond Elut Plexa SPE, an Agilent Poroshell 2 Column,and LC/Tandem MS...99 Aminoglycosides in Milk Using Agilent Bond Elut Plexa SPE, Agilent Poroshell 2, and LC/Tandem MS...5 Selectivity Comparison of Agilent Poroshell 2 Phases in the Separation of Butter Antioxidants... Fast Separation of Food Preservatives Using an Agilent Poroshell 2 EC-C8 Column...2 Fast Analysis of Fruit Juice Acids with an Agilent Poroshell 2 SB-Aq Column...24 药物分析采用安捷伦 Poroshell 2 色谱柱快速分析大鼠血浆中蟾蜍二烯内酯及其代谢物...3 采用安捷伦 Poroshell 2 EC-C8 色谱柱分析蜂蜜中的阿莫西林残留量...34 采用安捷伦 Poroshell 2 色谱柱快速分析氟替卡松丙酸酯...39 采用 Agilent 29 Infinity 液相色谱系统和 Agilent ZRBAX Poroshell 2 2.7 μm 色谱柱分析装饰或观赏鱼中的药物...43 使用 Agilent Poroshell 2 色谱柱快速分析现金上的违禁药物残留...45 将传统方法转移成使用安捷伦 Poroshell 2 色谱柱的快速方法进行人参分析...55 使用 Poroshell 2 EC-C8 管柱分析 Naproxen: 化繁为简的调整分析法...62 应用 Agilent Poroshell 2 SB-C8 色谱柱分析常见食品中的花青素...69 应用 Agilent Bond Elut Plexa PCX 与 Agilent Poroshell 2 对尿液中的 6- 乙酰吗啡进行 SAMHSA 标准的 LC/MS/MS 分析...76 应用 Agilent Bond Elut Plexa PCX 与 Agilent Poroshell 2 对尿液中的阿片类药物 ( 吗啡和可待因 ) 进行 SAMHSA 标准的 LC/MS/MS 分析...8 3
目 录 应用 Agilent Bond Elut Plexa PCX 和 Agilent Poroshell 2 对尿液中的苯环利啶进行 SAMHSA 标准的 LC/MS/MS 分析...89 应用 Agilent Bond Elut Plexa 和 Agilent Poroshell 2 对尿液中的 -nor-9- 羧基 -D9- 四氢大麻酚进行 SAMHSA 标准的 LC/MS/MS 分析...94 采用 Agilent Bond Elut Plexa PCX 和 Agilent Poroshell 2 色谱柱对全血中的丁丙诺啡和去甲丁丙诺啡进行 LC/MS/MS 分析...2 使用 Agilent Poroshell 2 色谱柱快速筛选 β- 受体阻滞剂的液相色谱分析方法...26 Analysis of Water Soluble Vitamins in Multivitamin Tablets Using Poroshell 2 EC-C8...2 Pharmaceuticals in Whole Blood Analyzed on Agilent Poroshell 2, with Modified Mini-Extraction for Sample Preparation...25 Fast Analysis of Zanthoxylum nitidum Using Agilent Poroshell 2 EC-8 Columns...224 SAMHSA-Compliant LC/MS/MS Analysis of Amphetamines in Urine with Agilent Bond Elut Plexa PCX and Agilent Poroshell 2...228 SAMHSA-Compliant LC/MS/MS Analysis of Benzoylecgonine in Urine with Agilent Bond Elut Plexa PCX and Agilent Poroshell 2...237 Faster LC Analysis of Notoginseng Total Saponins Using an Agilent Poroshell 2 EC-8...243 Analysis of Echinacoside and Verbascoside in Cistanche deserticola Chinese Medicine Using an Agilent Poroshell 2 EC-C8...247 Fast Screening Methods for Steroids by HPLC with Agilent Poroshell 2 Columns...25 LC/ELSD and LC/MS/MS of Cholesterol and Related Sterols on a Poroshell 2 Column...257 USP Analysis of Warfarin Sodium Tablets Using Agilent Poroshell 2 EC-CN and SB-C8 Columns...263 USP Analysis of Diphenhydramine and Pseudoephedrine Using an Agilent Poroshell 2 EC-CN Column...269 USP Analysis of Norethindrone and Mestranol Tablets with Agilent Poroshell 2 EC-CN and EC-C8 Columns...272 化工分析采用 Poroshell 2 色谱柱快速分析育发类化妆品中的 8 种违禁药物...28 采用 Poroshell 2 色谱柱快速分析 T 项目的中间体...284 应用配备 Agilent Poroshell 色谱柱的 Agilent 29 Infinity LC 在 2 min 内同时测定八种有机紫外线吸收剂...287 Fast Analysis of Hair Dyes Using an Agilent Poroshell 2 Bonus-RP Column by UHPLC and LC/MS/MS...295 环境分析 EPA 833A Analysis of Explosives Using Agilent Poroshell 2 EC-CN and EC-C8 Columns...32 生物分析将中国药典测定胰岛素的方法转换为使用 Agilent Poroshell 2 色谱柱的方法...38 使用 Agilent Poroshell 2 色谱柱最大限度地提高柱效...34 Hydrophilic Interaction Chromatography (HILIC) Using Agilent Poroshell 2 HILIC...322 4
前 言 在当今液相色谱分析中, 实现更快更有效的分析是一大热点也是大势所趋 Agilent Poroshell 2 填料采用安捷伦公司专利的制造工艺, 在实心核外包上表面多孔层, 能显著提高被分析物在固定相和流动相之间的传质, 使其在较低反压下实现快速高效的分离 Poroshell 2 填料平均总粒径为 2.7 µm, 由.7 µm 直径的实心核和.5 µm 厚的多孔外层组成 使用 Poroshell 2 填料可帮助您获得与亚二微米全多孔色谱柱相媲美的性能和比亚二微米填料低 4~5% 的反压 低的反压可以帮助您在常规液相上实现快速高效分离提供很大程度的可行性 上一版的 Poroshell 2 文集中部份应用充分展示了这一特点 : 即只需稍加改动, 即可将常规 5 µm 柱上的方法转换到 Agilent Poroshell 2 上, 为您节省大量实验时间和成本 分析得到了越来越广泛的应用, 与安捷伦的 Bond Elut 系列样品前处理产品一起成为安捷伦整体解决方案中的亮点, 用于体液 食品等复杂基质中药物和兽药残留的分析 希望本文集的出版, 能帮助大家更好地了解 Poroshell 2 表面多孔层色谱柱的特点, 并在日后工作中能充分利用以实现快速高效的实验室分析工作 作为上一版 Poroshell 2 应用文集的延伸, 本版文集整理收录了 2-23 年安捷伦公司及相关不同行业的用户使用 Poroshell 2 色谱柱的应用文章 行业应用包括 : 食品安全 环境分析 药物分析 化工分析和生物分析等热门领域 期间安捷伦公司一直致力于开发更多的 Poroshell 2 固定相以满足日益增长的不同类型物质的分析需求 您将在本版文集中看到更多类型固定相的应用, 如用 Poroshell 2 分离水果中的有机酸 用 Poroshell 2 EC- CN 分析炸药残留 Poroshell 2 Bonus RP, Phenyl- Hexyl 在抗氧剂分析中的应用, 以及 Poroshell 2 Hilic 的性能研究报告等最新的应用 本版文集收载的应用的另外一个特色是, 随着 Poroshell 2 的性能优势得到了越来越广泛的认可,Poroshell 2 色谱柱在复杂体系中痕量残留 5
低压条件下即可获得高柱效经过实际验证的柱间一致性这就是 Poroshell 2 色谱柱与众不同之处 安捷伦 Poroshell 2 色谱柱的关键特性是表面多孔微粒色谱柱 填料 Poroshell 2 填料由.7 µm 直径的实心硅胶核和.5 µm 厚的多孔外层组成 这种独特的配置能够使色谱柱在亚 3 µm 微粒背压 下实现亚 2 µm 微粒的所有性能优点.8 µm 全多孔 安捷伦 Poroshell 2 2.7 µm.5 µm.7 µm 孔径 2 Å, 小分子分离的理想之选.8 µm 2.7 µm 表面多孔层填料与亚二微米填料具有相似的性能 图中范德姆特曲线表明表面多孔层 2.7 µm 填料粒径的 Poroshell 2 色谱柱的理论塔板高度可以降低到与.8 µm 色谱柱相当, 从而获得相似的柱效 9 8 7 6 Agilent Poroshell 2 EC-C8, 3. x mm,2.7 µm,(uscfx9) 部件号 695975-32 Agilent ZRBAX Eclipse Plus C8, 3. x mm,.8 µm,(usuyb455) 部件号 959964-32 Agilent ZRBAX Eclipse Plus C8, 3. x mm,3.5 µm,(usuxv435) 部件号 95996-32 5 4 3 2 2 4 6 8 2 µ 6
Poroshell 2 填料如何制造 为了制造出最适合小分子分离的色谱柱, 我们彻底改进了表面多孔层填料技术 具体来说, 我们尽量减少生产过程中所需的步骤, 以确保填料和色谱性能达到最佳的重现性 第一步 制造内部实心核 Poroshell 2 色谱柱的填料内核具有非常光滑的表面和均一的.7 µm 粒径, 整体粒径分布集中 因此, 可以获得更紧实填充的柱床, 且能获得比全多孔填料更高的效率 全多孔填料和 Poroshell 2 填料的粒径分布对比 这张图表明 Agilent Poroshell 2 色谱柱最终填料粒径的分布最集中 这是内核填料粒径集中分布的直接结果 Agilent Poroshell 2 Agilent.8 µm RX SIL Agilent 3.5 µm RX SIL Agilent 5. µm RX SIL 分布集中的最终填料粒径是内核粒径集中分布的结果 实现了最小的扩散, 使表面多孔层色谱柱具有高柱效 填料粒径分布的标准是粒径 9/ 的比值应低于.5 由上述表中可见,ZRBAX 全多孔填料 ( 粒径为.8 µm,3.5 µm 和 5. µm) 都具有可接受的粒径分布 然而,Poroshell 2 填料具有比其他三种粒径高 25% 的集中粒径分布, 极大地改善了柱效 Agilent Poroshell 2 (2.7 µm) LN B6 Agilent ZRBAX (.8 µm) Agilent ZRBAX (3.5 µm) Agilent ZRBAX (5. µm) % 2.4 µm.67 µm 3.7 µm 4.59 µm 9% 2.85 µm 2.45 µm 4.44 µm 6.2 µm 9%/% 比率.6.47.45.35 如需了解更多安捷伦 Poroshell 2 色谱柱的信息, 请访问以下网址 : www.agilent.com/chem/poroshell2:cn 7
第二步 包覆多孔层 一些生产商通过包覆一层又一层的颗粒制造多孔层 然而在安捷伦, 我们只采用一步法, 即采用与制造传统的 ZRBAX 色谱柱相似的凝聚技术制造多孔层 这种独特的一步法工艺提高了产量, 使柱间重现性更好 第三步 应用键合相 安捷伦 Poroshell 2 固定相的类型已经扩展至能够匹配 ZRBAX 系列固定相, 在方法开发方面具备了更强的灵活性和可扩展性 参见下页中所有 Poroshell 2 固定相的详细信息 批次之间 年复一年的可重现分析性能 Poroshell 2 颗粒使用安捷伦发明的专利多孔颗粒制作工艺制成 不同于传统的多层化包覆,Poroshell 2 色谱柱使用一步式共凝聚工艺制造, 保证最终获得的颗粒更加均匀 色谱结果更加可靠 制造工艺越简单, 色谱柱一致性越好 Agilent Poroshell 2 EC-C8,3. x mm,2.7 µm 部件号 695975-92 来自 5 个不同的批次 从对五个批次之间的比较来看, 一步壳层工艺得到了高重现性的色谱柱 2 5 2 3 4 B5 分钟 5 2 3 4 B8 分钟 5 5 2 3 4 B4 分钟 5 5 2 3 4 B256 分钟 22 5 5 2 3 4 B24 分钟 8
各种键合相提供灵活的选择性 Poroshell 2 色谱柱与安捷伦业界领先的 ZRBAX 色谱柱系列 来自同一个生产工厂 Poroshell 2 色谱柱与所有 ZRBAX 色 谱柱所使用的键合填料相呼应 能够实现世界各地实验室间更 简单的方法转换并提供确定的可扩展性优势 提供各种固定相 完善您的分离 Poroshell 2 EC-C8 和 Poroshell 2 EC-C8 封端保证最佳峰形 此 类键合相应是您大多数分离的首选 包括使用液质兼容流动相的肽谱分析 我们推荐 您首先选择 C8 固定相 然后再使用对各种样品保留较弱的 C8 固定相 Poroshell 2 SB-C8 和 Poroshell 2 SB-C8 不封端用于更大的替代 选择性 这些键合相在低 ph ph -2 条件下能够表现出最佳性能和最长柱寿命 需要注意的是 许多现有使用 ZRBAX SB-C8 色谱柱的 USP 方法都能够转移到 C8 固定相上 Poroshell 2 Phenyl-Hexyl 封端 当加强 π-π 相互作用时 这种固定相可 以提供对芳香族化合物的特殊选择性 Poroshell 2 SB-Aq 不封端 这种专利固定相是极性化合物分离的理想选择 并可用于高水性条件 Poroshell 2 Bonus-RP 封端 这种烷基酰胺固定相对大量分离能产生正交 结果 并有助于分离难分离化合物 Poroshell 2 亲水相互作用色谱 HILIC 色谱柱 它们保留并分离小 极性分析物的能力使得这些色谱柱迅速普及 同时它们也提供了液质应用的高质谱灵 敏度 Poroshell 2 EC-CN 色谱柱 这种氰基固定相与我们的 ZBRAX Eclipse XDB-CN 固定相非常相似 为极性化合物正相和反相的 维和 2 维分析提供了替代的 选择性 以及更多 查阅我们的网站获得键合相的最新列表 如需了解更多安捷伦 Poroshell 2 色谱柱的信息 请访问以下网址 www.agilent.com/chem/poroshell2:cn 9
Agilent Poroshell 2 EC-C8 和 Poroshell 2 SB-C8 为优化分离提供不同的选择性 Agilent Poroshell 2 SB-C8,3. x mm,2.7 µm 部件号 685975-32 5 流动相 : 35% 水,65% 乙腈 流速 : 温度 : 3 ºC ml/ 分钟 4 质谱采集 : 动态 MRM 化合物母离子碎裂电压 花生四烯乙醇胺 (AEA)348 35 2 3 棕榈酸乙醇胺 (PEA)3 35 响应 (%)vs. 采集时间 ( 分钟 ) 2- 花生四烯酸甘油酯 (2-AG)379 35 油酰乙醇胺 (EA)326 35 质谱离子源 : Agilent Poroshell 2 EC-C8,3. x mm,2.7 µm 部件号 695975-32 气体温度 : 35 ºC 气体流量 : 2 升 / 分钟 5 雾化器 : 4 psi 毛细管电压 : 4 V 分析 :. 花生四烯乙醇胺 (AEA) 2. 2- 花生四烯酸甘油酯 3. 杂质 4. 棕榈酸乙醇胺 (PEA) 5. 油酰乙醇胺 (EA) 响应 (%)vs. 采集时间 ( 分钟 ) 4 2 3 Poroshell 2 EC-C8 色谱柱对非极性化合物的快速分析保留较弱 Agilent Poroshell 2 EC-C8,3 x 5 mm,2.7 µm 部件号 699975-32 流动相 : 6% 乙腈,4% 水 3 25 流速 :.85 ml/ 分钟 温度 : 26 ºC 2 5 检测波长 : 样品 : 254 纳米 2 µl RRLC 校验样品 ( 部件号 588-6529), 烷基苯酮 5.5.5 2 2.5 3 3.5 分钟 Agilent Poroshell 2 EC-C8,3 x 5 mm,2.7 µm 部件号 699975-36 3 25 2 5 5.5.5 2 2.5 3 3.5 分钟
4 种不同 Poroshell 2 固定相的选择性变化 苯基 - 己基固定相完成了 8 种类固醇的最 佳分离, 提供了 C8 柱及 C8 柱的替代选 择性, 并为这 8 种化合物提供更快速 更 干净的基线分离 色谱柱 : 流动相 : 流速 : 温度 : 25 ºC 检测波长 : 样品 : 梯度 : Poroshell 2,2. x mm, 2.7 µm A:.% 甲酸 B: 甲醇 +.% 甲酸.4 ml/min 26 nm 8 种类固醇 4-8% 甲醇 /4 min 多种可选固定相让您掌控选择性 5 5 5 5 5 样品 :. 氢化可的松 2. B 雌二醇 3. 雄甾二烯 -3,7- 二酮 4. 睾酮 5. 乙烯雌二酮 6. 雌酮 7. 醋炔诺酮 8. 孕酮 2 4 6 8 2 5 5 5 Poroshell 2 EC-C8 Poroshell 2 SB-C8 2 4 6 8 2 3 2,5 6 4 7 2 4 6 8 2 Poroshell 2 Phenyl-Hexyl Poroshell 2 Bonus-RP 3 2,5,6 3 4 7 2 5 6 8 4 7 3,2 7,8 6,4 2 4 6 8 2 5 8 8 分钟分钟分钟分钟 b- 受体阻滞剂的分析 :Poroshell 2 固定相的比较 对 b- 受体阻滞剂挑战性的分析证明了不 同的选择性可以产生不同的结果 总的来说,Bonus-RP 固定相提供了最佳峰形和分离度 ; 这对纳多洛尔尤其适用, 它在 C8 和苯基 - 己基固定相中呈现分裂峰 3 2-2 4 6 8 2 3 2 Poroshell 2 Bonus-RP Poroshell 2 Phenyl-Hexyl 2 3 4 2 5-2 4 6 8 2 3 7 5 6 4 样品 :. 阿替洛尔 2. 心得乐 3. 纳多洛尔 4. 美托洛尔 7 5. 醋丁洛尔 6. 心得安 7. 阿普洛尔 6 分钟 分钟 色谱柱 : Poroshell 2,2. x mm, 2.7 µm 流动相 : A: mm NH 4 C 2,pH 3.8 B: 甲醇 流速 :.4 ml/min 温度 : 4 ºC 检测波长 : 26 nm 样品 : b- 受体阻滞剂 梯度 : % B 到 3% B/2 min 3 2 6 2 5 3 4 7-2 4 6 8 2 3 2 - Poroshell 2 EC-C8 Poroshell 2 SB-C8 2 5 3 4 6 7 分钟 如需了解更多安捷伦 Poroshell 2 色谱柱的信息, 请访问以下网址 : www.agilent.com/chem/poroshell2:cn
标准的高效液相色谱是否能实现快速液相色谱 / 超高压液相色谱的性能 安捷伦 Poroshell 2 色谱柱能够实现 通过 Poroshell 2 色谱柱 能够使您在高效液相色谱的压力 低 于 4 bar 下实现亚 2 µm 快速液相色谱 / 超高压液相色谱柱 柱效的 8% - 9% 或更多 这种在低压下快速分离的能力可以极大程度地提高效率 使用 您实验室中现有的 HPLC 系统 使您用较少的运行时间分析更多 的样品 举例如下 而且 您可以随时将方法无缝对接轻松转 换到所选择的安捷伦 2 Infinity 系列液相色谱仪器上 甚至获 得更高的效率 RRLC 校验样品 部件号 588-6529 加标 5 µl 2 mg/ml 硫脲于水 / 乙腈 65:35 溶液 9.753 6.273 4.32 Agilent Eclipse Plus C8 3. x mm.8 µm 部件号 959964-32 N = 27295Ljუ = 386 bar 2.5 5 2 3.4 样品 8.28 二极管阵列检测 波长 =254, 4 纳米 参比波长 = 36, 纳米 7.5 5.28 26 ºC 检测器 5 3.494 温度 2.75 4 µl 2.48 进样量 2.5 >.8 µm 色谱柱效率的 9%.275.58 ml/ 分钟.865 6% 乙腈 4% 水.649 流动相 N = 2553Ljუ = 82 bar 2.86 压力的 5% 流速 2.223.58.646 2 色谱柱上的压力仅为.8 µm 色谱柱.48 9% 以上的效率 也请注意 Poroshell 2.6 色谱柱可以提供相当于.8 µm 色谱柱.756 对于中性烷基苯酮样品 Poroshell 2 Agilent Poroshell 2 EC-C8 3. x mm 2.7 µm 部件号 695975-32.826 较小压力下的超高压液相色谱效率 7.5 2.5 ݴ ዓ
选择 Agilent Poroshell 2 使 HPLC 的效率提高 分析此软饮料成分,Poroshell 2 色谱 柱达到 : 亚 2 µm 色谱柱柱效的 9% 3.5 µm 色谱柱柱效的两倍 Poroshell 2 色谱柱压力低于 4 bar, 而亚二微米色谱柱压力高于 4 bar 使用甲醇流动相时达到低反压是非常有意义的, 因为甲醇比乙腈更容易产生压力 Agilent Poroshell 2 EC-C8,3. x mm,2.7 µm 部件号 695975-32 3 2 3 2 N = 23283 压力 = 34 bar 2 3 4 5 6 Agilent RRHT Eclipse Plus C8,3. x mm,.8 µm 部件号 959964-32 N = 25364 压力 = 456 bar 色谱柱 : 3. x mm,2.7 µm 流动相 : 65% A:.2% 甲酸 35% B: 甲醇等度 流速 :.5 ml/min 进样量 : µl 温度 : 26 ºC 检测 : UV, 22 nm 2 3 4 5 6 7 Agilent Rapid Resolution Eclipse Plus C8,3. x mm,3.5 µm 部件号 95996-32 N = 896 压力 = 53 bar 25 2 5 5 2 3 4 5 6 7 Page 7 样品 :. 糖精 2. 咖啡因 3. P- 羟基苯甲酸 4. 阿斯巴甜 5. 脱氢乙酸 6. 苯甲酸 如需了解更多安捷伦 Poroshell 2 色谱柱的信息, 请访问以下网址 : www.agilent.com/chem/poroshell2:cn 3
为什么使用保护柱 没有保护住 安装简便 保护柱能延长分析柱寿命 节 约成本 流动相 A.% 甲酸的水溶液 B 乙腈 流速.65 ml/min 梯度 % B 保持 2 min 2 min 内提高到 45% B 进样量 µl 温度 23 ºC 检测 Sig = 254 4 nm; Ref = ff 仪器 Agilent 2 系列 RRLC 样品制备 ml 水 +.333 ml Similac + ml. mg/ml 磺胺氯哒嗪和磺胺甲基异恶唑 峰宽 (min).3.2 更换分析柱..4.3 2 4 6 8 2 4 8 2 4 峰宽 (min) 进样次数.2..4.3 峰宽 (min) 然而 您需要针对您的应用进行一次精 确的测定 这里所示为使用 3: 的水 / Similac 含. mg 磺胺氯哒嗪和磺胺甲 基异恶唑 进行累积寿命测试.4.2 有保护住 2 4 6 进样次数 8 次进样后保护柱失效 - 保护了分析柱. 仅需更换较 便宜的保护柱.4.3 峰宽 (min) 安装一个较便宜的保护柱 特别是当 分析较脏样品时 可防止颗粒物和强 吸附物质对色谱柱的损害 作为一种保护 当塔板数 压力或分离度变化超过 % 时 您需要更换保护柱 分析柱在 8 次进样后失效 2 4 6 8 2 4 2 4 进样次数.2 磺胺氯哒嗪 PW 磺胺甲基异恶唑 PW. 2 4 6 8 进样次数 磺胺氯哒嗪 PW 安捷伦快速保护柱使快速液相色谱应用保持超高速分析 用于超高压液相色谱的安捷伦快速保护柱在高压下坚固耐用并且可靠 同时与安捷伦快速液相色谱及超高压液相色谱柱兼容 无需特殊工具就 可以安装 观看在线视频学习如何轻松安装安捷伦快速保护柱 请查看 www.agilent.com/chem/poroshell2:cn 4 磺胺甲基异恶唑 PW
高分离度液质联用系统和液相色谱 - 串联质谱系统的耐用选择 安捷伦 Poroshell 2 色谱柱使您的液质联用系统和液相色谱 - 串联质谱系统工作更加出色 它们的多孔层和实心核限制了扩散距离 提高了分离速度, 而窄粒径分布提高了柱效和分离度 其它优势包括 : 快速和有效的分离重要的同重化合物 能够更好的分离邻近洗脱峰 一次分析分离更多化合物 液质分析准确度和确定性都得到改善 标准的 2 µm 滤芯防止脏样品堵塞 使用 Poroshell 2 EC-C8 液相色谱 - 串联质谱色谱柱分离胆固醇和其它甾醇 值得注意的是, 即使胆固醇与 7- 烯胆甾烷 醇的比例在 2:, 也能够获得足够的分 离, 这对于有效定量很关键, 因为这两种化合物具有相同的分子量 样品 :. 骨化二醇 2. 链甾醇 3. 5- 胆甾烯 -3- 酮 4. 7- 烯胆甾烷醇 5. 胆固醇 6. 菜油甾醇 7. 豆甾醇 8. 胆甾烷醇 9. 谷甾醇 色谱柱 : Poroshell 2 EC-C8, 3. x mm,2.7 µm 流动相 : 8% 乙腈 /2% 甲醇 流速 :.6 ml/min 进样量 : 2 µl 温度 : 2 ºC 检测 : APCI, 阳离子 如需了解更多安捷伦 Poroshell 2 色谱柱的信息, 请访问以下网址 : www.agilent.com/chem/poroshell2:cn 5
安捷伦 Poroshell 2 EC-C8 色 谱柱对维他命 D2/D3 的 维分离 Poroshell 2 实现了对血浆中维他命D2/ D3 非常快速的液相色谱-串联质谱分析 在色谱分离的前提下比较了不同等度条件 下的分离速度 色谱柱 Poroshell 2 EC-C8 2. x 5 mm 2.7 µm 流动相 A 水 +.% 甲酸 B 甲醇 +.% 甲酸 流速.5 ml/min 进样体积 µl 温度 5 ºC 自动进样器温度 5 ºC 针头清洗 冲洗端 5:25:25 异丙醇 : 甲醇 : 水 5 s 等度分析 A 2% B 8% 分析时间 5. min x4.9.8.7.6.5.4.3.2..9.8.7.6.5.4.3.2. +ESI MRM Frag=6.V CID@4. (43.3 -> 395.2) VD3-2-.d 85% 甲醇 3 min..2.3.4.5.6.7.8.9..2.3.4.5.6.7.8.9 2 2. 2.2 2.3 2.4 2.5 2.6 2.7 2.8 2.9 3 响应vs.采集时间 min x3 7.5 7 6.5 6 5.5 5 4.5 4 3.5 3 2.5 2.5.5 +ESI MRM Frag=6.V CID@4. (4.3 -> 383.2) VD3-2-3.d * 2.7 25-H 维他命 D3 8% 甲醇 5 min 25-H 维他命 D2..2.3.4.5.6.7.8.9..2.3.4.5.6.7.8.9 2 2. 2.2 2.3 2.4 2.5 2.6 2.7 2.8 2.9 3 响应vs.采集时间 min 耐用性能 - 即使进样 3 次以上 这个测试证明了 Poroshell 2 色谱柱卓 分析物 %RSD RT 分析物 %RSD RT 分析物 %RSD (RT) 越的长效性 在 3 次进样后仅有较小 吗啡.7 哌替啶.4 三唑仑 的性能损失 稳定性由保留时间的一致性 可待因.4 唑吡坦.3 纳曲酮. 来表示 %RSD 氢可酮.4 芬太尼. 氯氮. MDMA.3 EDDP. 去甲地西泮. 诺芬太尼.2 硝西泮. 丁丙诺啡.3 海洛因.2 丙氧芬. 古柯乙烯.2 哌甲酯.2 丁丙诺啡.3 - 去 -9- 羧基 -delta9-thc 6
安捷伦 Poroshell 2 色谱柱帮助您提高超高压液相色谱方法的灵活性 因为 Agilent Poroshell 2 色谱柱可以耐受 6 bar 的压力, 您 可以将它成功用于您的 UHPLC 方法中 可以使用很长的色谱 柱 使用更高的流速, 以及粘性溶剂 Agilent Poroshell 2 EC-C8 色谱柱用于在 UHPLC 上的快速分离 本示例展示了使用产生较高压力流动相的快速分离 在上面色谱图中, 使用 3. mm 内径色谱柱, 流速为.5 ml/min, 压力低于 4 bar 这是一个典型的液相色谱分离 虽然上图的分离速度已经很快 ( 仅不到 6 分钟 ), 但是在中图和下图中显示您仍可以通过增加流速使运行时间缩短到 3 分钟以下 这些更快的分析需要 4-56 bar 的压力 ; 采用安捷伦 2 Infinity 系列的灵活升级选件能够帮助您充分发挥 UHPLC 的优势 3 2 3 2 2 2 4 6 2 4 2 4 流速 =.5 ml/min, P = 3 bar,n BA = 24597 流速 =.75 ml/min, P = 433 bar 流速 =. ml/min, P = 559 bar P P P 粘性更大的溶剂, 例如甲醇, 可用在 HPLC 或 UHPLC 的工作压力下 色谱柱 : 流动相 : 流速 : 进样量 : µl 柱温箱 : 26 ºC 检测器 : Agilent Poroshell 2 EC-C8, 3. x mm,2.7 µm 部件号 695975-32 65% A:.2% 甲酸 35% B: 甲醇等度洗脱 采用不同流速 检测波长 :22, 4 纳米 ; 参比 = 关 样品 :. 糖精 2. 咖啡因 3. P- 羟基苯甲酸 4. 阿斯巴甜 5. 脱氢乙酸 6. 苯甲酸 如需了解更多安捷伦 Poroshell 2 色谱柱的信息, 请访问以下网址 : www.agilent.com/chem/poroshell2:cn 7
. 在 HPLC 或 UHPLC 上使用安捷伦 Poroshell 2 短柱和长柱采用 EPA 833 方法分离的对比 您可以灵活选择较长的 Poroshell 2 色 谱柱实现高分离度分离 从示例中可以看出随着色谱柱逐渐加长, 分离度得到改善, 压力逐渐增加 ( 最长的色谱柱可达到 UHPLC 的工作压力 ) 请注意分离度是受柱长的影响, 而不是柱填料批次的影响, 进一步证明了 Poroshell 2 色谱柱卓越的重现性 25 2 5 5-5 25 2 5 5-5 - 4 3 2 5 mm 长压力 =235 bar SN USCFZ7, 批号 B6 2 4 6 8 2 4 6 8 2 4 6 8 2 4 6 8 分钟 mm 长压力 =358 bar SN USCFX69, 批号 B34 分钟 5 mm 长压力 =568 bar SN USCFW49, 批号 B22 2 4 6 8 2 4 6 8 对于任何分离, 柱长 分离度和分析时间的平衡都是至关重要的 分钟 色谱柱 : Poroshell 2 EC-C8,2.7 µm 流动相 : 25% 甲醇,75% 水 流速 : ml/ 分钟 温度 : 44 ºC 串接 Agilent Poroshell 2 系列色谱柱在 HPLC 和 UHPLC 上的工作压力下都可提供最高柱效 因为 Poroshell 2 的优势之一是它的低反压, 您可以串接色谱柱以达到单位时间内的最佳分离效果 这种方法使复杂的样品得到更好的分离 峰号峰号化合物塔板数 k 2 苯乙酮 42.29 3 苯 993.46 4 甲苯 48.65 三个安捷伦 Poroshell 2 EC-C8,4.6 x 5 mm,2.7 µm 色谱柱串接实现超高效分离 部件号 693975-92 7.5 5 流速 : ml/ 分钟塔板数 ~83( 峰 4) 2.5 最大压力 : 36 bar 7.5 5 2.5 2 3 4 5 6 流速 :.5 ml/ 分钟 7.5 5 塔板数 ~3( 峰 4) 2.5 最大压力 : 478 bar 7.5 5 2.5 2 3 4 5 6 7.5 5 流速 :.8 ml/ 分钟塔板数 ~5( 峰 4) 2.5 最大压力 : 573 bar 7.5 5 2.5 2 3 4 5 6 流速为.8 ml/ 分钟柱效最高 8
止痛药中 种常见化合物在安捷 伦 Poroshell 2 EC-C8 色谱柱 上的快速分离 在本例中使用 Poroshell 2 色谱柱 通 过提高流速加快 种常见镇痛化合物的 4 6 5 最大压力 54 Bar 4 3 分离 5 2 2,3 7 9 6 8 色谱柱 流动相 2 3 4 Poroshell 2 EC-C8 4.6 x mm 2.7 µm 部件号 695975-92 A 水 +.% 甲酸 B 乙腈 流速 3.5 ml/ 分钟 进样量 5 µl 温度 4 ºC 检测器 二极管阵列检测器 波长 254 纳米 5 6 7 分钟 样品. 对乙酰氨基酚 2. 咖啡因 3. 2- 乙酰氨基酚 4. 乙酰胺 5. 对乙酰氨基苯乙醚 6. 舒林酸 7. 吡啶苯噻酰胺 8. 托美汀 9. 酮洛芬. 二氟苯水杨酸. 扶他林 这些信息丰富的选择指南是您实验室的宝贵资源 安捷伦高效液相色谱柱选择指南已经更新 安捷伦 BioHPLC 色谱柱选择指南包括生 并扩展了内容 为安捷伦色谱柱系列中所 物分子分离的方法开发 溶剂选择 流 有小分子色谱柱提供了简介和订购细节 动相改性和优化的建议和技巧及丰富的 也包括快速液相色谱 / 超高压液相色谱和 示例 方法开发的技巧指导 下载请访问 www.agilent.com/chem/getlcguide 现在下载 请访问 www.agilent.com/chem/getlcguide 如需了解更多安捷伦 Poroshell 2 色谱柱的信息 请访问以下网址 www.agilent.com/chem/poroshell2:cn 9
方法转换化繁为简 许多在较长的 5 µm C8 色谱柱上开发的方法能够快速轻松地转 移到较短的 Poroshell 2 色谱柱上应用 USP 规定的新变化使 得从传统方法向较新技术 如安捷伦 Poroshell 2 色谱柱 转 变更为容易 它能明显增加色谱通量并降低费用 在下面几页中 我们将向您展示包括 USP 方法的五种分离在 Poroshell 2 色谱柱上是如何重现的 以及对相同的分离如何 实现比 5 µm 色谱柱快 3-5 倍的分离速度 5 5 23.76 2 25 5 2 25 Agilent Poroshell 2 EC-C8 4.6 x mm 2.7 µm 部件号 695975-92 ml/ 分钟 色谱柱 如图中所见 分离是完全相同的 而时间却 从 3 分钟锐减到 7 分钟 效率大幅提升 3 ݴ ዓ 7.37 4.558 4.558 5.45 3.867 5.92 4.437 5 5.45 2.3 2.66 2.3 5.92 4.437 5 5 325 bar 3 ݴ ዓ 时间 2 3.2 3.867 2 2.89 25 5 流速 2.66 2 325 bar 2.89 25.79 转换 同时保持压力低于 4 bar.79 系列仪器 说明即使是梯度方法也可以轻松 29.29 2.687 5 度洗脱时间 所有条件保持不变 请注意两次分离均使用老款的 Agilent 29.29 5.248 6.5 6.435.596 2.674.6.596 2 7.37 色谱柱上 除了需要调整较短色谱柱上的梯 bar 23.76 4 %B 8 33 33 时间 33 35 2.687 转移到 mm 长的 Poroshell 2 EC-C8 6.5 6.435 6 2 流速 5.248 Eclipse Plus C8 25 mm 5 µm 色谱柱被 bar 2.674 8 4.6 8 6 9.72 在这个例子中 一个复杂的方法从 ZRBAX Agilent ZRBAX Eclipse Plus C8 4.6 x 25 mm 5 µm 部件号 95999-92 ml/ 分钟 色谱柱 9.72 安 捷 伦 Poroshell 2 和 ZRBAX 色谱柱间转换方法以节约时间或增强 扩展性 5 样品. 磺胺嘧啶 2. 磺胺噻唑 3. 磺胺吡啶 4. 磺胺甲嘧啶 5. 磺胺二甲嘧啶 6. 磺胺二甲恶唑 7. 磺胺甲氧基哒嗪5 8. 磺胺氯达嗪 9. 磺胺甲基异恶唑. 磺胺二甲氧嗪 2 ݴ ዓ 流动相 甲酸 A 水 +.% ݴ ዓ B 乙腈 +.% 甲酸 %B 8 33 33
分析萘普生片的 USP 方法 在 HPLC 的工作压力下 使用 Agilent Poroshell 2 色谱柱的分析速度 提高 4.5 倍 对 萘 普 生 的 分 离 证 明 了 使 用 Poroshell 2 色谱柱不需要改变流速和流动相 就可 方法要求 N > 4 Rs 大于.5 Agilent Eclipse Plus C8 4.6 x 5 mm L 5 µm 部件号 959993-92 2 µl 进样 分离度 =4.9 N= 4885 3 25 N= 2554 2 5 5 2 3 4 5 6 以轻松实现方法转换 上图所示为安捷伦 Eclipse Plus C8 色谱 柱上的 USP 分析 实现了尖峰 3 倍所需 效率以及 5 的分离度 中图 使用安捷伦 Poroshell 2 EC-C8 N= 246 N= 2676 25 2 8 9 分钟 Agilent Poroshell 2 EC-C8 4.6 x mm L 2.7 µm 部件号 695975-92 3.67 µl 进样 分离度 =7. 压力 =238 bar 2 倍的速度 3 7 5 5 色谱柱 mm 长 获得了更好的柱 2 3 4 5 6 7 效和分离度 速度比原始方法快了两倍 并且压力仅为 238 bar 这种等度方法是 HPLC 的极好选择 下图 使用安捷伦 Poroshell 2 EC-C8 色谱柱 5 mm 长 仍然满足效率和分离 3 N= 28 25 与 HPLC 方法完全兼容 N= 25 2 5 5 度的需要 但分析速度比使用 5 µm 色谱 柱快 4.5 倍 而且 压力仅为 33 bar Agilent Poroshell 2 EC-C8 4.6 x 5 mm L 2.7 µm 部件号 699975-92 6.7 µl 进样 分离度 =2.6 压力 =33 bar 4.5 倍速度 2 3 4 5 6 7 分钟 Agilent Poroshell 2 色谱柱是在 HPLC 工作压力下快速分析的卓越之选 流动相 5:49: 乙腈 : 水 : 乙酸 流速.2 ml/min 样品. 萘普生 2. 苯丁酮 参见我们的视频教程 学习如何实现萘普生方法向 Poroshell 2 色谱柱的方法转换 优化您的 LC 系统 获得最佳结果 请访问如下网址 www.agilent.com/chem/poroshell2video:cn 如需了解更多安捷伦 Poroshell 2 色谱柱的信息 请访问以下网址 www.agilent.com/chem/poroshell2:cn 2
快速低压分析这里, 分析了 种非营养食品及饮料添加剂, 使用安捷伦 Poroshell 2 EC-C8 色谱柱替换 5 µm ZRBAX Eclipse Plus C8 色谱柱, 方法转换的结果是分析时间从 3 min 以上减小到 3 min 以下 溶剂消耗减少 8% 以上, 关键组分的分离度从.8 提高到 3. 5 µm Agilent ZRBAX Eclipse Plus,P max = 2 bar 2 5 5 流动相 A:2 mm 乙酸胺,pH 4.8 B: 乙腈 流速 :. ml/min 温度 : 3 ºC 梯度 : 4% B 在 2 min 内升到 52% B 关键物质对 Rs.79 2 4 6 8 2 分钟 Agilent Poroshell 2,P max = 356 bar 4 流动相 A:2 mm 乙酸胺,pH 4.8 B: 乙腈 流速 :.85 ml/min 温度 : 3 ºC 梯度 : 4% B 在 2. 分钟内升至 52% 2 关键物质对 Rs 3. 2 分钟 Poroshell 2 对辛伐他汀的快速分析 分析辛伐他汀片的 USP 方法很容易转换 为使用 Poroshell 2 色谱柱的方法, 前者的分析时间需要 分钟, 而使用 Poroshell 2 色谱柱比之快 5 倍 请注 意, 我们使用了 75 mm 的 Poroshell 2 EC-C8 色谱柱代替 25 mm 的长色谱柱, 柱长缩短了 7%, 这仍可以看作一种方法 调整 Poroshell 2 EC-C8 固定相与其 他 USP L 固定相相似, 因此得到的结果 近似, 但速度更快 Agilent ZRBAX Eclipse Plus C8,4.6 x 25 mm,5 µm 部件号 95999-92 4 流速 :.5 ml/ 分钟,5 µm 色谱柱 9.97 35 2.8 ml/ 分钟,2.7 µm 3 Poroshell 2 色谱柱 25 2 5 5 4.457 35 3 25 2 5 5 流动相 : 温度 : 45 ºC 检测器 : 2 4 6 8 Agilent Poroshell 2 EC-C8,4.6 x 75 mm,2.7 µm 部件号 697975-92 2 分钟 65% 乙腈 35% 3.9 克 / 升磷酸氢钠 (ph=4.5) 二极管阵列检测器, 检测波长 =238, 8 纳米参比波长 =36, 纳米 USP 要求 5 µm (.5 ml/min) 分钟 2.7 µm (2.8 ml/min) T R n/a 9.97.457 k > 3. 5.962 5.22 N > 45 6939 4439 T f < 2..9. 22
使用 Poroshell 2 HILIC 色谱柱对吗啡及其代谢物的分离 越来越多的实验室开始在药物发现和开发的早期使用 HILIC, 原因如下 : 获得质谱兼容性 提高极性化合物及其极性更大的降解产物的保留性 提高液质分析的灵敏度 吗啡及其代谢物的分离是快速 有效的 HILIC 液质联用方法的一个示例 这里可以看到, 作为一种保留性能较差的高水性反相方法,Poroshell 2 HILIC 色谱柱使这些极性化合物在 2 min 以内得到完全分离, 并且具有完美的峰形和效率 Agilent Poroshell 2 HILIC,2. x mm,2.7 µm x.9.8.7.6.5.4.3.2. 2 + TIC SIM Morphine7.d 2..2.3.4.5.6.7.8.9..2.3.4.5.6.7.8.9 2 2. 2.2 2.3 2.4 2.5 2.6. 去甲吗啡 2. 吗啡 3. M6G 4. M3G 响应 (%)vs. 采集时间 (min) 流动相 : A: mm NH 4 HC 2 ph 3.2 B: 乙腈, mm NH 4 HC 2, ph 3.2(9:) 流速 :.8 ml/min 温度 : 25 ºC 压力 : 7 到 55 Bar 系统 : Agilent 29 和 64 QQQ 3 4 时间 %B.44.93 55 使用 2. x mm,2.7 µm Poroshell 2 HILIC 色谱柱分析维他命 B 及其相关化合物 HILIC 避免了使用己烷磺酸等离子对试剂, 这种试剂被普遍用于分离维他命 B 所用的流动相中 HILIC 也提高了液质分析的兼容性和保留性 Agilent Poroshell 2 HILIC,2. x mm,2.7 µm 2 x + TIC SIM Vitamin2.d.95.9.85.8.75.7.65.6.55.5.45.4.35.3.25.2.5..5 2 3.5..5.2.25.3.35.4.45.5.55.6.65.7.75.8.85.9.95.5..5.2.25.3.35.4.45.5.55.6.65.7 响应 (%)vs. 采集时间 (min) 4. 4- 氨基苯甲酸 2. 烟酰胺 3. 核黄素 4. 烟酸 流动相 : 乙腈 mm NH 4 HC 2 ph 3.2(9:) 流速 :.7 ml/min 温度 : 25 ºC 压力 : 24 Bar 系统 : Agilent 29 和 64 QQQ 如需了解更多安捷伦 Poroshell 2 色谱柱的信息, 请访问以下网址 : www.agilent.com/chem/poroshell2:cn 23
安捷伦 Poroshell 2 色谱柱 日常问题强有力的解决之道 2 µm 色谱柱入口筛板可耐受最脏的样品 亚二微米填料提供分析速度和分离度的极大优势 但是由于色谱柱入口使用.5 µm 的筛 板很容易被脏样品堵塞 Poroshell 2 色谱柱使用了标准的 2 µm 筛板解决了这个问题 有效地防止了脏样品 包括未过滤的血浆 的堵塞 Poroshell 2 色谱柱的碱性化合物样品负载能力可以与亚二微米色谱柱 相媲美 非多孔小粒径填料能为样品提供相互作用的比表面积很小 限制了载样量 而 Poroshell 2 色谱柱采用较大的比表面积的设计 极大地提高了样品负载能力 实际上 即使对 于最难分离的碱性化合物 Poroshell 2 色谱柱的负载能力也可以与.8 µm 色谱柱相 媲美 理想峰形确保最精确的分析结果 与其他表面多孔层色谱柱相比 Poroshell 2 色谱柱能提供优异的峰形 尤其在 ph 为 6-7 时 Agilent 和 2 系列液相色谱系统可轻松优化为适用 Poroshell 2 色谱柱 Poroshell 2 色谱柱的内在性质 使其成为大多数 HPLC 和 UHPLC 仪器的理想色谱柱 包括新的 2 Infinity 系列液相色谱仪 对 和 2 系列液相色谱系统 仅需对配 置稍微调整 如流速 连接管线长度及内径 流通池体积 检测器峰宽设置等 即可得到 优异结果 而压力更低 效率更高 24
Agilent Poroshell 2 色谱柱的 2 µm 筛板, 有效防止堵塞即使检测 脏 样品, 如未过滤的血浆, Poroshell 2 色谱柱也能有效防止堵塞 本示例中, 我们沉析出蛋白质, 但是没有离心和过滤样品 即使在这样的条件下进样 25 次之后, 压力也没有任何上升 色谱柱 : 进样量 : µl 样品 : Agilent Poroshell 2 EC-C8, 3. x 5 mm,2.7 µm 部件号 699975-32 沉淀血浆血浆 :2/8 水 - 乙腈 ( 含有.% 甲酸 ): 5/5 水 - 乙腈 ( 含二氟苯水杨酸 µg/ml)=2:7:( 二氟苯水杨酸最终浓度为 µg/ml), 摇匀, 静置 分钟不离心, 不过滤 压力 血浆中的二氟苯水杨酸 4 38 36 34 32 3 28 26 24 22 2 8 6 4 2 8 6 4 2 溶剂 A: 水, 含.% TFA 溶剂 B: 乙腈, 含.8% TFA 流速 : ml/min µl 进样量 Diflusinal in Plasma 5 5 2 25 进样次数 时间 %B 2.5 9.6 9. 2 2.5 2 2 8 6 4 2 8 6 4 2 柱效 ( 塔板数 ) 最终压力塔板数 仪器 : Agilent 2 RRLC(SL) 实现与全多孔填料相媲美的载样量 去甲替林碱载样量 在本示例中, 我们在几种安捷伦色谱柱和竞争厂商的色谱柱上进样去甲替林 ( 一种碱性化合物 ) 可以看到,Agilent Poroshell 2,2.7 µm 色谱柱与.8 µm 色谱柱具有相同的载样量, 而 3.5 µm 色谱柱有一个较大的初始峰宽, 从而影响分离度 在这些色谱柱上的载样量非常典型, 证明了 Poroshell 2 色谱柱可以被放心地用于碱性化合物的分离.7.6.5.4.3.2 Agilent Poroshell 2 EC-C8, 3. x mm,2.7 µm (USCFX84) 部件号 695975-32 Agilent ZRBAX Eclipse Plus C8, 3. x mm,.8 µm (USUYB454) 部件号 959964-92 Agilent ZRBAX Eclipse Plus C8, 3. x mm,3.5 µm (USUXV48) 部件号 95996-92..2.2.2.2 mg/ml 8% 25 mm Na 2 HP 4 缓冲液,pH 3. 2% 乙腈温度 :3 ºC 检测波长 :25 nm 如需了解更多安捷伦 Poroshell 2 色谱柱的信息, 请访问以下网址 : www.agilent.com/chem/poroshell2:cn 25
安捷伦 Poroshell 2 色谱柱对碱 性化合物的分析具有更好的峰形和 结果 本示例是对另一种碱性化合物的分离 证 Poroshell 2 EC-C8 拖尾因子 =.48 竞争柱 S 拖尾因子 = 2.68 竞争柱 P 拖尾因子 = 4.78 8 Poroshell 2 6 明了 Poroshell 2 色谱柱如何在分析挑 战性化合物中更胜一筹 竞争柱 S 4 竞争柱 P 2.2.4.6.8 色谱柱 4.6 x 5 mm 部件号 699975-92 流动相 2 毫摩尔 4% 磷酸氢二钠 ph 为 7. 6% 乙腈 流速.5 ml/ 分 温度 24 ºC.2 检测器 二极管阵列检测器 254 纳米 2 µl 流通池 样品 2 µl 进样 25 µg/ml 阿米替林 含 5 µg/ml 脲嘧啶的水 / 乙腈 9: 溶液 26.4.6.8 分钟
蛋白质和多肽的快速 可靠分离 安捷伦 Poroshell 色谱柱是用于分离和表征包括完整和消化蛋白质等复杂生物分子在内的理想选择, 安捷伦 Poroshell 3 色谱柱是用于快速分析完整蛋白质的理想选择 安捷伦 Poroshell 2 色谱柱极其适用于肽谱分析, 因为它们在较短的分析时间内能够获得比传统的 5 µm 色谱柱更高的分离度 高流速 2. mm 内径的 Poroshell 3 色谱柱用于蛋白质的高分离度分析及快速分离 Poroshell 3 色谱柱, 具有较大孔径和 较薄的外层, 是快速分离完整蛋白质的可靠选择 本示例表明不到 分钟就实现了全部分离 凭借表面多孔颗粒的快速传质能力, Poroshell 3 色谱柱可用于较高流速下蛋白质的极速高效分离 色谱柱 : Poroshell 3SB-C8, 2. x 75 mm,5 µm 部件号 6675-92 流动相 : A:.% TFA B:.7% TFA 的乙腈溶液 流速 : 3. ml/ 分钟 温度 : 7 ºC 检测器 : 紫外检测器, 25 纳米 梯度 : 在 分钟内从 5%-% B 压力 : 25 bar 样品 :. 血管紧张素 II 2. 神经紧张素 3. 核糖核酸酶 4. 胰岛素 5. 溶菌酶 6. 肌红蛋白 7. 碳酸酐酶 8. 卵清蛋白 时间 ( 分钟 ) 如需了解更多安捷伦 Poroshell 2 色谱柱的信息, 请访问以下网址 : www.agilent.com/chem/poroshell2:cn 27
在安捷伦 Poroshell 2 色谱柱上对单克隆抗体胰蛋白酶肽谱进行 5 次重复分析 此示例是使用 Poroshell 2 色谱柱分离 酶解单克隆抗体的肽谱, 得到了高分离度 和高重现性结果 单克隆抗体胰蛋白酶肽谱的 BioConfirm 分子特征提取 通过使用 BioConfirm 分子特征提取软件, 能够证明相同的单克隆抗体的轻链和重链 上是 % 的序列覆盖 四极杆 - 飞行时间质谱参数离子源 : 电喷雾正离子模式 气体温度 : 325 ºC 干燥气流速 : 雾化器 : 毛细管电压 : 碎裂电压 : 锥孔体电压 : L/min 4 psi 4 V 5 V 65 V 八极杆 射频电压 : 75 V MS: 4 Hz 扫描范围 : 2-32 m/z 参比质量 : 922.9798 采集模式 : 扩展动态范围模式 (2GHz) 色谱柱 : 流动相 : Poroshell 2 SB-C8, 3. x 5 mm,2.7 µm 部件号 683975-32 A: 水,.% 甲酸 B: 乙腈,.% 甲酸 时间 %B 2 3 2 3 45 5 65 时间 %B 5. 9 7 9 8 2 流速 :.3 ml/ 分钟 柱温 : 4 ºC 检测器 : 四极杆 - 飞行时间质谱, 电喷雾正离子模式 梯度 : 见表 28
使用 Poroshell 2 色谱柱分离更多的峰 : 蛋白裂解液分析 2Å 孔径柱尤其适合于蛋白质裂解物中 小分子亲水多肽和肽段的高分离度快速分析 流动相 : 流速 : 进样量 : µl A: 水 (.% TFA) B: 乙腈 (.8% TFA).3 ml/min 温度 : 4 ºC 样品 : BSA 胰蛋白酶消化液 ( 供应商 ) 梯度 : DAD: 保持 3% B,3 min 35-65% B;3min 4 min 后运行时间 25 nm Phenomenex Aeris Widepore,XB-C8,2. x 5 mm,3.6 µm 6 5 76 个峰 4 3 2 2 4 6 8 2 4 6 8 Poroshell 2 EC-C8,2. x 5 mm,2.7 µm 6 5 4 DAD C, Sig=25,4 Ref=36, (Z:\CHEM32\...A\P2DIGEST\DP REDUCED ST 22-3- 7-3-34\BI3.D) 4 个峰 3 2 2 4 6 8 2 4 6 8 分钟 分钟 分钟 胰岛素分析 : 把.8 µm ZRBAX StableBond 色谱柱转换为 Poroshell 2 色谱柱以提高效率由于具有更大的孔径及在 2Å 孔中更快速的扩散,Poroshell 2 SB-C8 色谱柱的柱效是 ZRBAX RRHD SB-C8 8Å 色谱柱的 2 倍 Poroshell 2 色谱柱是用于小蛋白质胰岛素或其它多肽分析的理想选择, 提供较低压力下的较高柱效 Agilent ZRBAX SB-C8,4.6 x mm,.8 µm. 猪胰岛素 2. A-2 desamido 胰岛素 5 4 5 N = 525 3 4 N 2 = 669 N 2 Tf = 525 3.4 N 2 = 669 2.2 255 bar 2 Tf =.4 N 2 2 =.2 255 bar 2 5 7.5 2.5 5 7.5 2 分钟 5 7.5 2.5 5 7.5 2 分钟 Agilent Poroshell 2 SB C8,4.6 x mm,2.7 µm P/N 693775-92 6 5 6 4 N = 86 5 N 2 = 237 3 4 N Tf = 86 2. N Tf 2 = 237 3 2. 9 bar Tf 2 2 =. Tf 2 =. 9 bar 2 5 7.5 2.5 5 7.5 2 分钟 5 7.5 2.5 5 7.5 2 分钟 6 5 6 4 5 3 4 2 3 2 N = 7854 N N 2 = 9434 Tf = 7854.4 N Tf 2 = 9434 Tf 2. =.4 Tf 2 =. 2 2 237 bar 237 bar 如需了解更多安捷伦 5 7.5 Poroshell 2 2.5色谱柱的信息 5, 请访问以下网址 7.5 2 分钟 : 5 7.5 2.5 5 7.5 2 分钟 www.agilent.com/chem/poroshell2:cn 29 6 5 6
哪种快速液相色谱柱最适合您 安捷伦提供最广泛的快速液相色谱柱 包括 Poroshell 2 ZRBAX 快速分离高分辨 RRHD.8 µm 稳定到 2 bar 色谱柱 及 ZRBAX 快速分离高通量 RRHT.8 µm 稳定到 6 bar 色谱柱 所有这些色谱柱都具有相似的固定相以确保它们的可扩展性 拥有这些选择 您可以灵活的创建方法优化您现有的分析仪器 您实验室的现有仪器 安捷伦推荐 原理 UHPLC + bar 和 HPLC 仪器 如安 捷伦 29 Infinity 液相色谱和 26 Infinity 液相色谱 6 bar. Poroshell 2 色谱柱 2. ZRBAX RRHD.8 µm Poroshell 2 是在两种仪器类型上都能使用的易用色谱柱 ZRBAX RRHD 能帮助您优化 29 Infinity 液相色谱的性能 进行 UHPLC 分离 仅 4-6 bar HPLC 系 列 Agilent 2 系列 Agilent 系列 4 bar 以 及 22 Infinity LC 或 26 Infinity LC 6 bar. Poroshell 2 色谱柱 2. ZRBAX Eclipse Plus 3.5 µm 和 5 µm 利用 Poroshell 2 您可以提高旧型号 4 bar 仪器的性能 并且使 新型 6 bar UHPLC 仪器获得更佳的性能 对于不能转移的已建立方法 ZRBAX Eclipse Plus 色谱柱能提供出色的峰形和性能 UHPLC 仪器 安捷伦 29 Infinity LC 其 他 bar 以上仪器 和某些 HPLC 仪器 例如 2 LC 的组合. ZRBAX RRHD.8 µm 2. Poroshell 2 色谱柱 ZRBAX RRHD 可以在所有这些仪器上获得最佳性能 Poroshell 2 可以在 6 bar 仪器上使用 以优化其性能 专为色谱工作者设计的简单 可靠的 ph 测试 安捷伦现提供全系列的 ph 计和电极 专 为色谱工作者设计 这些 ph 计为您的实 验室提供直观的用户界面设计及出色的耐 用性 了解更多 请访问 www.agilent.com/chem/agilentph 3
使您的 UHPLC 展现极致性能更可靠地运行常规分析方法 无论您是需要一台耐用的液相色谱系统运行常规分析, 还是需要功能更强的高分离度液相色谱 / 质谱系统,Agilent 2 Infinity 系列都能满足您的需要 2 Infinity 系列液相色谱使用 Poroshell 2 色谱柱可以提供最高的分离度和灵敏度, 同时提高每次分析的分离能力 它们也确保系统间方法轻松转换, 而无需方法的再开发或再确认 无限超值 无限信心 无限强大 了解更多安捷伦 2 Infinity 系列无限卓越的性能, 请访问 : www.agilent.com/chem/infinity:cn 22 Infinity LC 26 Infinity LC 29 Infinity LC 如需了解更多安捷伦 Poroshell 2 色谱柱的信息, 请访问以下网址 : www.agilent.com/chem/poroshell2:cn 3
规格和订购信息 安捷伦 Poroshell 2 订购信息 2.7 µm 规格 mm EC-C8 EC-C8 苯基 - 己基柱 SB-C8 SB-C8 SB-Aq Bonus-RP HILIC EC-CN 4.6 x 5 693975-92 693975-96 693975-92 683975-92 683975-96 683975-94 693968-9 693975-9 693975-95 4.6 x 695975-92 695975-96 695975-92 685975-92 685975-96 685975-94 695968-9 695975-9 695975-95 4.6 x 75 697975-92 697975-96 4.6 x 5 699975-92 699975-96 689975-96 689975-94 699968-9 699975-9 699975-95 4.6 x 3 69975-92 69975-96 3. x 5 693975-32 693975-36 693975-32 683975-32 683975-36 683975-34 693968-3 693975-3 693975-35 695975-32 685975-32 685975-36 685975-34 695968-3 695975-3 695975-35 689975-36 689975-34 699968-3 699975-3 699975-35 687975-92 699975-92 689975-92 68975-92 3. x 695975-32 695975-36 3. x 75 697975-32 697975-36 3. x 5 699975-32 699975-36 3. x 3 69975-32 69975-36 2. x 5 693775-92 693775-96 693775-92 683775-92 683775-96 683775-94 693768-9 693775-9 693775-95 2. x 695775-92 695775-96 695775-92 685775-92 685775-96 685775-94 695768-9 695775-9 695775-95 2. x 75 697775-92 697775-96 689775-96 689775-94 699768-9 699775-9 699775-95 2. x 5 699775-92 699775-96 2. x 3 69775-92 69775-96 687975-32 699975-32 689975-32 68975-32 687775-92 699775-92 689775-92 68775-92 注意 Poroshell 2 色谱柱的压力限值是 6 bar/9 psi 用于 UHPLC 的安捷伦 Poroshell 2 快速保护柱 规格 mm EC-C8 EC-C8 SB-C8 苯基 - 己基柱 4.6 x 5 8275-9 8275-93 8275-92 8275-94 3. x 5 82375-9 82375-93 82375-92 82375-94 2. x 5 82725-9 82725-93 82725-92 82725-94 32
安捷伦 Poroshell 2 键合相性能指标 键合相 孔径 温度限 ph 范围 封端 碳载量 表面积 EC-C8 2Å 6 ºC 2.-8. 是 8% 3 m 2 /g EC-C8 2Å 6 ºC 2.-8. 是 5% 3 m 2 /g Phenyl-Hexyl 2Å 6 ºC 2.-8. 是 8% 3 m 2 /g SB-C8 2Å 9 ºC.-8. 无 7.5% 3 m 2 /g SB-C8 2Å 8 ºC.-8. 无 4.5% 3 m 2 /g SB-Aq 2Å 8 ºC.-8. 无 专利 3 m 2 /g Bonus-RP 2Å 6 ºC 2.-9. 三封端 5% 3 m 2 /g HILIC 2Å 6 ºC.-8. 无 N/A 3 m 2 /g EC-CN 2Å 6 ºC 2.-8. 是 3.5% 3 m 2 /g 仅列出典型性指标 安捷伦 Poroshell 3 订购信息 (5 µm) 产品名称 规格 (mm) Agilent Poroshell 3SB-C8 Agilent Poroshell 3SB-C8 Agilent Poroshell 3SB-C3 Agilent Poroshell 3Extend-C8 窄径柱 2. x 75 6675-92 6675-96 6675-99 9775-92 微径柱. x 75 6675-92 6675-96 6675-99 9775-92 毛细管.5 x 75 565-4468 保护柱芯,4/ 包 2. x 2.5 8275-92 8275-98 8275-924 保护卡套 82888-9 82888-9 82888-9 微径保护柱芯,3/ 包. x 7 585-5968 585-5968 585-5968 585-5968 注意 :Poroshell 3 色谱柱的工作压力限值是 4 bar/6 psi Agilent Poroshell 3 键合相性能指标 键合相孔径温度上限 ph 范围是否封端 Poroshell 3SB-C8,C8,C3 3Å 9 ºC.-8. 未封端 Poroshell 3Extend 3Å ph 8 以上 4 ºC ph 8 以下 6 ºC 2.-. 封端 仅列出典型性能指标 如需了解更多安捷伦 Poroshell 2 色谱柱的信息, 请访问以下网址 : www.agilent.com/chem/poroshell2:cn 33
34
食品安全 35
Agilent Poroshell 2 应用文集 食品安全 采用 Poroshell 2 色谱柱快速分析运动饮料中的水溶性维生素 关键词 HPLC Poroshell 2 维生素 C 维生素 B3 维生素 B 维生素 B6 作者 黄桂颖陈悦娇马应丹 仲恺农业工程学院 摘要 维生素 C 维生素 B 维生素 B3 维生素 B6 是运动饮料中常用的食品添加剂, 该类添加剂添加过量会对人体健康造成潜在危害, 添加不足则达不到运动饮料描述的效果 国家标准对维生素有明确的限量 [], 但因为不同维生素的国家标准检测方法不一样, 检测多种维生素比较耗时费力 [2,3], 采用高效液相色谱法同时检测多种维生素是提高检测效率的有效途径 [4] 由于维生素 C 具有较强的还原性, 加热或在溶液中易氧化分解, 检测速度越快越准确, 超高效液相色谱仪 (UHPLC) 和亚 2 微米快速液相分析柱有利于维生素检测精密度的提高, 使得分析时间和试剂耗量大大降低 但目前基层实验室普遍使用的是常规液相色谱仪, 与亚 2 微米快速液相分析柱不兼容, 使得快速分析检测很难实现 安捷伦公司最新推出的 Poroshell 2 系列表面多孔层色谱柱, 由于其具有低反压, 高柱效的特点, 从而真正实现在常规液相色谱仪上进行快速分析的可操作性 本文使用 Poroshell 2 色谱柱, 并采用常规液相色谱仪, 对维生素 C 维生素 B 维生素 B3 和维生素 B6 的同时检测方法加以改进, 分析时间和试剂耗量均降低了 /3, 一次分析仅需 3min 现将实验结果报告如下, 以供参考 36
Agilent Poroshell 2 应用文集 食品安全 试验材料与方法. 仪器与试剂 高效液相色谱仪 (Agilent 公司 ) ; 甲醇 (HPLC 级, 德国默克公司 ); 水由双蒸水系统制得 ; 维生素 C( 抗坏血酸 ) 维生素 B( 盐酸硫胺 ) 维生素 B3( 烟酰胺 ) 维生素 B6( 盐酸吡哆辛 ) 标准品 ( 分析纯 ).2 色谱条件色谱仪条件 :Poroshell 2 SB-C8 柱 (4.6 mm i. d. mm, 2.7μm); 柱温 27 ; 流速. ml /min; 流动相为磷酸二氢钾溶液 (.5 mol/l)- 甲醇 =94-6; 紫外检测器 : 波长 265nm; 进样体积 3μL.3 试验样品运动饮料, 为市场采购.4 试验方法.4. 标准储备液的配制用磷酸二氢钾溶液分别和混合配置标准品浓度均为 μg/ml 的标准储备液,4 避光条件下保存.4.2 混合标准工作液 结果与讨论 2. 色谱条件的选择 以 Poroshell 2 柱 (4.6 mm i. d. mm, 2.7μm) 和 Zorbax eclipse XDB C8 (5mm 4.6mm,5μm ) 作为分析柱, 以磷酸二氢钾溶液 (.5 mol/l)- 甲醇的不同配比为流动相进行 HPLC 条件的优化 实验发现, 用 Zorbax eclipse XDB C8 柱, 磷酸二氢钾溶液 (.5 mol/l)- 甲醇为 95:5 时分离效果最好 用 Poroshell 2 柱, 运动饮料样品在磷酸二氢钾溶液 (.5 mol/l)- 甲醇为 94:6 分离效果最佳 通过使用 Poroshell2 色谱柱, 每个样品从原来的分析时间 5 分钟缩短至 3min, 提高了工作效率和结果的精密度 标准工作溶液和运动饮料的色谱图分别见图 和图 2 2.2 方法的线性范围和检出限混合标准工作液的测定按照.4 的操作步骤, 以添加剂的峰面积为纵坐标, 含量为横坐标, 绘制标准曲线 本方法中维生素 C 维生素 B 维生素 B3 维生素 B6 的回归方程和最低检出限 ( 信噪比为 3:) 结果见表 2.3 方法的精密度对混合标准溶液和样品液重复进样 5 次, 计算样品精密度 分别吸取不同体积的储备液, 用磷酸二氢钾溶液配制成浓度分别为 μg/ml 3μg/mL 5μg/mL 7μg/mL 9μg/mL 的混合标准工作液.4.3 样品处理运动饮料用.45μm 的滤膜过滤后待测.4.4 测定按.2 操作进行, 以保留时间定性, 外标法定量 37
Agilent Poroshell 2 应用文集 食品安全 表 4 种维生素的回归方程 精密度和检出限 维生素名称 回归方程 相关系数 精密度 (RSD%) 最低检出限 ( mg/l) 维生素 C Area=3557.85973*Amt+48.998285.9998.9. 维生素 B Area=467.7839*Amt+2.23237.9999.29.2 维生素 B6 Area=334.8935*Amt+3.52544.9999.79.8 维生素 B3 Area=58.4585*Amt+.343.9999..2 8 6 4 2.89- C.5.5 2 2.5.325-.533- B.864- B6 2.642- 图 4 种维生素标准色谱图 6 4 2 8 6 4 2.934- C.23.5.5 2 2.5.326-.5- B 2.65- 图 2 运动饮料色谱图 2.4 使用传统色谱柱的结果 ( 图 3).49 2 5 5.88 2.563 2.936 4.3 2 3 4 5 图 3 4 种维生素标准色谱图 38
Agilent Poroshell 2 应用文集 食品安全 色谱条件 液相,DAD 检测器, 标准流通池色谱柱 :Zorbax eclipse XDB C8 (5mm 4.6mm,5μm ) 流动相 :5% 甲醇 /95% 磷酸二氢钾 (.5mol/L) 流速 :ml/min 柱温 :27 进样量 :3μL 结论 本法采用 Poroshell2, 在基层普遍使用的常规液相色谱仪上测定维生素 C 维生素 B 维生素 B3 维生素 B6 共 4 种水溶性维生素 该方法的分析速度迅捷 试剂消耗少 最低检出限和重复性均符合批量样品的检测要求, 结果令人满意, 很适合于基层检测工作的开展 参考文献. GB 5266-29 运动饮料标准 [s]. 2. GB/T243 食品中抗坏血酸的测定 [s]. 3. GB/T59.84 食品中硫胺素的测定 [s]. 4. 黄桂颖, 陈悦娇, 白卫东等. RP HPLC 测定夏橙中维生素 C 含量 [J] 安徽农业科学, 28,(6) : 297-298. 39
Agilent Poroshell 2 应用文集 食品安全 采用 Poroshell 2 色谱柱快速分析鸡肉中的磺胺类药物残留 关键词 HPLC Poroshell 2 磺胺 作者 王凌云 佛山市农产品质量安全监督检测中心 摘要 磺胺类药物 (Sulfonamides,SAs) 具有抗菌谱广 抗菌力强 吸收迅速完全和价廉易得等 特点, 广泛应用于畜牧业 [] 由于 SAs 在动物体内的作用时间和代谢时间相对较长, 往往 造成可食性组织中有 SAs 残留, 人们食用了该类药物残留的畜禽产品后会出现急性或慢性 中毒, 影响机体的泌尿 免疫系统, 破坏肌肉 肾脏和甲状腺等组织, 如诱发人的甲状腺癌等, 而且还会导致人体内很多细菌对其产生耐药性 [2] 为了保障人类的健康, 各国对 SAs 残留限制越来越严格, 农业部 235 号公告 动物性食品中兽药最高残留限量 中规定 SAs 总量不得超过 ng/ml, 并规定了 SAs 的液相色谱和液相色谱 - 质谱联用检测方法 [3] 液质联用法因其价格昂贵, 技术要求高等特点, 不易推广使用 常规液相色谱仪和液相色谱柱普遍应用于基层检测机构, 能够满足几种磺胺类药物残留的测定, 但多组分测定时 ( 种以上 ) 存在分离难 耗时长等劣势, 使得快速分析检测很难实现, 尤其在应急检测中较难发挥作用 安捷伦公司最新推出的 Poroshell 2 系列表面多孔层色谱柱, 由于其具有低反压, 高柱效的特点, 从而真正实现在常规液相色谱仪上进行快速分析的可操作性 本文使用 Poroshell 2 色谱柱, 并采用常规液相色谱仪, 对鸡肉中 2 种磺胺的同时检测方法加以改进,2 种磺胺得到了很好的分离, 分析时间降低了 /2, 一次分析仅需 5min 现将实验结果报告如下, 以供参考 4
Agilent Poroshell 2 应用文集 食品安全 材料与方法. 仪器与试剂 高效液相色谱仪 (Agilent 公司 ) ; 甲醇 乙腈 (HPLC 级, 美国默克公司 ); 水由 Milli-Q A 超纯水仪制的 ; 磺胺二甲嘧啶 (SM 2 ) 磺胺二甲氧嘧啶(SDM) 磺胺甲噁唑(SMZ) 磺胺甲氧哒嗪 (SMP) 磺胺嘧啶(SD) 磺胺喹恶啉(SQX) 磺胺间甲氧嘧啶 (SMM) 磺胺异恶唑(SIZ) 磺胺甲基嘧啶(SMR) 磺胺二甲异嘧啶 (SIM 2 ) 磺胺对甲氧嘧啶(SMD) 磺胺吡啶 ( SP) 纯度均大于 99%, 均购自德国 Dr.Ehrenstorfer GmbH 公司.2 色谱条件 Agilent Poroshell 2 EC-C8 (4.6 75mm 粒径 2.7μm); 柱温 35 ; 流速. ml /min; 紫外检测器 : 波长 27nm; 进样体积 2μL; 流动相 A:.% 乙酸 - 水溶液 ; 流动相 B: 乙腈 ; 流动相 C: 甲醇 流动相梯度比例见表 : 表 梯度洗脱程序时间 (min) 流动相 A% 流动相 B% 流动相 C%. 9.5 6.5 3 5. 63 4 23 6. 9.5 6.5 3.3 试验样品鸡肉.4 试验方法.4. 标准储备液的配制精密称取各种 SAs 药物各 ±.mg, 置于 ml 棕色容量瓶中, 用乙腈溶解并定容, 分别配制成 µg/ml 的标准储备液, 避光保存.4.2 混合标准工作液分别量取各种 SAs 储备液 (µg/ml)ml, 置于 ml 棕色容量瓶中, 用乙腈定容, 配成 µg/ml 的 2 混合磺胺标准工作液 准确称取 5±.g 试样, 置于 5mL 聚丙烯离心管中, 加入乙腈 25mL, 无水硫酸钠少许, 涡旋后, 以 6r/min 的速度离心 5min 分离后的残渣再用 25mL 乙腈处理, 重复提取一次, 合并两次的上清液, 45 下旋转蒸发仪减压干燥, 残留物用.moL/L HCl 5mL 溶解 ( 若待测样品含脂肪较多, 溶解液加 5 ml 正己烷, 涡旋后离心, 弃掉正己烷层 ), 待过柱.4.4 净化复合阳离子交换柱的平衡 : 依次用 5mL 甲醇 5mL 去离子水 5mL.3moL/L HCl 平衡 ; 上样 : 将样品溶液以 5-8s/d 速度流过小柱 ; 洗涤 : 依次用 5mL.3moL/L HCl 5mL 去离子水 5mL 甲醇洗涤小柱 ; 洗脱 : 用 5mL 5% 氨化甲醇洗脱 ; 收集洗脱液 : 室温氮气吹干后, 用 5mL 流动相溶解, 过.2µm 有机滤膜, 供 HPLC 分析 结果与讨论 2. 色谱条件的选择 2.. 色谱柱的选择高效液相色谱法测定磺胺类药物的方法一般采用 C 8 填料的色谱柱, 但不同型号的填料对磺胺类药物的色谱行为有一定的影响, 为使 2 种磺胺类药物在色谱柱上得到有效分离, 实验选用 Agilent ZRBAX SB-C8(5µm,4.6 25mm) 和 Agilent Poroshell 2 EC-C8(2.7µm,4.6 75mm) 的色谱柱进行测试 实验发现, 流动相采用乙酸水 - 乙腈 - 甲醇体系进行梯度洗脱时, 均能对 2 种磺胺类药物达到分离要求, 但 SB-C8 的运行时间较长, 需要 28min 且基线漂移明显 ( 图 ), 而 Agilent Poroshell 2 EC-C8 的整个运行时间只需 5min, 基线稳定 ( 图 2) 综合考虑, 最后选择使用 Agilent Poroshell 2 EC-C 8 (2.7µm, 4.6 75mm) 色谱柱.4.3 样品处理 4
Agilent Poroshell 2 应用文集 食品安全 图 2 种磺胺类药物的标准色谱图 图 2 2 种磺胺类药物的标准色谱图 2..2 流动相的选择磺胺类药物残留分析流动相一般采用缓冲液与甲醇或乙腈按一定比例混合 实验比较了不同浓度的磷酸 乙酸与乙腈 甲醇配比梯度洗脱, 结果表明乙酸水 - 乙腈 - 甲醇作为流动相, 采用梯度洗脱,2 种磺胺类药物能达到基线分离, 且峰型尖锐, 峰对称性好 2 种磺胺类药物的标准色谱图见图 2 2.3 方法的线性范围分别取所配制的混合标准工作液 25µL 5µL µl 25µL 5µL µl 25µL 于玻璃管中, 室温下氮气吹干后用 5mL 的流动相复溶后, 供 HPLC 测定 以峰面积 (Y) 为纵坐标, 浓度 (X, µg/ml) 为横坐标, 绘制标准曲线 在浓度为.5~2µg/mL 范围内, 色谱峰峰面积与浓度呈线性相关, 线性关系和相关系数见表 2: 2.2 旋转蒸发温度对磺胺类药物的影响实验设立了 3 4 5 55 6 65 六个温度水平进行试验, 结果表明当温度高于 55 时,2 种磺胺类药物的回收率均有不同程度的降低, 特别是磺胺异恶唑 (SIZ), 其回收率随温度升高降低相对明显 ( 回收率约降低 %) 综合考虑旋蒸时间及温度对药物的影响, 确定最佳旋蒸温度为 45 42
Agilent Poroshell 2 应用文集 食品安全 表 2: 2 种磺胺药的线性范围 标准曲线回归方程及相关系数 药物 线性范围 (µg/ml) 回归方程 相关系数 R 磺胺二甲异嘧啶 SIM2.5-2 Y=75.449X-.38242.9995 磺胺嘧啶 SD.5-2 Y=8.94965X-.2573.99942 磺胺吡啶 SP.5-2 Y=7.926X-.35769.99895 磺胺甲基嘧啶 SMR.5-2 Y=77.238X-.37266.99884 磺胺对甲氧嘧啶 SMD.5-2 Y=67.5868X-.2268.9985 磺胺二甲嘧啶 SM2.5-2 Y=7.523X-7.384e -2.99952 磺胺甲氧哒嗪 SMP.5-2 Y=7.58532X-8.762e -2.99942 磺胺二甲氧嘧啶 SDM.5-2 Y=74.7747X-9.3847e -2.99955 磺胺甲 唑 SMZ.5-2 Y=8.966X-2.23526e -2.99965 磺胺异恶唑 SIZ.5-2 Y=73.7626X-.54536.99928 磺胺间甲氧嘧啶 SMM.5-2 Y=74.63985X-8.8582e -2.99945 磺胺喹恶啉 SQ.5-2 Y=75.4487X-.3483.99932 2.4 加标回收率和精密度的测定准确称取 5±.g 试样, 添加一定体积的混合标准工作液, 设定 5µg/kg µg/kg,2µg/kg 三个添加水平, 每个水平设 6 个平行, 涡旋.5min, 静置 3min 后, 按.4.3 和.4.4 样品前处理方法处理后进行 HPLC 分析, 方法的加标回收率和精密度见表 3, 鸡肉空白样品以及添加样品色谱图见图 3 和图 4 图 3 鸡肉空白样品色谱图 图 4 鸡肉空白样品添加色谱图 43
Agilent Poroshell 2 应用文集 食品安全 表 3: 鸡肉组织中磺胺类药物的添加平均回收率和 RSD(n=6) 药物 添加浓度 (µg/kg) 平均回收率 (%) RSD(%) 检测限 (µg/kg) 磺胺二甲异嘧啶 SIM2 5 2 82.8 84.2 89.7 4.4 3.5 5. 9 磺胺嘧啶 SD 5 2 8.6 82.2 89. 5.2 4.5 4.6 8 磺胺吡啶 SP 5 2 8.8 83.5 86. 6.3 4.8 5.7 磺胺甲基嘧啶 SMR 5 2 84.3 85. 89.9 3.8 4.7 6.4 磺胺对甲氧嘧啶 SMD 5 2 83.5 84.3 9. 5.3 5.3 4.3 3 磺胺二甲嘧啶 SM2 5 2 82.6 85.4 85.8 4. 4.4 3.5 3 磺胺甲氧哒嗪 SMP 5 2 83.3 84.4 85.5 5. 5.2 5. 3 磺胺二甲氧嘧啶 SDM 5 2 82.5 83. 84.2 4.8 4. 4.6 4 磺胺甲 唑 SMZ 5 2 82. 82. 84. 4.7 4. 3.7 4 磺胺异恶唑 SIZ 5 2 8.3 82.6 83.5 3.4 2.7 3.9 6 磺胺间甲氧嘧啶 SMM 5 2 8.5 8.6 83. 5. 3.9 4.2 6 磺胺喹恶啉 SQ 5 2 74.5 76.6 8. 4.7 4.2 5. 7 2.5 样品分析 利用本方法测定了来源于农贸市场的 4 个鸡肉样品中的磺胺类药 物残留量, 均未检出上述 2 种磺胺类药物 结论 本文建立了高效液相色谱法测定鸡肉中 2 种磺胺类药物的分析方法, 与以往报道的磺胺类药物 HPLC-UV 检测方法比较可以发现, 本方法前处理操作简单, 耗时少, 从提取至 SPE 柱洗脱结束, 全程不超过 4 小时, 且化学试剂使用量较少 Agilent Poroshell 2 色谱柱的使用实现了在常规液相色谱仪上快速分析的效果, 可满足基层检测机构对检测时效性的要求 参考文献. 沈建忠, 谢联金. 兽医药理学 [J]. 北京 : 中国农业大学出版社, 2:55. 2. 吴永宁, 邵兵, 沈建忠. 兽药残留检测与监控技术 [M]. 北京 : 化学工业出版社,27:89.3. 中国兽医学报,25.25(4): 42-43. 4. 方炳虎, 何绮霞, 绉潍力等. 动物源性食品中磺胺类药物残留检测方法进展 [J]. 中国兽药杂志,27,4():24-28. 44
Agilent Poroshell 2 应用文集 食品安全 采用 Poroshell 2 色谱柱研究邓老凉茶颗粒的指纹图谱 关键词 邓老凉茶颗粒 poroshell 2 异绿原酸 B 指纹图谱 质量控制 HPLC 作者 邓洁薇 李娜 张翠仙 2, 杨运云 *. 中国广州分析测试中心广东省分析测试技术公共实验室 2. 广州中医药大学中药学院 摘要 广东凉茶是岭南人民根据本地的气候和水土特性, 在长期预防疾病与保健过程中以中医养生理论为指导, 以中药为基础, 研制总结出来的具有清热解毒 生津止渴等功效的一类植物饮料 [-2] 邓老凉茶是著名的广东凉茶之一, 由金银花 菊花 白茅根 桑叶 蒲公英和甘草 6 味药材组成, 具有清热解毒 凉血排毒等功效 随着凉茶走向国际化市场, 建立统一的质量标准势在必行 凉茶大多以大组方的形式组成, 要确保其统一的质量标准, 必须借助于现代分析技术 指纹图谱是目前中药或中药制剂质量控制的有效手段 [3-9], 高效液相色谱法 (HPLC) 是目前最为成熟的指纹图谱技术 本实验对采用 Poroshell 2 色谱柱邓老凉茶颗粒的指纹图谱进行了研究, 建立了邓老凉茶颗粒甲醇提取液的 HPLC 指纹图谱, 为广东凉茶质量标准的建立提供了技术依据 45
Agilent Poroshell 2 应用文集 食品安全 材料与方法. 仪器与试剂 Agilent 高效液相色谱系统, 配备自动进样器 柱温箱 二极管阵列检测器 ChemStation 色谱工作站 甲醇和乙腈均为色谱纯 ( 美国 Burdick &Jackson 公司 ), 实验用水为超纯水, 由超纯水设备 ( 美国 Milipore 公司 ) 制备 ; 磷酸 ( 分析纯, 广州化学试剂厂 ); 绿原酸 (ps87233) 异绿原酸 B(ps832) 对照品 ( 成都普思生物科技有限公司, 质量分数 > 98%); 邓老凉茶颗粒购自广州养和医药科技有限公司.2 色谱条件色谱柱为 Agilent Poroshell 2 SB-C8 柱 ( mm 2. mm,2.7 μm); 流动相为.5% 磷酸水溶液 (A)- 乙腈 ( B), 梯度洗脱 : ~ 3 min,5% B;3 ~ 9 min,5% ~ 2% B;9 ~ 3 min,2% B; 3 ~ 2 min,2% ~ 95% B; 体积流量.5 ml/min; 进样量. μl; 柱温 25 ; 检测波长 254 nm.3 对照品溶液的制备.3. 绿原酸对照品溶液的制备精密称取绿原酸对照品 5.6 mg, 甲醇溶解后转移至 25 ml 棕色量瓶中, 甲醇定容, 过.45 μm 滤膜, 即得.3.2 异绿原酸 B 对照品溶液的制备精密称取异绿原酸 B 对照品 5.28 mg, 甲醇溶解后转移至 25 ml 棕色量瓶中, 甲醇定容, 过.45 μm 滤膜, 即得.3.3 混合对照品溶液的制备分别吸取. ml 绿原酸和异绿原酸 B 对照品溶液, 组成混合对照品溶液.4 供试品溶液的制备称取邓老凉茶颗粒 5. g, 用滤纸包好, 置索氏提取器中, 加入甲醇 5 ml, 索氏提取.5 h, 提取液旋转蒸馏浓缩至 ml, 转移至 25 ml 量瓶中, 甲醇定容, 过.45 μm 滤膜, 作为供试品溶液 结果与讨论 2. 色谱柱以及色谱条件的选择 选用粒径为 2.7 μm 表面多孔壳核填料高效分离色谱柱, 分离时间仅为常规 5 μm 粒径色谱柱的 25%, 并且具有更高的灵敏度, 能够使复杂组分实现快速有效的分离, 在指纹图谱研究方面比传统的常规分析柱更具优势 流动相的选择选用不同比例的甲醇 -.5% 磷酸水溶液 乙腈 -.5% 磷酸水溶液 甲醇 -.5% 甲酸水溶液和乙腈 -.5% 甲酸水溶液等流动相体系进行试验对比, 以确定最佳流动相的组成及洗脱梯度程序 结果表明, 使用乙腈 -.5% 磷酸水溶液系统时, 各组分均达到基线分离, 流动相中的磷酸明显降低绿原酸的拖尾现象, 故选择乙腈 - 水 - 磷酸系统为流动相 2.2 提取方式的选择比较水及 5% 7% 9% % 甲醇提取效果, 结果表明甲醇比其他几种溶剂提取的成分多, 故选用甲醇作为提取溶剂 另外, 比较了超声提取与索氏回流提取, 发现索氏回流提取出的峰较多, 提取率较高, 因此, 样品采用回流提取 2.3 方法学考察 2.3. 系统适应性试验取供试品溶液, 连续进样 5 次, 考察各共有峰的相对保留时间及相对峰面积的一致性, 结果显示各共有峰相对保留时间的 RSD 值在.3%~.79%, 相对峰面积的 RSD 值在.6%~2.67%, 均小于 5%, 表明仪器分析精密度良好, 分析结果有保障 2.3.2 重现性试验取同一批号样品 (S)6 份, 分别配制供试品溶液进行测定, 平行 6 份, 考察各共有峰的相对保留时间及相对峰面积的重复性, 结果显示相对保留时间的 RSD 值在.3%~.4%, 相对峰面积的 RSD 值在.95%~4.24%, 二者均小于 5%, 表明该方法的重现性良好 2.3.3 稳定性试验取同一批号样品 (S) 的供试品溶液, 分别在 3 6 9 2 24 h 进样, 考察各共有峰的相对保留时间及相对峰面积的一致性, 结果显示相对保留时间的 RSD 值在.6%~.96%, 相对峰面积的 RSD 值在.27%~3.74%, 二者均小于 5%, 表明供试品溶液在 24 h 内稳定 46
Agilent Poroshell 2 应用文集 食品安全 5. 王倩, 王建新, 于治国, 等. 金银花药材高效液相色谱指纹图谱研究 [J]. 中成药, 25, 27(7): 75-754. 3- 绿原酸 4- 异绿原酸 B 图 对照品的 HPLC 图 6. 张铁军, 韩世柳, 田成旺, 等 清咽滴丸极性成分的高效液相指纹图谱及其模式识别的研究 [J]. 中草药,2, 4(8): 282-285. 7. 祝明, 张鹏, 唐登峰, 等. 莪术油的 HPLC 指纹图谱研究 [J]. 中草药, 2, 42(): 8-84. 8. 房敏德. 中药指纹图谱技术的研究与应用 [J]. 中草药,25, 36(4): 632-634. S- 绿原酸图 2 邓老凉茶颗粒的 HPLC 指纹图谱 9. 刘毅, 刘素香, 龚苏晓, 等. 当归药材 HPLC 指纹图谱及其液相色谱 - 质谱联用分析 [J]. 药物评价研究,2, 33(4): 259-262. 2.4 HPLC 指纹图谱分析取不同批次的 批样品分别制备供试品溶液, 测定, 确定 6 个主要色谱峰为共有峰 用 中药色谱图的指纹图谱评价系统 软件 ( 24 A) 进行色谱峰的匹配, 对照品色谱图见图, 以绿原酸 (S) 为参照物的标准指纹图谱见图 2 与对照指纹图谱比较, 批邓老凉茶颗粒的相似度分别为.978.979.992.988.98.986.99.97.97.986.99 相似度评价结果显示, 批邓老凉茶颗粒指纹图谱相似度均大于.95, 说明工艺稳定, 用该方法对邓老凉茶颗粒进行质量控制较可靠 参考文献. 王萍, 肖更生, 张友胜, 等. 广式凉茶研究进展 [J]. 食品科技, 2, 35(2): 77-8. 2. 何蓉蓉, 姚新生, 栗原博. 广东凉茶的 泻火 作用与物质基础研究 [J]. 世界科学技术 中医药现代化,29, (6): 834-839. 3. 赵渤年, 于宗渊, 丁晓彦, 等. 黄芩质量评价谱 - 效相关模式的研究 [J]. 中草药, 2, 42(2): 38-383. 4. 张铁军. 中药质量认识与质量评价 [J]. 中草药, 2,42(): -9. 47
Agilent Poroshell 2 应用文集 食品安全 蜂蜜中呋喃唑酮代谢物的液质联用技术确证方法优化 应用新型液相色谱柱去除基质干扰 关键词 HPLC-MS/MS Agilent Poroshell 2 呋喃唑酮代谢物蜂蜜 作者 高洋洋 李晶 刘鑫 张杉 何悦 崔凤云 关旭 张朝晖 * 北京出入境检验检疫局检验检疫技术 中心食品实验室 摘要 硝基呋喃类药物为广谱抗生素, 对革兰氏阳性及阴性菌均有一定抗菌作用 由于呋喃价格低廉且治疗效果好, 所以广泛应用于家禽 家畜 水产品的痢疾 肠炎 球虫病的预防和治疗消化道疾病 [,2] 但研究证明硝基呋喃类药物及其代谢物具有相当的毒性, 有致畸胎作用, 且能诱发癌症, 这引起了人们高度重视 出于安全考虑, 欧盟和美国分别在 995 年和 22 年全面禁止将硝基呋喃类药物用于食源性动物 22 年 3 月, 我国农业部第 93 号公告也将硝基呋喃类抗菌剂列入 食品动物禁用的兽药及其他化合物清单 [3] 蜂蜜是我国重要的出口农产品之一, 也一直是药物残留检测的重点产品 但在检测中发现蜂蜜样品在各种检测基质中是最不稳定的, 除其本身基质的复杂性, 还由于蜜蜂所采的花粉分布难以掌握, 每批蜂蜜所包含的蜂蜜种类难以统一以及农户对蜂蜜的采集和调配具有不确定性 近些年来, 高效液相色谱 - 质谱联用技术 (LC-MS) 越来越多被用于测定动物组织中硝 [4,5] 基呋喃类代谢物的残留, 并且在日常检测呋喃代谢物时, 为了节省时间 提高效率, 通常使用短色谱柱进行分离 [3] 但是, 此常规方法针对蜂蜜基质的检测有时会出现假阳性现象, 因为基质的杂峰会与标准物质峰重叠, 而其离子比又与基质添加样品的离子比极为相近 [6] 本实验中采用了安捷伦公司的 Poroshell 2 系列表面多孔层色谱柱, 由于其具有柱子长 低反压, 高柱效的特点, 从而实现了在高效液相色谱串联质谱仪上对假阳性蜂蜜的基质杂峰与标准物质峰的分离 48
Agilent Poroshell 2 应用文集 食品安全 材料与方法. 仪器与试剂 高效液相色谱串联质谱仪 ; 甲醇 (HPLC 级 ) 甲酸 (HPLC 级 ) 乙酸乙酯 (HPLC 级 ); 水由 Milli-Q Academic 净化系统制得 ; 呋喃唑酮代谢物 AZ 标准品 ( 纯度均 >99%, Dr.Ehrenstorfer) 呋喃唑酮同位素内标 AZ-D4 ( 纯度均 >99%, WITEGA) 市售蜂蜜.2 标准溶液的配制称取适量呋喃唑酮内标标准物质用甲醇稀释成. mg/ml 标准储备液, 吸取适量的标准储备液用甲醇稀释成为 μg/ml 的标准中间液, 吸取适量的标准中间液用甲醇稀释成为.2 μg/ml 的标准工作液,-8 避光条件下保存 移取适量标准工作液, 按照样品操作步骤同步操作, 使最终样液中呋喃唑酮标准物质的浓度分别为 ng/ml,2.5 ng/ml,5 ng/ ml, ng/ml,2 ng/ml,3 ng/ml,5 ng/ml.3 色谱 - 质谱条件 采用 Agilent Poroshell 2 SB-C8 柱 (4.6 mm i. d. mm, 2.7 μm) 色谱柱 ; 流动相 A 为 5 mmol 乙酸铵溶液 +.% 甲酸, 流动相 B 为甲醇 梯度洗脱程序 : ~ 5. min,6% ~ 9% B;5. ~ 6. min,9% B;6. ~ 6.5 min,9% ~ 6% B;6.5 ~ 7.5 min, 6% B; 流速.4 ml /min; 柱温 4 ; 进样体积 : μl 采用某公司的 5 2. mm C8 短色谱柱 ; 流动相 A 为 5 mmol 乙酸铵溶液 +.% 甲酸, 流动相 B 为甲醇 梯度洗脱程序 : ~.5 min,8% A;.5 ~ 3.min,8% ~ 2% A;3. ~ 4.2 min, 2% A;4.2 ~ 5.min,2% ~ 8% A; 流速.3 ml /min; 柱温 4 ; 进样体积 : μl 电离方式 : 电喷雾 ; 正离子扫描 ; 离子传输毛细管温度 :35 ; 碰撞气体为氩气 ; 鞘气压力 :3 psi; 辅助气压力 : arb; 反应监测模式 其它质谱参数见表 样品中待测物质与同时检测的标准具有相同的保留时间, 并且所选择的离子相对丰度比相一致, 则可判定样品中存在该残留 内标法定量 表 呋喃唑酮代谢物和呋喃唑酮代谢物内标质谱参数 化合物 Compounds 保留时间 Retention time (min) 母离子 Parent ion (m/z) 子离子 Daughter ion (m/z) 碰撞能量 Collision energy (ev) 去簇电压 Declustering potential (V) 呋喃唑酮代物 (Furazolidone) 呋喃唑酮代谢物同位素内标 (Furazolidone -D4).99 236. 4. 2 22 34.* 2 22.95 24. 34. 2 22 * 用于定量的子离子 材料与方法.4 样品前处理 [7] 准确称取 2. g 蜂蜜样品于 5 ml 的离心管, 加入适量的内标标准工作液及. mol/l 2- 硝基苯甲醛衍生液, 再加入 2 ml.2 mol/l 的盐酸溶液, 混匀, 置于 37 的恒温箱避光反应 6h 按文献 [7] 方法过小柱净化 结果与讨论 采用 5 2. mm C8 短色谱柱时, 蜂蜜样品的检测结果为呋喃唑酮代谢物 (AZ) 疑似阳性 疑似样品出峰时间为 2.22 min( 如图 ), 与其内标出峰时间一致 ; 离子比为 9.78, 其样品添加的出峰时间为 2.22 min( 如图 2), 离子比为.98, 基本一致 49
Agilent Poroshell 2 应用文集 食品安全 RT:. - 4. 2.2 NL: 3.99E4 TIC F: + c ESI sid=5. SRM ms2 24. 9 [33.975-34.25] MS 223_26 8 Relative Abundance Relative Abundance 7 6 5 4 3 2 2.32 2.49 2.77 2.6 2.85 3.2 3. 3.32.63 3.63.2.24.99 3.45.46.83 3.85 2.22 NL: 2.52E4 Base Peak m/z= 33.5-34.5 F: + c ESI 9 sid=5. SRM ms2 236. [3.975-4.25, 8 33.975-34.25] MS 223_26 7 6 5 4.97 3 2 2.6 2.76 2.36.4 3.43 3.3 3.63.5.28 3.33.55.83 3.4 3.78 3.89.6.8 3. 3.8 4...2.4 2. 2.2 2.4 2.6 2.8 3.2 3.4 3.6 Time (min) 图 疑似阳性蜂蜜通过 5 2.mm 短柱分离的内标和定量离子的质谱图 RT:. - 7.5.94 9 2. 8 Relative Abundance Relative Abundance 7 6 5 4 3 2 2.2 4.2 4.82 2.38 2.56 6.7 4.63 7.4.39.72.45.63 4.8 2.75 3.3 5.6.99 5.69.67 9.72 8 7 6.79 5.94 4 3 2 3.7 2. 3.2 3.54 2.32 3.86 5.62 2.9 5.26 6.59.72 6.77.5.7 4.3 5.75 4.66 6.94..5..5 2. 2.5 3. 3.5 4. 4.5 5. 5.5 6. 6.5 7. Time (min) NL: 9.74E3 TIC F: + c ESI SRM ms2 24. [33.75-34.25] MS 223_6 NL: 2.25E3 Base Peak m/z= 33.5-34.5 F: + c ESI SRM ms2 236. [3.75-4.25, 33.75-34.25] MS 223_6 RT:. - 4. 9 8 2.9 NL: 4.4E4 TIC F: + c ESI sid=5. SRM ms2 24. [33.975-34.25] MS 223_28 图 3 疑似阳性蜂蜜通过 Poroshell 2 SB-C8 柱 (4.6 mm i. d. mm, 2.7μm) 长柱分离的内标和定量离子的质谱图 Relative Abundance Relative Abundance 2.43.38.55.94 7 6 5 4 3 2 3.2 2.5 2.6 2.8 3.36.68.86 2.99 3.57 3.65.3 3.95 2.22 NL: 3.59E4 Base Peak m/z= 33.5-34.5 F: + c ESI 9 sid=5. SRM ms2 236. [3.975-4.25, 8 33.975-34.25] MS 223_28 7 6 5 4 3.98 2 2.72 2.4 2.85.5.9 2.98 3.39.79 3.4 3.49.6 3.68.24 4. 4...2.4.6.8 2. 2.2 2.4 2.6 2.8 3. 3.2 3.4 3.6 3.8 Time (min) 图 2 疑似阳性蜂蜜添加通过 5 2.mm C8 短柱分离的内标和定量离子的质谱图更换 Agilent Poroshell 2 SB-C8 柱 (4.6 mm i. d. mm, 2.7 μm) 色谱柱 调整流动相后, 疑似样品与内标出峰时间不符, 为杂质峰 ( 如图 3) 痕量杂质峰与标准物质峰得到良好的分离( 如图 4) RT:. - 7.5.95 NL:.4E4 TIC F: + c ESI SRM ms2 24. 9 [33.75-34.25] MS 223_9 8 7 6 5 4 3 2 2.2 2.6 2.3 2.67 3.35.4.6.98.44.73 3.46 4.6 4.4 4.74 5.39 5.74 6.9 6.69 7.4.99 NL: 6.96E3 Base Peak m/z= 33.5-34.5 F: + c ESI 9 SRM ms2 236. [3.75-4.25, 8 33.75-34.25] MS 223_9 7 6 5 4.75.63 3 2 2.8 2.27.56 2.83 3.6.49.34 3.8 4.29 4.49 5.3 5.54 6.7 6.66 6.76 7.23 Relative Abundance Relative Abundance..5..5 2. 2.5 3. 3.5 4. 4.5 5. 5.5 6. 6.5 7. Time (min) 图 4 疑似阳性蜂蜜添加通过 Poroshell 2 SB-C8 柱 (4.6 mm i.d. mm, 2.7μm) 长柱分离的内标和定量离子的质谱图 5
Agilent Poroshell 2 应用文集 食品安全 以上实验表明, 新型液相色谱柱 Agilent Poroshell 2 SB-C8 的分离流速一般设为. ml/min, 而在这个实验中, 将流速设为.4 ml/min, 在保证分离效果的同时, 峰形也良好 对于种类繁多 基质复杂的蜂蜜, 传统带有.5 μm 筛板的色谱柱很容易被样品堵塞, 而 Poroshell 2 色谱柱入口使用了标准的 2 μm 筛板, 有效地防止了样品的堵塞 水产品中硝基呋喃类代谢物残留量的测定液相色谱 - 串联质谱法 ).National Standards of the People s Republic of China( 中华人民共和国国家标准 )GB/T 2752-26 总之, 长色谱柱的分离效果明显优于短色谱柱, 但短色谱柱所需时间较短, 适合大批量的样品检测 如果在实验过程中遇到疑似阳性样品的时候, 其有可能为假阳性, 应慎重对待, 建议更换长色谱柱确认, 进行色谱峰的分离, 排除假阳性的干扰, 提高实验的准确性 参考文献. YU Jian-Xin( 余建新 ), HU Xiao-Zhong ( 胡小钟 ), LIN Yan- Fei( 林雁飞 ).Journal of Analytical Science, ( 分析科学学报 ), 24,4(2):382~384 2. ZHANG Ping-An( 张平安 ), ZHANG Jian-Wei( 张建威 ), QIA Ming-Wu( 乔明武 ). Journal of Agricultural Sciences, ( 浙江农业科学 ), 2,3:6~64 3. SUN Tao( 孙涛 ), HU Kai-Feng ( 胡开峰 ), QIA Kun-Yun( 乔昆云 ). Analytical Instrumention, ( 分析仪器 ), 2,5:27~3 4. Murphy B J. LC/MS/MS method detects nitrofuran metabolites [J].Trac-trends in Analytical Chem- istry, 23, 22 ( ): 7~8 5. JIANG Yuan( 蒋原 ), DING Tao ( 丁涛 ), SHEN Chong-Yu( 沈崇钰 ). Animal Husbandry& Veterinary Medicine, ( 畜牧与兽医 ), 25,3(37):2~5 6. Angelii NM, Rampini D, Mugica H. Liquid chromatographic determination of nitrofuran residues in bovine muscle tissues [J]. Journal of Aoac Internationa,l 997, 8 ( 3) : 48~485 7. Method for the determination residues of the metabolites of nitrofuran in pork,beef,chicken,porcine liver and aquatic products LC-MS-MS method( 猪肉 牛肉 鸡肉 猪肝和 5
Agilent Poroshell 2 应用文集 食品安全 使用 Poroshell 2 色谱柱同时测定食品中 苯甲酸 山梨酸 脱氢乙酸 糖精钠的方法研究 关键词 HPLC Poroshell 2 防腐剂 作者 2 李静娜胡汉高黄常刚 朱其明卢冰吴晓旻. 武汉市疾病预防控制中心 2. 武汉工业学院 摘要 近年来, 由于消费者对食品的安全性日益关注, 特别是防腐剂苯甲酸 ( BA) 山梨酸 ( SA) 脱氢乙酸 ( DHA) 和人工合成甜味剂糖精钠 ( SS) 的使用越来越受到人们的重视 [,2] 由于防腐剂 甜味剂都有一定的毒性, 过量摄入会对人体带来伤害, 还可引发癌症 [3] 在我国食品添加剂使用卫生标准 ( GB276-27) 中对这些添加剂的使用范围和最大使用限量均有明确规定 由于这几种防腐剂和甜味剂允许同时添加在许多食品中, 因此同时快速检测成为必要, 而现行国标方法 GB/T23495-29 和 GB/T23377-29 分别测定 BA SA SS 和 DHA, 如果沿用国家标准分开检测, 不但增加了工作成本, 而且工作效率低 本文方法在文献 [ - 6] 的基础上加以改进, 探讨用高效液相色谱法同时对 BA SA DHA 和 SS 进行检测, 比较 Poroshell 2 色谱柱和普通色谱柱的区别, 结果表明采用 Poroshell 2 色谱柱同时检测食品中的 BA SA DHA 和 SS 更快速, 更高效 52
Agilent Poroshell 2 应用文集 食品安全 材料与方法. 仪器与试剂 高效液相色谱仪,AL24 电子天平 ( 瑞士 ),PT - 3 电子天平, 超声波清洗器, 低速台式离心机,Anke TGL - 6B 高速离心机 Poroshell 2 EC-C8( 4.6 mm 2.7μm) 色谱柱 ( 美国 Agilent 公司 ) 苯甲酸标准溶液 山梨酸标准溶液 糖精钠标准溶液均为. mg /ml( 国家标准物质中国计量科学研究院 ); 脱氢乙酸 : ( 98%, 美国 ACRS 公司 ); 甲醇 ( 色谱纯 ); 乙酸铵 硫酸锌 氢氧化钠 石油醚 3 ~ 6( 分析纯 ); 水为超纯水.2 样本来源酱腌菜制品 6 件, 糕点 9 件, 样品均为市场采购.3 测定方法.3. 色谱条件 氰化钾溶液和乙酸锌溶液 ); 脂肪含量高的样品需脱脂 ( 用石油醚或者正己烷 ) 弃去有机层 将样品粉碎混匀, 称取 5g( 精确至. g) 样品于 5mL 的比色管中, 加入约 3mL 水, 用氢氧化钠溶液调 ph 值至 7 ~ 8, 加水定容至刻度, 超声提取 3min, 3r/min 离心 min, 取上清液经.45μm 的滤膜过滤后待测.3.5 测定结果标准系列溶液与样品制备液按照.3. 的色谱条件进行检测, BA SS SA 和 DHA 与样品中其它共存物质分离良好, 测定不受干扰 结果与讨论 2. BA SS SA 和 DHA 的保留时间分别为 2.4 2.8 3.4 3.7 min, 各组份均能基线分离, 与共存的其他物质分离良好, 其混合标准溶液 阳性样品制备液及样品加标制备液色谱图见图 ~ 4 色谱柱 : ZRBAX Poroshell 2 EC-C8( 4.6 mm 2.7μm); 流动相 : MeH.2 mol /L NH4Ac( 9); 柱温 : 4 ; 流速 :. ml /min; 检测波长 23nm; 进样量 : μl 根据保留时间定性, 外标法定量.3.2 标准储备液的配制. mg /ml DHA 标准溶液 : 准确称取. g DHA 标准品, 用 ml( 2 mg /ml) 氢氧化钠溶液溶解, 置于 ml 容量瓶中, 用水定容至刻度 (4 保存 6 个月 ) 2 μg/ml BA SS SA 和 DHA 混合标准溶液 : 分别准确吸取. ml 浓度均为. mg/ ml BA SS SA 和 DHA 标准溶液置于 5mL 容量瓶中, 用水定容至刻度 ( 4 保存 3 个月 ) 图 2μg/mL BA SS SA 和 DHA 混标溶液色谱图 ( 色 谱柱 :Poroshell 2 EC-C8).3.3 标准溶液系列的配制将 2μg/mL BA SS SA 和 DHA 混合标准溶液逐级配制成浓度分别为. 5.. 2. 5. 8. μg /ml 的标准溶液系列 ( 临用现配 ).3.4 样品处理 参照国标方法 GB/T23495-29 和 GB/T23377-29 以及文 献 [ - 6], 含有二氧化碳的液体样品需超声脱气 ; 蛋白质含量高 的样品需沉淀蛋白质 ( 用氢氧化钠溶液和硫酸锌溶液或者用亚铁 图 2 BA SS SA 和 DHA 样品本底制备液色谱图 53
Agilent Poroshell 2 应用文集 食品安全 加标平均回收率依次为.3% 2. % 99.6% 88.8%, 相对标准偏差依次为.52%.93%.74%.99%( n = 6), 保留时间的相对标准偏差依次为.5%.54%.4%.63% (n=6), 用 BA SS SA 和 DHA 标准溶液作外标定量, 结果准确可靠, 重现性良好 图 3 BA SS SA 和 DHA 样品加标制备液色谱图图 4 2μg/mL BA SS SA 和 DHA 混标溶液色谱图 ( 色谱柱 :Eclipse XDB-C8) 2.2 工作曲线与检测限 BA SS SA 和 DHA 的回归方程在 ~ 8μg/mL 浓度范围内与峰面积呈良好的线性关系, 将混合标准溶液逐级稀释至.5..2μg/mL 进样量为 μl 时,BA SA(.5μg/mL) SS(.μg/ ml) DHA(. 2μg/mL), 峰高大于 3 倍噪音信号, 即 BA SS SA 和 DHA 仪器最低检出量为 :.5..5 2. ng, 该方法 BA SS SA 和 DHA 最低检出限为.5..5 2.mg/kg 2.3 加标回收率与精密度分别称取 5.g 同一混合均匀的样品共 8 份, 其中两份本底,6 份分别准确加入 5.mL2μg/mLBA SS SA 和 DHA 混合标准储备液做加标回收, 按照.3 的方法操作, 分别定容至 5mL, 制备液相当于各组分均加标 2 μg /ml, 测定样品本底 加标样品制备液浓度, 计算加标回收率 样品本底 BA 和 DNA 均未检出, 山梨酸为 5.27μg/mL,SS 为.3μg/mL,BA SS SA 和 DHA 的 2.4 样品中 BA SS SA 和 DHA 的检测结果我国食品添加剂使用卫生标准 ( GB276-27) 规定, 酱腌菜中 BA SS SA 和 DHA 最大使用量分别为.5g/kg.5g/kg.5g/kg.3g/ kg; 月饼和糕点中 BA SS SA 和 DHA 最大使用量分别为不得检出.5g/kg.g/kg.5g/kg 按照.3 的方法测定了 6 件酱腌菜 9 件糕点中的 BA SS SA 和 DHA, 其中酱腌菜中的 BA 检出 5 件, 结果为.9 ~ 6.2g/kg, SS 检出 5 件, 结果为.76 ~.26g/kg,SA 检出 7 件, 结果为.3 ~ 3.2g/kg, DHA 检出 8 件, 结果为. 27 ~.48g/kg; 糕点中的 BA 和 SS 均未检出,SA 检出 7 件, 结果为.24 ~.62g/kg,DHA 检出 7 件, 结果为.26 ~.58g/kg 其它样品中的 BA SS SA 和 DHA 均为未检出 2.5 现行国标方法 GB/T23495-29 和 GB/T23377-29 分别测定 BA SA SS 和 DHA, 使用该方法可同时测定 BA SS SA 和 DHA, 比国标方法大大缩短了分析时间, 提高了灵敏度和工作效率, 节约实验耗材 2.6 柱温提高到 4, 有利于提高灵敏度, 缩短分析时间 2.7 BA SS SA 和 DHA 各组份的最大吸收波长分别为 223 2 254 23 nm, 其中 DHA 还有个次吸收峰波长为 292 nm, 选择 23 nm 测定各组份可得到满意结果, 适合于基层单位具有普通液相色谱仪检测工作的开展 2.8 色谱柱 : Poroshell 2 EC-C8( 4.6 mm,2.7μm), 色谱柱 2: Eclipse XDB-C8(4.6 25mm,5μm), 色谱柱 3: ZRBAX SB-Aq(4.6 25mm,5μm), 以上色谱柱均为美国 Agilent 公司提供, 在.3 条件下, 使用色谱柱 2,BA SS SA 和 DHA 各组份均能基线分离, 色谱柱 3 DHA 色谱峰拖尾较严重, 由图 和图 4 可以看出, 色谱柱 比色谱柱 2 灵敏度更高 其它色谱条件相同, 色谱柱 比色谱柱 2 保留时间明显缩短,6min 即可完成分析 因此, 色谱柱 不仅有较高的灵敏度, 而且还提高了工作效率, 节约试剂 54