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第 40 卷 分 析 化 学 (FENXI HUAXUE) 研 究 第 期 0 年 月 Chinese Journal of Analytical Chemistry ~ DOI:0.74/SP.J.096.0.0555 超 高 效 液 相 色 谱 - 飞 行 时 间 质 谱 法 高 通 量 筛 查 乳 制 品 中 0 种 镇 静 剂 严 丽 娟 张 洁 * 潘 晨 松 林 立 毅 张 欣 怡 申 河 清 ( 厦 门 出 入 境 检 验 检 疫 局, 厦 门 60) ( 中 国 科 学 院 城 市 环 境 研 究 所 城 市 环 境 与 健 康 重 点 实 验 室, 厦 门,60) ( 美 国 布 鲁 克 道 尔 顿 公 司 北 京 代 表 处, 北 京 0008) 摘 要 利 用 超 高 效 液 相 色 谱 / 高 分 辨 飞 行 时 间 质 谱, 结 合 数 据 库, 建 立 了 乳 制 品 中 0 种 镇 静 剂 的 高 通 量 筛 查 方 法 样 品 以 乙 腈 和 酸 化 乙 腈 沉 淀 蛋 白 质 和 脂 肪, 冷 冻 离 心 浓 缩, 经 超 高 效 液 相 色 谱 分 离, 采 用 电 喷 雾 离 子 源, 正 离 子 模 式, 基 质 匹 配 法 进 行 定 量 分 析, 可 在 9 min 内 对 0 种 镇 静 剂 进 行 高 通 量 筛 查 和 定 量 分 析 镇 静 剂 的 质 量 浓 度 在 ~500 mg/l 或 5~000 mg/l 范 围 内 具 有 较 好 的 线 性 关 系, 检 出 限 为 0.~.5 mg/l, 定 量 限 为 ~ 5 mg/l 在 5 和 50 mg/l 添 加 水 平 时, 平 均 回 收 率 为 76.% ~08.%, 相 对 标 准 偏 差 为.5% ~9.0% 利 用 Targeṯ Analysis 软 件 建 立 镇 静 剂 数 据 库, 并 应 用 于 加 标 样 品 的 筛 查 分 析 通 过 数 据 库 比 对, 样 品 中 添 加 的 镇 静 剂 被 全 部 筛 查 出 来, 鉴 定 准 确 度 达 到 了 00%, 保 留 时 间 偏 差 小 于 0. min, 质 量 偏 差 小 于 mda, 同 位 素 峰 形 匹 配 度 大 于 89.5% 利 用 本 方 法 对 购 自 超 市 的 8 个 不 同 品 牌 的 50 余 份 乳 制 品 进 行 了 筛 查 分 析, 均 未 检 出 阳 性 样 品 关 键 词 镇 静 剂 ; 乳 制 品 ; 超 高 效 液 相 色 谱 ; 飞 行 时 间 质 谱 ; 高 通 量 筛 查 引 言 食 品 中 兽 药 残 留 检 测 已 从 单 一 化 合 物 发 展 为 多 种 不 同 化 合 物 的 同 时 定 性 和 定 量 分 析 与 低 分 辨 的 三 重 四 级 杆 质 谱 不 同, 高 分 辨 飞 行 时 间 质 谱 (High resolution time-of-flight spectrometer, HRTOF- MS) 能 够 采 集 高 质 量 分 辨 率 和 高 准 确 度 的 全 扫 描 数 据, 目 标 化 合 物 数 目 没 有 任 何 限 制 利 用 精 确 分 子 量 和 同 位 素 峰 形 还 可 对 异 常 未 知 峰 进 行 准 确 的 定 性 分 析 研 究 人 员 已 经 利 用 该 技 术 建 立 了 蔬 菜 水 果 肉 制 品 中 有 害 物 质 的 同 时 检 测 方 法 [~ 7], 显 示 了 其 在 高 通 量 筛 查 应 用 中 的 巨 大 潜 力, 但 是 国 内 该 方 面 相 关 的 报 道 还 较 少 镇 静 剂 药 物 具 有 抑 制 躁 狂 镇 吐 等 作 用, 可 能 被 添 加 到 奶 牛 饲 料 中 以 促 进 采 食, 提 高 饲 料 转 化 率, 并 缓 解 奶 牛 热 应 激, 提 高 产 奶 量 [8] 但 是, 这 类 药 物 的 残 留 会 造 成 过 敏 心 悸 肝 损 害 等 不 良 反 应 农 业 部 第 76 号 公 告 中 明 确 禁 止 在 动 物 饲 料 和 饮 用 水 中 添 加 氯 丙 嗪 异 丙 嗪 地 西 泮 利 血 平 等 镇 静 剂 [9] 国 标 GB/T99-008 也 制 定 了 乳 制 品 中 氯 丙 嗪 和 氟 哌 啶 醇 等 8 种 镇 静 剂 的 检 测 方 法 [0] 鉴 于 我 国 食 品 安 全 的 现 状, 有 必 要 对 更 多 镇 静 剂 进 行 监 测 本 研 究 以 氯 丙 嗪 氟 哌 啶 醇 地 西 泮 和 艾 司 唑 仑 等 0 种 镇 静 剂 为 例, 发 展 了 基 于 超 高 效 液 相 色 谱 - 飞 行 时 间 质 谱 技 术, 结 合 筛 查 数 据 库 的 高 通 量 分 析 方 法, 成 功 应 用 于 乳 制 品 的 快 速 筛 查, 方 法 检 出 限 等 技 术 指 标 满 足 相 关 法 规 要 求 实 验 部 分. 仪 器 与 试 剂 超 高 效 液 相 色 谱 ( 美 国 Waters 公 司 ); 四 极 杆 / 飞 行 时 间 质 谱 ( 美 国 Bruker 公 司 );Speedvac 离 心 浓 缩 仪 ( 美 国 Thermo 公 司 ); 高 速 离 心 机 ( 德 国 Hettich 公 司 ) 氯 丙 嗪 氟 哌 啶 醇 地 西 泮 和 艾 司 唑 仑 等 0 种 镇 静 剂 标 准 品 ( 纯 度 > 98% ), 购 自 美 国 Cerilliant 公 司 和 德 国 Dr. Ehrenstorfer 公 司 ; 甲 酸 ( 纯 度 为 99%, 美 国 Acros Organics 公 司 ); 乙 腈 甲 醇 (HPLC 级, 美 国 0-06-0 收 稿 ;0-09- 接 受 本 文 系 质 检 公 益 性 行 业 科 研 专 项 课 题 (No.009045) 和 厦 门 市 科 技 项 目 (Nos.50Z007,50Z009009) 资 助 * E-mail: jzhang@ iue.ac.cn

分 析 化 学 第 40 卷 Merck 公 司 ). 样 品 前 处 理 准 确 移 取 ml 液 态 奶 于 离 心 管 中, 加 入 ml 乙 腈, 旋 涡 振 荡 提 取 min,8000 g 离 心 5 min; 将 上 层 清 液 全 部 转 移 至 新 离 心 管 中, 加 入 6 ml 酸 化 乙 腈 (0.% 甲 酸,V/V), 旋 涡 振 荡 min,8000 g 离 心 5 min; 小 心 吸 取 5 ml 上 层 清 液 至 5 ml 离 心 管 ; 浓 缩 至 溶 液 体 积 小 于 ml, 全 部 转 移 到.5 ml 离 心 管 中 继 续 浓 缩 至 近 干 ; 加 入 0. ml 0% 乙 腈 溶 液 溶 解 提 取 物, 经 过 0. mm 滤 膜 过 滤, 转 移 到 装 有 内 插 管 的 样 品 瓶 中, 分 析 前 置 于 -0 保 存 对 于 奶 粉 等 固 体 样 品, 准 确 称 取 0.6 g 粉 末 样 品, 加 入 ml 超 纯 水 充 分 溶 解, 其 它 处 理 步 骤 同 液 态 奶. 超 高 效 液 相 色 谱 - 高 分 辨 飞 行 时 间 质 谱 的 分 析 条 件 Waters ACQUITY BEH 色 谱 柱 (00 mm. mm i.d.,.7 mm) 流 动 相 A 为 0.% (V/V) 甲 酸 溶 液, 流 动 相 B 为 0.% (V/V) 甲 酸 - 乙 腈 溶 液 梯 度 洗 脱 :0~ min,0% B;~9 min,0% ~7% B 流 速 : 0.0 ml/min; 柱 温 :0 ; 进 样 器 温 度 4 ; 进 样 体 积 : ml 电 喷 雾 离 子 源 (ESI); 正 离 子 模 扫 描 模 式 ; 毛 细 管 电 压 :4.5 kv; 雾 化 气 :50 kpa; 干 燥 气 温 度 :80 ; 干 燥 气 流 速 :6 L/min; 采 集 质 量 数 范 围 m/z 50~ 000 三 氟 乙 酸 钠 溶 液 作 为 外 标 以 校 正 分 子 量 结 果 与 讨 论. 样 品 前 处 理 条 件 优 化 本 研 究 采 用 乙 腈 和 酸 化 乙 腈 沉 淀 蛋 白 质 和 脂 肪, 并 结 合 高 速 离 心, 有 效 去 除 了 乳 制 品 中 大 量 蛋 白 质 [] 和 脂 肪, 大 多 数 镇 静 剂 的 提 取 率 可 达 到 80% 以 上 固 相 萃 取 柱 常 被 用 于 进 一 步 去 除 基 质 的 干 扰, 本 研 究 通 过 对 比 发 现, 对 于 这 0 种 镇 静 剂, 虽 然 在 不 经 固 相 萃 取 柱 净 化 的 情 况 下 存 在 一 定 的 基 质 干 扰, 但 是 高 分 辨 飞 行 时 间 质 谱 完 全 可 以 实 现 待 测 物 和 干 扰 物 的 区 分, 而 且 采 用 基 质 匹 配 法 拟 合 标 准 曲 线 也 可 在 一 定 程 度 上 消 除 基 质 干 扰 经 过 和 不 经 过 固 相 萃 取 柱 净 化 的 两 种 方 法 的 定 量 准 确 度 基 本 相 当, 并 无 明 显 差 异. 超 高 效 液 相 色 谱 - 高 分 辨 飞 行 时 间 质 谱 条 件 的 优 化 考 察 了 5 mmol/l 甲 酸 胺 - 甲 醇 5 mmol/l 甲 酸 胺 - 乙 腈 0.% 甲 酸 - 甲 醇 和 0.% 甲 酸 - 乙 腈 4 种 流 动 相 对 镇 静 剂 离 子 化 效 率 和 峰 形 的 影 响 甲 酸 胺 体 系 可 以 获 得 较 低 的 背 景 值, 但 是 分 析 物 的 信 号 也 较 低, 严 重 影 响 了 检 测 灵 敏 度 采 用 甲 酸 体 系 时, 虽 然 背 景 值 有 所 升 高, 但 是 分 析 物 的 信 号 显 著 增 强, 信 噪 比 比 甲 酸 胺 体 系 提 高 了 5~0 倍 与 甲 醇 相 比, 采 用 乙 腈 作 为 流 动 相 时 可 以 获 得 更 好 的 峰 形, 信 号 响 应 值 也 略 高 因 此, 本 研 究 采 用 0.% 甲 酸 - 乙 腈 作 为 流 动 相,0 种 镇 静 剂 在 9 min 内 可 得 到 较 好 地 分 离 ( 图 ) 图 0 种 镇 静 剂 的 高 分 辨 提 取 离 子 流 图 Fig. High resolution extracted ion chromatograms (hreic, ±0.00 Da) of twenty tranquilizers 峰 号 同 表 (The peak numbers are the same as in Table ). 精 密 度 线 性 关 系 和 回 收 率 在 基 于 UPLC/HRTOF-MS 的 高 通 量 筛 查 研 究 中, 保 留 时 间 的 重 现 性 和 质 量 准 确 度 是 定 性 分 析 的 关

第 期 严 丽 娟 等 : 超 高 效 液 相 色 谱 - 飞 行 时 间 质 谱 法 高 通 量 筛 查 乳 制 品 中 0 种 镇 静 剂 键 参 数 加 标 样 品 重 复 进 样 5 次, 保 留 时 间 偏 差 均 小 于 0. min, 测 定 分 子 量 偏 差 均 小 于 mda 测 定 分 子 量 偏 差 越 小, 数 据 处 理 时 可 设 置 更 窄 的 提 取 离 子 窗 口, 从 而 可 更 有 效 排 除 干 扰 化 合 物, 实 现 更 准 确 的 定 性 分 析 另 外, 高 质 量 准 确 度 使 得 在 无 标 样 情 况 下 对 未 知 物 定 性 成 为 可 能, 特 别 是 针 对 镇 静 剂 这 类 分 子 量 较 小 的 化 合 物 例 如, 某 化 合 物 的 实 测 分 子 量 为 88.59, 与 氟 西 泮 的 理 论 分 子 量 (88.586) 的 偏 差 仅 为 0.5 mda, 而 且 同 位 素 峰 形 匹 配 度 为 98.6%, 依 据 这 些 信 息 即 可 将 该 化 合 物 定 性 为 氟 西 泮 为 了 最 大 限 度 消 除 基 质 效 应 干 扰, 本 研 究 采 用 基 质 匹 配 法 进 行 定 量 分 析 以 空 白 牛 奶 样 品 的 提 取 液 配 制 0.~000 mg/l 的 系 列 混 合 标 准 溶 液 镇 静 剂 ( 除 唑 吡 旦 外 ) 的 质 量 浓 度 在 ~500 mg/l 或 5~000 mg/l 范 围 内 具 有 较 好 的 线 性 关 系, 检 出 限 为 0.~.5 mg/l, 定 量 限 为 ~5 mg/l( 表 ) 在 5 和 50 mg/l 两 个 添 加 水 平 测 定 方 法 回 收 率 及 精 密 度, 平 均 回 收 率 为 76.% ~08.%, 相 对 标 准 偏 差 为.5% ~9.0% 最 优 条 件 下 的 0 种 镇 静 剂 的 离 子 流 谱 图 如 图 所 示 表 0 种 镇 静 剂 的 线 性 方 程 相 关 系 数 检 出 限 和 定 量 限 Table Linear equations, correlation coefficients, limits of detection (LOD) and limits of quantification (LOQ) of twenty tranquiḻ izers 序 号 No. 名 称 Name 分 子 式 Formula 线 性 范 围 Linear range (mg/l) 线 性 方 程 Linear equation 相 关 系 数 Correlation coefficient 检 出 限 LOD (mg/l) 唑 吡 旦 Zolpidem C 9H N O ~00 Y=894.4X-085. 0.999 0. 利 眠 宁 Chlordiazepoxide C 6H 4ClN O ~500 Y=6.04X+88.94 0.9904 0. 氯 氮 平 Clozapine C 8H 9ClN 4 5~000 Y=40.8X+8.05 0.9959.5 4 咪 达 唑 仑 Midazolam C 8H ClFN ~500 Y=6.0X-075.6 0.9998 0. 5 氟 西 泮 Flurazepam C H ClFN O ~500 Y=74.79X+05.98 0.998 0. 6 氟 哌 啶 醇 Haloperidol C H ClFNO ~500 Y=495.46X-5.77 0.9975 0. 7 硝 西 泮 Nitrazepam C 5H N O 5~000 Y=44.68X+849.94 0.9996.5 8 氟 硝 西 泮 Flunitrazepam C 6H FN O 5~000 Y=4.04X+754.75 0.997.5 9 异 丙 嗪 Promethazine C 7H 0N S ~500 Y=5.4X-48.65 0.9988 0. 0 艾 司 唑 仑 Estazolam C 6H ClN 4 5~000 Y=87.54X+48.7 0.9999.5 安 眠 酮 Methaqualone C 6H 4N O 5~000 Y=577.5X+484.88 0.9998.5 诺 氟 西 汀 Norfluoxetine C 6H 6F NO 5~000 Y=4.00X+85.9 0.987.5 奥 沙 西 泮 Oxazepam C 5H ClN O 5~000 Y=5.7X+8. 0.9997.5 4 阿 普 唑 仑 Alprazolam C 7H ClN 4 5~000 Y=86.X-.77 0.9999.5 5 利 血 平 Reserpine C H 40N O 9 ~500 Y=50.5X-468.6 0.9996 0. 6 三 唑 仑 Triazolam C 7H Cl N 4 5~000 Y=9.60X-764.0 0.9996.5 7 氯 丙 嗪 Chlorpromazine C 7H 9ClN S ~500 Y=4.0X+8.06 0.995 0. 8 替 马 西 泮 Temazepam C 6H ClN O 5~000 Y=68.78X+54.9 0.9994.5 9 甲 硫 达 嗪 Thioridazine C H 6N S ~500 Y=775.97X+558.79 0.99 0.5 0 地 西 泮 Diazepam C 6H ClN O 5~000 Y=69.8X+84.88 0.999.5 国 标 GB/T99-008 中 氯 丙 嗪 和 氟 哌 啶 醇 的 检 出 限 分 别 为 0.5 和 0. mg/l, 而 本 研 究 中 这 两 种 镇 静 剂 的 检 出 限 均 为 0. mg/l, 与 国 标 相 当 由 于 我 国 目 前 尚 未 对 乳 制 品 中 镇 静 剂 制 定 限 量 标 准, 本 研 究 参 考 了 日 本 肯 定 列 表 的 一 律 标 准 本 方 法 中 镇 静 剂 的 检 出 限 均 低 于 一 律 标 准 的 限 量 值 (0 mg/l) 因 此, 本 方 法 完 全 能 够 满 足 日 常 检 测 的 需 要.4 数 据 库 的 建 立 及 筛 查 利 用 TargetAnalysis 软 件 建 立 筛 查 数 据 库, 包 含 镇 静 剂 的 保 留 时 间 精 确 分 子 量 同 位 素 峰 形 等 信 息 保 留 时 间 和 精 确 分 子 量 在 鉴 定 过 程 中 起 主 要 作 用, 如 果 两 个 化 合 物 保 留 时 间 和 精 确 分 子 量 ( 质 谱 测 定 偏 差 范 围 内 ) 非 常 接 近, 就 必 须 依 靠 同 位 素 峰 形 匹 配 度 进 行 进 一 步 的 确 认 利 用 筛 查 数 据 库 对 某 随 机 加 标 样 品 进 行 了 测 试, 结 果 如 表 所 示, 保 留 时 间 偏 差 小 于 0. min, 质 量 偏 差 小 于 mda, 同 位 素 峰 形 匹 配 度 大 于 89.5%, 通 过 比 对 保 留 时 间 精 确 分 子 量 同 位 素 峰 形 匹 配 度 等 信 息 即 可 实 现 快 速 准 确 的 筛 查, 准 确 度 达 到 00%.5 实 际 样 品 的 测 定 利 用 本 方 法 对 购 自 超 市 的 8 个 不 同 品 牌 的 50 余 份 乳 制 品 进 行 了 筛 查 分 析, 均 未 检 出 上 述 0 种 镇 静 剂

分 析 化 学 第 40 卷 表 TargetAnalysis 筛 查 结 果 Table Screening result from TargetAnalysis software 评 分 Score 名 称 Name 理 论 质 量 数 Theoretical (Da) 实 测 质 量 数 Measured (Da) 质 量 数 偏 差 Deviation of (mda) 保 留 时 间 偏 差 Deviation of retention time (min) 同 位 素 峰 形 匹 配 度 Degree of isotope pattern match (% ) +++ 唑 吡 旦 Zolpidem 08.757 08.759-0. 0.0 98.7 +++ 利 眠 宁 Chlordiazepoxide 00.0898 00.09 -.5 0.0 9. +++ 氯 氮 平 Clozapine 7.7 7.67 0.4 0.0 98.0 +++ 咪 达 唑 仑 Midazolam 6.0855 6.0857-0. 0.0 98. +++ 氟 西 泮 Flurazepam 88.586 88.59-0.5-0. 98.6 +++ 氟 哌 啶 醇 Haloperidol 76.474 76.460.4 0.0 96.0 ++ 异 丙 嗪 Promethazine 85.40 85.94.6-0. 89.5 +++ 硝 西 泮 Nitrazepam 8.087 8.0868 0.6 0.0 98.8 +++ 氟 硝 西 泮 Flunitrazepam 4.095 4.0945 -.0-0. 99.6 +++ 艾 司 唑 仑 Estazolam 95.0745 95.074 0. -0. 96. +++ 安 眠 酮 Methaqualone 5.79 5.86-0.7 0.0 98.7 +++ 诺 氟 西 汀 Norfluoxetine 96.57 96.46. -0. 96.9 +++ 奥 沙 西 泮 Oxazepam 87.058 87.0586-0.4-0. 9. +++ 阿 普 唑 仑 Alprazolam 09.090 09.090-0. 0.0 97.9 +++ 利 血 平 Reserpine 609.807 609.798 0.8 0.0 97. +++ 三 唑 仑 Triazolam 4.05 4.05 0. 0.0 9. +++ 氯 丙 嗪 Chlorpromazine 9.00 9.08 0. 0.0 97.5 ++ 替 马 西 泮 Temazepam 0.078 0.0766 -.8 0.0 9.7 +++ 甲 硫 达 嗪 Thioridazine 7.60 7.64-0.4 0.0 98. +++ 地 西 泮 Diazepam 85.0789 85.079-0. 0.0 97.7 评 分 标 准 :+++ 保 留 时 间 偏 差 0. min, 质 量 偏 差 mda, 同 位 素 峰 形 匹 配 度 90% ;++ 保 留 时 间 偏 差 0.5 min, 质 量 偏 差 5 mda, 同 位 素 峰 形 匹 配 度 85% Score standards: +++ Deviation of retention time 0. min, deviation of mda, degree of isotope pattern match 90% ;++ Deviation of retention time 0.5 min, deviation of 5 mda, degree of isotope pattern match 85%..6 结 论 基 于 UPLC/HRTOF-MS 技 术, 结 合 数 据 库, 建 立 了 高 通 量 筛 查 0 种 镇 静 剂 的 方 法, 采 用 基 质 匹 配 进 行 定 量 分 析, 并 应 用 于 市 售 乳 制 品 中 0 种 镇 静 剂 的 快 速 筛 查 分 析 HRTOF-MS 能 够 提 取 扫 描 范 围 内 所 有 目 标 化 合 物 的 精 确 质 量 色 谱 图, 理 论 上 增 加 新 的 目 标 化 合 物 不 会 降 低 方 法 的 灵 敏 度, 而 且 全 扫 描 数 据 还 可 以 随 时 进 行 重 新 处 理 本 研 究 组 将 进 一 步 扩 充 数 据 库, 以 实 现 对 乳 制 品 等 食 品 中 更 多 兽 药 残 留 的 高 通 量 筛 查 References ValverdeA,AguileraA,FerrerC,CamachoF,CammaranoA.J.Agric.FoodChem.,00,58(5):88-8 StolkerA A,RutgersP,OosterinkE,LasaromsJJ,PetersRJ,VanRhijnJA,Nielen M W.Anal.Bioanal. Chem.,008,9(6):09- DengXJ,Yang H Q,LiJZ,SongY,GuoD H,LuoY,DuX N,BoT.J.LiquidChromatogr.& Related Technol.,0,4:86-0 4 HaywardD G,WongJW,ZhangK,ChangJ,ShiF,BanerjeeK,YangP.J.AOAC.Int.,0,94(6):74-75 5 WANG He-Xing,ZHOU Ying,JIANG Qing-Wu.ChineseJ.AnalChem.,0,9(9):-8 王 和 兴, 周 颖, 姜 庆 五. 分 析 化 学,0,9(9):-8 6 ZHANG Feng,DING Fei,CHU Xiao-Gang,LIFaṉZhu,YONG Wei,WANG Xiu-Juan,LÜ QuaṉFu,XU Cheng-Bao.ChineseJ.AnalChem.,0,9(6):788-79 张 峰, 丁 菲, 储 晓 刚, 李 范 珠, 雍 炜, 王 秀 娟, 吕 泉 福, 许 成 保. 分 析 化 学,0,9(6):788-79 7 SUNBi-Xia,GUO De-Hua,DINGZhuo-Ping,JIFeng,DONGJi-Chuan,YAOJiṉTing.J.InstrumentalAnal., 00,9(0):07-04 孙 碧 霞, 郭 德 华, 丁 卓 平, 冀 峰, 董 吉 川, 姚 劲 挺. 分 析 测 试 学 报,00,9(0):07-04

第 期 严 丽 娟 等 : 超 高 效 液 相 色 谱 - 飞 行 时 间 质 谱 法 高 通 量 筛 查 乳 制 品 中 0 种 镇 静 剂 8 LIZhen.GuangdongDiaryProd.,009,:5-7 李 振. 广 东 奶 业,009,:5-7 9 MinistryofAgriculture.No.76BuletinoftheMinistryofAgricultureofthePeople srepublicofchina,htp:// www.moaġov.cn/zwlm/tzgg/gg/004/t004_97607.htm,00 农 业 部, 中 华 人 民 共 和 国 农 业 部 公 告 第 76 号,htp://www.moa ġov.cn/zwlm/tzgg/gg/004/t004_ 97607.htm,00 0 GB/T99-008,Determinationofeighttranquilizersresiduesinbovine milkand milkpowder-lc-ms-ms method.nationalstandardsofthepeople srepublicofchina 牛 奶 和 奶 粉 中 8 种 镇 定 剂 残 留 量 的 测 定 液 相 色 谱 - 串 联 质 谱 法. 中 华 人 民 共 和 国 国 家 标 准.GB/T99-008 HighThroughputScreeningofTranquilizersinDairyProducts usingultraperformanceliquidchromatographycoupledto HighResolutionTime-of-flightMassSpectrometry YANLi-Juan,ZHANGJie *,PANCheṉSong,LINLi-Yi,ZHANG XiṉYi,SHEN He-Qing (XiamenEntrȳExitInspectionandQuarantineBureau,Xiamen,60,China) (ChinaKeyLaboratoryofUrbanEnvironmentand Health,InstituteofUrbanEnvironment, ChineseAcademyofSciences,Xiamen60,China) (BrukerDaltonicsBeijingOfice,Beijing0008,China) Abstract Ahighthroughputscreening methodwasdevelopedforthesimultaneousdeterminationof twentyrepresentativetranquilizersindairyproductsusingthecombinationofultra-performanceliquid chromatography-highresolutiontime-of-flight spectrometryandscreeningdatabasebuiltwith TargetAnalysissoftware.Theproteinandfatinthesamplewasremovedusingatwo-stepprecipitationofacetonitrileandacidicacetonitrile,andthesupernatantwascombinedandconcentrated with Speedvac concentrator.the chromatographic separation was performed on an ACQUITY BEH columnwithgradientelutinusing0.% formicacidandacetonitrileasmobilephaseataflowrateof 0. ml/min.themonitoringoftranquilizerswasachievedbytime-of-flightspectrometryunder positiveionizationmodein9 min.thequantification wasperformedwith matrix-matching method. Thelinearrangeswere-500 mg/lor5-000 mg/l.thelodsandloqswere0.-.5 mg/land -5 mg/l,respectively.at5and50 mg/lspikedlevels,theaveragerecoveries were76.% - 08.% withrelativestandarddeviationsof.5% -9.0%.Thescreeningresultforspikedsample showedalthespikedtranquilizerscouldbecorrectlyidentifiedwithlowdeviationsofretentiontime (<0. min)and(<mda)andhighdegreesofisotopepaternmatch (>89.5%).Thedeveḻ opedmethodwasfurtherappliedfortheanalysisof50realdairyproducts,andnopositivesamplewas detected. Keywords Tranquilizer;Dairyproduct;Ultraperformanceliquidchromatography;Time-of-flight spectrometry;highthroughputscreening (ReceivedJune0;acceptedSeptember0)