. 560. 中国抗生素杂志 00 年 6 月第 45 卷第 6 期 文章编号 :1001-8689(0006-0560-07 微生物药物筛选 海洋链霉菌 Streptomyces sp. S598 中抗菌活性产物的研究 李慧玲 1, 赵玉瑛 3 姚敏娜 张迪 冯智军 张娟利,* 张晓梅 3 文爱东 (1 中国药科大学基础医学与临床药学学院, 南京 11198; 空军军医大学第一附属医院药剂科, 西安 71003; 3 云南中医药大学基础医学院, 昆明 650500 摘要 : 目的对海洋链霉菌 Streptomyces sp. S598 固体发酵提取物的抗菌成分进行研究 方法采用葡聚糖凝胶 Sephadex LH-0 反相柱色谱 硅胶柱层析及半制备 HPLC 等方法分离纯化该菌株的活性次级代谢产物, 并通过 ESI-MS NMR 等波谱技术结合文献对比鉴定其结构 结果从 10L 固体发酵提取物中分离得到 5 个单体化合物, 分别鉴定为缬氨霉素 (1 二活菌素( 亚油酸 (3 亚油酸甲酯(4 和油酸 (5 结论海洋链霉菌 Streptomyces sp. S598 能代谢产生具有多种生物活性的化合物 化合物 1 对 MRSA 8300 和白念珠菌 (ATCC1031 的 MIC 为 1μg/mL, 化合物 具有较强的广谱抗细菌活性, 对肺炎链球菌 流感嗜血菌的 MIC 为 0.15μg/mL, 尤其具有显著的抗 MRSA 的活性, 对 MRSA 8300 的 MIC<0.15μg/mL 化合物 1 和 均为首次从该种放线菌中分离得到, 且本文首次报道其对 MRSA 均具有抑制活性 关键词 : 海洋链霉菌 ; 分离纯化 ; 结构鉴定 ; 生物活性 ; 耐甲氧西林的金黄色葡萄球菌中图分类号 :R978 文献标志码 :A Study of antibiotic bioactive metabolites from marine Streptomyces sp. S598 Li Hui-ling 1,, Zhao Yu-ying 3, Yao Min-na, Zhang Di, Feng Zhi-jun, Zhang Juan-li, Zhang Xiao-mei 3 and Wen Ai-dong (1 School of Basic Medicine and Clinical Pharmacy, China Pharmaceutical University, Nanjing 11198; Department of Pharmacy, the First Affiliated Hospital of Air Force Medical University, Xi'an 71003; 3 College of Basic Medicine, Yunnan University of Chinese Medicine, Kunming 650500 Abstract Objective To investigate the antimicrobial constituents from the solid fermentation extracts of Streptomyces sp.s598. Methods The active secondary metabolites were isolated and purified by sephadex LH- 0, reversed phase column chromatography, silica gel column chromatography and semi-preparative HPLC steps. Their chemical structures were identified by ESI-MS and NMR spectral analysis and compared with the data of literature. Results Five compounds were isolated from 10L solid fermentation extracts and identified as valinomycin (1, dinactin (, linoleic acid (3, methyl linoleate (4 and oleic acid (5, respectively. Conclusion The marine actinomycete Streptomyces sp. S598 can produce the compounds with many biological activities. The MIC of compound 1 against MRSA 8300 and Candida albicans ATCC1031 was 1μg/mL. Compound showed strong broadspectrum antibacterial activity, and the MIC for Haemophilus influenza and Streptococcus pneumoniae was 0.15μg/ ml. Especially it showed remarkable anti-mrsa activity with MIC<0.15μg/mL against MRSA 8300. Compounds 1~ were isolated from the strain of marine actinomycete for the first time and they were reported firstly for the inhibitory activities against MRSA. Key words Marine Streptomyces; Isolatation and purification; Structural elucidation; Bioactivity; Methicillinresistant Staphylococcus aureus 收稿日期 :019-07-08 基金项目 : 国家自然科学基金 (No. 8160979, 国家自然科学基金 (No. 166048, 云南省科技计划项目 (No. 017FF116(-00 作者简介 : 李慧玲, 女, 生于 199 年, 在读硕士研究生, 研究方向微生物药物的研究,E-mail: 94196838@qq.com * 通讯作者,E-mail: zhangjuanli081@163.com
海洋链霉菌 Streptomyces sp.s598 中抗菌活性产物的研究李慧玲等. 561. 1959 年, 甲氧西林问世, 有效解决了当时青霉素耐药问题 但仅仅过了两年, 就在英国发现了耐甲氧西林金黄色葡萄球菌 (MRSA, 该菌能抵抗绝 [1] 大多数抗生素 017 年 CHINET 中国细菌耐药监测显示, 在金黄色葡萄球菌感染中,MRSA 的平均检出率为 35.3% [] MRSA 感染可能增加死亡风险 [3-4] 患病率 延长住院时间 增加住院费用 目前对 MRSA 感染治疗有效的药物仅限于万古霉素 利奈唑胺 替考拉宁 达托霉素等少数药物, 这些是 MRSA 感染治疗的最后一道防线, 而部分药物有局限性, 比如出现耐药 敏感性改变, 部分组织中的穿透性或活性较低, 毒副作用等 因此, 新型抗耐 [5] 药抗生素的研发已迫在眉睫 放线菌是迄今最重要和最大的药用微生物种群, 是抗生素的主要来源 其中链霉菌是放线菌中最重要的属, 绝大多数的抗生素都由该类细菌产生 海洋链霉菌因其特殊的生境, 产生的次级代谢产物丰富而 [6] 独特, 越来越受到研究者们的关注和青睐 本研究组前期对海洋链霉菌 Streptomyces sp. S598 的发酵粗提物研究中, 发现其具有一定的抗 MRSA 活性, 遂对该菌株进行了大规模的发酵和系统地分离纯化, 从中分离得到了 5 个单体化合物, 应用波谱技术结合文献数据分别鉴定为缬氨霉素 (1 二活菌素( 亚油酸 (3 亚油酸甲酯(4 和油酸 (5( 图 1 本文主要报道了 Streptomyces sp. S598 的发酵 活性代谢产物的分离 纯化 结构鉴定及生物活性 1 材料与菌株 1.1 仪器与材料旋转蒸发仪 ( 日本 Eyela 公司 ; 低温冷却液循环泵 ( 郑州长城科工贸有限公司 ; 隔膜真空泵 ( 天津市津腾实验设备有限公司 ; 高效液相色谱仪 ( 日本岛津 LC-10Avp;ZF-C 型三用紫外分析仪 ( 上海康禾光电仪器有限公司 ; 电子天平 ( 赛多利斯科学仪器有限公司 ; 全自动旋光仪 (Anton Paar 公司 ; 电喷雾 - 四级杆 - 飞行时间串联质谱仪 (Bruker 公司 ; 核磁共振仪 (Bruker 公司 材料: 凝胶 Sephadex LH-0( 美国 GE 公司 ; 反相硅胶 RP-18( 德国 Merck 公司 ; 柱层析用硅胶 高效硅胶薄层板 GF54( 青岛海洋化工厂 试剂 : 甲醇 二氯甲烷 正丁醇 丙酮 石油醚 环己烷和乙酸乙酯 ( 分析纯, 天津市富宇精细化工有限公司 ;HPLC 甲醇 (Fisher Scientific 公司 1. 菌株海洋链霉菌 Streptomyces sp.s598 由云南中医药大学基础医学院张晓梅课题组所提供, 菌株 S598( 曾用编号 :YIM MI13598 分离自烟台海阳马河巷的海泥 [7] 样品 1.3 培养基 (1 燕麦培养基 (ISP3 培养基 : 燕麦片 ( 磨成粉状 0.0g, 加水煮沸约 0min 后过滤得滤出液, 加微量无机盐溶液 1mL, 加纯水定容至 1000mL, 调节 ph 图 1 化合物 1~5 的结构式 Fig. 1 Chemical structures of compounds 1~5
. 56. 值至 7.~7.4; 固体培养基则加入 % 的琼脂,11 高压灭菌 30min ( 液体 LB 培养基 : 胰化蛋白胨 10g; 酵母提取物 5g;NaCl 10g; 琼脂 15g; 蒸馏水 1000mL; PH7.~7.6 (3SAB: 液体沙氏培养基 50g, 蒸馏水 1000mL; 琼脂 15g;pH5.6 1.4 测试菌株 13 株普通病原菌 : 金黄色葡萄球菌 (S. aureus ATCC593 白色葡萄球菌(S. albus 109 肺炎链球菌 (Streptococcus pneumonia BNCC33845 粪肠球菌 (E. faecalis ATCC91 大肠埃希菌(E. coli ATCC59 枯草芽孢杆菌(B. subtilis ATCC6633 鼠伤寒沙门菌 (S. typhimurium χ8956 铜绿假单胞菌 (P. aeruginosa PA01 耻垢分支杆菌(Mycobacterium smegmatis 1037 肺炎克雷伯菌(K. pneumonia ATCC13883 鲍曼不动杆菌(A. baumanii ATCC 19606 流感嗜血菌(Haemophilus influenza ATCC 1011 白念珠菌(Candida albicans ATCC1031; 8 株 MRSA 临床分离株 :1505 1450 1591 1957 04 I-0 I-67 和 8300;5 株耐氟康唑白念珠菌临床分离株 :3# 63# 175# 1730# 和 173# 方法.1 菌株发酵及提取粗提物采用燕麦琼脂培养基平板发酵菌株 S598 10L, 8 倒置培养 11d 切块后室温浸泡提取其发酵产物 3 次 ( 提取液为乙酸乙酯 : 甲醇 : 乙酸 =80:15:5,V/V/V, 合并浸提液 45 减压浓缩至干, 得发酵粗提物 发酵粗提物经乙酸乙酯 : 水 (1:1, V/V 萃取 5 次分相, 分别合并乙酸乙酯层 ( 无水 Na SO 4 除水 和水层,40 减压浓缩至干得乙酸乙酯提取物和水提取物 乙酸乙酯提取物再经石油醚 : 甲醇 (1:1, V/V 萃取 4 次分相, 分别合并石油醚层和甲醇层,45 减压浓缩至干得石油醚提取物和甲醇提取物 (4.148g. 分离纯化甲醇提取物 (4.148g 经葡聚糖凝胶 Sephadex LH-0(160g, 二氯甲烷 : 甲醇 =1: 洗脱 柱层析分离,TLC 检测洗脱进程, 最终合并得到 6 个组分 Fr.1~6 Fr.3(779mg 经中压反相硅胶柱层析, 依次用纯水 30% 50% 70% 90% 和 100% 甲醇水梯度洗脱,TLC 跟踪检测, 分段收集洗脱液得到 4 个 中国抗生素杂志 00 年 6 月第 45 卷第 6 期组分 Fr.3A~D Fr.3D(6mg 经葡聚糖凝胶 Sephadex LH-0(65g, 甲醇洗脱 柱层析,TLC 跟踪检测, 分段收集洗脱液得到 Fr.3D(91mg 和 Fr.3D4(8mg Fr.3D 经正相硅胶柱层析, 采用环己烷 / 乙酸乙酯梯度洗脱 (0:1~:1, 分段收集洗脱液, 得到化合物 1(60mg Fr.3D4 经正相硅胶柱层析, 采用环己烷 / 乙酸乙酯梯度洗脱 (60:1~:1, 分段收集洗脱液, 得到 Fr.3D4D(4mg, 再经 HPLC(Inertsustain-C 18, 5μm, 10mm 50mm, UV 193nm,87% 甲醇水溶液洗脱得到化合物 (10mg Fr.5 经中压反相硅胶柱层析, 依次用纯水 30% 50% 70% 90% 和 100% 乙腈水梯度洗脱,TLC 跟踪检测, 分段收集洗脱液得到 Fr.5D(314mg 和 Fr.5E(654mg Fr.5D 经正相硅胶柱层析, 采用环己烷 / 乙酸乙酯洗脱 (10:1, 得到 Fr.5D(130mg,Fr.5D 经正相硅胶柱层析, 采用环己烷 / 乙酸乙酯梯度洗脱 (150:1 和 5:1, 得到化合物 3(110mg Fr.5E 正相硅胶柱层析, 采用环己烷 / 丙酮梯度洗脱 (30:1~:1, 得到化合物 4(175mg 和 Fr.5E3(300mg,Fr.5E3 经正相硅胶柱层析, 采用环己烷 / 乙酸乙酯洗脱 (60:1, 得到化合物 5(80mg.3 生物活性测定 (1 菌液的制备 : 将纯化后的指示菌分别接种于相应的液体培养基中 : 细菌接种于 LB 培养基中, 37 下恒温培养 ; 白念珠菌耐药菌接种于 SAB 培养基中,8 恒温培养 1~4h 后用相应的液体培养基稀释成 : 细菌 0.5 10 6 CFU/ml, 真菌 1.0 10 4 CFU/mL ( 供试品的制备 : 取化合物, 加入 180μL 的 DMSO 溶解, 制成 5.6mg/mL 的供试品 阳性对照药物分别为氨苄青霉素 万古霉素和两性霉素 B (3 最小抑菌浓度 (MIC 实验 : 运用 倍稀释法测量 MIC, 进行 3 次平行实验 第 1 孔加入培养液 196μL 和供试品 μl,~11 孔加入 99μL 培养液 取第一孔混合液 99μL 放入第 孔, 混匀后从第二孔取 99μL 加入第三孔, 以此类推, 直到第 11 孔取 99μL 丢弃 ; 第 1~11 孔加入 99μL 培养液, 并加入 μl 菌液 进行 3 组对照实验, 第 1 孔分别是 :00μL 空白液体培养基, 菌液 μl+ 液体培养基 198μL, 供试品 μl+198μl 液体培养基 因此, 实验浓度 (μg/ml 依次为 :18 64 3 16 8 4 1 0.5 0.5 和 0.15 置于恒温培养箱中培养 1~4h, 每 1h 观察记录 1 次 结果判定以肉眼观察, 以药物最低浓度管中无细菌生长为
海洋链霉菌 Streptomyces sp.s598 中抗菌活性产物的研究李慧玲等. 563. 该试验菌 MIC.4 结构鉴定 将分离所得的纯品化合物 1~ 和 3~5 分别溶解于 0.5mL 氘代丙酮和氘代氯仿中, 装于核磁管中, 分别 进行核磁共振扫描 ( 1 H NMR 和 13 C NMR 分别为 600 和 150MHz 记录 1 H NMR 13 C NMR 1 H 1 H COSY NOESY HMQC 和 HMBC 等谱图信息 3 结果 3.1 化合物的结构鉴定 化合物 1: 白色结晶, 易溶于甲醇 乙腈 丙酮 等有机溶剂,[α] 5 D =+30.6(c 0.085,CHCl 3,ESI- MS: m/z 1133.617[M+Na] +, m/z 1149.5914[M+K] +, 化合物的分子式为 C 54 H 90 N 6 O 18 ; 通过 1 H NMR 13 C NMR 和 HMQC 谱数据对其进行归 属可知 : 化合物 1 含有 7 个甲基,7 个次甲基 ( 包括 个 连氧碳 和 4 个羰基 ; 进一步通过 1 H 1 H COSY 和 HMBC 谱图解析表明化合物 1 含有 Hiv-Val-Lac-Val 的 结构片段 ;NOESY 图谱中 Hiv 片段中连氧氢与 Val a 片 段中 -NH 质子 Lac 片段中连氧氢与 Val b 片段中 -NH 质 子有交叉信号, 表明其质子在同侧 综合分析该化 合物的质谱和核磁等数据 ( 表 1, 与文献 [8-9] 报道的 valinomycin( 缬氨霉素 的核磁数据基本一致, 因此鉴 定化合物 1 为 valinomycin 化合物 : 淡黄色油状物, 易溶于甲醇 乙腈 丙酮等有机溶剂,[α] 1 7 D =0.0(c 0.01, CHCl 3, ESI-MS: m/z 787.4573 [M+Na] +, m/z 803.433 [M+K] +, 化合物 的分子式为 C 4 H 68 O 1 ; 1 H NMR(600MHz, CD 3 COCD 3 δ:4.93(4h, m,h-8/8'/8''/8''', 3.99(4H, m, H-3/3'/3''/3''', 3.86(4H, m, H-6/6'/6''/6''',.50(4H, m, H-/'/''/''',.04-1.99(4H, m, H-5/5'/5''/5''', 1.98-1.91(4H, m, H-4/4'/4''/4''', 1.73(8H, t, J=6.4Hz, H-7/7'/7''/7''', 1.70~1.60(8H, m, H-4/4'/4''/4''', 8'/8'''-CH, 1.58~1.45(4H, m, H-5/5'/5''/5''', 1.1(6H, d, J=6.Hz, 8'/8'''-CH 3, 1.06(1H, d, J=7.0Hz, /'/''/'''-CH 3, 0.87(6H, t, J=7.4 Hz, 8/8''-CH 3 13 C NMR(150MHz, CD 3 COCD 3 δ:173.75(c-1/1'', 173.53(C-1'/1''', 80.17(C-3/3'', 80.11(C-3'/3''', 75.99(C-6/6'', 75.91(C- 6'/6''', 7.77(C-8/8'', 68.59(C-8'/8''', 45.11(C-/'', 45.0(C-'/''', 4.40(C-7'/7''', 40.05(C-7/7'', 31.38(C- 5'/5''', 31.9(C-5/5'', 7.87(C-4/4'', 7.8(C-4'/4''', 表 1 化合物 1 在氘代丙酮中的核磁谱数据 Tab. 1 The NMR data of compound 1 in CD 3 COCD 3 位置 编号 1 H(mult.,J in Hz 13 C(mult. COSY(H H HMBC(H C Hiv 1 171.5s 5.01(d, J=3.4 78.3d.38 16., 18.6, 30.3, 171.5 3.38(m 30.3d 0.98, 1.00, 5.01 16., 18.6, 171.5 4 1.00(d, J=6.8 18.6q.38 16., 30.3, 171.5 5 0.98(d, J=6.8 16.q.38 18.6, 30.3, 171.5 Val a 6 169.5s 7 4.38(dd, J=8.5, 7.3 57.9d.38 18.1, 18.9, 30.3, 171.5 8.38(m 30.3d 0.97, 1.03 18.1, 18.9, 57.9, 171.7 9 0.97(d, J=6.6 18.9q.38 18.1, 30.3, 57.9 10 1.03(d, J=6.6 18.1q.38 18.9, 30.3, 57.9 NH 7.64(d, J=8.5 4.38 Lac 11 171.7s 1 5.40(q, J=6.8 70.1d 1.41 16.5, 170.3, 171.7 13 1.41(q, J=6.8 16.5q 5.40 70.1, 170.3 Val b 14 170.3s 15 4.17(dd, J=9.5, 7.1 59.6d.0 18.5, 18.8, 9.8, 170.3 16.0(m 9.8d 0.99, 1.08, 4.17 18.5, 18.8, 59.6, 170.3 17 1.08(d, J=6.6 18.8q.0 18.5, 9.8, 59.6 18 0.99(d, J=6.6 18.5q.0 18.9, 9.8, 57.9 NH 7.96(d, J=7.1 4.17 9.8, 59.6, 170.3, 171.7 注 : Val a 表示图 1 中的 D-Val, Val b 表示图 1 中的 L-Val
. 564. 7.30(8'/8'''-CH, 0.03(8'/8'''-CH 3, 1.54(C-'/'''- CH 3, 1.4(C-/''-CH 3, 8.86(C-8/8''-CH 3 以上数据与文献 [10] 报道的 dinactin( 二活菌素 的氢碳谱数据基本一致,NOESY 图谱中端基 /'/''/'''-CH 3 中质子与 H-3/3'/3''/3''' H-6/6'/6''/6''' 与 H-8/8'/8''/8''' 有交叉信号, [11] 表明其质子在同侧 结合其它谱图和理化性质, 鉴定化合物 为 dinactin 化合物 3: 黄色油状物, 易溶于石油醚 氯仿等亲脂性有机溶剂,ESI-MS:m/z 79.349 [M-H] -, 化合物的分子式为 C 18 H 3 O ; 1 H NMR(600MHz, CDCl 3 δ:5.36(4h, m, H-9, H-10, H-1, H-13,.77(H, t, J=6.9Hz, H-11,.34(H, t, J=7.5Hz, H-,.04(4H, q, J=7.1Hz, H-8, H-14, 1.63(H, m, H-3, 1.37~1.3(14H, m, H-4-7, H-15-17, 0.88(3H, t, J=6.8Hz, H-18 13 C NMR(150MHz, CDCl 3 δ:179.9(c-1, 130.3(C- 9, 130.1(C-13, 18.(C-1, 18.0(C-10, 34.1(C-, 31.6(C-16, 9.7-9.1(C-4-7, C-15, 7.3(C-8, C-14, 5.7(C-11, 4.7(C-3,.7(C-17, 14.(C-18 以上数据与文献 [1] 报道的亚油酸基本一致, 因此鉴定化合物 3 为亚油酸 化合物 4: 白色固体, 易溶于石油醚 氯仿等亲脂性有机溶剂,ESI-MS:m/z 93.1856 [M-H] -, 化合物的分子式为 C 19 H 36 O ; 1 H NMR(600MHz, CDCl 3 δ:5.39(4h, m, H-9, H-10, H-1, H-13, 3.65(3H, s, -OCH 3,.77(H, t, J=7.7Hz, H-11,.30(H, t, J=7.5Hz, H-,.04(4H, q, J=7.1Hz, H-8, H-14, 1.6(H, m, H-3, 1.35-1.4(14H, m, H-4-7, H-15-17, 0.88(3H, t, J=6.9Hz, H-18 13 C NMR(150MHz, CDCl 3 δ:174.4(c-1, 130.3(C-9, 130.1(C-13, 18.1(C-1, 18.0(C-10, 51.6(-OCH 3, 34.(C-, 3.0(C-16, 9.9-9.(C-4-7, C-15, 7.3(C-8, C-14, 5.7(C-11, 5.0(C-3,.8(C-17, 14.(C-18 以上数据与文献[13] 报道的亚油酸甲酯基本一致, 因此鉴定化合物 4 为亚油酸甲酯 化合物 5: 白色固体, 易溶于石油醚 氯仿等亲脂性有机溶剂,ESI-MS:m/z 81.501 [M-H] -, 化合物的分子式为 C 18 H 34 O ; 1 H NMR(600MHz, CDCl 3 δ:5.37(h, m, H-9, H-10,.35(H, t, J=7.5Hz, H-,.01(4H, m, H-8, H-11, 1.63(H, m, H-3, 1.34~1.5(0H, m, H-4-7, H-1-17, 0.88(3H, t, J=7.0Hz, H-18 13 C NMR(150MHz, CDCl 3 δ: 180.(C-1, 130.1(C-10, 19.8(C-9, 34.1(C-, 3.0(C- 中国抗生素杂志 00 年 6 月第 45 卷第 6 期 16, 9.8-9.1(C-4-7, 1-15, 7.3(C-8, 7.(C-11, 4.7(C-3,.7(C-17, 14.(C-18 以上数据与文献 [1] 报道的油酸基本一致, 因此鉴定化合物 5 为油酸 3. 生物活性分析从海洋链霉菌 Streptomyces sp. S598 发酵液中分离纯化得到 5 个化合物, 生物活性结果见表 化合物 1 对白色葡萄球菌的 MIC 为 8μg/mL, 对耻垢分枝杆菌的 MIC 为 4μg/mL, 对 MRSA 8300 和白念珠菌 (ATCC1031 的 MIC 为 1μg/mL; 化合物 有强烈的广谱抗细菌活性, 对金黄色葡萄球菌 粪肠球菌 肺炎克雷伯菌的 MIC 为 5μg/mL, 对大肠埃希菌 鲍曼不动杆菌的 MIC 为.5μg/mL, 对肺炎链球菌 流感嗜血菌的 MIC 为 0.15μg/mL, 尤其具有显著的抗 MRSA 活性, 其中对 MRSA 8300 的 MIC<0.15μg/mL; 注 : - 表示未检测化合物 3 对 MRSA 8300 的 MIC 为 16μg/mL, 化合物 5 对 MRSA 8300 的 MIC 为 64μg/mL, 化合物 4 对所有测试菌株均没有显著的生物活性 4 讨论本研究从海洋链霉菌 Streptomyces sp. S598 发酵液中分离鉴定得到 5 个具有抗菌活性的化合物 化合物 1 为缬氨霉素, 是一种由 1 个氨基酸组成的环状 [14] 肽, 为脂溶性抗生素 文献报道其对革兰阳性菌 [15] [16] [17] 真菌 病毒和肿瘤细胞均有抑制活性, 但本文首次报道其还具有抗 MRSA 8300 菌株的活性 同时, 缬氨霉素还是一种离子载体, 与钾具有特异的亲和力, 主要作为脂质体离子载体, 用于评估脂 [18] 质体的膜流动活性 化合物 为二活菌素, 是一种大环内酯类抗生素 文献报道其对多种革兰阳性 [10] 菌和革兰阴性菌均具有较强的抑制活性, 与本文的研究结果相符, 但本文首次报道其对多种临床耐药株 MRSA 具有强烈的抗菌活性, 具有重要的临床意义, 有望成为治疗临床 MRSA 感染的新型候选物质 化合物 3 为亚油酸, 是一种公认的必需脂肪酸, 在医药上可用于治疗血脂过高和动脉硬化等症 有文献报道其对肺炎克雷伯菌 表皮葡萄球菌 大肠埃希菌 金黄色葡萄球菌 屎肠球菌 5 种耐药菌具有 [19] 抑菌活性 ; 化合物 4 为亚油酸甲酯, 是化合物 3 的甲酯化产物 化合物 5 为油酸, 是一种单不饱和脂肪酸, 可激活蛋白激酶 C, 诱导细胞脂肪变性和细胞损 [0-1] 伤 ; 本文首次报道亚油酸和油酸对 MRSA 8300 具有中等的抑制活性 以上结果表明该海洋链霉菌
海洋链霉菌 Streptomyces sp.s598 中抗菌活性产物的研究李慧玲等. 565. 表 化合物 1~5 的抗菌活性 Tab. The antibacterial activity of compounds 1~5 类别菌株 / 样品化合物 1 化合物 化合物 3 化合物 4 化合物 5 氨苄青霉素万古霉素两性霉素 B 革兰阳性菌金黄色葡菌球菌 >18 0.5 64 >18 >18 3 - - 白色葡萄球菌 8 >18 64 >18 18 16 - - 肺炎链球菌 >18 0.15 64 >18 >18 3 - - 粪肠球菌 >18 0.5 64 >18 >18 18 - - 枯草芽孢杆菌 >18 >18 >18 >18 >18 3 - - 耻垢分支杆菌 4 18 >18 >18 >18 18 - - 革兰阴性菌鼠伤寒沙门菌 18 >18 3 >18 >18 <0.15 - - 大肠埃希菌 >18 0.5 64 >18 >18 3 - - 铜绿假单胞菌 >18 >18 >18 >18 >18 >18 - - 肺炎克雷伯菌 >18 0.5 >18 >18 >18 18 - - 鲍曼不动杆菌 >18 0.5 3 >18 >18 >18 - - 流感嗜血菌 >18 0.15 3 >18 >18 64 - - MRSA I-0 >18 1 >18 >18 >18-4 I-67 >18 0.5 >18 >18 >18-1 8300 1 <0.15 16 >18 64-4 1450 >18 1 >18 >18 >18-4 1505 >18 1 >18 >18 >18-1591 >18 4 >18 >18 >18-4 1957 >18 >18 >18 >18 >18-4 04 >18 1 >18 >18 >18-4 白念珠菌 ATCC1031 1 1 >18 >18 >18-1 - 耐氟康唑白念珠菌 3# >18 >18 >18 >18 >18 - >18 8 63# >18 >18 >18 >18 >18 - >18 4 175# 64 >18 >18 >18 >18 - >18 8 1730# 18 >18 >18 >18 >18 - >18 4 173# >18 64 >18 >18 >18 - >18 次生代谢产物丰富且生物活性多样, 首次发现化合 物 1~3 和 5 均具有一定的抗 MRSA 活性, 可在此基础 上对该菌株进一步研究, 通过对其发酵条件的优 化, 深入开展其余抗 MRSA 活性成分的研究, 为寻 找天然抗 MRSA 活性化合物提供更多的物质基础 致谢 : 诚挚感谢云南中医药大学基础医学院张晓梅老师 为本研究提供的 S598 菌株以及所做的培养发酵 产物提取和 生物活性测定等工作! 参考文献 [1] Matouskova I, Janout V. Current knowledge of methicillinresistant Staphylococcus aureus and community-associated methicillin-resistant Staphylococcus aureus[j]. Biomed Pap Med Fac Univ Palacky Olomouc Czech Repub, 008, 15(: 191-0. [] 胡付品, 郭燕, 朱德妹, 等. 017 年 CHINET 中国细菌耐药性监测 [J]. 中国感染与化疗杂志, 018, 18(3: 41-51. [3] Rubin R J, Harrington C A, Poon A, et al. The economic impact of Staphylococcus aureus infection in New York City hospitals[j]. Emerg Infect Dis, 1999, 5(1: 9-17. [4] 吕媛, 李耘, 郑波. 国内外细菌耐药监测研究介绍 [J]. 中国临床药理学杂志, 011, 7(4: 311-317. [5] Stanton T B. A call for antibiotic alternatives research[j]. Trends Microbiol, 013, 1(3: 111-113. [6] 田新朋, 张偲, 李文均. 海洋放线菌研究进展 [J]. 微生物学报, 011, 51(: 161-169. [7] 张晓梅. 五株海洋稀有放线菌次级代谢产物研究 [D]. 昆明 : 云南大学, 014. [8] Singh V P, Sharma R, Sharma V, et al. Isolation of depsipeptides and optimization for enhanced production of valinomycin from the North-Western Himalayan cold desert strain Streptomyces lavendulae[j]. J Antibiot (Tokyo, 019, 7(8: 617-64. [9] Pettit G R, Tan R, Melody N, et al. Antineoplastic agents. Part 409: Isolation and structure of montanastatin from a terrestrial actinomycete[j]. Bioorg Med Chem, 1999, 7(5: 895-899. [10] Hussain A, Rather M A, Dar M S, et al. Streptomyces puniceus
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