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1 有 机 化 学 DI: /cjoc Chinese Journal of rganic Chemistry 新 型 一 枝 蒿 酮 酸 异 噁 唑 衍 生 物 的 合 成 及 其 抗 A, B 型 流 感 病 毒 活 性 研 究 赵 江 瑜 a,b 阿 吉 艾 克 拜 尔 艾 萨 *,a ( a 中 国 科 学 院 新 疆 理 化 技 术 研 究 所 干 旱 区 植 物 资 源 化 学 重 点 实 验 室 乌 鲁 木 齐 ) ( b 中 国 科 学 院 研 究 生 院 北 京 ) 摘 要 为 了 提 高 一 枝 蒿 酮 酸 的 生 物 活 性, 以 一 枝 蒿 酮 酸 和 3- 取 代 苯 基 -5- 氨 甲 基 - 异 噁 唑 为 原 料, 在 偶 合 试 剂 DCC, HBt/ DMAP 的 作 用 下, 合 成 了 6 个 未 见 文 献 报 道 的 含 异 噁 唑 的 一 枝 蒿 酮 酸 酰 胺 衍 生 物 3a~3f. 所 合 成 的 化 合 物 均 经 过 IR, MR, 13 C MR, ESI-MS 等 分 析 方 法 表 征 及 初 步 体 外 抗 A (H32, H11) 型 和 B 型 流 感 病 毒 活 性 研 究. 初 步 实 验 结 果 表 明 : 化 合 物 3c 同 时 具 有 抗 A (H32) 型 和 B 型 流 感 病 毒 活 性, 化 合 物 3c 和 3e 表 现 出 比 母 体 化 合 物 强 的 抗 B 型 流 感 病 毒 活 性. 关 键 词 一 枝 蒿 酮 酸 ; 异 噁 唑 衍 生 物 ; 流 感 病 毒 ; 活 性 研 究 Synthesis of ovel Isoxazole Contained Rupestonic Acid Derivatives and in vitro Inhibitory Activity against Influenza Viruses A and B Zhao, Jiangyu a,b Aisa, Haji Akber*,a ( a Key Laboratory of Chemistry of Plant Resources in Arid Region, Xinjiang Technical Institute of Physics and Chemistry, Chinese Academy of Sciences, Urumqi ) ( b Graduate School of Chinese Academy of Sciences, Beijing ) Abstract To improve biological activity of rupestonic acid, six rupestonic acid amide derivatives containing isoxazole were synthesized in the presence of DCC, HBt/DMAP using the rupestonic acid and 3-aryl-5-isoxazole-methylamine as the starting materials. The synthesized compounds 3a~3f were confirmed by the methods of MR, 13 C MR, IR, ESI-MS techniques and preliminarily assayed in vitro against influenza viruses A and B. The results showed that compound 3c showed better activity against both influenza viruses A (H32) and B, and compounds 3c and 3e had the higher inhibition against influenza B virus than the parent compound 1. Keywords rupestonic acid; isoxazole derivative; influenza virus; inhibitory activity 流 感 是 流 行 性 感 冒 的 简 称, 是 由 流 感 病 毒 引 起 的 急 性 呼 吸 道 疾 病, 是 一 种 造 成 人 类 及 动 物 患 流 行 性 感 冒 的 单 链 RA 病 毒, 具 有 流 行 面 广 传 染 性 强 发 病 率 高 等 特 点, 在 儿 童 老 人 和 高 危 人 群 中 的 死 亡 率 较 高. 仅 20 世 纪 就 有 5 次 大 规 模 的 流 感 疫 情 爆 发, 最 大 规 模 的 一 次 流 感 大 流 行 发 生 在 1918~1919 年, 共 造 成 2100~ 4000 万 人 死 亡, 超 过 第 一 次 世 界 大 战 的 死 亡 人 数. 据 不 完 全 统 计, 北 半 球 每 年 约 有 1 亿 人 感 染 流 感, 500 万 次 就 诊, 30 万 次 住 院, 1 万 人 死 于 流 感, 每 年 经 济 损 失 超 过 100 亿 美 元. 目 前 应 对 流 感 病 毒 的 主 要 方 式 是 疫 苗 和 药 物 治 疗. 过 去 几 十 年 的 应 用 充 分 证 明 了 接 种 流 感 疫 苗 对 保 护 健 康 起 到 很 大 作 用, 疫 苗 对 健 康 成 年 人 的 保 护 率 高 达 80%~90%, 但 是 对 老 年 人 和 婴 儿 的 保 护 作 用 很 小, 而 且 疫 苗 预 防 的 有 效 性 是 建 立 在 疫 苗 的 病 毒 株 与 正 在 流 行 的 流 感 病 毒 株 相 似 的 基 础 上 的 [1], 因 而 疫 苗 的 作 用 就 非 常 有 限 ; 而 seltamivir( 中 文 名 : 达 菲 ) 作 为 第 一 个 口 服 有 效 的 流 感 病 毒 神 经 氨 酸 酶 (A) 抑 制 剂, 在 治 疗 H51 禽 流 感 和 H11 甲 型 流 感 病 毒 过 程 中 发 挥 着 非 常 重 要 的 作 用 [2,3] [4], 但 是 最 近 Mai 等 研 究 发 现 禽 流 感 病 毒 H51 对 达 菲 产 生 了 一 定 的 耐 药 性. 因 此 研 究 新 的 预 防 和 治 疗 流 感 病 毒 的 有 效 药 物, 尤 其 是 从 天 然 产 物 中 发 现 * [email protected] Received August 8, 2011; revised September 14, 2011; accepted ovember 1, Project supported by the High-tech Research and Development Program of Xinjiang (o ), the ational atural Science Foundation of China (o ) and the China ational Science Fund for Distinguished Young Scholars (o ). 新 疆 自 治 区 高 技 术 研 究 发 展 计 划 (o ) 国 家 自 然 科 学 基 金 (o ) 和 国 家 杰 出 青 年 基 金 科 学 (o ) 资 助 项 目. Chin. J. rg. Chem. 2012, 32, 333~ Chinese Chemical Society & SIC, CAS 333

2 有 机 化 学 新 的 抗 病 毒 先 导 化 合 物 显 得 尤 为 重 要. 新 疆 一 枝 蒿 (Artemisia rupestris L.) 在 民 间 用 药 历 史 悠 久, 具 有 抗 炎 抗 过 敏 [5~7] 增 强 免 疫 力 解 蛇 毒 [8] 保 肝 等 活 性. 目 前 已 有 以 新 疆 一 枝 蒿 为 主 要 成 分 的 复 方 制 剂 复 方 一 枝 蒿 颗 粒 用 于 临 床. 一 枝 蒿 酮 酸 (Rupestonic acid, 1) [9] 是 从 新 疆 一 枝 蒿 中 分 离 出 的 一 种 多 官 能 团 的 单 体 倍 半 萜 类 化 合 物 [10], 在 新 疆 一 枝 蒿 中 [11~13] 的 含 量 高 达 1% 左 右. 雍 建 平 等 率 先 对 其 进 行 结 构 改 造, 合 成 了 70 多 个 一 枝 蒿 酮 酸 酰 胺 和 酯 类 衍 生 物, 并 对 它 们 进 行 了 初 步 的 体 外 抗 流 感 病 毒 和 单 纯 的 I, II 型 疱 疹 病 毒 活 性 测 试. 结 果 发 现 4- 叔 丁 基 苯 基 一 枝 蒿 酮 酸 对 叔 丁 基 苯 酯 对 甲 型 流 感 病 毒 具 有 明 显 的 抑 制 活 性 (IC 50 =0.5 μmol L -1 ). 在 以 上 工 作 的 基 础 上, 为 了 提 高 一 枝 蒿 酮 酸 的 生 物 活 性, 我 们 继 续 对 一 枝 蒿 酮 酸 进 行 修 饰, 以 期 发 现 活 性 高 副 作 用 低 的 新 型 抗 流 感 病 毒 先 导 化 合 物. 本 研 究 中, 我 们 首 次 以 一 枝 蒿 酮 酸 和 3- 取 代 苯 基 -5- 氨 甲 基 - 异 噁 唑 为 原 料, 在 偶 合 试 剂 DCC, HBt/DMAP 的 作 用 下, 合 成 了 6 个 未 见 文 献 报 道 的 一 枝 蒿 酮 酸 异 噁 唑 酰 胺 类 衍 生 物 3a~3f. 通 过 IR, MR, 13 C MR, ESI-MS 对 所 合 成 的 目 标 化 合 物 进 行 了 结 构 表 征, 并 初 步 测 定 了 它 们 的 体 外 抗 A 型 (H32, H11) 和 B 型 流 感 病 毒 活 性. 合 成 路 线 见 Scheme 1. 1 结 果 与 讨 论 1.1 目 标 化 合 物 的 合 成 与 表 征 本 研 究 以 取 代 苯 甲 醛 为 起 始 原 料 经 过 一 系 列 反 应, 合 成 了 3- 取 代 苯 基 -5- 氨 甲 基 - 异 噁 唑 衍 生 物 2a~2f, 再 在 偶 合 试 剂 DCC, HBt/DMAP 的 作 用 下, 与 一 枝 蒿 酮 酸 (1) 反 应 得 到 了 6 个 新 型 的 含 异 噁 唑 的 一 枝 蒿 酮 酸 酰 胺 类 衍 生 物 3a~3f. 并 通 过 IR, MR, 13 C MR, ESI-MS 等 分 析 方 法 对 所 合 成 的 化 合 物 进 行 了 表 征. 在 IR 谱 图 中, 所 有 的 化 合 物 在 3300 cm -1 出 现 了 酰 胺 H 键 的 吸 收 峰, 在 1690 cm -1 左 右 出 现 了 共 轭 双 键 的 羰 基 峰, 在 1650 cm -1 左 右 出 现 了 酰 胺 键 中 羰 基 的 吸 收 峰 ; 在 MR 谱 图 中, 在 δ 5.6 和 6.2 左 右 出 现 了 倍 半 萜 骨 架 中 端 烯 中 的 两 个 质 子 信 号 ; 在 ESI-MS 谱 图 中, 所 有 的 化 合 物 均 出 现 了 [M+1] + 峰 和 [M+a] + 峰. 1.2 体 外 抗 病 毒 活 性 研 究 对 所 合 成 的 含 异 噁 唑 的 一 枝 蒿 酮 酸 酰 胺 类 衍 生 物 3a~3f 进 行 了 初 步 的 体 外 抗 流 感 病 毒 活 性 测 试. 活 性 数 据 见 表 1 和 表 2. 从 表 1 可 以 看 出, 化 合 物 3c 显 示 出 较 强 的 抗 A (H32) 型 流 感 病 毒 活 性, 其 IC 50 值 达 到 了 1.09 μmol L -1, 具 有 和 阳 性 对 照 药 seltamivir 相 当 的 IC 50 值 (1.1 μmol L -1 ). 化 合 物 3c 和 3e 对 B 型 流 感 病 毒 均 显 示 出 比 母 体 化 合 物 强 的 生 物 活 性, IC 50 值 分 别 为 3.25 和 9.5 μmol L -1. 活 性 测 试 结 果 表 明 : 在 一 枝 蒿 酮 酸 分 子 中 引 入 异 噁 唑 环 后, 和 母 体 化 合 物 相 比, 在 一 定 程 度 上 提 高 了 抗 流 感 病 毒 的 活 性, 但 同 时 化 合 物 本 身 的 毒 性 也 相 对 较 高 ; 当 苯 环 上 的 氢 原 子 被 电 负 性 大 的 氟 原 子 取 代 时, 其 抗 流 感 病 毒 活 性 和 母 体 化 合 物 一 枝 蒿 酮 酸 相 比, 活 性 增 强 而 且 毒 性 增 大 ; 但 对 于 电 负 性 和 体 积 适 中 的 氯 原 子 而 言, 其 抗 流 感 病 毒 活 性 与 含 氟 原 子 的 一 枝 蒿 酮 酸 衍 生 物 相 比, 活 性 减 弱 而 且 毒 性 减 小 ; 对 于 苯 环 上 不 同 位 置 被 供 电 子 基 团 甲 基 取 代 的 化 合 物 3d 和 3e, 活 性 与 甲 基 在 苯 环 上 的 位 置 有 着 紧 密 的 联 系, 当 甲 基 位 于 苯 环 的 邻 位 时, 其 活 性 相 比 于 甲 基 位 于 对 位 的 化 合 物 毒 性 减 弱 而 且 活 性 也 减 弱. 化 合 物 3c 可 作 为 抗 流 感 病 毒 的 先 导 化 合 物. 此 化 合 物 正 进 行 动 物 试 验. (1) CS R H 2 H, a 2 C 3 R (2) H (3) (CH 3 CH 2 ) 3 R CH CH 3 H/H 2 CH= H DCM, r.t. to reflux H CH 3 S 2 Cl (CH 3 CH 2 ) 3 R a 3 R Zn/H 4 Cl R Ms 3 CH 3 CH 2 H/H 2 H 2 2a~2f H CH 3 + 2a~2f CH DCC/DMAP HBt H CH 3 CH R 1 3a~3f 3a: R = H 3b: R = p-cl 3c: R = p-f 3d: R = o-ch 3 3e: R = p-ch 3 3f: R = p-ch 3 Scheme Chinese Chemical Society & SIC, CAS Chin. J. rg. Chem. 2012, 32, 333~337

3 Chinese Journal of rganic Chemistry Table 1 表 1 化 合 物 3a~3f 抑 制 A (H32 和 H11) 型 流 感 病 毒 活 性 测 试 结 果 The results of the rupestonic acid derivatives 3a~3f against influenza A (H32 and H11) viruses Against influenza H32 virus Against influenza H11 virus Compd. TC 50 /(μmol L -1 ) a IC 50 /(μmol L -1 ) b SI c IC 50 /(μmol L -1 ) b SI c 1 d >1344 e 3a b >9.4 e >0.94 e 3c >0.97 e 3d >85.3 e e >9.5 e >0.94 e 3f 6.8 >3.3 e >3.3 e Ribavirin seltamivir f a 50% cytotoxic concentration; b 50% virus-inhibitory concentration, determined by CPE inhibition assay; c selectivity index (TC 50 /IC 50 ); d parent compound; e the SI can not be calculated, since the highest concentration tested was less than IC 50 ; f the positive drug, orally more active for anti-influenza virus in clinical to today. 表 2 化 合 物 3a~3f 抑 制 B 型 流 感 病 毒 活 性 测 试 结 果 Table 2 The results of the rupestonic acid derivatives 3a~3f against influenza B virus Against influenza B virus Compd. TC 50 /(μmol L -1 ) a IC 50 /(μmol L -1 ) b SI c 1 d >4032 >4032 e 3a 30.6 >10.2 e 3b >9.4 e 3c d >85.3 e 3e f 6.8 >3.3 e Ribavirin seltamivir f 1260 >500 e a 50% cytotoxic concentration; b 50% virus-inhibitory concentration, determined by CPE inhibition assay c ; selectivity index (TC 50 /IC 50 ); d parent compound; e the SI can not be calculated, since the highest concentration tested was less than the IC 50 ; f the positive drug, orally more active for anti-influenza virus in clinical to today. 2 实 验 部 分 2.1 仪 器 与 试 剂 X-4 数 字 显 示 显 微 熔 点 测 定 仪 ( 北 京 泰 克 仪 器 有 限 公 司 生 产 ); Varian Inova-400 核 磁 共 振 仪 ; Shimadzu FTIR-8400S 红 外 光 谱 仪 ( 日 本 岛 津 制 作 所 生 产 ); 质 谱 在 HP1100LC/MS(ESI 源 ) 上 测 定. 一 枝 蒿 酮 酸 [ 自 己 分 离 制 备, HPLC 纯 度 : 98%; 其 它 试 剂 均 为 市 售 的 分 析 纯, 在 使 用 前 未 进 一 步 纯 化, 四 氢 呋 喃 (THF) 使 用 前 进 行 严 格 的 无 水 处 理. 2.2 化 合 物 的 合 成 与 表 征 取 代 苯 基 -5- 氨 甲 基 - 异 噁 唑 2a~2f 的 合 成 合 成 方 法 参 考 文 献 [14, 15] [(3- 取 代 苯 基 - 异 噁 唑 -5- 基 )- 甲 基 ]- 一 枝 蒿 酮 酸 酰 胺 衍 生 物 3a~3f 合 成 的 一 般 过 程 将 g (0.50 mmol) 一 枝 蒿 酮 酸 和 0.11 g (0.55 mmo1),- 二 环 己 基 碳 二 酰 亚 胺 (DCC) 溶 解 于 8 ml 干 燥 的 四 氢 呋 喃 中, 室 温 搅 拌 10 min 后, 将 0.08 g (0.60 mmo1) 的 HBt 和 0.07 g (0.55 mmol) DMAP 溶 解 在 3 ml 干 燥 的 四 氢 呋 喃 中, 冰 浴 搅 拌 下 加 入 上 述 体 系 中, 搅 拌 30 min 后, 将 0.75 mmol 3- 取 代 苯 基 -5- 氨 甲 基 - 异 噁 唑 2a~2f 加 入 反 应 体 系 中, 冰 浴 搅 拌 30 min 后, 自 然 升 至 室 温 继 续 反 应, TLC 检 测 反 应 完 全 后, 滤 掉 沉 淀 DCU, 减 压 蒸 去 溶 剂, 残 渣 用 二 氯 甲 烷 溶 解, 依 次 用 5% 的 碳 酸 氢 钠 溶 液 5% 的 柠 檬 酸 溶 液 和 水 洗 涤, 无 水 硫 酸 钠 干 燥, 浓 缩 后 柱 色 谱 分 离, V( 石 油 醚 ) V( 乙 酸 乙 酯 )=5 1~2 1, 即 得 目 标 产 物 3a~3f [12,13]. -[(3- 苯 基 - 异 噁 唑 -5- 基 )- 甲 基 ]- 一 枝 蒿 酮 酸 酰 胺 (3a): 产 率 56%, 白 色 固 体. m.p. 150~152 ; MR (400 MHz, CDCl 3 ) δ: 0.65 (d, J=6.4 Hz, 3H, CH 3 ), 1.63~1.66 (m, 4H, 2CH 2 ), 1.82 (s, 3H, CH 3 ), 2.01~2.05 (m, 1H), 2.11~2.12 (m, 1H), 2.43~2.54 (m, 1H), 2.56~ 2.60 (m, 1H), 2.84~2.89 (m, 1H), 2.92~2.98 (m, 1H), 3.18 (s, 1H), 4.67~4.68 (m, 2H), 5.41 (s, 1H), 5.63 (s, 1H), 6.53 (s, 1H), 6.63 (s, 1H), 7.27~7.77 (m, 5H, PhH); 13 C MR (100 MHz, CDCl 3 ) δ: 208.4, 174.4, 169.2, 169.1, 162.9, 151.2, 151.0, 138.0, 130.4, 129.2, 128.9, 126.9, 116.2, 100.8, 46.0, 41.6, 38.8, 38.3, 36.7, 35.6, 35.5, 31.5, 12.3, 8.2; IR (KBr) ν: 3357 (H), 2930, 1674 (C=), 1619 (H C=), 1522, 1443, 1382, 1251, 1174, 944 cm -1 ; ESI-MS (70 ev) m/z (%): 405 ([M+1] +, 10), 427 ([M+a] +, 40). -[(3- 对 氯 苯 基 - 异 噁 唑 -5- 基 )- 甲 基 ]- 一 枝 蒿 酮 酸 酰 胺 (3b): 产 率 60%, 白 色 固 体. m.p. 168~170 ; MR (400 MHz, CDCl 3 ) δ: 0.65 (d, J=6.8 Hz, 3H, CH 3 ), 1.62~1.68 (m, 4H, 2CH 2 ), 1.83 (s, 3H, CH 3 ), 2.02~2.06 (m, 1H), 2.13~2.18 (m, 1H), 2.44~2.50 (m, 1H), 2.52~ 2.62 (m, 1H), 2.84~2.89 (m, 1H), 2.92~2.98 (m, 1H), 3.17 (s, 1H), 4.67~4.69 (m, 2H), 5.43 (s, 1H), 5.61 (s, 1H), 6.47 (s, 1H), 6.52 (s, 1H), 7.42~7.73 (m, 4H, PhH); Chin. J. rg. Chem. 2012, 32, 333~ Chinese Chemical Society & SIC, CAS 335

4 有 机 化 学 13 C MR (100 MHz, CDCl 3 ) δ: 208.4, 174.3, 169.5, 169.1, 162.0, 151.2, 138.1, 136.5, 129.5, 128.2, 127.4, 116.3, 100.7, 46.1, 41.6, 38.9, 38.3, 36.8, 35.6, 35.5, 34.1, 31.5, 25.8, 25.1, 12.3, 8.2; IR (KBr) ν: 3324 (H), 2927, 1688 (C=), 1623 (H C=), 1526, 1429, 1383, 1178, 1093, 921 cm -1 ; ESI-MS (70 ev) m/z (%): 439 ([M+1] +, 15), 461 ([M+a] +, 10). -[(3- 对 氟 苯 基 - 异 噁 唑 -5- 基 )- 甲 基 ]- 一 枝 蒿 酮 酸 酰 胺 (3c): 产 率 63%, 白 色 固 体. m.p. 174~176 ; MR (400 MHz, CDCl 3 ) δ: 0.65 (d, J=6.4 Hz, 3H, CH 3 ), 1.63~1.68 (m, 4H, 2CH 2 ), 1.82 (s, 3H, CH 3 ), 2.01~2.05 (m, 1H), 2.13~2.16 (m, 1H), 2.48~2.52 (m, 1H), 2.56~ 2.61 (m, 1H), 2.85~2.89 (m, 1H), 2.92~2.95 (m, 1H), 3.18 (s, 1H), 4.66~4.68 (m, 2H), 5.42 (s, 1H), 5.64 (s, 1H), 6.50 (s, 1H), 6.62 (s, 1H), 7.14~7.78 (m, 4H, PhH); 13 C MR (100 MHz, CDCl 3 ) δ: 208.4, 174.4, 169.2, 169.1, 165.3, 162.8, 151.2, 138.0, 128.9, 125.1, 116.4, 116.2, 100.6, 46.0, 41.6, 38.8, 38.3, 36.7, 35.6, 35.5, 31.5, 12.3, 8.2; IR (KBr) ν: 3349 (H), 2930, 1672 (C=), 1619 (H C=), 1525, 1434, 1384, 1231, 1153, 944 cm -1 ; ESI-MS (70 ev) m/z (%): 423 ([M+1] +, 15), 445 ([M+ a] +, 100). -[(3- 对 甲 氧 基 苯 基 - 异 噁 唑 -5- 基 )- 甲 基 ]- 一 枝 蒿 酮 酸 酰 胺 (3d): 产 率 68%, 白 色 固 体. m.p. 160~162 ; MR (400 MHz, CDCl 3 ) δ: 0.65 (d, J=6.8 Hz, 3H, CH 3 ), 1.61~1.68 (m, 4H, 2CH 2 ), 1.83 (s, 3H, CH 3 ), 2.01~2.06 (m, 1H), 2.12~2.18 (m, 1H), 2.47~2.55 (m, 1H), 2.57~2.63 (m, 1H), 2.84~2.89 (m, 1H), 2.92~2.97 (m, 1H), 3.18 (s, 1H), 3.86 (s, 3H, CH 3 ), 4.66~4.67 (m, 2H), 5.41 (s, 1H), 5.60 (s, 1H), 6.45 (s, 1H), 6.48 (s, 1H), 6.96~7.72 (m, 4H, PhH); 13 C MR (100 MHz, CDCl 3 ) δ: 208.4, 174.4, 174.3, 169.1, 168.9, 168.8, 162.5, 161.3, 151.3, 138.0, 128.4, 121.4, 116.2, 114.6, 100.5, 55.6, 46.1, 41.6, 38.9, 38.3, 36.8, 35.6, 35.5, 31.5, 29.9, 12.3, 8.2; IR (KBr) ν: 3340 (H), 2924, 2853, 1691 (C=), 1616 (H C=), 1529, 1433, 1385, 1253, 1179, 913 cm -1 ; ESI-MS (70 ev) m/z (%): 435 ([M+1] +, 70), 457 ([M+ a] +, 100). -[(3- 邻 甲 氧 基 苯 基 - 异 噁 唑 -5- 基 )- 甲 基 ]- 一 枝 蒿 酮 酸 酰 胺 (3e): 产 率 52%, 白 色 固 体. m.p. 167~169 ; MR (400 MHz, CDCl 3 ) δ: 0.65 (d, J=6.8 Hz, 3H, CH 3 ), 1.25 (s, 1H), 1.61~1.63 (m, 4H, 2CH 2 ), 1.83 (s, 3H, CH 3 ), 2.01~2.05 (m, 1H), 2.11~2.12 (m, 1H), 2.13~ 2.18 (m, 1H), 2.51~2.56 (m, 1H), 2.59~2.63 (m, 1H), 2.89~2.95 (m, 1H), 3.18 (s, 1H), 3.88 (s, 3H, CH 3 ), 4.68~4.69 (m, 2H), 5.40 (s, 1H), 5.61 (s, 1H), 6.55 (s, 1H), 6.72 (s, 1H), 7.01~7.85 (m, 4H, PhH); 13 C MR (100 MHz, CDCl 3 ) δ: 208.4, 174.4, 169.1, 167.7, 160.6, 157.4, 151.3, 138.0, 131.6, 129.6, 121.1, 117.8, 116.0, 111.6, 104.2, 55.7, 54.0, 46.0, 41.6, 38.9, 38.3, 36.8, 35.6, 35.5, 31.4, 29.5, 12.3, 8.2; IR (KBr) ν: 3329 (H), 2923, 1691 (C=), 1624 (H C=), 1527, 1470, 1359, 1250, 1181, 921 cm -1 ; ESI-MS (70 ev) m/z (%): 435 ([M+1] +, 30), 457 ([M+a] +, 100). -[(3- 对 甲 基 苯 基 - 异 噁 唑 -5- 基 )- 甲 基 ]- 一 枝 蒿 酮 酸 酰 胺 (3f): 产 率 70%, 白 色 固 体. m.p. 185~187 ; MR (400 MHz, CDCl 3 ) δ: 0.65 (d, J=6.8 Hz, 3H, CH 3 ), 1.62~1.67 (m, 4H, 2CH 2 ), 1.82 (s, 3H, CH 3 ), 1.91~1.92 (m, 1H), 2.01~2.06 (m, 1H), 2.13~2.17 (m, 1H), 2.40 (s, 3H, Ar-CH 3 ), 2.42~2.51 (m, 1H), 2.55~2.60 (m, 1H), 2.61~2.62 (m, 1H), 2.84~2.95 (m, 1H), 3.18 (s, 1H), 3.85 (s, 3H, CH 3 ), 4.66~4.68 (m, 2H), 5.41 (s, 1H), 5.61 (s, 1H), 6.47 (s, 1H), 6.50 (s, 1H), 7.24~7.67 (m, 4H, PhH); 13 C MR (100 MHz, CDCl 3 ) δ: 208.4, 174.3, 169.1, 168.9, 162.9, 151.3, 140.6, 138.1, 129.9, 126.9, 126.0, 116.2, 100.7, 46.1, 41.6, 38.9, 38.3, 36.8, 35.6, 35.5, 34.1, 31.5, 25.8, 25.1, 21.6, 12.3, 8.2; IR (KBr) ν: 3329 (H), 2926, 2855, 1690 (C=), 1624 (H C=), 1529, 1432, 1384, 1226, 1184, 915 cm -1 ; ESI-MS (70 ev) m/z (%): 419 ([M+1] +, 50), 441 ([M+a] +, 40). 2.3 抗 病 毒 活 性 测 试 测 试 样 品 溶 液 的 配 制 将 各 样 品 溶 于 适 量 的 DMS, 再 用 培 养 液 配 制 成 1000 μg/ml 的 初 始 浓 度, 然 后 用 培 养 液 做 3 倍 稀 释, 各 8 个 稀 释 度 ( 浓 度 依 次 为 250, 62.5, 15.6, 3.9, 1.0, 0.2, 0.06, 0.02 μg/ml) 抗 流 感 病 毒 活 性 测 试 将 狗 肾 (MDCK) 细 胞 接 种 于 96 孔 培 养 板, 置 于 5% C 2, 37 培 养 24 h, MDCK 细 胞 分 别 加 入 A 型 流 感 病 毒 (H32/ 江 西 东 湖 /312/2006, H11/ 广 东 罗 湖 219/2006) (50 倍 TCID 50 ), B 型 流 感 病 毒 ( 济 防 97-13) (10 倍 TCID 50 ), 37 吸 附 2 h 后 移 出 病 毒 液, 然 后 分 别 加 入 不 同 稀 释 度 的 药 物. 设 病 毒 对 照 细 胞 对 照 和 阳 性 药 对 照, 37 培 养 36 h, 观 察 结 果, 纪 录 细 胞 病 变 程 度 CPE, 用 Reed-Muench 法 分 别 计 算 各 样 品 半 数 中 毒 浓 度 (TC 50 ) 值 和 对 流 感 病 毒 半 数 抑 制 浓 度 (IC 50 ) 值, 实 验 结 果 见 表 1 和 表 2. 致 谢 活 性 筛 选 试 验 由 中 国 医 学 科 学 院 医 药 生 物 技 术 研 究 所 协 助 测 定, 在 此 对 他 们 的 帮 助 表 示 诚 挚 的 谢 意 Chinese Chemical Society & SIC, CAS Chin. J. rg. Chem. 2012, 32, 333~337

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