中 国 农 学 通 报,9():- Chinese Agricultural Science Bulletin 药 百 合 种 子 萌 发 及 染 色 体 倍 性 检 测 吴 昀, 马 怡 迪, 张 琳, 夏 宜 平 ( 浙 江 大 学 农 业 与 生 物 技 术 学 院 园 艺 系 / 农 业 部 园 艺 植 物 生 长 发 育 与 品 质 调 控 重 点 开 放 实 验 室, 杭 州 ) 摘 要 : 旨 在 研 究 药 百 合 种 子 萌 发 的 适 宜 激 素 配 比 以 浙 江 省 广 布 种 药 百 合 为 材 料, 采 用 不 同 激 素 浓 度 的 培 养 基 进 行 种 子 诱 导 及 萌 发 试 验, 以 不 添 加 任 何 激 素 的 MS 培 养 基 为 对 照, 对 药 百 合 种 子 萌 发 率 诱 导 率 诱 导 芽 数 及 生 长 势 等 进 行 研 究, 同 时, 对 药 百 合 种 子 诱 导 所 形 成 试 管 苗 进 行 染 色 体 制 片 常 规 技 术 分 析 结 果 表 明, 添 加 不 同 激 素 浓 度 培 养 基 能 显 著 促 进 药 百 合 种 子 萌 发, 最 佳 培 养 基 为 MS+-BA. mg/l+ NAA. mg/l, 萌 发 率 为.%, 诱 导 率 为.9%, 平 均 诱 导 不 定 芽 数 达. 个 ; 未 经 剥 皮 处 理 的 种 子 在 天 时 仍 无 任 何 萌 动 ; 将 诱 导 后 的 种 子 转 至 MS 基 本 培 养 基 中, 仍 表 现 出 与 转 接 前 一 致 的 生 长 状 态, 说 明 百 合 种 皮 是 制 约 百 合 种 子 萌 发 的 关 键 因 素, 进 行 剥 皮 处 理 或 其 他 物 理 措 施 可 有 效 提 高 其 萌 发 率 ; 种 子 萌 发 试 管 苗 染 色 体 倍 性 为 n=x=, 未 发 生 遗 传 变 异 关 键 词 : 药 百 合 ; 激 素 处 理 ; 种 子 剥 皮 处 理 ; 种 子 萌 发 ; 染 色 体 倍 性 中 图 分 类 号 :S.+9 文 献 标 志 码 :A 论 文 编 号 :- Studies on Seeds Germination and Ploidy levels of Lilium speciosum var. gloriosoides Wu Yun, Ma Yidi, Zhang Lin, Xia Yiping (Department of Horticulture, College of Agriculture and Biotechnology, Zhejiang University/ The Key Laboratory of Horticultural Plant Growth, Development and Quality Improvement, the Ministry of Agriculture of the People s Republic of China, Hangzhou ) Abstract: The aim was to study the proper ratio of hormones for seed germination. Lilium speciosum var. gloriosoides widely distributed in Zhejiang Province, was used as matericals. The seeds of induction and germination medium adding different concentration of hormones were studied, and the MS basal medium without any hormones was used as control. The germination rate, shoot induction rate, number of shoots inducted were measured, and the growth of plantlets were observed during the experiment. Meanwhile, the seeds induced form plantlets were analyzed using the conventional chromosome preparation in this paper. The results showed that medium adding hormones could enhance the germination rate significantly, the optimum medium was MS media supplemented with -BA. mg/l and NAA. mg/l, the germination percentage, induction rate and average indefinite buds were.%,.9% and., respectively. Seeds without peeling treatment did not germinate after inoculating days at all. The induced seedlings were transferred to MS medium, the growth condition sustained as before, which illustrated testa was the key factor limiting seed germination and hormone treatment or other physical measures can effectively improve the germination rate. The ploidy levels of seeds induction plantlets were diploid (n=x=), and no genetic variation was found. Key words: Lilium speciosum var. gloriosoides; hormone treatment; seeds germination; chromosome ploidy 基 金 项 目 : 国 家 计 划 子 项 目 月 季 菊 花 百 合 分 子 育 种 与 品 种 创 新 (AA); 浙 江 省 自 然 科 学 基 金 项 目 百 合 试 管 鳞 茎 膨 大 机 理 与 化 学 调 控 研 究 (YC) 第 一 作 者 简 介 : 吴 昀, 女,9 年 出 生, 博 士, 主 要 从 事 百 合 等 球 根 花 卉 生 理 生 化 与 分 子 生 物 学 等 研 究 工 作 通 信 地 址 : 浙 江 省 杭 州 市 浙 江 大 学 紫 金 港 校 区 农 学 院 园 艺 系 园 林 研 究 所,Tel:-99,E-mail:meimeiyu@zju.edu.cn 通 讯 作 者 : 夏 宜 平, 男,9 年 出 生, 安 徽 安 庆 人, 博 士 生 导 师, 博 士 研 究 生 通 信 地 址 : 浙 江 省 杭 州 市 浙 江 大 学 紫 金 港 校 区 农 学 院 园 艺 系 园 林 研 究 所,Tel:-99,E-mail:ypxia@zju.edu.cn 收 稿 日 期 :--, 修 回 日 期 :--
中 国 农 学 通 报 http://www.casb.org.cn 引 言 百 合 科 百 合 属 植 物 是 具 有 极 高 观 赏 价 值 和 商 品 价 值 的 物 种, 而 中 国 的 百 合 属 种 质 资 源 占 到 全 世 界 的 % 全 世 界 百 合 属 植 物 约 9 种, 中 国 原 产 约 种, 个 变 种, 占 世 界 百 合 种 类 总 数 / 以 上, 其 中 个 种 个 变 种 为 中 国 特 有 种 药 百 合 (Lilium speciosum Thunb. var. gloriosoides Baker) 为 浙 江 省 广 布 百 合 资 源, 是 美 丽 百 合 的 变 种 花 常 ~ 朵, 成 圆 锥 状 总 状 花 序, 花 梗 长, 且 花 下 垂, 花 被 片 反 卷, 纯 白 色, 边 缘 成 波 纹 状, 下 部 有 紫 红 色 斑 块 和 斑 点, 蜜 腺 两 侧 具 红 色 流 苏 状 突 起, 花 径 ~ cm, 花 极 其 美 丽, 观 赏 价 值 高 花 期 月, 果 期 9 月 鳞 茎 呈 扁 球 形, 可 入 药, 亦 可 供 食 用 药 百 合 原 产 于 中 国 浙 江 安 徽 台 湾 等 地, 日 本 九 州 地 区 也 有 分 布 [] 此 外, 药 百 合 耐 旱 抗 冻 抗 风 适 种 范 围 广 边 缘 波 状 等, 均 是 可 以 利 用 的 重 要 性 状 [] 因 此, 保 存 和 开 发 野 生 的 中 国 原 产 的 百 合 属 种 质 资 源, 对 百 合 育 种 和 改 良 商 品 用 百 合 的 性 状 有 重 要 意 义 对 于 包 括 药 百 合 在 内 的 野 生 种 的 种 质 资 源 保 存 和 繁 殖, 成 功 的 离 体 组 织 培 养 能 够 在 短 时 间 内 获 得 大 批 量 的 植 物 材 料 目 前, 药 百 合 的 研 究 主 要 集 中 在 组 织 [-] [] [] 培 养 资 源 应 用 栽 培 管 理 等 方 向, 有 关 药 百 合 在 离 体 条 件 下 的 种 子 萌 发 还 未 见 报 道 种 子 在 适 宜 的 温 度 水 分 和 光 照 等 条 件 才 能 正 常 萌 发, 其 中 有 关 光 照 温 度 等 对 野 生 百 合 种 子 萌 发 的 影 响 已 有 较 多 探 索 [-] 为 此, 本 研 究 以 药 百 合 种 子 为 材 料, 观 察 不 同 激 素 配 比 的 培 养 基 对 萌 发 的 影 响, 以 期 找 出 药 百 合 种 子 萌 发 的 适 宜 激 素 配 比, 为 药 百 合 的 种 质 资 源 保 存 药 百 合 的 栽 培 及 园 林 应 用 提 供 新 途 径, 也 为 百 合 属 植 物 种 子 萌 发 与 激 素 的 关 系 提 供 参 考 同 时, 本 研 究 还 对 药 百 合 萌 发 后 形 成 植 株 进 行 常 规 染 色 体 倍 性 检 测, 明 确 组 织 培 养 中 是 否 产 生 染 色 体 变 异, 为 药 百 合 育 种 工 作 提 供 依 据 材 料 与 方 法. 材 料 供 试 材 料 为 年 月 底 于 浙 江 省 缙 云 县 采 集 的 已 成 熟 野 生 药 百 合 蒴 果, 选 择 种 子 饱 满, 胚 清 晰 ( 胚 长 / 种 长 ) 的 种 子 作 为 试 验 材 料 ( 见 图 ), 千 粒 重 为.9 g. 方 法 试 验 于 年 月 年 月 在 浙 江 大 学 园 艺 植 物 生 长 发 育 与 品 质 调 控 重 点 开 放 实 验 室 进 行.. 剥 皮 处 理 将 蒴 果 于 添 加 吐 温 - 及 洗 洁 精 各 ~ 滴 的 水 溶 液 中 浸 泡 min, 流 水 下 冲 洗 h,% 酒 精 消 毒 s,% NaClO 处 理 min, 无 菌 水 冲 洗 ~ 次, 并 放 于 滤 纸 上 吸 干, 一 部 分 种 子 直 接 接 种 于 种 培 养 基 上 ( 表 ), 另 一 部 分 种 子 进 行 种 皮 剥 除 后 待 用.. 不 同 激 素 浓 度 处 理 MS 培 养 基 中 添 加 种 不 同 配 比 的 -BA 及 NAA 种 激 素, 具 体 配 方 见 表, 以 不 填 加 任 何 激 素 的 MS 培 养 基 为 对 照.. 根 尖 染 色 体 制 片 染 色 体 倍 性 分 析 采 用 李 克 虎 [9] 等 的 方 法 待 试 管 苗 的 根 长 至.~ cm 长 时 切 下, 用 蒸 馏 水 清 洗 干 净, 再 用. mmol/l 的 放 线 菌 酮 室 温 预 处 理 h, 后 用 卡 诺 氏 固 定 液 ( 酒 精 : 乙 醇 (v/v)=:) 固 定 一 晚 上 后 备 用 ; 将 固 定 好 的 根 尖 用 含 % 纤 维 素 酶 和 果 胶 酶 混 合 液 软 化 后, 用 % 醋 酸 洋 红 染 色, 压 片 后 用 Olympus(BH-) 观 察, 选 择 较 好 的 中 期 分 裂 相 拍 片.. 观 察 与 统 计 萌 发 标 志 : 以 胚 根 或 幼 芽 突 破 种 皮 为 准 每 隔 天 观 察 一 次, 统 计 接 种 天 时 萌 发 率, 诱 导 芽 数 及 生 长 势, 并 于 天 时 将 萌 发 种 子 转 入 仅 含 MS 培 养 基 的 柱 形 瓶 中, 天 后 观 察 生 长 情 况 并 拍 照 其 中, % 萌 发 率 =( 发 芽 种 子 数 / 种 子 总 数 ) % 诱 导 率 =( 诱 导 出 芽 的 种 子 数 / 总 接 种 种 子 数 ) 诱 导 芽 数 =( 诱 导 芽 总 数 / 分 化 芽 的 种 子 数 ) % 每 个 处 理 接 种 粒 种 子, 重 复 次 试 验 结 果 采 用 SPSS 软 件 分 析 结 果 与 分 析 图 药 百 合 种 子. 剥 皮 处 理 对 种 子 萌 发 的 影 响 未 经 剥 皮 处 理 的 种 子 在 生 长 天 后, 种 培 养 基 均 未 见 任 何 萌 动 迹 象 在 培 养 过 程 中, 种 子 胚 吸 水 膨 胀, 胚 所 在 部 位 转 白 明 显, 但 转 白 的 比 率 在 ~ 天 期 间, 号 及 号 培 养 基 并 未 随 时 间 延 长 而 增 高, 而 是 出 现 了 一 定 程 度 的 降 低 这 可 能 是 由 于 种 皮 对 种 子 萌 发 形 成 较 大 的 机 械 阻 碍, 种 子 不 能 吸 收 足 够 水 分, 导 致 生 长 停 滞 萎 缩 甚 至 死 亡 此 外, 试 验 中 还 发 现 未 经 剥 皮
吴 昀 等 : 药 百 合 种 子 萌 发 及 染 色 体 倍 性 检 测 处 理 的 种 子 出 现 了 约 % 的 细 菌 或 真 菌 污 染, 而 剥 皮 处 理 的 种 子 污 染 率 为 将 未 经 剥 皮 处 理 的 种 子 重 新 进 行 剥 皮 处 理, 并 转 入 相 应 培 养 基, 发 现 天 后 % 以 上 种 子 正 常 萌 发 药 百 合 接 种 到 不 同 激 素 配 比 的 培 养 基 后, 开 始 萌 发 时 间 除 号 培 养 基, 其 他 均 明 显 低 于 对 照 的 第 9 天, 最 短 为 号 培 养 基, 即 MS+-BA. mg/l+naa. mg/l, 从 第 天 开 始 便 有 萌 动 ; 试 验 发 现, 除 号 及 号 培 养 基 萌 发 高 峰 期 在 天 以 内, 号 与 号 与 对 照 无 显 著 差 异, 而 当 -BA 含 量 为. mg/l 时, 种 培 养 基 均 表 现 出 较 长 的 萌 发 时 间, 其 中, 号 及 号 培 养 基 高 峰 期 延 续 时 间 最 长, 分 别 为 9 天 及 天 ; 种 培 养 基 除 号 外, 其 余 均 显 著 高 于 对 照, 最 高 达 到 了.9% 的 萌 发 率, 平 均 萌 发 率 亦 达 到 了 % 以 上 ( 见 表 ). 不 同 激 素 配 比 对 种 子 萌 发 的 影 响 剥 皮 处 理 的 种 子 在 各 自 培 养 基 上 继 续 培 养, 在 天 时 统 计 观 察 发 现, 不 同 激 素 培 养 基 对 药 百 合 种 子 诱 导 芽 上 差 异 明 显, 在 号 号 及 号 培 养 基 中 生 长 的 种 子 诱 导 率 均 达 到 % 以 上, 显 著 高 于 对 照 的.%, 其 对 应 的 诱 导 芽 数 为... 个, 号 培 养 基 诱 导 率 虽 低 于 前 三 者, 但 其 平 均 诱 导 芽 数 较 高, 达 到. 个 ( 表 ), 不 同 培 养 基 上 生 长 的 药 百 合 种 子 生 长 势 稍 有 差 异, 具 体 见 图 表 不 同 培 养 基 与 种 子 剥 皮 与 否 对 种 子 萌 发 的 影 响 试 验 还 发 现,9% 以 上 种 子 始 于 下 胚 轴 伸 长, 属 于 子 叶 出 土 型, 仅 % 种 子 表 现 上 下 胚 轴 同 时 伸 长 生 长, 属 于 子 叶 留 土 型, 主 要 集 中 在 号 及 号 培 养 基 上 将 以 上 接 种 天 后 的 药 百 合 芽 转 接 至 不 添 加 任 何 激 素 的 MS 培 养 基 中, 发 现 生 长 天 后, 原 不 同 编 号 培 养 基 在 相 同 生 长 环 境 中 仍 然 继 续 表 现 出 差 异, 特 别 是 在 形 成 的 小 鳞 茎 直 径 及 植 株 高 度 上, 认 为 这 可 能 是 所 添 加 的 激 素 在 材 料 上 的 滞 留, 从 而 延 续 的 表 现 在 其 整 个 植 [] 株 生 长 过 程 中 ( 图 ), 这 与 许 智 宏 等 在 烟 草 上 的 研 究 结 果 相 近, 即 细 胞 分 裂 素 作 用 时 间 仅 需 ~ 天, 随 后 将 其 移 到 MS 培 养 基 上, 均 能 正 常 形 成 芽 因 此, 研 究 表 明, 培 养 基 中 添 加 适 宜 浓 度 的 -BA 和 NAA 可 有 效 提 高 药 百 合 种 子 的 萌 发 水 平, 综 合 考 虑 不 剥 皮 处 理 剥 皮 处 理 编 号 培 养 基 配 方 /(mg/l) d 后 种 子 转 白 比 率 /% d 后 种 子 转 白 比 率 /% 萌 发 率 /% 开 始 萌 发 时 间 /d 萌 发 高 峰 期 /d 萌 发 率 /% MS+-BA.+NAA..±.a.±.a ~.±9.a MS+-BA.+NAA..±.c.9±.a ~.±.b MS+-BA.+NAA..±.b.±.9ba ~.±.ab MS+-BA.+NAA..±.b.±.a ~.±.a MS+-BA.+NAA..±.d.±.bc ~.±.ab MS+-BA.+NAA..±. d.±.c ~.9±.a MS+-BA.+NAA..±.cd.±.c ~.±9.a MS+-BA.+NAA..±.c.±.ba ~.±9.a CK MS.9±.d.±.c 9 ~.±.b 注 : 种 子 转 白 比 率 是 以 种 子 吸 水 膨 胀, 且 / 以 上 部 位 转 白 为 标 准 ; 显 著 性 水 平 为 % 表 不 同 培 养 基 对 剥 皮 种 子 萌 发 的 影 响 编 号 培 养 基 配 方 /(mg/l) 诱 导 率 /% 诱 导 芽 数 生 长 势 MS+-BA.+NAA. 9.±. a.±.ab 芽 长 约 ~. cm, 浅 绿 色, 基 部 粗 壮 MS+-BA.+NAA..±. c.±.b 芽 长 约 为. cm, 浅 绿 色, 细 弱 MS+-BA.+NAA..±9. bc.±.b 芽 长 约 为 cm 芽 偏 白 MS+-BA.+NAA..±. bc.±.b 芽 长 约 为. cm, 细 弱, 基 部 膨 大 明 显 MS+-BA.+NAA..±.. b.±.a 芽 长 约 为. cm, 细 长, 根 粗 壮 且 有 根 毛 MS+-BA.+NAA..±9. a.±.b 芽 长 约 为. cm, 细 长, 浅 绿 色 MS+-BA.+NAA..±9. b.±.a 芽 长 约 为. cm, 偏 白, 有 根 且 有 根 毛 MS+-BA.+NAA..9±. a.±.a 芽 长. cm, 有 根, 芽 与 根 均 短 而 粗 壮, 有 根 毛 CK MS. ±9.c.±. b 芽 长 约 为. cm, 细 弱 注 : 显 著 性 水 平 为 %
中国农学通报 http://www.casb.org.cn 图 不同培养基上生长 天的药百合种子 ck 图 转入 MS 培养基后生长 天情况 各因素 本研究认为 号 号 号均可有效促进药百合 种子的萌发 所形成的植株健壮 生长速度快 表. 染色体倍性检测 随机抽取 株不同试管苗根尖进行染色体倍性观 察 结果发现未检测到变异植株 染色体条数稳定为 条 即 n=x=尽管如此 并不能彻底排除由药百合 种子诱导形成组培苗存在变异的可能 只能说明大部 分植株可稳定遗传原植株性状 不产生变异 图 结论 结 果 表 明 最 佳 培 养 基 为 MS + -BA. mg/l + NAA. mg/l 萌发率为.% 诱导率为.9% 平均 诱导不定芽数达. 个 不定芽诱导率及不定芽数均与 图 药百合种子诱导植株根尖染色体倍性 其他处理及对照呈显著性差异 且植株生长健壮 9% 以 上 种 子 属 于 子 叶 出 土 型 仅 接 种 在 高 浓 度 -BA (. mg/l)及低浓度 NAA(.~. mg/l)培养基上的种 子有少量表现为子叶留土型 占 % 未经剥皮处理的种 子在 天时仍无任何萌动 将诱导后的种子转至 MS 基 本培养基中 仍表现出与转接前一致的生长状态 种子 萌发试管苗染色体倍性为n=x= 未发生遗传变异
吴 昀 等 : 药 百 合 种 子 萌 发 及 染 色 体 倍 性 检 测 讨 论 种 子 的 萌 发 受 多 种 因 素 的 综 合 影 响, 种 子 在 适 宜 的 水 氧 气 温 度 或 光 照 等 环 境 因 子 条 件 下, 才 能 正 常 萌 发, 同 时, 不 同 种 类 不 同 居 群 甚 至 不 同 母 株 的 种 子 休 眠 特 性 存 在 差 异, 这 主 要 是 由 于 其 遗 传 物 质 的 不 同, 因 此, 种 子 萌 发 是 基 因 型 及 环 境 因 素 共 同 决 定 的 [-] 通 常 成 熟 度 高 的 种 子 发 芽 率 高, 因 其 能 为 萌 发 提 供 充 足 营 养 物 质, 且 成 熟 种 子 胚 乳 中 角 质 结 构 较 多, 含 水 量 低, 仅 需 吸 收 较 少 水 分 便 可 萌 发 [] 因 此, 笔 者 选 择 已 成 熟 蒴 果, 选 种 子 饱 满, 胚 清 晰 ( 胚 长 / 种 长 ) 的 种 子 亦 是 基 于 此 考 虑 百 合 属 植 物 种 子 通 常 具 有 坚 厚 的 种 皮, 预 冷 或 预 热 处 理 常 有 助 于 擦 破 种 皮, 从 而 提 高 种 子 的 萌 发 速 度 与 萌 发 率 [] 而 本 试 验 中 未 经 剥 皮 处 理 的 药 百 合 种 子 在 接 种 天 后 仅 出 现 不 同 程 度 的 吸 水 膨 胀, 但 未 有 任 何 萌 动 迹 象, 且 随 着 时 间 延 长, 部 分 种 子 出 现 完 全 褐 化 死 亡, 证 实 了 百 合 种 子 种 皮 厚 实, 吸 水 及 通 气 困 难 而 经 剥 皮 处 理 种 子 全 部 萌 发, 最 高 可 达.9%, 这 与 周 晓 [] 杰 等 在 百 合 远 缘 杂 交 种 子 的 结 果 接 近 在 实 际 操 作 中, 延 长 无 菌 水 冲 洗 时 间, 此 步 骤 可 一 定 程 度 软 化 种 皮, 去 除 种 皮 表 层 的 蜡 质 和 油 脂, 增 强 皮 透 性 并 能 浸 出 发 芽 抑 制 物 质, 减 轻 剥 皮 处 理 难 度, 提 高 萌 发 率 [] 因 此, 笔 者 认 为, 百 合 种 皮 是 制 约 百 合 种 子 萌 发 的 关 键 因 素, 进 行 剥 皮 处 理 或 其 他 物 理 措 施 可 有 效 提 高 其 萌 发 率 除 了 物 理 处 理, 种 子 萌 发 时, 也 常 通 过 一 些 化 学 处 理 达 到 打 破 休 眠, 促 进 种 子 萌 发 的 作 用, 其 中 包 括 激 素 处 理, 如 赤 霉 素 细 胞 分 裂 素 萘 乙 酸 等 细 胞 分 裂 素 可 促 进 胚 的 萌 发, 如 通 过 细 胞 分 裂 素 处 理 可 促 进 深 休 眠 的 槭 树 种 子 萌 发, 使 苹 果 种 子 层 积 时 间 缩 短, 或 促 进 杨 梅 种 子 发 芽 [] 激 素 处 理 时, 不 同 浓 度 常 会 改 变 处 理 的 效 果 [] 本 研 究 认 为 则 认 为 细 胞 分 裂 素 与 生 长 素 比 值 较 高 [9] 时 效 果 最 佳 这 与 郑 相 穆 等 研 究 结 果 有 差 异, 可 能 是 因 为 单 一 使 用 细 胞 分 裂 素 或 生 长 素 效 果 不 佳, 需 两 [] 者 配 合 使 用, 而 这 一 研 究 结 果 在 段 金 玉 等 在 兰 属 植 物 中 的 发 现 相 同 植 物 组 织 培 养 中, 离 体 培 养 细 胞 中 的 染 色 体 数 目 和 组 型 与 供 体 植 物 不 同 常 有 出 现, 且 通 常 表 现 出 多 倍 体 非 整 倍 体 及 结 构 变 异 通 常 含 植 物 激 素 的 培 养 基 中, 均 有 可 能 出 现 各 种 染 色 体 异 常 的 细 胞, 其 原 因 可 能 是 生 长 调 节 物 质 破 坏 了 细 胞 纺 锤 体 形 成, 并 改 变 有 丝 分 裂 各 个 时 期 的 正 常 比 含,-D 的 培 养 基 比 含 IAA NAA 等 的 培 养 基 更 易 于 发 生 变 异 [] 本 研 究 随 机 选 取 株 不 同 试 管 苗 根 尖 进 行 染 色 体 倍 性 观 察, 结 果 未 检 测 到 变 异 植 株, 染 色 体 倍 性 为 n=x=, 与 胡 凤 荣 [] 等 的 研 究 结 果 一 致 但 更 多 试 管 苗 倍 性 还 有 待 进 一 步 检 测, 以 明 确 变 异 植 株 是 否 存 在, 并 为 后 期 杂 交 育 种 提 供 依 据 参 考 文 献 [] 曹 毅, 周 荣, 黎 明 星, 等. 低 温 及 乙 烯 利 处 理 鳞 茎 对 药 百 合 的 影 响 [J]. 种 子,():-. [] 储 俊, 许 娜, 龚 义 平, 等. 安 徽 霍 山 药 百 合 组 织 培 养 的 研 究 [J]. 安 徽 农 学 通 报,9,():9-. [] 余 梅, 尹 艺 林, 王 继 明, 等. 食 用 药 百 合 组 织 培 养 及 其 多 倍 体 诱 导 研 究 [J]. 皖 西 学 院 学 报,9,():-. [] 唐 艳 平, 刘 秀 群, 傅 强, 等. 长 江 中 游 地 区 野 生 百 合 资 源 调 查 及 利 用 前 景 [J]. 中 国 野 生 植 物 资 源,,9():-. [] 兰 家 泉, 向 世 军, 陈 继 富, 等. 湘 西 野 生 药 百 合 品 种 筛 选 及 园 林 观 赏 利 用 前 景 [J]. 中 国 农 村 小 康 科 技,():9. [] 管 康 林. 略 叙 种 子 休 眠 与 萌 发 研 究 中 的 几 个 问 题 [J]. 种 子,9():. [] 杨 炜 茹, 张 启 翔. 岷 江 百 合 种 子 萌 发 的 研 究 [J]. 种 子,,(): -. [] 伍 丹, 周 兰 英. 光 照 和 温 度 对 大 百 合 种 子 萌 发 的 影 响 [J]. 中 国 野 生 植 物 资 源,,():-. [9] 李 克 虎, 周 桂 雪, 任 贵 玲, 等. 百 合 品 种 染 色 体 倍 性 观 察 [J]. 园 艺 学 报,,():9-9. [] 许 智 宏, 王 熊, 刘 桂 云. 烟 草 叶 组 织 培 养 中 器 官 形 成 的 研 究 [J]. 植 物 生 理 与 分 子 生 物 学 学 报,9():-. [] 杨 利 平, 宋 满 珍, 张 晶, 等. 光 照 和 温 度 对 百 合 属 种 植 物 种 子 萌 发 的 影 响 [J]. 植 物 资 源 与 环 境 学 报,,9():-. [] 杨 期 和, 叶 万 辉, 宋 松 泉, 等. 植 物 种 子 休 眠 的 原 因 及 休 眠 的 多 形 性 [J]. 西 北 植 物 学 报,,():-. [] 马 建 华. 影 响 种 子 萌 发 出 苗 的 几 个 因 素 [J]. 种 子 科 技,,(): -. [] 李 雪, 杜 捷, 陈 丽 梅, 等. 克 得 利 亚 百 合 种 子 萌 发 及 鳞 茎 生 长 的 研 究 [J]. 西 北 师 范 大 学 学 报 : 自 然 科 学 版,,():9-. [] 周 晓 杰, 樊 金 萍, 龚 束 芳, 等. 百 合 远 缘 杂 交 种 子 快 繁 方 法 的 研 究 [J]. 作 物 杂 志,9():-. [] 夏 宜 平, 潘 菊 明, 郑 慧 俊, 等. 从 种 球 高 山 繁 育 实 践 谈 东 方 百 合 的 国 产 化 问 题 [J]. 中 国 花 卉 园 艺,():-. [] 傅 强, 杨 期 和, 叶 万 辉, 等. 种 子 休 眠 的 解 除 方 法 [J]. 广 西 农 业 生 物 科 学,,():-. [] 尹 黎 燕, 王 彩 云, 叶 要 妹, 等. 观 赏 树 木 种 子 休 眠 研 究 方 法 综 述 [J]. 种 子,():-. [9] 郑 相 穆, 周 阮 宝. 凤 丹 种 子 的 休 眠 和 萌 发 特 性 [J]. 植 物 生 理 学 通 讯, 99,():-. [] 段 金 玉, 谢 亚 红. 在 无 菌 条 件 下, 激 素 和 种 子 处 理 对 兰 属 十 种 植 物 种 子 萌 发 的 影 响 [J]. 云 南 植 物 研 究,9():9-. [] 商 效 民. 植 物 离 体 培 养 中 染 色 体 的 变 异 [J]. 细 胞 生 物 学 杂 志,9 ():-. [] 胡 凤 荣, 刘 光 欣, 席 梦 利, 等. 药 百 合 根 尖 染 色 体 C- 带 分 析 [J]. 南 京 林 业 大 学 学 报 : 自 然 科 学 版,9():-9.