中国药师 年第 卷第 期 C P m V N 丹参注射液对肝性脑病的的防治作用及机制研究 胡瑜 蔡梦婷 陈健文 陈浩凡 广东省边防总队医院 广东深圳 中山大学药学院 摘 要 目的探讨丹参注射液对肝性脑病 HE的防治作用及其作用的初步机制 方法通过急性 氨中毒动物模型和四氯化碳 CC 致肝损伤合并硫代乙酰胺 TAA诱导!血氨的大鼠肝性脑病模型 对氨中毒死亡时相 血 氨 脑氨水平 肝脏功能以及肝脏病理组织学改变等指标进行了评价 结果在急性氨中毒实验中 丹参注射液能使急性氨中 毒小鼠存活时间明显延长 在 CCL 和 TAA诱导的肝性脑病大鼠模型中 丹参注射液能明显降低肝性脑病大鼠血氨和脑氨水 平 并可在一定程度上降低肝性脑病大鼠血清 ALT AS T ALP 总胆红素 T 含量 改善肝功能 从而防治肝性脑病 结论 丹参注射液对肝性脑病有较好的防治作用 可能与降低血氨和脑氨水平有关 关键词 丹参注射液 肝性脑病 高血氨 硫代乙酰胺 中图分类号R 文献标识码A 文章编号 X P T E U M m D I T m H E HY C M C J w C H G G T mh A m P G S C S P m S S Y U ABSTRACT O T m m m D m HEM T mm m mm m w HEm w mm m w m m T m w m m w m R I mm m m D w F m D m ALT AS T ALP T m m w HEC D m m m HE w KEYWORDS D H H mm T m 肝性脑病 HE是严重 痹血瘀症候 如胸闷 心悸 心绞痛 急慢性心肌梗 肝脏疾病并发的一种可逆性意识障碍为主要特征的 死 缺血性脑中风 脑梗死或中风后遗症 通过前期 神经紊乱和运动异常综合征 急性肝功能衰竭 慢 初步研究发现其对肝性脑病有保护作用 本研究课 性肝炎 肝硬化和门体静脉分流者均易诱发肝性脑 题拟通过急性氨中毒小鼠模型和四氯化碳 CC 病 一般肝性脑病是由于暴发性 亚暴发性肝功能 致肝损伤合并硫代乙酰胺 TAA诱导! 血氨的大 衰竭或严重慢性肝病伴有门 体分流而出现的一系 鼠肝性脑病模型 以氨中毒死亡时相 血氨 脑组织 列代谢紊乱 并影响中枢神经系统的正常功能 出现 氨水平及肝脏损伤程度等指标进行评价 进一步探 以神经 精神症状为主的一种综合征 临床中常先 讨丹参注射液对肝性脑病的药效学作用以及作用的 出现精神症状 继之出现意识障碍 故又称之为 肝 初步机制 性昏迷 肝性脑病中并发的脑水肿常导致颅内压 材料 增高和脑卒的发生 有较高的死亡率 所以是肝功能 药品 衰竭尤其是急性暴发性肝功能衰竭 m FHF最常见 最直接的致死原因 是活血化瘀药 丹参注射液 物 有许多有益的心血管效应 近年来广泛用于治疗 冠心病等疾病 取得较好的疗效 该药也适用于胸 受试药物丹参注射液 四川三精升和制药有限 批号为 阳 公司 成人用量为 m 性对照药谷氨酸片 天津力生制药股份有限公司 片 批号 溶媒对照羧甲基纤维素 钠 广州市医药公司化学试剂批发部 进口分装 批 通讯作者胡瑜 T E m qq m
研究论文 www 号 m 组有非常显著的统 对照组延长 其中 试剂 计学差异 与对照组比较 P 效果优于阳性 氯化铵 AR 相对分子质量 天津市福晨 对照 谷氨酸片 m 组 化学试剂厂 瓶 批号 硫代乙酰 对四氯化碳致肝损伤合并硫代乙酰铵诱导高 m公司产品 产品号G 批号 氨 S 血氨大鼠肝性脑病的影响 其他 试 剂 为 国 产 色 谱 纯 或 分 析 纯 四 氯 化 碳 分组与方法 SPF级雄性 SD大鼠 体 CC 天 津 汇 英 化 学 试 剂 有 限 公 司 生 产 批 号 随机分为空白对照组 模型对照 质量 用市售花生油稀释至所需浓度 m 受 组 阳性药物谷氨酸钠对照组 动物 试药品丹参注射液低中高剂量组 m 昆明小鼠 雄性 体质量 由中山大学 除阳性对照药口服 其他均灌胃给药 除正常对 CXK 粤 药学院 实 验 动 物 中 心 提 供 合 格 证 号S 照组外 其余各组动物皮下注射 CC 油溶液 SD大鼠 雄性 体质量 由 每周注射两次 连续两周 以制备大鼠肝损伤模型 中山 大 学 药 学 院 实 验 动 物 中 心 提 供 合 格 证 号 各组大鼠给 CC 每天 次 的同时给予药物治疗 SCXK 粤 天 在第 天给药后 m 腹腔注 连续给药 饲养条件动物购进后放 SPF级动物房 大鼠 每笼放养 只 小鼠每笼放养 只 动物自由摄食 射 TAA m 作为 NH 供体 次 连 续给予 TAA次 各药亦按原剂量给予 饮水 由专人饲养管理 动物室灯光 照明 通 于末次注射 TAA后 m 各组大鼠按顺序进 风和空调设备良好 室温控制在 ± 相对湿 行实验 以戊巴比妥钠麻醉 m 从腹 实验室按常规定期消毒 度为 腔静脉取血 取 m肝素锂抗凝用于测血氨 另取 统计分析 m分离 血 清 用 于 检 测 ALT AS T ALP 总 胆 红 素 所有实验数据以 珋±表示 计量数据由 SPSS T 总蛋白 TP 白蛋白 A 球蛋白以及 A 统计软件进行方差分析及组间比较 G比 值 等 之 后 迅 速 断 头 取 半 侧 脑 组 织 低 温 操 方法与结果 作 用于匀浆测定脑组织氨含量 另取部分肝脏和 对氯化铵导致急性氨中毒的影响 另一侧脑组织置 甲醛固定 切片 HE染色 进 SPF级健康昆明小鼠 雄性 共 只 体质量 随机分成 组 分别为对照组 丹参注射液 低中高剂量组 m 阳性对照药谷氨 行病理组织学检查 实验结果 从表 可见 与空白对照组比 较 模型对照组血氨和脑氨含量均明显升高 差异有 酸片 m 组 各组小鼠分别尾静脉注射 统计学意义 P 说明 CC AA高 肝损伤伴 T 给药 阳性药灌胃 q 连续 对照组给予生理 血氨动物模型可致大鼠血氨和脑氨含量升高 模型 盐水 给药期间小鼠自由摄食 饮水 末次给药后 成功 与模型对照组相比 丹参注射液组 m m 各组均腹腔注射 NHC 每次 m 以及谷氨酸组 m 能明显降低大 每 m 一次 观察动物中毒症状 记录动 提示丹参 鼠血氨以及脑组织氨的水平 P 物中毒死亡所需时间 氨中毒时相和 NHC致死 注射液对降低大鼠血氨和脑氨含量具有一定的剂量 用量 依赖关系 由表 可见 丹参注射液组 m m 组的存活时间明显比 以及谷氨酸片 从表 可见 与空白对照组比较 模型组大鼠血 T ALP含量明显升高 P 表 清中ALT AS 表 丹参注射液灌胃给药对小鼠肝昏迷的影响 珋± 组别 剂量 例数 只 给氯化铵量 m 给氯化铵量 m 存活时间 m 对照组 ± ± ± 谷氨酸片组 m ± ± ± 丹参注射液低剂量组 m ± ± ± 丹参注射液中剂量组 m ± ± ± 丹参注射液高剂量组 m ± ± ± 注与对照组比较P P
中 国 药 师 2014 年 第 17 卷 第 11 期 ChinaPharmacist2014,Vol.17 No.11 表 2 对 四 氯 化 碳 肝 损 伤 伴 高 血 氨 动 物 模 型 大 鼠 血 氨 / 脑 氨 的 影 响 ( x±s) 珋 组 别 剂 量 ( kg -1 ) 血 氨 (μmol L -1 ) 脑 氨 (μmol kg -1 ) 空 白 对 照 组 69.3±12.5 230.1±51.4 模 型 对 照 组 265.3±38.9 c 463.1±40.8 c 谷 氨 酸 片 组 360mg 211.2±38.7 b 344.3±40.7 b 低 剂 量 组 中 剂 量 组 高 剂 量 组 2ml 222.3±39.3 a 409.1±72.3 4ml 220.5±41.4 a 362.3±71.2 b 8ml 206.2±37.5 b 338.7±76.2 b 注 : 与 空 白 对 照 组 相 比, c P<0.05; 与 模 型 对 照 组 相 比, a P<0.05, b P<0.01 明 通 过 CCl 4 以 及 TAA 造 模 大 鼠 肝 功 能 出 现 明 显 的 损 害 与 模 型 对 照 组 比 较, 各 剂 量 组 给 药 均 能 有 一 定 程 度 改 善 肝 脏 功 能 的 作 用 趋 势, 但 与 模 型 组 比 较 差 异 无 统 计 学 意 义 (P>0.05) 从 表 4 可 见, 与 空 白 对 照 组 比 较, 模 型 组 大 鼠 血 清 中 A/G 比 值 明 显 降 低, 差 异 有 统 计 学 意 义 (P< 0.05); 与 模 型 对 照 组 相 比, 各 剂 量 组 以 及 谷 氨 酸 组 对 肝 性 脑 病 大 鼠 TP ALB A/G 均 无 明 显 影 响 (P>0.05) 正 常 对 照 组 : 肝 细 胞 结 构 基 本 正 常, 未 见 脂 肪 变 性 肿 胀 炎 症 细 胞 变 性 坏 死 等 明 显 的 病 理 组 织 学 的 改 变 模 型 对 照 组 : 很 多 肝 细 胞 呈 肿 胀 变 性 坏 死, 排 列 见 明 显 紊 乱, 肝 小 叶 结 构 显 模 糊, 肝 组 织 呈 现 不 同 程 度 的 病 理 改 变, 有 点 状 片 状 小 灶 或 大 灶 性 碎 屑 状 坏 死, 可 见 有 纤 维 组 织 增 生 现 象, 血 管 周 围 尤 明 显, 肝 组 织 间 质 含 有 脂 肪 细 胞 堆 积, 纤 维 组 织 中 可 见 有 炎 症 细 胞 ( 主 要 是 淋 巴 细 胞 浆 细 胞 及 嗜 酸 性 细 胞 ) 浸 润 与 模 型 对 照 组 比 较, 中 剂 量 组 (4ml kg -1 ) 高 剂 量 组 (8ml kg -1 ) 以 及 谷 氨 酸 片 组 可 见 肝 组 织 变 性 坏 死 明 显 减 轻, 部 分 肝 细 胞 呈 点 状 或 小 片 状 坏 死, 肝 细 胞 肿 胀 坏 死 排 列 以 及 炎 症 相 对 改 善 由 此 表 明, 具 有 一 定 程 度 的 防 止 或 减 轻 肝 组 织 损 伤 的 作 用 见 表 5 表 3 对 四 氯 化 碳 肝 损 伤 伴 高 血 氨 动 物 模 型 大 鼠 肝 功 指 标 的 影 响 ( 珋 x±s) 组 别 剂 量 ( kg -1 ) ALT(U L -1 ) AST(U L -1 ) Tbil ALP 空 白 对 照 组 57.9±9.9 176.2±26.3 0.32±0.08 376.9±62.3 模 型 对 照 组 96.2±20.0 c 243.4±49.8 c 0.41±0.17 520.1±125.3c 谷 氨 酸 片 组 360mg 94.9±44.7 228.7±47.6 0.39±0.18 501.5±97.2 低 剂 量 组 2ml 87.2.±23.1 221.9±69.2 0.39±0.21 419.5±57.3 中 剂 量 组 4ml 85.2±32.4 230.3±49.6 0.40±0.14 477.2±88.2 高 剂 量 组 8ml 81.6±30.7 215.9±50.1 0.36±0.17 511.3±102.7 注 : 与 空 白 对 照 组 相 比, a P<0.05 表 4 四 氯 化 碳 亚 急 性 肝 损 伤 伴 高 血 氨 动 物 模 型 大 鼠 肝 功 指 标 的 影 响 ( 珋 x±s) 组 别 剂 量 ( kg -1 ) 例 数 ( 只 ) TP(g L -1 ) ALB(g L -1 ) A/G 空 白 对 照 组 10 68.1±3.8 30.2±2.3 0.80±0.14 模 型 对 照 组 8 68.7±7.5 26.3±4.0 0.62±0.09 a 谷 氨 酸 片 组 360mg 9 67.7±4.9 27.6±2.3 0.69±0.12 低 剂 量 组 2ml 8 67.7±1.5 27.3±2.2 0.61±0.06 中 剂 量 组 4ml 9 67.2±4.7 27.3±2.4 0.62±0.07 高 剂 量 组 8ml 8 68.3±4.5 26.7±2.3 0.64±0.10 注 : 与 空 白 对 照 组 相 比, a P<0.05 表 5 对 肝 性 脑 病 大 鼠 肝 脏 病 理 组 织 学 改 变 的 影 响 组 别 炎 性 细 胞 浸 润 脂 肪 变 性 细 胞 坏 死 坏 死 灶 - + ++ +++ - + ++ +++ - + ++ +++ ++++ 空 白 对 照 组 10 0 0 0 9 1 0 0 8 2 0 0 0 模 型 对 照 组 1 3 3 1 3 3 2 0 0 2 3 3 0 谷 氨 酸 片 组 2 4 2 0 4 4 0 0 1 3 2 2 0 低 剂 量 组 3 4 2 0 5 3 1 0 2 2 2 3 0 中 剂 量 组 3 3 2 0 3 3 2 0 0 2 3 3 0 高 剂 量 组 3 4 2 0 5 3 1 0 1 4 2 2 0 注 :+ 轻 度 ;++ 中 度 ;+++ 重 度 ;++++ 极 重 度 1813
研究论文 www 改善肝脏微循环 促进肝细胞的再生 而本实 讨论 肝性脑病是肝功能衰竭或门体分流引起的中枢 验对肝性脑病大鼠肝脏病理组织检测中 丹参注射 神经系统神经精神综合症 最常见于终末期肝硬 液中高剂量组以及谷氨酸片组可见肝组织变性 坏 化 有关肝性脑病的发病机制 目前尚不完全清楚 死明显减轻 部分肝细胞呈点状或小片状坏死 肝细 一般情况下 肝性脑病时脑内并没无明显的特异性 胞肿胀 坏死 排列以及炎症相对改善 ②降低转氨 结构变化 一般认为 主要是由于脑组织的功能和 酶反映肝细胞有无受损及严重程度指标的检测一般 代谢障碍所引起的 近年有几种假说 氨中毒学 T主要分布在心肌 肝脏 ALT主 有 AST ALT等 AS 说 假性神经递质学说 血浆氨基酸失衡学说 GA 要分布在肝脏 在肝细胞中 ALT主要存在非线粒体 BA学说 内毒素学说等 目前认为 肝性脑病 中 而大约 的 AS T存在线粒体中 由上可知 是由于肝细胞的代谢解毒功能障碍 血液中有多种 AST ALT均为非特异性细胞内功能酶 正常时血清 有毒物质不能被肝脏清除 这些毒物经肝随血 的 AS T及 ALT含量很低 当肝细胞受损时 肝细胞 液达到脑并作用于中枢神经系统使脑能量代谢障 膜通透性增加 胞浆内的 AST及 ALT释放入血浆 碍 神经元膜面受体被影响 使神经递质异常而引发 致使血清 中 AST及 ALT酶 活 性 增 高 本 实 验 肝性脑病 近年对于肝脑发病机理的研究带有 中 与空 白 对 照 组 比 较 模 型 组 大 鼠 血 清 中 ALT 倾向性是各种因素的综合 其中神经氨中毒学说最 AST ALP含量明显升高 P 表明通过 CC 为重要 普遍认为氨中毒是 HE发病的经典学说 以及 TAA造模大鼠肝功能出现明显的损害 与模 肝硬化病情进展过程中脑内神经元与胶质细胞均受 型对照组比较虽差异无统计学意义 丹参注射液各 到不良影响高血氨症是其中一个极大的影响因素 剂量组给药均能有一定程度改善肝脏功能的作用趋 血氨来源分为体内代谢产氮和肠道内产氨 入血后 势 而其他反映肝脏功能的指标中 丹参注射液各 在肝脏中经鸟氨酸循环合成尿素 由尿排出 肝脏 剂量组对肝性脑病大鼠 TP ALB A G均无明显影 损害时 不能将进入肝脏的氨都转变为尿素 使血氨 响 这可能是因为肝脏有重要的代偿功能 所以肝 升高 氨进入脑细胞后干扰脑细胞的能量代谢 使 脏往往要到一定病程和一定程度时才会出现血清白 N K ATP酶活性减低 ATP缺乏 能量供应不 蛋白量的改变 文献报道肝储备功能至少损失 足 以致不能维持中枢神经系统的兴奋活动 从而引 以上时肝细胞合成 功 能 才 出 现 失 代 偿 起昏迷 能否降低血氨浓度在临床上是衡量药物疗 效和评估患者预后的一个重要指标 本实验慢 ③调节肝内免疫功能 ④减轻门静脉高压 ⑤抑制 肝星状细胞 性肝损伤实验中 与模型对照组相比 丹参注射液 根据本实验室前期的相关研究 初步认为丹参 组 m 以及谷氨酸组 m 能 注射液对肝性脑病有一定的保护作用 在此基础 明显降低大鼠血氨以及脑组织氨的水平 上 本次实验结合肝性脑病的发病机制 主要针对氨 中医的经典著作中没有肝损伤的概念 根据肝 中毒学说这一学术界最为公认的肝性脑病发病核心 损伤的临床表现 多属于中医的 胁痛 黄疽 因素 建立了急性铵中毒动物模型 以及 CC 致肝 积聚 鼓胀 等病证范畴 常因外感湿热 疫病 损伤伴 TAA诱导高血氨动物模型两种动物模型 以 之气 饮食不节 过食肥甘 饮酒过度 药物毒性及 氨中毒死亡时相 血氨 脑组织氨水平 肝功生化以 其他有毒物质影响机体功能 酿湿生热 湿热毒邪 及肝脏组织病理学检查等相应的药效学指标为依 互相胶结 缠绵难愈 并能通过多种途径导致癖血 据 进一步证实受试药物丹参注射液对肝性脑病的 和气滞等病理产物的形成 产生癖血阻络及肝郁气 治疗及预防作用 并且初步地证明了其防治肝性脑 滞的 病 机 丹 参 为 唇 形 科 鼠 尾 草 属 植 物 丹 参 病的作用机制 降低血氨 脑组织氨和保护肝功能 S M B 的根 性微苦微寒 有活血 至于丹参注射液具体通过何种机制降低血氨 脑氨 化瘀 安神宁心 通利关脉等作用 从其功能来看 以及如何保护和增强肝功能 其确切机制还有待相 丹参活血化瘀的药理作用 主要与其对血液系统 关实验的进一步深入 心血管系统的作用有关 近年来 有关丹参对消化 系统的作用研究比较多 在临床上取得了比较满意 的 效 果 丹 参 在 保 肝 护 肝 方 面 的 应 用 也 较 为 多 见 丹参对肝损伤的保护和抗肝纤维化机制有 ①保护肝细胞 丹参可明显减轻肝细胞的炎性坏死 参 考 文 献 姚希贤 崔东来肝性脑病的发病机制 内科急危重症杂志 江文明肝性脑病的发病机制及治疗进展 求医问药
中国药师 年第 卷第 期 C P m V N GC法测定甘油止痒洗剂中苯酚和薄荷脑的含量 程丽萍 郇瑜 赵洪雨 初旭 禚旭晶 苑振亭 解放军第 医院 辽宁丹东 摘 要 目的建立 GC法测定甘油止痒洗剂中苯酚和薄荷脑的含量方法 方法色谱柱为 Z ZB W mm m μm毛细管柱色谱柱 FI D检测器 柱温为 保持 m 然后以 m 速率升温至 保温 m 检测器温度 载气为氮 气 结 果苯 酚 和 薄 荷 脑 的 线 性 范 围 分 别 是 m m 进样口温度 和 m m 苯酚和薄荷脑的平均回收率分别为 RS D 和 RS D 结论该方法简单 结果准确可靠 可用于止痒洗剂中苯酚和薄荷脑的含量测定 关键词 气相色谱法 苯酚 薄荷脑 止痒洗剂 甘油 中图分类号R 文献标识码A 文章编号 X D m P L M G Z L GC C L H Y Z H C X Z X Y Z N H PLA L D C ABSTRACT O T GCm m L m Z M AZ ZB WAX mm m μm mw w FI D T m m w m m m m m T m m w w R T L m w w m m m m T L m w RS D RS D C T m m m L m Z KEYWORDS GC P L m Z G 甘油止痒洗剂为 军队制剂规范 年版收 有关苯酚和薄荷脑的测定有很多研究 但未见 载的复方制剂 总制字 B 含有薄荷 甘油止痒洗剂中苯酚和薄荷脑的含量测定报道 为 苯酚 m 甘油 脑和液化苯酚 薄荷脑 此 本文采用 GC法同时测定了甘油止痒洗剂中苯 m 加 乙醇至 m 具有抗菌止痒的作用 酚和薄荷脑的含量 现介绍如下 临床上常用于治疗干燥性皮肤骚痒症 老年性皮肤 仪器与试药 瘙痒症 干性湿疹等 原标准 采用紫外分光光 度法测定苯酚的含量 而对薄荷脑不加以含量控制 仪器 气相色谱仪 岛津 FI D检测器 L 基金项目军队医疗机构制剂标准提高科研专项课题 编号 ZJ Z 通讯作者苑振亭 T E m m m 櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊 魏伟药 理 实 验 方 法 学 M 第 版北 京人 民 卫 生 出 版 社 C CJ C CC W TF D m w m m m JG H 刘思纯 张敏肝性脑病的发病机制及治疗对策概述 新医 学 李绍白肝脏病学 M 北京人民卫生出版社 周大桥 李航森 李之清 等实验性大鼠肝性脑病动物模型的研 究 中国实验动物学杂志 刘赫地黄 苏合香对大鼠早期肝性脑病的神经保护作用 D 北 京北京协和医学院博士学位论文 中医药大学硕士学位论文 沈映君中 药 药 理 学 M 北 京人 民 卫 生 出 版 社 黄建生复方丹参滴丸加黄芪对乙肝肝硬化肝纤维化指标的影响 湖南中医杂志 季灵游丹参对肝脏的药理作用研究概况 中国药师 陈文彬诊断学 M 北京人民卫生出版社 龙亚秋灵芝袍子粉对大鼠肝硬化的影响研究 D 广州南方医 科大学硕士学位论文 文芳 吴符 火 陈 兴 明丹 参 抗 肝 纤 维 化 作 用 机 制 的 研 究 进 展 中国民族民间医药 收稿 修回 黄丹青清肝解毒方抗肝损伤的临床和实验研究 D 济南山东