06 年 月第 3 卷第 期 中国中医药信息杂志 47 实验研究 香砂六君子汤对脾胃虚弱型萎缩性胃炎大鼠胃排空功能 及胃蛋白酶活性和缺氧诱导因子-α表达的影响 段云燕 成映霞 3 王强 李兰珍 王庆胜 郑世铎 鲁鹏程 雷作汉 刘雪松 刘臻华.甘肃中医药大学 甘肃 兰州 73000.甘肃省中医方药挖掘与创新转化重点实验室 甘肃 兰州 73000 3.甘肃省中医院 甘肃 兰州 73000 摘要 目的 观察香砂六君子汤对脾胃虚弱型萎缩性胃炎 CAG 大鼠胃排空功能 胃蛋白酶活性 胃 黏膜组织缺氧诱导因子-α HIF-α 基因和蛋白表达的影响 探讨该复方防治 CAG 的作用机制 方法 受试 大鼠按随机数字表法分为空白组和造模组 采用综合法复制脾胃虚弱型 CAG 动物模型 成模后将模型大鼠分 为模型组 阳性对照组和香砂六君子汤高 中 低剂量组 空白组和模型组大鼠每日给予 0 ml/kg 蒸馏水灌 胃 香砂六君子汤大 中 小剂量组每日分别给予 4 6 g/kg 香砂六君子汤药液灌胃 阳性对照组每日 给予 0.30 g/kg 维霉素药剂灌胃 连续给药 0 d 检测各组大鼠胃排空功能 胃蛋白酶活性 分别采用实时荧 光定量 PCR 和免疫组化法检测胃黏膜组织 HIF-α 基因及蛋白表达 结果 与空白组比较 模型组大鼠胃排空 功能 胃蛋白酶活性显著降低 P 0.0 HIF-α 基因和蛋白表达水平显著升高 P 0.0 与模型组比较 香砂六君子汤各组大鼠胃排空功能 胃蛋白酶活性升高 HIF-α 基因和蛋白表达水平降低 且以香砂六君子 汤高剂量组作用显著 P 0.05 结论 香砂六君子汤具有改善脾胃虚弱型 CAG 大鼠胃排空功能 促进胃蛋 白酶活性 下调缺氧环境中 HIF-α 基因和蛋白表达的作用 关键词 胃排空功能 胃蛋白酶 缺氧诱导因子-α 萎缩性胃炎 香砂六君子汤 大鼠 DOI 0.3969/j.issn.005-5304.06.0.0 中图分类号 R85.5 文献标识码 A 文章编号 005-5304(06)0-0047-05 Effects of Xiangsha Liujunzi Decoction on Gastric Emptying Function, Pepsin Activity and Expression of HIF-α in Chronic Atrophic Gastritis of Rats with Deficiency Spleen and Stomach DUAN Yun-yan,, CHENG Ying-xia,, WANG Qiang, LI Lan-zhen, WANG Qing-sheng, ZHENG Shi-duo, LU Peng-cheng, LEI Zuo-han3, LIU Xue-song, LIU Zhen-hua (. Gansu University of Chinese Medicine, Lanzhou 73000, China;. Key Laboratory of Traditional Chinese Herbs and Prescription Innovation and Transformation of Gansu Province, Lanzhou 73000, China; 3. Gansu Chinese Medicine Hospital, Lanzhou 73000, China) Abstract: Objective To study effects of Xiangsha Liujunzi Decoction (XSLJZ) on gastric emptying function, pepsin activity and expression of HIF-α gene and protein of gastric mucosa in chronic atrophic gastritis (CAG) of rats with deficiency of spleen and stomach. Methods Rats were randomly divided into normal group and model group. The models of CAG rats with deficiency of spleen and stomach type were induced by synthetic methods. After the modeling, models rats were divided into model group, positive control group and XSLJZ high-, medium-, and low-dose groups. Normal group and model group were given 0 ml/kg distilled water every day for gavage; XSLJZ high-, medium-, and low-dose groups were given 4,, and 6 g/kg XSLJZ Decoction for gavage; positive control 基金项目 国家自然科学基金 86059 甘肃省中医药管理局基金项目 GZK-04-73 甘肃省中医方药挖掘与创新转化重 点实验室开放基金项目 04-GZY-04 通讯作者 成映霞 E-mail cyxgs008@63.com
48 Chinese Journal of Information on TCM Jan.06 Vol.3 No. group was given 0.30 g/kg Vatacoenayme for gavage, for successive 0 d. Gastric emptying function and pepsin activity were detected, and HIF-α gene and protein expression in gastric mucosa were detected by RT-qPCR and IHC. Results Compared with the normal group, the gastric emptying function and pepsin activity in the model group were much lower (P<0.0); expressions of HIF-α gene and protein in gastric tissues was much higher (P<0.0). Compared with model group, XSLJZ could increase the gastric emptying function and pepsin activity significantly (P<0.05), and decrease expressions of HIF-α gene and protein (P<0.05). Conclusion XSLJZ has functions of improving the gastric emptying function, promoting pepsin activity, and reducing expressions of HIF-α gene and protein. Key words: gastric emptying function; pepsin; HIF-α; atrophic gastritis; Xiangsha Liujunzi Decoction; rats 慢 性 萎 缩 性 胃 炎 (chronic atrophic gastritis,cag) 作 为 消 化 系 统 常 见 病, 尤 其 在 CAG 伴 有 肠 上 皮 化 生 和 异 常 增 生 时, 易 引 起 继 发 性 胃 癌, 严 重 威 胁 生 命 质 量 就 其 临 床 病 症 特 点 而 言, 中 医 认 为 CAG 多 以 脾 胃 虚 弱 气 机 或 气 血 失 调 为 主 要 病 机, 故 治 疗 多 以 健 脾 益 气 理 气 和 胃 为 大 法 香 砂 六 君 子 汤 出 自 古 今 名 医 方 论 临 床 应 用 显 示, 香 砂 六 君 子 汤 及 其 加 减 方 治 疗 CAG 疗 效 显 著 [-] 本 研 究 通 过 观 察 香 砂 六 君 子 汤 对 脾 胃 虚 弱 型 CAG 大 鼠 胃 排 空 功 能 胃 蛋 白 酶 活 性 及 胃 窦 黏 膜 缺 氧 诱 导 因 子 -α(hif-α) 基 因 和 蛋 白 表 达 的 影 响, 探 讨 该 复 方 防 治 CAG 的 作 用 机 制 实 验 材 料. 动 物 月 龄 SPF 级 健 康 Wistar 大 鼠 54 只, 体 质 量 (60±0)g, 甘 肃 中 医 药 大 学 医 学 实 验 中 心, 动 物 合 格 证 号 SCXK( 甘 )0-000-00000 饲 养 于 甘 肃 中 医 药 大 学 SPF 级 实 验 室, 雌 雄 各 半, 分 笼 饲 养, 湿 度 45%~55%, 室 温 (3±), 喂 养 灭 菌 标 准 饲 料 和 消 毒 纯 净 水, 自 由 饮 水 进 食 本 实 验 动 物 处 理 相 关 程 序 遵 守 中 国 国 家 健 康 与 医 学 研 究 委 员 会 动 物 道 德 准 则, 并 得 到 甘 肃 中 医 药 大 学 动 物 实 验 伦 理 委 员 会 的 批 准. 药 物 香 砂 六 君 子 汤 以 人 参 白 术 茯 苓 陈 皮 姜 半 夏 炒 砂 仁 木 香 生 姜 甘 草 按 6 5 6 5 4 比 例 配 制 ( 饮 片 均 购 自 兰 州 复 兴 厚 中 药 材 有 限 责 任 公 司, 并 经 甘 肃 中 医 药 大 学 药 学 院 中 药 生 药 学 教 研 室 杨 扶 德 教 授 鉴 定 合 格 ), 第 次 加 0 倍 量 蒸 馏 水 浸 泡 h 后, 按 常 法 煎 煮 次, 每 次 40 min, 滤 出 药 液 加 热 浓 缩 至 每 ml 药 液 含 原 药 材 g, 冷 却 后 置 4 冰 箱 备 用, 使 用 时 稀 释 至 所 需 浓 度 ; 维 酶 素 片, 新 乡 恒 久 远 药 业 有 限 公 司,0. g/ 片, 批 号 04008.3 主 要 试 剂 与 仪 器 脱 氧 胆 酸 钠, 西 格 玛 奥 德 里 奇 ( 上 海 ) 贸 易 有 限 公 司, 批 号 SLBC043V; 吲 哚 美 辛, 上 海 信 谊 黄 河 制 药 有 限 公 司, 批 号 070; 氨 水, 白 银 良 友 化 学 试 剂 有 限 公 司, 批 号 00; 乙 醇, 天 津 市 富 宇 精 细 化 工 有 限 公 司, 批 号 00007; 考 马 斯 亮 蓝 蛋 白 测 定 试 剂 盒 ( 批 号 04083) 胃 蛋 白 酶 测 定 试 剂 盒 ( 批 号 0408), 南 京 建 成 生 物 科 技 有 限 公 司 ;β-actin HIF-α 引 物, 宝 生 物 工 程 ( 大 连 ) 有 限 公 司 ;Trizol 试 剂 ( 批 号 AK708-) 反 转 录 和 实 时 定 量 PCR 试 剂 盒 ( 批 号 000003680),Promega Corporation; 辣 根 酶 标 记 山 羊 抗 兔 IgG(H+L), 批 号 ZB-30, 北 京 中 杉 金 桥 生 物 科 技 有 限 公 司 ;Anti-HIF-α antibody ( 批 号 B330), 美 国 ImmunoWay 公 司 DF0 型 电 子 分 析 天 平, 江 苏 常 熟 衡 器 工 业 公 司 ;XYJ80- 离 心 机, 广 东 塘 厦 骏 越 机 电 设 备 厂 ;HH-4 数 显 恒 温 水 浴 箱, 江 苏 省 金 坛 市 友 联 仪 器 研 究 所 ;Benchmark Plus 酶 联 免 疫 检 测 仪 BIOMATE 3S 核 酸 蛋 白 测 定 仪 S000 TM 逆 转 录 仪 Chemi DOC XRS 凝 胶 成 像 分 析 系 统 CFX96 TM Optics Module PCR 仪, 美 国 BIO-RAD 公 司 ;BX5/BX5 型 Olympus 系 统 显 微 镜, 日 本 Olympus 公 司 实 验 方 法. 造 模 与 分 组 除 空 白 组 8 只 大 鼠 正 常 饲 养 不 予 造 模 外, 其 余 46 只 大 鼠 参 照 文 献 [3] 方 法 造 模 造 模 组 采 用 复 合 慢 性 损 伤 因 素 联 合 作 用 :60% 乙 醇, 每 3 d 空 腹 灌 胃 次 ( 前 d 晚 上 撤 除 饲 料 ), 每 次 8 ml/kg;0 mmol/l 脱 氧 胆 酸 钠 灌 胃, 每 日 次, 每 次 8 ml/kg;3 每 日 配 制 0.% 氨 水 作 为 大 鼠 日 常 饮 用 水 自 由 饮 用, 并 记 录 每 日 饮 用 量 ;40.05% 吲 哚 美 辛 灌 胃, 每 日 次, 每 次 8 ml/kg;5 采 用 饥 饱 失 常 喂 养 法 : d 足 量 喂 养, d 禁 食 连 续 造 模 40 周 待 综 合 法 造 模 30 周 时, 每 隔 周 随 机 抽 检 大 鼠, 取 胃 黏 膜 组 织 做 病 理 检 查 并 判 定 胃 黏 膜 萎 缩 病 理 变 化, 评 价 CAG 模 型 大 鼠 胃 黏 膜 萎 缩 病 理 形 成 后 开 始 治 疗 将 CAG 大 鼠 按 体 质 量 编 号, 采 用 随 机 数 字 表 法 分 为 模 型 组 阳 性 对 照 组 和
06 年 月 第 3 卷 第 期 中 国 中 医 药 信 息 杂 志 49 香 砂 六 君 子 汤 高 中 低 剂 量 组, 每 组 8 只. 给 药 香 砂 六 君 子 汤 高 中 低 剂 量 组 每 日 分 别 给 予 4 6 g/kg 香 砂 六 君 子 汤 药 剂 灌 胃 ( 相 当 于 60 kg 成 人 剂 量 的 6 3 倍 ); 对 照 组 每 日 给 予 0.30 g/kg 维 酶 素 药 剂 灌 胃 ( 相 当 于 60 kg 成 人 剂 量 的 6 倍 ), 等 效 剂 量 按 人 与 动 物 系 数 折 算 [4] 连 续 给 药 0 d 每 日 给 药 体 积 为 0 ml/kg 空 白 组 和 模 型 组 给 予 等 量 蒸 馏 水 灌 胃.3 标 本 采 集 与 检 测 胃 排 空 率 实 验 参 照 文 献 [5] 方 法, 于 末 次 给 药 后 禁 食 不 禁 水 4 h 后, 分 别 随 机 抽 取 各 组 大 鼠 8 只, 给 予 半 固 体 营 养 糊 ml,30 min 后 用 乌 拉 坦 g/kg 麻 醉 采 血 后, 迅 速 打 开 腹 腔, 结 扎 幽 门 和 贲 门 后 取 出 胃, 清 除 胃 表 面 的 血 渍, 第 次 称 重 ( 胃 总 重 ), 后 剪 开 胃 体, 洗 去 胃 内 容 物, 用 滤 纸 吸 干 水 分 第 次 称 重 ( 胃 净 重 ), 计 算 胃 排 空 率 [-( 胃 总 重 - 胃 净 重 ) 所 给 糊 重 00%] 胃 黏 膜 组 织 匀 浆 制 备 : 麻 醉 处 死 后 低 温 条 件 下 快 速 剖 取 胃 黏 膜 组 织, 以 冰 冷 生 理 盐 水 冲 洗, 滤 纸 吸 干, 称 重 后 用 眼 科 小 剪 刀 尽 快 剪 碎, 置 于 匀 浆 器 中, 用 组 织 重 9 倍 生 理 盐 水 匀 浆,3500 r/min 离 心 0 min, 取 上 清 液, 置 4 冰 箱 保 存, 待 测 胃 组 织 蛋 白 酶 活 性.4 胃 黏 膜 组 织 缺 氧 诱 导 因 子 -α 基 因 表 达 检 测 取 适 量 胃 窦 组 织, 用 Trizol 法 抽 提 总 RNA: 将 保 存 于 -80 冷 冻 冰 箱 中 各 组 大 鼠 胃 窦 组 织 称 取 50 mg 组 织 块 置 于 研 钵 中, 加 入 ml Trizol, 研 磨 均 匀, 于 冰 上 孵 育 5 min 后,4 000 g 离 心 5 min; 移 入 离 心 管 中, 冰 上 孵 育 5 min 后 加 0. ml 氯 仿, 震 荡 后 4 000 g 离 心 5 min, 取 上 清 液 移 至 新 离 心 管, 加 0.5 ml 异 丙 醇, 震 荡, 冰 上 孵 育 0 min 后,4 000 g 离 心 0 min, 弃 上 清 液,RNA 沉 于 管 底 向 沉 淀 中 加 入 ml 75% 乙 醇, 震 荡 后 4 8000 g 离 心 0 min, 弃 上 清 液 后 室 温 下 干 燥, 加 入 50 μl DEPC 处 理 水 溶 解 RNA 核 酸 定 量 分 析 仪 测 定 其 OD 60 /OD 80 均 在.8~.0 之 间, 经 总 RNA 琼 脂 糖 凝 胶 电 泳 检 测 符 合 纯 度 要 求, 可 用 于 后 续 PCR 反 转 录 合 成 模 板 cdna: 在 0.5 ml 去 酶 管 中 加 入 总 RNA 5 μg 5 Oligo dt μl Random Primer μl, 加 Nuclease-Free Water 至 0 μl;70 变 性 5 min, 然 后 冰 上 放 置 5 min 以 上 ; 加 入 反 转 录 GoScript TM 5 Reaction Buffer 4 μl,mgcl (5 mmol/l) μl,pcr Nucleotide Mix(0 mmol/l) μl,recombinant Rnasin Ribonuclease inhibitor 0.5 μl, GoScript TM Reverse Transcriptase μl,nuclease-free Water 至 0 μl, 总 体 积 为 0 μl 混 匀 配 制 的 反 应 混 合 物, 短 暂 离 心 后 在 5 温 浴 5 min,4 反 应 60 min, 再 70 5 min 灭 活 处 理, 所 得 单 链 cdna 放 置 于 -0 备 用 从 NCBI 中 查 询 目 标 基 因 ID 及 序 列, 由 TAKARA 公 司 宝 生 物 工 程 ( 大 连 ) 有 限 公 司 设 计 和 合 成 目 标 基 因 引 物 HIF-α 引 物 序 列 为 : 上 游 5'-CCAGATTCA AGATCAGCCAGCA-3', 下 游 5'-GCT GTCCACATC AAAGCAGTACTCA-3', 扩 增 片 段 长 度 为 00 bp; β-actin 引 物 序 列 为 : 上 游 5'-GGAGATTACTGCCCT GGCTCCTA-3', 下 游 5'-GACTCATCG TACTCCTGC TTGCTG-3', 扩 增 片 段 长 度 为 50 bp 实 时 荧 光 定 量 PCR 以 β-actin 作 为 内 参 基 因, 相 同 模 板 相 同 基 因 设 3 复 孔 6 次 平 行 实 验, 得 到 各 扩 增 反 应 的 Ct 值 反 应 体 系 据 GoTaq -Step RT-qPCR 试 剂 盒 说 明 书 配 制 反 应 参 数 : 预 变 性 95 min, 变 性 95 5 s, 退 火 60 60 s, 循 环 40 次, 终 末 延 伸 65 5 s 连 续 检 测 荧 光 并 记 录 扩 增 曲 线, 采 用 样 点 拟 合 法 分 析 结 果 得 到 目 的 基 因 和 β-actin 的 Ct 值 测 Ct 值 并 分 析 融 解 曲 线, 以 β-actin 为 内 参, 用 比 较 Ct 值 法 计 算 相 对 表 达 量 :ΔΔCt=( 测 试 组 目 的 基 因 Ct 值 - 测 试 组 内 参 基 因 Ct 值 )-( 对 照 组 目 的 基 因 Ct 值 - 对 照 组 内 参 基 因 Ct 值 ), 相 对 表 达 量 用 -ΔΔCt 表 示.5 胃 黏 膜 组 织 缺 氧 诱 导 因 子 -α 蛋 白 表 达 检 测 胃 窦 组 织 块 浸 于 4% 多 聚 甲 醛 中 固 定 后, 常 规 梯 度 乙 醇 脱 水, 二 甲 苯 透 明, 石 蜡 包 埋, 做 连 续 切 片, 片 厚 4 μm 取 各 大 鼠 等 部 位 切 片 3 张, 经 二 甲 苯 二 级 脱 蜡 各 5 min, 梯 度 酒 精 脱 水, 高 压 热 修 复 后 滴 加 00 比 例 稀 释 的 兔 抗 大 鼠 HIF-α 一 抗 4 过 夜, 次 晨 取 出 置 常 温,PBS 冲 洗 后, 滴 加 二 抗,37 孵 育 l h,dab 显 色, 水 冲 洗 后 苏 木 素 复 染 脱 水 透 明 中 性 树 胶 封 片 光 镜 下 观 察 细 胞 核 呈 蓝 色, 阳 性 细 胞 肿 胀, 胞 浆 黄 染 ; 空 白 组 采 用 0.0 mol/l PBS 代 替 一 抗 同 时 进 行 免 疫 组 化 染 色, 应 用 BI-000 多 媒 体 彩 色 病 理 图 像 分 析 系 统 对 免 疫 组 化 切 片 进 行 图 像 分 析, 每 个 部 位 取 6 个 视 野, 分 别 测 量 同 一 视 野 中 反 映 免 疫 反 应 物 阳 性 强 度 的 平 均 光 密 度 分 布 密 度 数 值, 并 以 平 均 数 进 行 统 计 学 分 析 3 统 计 学 方 法 采 用 SPSS3.0 统 计 软 件 进 行 分 析 实 验 数 据 以 x±s 表 示, 组 间 样 本 均 数 比 较 采 用 F 检 验, 在 F 检 验 有 统 计 学 意 义 时, 再 用 q 检 验 进 行 两 两 比 较 P<0.05 表 示 差 异 有 统 计 学 意 义
50 Chinese Journal of Information on TCM Jan.06 Vol.3 No. 4 结 果 4. 各 组 大 鼠 一 般 生 存 情 况 空 白 组 大 鼠 始 终 表 现 为 反 应 灵 敏, 活 动 及 摄 食 量 正 常, 被 毛 浓 密 柔 顺 而 有 光 泽, 粪 便 呈 棕 褐 色 颗 粒 状 CAG 模 型 50% 大 鼠 第 6 周 即 开 始 出 现 倦 卧 被 毛 稀 疏 干 枯 摄 食 量 减 少 ; 第 8 周 后 出 现 少 食 怠 动 消 瘦, 对 外 界 反 应 迟 钝 的 病 理 表 现, 随 着 造 模 时 间 延 长, 大 鼠 生 存 能 力 明 显 下 降, 表 现 为 怠 动 少 食 消 瘦 弓 背 毛 发 枯 槁 疏 散,75% 大 鼠 摄 食 量 明 显 减 少, 容 易 出 现 眯 眼 蜷 缩 反 应 迟 钝, 平 均 每 日 体 质 量 增 加 量 和 摄 食 量 明 显 下 降 经 药 物 干 预 后, 香 砂 六 君 子 汤 各 剂 量 组 和 阳 性 对 照 组 大 鼠 治 疗 第 0 周 开 始 上 述 症 状 逐 渐 减 轻 或 消 失, 表 现 为 反 应 较 为 灵 敏, 被 毛 疏 散 但 有 光 泽, 活 动 及 饮 食 量 正 常, 平 均 每 日 体 质 量 增 加 量 和 摄 食 量 恢 复 接 近 正 常, 尤 其 以 香 砂 六 君 子 汤 高 剂 量 组 大 鼠 一 般 生 存 情 况 恢 复 正 常 明 显 4. 香 砂 六 君 子 汤 对 大 鼠 胃 排 空 率 和 胃 蛋 白 酶 活 性 的 影 响 与 空 白 组 比 较, 模 型 组 大 鼠 胃 排 空 率 和 胃 蛋 白 酶 活 性 显 著 降 低 (P<0.0); 与 模 型 组 比 较, 香 砂 六 君 子 汤 高 中 低 剂 量 组 和 阳 性 对 照 组 均 能 升 高 大 鼠 胃 排 空 率 和 胃 蛋 白 酶 活 性, 且 以 香 砂 六 君 子 汤 高 剂 量 组 和 阳 性 对 照 组 作 用 显 著 (P<0.05) 结 果 见 表 表 各 组 大 鼠 胃 排 空 率 和 胃 蛋 白 酶 活 性 比 较 ( x±s) 组 别 只 数 胃 排 空 率 /% 胃 蛋 白 酶 /(U/mL) 空 白 组 8 45.7±4.7 0.7±4.9 模 型 组 8 36.3±6.03 ** 00.±0.89 ** 香 砂 六 君 子 汤 高 剂 量 组 8 4.39±5.0.8±4.64 香 砂 六 君 子 汤 中 剂 量 组 8 39.63±7.30 03.9±.85 香 砂 六 君 子 汤 低 剂 量 组 8 39.07±5.3 06.36±.65 阳 性 对 照 组 8 43.5±5.06 4.97±3.53 注 : 与 空 白 组 比 较,**P <0.0; 与 模 型 组 比 较, P<0.05 4.3 香 砂 六 君 子 汤 对 大 鼠 胃 黏 膜 组 织 缺 氧 诱 导 因 子 -α 基 因 表 达 的 影 响 与 空 白 组 比 较, 模 型 组 大 鼠 胃 黏 膜 组 织 HIF-α 基 因 表 达 水 平 显 著 升 高 (P<0.0); 与 模 型 组 比 较, 香 砂 六 君 子 汤 高 中 低 剂 量 组 和 阳 性 对 照 组 均 能 降 低 大 鼠 胃 黏 膜 组 织 HIF-α 基 因 表 达 水 平, 且 以 香 砂 六 君 子 汤 高 剂 量 组 和 阳 性 对 照 组 作 用 显 著 (P< 0.0) 结 果 见 表 4.4 香 砂 六 君 子 汤 对 大 鼠 胃 黏 膜 组 织 缺 氧 诱 导 因 子 -α 蛋 白 表 达 的 影 响 通 过 阳 性 免 疫 产 物 表 达 数 据 分 析, 平 均 光 密 度 和 分 布 密 度 与 HIF-α 蛋 白 的 阳 性 表 达 成 正 比 与 空 白 组 比 较, 模 型 组 大 鼠 胃 黏 膜 组 织 阳 性 免 疫 产 物 平 均 光 密 度 和 分 布 密 度 计 数 水 平 显 著 升 高 (P<0.0), 提 示 HIF-α 蛋 白 表 达 水 平 升 高 ; 与 模 型 组 比 较, 香 砂 六 君 子 汤 高 中 低 剂 量 组 可 降 低 胃 黏 膜 组 织 阳 性 免 疫 产 物 平 均 光 密 度 和 分 布 密 度 计 数 水 平, 且 以 香 砂 六 君 子 汤 高 剂 量 组 和 阳 性 对 照 组 作 用 显 著 (P<0.05), 提 示 HIF-α 蛋 白 表 达 水 平 降 低 结 果 见 表 3 表 各 组 大 鼠 胃 黏 膜 组 织 HIF-α 基 因 表 达 比 较 ( x±s) 组 别 n HIF-α mrna 空 白 组 6.00 模 型 组 6.376±0.5 ** 香 砂 六 君 子 汤 高 剂 量 组 6.6±0.34 香 砂 六 君 子 汤 中 剂 量 组 6.34±0.67 香 砂 六 君 子 汤 低 剂 量 组 6.35±0.78 阳 性 对 照 组 6.86±0.078 注 : 与 空 白 组 比 较,**P <0.0; 与 模 型 组 比 较, P<0.0 表 3 各 组 大 鼠 胃 黏 膜 组 织 HIF-α 蛋 白 表 达 比 较 ( x±s) 组 别 n 平 均 光 密 度 分 布 密 度 空 白 组 6 0.356 7±0.0 5 0.040 7±0.007 4 模 型 组 6 0.565 0±0.37 9 ** 0.06 0±0.004 5 ** 香 砂 六 君 子 汤 高 剂 量 组 6 0.400 0±0.0 5 0.04 3±0.007 3 香 砂 六 君 子 汤 中 剂 量 组 6 0.430 0±0.4 4 0.050 ±0.009 5 香 砂 六 君 子 汤 低 剂 量 组 6 0.503 3±0.37 9 0.057 0±0.007 阳 性 对 照 组 6 0.40 0±0.066 3 0.049 0±0.009 4 注 : 与 空 白 组 比 较,**P <0.0; 与 模 型 组 比 较, P<0.05 5 讨 论 根 据 CAG 的 脘 腹 胀 痛 嗳 气 纳 呆 运 化 迟 滞 大 便 或 溏 或 结 面 色 萎 黄 形 体 逐 渐 消 瘦 等 临 床 表 现, 可 将 其 归 属 于 中 医 学 痞 满 胃 痞 等 范 畴,CAG 主 要 病 机 在 于 脾 胃 虚 弱 ( 或 脾 胃 虚 寒 ), 中 焦 气 机 窒 塞, 此 如 素 问 至 真 要 大 论 篇 : 心 胃 生 寒, 胸 膈 不 利, 心 痛 否 满 ; 另 如 兰 室 秘 藏 中 满 腹 胀 论 谓 脾 胃 久 虚 之 人, 胃 中 寒 则 生 胀 满, 或 脏 寒 生 满 病, 故 中 医 临 床 治 疗 的 基 本 法 则 亦 多 以 健 脾 理 气 和 胃 ( 如 香 砂 六 君 子 汤 ) 为 主 且 疗 效 显 著 [6-8] 香 砂 六 君 子 汤 出 自 古 今 名 医 方 论, 主 治 因 脾 胃 虚 弱, 气 机 阻 滞, 痰 浊 湿 毒 内 生 而 生 痞 满 之 效 方, 亦 是 体 现 健 脾 理 气 和 胃 治 则 治 法 的 经 典 方 剂 方 中 人 参 补 中 益 气, 健 脾 养 胃 ; 白 术 健 脾 燥 湿 ; 茯 苓 健 脾 渗 湿 ; 白 术 茯 苓 合 用, 能 增 强 健 脾 除 湿 功 能, 促 进 脾 胃 运 化 ; 木 香 砂 仁 芳 香 健 脾 和 胃, 理 气 消 痞 而 止 痛 ; 陈 皮 姜 半 夏 燥 湿 化 痰, 理 气 降 逆 ; 甘 草 调 胃 和 中, 具 有 补 脾 和 胃 缓 急 止 痛 调 和 诸 药 作 用 本 方 是 中 医 临 床 治 疗 CAG 的 有 效 方 剂
06 年 月 第 3 卷 第 期 中 国 中 医 药 信 息 杂 志 5 中 医 认 为, 脾 ( 胃 ) 主 司 运 化 水 谷, 主 要 涉 及 机 体 消 化 吸 收 功 能 从 现 代 医 学 病 理 生 理 学 的 角 度 分 析, 正 常 胃 黏 膜 具 有 分 泌 胃 酸 和 胃 蛋 白 酶 的 功 能 以 促 进 摄 入 物 质 的 初 步 消 化 和 排 空, 而 CAG 患 者 常 因 胃 黏 膜 慢 性 炎 性 反 应, 组 织 充 血 水 肿 而 胃 动 力 障 碍, 或 因 壁 细 胞 数 量 逐 渐 减 少, 胃 黏 膜 腺 体 发 生 不 同 程 度 萎 缩, 常 伴 有 分 泌 功 能 降 低 [9], 临 床 则 出 现 纳 呆 少 食 运 化 迟 滞 嗳 气 胃 胀 等 消 化 功 能 障 碍 的 典 型 症 状 胃 蛋 白 酶 是 由 胃 黏 膜 主 细 胞 所 分 泌 并 存 在 于 胃 液 中 的 一 种 消 化 性 蛋 白 酶, 具 有 促 进 机 体 消 化 食 物 的 功 能 研 究 表 明,CAG 患 者 因 胃 腺 体 细 胞 发 生 不 同 程 度 的 萎 缩, 其 胃 液 分 泌 量 和 胃 蛋 白 酶 减 少, 同 时 因 胃 液 ph 值 改 变, 胃 蛋 白 酶 的 活 性 亦 减 弱, 进 而 导 致 胃 体 化 学 消 化 功 能 降 低, 从 而 出 现 纳 呆 少 食 运 化 迟 滞 及 胃 脘 胀 满 之 证 [0] 同 时 从 病 理 学 角 度 分 析,CAG 病 程 中 主 要 存 在 胃 黏 膜 慢 性 炎 性 反 应 及 不 典 型 增 生 等 变 化, 而 且 HIF-α 与 慢 性 炎 性 反 应 的 关 系 密 切 HIF-α 是 广 泛 存 在 于 机 体 细 胞 中 的 一 种 转 录 调 节 因 子 [], 该 基 因 由 低 氧 诱 导 并 介 导 细 胞 对 缺 氧 微 环 境 进 行 适 性 反 应, 缺 氧 时 HIF-α 表 达 显 著 上 调 [], 由 此 启 动 60 余 种 下 游 因 子 的 转 录 以 使 细 胞 逐 渐 适 应 有 氧 到 缺 氧 的 转 变, 而 且 HIF-α 与 炎 症 反 应 关 系 密 切, 多 种 致 炎 细 胞 因 子 如 白 细 胞 介 素 -β 肿 瘤 坏 死 因 子 -α 前 列 腺 素 E 及 脂 多 糖 均 能 激 活 HIF-α 的 转 录 活 性 [3], 参 与 创 伤 修 复 重 塑 及 炎 症 等 过 程 本 研 究 结 果 显 示, 与 空 白 组 比 较, 模 型 组 大 鼠 一 般 生 存 情 况 较 差, 胃 排 空 功 能 胃 蛋 白 酶 活 性 显 著 降 低, 而 HIF-α 基 因 和 蛋 白 表 达 水 平 显 著 升 高, 说 明 大 鼠 CAG 病 程 中 存 在 胃 排 空 功 能 紊 乱, 胃 蛋 白 酶 活 性 下 降, 而 且 因 胃 黏 膜 组 织 萎 缩 炎 性 病 变 表 现 为 缺 氧 条 件 下 黏 膜 组 织 中 HIF-α 基 因 和 蛋 白 高 表 达 ; 经 药 物 治 疗 后 并 与 模 型 组 比 较, 香 砂 六 君 子 汤 组 大 鼠 胃 排 空 功 能 胃 蛋 白 酶 活 性 显 著 升 高,HIF-α 基 因 和 蛋 白 表 达 下 调, 且 以 香 砂 六 君 子 汤 高 剂 量 作 用 显 著, 提 示 香 砂 六 君 子 汤 通 过 调 节 胃 排 空 功 能, 促 进 胃 蛋 白 酶 活 性 下 调 缺 氧 环 境 中 胃 黏 膜 组 织 HIF-α 基 因 和 蛋 白 表 达 的 途 径 以 防 治 脾 胃 虚 弱 型 CAG 参 考 文 献 : [] 高 艳. 加 味 香 砂 六 君 子 汤 治 疗 幽 门 螺 杆 菌 相 关 性 胃 炎 的 临 床 观 察 [J]. 时 珍 国 医 国 药,0,(5):83-84. [] 白 冬 梅. 香 砂 六 君 颗 粒 对 慢 性 胃 炎 伴 肠 化 生 和 不 典 型 增 生 的 疗 效 观 察 [J]. 实 用 中 医 内 科 杂 志,0,5():49-50. [3] 姒 健 敏, 吴 加 国, 曹 倩, 等. 鼠 慢 性 萎 缩 性 胃 炎 模 型 的 建 立 及 致 萎 缩 因 素 探 讨 [J]. 中 华 消 化 杂 志,00,():75-77. [4] 陈 奇. 中 药 药 理 研 究 方 法 学 [M]. 北 京 : 人 民 卫 生 出 版 社,993:33-34. [5] 王 松 坡, 张 存 钧, 窦 丹 波. 消 痞 方 对 功 能 性 消 化 不 良 大 鼠 胃 排 空 血 浆 胃 动 素 的 影 响 [J]. 中 国 中 医 药 信 息 杂 志,004,(0):060-06. [6] 姚 梅 兰. 香 砂 六 君 子 汤 加 味 治 疗 慢 性 萎 缩 性 胃 炎 68 例 [J]. 江 苏 中 医 药,0,44(7):37-38. [7] 李 冀, 李 浦 媛, 刘 波. 香 砂 六 君 子 汤 的 实 验 研 究 进 展 [J]. 中 医 药 信 息, 008,5():33-34. [8] 李 维 柏. 香 砂 六 君 子 汤 加 减 治 疗 慢 性 萎 缩 性 胃 炎 临 床 观 察 [J]. 四 川 中 医,009,7(8):88. [9] 陈 佳, 李 守 英, 徐 红. 慢 性 萎 缩 性 胃 炎 的 研 究 进 展 [J]. 中 国 老 年 学 杂 志,03,33(4):3540-354. [0] 毕 珺 辉, 杨 天 仁. 香 砂 六 君 子 汤 及 其 拆 方 对 脾 虚 胃 溃 疡 模 型 大 鼠 胃 蛋 白 酶 SOD MDA 水 平 的 影 响 [J]. 南 京 中 医 药 大 学 学 报,00,6(4):80-8. [] CHAN D A, SUTPHIN P D, DENKO N C, et al. Role of poly hydroxylation in oncogenically stabilized hypoxia-inducible factor-α[j]. Biol Chem,00,77(4):40-407. [] CRAMER T, YAMANISHI Y, CLAUSEN B E, et al. HIF-alpha is essential for myeloid cell-mediated inflammation[j]. Cell,003, (5):645-657. [3] HADDAD J J, HARB H L. Cytokines and the regulation of hypoxia inducible factor (HIF)-alpha[J]. Int Immunopharmacol,005,5(3): 46-483. ( 收 稿 日 期 :05-07-07; 编 辑 : 华 强 )