第 6 卷 第 期 中 国 现 代 医 学 杂 志 Vol. 6 No. 6 年 月 China Journal of Modern Medicine Jan. 6 文 章 编 号 : 5-898(6)-5-6 论 著 白 藜 芦 醇 抑 制 Sonic hedgehog 信 号 并 减 轻 大 鼠 肺 纤 维 化 的 研 究 李 利 华, 卢 滨, 吴 红 科, 张 浩, 姚 菲 菲 ( 郑 州 人 民 医 院 呼 吸 科, 河 南 郑 州 5) 摘 要 : 目 的 研 究 白 藜 芦 醇 对 博 莱 霉 素 诱 导 大 鼠 肺 纤 维 化 的 影 响 方 法 完 全 随 机 分 组 法 将 只 SD 雄 性 大 鼠 分 为 组 : 5μmol 白 和 大 鼠 气 管 内 滴 注 博 莱 霉 素,5 和 大 鼠 气 管 内 滴 注 博 莱 霉 素 后 分 别 用 5 和 藜 芦 醇 灌 胃, 大 鼠 气 管 内 滴 注 生 理 盐 水 处 理 d 后, 观 察 各 处 理 组 大 鼠 肺 组 织 病 理 变 化 并 检 测 大 鼠 肺 组 织 羟 脯 氨 酸 (HYP) 和 Ⅰ 型 胶 原 蛋 白 含 量 分 离 各 组 大 鼠 肺 成 纤 维 细 胞, 并 利 用 实 时 荧 光 定 量 聚 合 酶 链 反 应 (qrt-pcr) 和 Western blot 检 测 细 胞 中 SHH(Sonic hedgehog,shh) Smo Gli- mrna 和 蛋 白 的 表 达, 同 时 检 测 细 胞 增 殖 和 凋 亡 结 果 大 鼠 肺 泡 结 构 严 重 破 坏 并 伴 有 胶 原 纤 维 沉 淀, 白 藜 芦 醇 处 理 可 减 轻 纤 维 化 病 变 白 藜 芦 醇 可 降 低 肺 组 织 中 博 莱 霉 素 诱 导 的 HYP 和 Ⅰ 型 胶 原 蛋 白 含 量 博 莱 霉 素 能 显 著 上 调 成 纤 维 细 胞 中 SHH Smo Gli- mrna 和 蛋 白 的 表 达, 而 白 藜 芦 醇 则 可 抑 制 SHH Smo 和 Gli- 的 表 达 博 莱 霉 素 促 进 成 纤 维 细 胞 增 殖 并 减 少 凋 亡, 白 藜 芦 醇 抑 制 细 胞 增 殖 并 促 进 细 胞 凋 亡 结 论 轻 大 鼠 肺 纤 维 化 关 键 词 : 白 藜 芦 醇 ;sonic hedgehog 信 号 ; 肺 纤 维 化 ; 博 莱 霉 素 ; 成 纤 维 细 胞 中 图 分 类 号 :R56.9;R 文 献 标 识 码 :A 白 藜 芦 醇 可 抑 制 博 莱 霉 素 诱 导 的 SHH 信 号 活 化 并 减 Resveratrol inactivates sonic hedgehog signaling and alleviates lung fibrosis in rats Li-hua Li, Bin Lu, Hong-ke Wu, Hao Zhang, Fei-fei Yao (Department of Respiratory Diseases, People's Hospital of Zhengzhou, Zhengzhou, Henan 5, China) Abstract: Objective To investigate the effect of resveratrol on lung fibrosis in rats. Methods Forty SD male rats were randomly allocated to four groups: control, model, 5- 滋 mol resveratrol and 5- 滋 mol resveratrol groups. Rats in the model group were intratracheally administrated with Bleomycin. Rats in the 5- 滋 mol resveratrol and 5- 滋 mol resveratrol groups were administrated with Bleomycin before intragastric administration of resveratrol. Rats in the control group were administrated with normal saline. After d pathological changes of the lungs in each group were observed and the levels of hydroxyproline (HYP) and type 玉 collagen were determined. Lung fibroblasts in the rats of each group were isolated and the expression of SHH, Smo and Gli- were analyzed by qrt-pcr and Western blot, along with the evaluation of proliferation and apoptosis in these cells. Results The pulmonary alveoli structures of model rats were damaged seriously with the deposition of collagen, while resveratrol attenuated the progression of lung fibrosis. Resveratrol reduced HYP content and type 玉 collagen expression induced by Bleomycin in the lung tissue. Moreover, Bleomycin significantly upregulated the expressions of Sonic hedgehog (SHH), Smo and Gli- mrnas and proteins, which were inhibited by resveratrol. In addition, Bleomycin enhanced the proliferation and reduced apoptosis of fibroblasts, while resveratrol inhibited fibroblst proliferation and promoted apoptosis. Conclusions Resveratrol 收 稿 日 期 :5-- 5
中 国 现 代 医 学 杂 志 第 6 卷 might impede Bleomycin-induced SHH signaling and contribute to the alleviation of lung fibrosis in rats. Keywords: resveratrol; sonic hedgehog; lung fibrosis; Bleomycin; fibroblast 肺 间 质 纤 维 化 是 一 种 多 诱 因 的 慢 性 肺 疾 病 [] 肺 间 质 纤 维 化 病 变 过 程 中, 肺 泡 上 皮 细 胞 和 内 皮 细 胞 损 伤, 肺 泡 基 底 膜 破 坏, 细 胞 外 基 质 沉 积 并 成 纤 维 细 胞 聚 集 和 增 殖 [] 白 藜 芦 醇 是 非 黄 酮 类 多 酚 化 合 物, 广 泛 存 在 于 葡 萄 虎 杖 花 生 桑 葚 等 植 物 中, 有 抗 氧 化 消 炎 抗 肿 瘤 调 节 激 素 等 作 用 [] 近 年 来, 多 个 实 验 证 明 白 藜 芦 醇 可 对 实 验 动 物 肺 纤 维 化 疾 病 进 展 产 生 影 响 [-6], 但 具 体 作 用 机 制 还 不 清 楚 因 此, 本 研 究 着 眼 于 白 藜 芦 醇 对 博 莱 霉 素 诱 导 的 大 鼠 肺 纤 维 化 的 影 响, 分 析 白 藜 芦 醇 的 作 用 机 制, 为 肺 纤 维 化 的 治 疗 提 供 实 验 依 据 材 料 与 方 法. 实 验 动 物 与 主 要 试 剂 只 周 龄 雄 性 SD 大 鼠 购 自 上 海 斯 莱 克 实 验 动 物 公 司, 将 实 验 动 物 饲 养 于 h 昼 / 夜 循 环 照 明 恒 温 恒 湿 的 清 洁 级 环 境 中, 自 由 饮 食, 饲 养 周 后 备 用 白 藜 芦 醇 戊 巴 比 妥 钠 聚 偏 二 氟 乙 烯 (polyvinylidene fluoride,pvdf) 膜 购 自 美 国 Sigma 公 司, 博 莱 霉 素 购 自 美 国 Invitrogen 公 司, 羟 脯 氨 酸 (Hydroxyproline,HYP) 检 测 试 剂 盒 购 自 南 京 建 成 生 物,Trizol 试 剂 和 Dy NAmo SYBR Green 荧 光 定 量 聚 合 酶 链 反 应 (quantitative polymerase chain reaction,qpcr) 试 剂 盒 购 自 大 连 宝 生 生 物 有 限 公 司, 抗 Ⅰ 型 胶 原 蛋 白 抗 体 抗 SHH(sonic hedgehog,shh) 抗 体 抗 Smo 抗 体 抗 Gli- 抗 体 购 自 美 国 Santa Cruz Biotech 公 司, 辣 根 过 氧 化 物 酶 标 记 的 兔 抗 鼠 二 抗 购 自 英 国 Abcam 公 司,Annexin V-FITC/PI 凋 亡 检 测 试 剂 盒 购 自 北 京 索 莱 宝 公 司, 噻 唑 蓝 [-(,5- dimethyl- -thiazolyl)-,5-diphenyl--h-tetrazolium bromide,mtt] 试 剂 盒 购 自 北 京 百 浩 生 物 公 司, 其 余 常 见 试 剂 为 国 产. 动 物 分 组 处 理 利 用 随 机 数 字 法 将 只 5 周 龄 雄 性 SD 大 鼠 随 机 分 为 组 : 5μmol 白 藜 芦 醇 组 和, 每 组 只 大 鼠 气 管 内 注 射 mg/kg 博 莱 霉 素 建 立 肺 纤 维 化 模 型, 5 和 大 鼠 气 管 注 射 博 莱 霉 素 后 第 天 分 别 用 5 和 藜 芦 醇 灌 胃, 处 理 d 和 利 用 生 理 盐 水 灌 胃 大 6 鼠 于 博 莱 霉 素 滴 注 后 死 亡 只, 和 5μmol 白 灌 胃 第 6 天 分 别 死 亡 只 大 鼠,5μmol 白 分 别 于 博 莱 霉 素 滴 注 后 及 白 藜 芦 醇 灌 胃 第 天 死 亡 只 大 鼠 处 理 结 束 后, 利 用 戊 巴 比 妥 钠 深 度 麻 醉 处 死 大 鼠, 分 离 大 鼠 肺 成 纤 维 细 胞 备 用 检 测 各 组 大 鼠 肺 组 织 HYP 和 Ⅰ 型 胶 原 蛋 白 表 达, 制 作 病 理 切 片, 观 察 肺 纤 维 化 病 变. 肺 成 纤 维 细 胞 分 离 和 培 养 大 鼠 肺 成 纤 维 细 胞 的 分 离 参 考 朱 天 琦 等 [7] 的 方 法 将 分 离 得 到 的 成 纤 维 细 胞 置 于 7 5% 二 氧 化 碳 CO 培 养 箱, 用 含 5% 胎 牛 血 清 (fetal bovine serum, FBS) 的 H-DMEM 培 养 液 培 养, 隔 天 换 液 次 细 胞 生 长 接 近 融 合 时, 弃 培 养 液,D-Hanks 液 轻 洗 次, 加 入.5% 胰 酶 消 化 min, 用 含 5%FBS 的 H-DMEM 培 养 液 终 止 消 化, 吸 管 轻 轻 吹 打 细 胞, 收 集 细 胞 悬 液, r/min 离 心 min, 弃 上 清 液, 用 5% FBS 的 H-DMEM 培 养 液, 按 接 种 传 代 培 养 利 用 免 疫 细 胞 化 学 方 法 检 测 细 胞 中 波 形 蛋 白 和 CD 的 表 达, 对 原 代 肺 成 纤 维 细 胞 进 行 鉴 定. MTT 检 测 细 胞 增 殖 分 离 肺 成 纤 维 细 胞, 将 来 源 于 5 和 大 鼠 的 肺 成 纤 维 细 胞, 按 个 / 孔 接 种 于 96 孔 培 养 板 每 孔 细 胞 加 入 含 5%FBS 的 H-DMEM 培 养 液 进 行 培 养 细 胞 培 养 8 7 和 96 h 后 分 别 进 行 MTT 实 验 检 测 按 实 验 分 组, 每 孔 加 入 μl MTT(5 mg/ml) 后 培 养 h 去 上 清 液, 每 孔 加 入 5μl 二 甲 基 亚 砜 (dimethyl sulfoxide,dmso) 混 匀 后 用 酶 标 仪 (Instruments, 美 国 Bio-tek 公 司 ) 测 定 ( 测 量 波 长 为 9 nm) 实 验 重 复 次, 取 平 均 数 作 为 实 验 结 果.5 流 式 细 胞 术 检 测 细 胞 凋 亡 收 集 分 离 培 养 的 大 鼠 肺 成 纤 维 细 胞, 分 别 对 应 5 和 首 先 用 PBS 洗 涤 细 胞, 细 胞 计 数 后 调 整 细 胞 密 度 为 6 /L, 制 成 单 细 胞 悬 液, 加 入 μl 结 合 缓 冲 液 与 FITC- Annexin Ⅴ(μg/ml)μl, 室 温 避 光 放 置 min, 加 入 5μl PI(5μg/ml), 室 内 避 光 反 应 5min, 加 入 μl 结 合 缓 冲 液, 上 流 式 细 胞 仪 检 测.6 HYP 含 量 测 定 采 用 商 业 化 HYP 试 剂 盒 检 测 各 组 大 鼠 肺 组 织 中
第 期 李 利 华, 等 : 白 藜 芦 醇 抑 制 Sonic hedgehog 信 号 并 减 轻 大 鼠 肺 纤 维 化 的 研 究 HYP 含 量 试 剂 盒 主 要 原 理 是 利 用 氧 化 HYP 与 - ( 二 甲 氨 基 ) 苯 甲 醛 (DMAB) 的 生 色 反 应 来 测 定 HYP 浓 度, 反 应 生 成 与 样 品 中 HYP 含 量 成 正 比 的 比 色 (56 nm) 产 物 实 时 荧 光 定 量 聚 合 酶 链 反 应 (quantitative real time-polymerase chain reaction,qrt-pcr) 使 用 Trizol 试 剂 提 取 大 鼠 肺 组 织 总 RNA, 并 逆 转 录 成 cdna, 并 以 该 cdna 为 模 板 扩 增 基 因 片 段, 所 用 引 物 见 表 扩 增 产 物 经 琼 脂 糖 凝 胶 电 泳 后 染 色 拍 照 采 用 ABI 75 型 实 时 荧 光 定 量 PCR 仪 和 Dy NAmo SYBR Green qpcr 试 剂 盒 对 目 的 基 因 表 达 进 行 测 定 分 别 根 据 产 生 的 Ct 值 从 各 自 的 标 准 曲 线 获 得 目 的 基 因 和 β-actin 基 因 的 拷 贝 数 取 次 的 平 均 值, 以 目 的 基 因 的 拷 贝 数 除 以 β-actin 的 拷 贝 数 作 为 靶 基 因 的 相 对 表 达 量 表 实 时 定 量 PCR 引 物 序 列 基 因 引 物 序 列 SHH 正 向 引 物 :5'-CCAATTACAACCCCGACATC-' 反 向 引 物 :5'-GCATTTAACTTGTCTTTGCACCT-' Smo 正 向 引 物 :5'-GGCTGCTGAGTGAGAAG-' 反 向 引 物 :5'-CTGGTTGAAGAAGTCGTAGAAG-' Gli- 正 向 引 物 :5'-CCAAGCCAACTTTATGTCAGGG-' 反 向 引 物 :5'-AGCCCGCTTCTTTGTTAATTTGA-' β-actin 正 向 引 物 :5'-TACAACCTTCTTGCAGCTCC-' 反 向 引 物 :5'-ATCTTCATGAGGTAGTCTGTC-' 色 法 分 析, 切 片 常 规 脱 蜡 至 水, 置 于 Bouin 液 室 温 过 夜 或 56 中 处 理 h, 自 来 水 冲 洗 至 黄 色 消 失 后 蒸 馏 水 洗 涤 Weigert 铁 苏 木 精 染 核 min, 盐 酸 乙 醇 分 化, 自 来 水 冲 洗 min, 蒸 馏 水 洗 涤 按 照 Ⅰ 液 染 min,Ⅱ 液 染 5min,Ⅲ 液 染 5min 的 顺 序 进 行 处 理 ; 蒸 馏 水 洗 涤 min 后,% 冰 乙 酸 溶 液 浸 洗 5min, 常 规 脱 水 透 明, 中 性 树 胶 封 片.9 统 计 学 方 法 采 用 SPSS. 统 计 软 件 进 行 数 据 分 析, 计 量 资 料 以 均 数 ± 标 准 差 (x±s) 表 示, 用 检 验 和 单 因 素 方 差 分 析, 用 LSD 法 进 行 多 重 比 较, <.5 为 差 异 有 统 计 学 意 义 结 果. 白 藜 芦 醇 抑 制 博 莱 霉 素 诱 导 的 大 鼠 肺 纤 维 化 病 理 结 果 显 示, 大 鼠 肺 组 织 结 构 正 常, 肺 泡 结 构 完 整 大 鼠 肺 组 织 肺 泡 壁 增 厚, 肺 泡 结 构 破 坏 严 重, 可 见 大 量 胶 原 纤 维 沉 淀 以 及 成 纤 维 细 胞 增 生 白 藜 芦 醇 处 理 大 鼠 肺 泡 结 构 破 坏 相 对 较 轻, 同 时 可 见 少 量 胶 原 纤 维 沉 淀 和 成 纤 维 细 胞 增 生, 肺 组 织 中 性 粒 细 胞 浸 润 减 少 见 图. 白 藜 芦 醇 降 低 模 型 大 鼠 肺 组 织 HYP 和 Ⅰ 型 胶 原 蛋 白 的 含 量 与 比 较, 大 鼠 肺 组 织 HYP 含 量.7 Western blot 检 测 提 取 肺 组 织 总 蛋 白, 利 用 % 十 二 烷 基 硫 酸 钠 - 聚 丙 烯 酰 胺 凝 胶 恒 压 电 泳 分 离 蛋 白, 随 后 转 移 蛋 白 至 PVDF 膜 上, 用 含 5% 脱 脂 奶 粉 的 Tris-HCl 缓 冲 盐 溶 液 +Tween(TBS+Tween,TBST) 室 温 下 水 平 摇 床 慢 摇 封 闭 h 利 用 抗 Ⅰ 型 胶 原 蛋 白 抗 体 抗 SHH 抗 体 抗 Smo 抗 体 或 抗 Gli- 抗 体 孵 育 过 夜 隔 天 TBST 漂 洗 遍, 加 入 辣 根 过 氧 化 物 酶 标 记 的 兔 抗 鼠 二 抗 ( ), 室 温 下 水 平 摇 床 慢 摇 孵 育 h 选 取 β-actin 作 为 蛋 白 表 达 内 参 TBST 漂 洗 遍 后 进 行 增 强 化 学 发 光 法 (enhanced chemiluminescence, ECL) 显 色, 凝 胶 成 像 分 析 系 统 进 行 拍 照 分 析.8 肺 组 织 病 理 切 片 与 Masson 染 色 将 大 鼠 肺 组 织 用 % 甲 醛 固 定, 将 固 定 好 的 样 本 按 顺 序 置 于 脱 水 机 中 脱 水 将 过 夜 的 肺 组 织 取 出, 置 于 沾 有 少 量 蜡 液 的 包 埋 盒 中 包 埋 将 蜡 块 固 定 于 切 片 机 上, 切 成 ~6μm 薄 片 采 用 Masson 三 色 染 7 芦 醇 组 A: ;B: ;C:5μmol 白 ;D: 藜 图 A C 各 组 大 鼠 肺 组 织 病 理 切 片 观 察 (Masson 染 色 ) B D
中 国 现 代 医 学 杂 志 第 6 卷 明 显 升 高 ( =. 白 藜 芦 醇 可 明 显 降 低 肺 组 织 HYP 含 量, 并 具 有 剂 量 效 应 ;5μmol 白 HYP 含 量 与 比 较, 差 异 有 统 计 学 意 义 ( =. 和.5); HYP 含 量 与 比 较, 差 异 有 统 计 学 意 义 ( =.)( 见 表 与 比 较, 博 莱 霉 素 诱 导 的 大 鼠 肺 组 织 中 Ⅰ 型 胶 原 蛋 白 表 达 显 著 上 调 ( =.; 白 藜 芦 醇 则 显 著 下 调 模 型 大 鼠 Ⅰ 型 胶 原 蛋 白 表 达 (5μmol 白 =., =. 见 图 表 各 组 大 鼠 肺 组 织 HYP 含 量 测 定 组 别 例 数 HYP 含 量 /(mg/g,x±s) 9.79±.6 8.5±. 5μmol 白 8.9±.7 9.86±.8 注 : 与 比 较, <.5; 与 比 较, <.5 5μmol 白 Smo=., Gli- =.; 蛋 白 : SHH ==., Smo =., PGli-=.; mrna: SHH =., Smo =., Gli- =.; 蛋 白 : SHH =., Smo =.8, Gli- =.) 见 图. 白 藜 芦 醇 降 低 成 纤 维 细 胞 的 增 殖 与 比 较, 博 莱 霉 素 能 显 著 提 高 大 鼠 肺 成 纤 维 细 胞 增 殖 速 率 ( =.); 与 比 较, 白 藜 芦 醇 能 明 显 降 低 成 纤 维 细 胞 的 增 殖 (5μmol 白 藜 芦 醇 组 =.7, =.) 见 图 5 5 5μmol 白 A 玉 型 胶 原 蛋 白.5 图..5..5 5μmol 白 与 比 较, <.5; 与 比 较, <.5 各 组 大 鼠 肺 组 织 Ⅰ 型 胶 原 蛋 白 免 疫 印 迹 法 定 量 分 析. 白 藜 芦 醇 下 调 模 型 大 鼠 肺 成 纤 维 细 胞 SHH 信 号 的 表 达 与 比 较, 大 鼠 成 纤 维 细 胞 中 SHH Smo 和 Gli- mrna 和 蛋 白 表 达 水 平 显 著 上 升 (mrna: SHH =., Smo =., Gli- =.; 蛋 白 : SHH=., Smo =., Gli- =.); 白 藜 芦 醇 显 著 降 低 博 莱 霉 素 诱 导 的 SHH Smo 和 Gli- mrna 和 蛋 白 表 达 (5μmol 白 mrna: SHH =., A: 大 鼠 肺 成 纤 维 细 胞 SHH mrna 表 达 ;B: 大 鼠 肺 成 纤 维 细 胞 Smo mrna 表 达 ;C: 大 鼠 肺 成 纤 维 细 胞 Gli- mrna 表 达 与 对 照 组 比 较, <.5; 与 比 较, <.5 图 5μmol 白 B 5μmol 白 C 各 组 大 鼠 肺 成 纤 维 细 胞 SHH Smo 和 Gli- mrna 的 荧 光 定 量 PCR 8
第 期 李 利 华, 等 : 白 藜 芦 醇 抑 制 Sonic hedgehog 信 号 并 减 轻 大 鼠 肺 纤 维 化 的 研 究 5μmol 白. SHH... 5μmol 白 h 8 h 7 h 96 h 图 5 MTT 法 测 定 各 组 大 鼠 肺 成 纤 维 细 胞 体 外 增 殖 Smo 5μmol 白 A 5μmol 白.5 白 藜 芦 醇 促 进 成 纤 维 细 胞 凋 亡 流 式 细 胞 术 结 果 显 示, 博 莱 霉 素 能 降 低 成 纤 维 细 胞 凋 亡 率 ( =., 而 白 藜 芦 醇 则 能 显 著 促 进 成 纤 维 细 胞 的 凋 亡 (5μmol 白 =.6, =. 见 图 6 5 Gli- C A: 大 鼠 肺 成 纤 维 细 胞 SHH 蛋 白 表 达 ;B: 大 鼠 肺 成 纤 维 细 胞 Smo 蛋 白 表 达 ;C: 大 鼠 肺 成 纤 维 细 胞 Gli- 蛋 白 表 达 与 比 较 <.5; 与 比 较, <.5 图.5..5..5 5μmol 白 5μmol 白 B 5μmol 白 各 组 大 鼠 肺 成 纤 维 细 胞 SHH Smo 和 Gli- 蛋 白 的 荧 光 定 量 PCR 9 图 6 5 讨 论 5μmol 白 与 比 较, <.5; 与 比 较, <.5 流 式 细 胞 术 测 定 各 组 大 鼠 肺 成 纤 维 细 胞 凋 亡 比 率 作 为 一 种 进 行 性 肺 疾 病, 肺 纤 维 化 患 者 在 诊 断 后 5 年 病 死 率 达 65% [8], 目 前 还 没 有 公 认 的 有 效 治 疗 方 法, 主 要 采 用 抗 炎 抗 纤 维 化 抗 凝 血 及 肺 移 植 等 治 疗 措 施, 疗 效 各 有 优 劣 [9] 因 此, 迫 切 需 要 探 索 新 的 有 效 而 副 作 用 低 的 治 疗 方 法 白 藜 芦 醇 是 一 种 从 植 物 中 提 取 的 天 然 药 物, 在 抗 肿 瘤 治 疗 心 血 管 疾 病 抗 氧 化 等 方 面 疗 效 显 著, 毒 性 低, 便 于 长 期 服 药 [] 白 藜 芦 醇 在 实 验 性 肺 纤 维 化 模 型 中 的 作 用 越 来 越 受 到 关 注, 有 望 开 发 为 治 疗 人 体 肺 纤 维 化 的 临 床 用 药 本 研 究 通 过 向 大 鼠 气 管 滴 注 博 莱 霉 素 建 立 肺 间 质 纤 维 化 模 型, 病 理 组 织 结 果 发 现, 模 型 大 鼠 较 对 照 组 肺 泡 结 构 受 损 严 重, 有 明 显 的 胶 原 蛋 白 沉 积, 成 纤 维 细 胞 大 量 增 生 另 建 的 立 白 藜 芦 醇 处 理 组, 结 果 发 现, 白 藜 芦 醇 能 够 保 护 肺 泡 结 构, 减 少 组 织 损 伤, 并 减 轻 模 型 大 鼠 肺 间 质 纤 维 化 和 炎 症 反 应, 表 明 白 藜 芦 醇 有 拮 抗 博 莱 霉 素 的 作 用, 能 减 轻 博 莱 霉 素
中 国 现 代 医 学 杂 志 第 6 卷 诱 导 的 大 鼠 肺 纤 维 化 本 研 究 中, 肺 纤 维 化 模 型 大 鼠 肺 组 织 HYP 含 量 和 Ⅰ 型 胶 原 蛋 白 表 达 水 平 明 显 增 高 白 藜 芦 醇 处 理 后, 模 型 大 鼠 肺 组 织 中 HYP 含 量 减 少,Ⅰ 型 胶 原 蛋 白 水 平 降 低 多 种 信 号 途 径 包 括 STAT 酪 氨 酸 蛋 白 [] 激 酶 MAPK TGF-β 参 与 肺 纤 维 化 进 展 SHH 途 [] 径 参 与 肺 脏 在 胚 胎 期 的 发 育, 并 且 在 成 体 胚 胎 干 [] [] 细 胞 的 维 持 中 具 有 重 要 作 用 Teglund 等 的 研 究 也 发 现 其 参 与 多 种 癌 症 的 发 生 最 近 多 个 研 究 发 现, [5] [6] SHH 参 与 肺 纤 维 化 病 变 Hu 等 证 明 SHH 在 体 外 可 通 过 Smo 和 Gli 促 进 成 纤 维 细 胞 分 化 为 肌 成 纤 维 [7] 细 胞 Moshai 等 发 现, 抑 制 Gli 的 活 性 可 减 缓 小 鼠 肺 纤 维 化, 减 小 肺 胶 原 蛋 白 的 沉 积, 促 进 肺 组 织 内 抗 炎 抗 纤 维 化 环 境 形 成 国 内 研 究 报 道, 百 草 枯 可 导 致 SHH 途 径 中 Smo Gli 的 表 达 水 平 在 肺 纤 维 化 大 [8] 鼠 肺 组 织 中 显 著 上 调 本 研 究 发 现, 在 模 型 大 鼠 肺 成 纤 维 细 胞 中,SHH Smo Gli- mrna 和 蛋 白 的 表 达 水 平 较 显 著 上 调, 而 白 藜 芦 醇 则 可 以 抑 制 SHH Smo 和 Gli- 的 表 达, 结 果 表 明, 博 莱 霉 素 诱 导 的 肺 纤 维 化 过 程 具 有 活 化 成 纤 维 细 胞 中 SHH 信 号 途 径 的 作 用 ; 与 之 相 反, 白 藜 芦 醇 则 可 以 抑 制 成 纤 维 细 胞 中 SHH 信 号 的 活 化, 下 调 相 关 信 号 蛋 白 的 表 达 水 平 其 他 研 究 同 样 证 明 白 藜 芦 醇 对 SHH 信 号 的 调 控 作 用 在 急 性 髓 系 白 血 病 HL-6 细 胞 中, 白 藜 芦 醇 能 够 拮 抗 白 介 素 -6(interleukin-6,IL-6) 的 作 用, 降 低 细 胞 中 SHH 和 Gli- 的 表 达, 从 而 抑 制 细 [9] 胞 生 长 本 研 究 还 发 现, 博 莱 霉 素 促 进 成 纤 维 细 胞 增 殖, 而 白 藜 芦 醇 则 可 以 抑 制 细 胞 增 殖 此 外, 博 莱 霉 素 降 低 成 纤 维 细 胞 凋 亡, 白 藜 芦 醇 则 促 进 成 纤 维 细 胞 凋 亡 综 上 所 述, 本 研 究 观 察 到 白 藜 芦 醇 可 减 轻 博 莱 霉 素 诱 导 的 大 鼠 肺 纤 维 化, 抑 制 成 纤 维 细 胞 干 细 胞 SHH 信 号 活 化 及 成 纤 维 细 胞 增 殖, 促 进 细 胞 凋 亡, 为 明 确 白 藜 芦 醇 在 预 防 和 治 疗 肺 纤 维 化 中 的 作 用 机 制 提 供 实 验 和 理 论 支 持 参 考 文 献 : [] Noble PW, Barkauskas CE, Jiang D. Pulmonary fibrosis: patterns and perpetrators[j]. J Clin Invest,, (8): 756-76. [] Spagnolo P, Maher TM, Richeldi L. Idiopathic pulmonary fibrosis: recent advances on pharmacological therapy[j]. Pharmacol Ther, 5, 5: 8-7. [] 韩 晶 晶, 刘 炜, 毕 玉 平. 白 藜 芦 醇 的 研 究 进 展 [J]. 生 物 工 程 学 报, 8, (:85-859. [] 曹 国 文, 毛 卫 东. 白 藜 芦 醇 对 博 莱 霉 素 诱 导 的 小 鼠 纤 维 化 的 作 用 [J]. 现 代 医 药 卫 生,8,():6-65. [5] 刘 理 静, 于 小 华, 张 平. 白 藜 芦 醇 通 过 TGF-β /ADAMTS- 信 号 通 路 抑 制 肺 纤 维 化 [J]. 中 国 药 理 学 通 报,, 9():5-. [6] Akgedik R, Akgedik S, Karamanli H, et al. Effect of resveratrol on treatment of bleomycin-induced pulmonary fibrosis in rats[j]. Inflammation,, 5(5): 7-7. [7] 朱 天 琦, 郑 声 星. 大 鼠 肺 成 纤 维 细 胞 的 体 外 培 养 及 急 性 炎 症 模 型 的 建 立 [J]. 温 州 医 学 院 学 报,,():-5. [8] Brown KK, Raghu G. Medical treatment for pulmonary fibrosis: current trends, concepts, and prospects[j]. Clin Chest Med,, 5(): 759-77. [9] 崔 冰, 胡 卓 伟. 抗 纤 维 化 药 物 治 疗 研 究 进 展 [J]. 生 理 科 学 进 展, 8, 9():-8. [] 白 杨, 潘 隽 丽, 苏 薇 薇. 白 藜 芦 醇 与 白 藜 芦 醇 甙 的 研 究 进 展 [J]. 中 药 材,,7(:55-59. [] 刘 涛, 宋 良 文. 肺 纤 维 化 发 生 的 分 子 机 制 和 早 期 防 治 研 究 进 展 [J]. 军 事 医 学 科 学 院 院 刊,,7(): -6. [] Maeda Y, Dave V, Whitsett JA. Transcriptional control of lung morphogenesis[j]. Physiol Rev, 7, 87(: 9-. [] Brownell I, Guevara E, Bai CB, et al. Nerve-derived sonic hedgehog defines a niche for hair follicle stem cells capable of becoming epidermal stem cells[j]. Cell Stem Cell,, 8(5): 55-565. [] Teglund S, Toftgard R. Hedgehog beyond medulloblastoma and basal cell carcinoma[j]. Biochim Biophys Acta,, 85(: 8-8. [5] Cigna N, Farrokhi Moshai E, Brayer S, et al. The hedgehog system machinery controls transforming growth factor-beta-dependent myofibroblastic differentiation in humans: involvement in idiopathic pulmonary fibrosis[j]. Am J Pathol,, 8(6): 6-7. [6] Hu B, Liu J, Wu Z, et al. Reemergence of hedgehog mediates epithelial-mesenchymal crosstalk in pulmonary fibrosis[j]. Am J Respir Cell Mol Biol, 5, 5(): 8-8. [7] Moshai EF, Wemeau-Stervinou L, Cigna N, et al. Targeting the hedgehog-glioma-associated oncogene homolog pathway inhibits bleomycin-induced lung fibrosis in mice[j]. Am J Respir Cell Mol Biol,, 5(: -5. [8] 周 媛 媛, 曾 凡 军. 百 草 枯 致 肺 纤 维 化 大 鼠 肺 组 织 中 Smo Gli 的 表 达 变 化 及 意 义 [J]. 山 东 医 药,,5(7):-. [9] Su YC, Li SC, Wu YC, et al. Resveratrol downregulates interleukin-6-stimulated sonic hedgehog signaling in human acute myeloid leukemia[j]. Evid Based Complement Alternat Med,, DOI:.55//57. ( 童 颖 丹 编 辑 )