QUANTA LiteTM M2 EP（MIT3） 704540

QUANTA Lite M2 EP (MIT3) ELISA 704540 体 外 诊 断 用 试 剂 CLIA 复 杂 性 : 高 用 途 QUANTA Lite M2 EP(MIT3)ELISA 是 一 种 半 定 量 检 测 人 血 清 中 线 粒 体 抗 体 的 酶 联 免 疫 (ELISA) 检 测 试 剂 盒 线 粒 体 抗 体 的 存 在, 结 合 临 床 结 果 和 其 它 实 验 室 检 测 结 果, 可 帮 助 诊 断 原 发 性 胆 汁 性 肝 硬 变 概 述 和 检 测 说 明 原 发 性 胆 汁 性 肝 硬 变 (PBC) 是 一 种 慢 性 肝 脏 疾 病, 其 特 征 是 肝 内 小 胆 管 破 坏 进 行 性 胆 管 的 破 坏 会 导 致 肝 脏 功 能 受 损, 并 且 随 时 间 推 移, 可 以 导 致 肝 衰 竭 并 需 要 进 行 肝 移 植 1, 2 尽 管 遗 传 因 素 和 一 些 其 它 因 素 可 1, 3, 4 能 是 该 疾 病 发 展 的 重 要 原 因, 但 是 PBC 的 病 因 学 目 前 还 不 清 楚 PBC 通 常 发 生 在 30 到 65 岁 的 人 群 中, 并 且 更 容 易 影 响 女 性 ( 女 性 与 男 性 的 患 病 率 比 例 大 约 为 9:1) 3, 4 PBC 在 PBC 患 者 一 级 亲 属 中 的 发 病 率 在 1.3% 到 6.4% 之 间 4, 5 PBC 在 所 有 种 族 中 都 有 发 生, 并 且 在 世 界 各 地 都 有 病 例 据 报 道 世 界 各 地 PBC 的 发 病 率 差 异 很 大, 日 本 和 澳 大 利 亚 每 100,000 人 大 约 有 2 例, 美 国 每 100,000 人 大 约 有 40 例 3, 6 血 清 学 检 测 是 重 要 的 PBC 诊 断 和 鉴 别 的 辅 助 手 段, 因 为 许 多 与 PBC 相 关 的 抗 体 会 在 明 显 的 症 状 出 现 之 前 出 现 7-9 抗 线 粒 体 抗 体 (AMA), 通 常 采 用 间 接 免 疫 荧 光 分 析 (IFA) 检 测, 是 经 典 的 PBC 血 清 学 标 志 物 10 尽 管 有 研 究 报 道 90-95% 的 PBC 患 者 会 出 现 AMA, 但 是 此 方 法 的 检 出 率 却 相 对 很 低 11 采 用 IFA 法 检 测 AMA 高 度 依 赖 于 观 察 者 的 技 巧 分 析 的 技 术 成 分 以 及 其 它 会 混 淆 IFA 判 读 或 者 引 起 结 果 模 糊 的 抗 体 的 存 在 早 期 的 研 究 共 发 现 了 9 个 亚 型 的 线 粒 体 抗 原, 分 别 命 名 为 M1-M9 12 由 PBC 患 者 血 清 所 识 别 的 主 要 自 身 抗 原 是 M2 亚 型 M2 亚 型 抗 原 的 主 要 组 分 是 1- 酮 酸 脱 氢 酶 复 合 物 的 成 员 这 种 特 异 性 的 抗 原 被 鉴 定 为 丙 酮 酸 脱 氢 酶 复 合 物 E2 亚 单 位 (PDC-E2) 2- 酮 酸 脱 氢 酶 复 合 物 的 支 链 (BCOADC-E2) 以 及 2- 酮 戊 二 酸 脱 氢 酶 复 合 物 (OGDC-E2) 13 上 述 抗 原 的 发 现 可 用 于 开 发 ELISA 检 测 方 法 ELISA 检 测 方 法 比 IFA 方 法 的 灵 敏 度 更 高 14-17 第 一 代 抗 M2 ELISA 检 测 方 法 使 用 PDC-E2 作 为 主 要 底 物 来 检 测 PBC 特 异 性 的 抗 体 而 只 有 80-90% 的 组 织 学 证 明 的 PBC 患 者 有 PDC-E2 抗 体, 大 约 有 10% 的 PBC 患 者 只 与 BCOADC-E2 和 / 或 OGDC-E2 反 应 18,19 Gershwin 和 Leung 开 发 了 一 种 三 表 达 杂 交 克 隆 ( MIT3 ), 该 杂 交 克 隆 可 以 表 达 11, 15, 16, 19 PDC-E2 BCOADC-E2 和 OGDC-E2 三 种 免 疫 显 性 表 位, 他 们 还 对 这 种 克 隆 申 请 了 专 利 研 究 表 明, 基 于 MIT3 建 立 的 ELISA 方 法 与 IFA 或 传 统 的 基 于 PDC-E2 建 立 的 ELISA 方 法 相 比 具 有 更 优 异 的 性 能, 并 可 以 在 超 过 三 分 之 二 的 AMA 阴 性 (IFA 法 检 测 ) 的 PBC 患 者 中 检 测 到 AMA 15, 16 由 于 AMA 是 先 于 疾 病 症 状 出 现 的, 因 此 可 以 更 加 准 确 的 鉴 定 PBC 标 记 物 的 存 在, 使 得 诊 断 和 治 疗 更 早, 从 而 延 缓 疾 病 的 进 程 7,8,9 1 624540CHN

检 测 原 理 在 维 持 抗 原 天 然 状 态 的 条 件 下, 将 经 亲 和 层 析 纯 化 的 重 组 抗 原 (MIT3)( 包 括 PDC-E2 BCOADC-E2 和 OGDC-E2 的 免 疫 显 性 部 分 ) 结 合 到 聚 苯 乙 烯 微 孔 板 的 孔 中 将 预 先 稀 释 的 质 控 品 和 稀 释 的 患 者 血 清 分 别 加 入 到 不 同 的 微 孔 中, 使 其 中 的 线 粒 体 抗 体 结 合 到 固 定 的 抗 原 上 洗 去 未 结 合 的 样 本, 并 将 酶 标 记 的 抗 人 IgG 结 合 物 加 入 到 微 孔 板 的 每 个 孔 中 进 行 第 二 次 温 育, 使 酶 标 记 的 抗 人 IgG 抗 体 与 已 吸 附 到 微 孔 中 的 患 者 抗 体 结 合 在 洗 去 未 结 合 的 酶 标 抗 人 IgG 抗 体 之 后, 加 入 显 色 底 物, 通 过 检 测 所 发 出 的 颜 色 强 度 来 测 量 残 留 的 酶 活 性 通 过 分 光 光 度 法 对 患 者 孔 中 所 发 出 的 颜 色 强 度 和 质 控 品 孔 中 所 发 出 的 颜 色 强 度 进 行 测 定 和 对 比, 由 此 对 检 测 结 果 进 行 评 估 试 剂 1. ELISA 用 聚 苯 乙 烯 微 孔 板, 包 被 有 纯 化 的 重 组 MIT3 抗 原 (12-1 8 孔 ), 与 微 孔 板 固 定 器 一 起 装 在 含 有 干 燥 剂 的 锡 箔 纸 袋 中 2. ELISA 阴 性 质 控 品, 一 支, 含 有 防 腐 剂 和 人 血 清 ( 无 人 线 粒 体 M2 抗 体 ) 的 缓 冲 液, 已 预 先 稀 释, 1.2mL 3. M2 EP(MIT3)ELISA 低 值 阳 性 质 控 品, 一 支, 含 有 防 腐 剂 和 人 血 清 ( 含 线 粒 体 M2 抗 体 ) 的 缓 冲 液, 已 预 先 稀 释,1.2mL 4. M2 EP(MIT3)ELISA 高 值 阳 性 质 控 品, 一 支, 含 有 防 腐 剂 和 人 血 清 ( 含 线 粒 体 M2 抗 体 ) 的 缓 冲 液, 已 预 先 稀 释,1.2mL 5. HRP 样 本 稀 释 液, 一 支, 粉 色, 含 有 Tris 缓 冲 盐 溶 液 Tween 20 蛋 白 稳 定 剂 和 防 腐 剂,50mL 6. HRP 浓 缩 洗 涤 液, 一 支,40 浓 缩 液, 红 色, 含 有 Tris 缓 冲 盐 溶 液 和 Tween 20,25mL 有 关 稀 释 方 法 的 说 明 参 见 方 法 部 分 7. HRP IgG 结 合 物,( 山 羊 ), 抗 人 IgG, 一 支, 蓝 色, 含 有 缓 冲 液 蛋 白 稳 定 剂 和 防 腐 剂,10mL 8. TMB 显 色 剂, 一 支, 含 有 稳 定 剂,10mL 9. HRP 终 止 液,0.344M 硫 酸, 一 支, 无 色,10mL 警 告 1. 警 告 : 本 品 的 样 本 稀 释 液 质 控 品 和 结 合 物 中 含 有 一 种 化 学 物 质 (0.02% 氯 霉 素 ), 此 化 学 试 剂 在 加 州 被 认 为 是 一 种 致 癌 物 2. 本 品 质 控 品 配 制 过 程 中 使 用 的 所 有 人 源 材 料 均 已 采 用 FDA 批 准 的 方 法 检 测 并 证 实 HIV HbsAg 和 HCV 抗 体 阴 性 但 尚 无 任 何 检 测 方 法 可 以 保 证 材 料 中 绝 对 不 含 HIV HBV HCV 或 其 它 感 染 源 因 此,M2 EP(MIT3)ELISA 低 值 阳 性 质 控 品 M2 EP(MIT3)ELISA 高 值 阳 性 质 控 品 和 ELISA 阴 性 质 控 品 应 同 样 作 为 潜 在 传 染 性 物 质 来 处 理 20 2 624540CHN

3. 本 品 使 用 叠 氮 钠 作 为 防 腐 剂 叠 氮 钠 是 有 毒 物 质, 如 摄 入 或 经 皮 肤 眼 睛 吸 收 会 引 起 中 毒 叠 氮 钠 可 与 铅 或 铜 铅 制 品 反 应 而 形 成 具 有 潜 在 爆 炸 危 险 的 叠 氮 金 属 化 合 物 如 使 用 冲 洗 槽 对 试 剂 进 行 处 理, 应 使 用 大 量 的 水 冲 洗, 以 防 止 叠 氮 化 合 物 积 累 4. HRP 结 合 物 含 有 一 种 稀 释 的 有 毒 / 腐 蚀 性 化 学 物 质, 如 大 量 摄 入 会 引 起 中 毒 避 免 接 触 皮 肤 和 眼 睛 以 防 止 可 能 的 化 学 物 质 灼 伤 5. TMB 显 色 剂 含 有 一 种 刺 激 性 物 质, 如 吸 入 摄 入 或 经 皮 肤 吸 收 会 造 成 伤 害 避 免 吸 入 摄 入 或 皮 肤 和 眼 睛 接 触 以 防 止 损 伤 6. HRP 终 止 溶 液 由 稀 释 的 硫 酸 组 成 避 免 触 及 可 与 硫 酸 反 应 的 碱 金 属 或 其 它 复 合 物 硫 酸 具 毒 性 和 腐 蚀 性, 如 摄 入 会 引 起 中 毒 避 免 皮 肤 和 眼 睛 接 触 以 防 止 化 学 灼 伤 7. 在 对 所 提 供 的 试 剂 进 行 操 作 时, 使 用 适 当 的 个 人 防 护 设 备 8. 溅 出 的 试 剂 应 当 立 即 清 除 废 弃 物 的 处 理 应 遵 守 所 有 联 邦 州 和 地 方 环 境 保 护 法 规 注 意 事 项 1. 本 品 为 体 外 诊 断 用 试 剂 2. 使 用 非 本 系 统 提 供 的 试 剂 组 分 替 代 物 可 能 导 致 结 果 不 一 致 3. ELISA 微 孔 板 清 洗 不 完 全 或 不 充 分, 或 微 孔 板 中 的 液 体 去 除 不 彻 底, 会 引 起 精 密 度 下 降 和 / 或 背 景 值 升 高 4. 在 试 验 过 程 中, 如 果 应 用 自 动 样 本 处 理 器 和 其 它 液 体 处 理 装 置 进 行 全 部 或 部 分 操 作, 所 获 得 的 试 验 结 果 可 能 会 与 人 工 操 作 的 结 果 有 差 异 各 实 验 室 有 责 任 验 证 自 动 处 理 器 的 检 测 结 果 在 可 接 受 的 范 围 内 5. 许 多 因 素 影 响 测 试 性 能, 包 括 试 剂 的 初 始 温 度 环 境 温 度 移 液 操 作 的 准 确 性 和 重 现 性 ELISA 微 孔 板 清 洗 的 充 分 程 度 孔 内 液 体 去 除 的 彻 底 程 度 用 于 结 果 检 测 的 分 光 光 度 计 以 及 试 验 过 程 中 温 育 时 间 的 长 度 需 特 别 注 意 一 致 性 问 题, 以 获 得 准 确 可 重 复 性 结 果 6. 建 议 严 格 遵 守 给 定 的 试 验 方 案 7. 重 新 封 装 含 微 孔 条 和 干 燥 剂 的 拉 链 袋 时, 如 果 密 封 不 完 全, 会 导 致 抗 原 降 解 和 精 密 度 下 降 8. 在 一 段 时 间 内 两 次 或 多 次 使 用 来 自 同 一 瓶 的 酶 结 合 物, 可 能 会 导 致 吸 光 度 数 值 低 于 可 接 受 范 围 遵 守 所 有 给 定 的 HRP 结 合 物 操 作 程 序 对 于 防 止 上 述 情 况 发 生 是 非 常 重 要 的 9. HRP 结 合 物 的 化 学 污 染 可 能 是 由 于 仪 器 或 设 备 不 正 确 的 清 洁 或 冲 洗 造 成 的 来 自 实 验 室 常 用 化 学 物 质, 如 福 尔 马 林 漂 白 液 乙 醇 或 洗 涤 剂 等 的 残 留 物 会 引 起 HRP 结 合 物 在 一 段 时 间 后 降 解 在 使 用 了 化 学 清 洁 剂 / 消 毒 剂 后, 应 彻 底 清 洗 所 有 仪 器 和 设 备 3 624540CHN

保 存 条 件 1. 所 有 试 剂 保 存 于 2-8 C 请 勿 冷 冻 保 存 按 说 明 书 保 存 和 操 作, 试 剂 在 有 效 期 内 可 保 持 稳 定 2. 未 使 用 的 抗 原 包 被 微 孔 板 条 应 当 重 新 用 含 有 干 燥 剂 的 锡 箔 袋 包 装 并 密 封, 于 2-8 C 保 存 3. 稀 释 的 冲 洗 缓 冲 液 于 2-8 C 保 存, 稳 定 性 可 保 持 1 周 样 本 收 集 本 方 法 适 用 于 血 清 样 本 向 测 试 样 本 中 加 入 叠 氮 化 物 或 其 它 防 腐 剂 可 能 对 检 测 结 果 产 生 不 良 影 响 不 应 使 用 微 生 物 污 染 热 处 理 或 含 有 可 见 的 颗 粒 的 样 本 避 免 使 用 严 重 溶 血 或 脂 血 的 血 清 或 样 本 样 本 收 集 后, 应 将 血 清 从 凝 血 中 分 离 NCCLS 文 件 H18-A3 建 议 按 如 下 条 件 保 存 样 本 :1) 样 本 在 室 温 下 保 存 不 可 超 过 8 小 时 2) 如 果 试 验 时 间 超 过 8 小 时 内, 将 样 本 冷 藏 在 2-8 C 3) 如 果 试 验 程 序 或 样 本 运 输 超 过 48 小 时, 将 样 本 冻 存 于 -20 C 或 更 低 的 温 度 下 冷 冻 样 本 在 复 融 后 和 检 测 前 必 须 充 分 混 匀 检 测 程 序 提 供 的 材 料 1 块 M2 EP(MIT3)ELISA 微 孔 板 (12-1 8 孔 ), 带 有 固 定 器 1 支 1.2mL, 预 先 稀 释 的 ELISA 阴 性 质 控 品 1 支 1.2mL, 预 先 稀 释 的 M2 EP(MIT3)ELISA 低 值 阳 性 质 控 品 1 支 1.2mL, 预 先 稀 释 的 M2 EP(MIT3)ELISA 高 值 阳 性 质 控 品 1 支 50mL,HRP 样 本 稀 释 液 1 支 25mL,HRP 浓 缩 洗 涤 液,40 浓 缩 液 1 支 10mL,HRP IgG 结 合 物,( 山 羊 ), 抗 人 IgG 1 支 10mL,TMB 显 色 剂 1 支 10mL,HRP 终 止 液,0.344M 硫 酸 需 要 但 不 随 试 剂 盒 提 供 的 材 料 5 100 200-300 和 500μL 微 量 移 液 器 一 次 性 微 量 移 液 器 吸 头 用 于 稀 释 患 者 样 本 的 试 管, 体 积 为 4mL 蒸 馏 水 或 去 离 子 水 1L 容 器, 用 于 稀 释 HRP 浓 缩 洗 涤 液 微 孔 板 读 板 器, 可 检 测 波 长 450nm 处 的 OD 值 ( 对 于 双 波 长 测 定, 还 需 检 测 620nm 处 的 OD 值 ) 4 624540CHN

方 法 试 验 开 始 前 的 准 备 工 作 1. 将 所 有 试 剂 和 样 本 回 复 至 室 温 下 (20-26 C), 并 混 合 均 匀 2. 按 1:40 比 例 稀 释 HRP 浓 缩 洗 液, 将 HRP 浓 缩 洗 液 加 入 到 975mL 蒸 馏 水 或 去 离 子 水 中 如 果 近 期 不 需 使 用 全 部 微 孔 板, 可 配 制 较 少 量 的 稀 释 液, 即 每 使 用 16 孔 可 将 2.0mL 浓 缩 液 加 入 到 78mL 蒸 馏 水 或 去 离 子 水 中 稀 释 的 缓 冲 液 可 在 2-8 C 下 稳 定 保 存 1 周 3. 按 1:101 比 例 稀 释 患 者 样 本, 对 于 每 一 份 患 者 样 本, 取 5μL 加 入 到 500μL 的 HRP 样 本 稀 释 液 中 稀 释 后 的 样 本 必 须 在 制 备 后 8 小 时 内 使 用 请 勿 稀 释 M2 EP(MIT3)ELISA 低 值 阳 性 质 控 品 M2 EP (MIT3)ELISA 高 值 阳 性 质 控 品 和 ELISA 阴 性 质 控 品 4. 不 论 采 用 哪 种 单 位 确 定 是 否 存 在 M2(MIT3) 抗 体, 三 个 质 控 品 中 各 需 要 2 个 孔, 每 个 患 者 样 本 需 要 1 个 或 2 个 孔 建 议 对 样 本 做 双 份 检 测 试 验 步 骤 1. 试 验 前, 所 有 试 剂 必 须 回 复 室 温 (20-26 C) 将 所 需 数 量 的 微 孔 板 条 放 在 固 定 器 中 然 后 立 即 将 不 需 要 使 用 的 板 条 放 回 含 干 燥 剂 的 锡 箔 纸 袋 中 并 其 密 封 好, 以 减 少 板 条 暴 露 在 水 蒸 气 中 的 时 间 2. 将 100μL 预 先 稀 释 的 M2 EP(MIT3)ELISA 低 值 阳 性 质 控 品 M2 EP(MIT3)ELISA 高 值 阳 性 质 控 品 ELISA 阴 性 质 控 品 和 稀 释 的 患 者 样 本 加 入 到 各 孔 中 盖 好 微 孔 板 盖, 水 平 放 置, 在 室 温 下 温 育 30 分 钟 在 最 后 一 个 样 本 加 完 之 后, 温 育 便 开 始 3. 清 洗 步 骤 : 彻 底 吸 干 各 孔 内 的 液 体 每 孔 加 入 200-300μL 稀 释 的 HRP 洗 液, 然 后 吸 干 该 步 骤 重 复 两 次, 共 洗 3 次 最 后 一 次 清 洗 后, 将 微 孔 板 倒 置 于 吸 水 材 料 上 轻 敲, 以 彻 底 去 除 孔 内 残 留 液 每 次 清 洗 后 将 各 孔 内 的 液 体 彻 底 吸 干 非 常 重 要 吸 液 顺 序 与 加 样 顺 序 保 持 一 致 4. 每 孔 加 入 100μL HRP IgG 结 合 物 从 试 剂 瓶 中 移 取 结 合 物 应 按 照 良 好 的 实 验 室 操 作 规 范 在 标 准 无 菌 条 件 下 进 行 仅 从 瓶 中 移 取 试 验 所 需 量 的 结 合 物 为 避 免 可 能 的 微 生 物 和 / 或 化 学 污 染, 勿 将 已 移 出 但 未 使 用 的 结 合 物 放 回 瓶 中 按 步 骤 2, 在 室 温 下 将 微 孔 板 温 育 30 分 钟 5. 清 洗 步 骤 : 重 复 步 骤 3 6. 每 孔 加 入 100μL TMB 显 色 剂, 在 室 温 下 避 光 反 应 30 分 钟 7. 每 孔 加 入 100μL HRP 终 止 液 加 入 终 止 液 的 顺 序 和 时 间 与 加 入 TMB 显 色 剂 的 顺 序 和 时 间 保 持 一 致 用 手 指 轻 轻 拍 打 微 孔 板 以 充 分 混 匀 孔 内 液 体 8. 在 终 止 反 应 1 小 时 内, 于 450nm 处 读 取 每 个 孔 的 吸 光 度 (OD) 如 需 双 波 长 测 量, 可 使 用 620nm 作 为 参 考 波 长 5 624540CHN

质 量 控 制 1. 对 于 每 一 批 样 本, 都 应 使 用 M2 EP(MIT3)ELISA 低 值 阳 性 质 控 品 M2 EP(MIT3)ELISA 高 值 阳 性 质 控 品 和 ELISA 阴 性 质 控 品, 以 确 保 所 有 的 试 剂 和 操 作 都 正 确 执 行 2. 请 注 意,M2 EP(MIT3)ELISA 低 值 阳 性 质 控 品 M2 EP(MIT3)ELISA 高 值 阳 性 质 控 品 和 ELISA 阴 性 质 控 品 已 预 先 稀 释, 因 此 不 能 用 作 与 样 本 稀 释 相 关 的 程 序 性 方 法 的 对 照 3. 按 照 地 方 州 和 / 或 联 邦 法 规 及 其 授 权 机 构 的 要 求 和 指 导 原 则, 可 能 需 要 检 测 附 加 的 质 控 品 适 用 的 附 加 质 控 品 血 清 可 以 通 过 将 混 合 的 人 血 清 样 本 等 量 分 装, 然 后 保 存 于 -20 C 的 方 法 来 制 备 4. 为 了 保 证 检 测 试 结 果 的 有 效 性, 必 须 符 合 下 面 所 列 的 所 有 标 准 如 果 有 任 何 一 项 未 符 合, 该 检 测 被 认 为 无 效, 需 重 新 检 测 a. 预 先 稀 释 的 M2 EP(MIT3)ELISA 高 值 阳 性 质 控 品 的 吸 光 度 必 须 大 于 预 先 稀 释 的 M2 EP (MIT3)ELISA 低 值 阳 性 质 控 品 的 吸 光 度, 后 者 的 吸 光 度 必 须 大 于 预 先 稀 释 的 ELISA 阴 性 质 控 品 的 吸 光 度 b. 预 先 稀 释 的 M2 EP(MIT3)ELISA 高 值 阳 性 质 控 品 的 吸 光 度 必 须 大 于 1.0, 而 预 先 稀 释 的 ELISA 阴 性 质 控 品 的 吸 光 度 不 能 大 于 0.2 c. M2 EP(MIT3)ELISA 低 值 阳 性 质 控 品 的 吸 光 度 必 须 是 ELISA 阴 性 质 控 品 吸 光 度 的 两 倍 以 上, 或 超 过 0.25 d. ELISA 阴 性 质 控 品 和 M2 EP(MIT3)ELISA 高 值 阳 性 质 控 品 用 于 监 测 重 要 试 剂 的 有 效 性 M2 EP(MIT3)ELISA 高 值 阳 性 质 控 品 不 能 保 证 检 测 终 点 的 精 密 度 e. 关 于 正 确 质 量 控 制 操 作 的 其 它 指 导 原 则, 参 见 NCCLS 文 件 C24-A2 21 结 果 计 算 首 先 计 算 每 一 组 重 复 检 测 的 平 均 OD 值 然 后 将 每 个 样 本 的 平 均 OD 值 除 以 M2 EP(MIT3)ELISA 低 值 阳 性 质 控 品 的 平 均 OD 值, 再 将 所 得 结 果 乘 以 M2 EP(MIT3)ELISA 低 值 阳 性 质 控 品 的 单 位 数 ( 标 于 M2 EP (MIT3)ELISA 低 值 阳 性 质 控 品 的 标 签 上 ), 以 计 算 每 个 样 本 的 反 应 性 样 本 OD 样 本 数 值 = M2 EP(MIT3)ELISA 低 值 阳 性 质 控 品 ( 单 位 数 ) M2 EP(MIT3)ELISA 低 值 阳 性 质 控 品 OD ( 单 位 数 ) 反 应 性 与 抗 体 数 量 呈 非 线 性 相 关 当 患 者 体 内 的 抗 体 浓 度 增 加 或 减 少 时, 其 反 应 性 也 相 应 的 上 升 或 下 降, 但 该 变 化 不 成 正 比 ( 即 抗 体 浓 度 加 倍 时, 反 应 性 不 会 加 倍 ) 如 需 对 患 者 抗 体 进 行 更 加 准 确 的 定 量, 应 该 对 患 者 样 本 进 行 系 列 稀 释, 并 进 行 检 测 在 检 测 中 结 果 为 阳 性 的 最 后 一 个 稀 释 点 应 报 告 为 患 者 的 抗 体 滴 度 6 624540CHN

结 果 分 析 ELISA 是 一 种 非 常 灵 敏 的 检 测 技 术, 可 检 测 到 患 者 之 间 非 常 微 小 的 差 异 下 面 所 列 数 值 仅 为 推 荐 值 每 个 实 验 室 都 应 根 据 各 自 建 立 的 程 序 以 及 自 身 技 术. 质 控 设 备 和 患 者 群 体 来 建 立 自 己 的 正 常 范 围 根 据 下 表, 样 本 可 分 为 阴 性 可 疑 或 阳 性 单 位 阴 性 20 可 疑 20.1-24.9 阳 性 25 1. 阳 性 结 果 表 示 存 在 线 粒 体 抗 体, 说 明 可 能 患 有 原 发 性 胆 汁 性 肝 硬 变 2. 阴 性 结 果 表 示 不 存 在 线 粒 体 抗 体, 或 其 水 平 低 于 本 检 测 方 法 的 阴 性 临 界 值 3. 建 议 实 验 室 报 告 检 测 结 果 时, 应 包 含 如 下 声 明 : 本 结 果 是 采 用 INOVA QUANTA Lite M2 EP(MIT3) ELISA 方 法 检 测 得 到 的 采 用 不 同 生 产 商 的 检 测 方 法 所 得 到 的 M2 EP(MIT3) 抗 体 数 值 不 能 相 互 交 换 使 用 本 试 剂 报 告 的 IgG 的 量 度 不 能 与 终 点 滴 度 相 关 联 检 测 的 局 限 性 1. 患 者 样 本 中 存 在 的 免 疫 复 合 物 或 其 它 免 疫 球 蛋 白 聚 集 物 可 能 会 造 成 非 特 异 性 结 合 增 加, 并 在 检 测 中 产 生 假 阳 性 结 果 2. 并 非 所 有 原 发 性 胆 汁 性 肝 硬 变 患 者 都 会 出 现 线 粒 体 抗 体 阳 性 的 结 果 3. 本 检 测 结 果 应 与 临 床 症 状 和 其 它 血 清 学 检 测 结 合 使 用 4. 对 于 除 血 清 之 外 的 基 质, 本 检 测 的 性 能 特 点 尚 未 建 立 期 望 值 在 世 界 各 地 PBC 的 发 病 率 有 所 不 同, 据 估 计 日 本 和 澳 大 利 亚 每 100,000 人 有 2 例, 美 国 每 100,000 人 有 40 例 3, 6 然 而 一 般 认 为, 抗 线 粒 体 抗 体 会 在 90-95% 的 PBC 患 者 中 出 现, 抗 体 的 检 出 率 会 根 据 研 究 人 群 的 不 同 而 有 所 差 异, 其 灵 敏 度 会 在 72% 左 右 11 采 用 IFA 法 检 测 PBC 患 者, 其 AMA 特 异 性 范 围 在 95-97% 11 正 常 值 范 围 在 无 症 状 健 康 人 群 中 的 抗 M2(MIT3) 抗 体 采 用 QUANTA Lite M2 EP(MIT3)ELISA 试 剂 盒 检 测 了 520 份 无 症 状 健 康 人 群 的 M2 EP(MIT3) 抗 体 有 299 份 样 本 已 知 年 龄 和 性 别 年 龄 范 围 从 18-78 岁, 其 中 150 位 是 男 性,149 位 是 女 性 该 人 群 的 平 均 值 是 7.6 单 位, 中 位 数 为 6.0 单 位 对 于 正 常 研 究 对 象, 本 检 测 的 特 异 性 为 98.5%(512/520) 另 外 两 份 样 本 采 用 IFA 检 测 时 表 现 非 常 明 显 的 AMA 模 式 7 624540CHN

特 异 性 性 能 特 征 采 用 QUANTA Lite M2 EP(MIT3)ELISA 试 剂 盒 对 来 自 于 几 个 临 床 队 列 的 980 份 确 诊 为 PBC(978) 或 PBC/ 自 身 免 疫 性 肝 炎 (AIH)(2) 的 样 本 进 行 了 检 测, 所 得 到 的 M2(MIT3) 抗 体 阳 性 的 频 率 列 于 表 1 患 有 AIH 的 样 本, 已 知 AMA 阴 性 的 PBC 患 者 或 者 疑 似 但 是 没 有 确 诊 的 患 者 被 排 除 在 外 本 检 测 的 总 体 灵 敏 度 为 87.3%(856/980), 特 异 性 为 98.7%(590/598) 阳 性 预 测 值 为 99.1%, 阴 性 预 测 值 为 82.6% 非 PBC 或 PBC/AIH 的 平 均 值 和 中 位 数 值 分 别 为 7.5 和 5.9 单 位 表 1:QUANTA Lite TM M2 EP(MIT3)ELISA 试 剂 盒 的 灵 敏 度 N=1578 QUANTA Lite M2 EP(MIT3)ELISA 患 者 组 n= 阳 性 可 疑 阴 性 PBC(967) 或 PBC/AIH(13) 980 856 2 122 健 康 对 照 (520) 原 发 性 硬 化 性 胆 管 炎 -PSC(47) 其 它 疾 病 对 照 (31) 598 8 4 586 灵 敏 度 :87.3%(856/980);95% 置 信 区 间 (CI):85.1% 至 89.4% 特 异 性 :98.7%(590/598);95% 置 信 区 间 (CI):97.4% 至 99.4% 交 叉 反 应 采 用 QUANTA Lite M2 EP(MIT3)ELISA 试 剂 盒 对 155 份 来 自 于 患 有 非 PBC 肝 脏 疾 病 (70 份 AIH 46 份 PSC 和 8 份 AIH/PSC) 以 及 自 身 免 疫 性 疾 病 或 感 染 性 疾 病 (3 份 LKM-1 2 份 SLA 3 份 GPA 3 份 染 色 质 3 份 ASCA 2 份 Sm 2 份 RNP 2 份 SS-A 2 份 SS-B 2 份 Scl-70 2 份 Jo-1 1 份 SLE,2 份 HCV 和 2 份 疑 似 非 PBC 肝 脏 疾 病 ) 的 患 者 血 清 进 行 了 检 测, 以 评 估 这 一 检 测 的 特 异 性 QUANTA Lite M2 EP(MIT3)ELISA 试 剂 盒 没 有 检 测 到 自 身 免 疫 性 疾 病 或 感 染 性 疾 病 血 清 有 阳 性 结 果 有 5 份 AIH 样 本 被 检 测 为 阳 性, 但 它 们 可 能 是 未 确 诊 的 或 即 将 确 诊 的 AIH/PBC 综 合 症 所 有 AIH 或 AIH/PSC 样 本 没 有 包 括 在 特 异 性 的 计 算 中 精 密 度 和 重 现 性 通 过 对 6 个 样 本 进 行 检 测, 每 个 样 本 检 测 6 次, 以 评 估 批 内 的 性 能 表 2:QUANTA Lite M2 EP(MIT3)ELISA 试 剂 盒 的 批 内 性 能 A B C D E F 平 均 单 位 数 123.8 7.3 55.4 11.8 168.2 8.1 SD 3.46 0.95 3.14 0.96 2.55 0.78 CV % 2.8 13.0 5.7 8.1 1.5 9.7 8 624540CHN

通 过 对 5 个 样 本 试 剂 盒 的 高 值 阳 性 质 控 品 (HPC) 和 阴 性 质 控 品 (NC) 进 行 检 测, 每 个 试 验 做 双 份 检 测, 每 天 检 测 两 次 ( 上 午 检 测 一 次, 下 午 检 测 一 次 ), 连 续 3 天, 以 评 估 批 间 的 性 能 表 3:QUANTA Lite M2 EP (MIT3)ELISA 试 剂 盒 的 批 间 性 能 HPC NC A B C D E 平 均 单 位 数 112.7 2.2 110.3 7.8 54.4 11.6 160.3 SD 2.98 0.16 2.56 1.27 1.57 0.61 4.30 CV % 2.6 7.4 2.3 16.2 2.9 5.3 2.7 参 考 文 献 1. Kaplan, M. M. Primary biliary cirrhosis. N Engl J Med 335, 1570-1580 (1996). 2. Heathcote, E. J. Management of primary biliary cirrhosis. The American Association for the Study of Liver Diseases practice guidelines. Hepatology 31, 1005-1013 (2000). 3. Feld, J. J. & Heathcote, E. J. Epidemiology of autoimmune liver disease. J Gastroenterol Hepatol 18, 1118-1128 (2003). 4. Talwalkar, J. A. & Lindor, K. D. Primary biliary cirrhosis. Lancet 362, 53-61 (2003). 5. Jones, D. E., Watt, F. E., Metcalf, J. V., Bassendine, M. F. & James, O. F. Familial primary biliary cirrhosis reassessed: a geographically-based population study. J Hepatol 30, 402-407 (1999). 6. Kim, W. R. et al. Epidemiology and natural history of primary biliary cirrhosis in a US community. Gastroenterology 119, 1631-1636 (2000). 7. Metcalf, J. V. et al. Natural history of early primary biliary cirrhosis. Lancet 348, 1399-1402 (1996). 8. Kisand, K. E. et al. The follow-up of asymptomatic persons with antibodies to pyruvate dehydrogenase in adult population samples. J Gastroenterol 36, 248-254 (2001). 9. Prince, M., Chetwynd, A., Newman, W., Metcalf, J. V. & James, O. F. Survival and symptom progression in a geographically based cohort of patients with primary biliary cirrhosis: follow-up for up to 28 years. Gastroenterology 123, 1044-1051 (2002). 10. Walker, J. G., Doniach, D., Roitt, I. M. & Sherlock, S. Serological Tests in Diagnosis of Primary Biliary Cirrhosis. Lancet 39, 827-831 (1965). 11. Muratori, P. et al. 'True' antimitochondrial antibody-negative primary biliary cirrhosis, low sensitivity of the routine assays, or both? Clin Exp Immunol 135, 154-158 (2004). 12. Berg, P. A. & Klein, R. Mitochondrial antigens and autoantibodies: from anti-m1 to anti-m9. Klin Wochenschr 64, 897-909 (1986). 13. Fussey, S. P., Guest, J. R., James, O. F., Bassendine, M. F. & Yeaman, S. J. Identification and analysis of the major M2 autoantigens in primary biliary cirrhosis. Proc Natl Acad Sci USA 85, 8654-8658 (1988). 14. Vergani, D. & Bogdanos, D. P. Positive markers in AMA-negative PBC. Am J Gastroenterol 98, 241-243 (2003). 15. Miyakawa, H. et al. Detection of antimitochondrial autoantibodies in immunofluorescent AMA-negative patients with primary biliary cirrhosis using recombinant autoantigens. Hepatology 34, 243-248 (2001). 16. Moteki, S. et al. Use of a designer triple expression hybrid clone for three different lipoyl domain for the detection of antimitochondrial autoantibodies. Hepatology 24, 97-103 (1996). 17. Fritzler, M. J. & Manns, M. P. Anti-mitochondrial autoantibodies. Clin Appl Immunol Rev 3, 87-113 (2002). 18. Nishio, A., Keeffe, E. B. & Gershwin, M. E. Immunopathogenesis of primary biliary cirrhosis. Semin Liver Dis 22, 291-302 (2002). 19. Leung, P. S. et al. Use of designer recombinant mitochondrial antigens in the diagnosis of primary biliary cirrhosis. Hepatology 15, 367-372 (1992). 20. Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories, Fourth Edition, HHS Pub#(CDC) 93-8395, (CDC/NIH, 1999). 21. Internal Quality Control: Principles and Definitions, Approved Guidline, NCCLS Doc C24-A2 (National Committee for Clinical Laboratory Standards, 1991). 9 624540CHN

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