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1 产品目录 02 PCR\RT-PCR 及荧光定量 PCR PCR 产品 PCR 产品选择指南 103 耐热 DA 聚合酶简介 106 PCR 条件对反应的影响 107 Taq DA Polymerase (ET101/KT201) 108 Pfu DA Polymerase (EP101/KP201) 110 Fast HiFidelity PCR Kit (KP202) 112 Super HiFi DA polymerase (KP212/KT212) 115 Taq Plus DA Polymerase (ET105/KT205) 116 HotMaster Taq DA Polymerase (ET106) 118 Long Taq DA Polymerase (ET103) 119 Taq Platinum DA Polymerase (ET104/KT204) 121 SuperPure Taq DA Polymerase (ET107) 123 High Affinity HotStart Taq (ET108) 124 多重 PCR 扩增试剂盒 (KT109) 125 一管便捷式 PCR MasterMix GC-Rich PCR MasterMix (KT206) PCR Reagent (KT207) HotStart Taq PCR MasterMix (KT202) HotMaster PCR MasterMix (KT208) 130 Golden Easy PCR System (KT221) 131 快速定点突变试剂盒 (KM101) 132 GeneGreen 核酸染料 (RT210) 134 dtp(cd111) 135 PCR 引物 (CD106) 136 PCR Enhancer (RP202) 136 去离子水 (RT120) 137 Dase/Rase-Free 去离子水 (RT121) 137 快速 DA 提取扩增套装 (KG201) 138 快速 DA 提取检测试剂盒 (KG203) 139 血液直接 PCR 试剂盒 (KG204) 140 GMO 作物提取检测试剂盒 (KG202) 141 甲基化特异性 PCR 试剂盒 (EM101) 142 PCR 常见问题分析 142 部分使用 PCR 产品发表的文献列表 144

2 二PCR RT 及荧光定更多信息请参见 : 免费电话 : people@tiangen.com PCR 产品选择指南 PCR (Polymerase Chain Reaction) 反应是上世纪 80 年代中期发展起来的体外核酸扩增技术 其基本原理是酶促 DA 合成反应, 即在模板 DA 引物和脱氧核糖核酸存在下, 在耐热 DA 聚合酶的作用下, 经过 DA 链热变性 引物退 火和引物延伸三个步骤, 循环往复, 使 DA 片段在短时间内迅速扩增 它具有特异 敏感 产率高 快速 简便 重复性好 易自动化等突出优点, 使它在分子生物学和医学领域迅速得到了广泛的实际应用, 被许多科学家视为近十几 年来分子生物学领域最重要的一项技术突破 量耐热 DA 聚合酶 PCR 反应经常用于基因克隆 基因突变 测序 基因检测 探针标记等 进行 PCR 反应时, 应根据不同要求选择不同 聚合酶 不同的反应缓冲体系并适当调整 PCR 反应条件 ( 如 PCR 反应温度 时间和循环次数等 ) 如果选择不当, 会造成 PCR 反应结果较差甚至完全失败 为了确保得到最佳实验结果, 的研发人员针对客户的不同需求, 精心配制了各种系列的 PCR 产品供您选择, 为您的实验工作顺利进行提供保障 多种不同的耐热 DA 聚合酶可供选择 满足您在保真度 扩增效率 扩增长度和扩增特异性 4 个方面的不同要求 适合于各种来源的 DA 模板 扩增不同长度的 DA 片段 方便开展顺畅的后续实验 一管便捷式 PCR 反应体系 (PCR MasterMix) 国家高新技术产品认证 显著提高 PCR 反应的特异性和灵敏度, 还能有效扩增 GC 含量高 具有二级结构的复杂模板 最低可扩增 2 个 拷贝的目的模板, 使实验结果更加精确 独创的 MasterMix 配方使整个反应体系非常稳定, 即使多次冻融或长期放于 4 亦不会影响活性 稳定高效预配好的 PCR 混合液快速简便, 大大降低劳动强度和取样误差, 而且加入了高性能的 PCR 增强剂和 优化剂, 降低了对 PCR 条件的要求 备有多种 MasterMix, 每种分成含染料和不含染料两种体系 含染料的 MasterMix 产品在 PCR 结束后可以直接 电泳, 无需加入上样缓冲液 双组分简单型 PCR 反应系统 (Golden PCR System) 103 该体系内的聚合酶经过特殊处理, 性能稳定, 可在 4 长期放置, 仍保持优良高效的扩增效果 该系统包括 : 组分 Ⅰ: 耐热聚合酶 ; 组分 Ⅱ:PCR 反应必需成分的预混液 使用方法简单快捷 : 只需将两种组分按比例混合后加入模板和引物即可, 省去了一一加入各种 PCR 反应组分的 烦恼, 节省您宝贵的时间 准确高效的扩增效率, 适用于各种常规 PCR 反应 复杂模板如 GC 含量高 (> 60%) 有二级结构等模板的扩 增和大规模基因检测 反应系统中含有染料, 让你的 PCR 和电泳步骤无时间间隔, 快速省力

3 光定 PCR 酶选择指南 方便快捷的预混合成分 精心配比的独立组分 快速完成 PCR 反应 灵活应对不同样本 DA 提取与 PCR 双组分简单型 PCR 一管便捷式 PCR 试剂盒 高保真性高特异性多重 PCR 高扩增效率 扩增合二为一 反应系统 (MasterMix) 组分 I: 耐热聚合酶 反应中只需加入模板和引物 Multi PCR kit HotMaster Taq DA Polymerase SuperPure DA Polymerase Taq DA Polymerase 组分 II: 反应预混液 ( 染料和不含染料 ) 长片段扩增 Golden Easy PCR System 更多信息请参见 : 免费电话 : people@tiangen.com 二PCR RT 及Super HiFi DA Pfu DA Polymerase Polymerase Long Taq 2 x Taq MasterMix Polymerase 快速 DA 提取检测试剂盒 TIAcombi DA Lyse & Amp PCR Kit GMO 作物提取检测试剂盒 2 x Pfu MasterMix GMO Crop Extraction & 2 x Taq Plus MasterMix Amplification Kit 2 x HotStart Taq MasterMix 2 x Long Taq MasterMix 2 x Taq Platinum MasterMix 快速 DA 提取扩增套装 2 x GC-Rich PCR MasterMix TIAcombi DA Lyse & Amp PCR Kit 2 x HotMaster PCR MasterMix 2 x Super HiFi PCR Mix 104 量 荧

4 二PCR RT 及荧光定更多信息请参见 : 免费电话 : people@tiangen.com 量 不同 PCR 产品扩增性能及便捷性 105

5 光定耐热 DA 聚合酶简介 合理选择耐热 DA 聚合酶是 PCR 成败与否的一个关键因素 如何选择最合适的耐热 DA 聚合酶, 是用户首先考虑的问题 目前市面上有许多种耐热 DA 聚合酶, 名称各不相同, 主要区别在于特异性 保真性 耐热性 扩增速率 扩增片段长度等几个指标 公司生产的多种耐热 DA 聚合酶全部采用国外生产工艺和质量检测标准, 是经过多次分子筛 离子交换层析柱纯化的超纯型产品, 去除宿主 DA 和蛋白酶等因素的影响, 特异性非常好且特别稳定, 经检测, 室温放置 1 个月, 活性不发生改变 二PCR RT 及不同耐热 DA 聚合酶比较 更多信息请参见 : 免费电话 : people@tiangen.com Taq 扩增效率最高的耐热 DA 聚合酶, 能很好地扩增 6 kb 以下的 DA 片段 Pfu 目前使用最广泛的耐热 DA 聚合酶, 但扩增效率低于 Taq 酶, 能很好的扩增 2 kb 以下的片段 一般用于点突变 基因筛选等对保真性要求很高的 DA 扩增 Taq Plus 集扩增效率高和保真度于一体 能有效地扩增 10 kb 以下的片段, 扩增效率比 Pfu 高, 保真度比 Taq 好 对于有些结构复杂的模板, 如 GC 含量高 有二级结构等可选用 Taq Plus 扩增 采用了创新的合成亲和性配体技术, 该配体可以以一种温度依赖性的方式来可逆性地阻断酶的活性 HotMaster Taq 能最大限度的减少 PCR 扩增全程中的非特异性扩增产物产生, 大大提高了 PCR 反应的特异性 能很好地扩增 6 kb 以下的 DA 片段,PCR 产物 3 端为 A, 可直接用 TA 载体克隆 具有 3-5 外切酶活性的耐热 DA 聚合酶, 它不但扩增效率高而且错配率低, 对简单模板可扩增 Long Taq 长达 40 kb 的片段, 对复杂模板也可扩增长达 15 kb 的片段, 特别适合于长片段扩增, 如构建基因 图谱及分子遗传学研究等 热启动高保真耐热 DA 聚合酶 保真度略低于 Pfu 聚合酶, 但扩增效率比 Pfu 要高, 如果对保真度 Taq Platinum 要求很高, 而用 Pfu 扩增有难度, 可选用 Taq Platinum 聚合酶 一般扩增长度可达 4 kb High Affinity 特异性抗体修饰的热启动型 DA 聚合酶, 抗体亲和力高, 具有高特异性 较高的模板亲和力和稳定的扩 HotStart Taq 增效率 不仅适合于普通 PCR, 还适合于多重 PCR 和荧光定理 PCR 普通 PCR 扩增长度可达 6 kb SuperPure Taq 经特殊分离纯化工艺制备的 Taq 酶, 具有高纯度 高活性 高稳定性的特点, 无核酸酶残留 Fast HiFidelity 来源于 Pyrococcus spp, 具有很强的 3-5 外切酶活性, 保真性约为 Taq DA Polymerase 的 80 倍, 独有的延伸增强因子, 使延伸速度得到了显著提高, 可提升至 sec/kb 扩增人类基因组长度可达 6 kb 通过定向分子进化技术开发得到的新型快速高保真 DA 聚合酶, 对 DA 模板具有超强的亲和力, 模 Super HiFi 板延伸能力可达 15 kb, 具有超强的 3-5 外切酶活性, 保真性约为普通 Taq DA Polymerase 的 50 倍 适可扩增 GC 含量高达 75% 的复杂模板 耐热 DA 聚合酶的保真性能比较 Taq Pfu Taq Plus HotMaster Taq Long Taq Taq Platinum High Affinity HotStart Taq SuperPure Taq Fast HiFidelity Super HiFi 如果将 Taq 的保真度定为 1,Pfu 的保真度为 10, 其它酶的保真度如图所示 106 量 荧

6 二PCR RT 及荧光定更多信息请参见 : 免费电话 : people@tiangen.com PCR 条件对反应的影响 变性温度与时间 模板变性温度是决定 PCR 反应中双链 DA 解链的温度, 达不到变性温度就不会产生单链 DA 模板,PCR 也就不 会启动 变性温度低则变性不完全,DA 双链会很快复性, 因而减少产量 变性温度太高, 又会影响酶的活性 一 般情况下可设为 94 温浴 sec, 高温时间应尽量缩短, 以保持耐热 DA 聚合酶的活力, 最高变性温度不宜 超过 95 退火温度与时间 量延伸温度与时间循环次数酶量模板 引物 退火温度决定 PCR 特异性与产量 温度高特异性强, 但过高则引物不能与模板牢固结合,DA 扩增效率下降 ; 温 度低产量高, 但过低可造成引物与模板错配, 非特异性产物增加 合适的退火温度一般在 之间 设置特定反应的最适退火温度, 可根据引物的 (G+C)% 含量进行推测, 一般实验中退火温度比扩增引物的熔解温度 Tm 低 5, 退火时间一般为 sec, 足以使引物与模板之间完全结合, 长时间退火没有必要 PCR 反应的延伸温度一般选择在 之间, 延伸时间根据所用聚合酶扩增速度和扩增片段大小设定, 如同样扩增 1 kb 片段, 若使用 Taq 酶只需 1 min, 使用 Pfu 酶则应设定 2 min 以上 延伸时间过长会导致非特异性扩增带的出现, 时间太短则可能得不到扩增产物或得到一些短的非特异性片段 可根据模板 DA 的量 扩增片段的大小和扩增产物的下步应用等因素, 设定 个循环 循环次数太少, 扩增量不足, 如果循环次数太多, 错配几率会增加, 非特异性背景严重 所以, 在保证产物得率前提下, 应尽量减少循环次数 50 µl 反应体系可用 U 酶, 酶量的选择与模板 DA 的量 扩增片段大小等有关, 酶量过多易发生非特异性反应, 而且可能增加突变的机率, 尤其在进行高保真扩增时, 应尽量减少酶量, 但酶量过少时反应性能会下降 模板可以是单链 DA, 也可以是双链 DA, 质粒 DA 的扩增效率略低于线状 DA 模板加量一般不需太多, 不超过 1 µg 为宜, 因为模板量过多可能导致非特异性扩增增加, 但是要考虑模板中靶序列的含量 例如, 使用基因组 为模板扩增单拷贝或低拷贝靶序列, 就需要适当加大模板用量 引物与模板配对的长度应至少为 17 个核苷酸, 最高不宜超过 30 个核苷酸, 最佳长度为 个核苷酸, 如需插入酶切位点, 应在酶切位点 5 端多加几个碱基, 有利于酶切 引物的 (G+C)% 含量组成应均匀, 尽量避免含有相同的碱基多聚体 两个引物中 (G+C)% 含量应尽量相似 引物内部应避免形成明显的二级结构, 如发夹结构 两个引物之间不应发生互补, 特别是在引物 3 端 如果可能, 引物 3 端最好富有 GC, 这样退火后有利于引物 3 端的延伸 人工合成的引物需经过色谱层析或 PAGE 纯化, 以除去未能合成至全长的短链等杂质 引物的终浓度一般为 µm 左右, 浓度太高会导致非特异性扩增, 太低则扩增产物太少 反应缓冲液 缓冲液的 ph 值 盐离子浓度 助溶剂成分等都会对 PCR 反应产生影响 公司提供的 Taq 酶通用缓冲液 ph 值为 8.4,Mg 2 + 浓度为 1.5 mm, 可以适用于大多数 PCR 反应, 但它并非对任何模板和引物的组合都是最佳的, 我们还备有成分不同的另外两种常规缓冲液及一种优化缓冲液, 可适用于不同 PCR 反应条件, 如果使用通用缓冲液不能得到满意结果, 建议使用优化试剂盒建立最佳反应条件 107

7 光定Taq DA Polymerase 超纯高效耐热 DA 聚合酶 ET U, 2.5 U/µl ET Taq DA Polymerase 250 U, 5 U/µl 95 元 ET ( 含 10 Taq Buffer,Mg 2+ ) 500 U, 2.5 U/µl ET U, 5 U/µl 175 元 KT Taq PCR MasterMix 1 ml 150 元 KT ( 含染料 ) 5 1 ml 600 元 KT Taq PCR MasterMix 1 ml 150 元 KT ( 不含染料 ) 5 1 ml 600 元 KT Golden Easy PCR System 组分 Ⅰ:250 U; 组分 Ⅱ:5 ml 250 元 KT ( 含染料 ) 组分 Ⅰ:500 U; 组分 Ⅱ:2 5 ml 400 元 产品内容 活性定义 10 x Taq Buffer 1 单位 (U) Taq DA Polymerase 活力定义为在 min 内, 200 mm Tris-HCl (ph9.0) 以活性化的大马哈鱼精子 DA 作为模板 / 引物, 将 10 nmol 脱氧 200 mm KCl 核苷酸掺入到酸不溶物质所需的酶量 15 mm MgCl 2 其它 质量控制检测 SDS-PAGE 检测纯度大于 99%; 经检测无外源核酸酶活性 ;PCR 酶贮存缓冲液 方法检测无宿主残余 DA; 能有效地扩增人基因组中的单拷贝基 20 mm Tris-HCl (ph8.0) 因 ; 室温存放一周, 无明显活性改变 0.1 mm EDTA 主要技术参数 1 mm DTT 100 mm KCl 该酶具 5-3 聚合酶的活性以及 5-3 外切核酸酶活性, 无 50% Glycerol 3-5 外切酶活性 在 时,DA 聚合的延伸速度为 1-2 Stabilizers kb/min PCR 产物 3 端为 A, 可直接用 TA 载体克隆 保存条件 适用范围 -20 保存 一般用于 < 6 kb 的对保真度要求不高的 DA 产物的扩增 引物延 伸 序列测定,DA 平末端加 A 等 反应举例 以人基因组 DA 为模板, 扩增 1 kb 的片段 Template <1 µg 94 3 min Primer 1 (10 µm) 1 µl sec Primer 2 (10 µm) 1 µl sec 30 Cycles 10 Taq Buffer 5 µl 72 1 min dtp Mixture (2.5 mm each) 4 µl 72 5 min Taq (2.5 U/µl) µl ddh 2 O up to 50 µl PCR 反应结束取 5 µl 电泳检测结果 目录号产品名称包装价格 ET ET ET ET Taq DA Polymerase ( 含预混 Mg 2+ 的 10 Taq Buffer) 250 U, 2.5 U/µl 250 U, 5 U/µl 500 U, 2.5 U/µl 500 U, 5 U/µl 95 元 175 元 108 量 荧

8 二PCR RT 及荧光定更多信息请参见 : 免费电话 : people@tiangen.com 产品说明 Taq DA Polymerase 量常见问题 Q: A: Q: A: 109 Taq DA Polymerase 是从克隆有 Thermu aquaticus DA Polymerase 基因的大肠杆菌经诱导表达后, 再经三次 过柱纯化分离出来的一个约 94 KD 的重组蛋白 无外源核酸酶和细菌 DA 污染, 稳定性好, 特异性强, 适用于 常规 PCR 扩增 一管便捷式 Taq MasterMix ( 国家高新技术产品认证 ) 使用 Taq 酶扩增的 PCR 产物如何进行 TA 连接? 显著提高 PCR 反应的特异性和灵敏度, 还能有效扩增 GC 含量高 二级结构等复杂模板 最低可扩增 2 个拷贝 的目的模板, 使实验结果更加精确 独创的 Taq MasterMix 配方使整个反应体系非常稳定, 多次冻融或长期放于 4 亦不会影响活性 稳定高效预配好的 PCR 混合液快速简便, 大大降低劳动强度和取样误差, 而且加入了高性能的 PCR 增强剂和 优化剂, 降低了对 PCR 条件的要求 分成含染料和不含染料两种体系 含染料的 MasterMix 产品在 PCR 结束后可以直接电泳, 无需加入上样缓冲液 双组分简单型 PCR 反应系统 (Golden PCR System) 该体系内的聚合酶经过特殊处理, 性能稳定, 可在 4 长期放置, 仍保持优良高效的扩增效果 该系统包括 : 组分 Ⅰ: 耐热聚合酶 ; 组分 Ⅱ:PCR 反应必需成分的预混液 使用方法简单快捷 : 只需将两种组分按比例混合后加入模板和引物即可, 省去了一一加入各种 PCR 反应组分的 烦恼, 节省您宝贵的时间 准确高效的扩增效率, 适用于各种常规 PCR 反应 复杂模板如 GC 含量高 (> 60%), 有二级结构等模板的 扩增和大规模基因检测 反应系统中含有染料, 让你的 PCR 和电泳步骤无时间间隔, 快速省力 使用 Taq 酶的 PCR 扩增产物在 3 端有一个附加的 A 碱基, 可进行 TA 连接 公司的 Taq 酶反应缓 冲液中没有抑制连接反应的成分,PCR 产物如果没有非特异性杂带, 不需进行纯化, 可直接用于连接 但鉴于 PCR 产物中多数会有引物二聚体存在, 建议纯化后再进行连接 PCR 产物经末端平滑后克隆于去磷酸的平滑末端载体时, 其 PCR 产物需不需要进行 5 末端磷酸化? 需要 一般的 PCR 用引物 5 末端都不带磷 ( 除非在合成时特别标记 ) 使用这种引物进行 PCR 的产物经末 端平滑化后, 与去磷酸的平滑末端载体连接之前, 必须进行末端磷酸化

9 光定Pfu DA Polymerase 超纯高保真耐热 DA 聚合酶 KP ( 含染料 ) 5 1 ml 850 元 KP Pfu PCR MasterMix 1 ml 180 元 KP ( 不含染料 ) 5 1 ml 850 元 产品内容 活性定义 10 Pfu Buffer 1 单位 (U) Pfu DA Polymerase 活力定义为在 min 内, 200 mm Tris-HCl (ph8.8) 以活性化的大马哈鱼精子 DA 作为模板 / 引物, 将 10 nmol 脱氧 100 mm KCl 核苷酸掺入到酸不溶物质所需的酶量 100 mm (H 4 ) 2 SO 4 20 mm MgSO 4 质量控制检测 其它 SDS-PAGE 检测纯度大于 99%; 经检测无外源核酸酶活性 ;PCR 方法检测无宿主残余 DA; 能有效地扩增人基因组中的单拷贝基 酶贮存缓冲液 因 ; 室温存放一周, 无明显活性改变 50 mm Tris-HCl (ph8.2) 主要技术参数 0.1 mm EDTA 有 3-5 外切核酸酶活性, 无 5-3 外切核酸酶活性,DA 扩 1 mm DTT 增时延伸速度低于 50% Glycerol Taq 酶, 一般情况下 Pfu 酶的延伸速度为每分 Stabilizers 钟 kb Pfu 酶的热稳定性比 Taq 酶好, 对于 GC 含量很高 的模板, 变性温度可以提高到 98, 对 Pfu 酶的活性无影响 其 PCR 产物为平端, 可加 A 处理再与 TA 载体连接或使用平末端克 隆载体 适用范围 用于 DA 的高保真扩增, 如基因表达克隆 基因定点突变 细 胞内基因点突变的分析 (SP) 和末端补平等 反应举例 以基因组 DA 为模板, 扩增 1kb 的片段 Template < 1 µg 94 3 min Primer 1 (10 µm) 1 µl sec Primer 2 (10 µm) 1 µl sec 10 Pfu Buffer 5 µl 72 2 min dtp Mixture (2.5 mm each) 4 µl 72 5 min Pfu(2.5 U/µl) 0.5-1µl 30 Cycles ddh 2 O up to 50 µl PCR 反应结束取 5 µl 电泳检测结果 保存条件 -20 保存 目录号产品名称包装价格 EP Pfu DA Polymerase 250 U, 2.5 U/µl 150 元 EP 含预混 Mg 2+ 的 10 Pfu Buffer) 500 U, 2.5 U/µl 280 元 KP Pfu PCR MasterMix 1 ml 180 元 110 量 荧

10 二PCR RT 及荧光定更多信息请参见 : 免费电话 : people@tiangen.com 产品说明 Pfu DA Polymerase 量常见问题 Q: A: Q: A: Q: A: 111 Pfu DA Polymerase 是从克隆有 Pyrococcus furiosis DA Polymerase 基因的大肠杆菌中表达并经多次过柱纯 化分离出来的 由于 Pfu 有 3-5 的外切酶活性, 它能纠正 DA 扩增过程中产生的错误, 而传统的 Taq DA Polymerase 却不能 其它高温 DA Polymerase 如 :Vent,Deep Vent,Tli,UITma 等虽具有校正功能, 但 Pfu 是目前已发现的所有耐高温 DA Polymerase 中出错率最低的 Pfu DA 聚合酶比普通 Taq DA 聚合酶热稳 定性更好, 95 条件下 1 h 仍保持 90% 以上活性 一管便捷式 Pfu MasterMix ( 国家高新技术产品认证 ) 显著提高 PCR 反应的特异性和灵敏度, 还能有效扩增 GC 含量高 二级结构等复杂模板 最低可扩增 2 个拷贝 的目的模板, 使实验结果更加精确 独创的 Pfu MasterMix 配方使整个反应体系非常稳定, 多次冻融或长期放于 4 亦不会影响活性 稳定高效预配好的 PCR 混合液快速简便, 大大降低劳动强度和取样误差, 而且加入了高性能的 PCR 增强剂和 优化剂, 降低了对 PCR 条件的要求 分成含染料和不含染料两种体系 含染料的 MasterMix 产品在 PCR 结束后可以直接电泳, 无需加入上样缓冲液 Q: A: 使用 Pfu 可以扩增多长的片段? 对于简单模板,Pfu 应该可以很好地扩增 3 kb 以下片段 扩增更长片段时, 能否成功扩增主要与模板和引物的 设计有关 如果对保真度要求很高, 而用 Pfu DA 聚合酶有困难时, 可选用 公司的 Taq Platinum 聚合酶替代 使用 Pfu 进行 PCR 扩增后的 PCR 产物能否进行 TA 克隆? 不可以直接进行 TA 克隆, 只可选用平末端加 A 后再与 TA 载体连接 用同等单位的 Pfu 和 Taq 扩增, 为什么 Pfu 扩增效率比 Taq 酶低? 因为高保真性能的 Pfu 聚合酶具有 3-5 核酸外切酶的活性, 扩增中如果产生了错配的碱基, 它可以将其切掉, 从而保证了扩增的准确性 正是由于此酶具有核酸外切酶功能, 往往扩增效率比 Taq 要低, 而且还容易降解引 物, 因而在设置 PCR 反应时, 应最后加入 Pfu 酶为好 用 Pfu 酶扩增时, 对引物设计有何要求? 用 Pfu 酶扩增时, 引物的纯度要求较高, 引物长度大于 18 个碱基,Tm 在 之间, 引物浓度在 µm 之间, 比 Taq 酶略高

11 光定Fast HiFidelity PCR Kit 快速 特异的新一代超高保真 DA 聚合酶 二PCR 产品包装产品简介 RT Fast HiFidelity Polymerase 是从超嗜热原始菌 Pyrococcus spp 中分离纯化的, 具有超强的 3-5 外切及试剂盒组成 50 次 200 次 1000 次 Fast HiFidelity Polymerase 125 U 500 U U 酶活性 (Proofreading 活性 ), 保真性约为 5 Fast HiFidelity Taq DA 500 µl 2 1 ml 10 1 ml Polymerase 的 80 倍 本产品采用了创新的合成亲和 PCR Buffer 性配体技术, 配体以一种温度依赖性的方式来抑制聚 20 Fast PCR Enhancer 500 µl 500 µl µl 合酶和外切酶的活性, 配体 A 在常温下能够抑制 5 DA Loading Buffer 500 µl 2 1 ml 10 1 ml DA Polymerase 活性, 从而有效减少非特异性扩增 ; 配体 B 能够抑制 3-5 外切酶活性, 可防止引物和模板下游应用 DA 的降解, 无需额外的激活步骤即可进行高特异性 高保真 PCR 快速扩增 的 Hot Start PCR 平端克隆 本产品通过添加独有的延伸增强因子, 使延伸速度 长片段扩增 和扩增产量得到了显著提高 反应 Buffer 系统包含 dtps, 增强剂, 稳定剂, 拥有特殊的 Mg 2+ 自动调节保存条件系统, 在整个反应过程 Mg 2+ 始终保持最佳浓度, 提高 -20 保存扩增效率 其 PCR 产物为平末端, 可加 A 处理再与 T 载体连接或使用平末端克隆载体, 如 plb 零背景快速连接试剂盒 ( 目录号 :VT205) 产品特点 保真度是普通 Taq 的 80 倍 扩增速度是普通 Pfu 的 4-8 倍 四大法宝 实现超凡扩增能力 Fast HiFidelity Polymerase 原理图活性定义 :1 单位 (U) Fast HiFidelity Polymerase 活力定义为在 min 内, 以活性化的大马哈鱼精子 DA 作为模板 / 引物, 将 10 nmol 脱氧核苷酸掺入到酸不溶物质所需的酶量 主要技术参数 : 具有较强的 3-5 外切核酸酶活性, 保真性约为 Taq DA Polymerase 的 80 倍 延伸速率为 sec/kb, 大大缩短了 PCR 所需时间 PCR 产物为平末端, 可直接使用平末端克隆载体连接或加 A 处理后再与 TA 载体连接 PCR 反应进行前 PCR 反应进行中更多信息请参见 : 免费电话 : people@tiangen.com 目录号包装价格 KP µl 50 次 300 元 KP µl 200 次 1000 元 KP µl 1000 次 4500 元 112 量 荧

12 二PCR RT 及荧光定更多信息请参见 : 免费电话 : people@tiangen.com 三大难题一举突破 低保真 时间长 扩增差 保真度是普通 Taq 的 80 倍 Fast HiFidelity Polymerase 是从超嗜热原始菌 Pyrococcus spp 中分离纯化的, 具有超强的 3-5 外切酶活性 (Proofreading 活性 ), 保真度约为 Taq DA Polymerase 的 80 倍,Pfu 的 8 倍 量 扩增速度是普通 Pfu 的 4-8 倍在保证高保真度的基础上, 扩增体系中添加了独有的延伸增强因子及特殊缓冲体系, 使延伸速度可显著提升至 sec/kb, 是 Taq DA Polymerase 的 2-4 倍,Pfu 的 4-8 倍, 是目前延伸速度最快的高保真 DA 聚合酶之一 四大法宝 实现超凡扩增能力 法宝 Ⅰ: 创新的合成亲和性双配体技术采用创新的合成亲和性双配体技术, 配体 A 在常温下能够抑制 DA Polymerase 活性, 从而减少非特异性扩增, 配体 B 可以防止引物和模板 DA 的降解, 并且配体 A 和 B 均为温度敏感型, 当高温 (95 ) 时会迅速从酶上脱落, 从而实现无需额外激活步骤的高特异性扩增反应 113 高特异 将 Taq 酶保真度定义为 1,Pfu 保真度为 10, 则其它酶的保真度如图所示,Fast HiFidelity Polymerase 的保真度约为 80 M: Marker III 1: MPKC(2.0 kb) 2: Hn2.0(2.0 kb) 3: Hn4.5(4.5 kb) 实验结果 : Taq plus 和 T 公司 Fast 酶, 以 15/30 sec/kb 的延伸速度均很难有效扩增以上目的片段, 而 Fast HiFidelity PCR Kit 的的延伸速度可达 15 sec/kb, 并且 30 sec/kb 的延伸速度会提高产量, 所以推荐 30 sec/kb 的延伸速度 M M: Marker III 1: 加配体扩 MCD19 基因 2: 不加配体扩 MCD19 基因 3: 加配体扩 MPCK 基因 4: 不加配体扩 MPCK 基因实验结果 : 加配体可显著地提高反应的特异性

13 光定 法宝 Ⅱ: 独特的 Mg 2+ 自动调节系统 Buffer 中包含独特的 Mg 2+ 自动调节系统, 随着 PCR 反应中酶活的变化, 动态调节 Mg 2+ 浓度, 使整个 PCR 反应过程中 Mg 2+ 浓度终始保持最佳水平, 明显提高了扩增成功率及产量 二PCR RT 及用 Fast HiFidelity PCR Kit 分别以人类基因组 DA 为模板对 D1.0,Hn2.0 和 Hn4.5 等基因进行扩增, 以拟南芥基因组 DA 为模板扩增 At510 片段 结果表明 Fast HiFidelity PCR Kit 可高效扩增基因组 DA 片段, 扩增产物产量与国外 T 和 T1 公司产品相当, 均比国内 T 公司产品产量高 基因组 DA 模板用量为 100 ng/50 µl,pcr 产物上样量 3 µl 长片段 M 400 bp 750 bp 1.0 kb 1.5 kb 2.0 kb 3.9 kb 4.5 kb 6.0 kb M: Marker III, 基因组 DA 模板上样量为 100 ng/50 µl,pcr 产物上样量 3 µl 用 Fast HiFidelity PCR Kit (KP202) 分别以人类基因组 DA 为模板对 Cyclo (400 bp),prp (750 bp),d1.0 (1.0 kb),hn3.9 (3.9 kb),hn4.5 (4.5 kb) 和 Hn6.0 (6.0 kb) 等基因进行扩增, 以拟南芥基因组 DA 为模板扩增 At510(1.5 kp) 片段, 以小鼠基因组 DA 为模板扩增 MPKC (2.0 kb), 结果表明 Fast HiFidelity PCR Kit 可高效地扩增 400 bp-6.0 kb 的基因组 DA 片段, 有超强的长片段扩增能力 易扩增 M 1 2 M: Marker III 1: 不加入 20 Fast PCR Enhancer 2: 加入 20 Fast PCR Enhancer 实验结果 : 和对照相比, 加入 20 Fast PCR Enhancer 后的扩增产量明显提高 更多信息请参见 : 免费电话 : people@tiangen.com 法宝 Ⅲ: 独特的延伸增强因子 独特的延伸增强因子, 与增强剂, 稳定剂等协同 作用, 明显地提高了长片段扩增能力, 可有效扩 增长达 6 kb 的人基因组 DA,10 kb 大肠杆菌基 因组,6 kb 的 cda 和 15 kb 的 λda 法宝 Ⅳ : 20 Fast PCR Enhancer 高产量 20 Fast PCR Enhancer 能改变某些特殊难扩增 DA 片段的解链性质, 使扩增效果发生明显改善 D1.0 (1.0 kb) At510 (1.5 kb) Hn2.0 (2.0 kb) Hn4.5 (4.5 kb) M M: Marker III 1: Fast HiFidelity PCR Kit 2: 国外 T 公司 3: 国外 T1 公司 4: 国内 T 公司 114 量 荧

14 二PCR RT 及荧光定更多信息请参见 : 免费电话 : people@tiangen.com Super HiFi DA polymerase 能扩增长片段 复杂模板的高性能快速高保真酶目录号产品名称包装价格 KP μl 50 rxn 300 元 Super HiFi DA polymerase KP μl 200 rxn 1000 元 KT Super HiFi PCR Mix( 含染料 μl 40 rxn 300 元 ) KT μl 200 rxn 1100 元 KT Super HiFi PCR Mix( 不含染料 μl 40 rxn 300 元 ) KT μl 200 rxn 1100 元 产品包装 量保存条件下游应用实验例 -20 试剂盒组成 KP KP Super HiFi DA Polymerase 50 μl 200 μl 2 Super HiFi PCR Buffer 2 1 ml 6 1 ml 25 mm MgSO 4 1 ml 1 ml Super Pure dtps(2.5 mm each) 500 μl 1 ml 试剂盒组成 KT KT KT KT Super HiFi PCR Mix 1 ml 5 1 ml 1 ml 5 1 ml ddh 2 O 1 ml 5 1 ml 1 ml 5 1 ml Loading dye in Mix Yes Yes o o 产品简介 DA 的高保真快速扩增, 如长片段扩增 高 GC 含 量模板 复杂模板扩增等, 基因定点突变 基因组点突变的分析 (SP) 等 优良的扩增速度及高扩增产物量 Super HiFi DA polymerase 对 DA 模板具有超强的亲和力, 在保证扩增速度的同时, 增加 PCR 扩增的产物量 1 kb 产物 2 kb 产物 8 kb 产物 10 kb 产物 15 kb 产物 15 sec/kb 30 sec/kb 15 sec/kb 30 sec/kb 15 sec/kb 30 sec/kb 30 sec/kb 30 sec/kb M1 P 公司 P 公司 P 公司 P 公司 M1 P 公司 P 公司 P 公司 P 公司 Super HiFi DA Polymerase 是通过定向分子进化技术开发得到的新型快速高保真 DA 聚合酶, 从而使得聚合酶的延伸速度可达 15 ~ 30 sec/kb 模板延伸能力可达 15 kb, 并能提高 PCR 反应的成功率 增加 PCR 扩增的产物量 此外,Super HiFi DA Polymerase 具有的 3-5 外切酶活性 (Proofreading 活性 ), 保真性约为普通 Taq DA Polymerase 的 50 倍 反应体系中专门优化的 PCR 反应增强系统, 提高了聚合酶扩增效率, 以及复杂模板的扩增能力, 可扩增 GC 含量高达 75% 的模板 本产品的 PCR 产物为平末端, 可直接使用平末端克隆载体进行基因克隆, 如 零背景快速连接试剂盒 ( 目录号 :VT205/206) 产品特点 扩增快速 : 延伸速度可达 sec/kb 延伸力强 : 可扩增长至 15 kb 的 DA 片段 复杂模板 : 可成功扩增 GC 含量高达 75% 的 DA 模板 超强的复杂模板扩增能力 Super HiFi DA polymerase 配合专门优化的 PCR 反应增强系统, 提高复杂模板的扩增能力, 可扩增 GC 含量高达 75% 的模板 A 公司 P 公司 M :GC 含量 75%;2:GC 含量 68%;3:GC 含量 62%; 4:GC 含量 70% ;M: Marker D15000 高 PCR 扩增成功率对于不同物种来源的基因组 DA 模板 高 GC 含量的复杂 DA 模板 长片段模板等均有较高的扩增效率及成功率 P 公司 人类基因 λda 高 GC 水稻基因组 E.Coli 基因组 人类基因 λda 高 GC 水稻基因组 E.Coli 基因组 M1 8 9 M M M1 8 9 M M : 长度 1 kb;2: 长度 2 kb;3: 长度 4 kb;5: 长度 8 kb;6: 长度 10 kb;7: 长度 15 kb;8: GC 含量 62%( 长度 1.5 kb );9:GC 含量 75%( 长 度 2 kb);10: 长度 2.2 kb;11: 长度 8 kb; 12: 长度 2.1 kb;13: 长度 8 kb; M1: Marker D15000;M2: Marker 1 kb 115

15 光定Taq Plus DA Polymerase 超纯高效率 高保真耐热 DA 聚合酶 KT ( 含染料 ) 5 1 ml 850 元 KT Taq Plus PCR MasterMix 1 ml 180 元 KT ( 不含染料 ) 5 1 ml 850 元 产品内容 活性定义 1 单位 (U) Taq Plus DA Polymerase 活力定义为在 x Taq Plus Buffer 200 mm Tris-HCl (ph9.0) min 内, 以活性化的大马哈鱼精子 DA 作为模板 / 引物, 将 mm KCl nmol 脱氧核苷酸掺入到酸不溶物质所需的酶量 100 mm (H 4 ) 2 SO 4 15 mm MgCl 2 质量控制检测 其它 SDS-PAGE 检测纯度大于 99%; 经检测无外源核酸酶活性 ; 酶贮存缓冲液 PCR 方法检测无宿主残余 DA; 能有效地扩增人基因组中的单拷贝基因 ; 室温存放一周, 无明显活性改变 20 mm Tris-HCl (ph8.0) 0.1 mm EDTA 主要技术参数 1 mm DTT 有 5-3 外切核酸酶活性和 3-5 外切酶活性 PCR 产物 100 mm KCl 可直接进行 TA 载体克隆, 如需提高克隆效率, 建议先纯化, 50% Glycerol Stabilizers 加 A 后再进行 TA 载体克隆 适用范围保存条件常用于一些保真度高, 结构复杂的模板如 GC 含量高, 有二级 -20 保存结构等扩增, 大多数情况下可替代 Taq DA 聚合酶 反应举例 以基因组 DA 为模板, 扩增 1kb 的片段 Template < 1 µg 94 3 min Primer 1 (10 µm) 1 µl sec Primer 2 (10 µm) 1 µl sec 10 Taq Plus Buffer 5 µl 72 1 min dtp Mixture (2.5 mm each) 4 µl 72 5 min Taq Plus (2.5 U/µl) µl 30 Cycles ddh 2 O up to 50 µl PCR 反应结束取 5 µl 电泳检测结果 ET Taq Plus DA Polymerase 250 U, 2.5 U/µl 120 元 ET ( 含预混 Mg 2+ 的 10 Taq Plus Buffer) 500 U, 2.5 U/µl 220 元 KT Taq Plus PCR MasterMix 1 ml 180 元 目录号产品名称包装价格 116 量 荧

16 二PCR RT 及荧光定更多信息请参见 : 免费电话 : people@tiangen.com 产品说明 Taq Plus DA Polymerase 量常见问题 Q: A: Q: A: 117 Taq Plus DA Polymerase 是 Taq 和 Pfu DA 聚合酶的混合物, 有 5-3 外切酶活性和 3-5 外切酶活性, 具 备扩增效率高, 错配率低的特点 与 Taq DA 聚合酶相比,Taq Plus DA 聚合酶具有扩增长度增加 ( 简单模板 可有效扩增长达 20 kb, 对复杂模板也可达 10 kb) 保真度好等优点 ; 与 Pfu DA 聚合酶比较, 具有扩增速度快, 反应效率高的优势 一管便捷式 Taq Plus MasterMix ( 国家高新技术产品认证 ) 使用 Taq Plus 可以扩增多长的片段? 显著提高 PCR 反应的特异性和灵敏度, 还能有效扩增 GC 含量高 二级结构等复杂模板 最低可扩增 2 个拷贝 的目的模板, 使实验结果更加精确 独创的 Taq Plus MasterMix 配方使整个反应体系非常的稳定, 多次冻融或长期放于 4 亦不会影响活性 稳定高效预配好的 PCR 混合液快速简便, 大大降低劳动强度和取样误差, 而且加入了高性能的 PCR 增强剂和 优化剂, 降低了对 PCR 条件的要求 分成含染料和不含染料两种体系 含染料的 MasterMix 产品在 PCR 结束后可以直接电泳, 无需加入上样缓冲液 一般情况下,Taq Plus 应该可以很好地扩增 10 kb 以下片段 能否成功扩增更长片段, 主要与模板的结构和 引物的设计有关, 如果扩增长片段有困难, 最好选用 Long Taq DA 聚合酶 使用 Taq Plus 进行 PCR 扩增后的 PCR 产物能否进行 TA 克隆? PCR 产物可直接进行 TA 载体克隆, 但效率可能会略低于 Taq, 建议最好先将 PCR 产物进行纯化, 然后经 过加 A 处理, 再与 T 载体连接, 这样可大大提高克隆效率

17 光定HotMaster Taq DA Polymerase 超纯特异性最强的耐热 DA 聚合酶 产品内容活性定义 1 单位 (U) HotMaster Taq DA Polymerase 活力定义为在 10 x HotMaster Taq Buffer min 内, 以活性化的大马哈鱼精子 DA 作为模板 / 200 mm Tris-HCl (ph8.4) 200 mm KCl 引物, 将 10 nmol 脱氧核苷酸掺入到酸不溶物质所需的酶量 100 mm (H 4 ) 2 SO 4 25 mm MgCl 2 质量控制检测 其它 SDS-PAGE 检测纯度大于 99%; 经检测无外源核酸酶活性 ; PCR 方法检测无宿主残余 DA; 能有效地扩增人基因组中的 酶贮存缓冲液 单拷贝基因 ; 室温存放一周, 无明显活性改变 20 mm Tris-HCl (ph8.0) 主要技术参数 0.1mM EDTA 有 5-3 外切核酸酶活性, 无 3-5 外切酶活性, 同时具有 1 mm DTT 100 mm KCl 更强的特异性 PCR 产物 3 端为 A, 可直接用 TA 载体克隆 50% Glycerol Stabilizers 适用范围 一般用于高灵敏度和有较强背景的基因组扩增 ( 如基因组中 保存条件 某个特定基因位点或外源病原体的检测 ) DA 序列测定 -20 保存 MultiPlex PCR TA 克隆等 反应举例 以基因组 DA 为模板, 扩增 1kb 的片段 Template < 1 µg 94 3 min Primer 1 (10 µm) 1 µl sec Primer 2 (10 µm) 1 µl sec 30 Cycles 10 HotMaster Taq Buffer 5 µl 65 1 min dtp Mixture (2.5 mm each) 4 µl 65 5 min HotMaster Taq (2.5 U/µl) µl ddh 2 O up to 50 µl PCR 反应结束取 5 µl 电泳检测结果 产品说明 HotMaster Taq DA Polymerase HotMaster Taq DA polymerase 采用了创新的合成亲和性配体技术, 该配体可以以一种温度依赖性的方式来可 逆性地阻断酶的活性 能最大限度的减少 PCR 扩增全程中的非特异性扩增产物产生, 大大提高了 PCR 反应的特 异性 PCR 产物 3 端为 A, 可直接用 TA 载体克隆 影响 PCR 特异性的因素很多, 包括模板 引物性质及质量 反应条件的控制等等, 而高特异性 Taq 酶的出现大 大减少了摸条件这一繁琐的实验过程, 也为 PCR 产物快速有效的纯化 ( 如用 DA 产物纯化试剂盒 ) 打下了基础 目录号产品名称包装价格 ET HotMaster Taq DA Polymerase 250 U, 2.5 U/µl 300 元 ET ( 含预混 Mg 2+ 的 10 HotMasterTaq Buffer) 500 U, 2.5 U/µl 580 元 118 量 荧

18 二PCR RT 及荧光定更多信息请参见 : 免费电话 : people@tiangen.com Long Taq DA Polymerase 超纯长片段扩增耐热 DA 聚合酶 量酶贮存缓冲液保存条件 反应举例 目录号 产品名称 包装 价格 ET Long Taq DA Polymerase 250 U, 2.5 U/µl 150 元 ET ( 含预混 Mg 2+ 的 10 LongTaq Buffer) 500 U, 2.5 U/µl 280 元 产品内容 10 Long Taq Buffer 配备两种高效扩增 Buffer, 即 10 Long Taq Buffer I 和 Buffer Ⅱ, 可适应不同模板的扩增 请先使用 Buffer Ⅰ, 当使用 Buffer Ⅰ 不能扩增时, 再试用 Buffer Ⅱ 20 mm Tris-HCl (ph8.0) 0.1 mm EDTA 1 mm DTT 100 mm KCl 50% Glycerol Stabilizers -20 保存 119 以基因组 DA 为模板, 扩增 10 kb 的片段 Template < 1 µg Primer 1 (10 µm) 1 µl Primer 2 (10 µm) 1 µl 10 Long Taq Buffer 5 µl dtp Mixture (2.5 mm each) 4 µl Long Taq(2.5 U/µl) µl 活性定义 ddh 2 O up to 50 µl PCR 反应结束取 5 µl 电泳检测结果 1 单位 (U) Long Taq DA Polymerase 活力定义为在 min 内, 以活性化的大马哈鱼精子 DA 作为模板 / 引物, 将 10 nmol 脱氧核 苷酸掺入到酸不溶物质所需的酶量 质量控制检测 SDS-PAGE 检测纯度大于 99%; 经检测无外源核酸酶活性 ; PCR 方法检测无宿主残余 DA; 能有效地扩增人基因组中的单 拷贝基因 ; 室温存放一周, 无明显活性改变 主要技术参数 94 3 min sec sec 30 Cycles 72 8 min 72 5 min 有 5-3 外切核酸酶活性和 3-5 外切酶活性 PCR 产物可 直接进行 TA 载体克隆, 如需提高克隆效率, 建议先纯化, 加 A 后再进行 TA 载体克隆 适用范围 适合于保真度要求高的长片段及一些复杂模板 ( 如含二级结构, 富含 GC 序列和重复序列等 ) 的扩增, 如构建基因图谱 测序及分子遗传学研究等

19 光定产品说明 Long Taq DA Polymerase Long Taq DA Polymerase 是本公司研制的具有 5-3 外切核酸酶活性和 3-5 外切酶活性的耐热 DA 聚合酶, 具备扩增效率高, 保真性能强的特点 配备两种高效扩增 Buffer, 可适应不同模板的扩增, 对简单模板可扩增长 达 40 kb 的片段, 对复杂二级结构 (GC rich 等 ) 和具有重复序列的模板可扩增长达 15 kb 的片段 常见问题 二PCR RT 及Q: Long Taq Polymerase 是否只能扩增长片段? A: Long Taq DA Polymerase 也可用于扩增短片段, 有些情况下扩增性能优于 Taq DA 聚合酶 如果常规 PCR 反应不能得到目的片段, 可试用 Long Taq 酶或 Taq Plus 酶 Q: Long Taq DA Polymerase 的 10 Buffer 如何使用? A: Long Taq DA Polymerase 的制品包装中备有两种高效扩增 Buffer, 即 10 Buffer Ⅰ 和 10 Buffer Ⅱ, 适应不同模板的扩增, 实验时可先使用 Buffer Ⅰ, 当使用 Buffer Ⅰ 不能进行 PCR 扩增时, 再使用 Buffer Ⅱ Q: 扩增长片段, 为什么推荐使用二阶段温度 PCR 法? A: Long PCR 成功的关键之一是设计 30 mer 以上的长引物, 以增加引物的特异性, 而长引物的 Tm 值一般较高, 在进行 PCR 反应时, 退火温度和延伸温度间的差距较小 当退火温度超过 60 时, 退火温度和延伸温度就可以设定在同一数值, 此时进行二阶段温度 PCR 反应, 效果颇佳 Q: 使用 Long Taq DA Polymerase, 是否必须采用二阶段温度法? A: 不是, 当使用 20 mer 左右的引物进行长片段 PCR 扩增时, 进行三阶段温度 PCR 反应较好,20mer 左右的引物也在诸多实验中成功地进行过 Long PCR 更多信息请参见 : 免费电话 : people@tiangen.com 120 量 荧

20 二PCR RT 及荧光定更多信息请参见 : 免费电话 : people@tiangen.com Taq Platinum DA Polymerase 超纯热启动高保真耐热 DA 聚合酶 量产品内容酶贮存缓冲液保存条件 10 Taq Platinum Buffer 20 mm Tris-HCl (ph8.0) 0.1 mm EDTA 1 mm DTT 100 mm KCl 50% Glycerol Stabilizers 目录号 产品名称 包装 价格 ET Taq Platinum DA Polymerase 250 U, 2.5 U/µl 250 元 ET ( 含预混 Mg 2+ 的 10 Taq Platinum Buffer) 500 U, 2.5 U/µl 460 元 KT Taq Platinum PCR MasterMix 1 ml 270 元 KT ( 含染料 ) 5 1 ml 1250 元 KT Taq Platinum PCR MasterMix 1 ml 270 元 KT ( 不含染料 ) 5 1 ml 1250 元 Buffer I Buffer II 200 mm Tris-HCl (ph8.8) 200 mm Tris-HCl (ph9.0) 200 mm KCl 100 mm KCl 100 mm (H 4 ) 2 SO mm (H 4 ) 2 SO 4 15 mm MgSO 4 15 mm MgSO 4 其它 其它 -20 保存 反应举例以基因组 DA 为模板, 扩增 1kb 的片段 121 活性定义 Template < 1 µg Primer 1 (10 µm) 1 µl Primer 2 (10 µm) 1 µl 10 Taq Platinum Buffer 5 µl dtp Mixture (2.5 mm each) 4 µl Taq Platinum (2.5 U/µl) µl ddh 2 O up to 50 µl 主要技术参数 1 单位 (U) Taq Platinum DA Polymerase 活力定义为 min 内, 以活性化的大马哈鱼精子 DA 作为模板 / 引物, 将 10 nmol 脱氧核苷酸掺入到酸不溶物质所需的酶量 质量控制检测 SDS-PAGE 检测纯度大于 99%; 经检测无外源核酸酶活性 ; PCR 方法检测无宿主残余 DA; 能有效地扩增人基因组中的单拷贝基因 ; 室温存放一周, 无明显活性改变 有 5-3 外切核酸酶活性和 3-5 外切酶活性, 保真度仅次于 Pfu 聚合酶 DA 聚合时的延伸速度比 Pfu 聚合酶快, 扩增效率更高 PCR 产物可直接进行平末端连接或 TA 载体克隆, 如需提高克隆效率, 建议先纯化, 加 A 后再进行 TA 载体克隆 适用范围 可替代 Pfu 聚合酶, 用于从复杂模板中如基因组等扩增高保真产物, 如表达基因的克隆 基因的定点突变和细胞内基因点突变的分析 (SP) 等 94 5 min sec sec 30 Cycles 72 2 min 72 5 min PCR 反应结束取 5 µl 电泳检测结果

21 光定产品说明 Taq Platinum DA Polymerase 二PCR RT 及一管便捷式 Taq Platinum MasterMix ( 国家高新技术产品认证 ) 显著提高 PCR 反应的特异性和灵敏度, 还能有效扩增 GC 含量高 二级结构等复杂模板 最低可扩增 2 个拷贝的目的模板, 使实验结果更加精确 独创的 Taq Platinum MasterMix 配方使整个反应体系非常稳定, 多次冻融或长期放于 4 亦不会影响活性 稳定高效预配好的 PCR 混合液快速简便, 大大降低劳动强度和取样误差, 而且加入了高性能的 PCR 增强剂和优化剂, 降低了对 PCR 条件的要求 分成含染料和不含染料两种体系 含染料的 MasterMix 产品在 PCR 结束后可以直接电泳, 无需加入上样缓冲液 设计 PCR 引物时的注意事项 引物长度通常为 mer 但进行长片段 PCR 时, 引物长度应增长为 mer 二条引物之间不能互补配对, 特别对 3 端的 3 个碱基需特别注意 GC 含量在 50-60%, 避开局部富含 GC 或 AT, 为了使引物和模板稳定结合,3 端避开 AT rich 结构 避开引物自身形成二级结构 选择 Tm 温度相互接近的两条引物 PCR 用引物的 Tm 值的计算方法 引物为 20 mer 以下时 :Tm=2 (A+T)+4 (G+C) 引物为 20 mer 以上时 :Tm= (GC%)-600/L 其中 L 为引物的长度 在 PCR 反应过程中选择退火温度时, 一般为 (Tm-5) PCR 引物使用量合适的终浓度可在 0.1 µm-1.0 µm 之间选择 引物浓度过低导致扩增产物太少, 引物浓度过高则比较容易出现非特异性扩增 通常模板 DA 的量较多或复杂模板 DA ( 例如人基因组 DA) 作为模板时, 引物浓度应低一些 ; 当模板 DA 的量较少或简单模板 DA( 例如质粒 DA 等 ) 作为模板时, 引物浓度应高一些 更多信息请参见 : 免费电话 : people@tiangen.com Taq Platinum DA Polymerase 是经过化学修饰的热启动耐热聚合酶, 具有 3-5 外切酶活性和 5-3 外切核酸酶活性 常温时 Taq Platinum DA Polymerase 的酶活性被封闭,94 加热 5-10 min 才能恢复正常活力, 从而避免了 PCR 反应起始循环前低温条件下由引物非特异性退火或引物二聚体引起的非特异性扩增, 大大提高了 PCR 反应的灵敏度 及特异性 同时 Taq Platinum DA Polymerase 具有很高的保真度, 仅次于 Pfu 聚合酶, 且 DA 聚合时的延伸速 度比 Pfu 聚合酶快, 扩增效率更高 122 量 荧

22 二PCR RT 及荧光定更多信息请参见 : 免费电话 : people@tiangen.com SuperPure Taq DA Polymerase 高纯度 高活性 高稳定性 Taq DA 聚合酶 产品简介 量产品特点保存条件 高纯度 高活性 高稳定性 无核酸酶污染 无核酸污染 -20 保存 目录号 产品名称 包装 价格 ET SuperPure Taq DA Polymerase( 含预混 Mg 2+ 的 Buffer) 500 U,5U/µl 260 元 ET SuperPure Taq DA Polymerase(Mg 2+ Free 的 Buffer 和 MgCl 2 ) 500 U,5U/µl 260 元 SuperPure Taq DA Polymerase 是从克隆有 Thermu aquaticus DA Polymerase 基因的大肠杆菌中经诱导表达和特殊分 离纯化工艺制备的 具有高纯度 高活性 高稳定性, 无核 酸酶残留等特点 其分子量为 94 kda SuperPure Taq DA Polymerase 具有 5-3 DA 聚合酶活性和 5-3 外切核酸 酶活性, 而无 3-5 外切酶活性 在 PCR 反应中,Super- Pure Taq DA Polymerase 延伸速度为 1-2 kb/min, 产物 3 端带 A, 可直接用 TA 载体克隆 反应举例 123 以人基因组 DA 为模板, 扩增 1 kb 的片段 Template <1 µg Primer 1(10 µm) 1 µl Primer 2(10 µm) 1 µl 10 Taq Buffer 5 µl dtp Mixture(2.5 mm) 4 µl SuperPure Taq DAPolymerase (5 U/µl) µl ddh 2 O 补至 50 µl 活性定义 94 3 min sec 1 单位 (U) SuperPure Taq DA Polymerase 活力定义为在 min 内, 以活性化的大马哈鱼 精子 DA 作为模板 / 引物, 将 10 nmol 脱氧核苷酸 掺入到酸不溶物质所需的酶量 质量控制检测 SDS-PAGE 检测纯度大于 99%; 经检测无外源核 酸酶活性 能有效扩增人类基因组单拷贝基因 ; 室 温存放一周, 无明显活性改变 适用范围 一般用于 DA 片段的 PCR 扩增 DA 标记 引 物延伸 序列测定 平末端加 A 等, 产物可以直接 用于 T/A 载体克隆 sec 30 cycles 72 1 min 72 5 min

23 光定High Affinity HotStart Taq 高亲和力抗体修饰热启动 DA 聚合酶 产品包装 二PCR RT 及本产品中的 High Affinity HotStart Taq 是 Taq DA 试剂盒组成 ET ET Polymerase 和其单克隆抗体的混合制品, 适用于 HotStart High Affinity HotStart Taq(5 U/ µl)250 U 500 U PCR 实验 在 PCR 反应高温加热前,Taq 单克隆抗体会与 10 HA Buffer 1.8 ml 1.8 ml 更多信息请参见 : 免费电话 : people@tiangen.com 5 Probe qpcr Buffer 1 ml 2 1 ml Taq 酶结合, 抑制其聚合酶活性 本产品中高亲和力抗体可以 保证在常温条件下完全屏蔽 Taq 酶活性, 使整个反应体系具 产品特点 有很高的特异性 另外, 本产品中的 Taq DA Polymerase 具 高亲和体系 :High Affinity HotStart Taq 是特异性抗 有较高的模板亲和力, 可以提高扩增的效率以及特异性 该试 体修饰的热启动型 DA 聚合酶, 其抗体亲和力高 ; 剂盒所产生的 PCR 产物 3 末端为 A, 可直接用 TA 载体克隆 同时 Taq DA Polymerase 具有较高的模板亲和力, 下游应用 具有稳定的扩增效率, 和高的特异性 ; 该酶配合精 普通 PCR, 多重 PCR, 染料法和探针法 Real-Time PCR 心优化的 Buffer 体系, 使得 PCR 反应同时具有灵 敏度高的优点 注意事项 稳定性强 : 对于复杂模板, 低拷贝模板的 PCR 反 1. 在进行普通 PCR 反应和染料法定量 PCR 反应时, 不需 应以及多重 PCR 反应等普通 DA 聚合酶无法完成 要额外的加入 5 Probe qpcr Buffer, 只有在进行探针 的实验, 本产品都具有较高的反应成功率 法定量 PCR 时才需要额外加入 5 Probe qpcr Buffer 应用广泛 : 本产品不但适用于普通 PCR 分析, 还 2. 在进行探针法定量 PCR 时, 引物终浓度为 250 nm, 探 适用于定量 PCR 分析 针终浓度为 200 nm 可以在大多数体系中获得良好的扩增结果 如果需要进一步优化引物浓度的, 可以在 50- 保存条件 900 nm 范围内调整 ; 需要进一步优化探针浓度的, 可以 -20 保存 在 nm 范围内调整 实验例 建立染料法 Real-Time PCR 反应体系 : Template < 5 µl dtps(2.5 mm,each) 1.6 µl 正向引物 (10 µm) 0.5 µl 反向引物 (10 µm) 0.5 µl 10 HA Taq Buffer 2.0 µl High Affinity Hotstart Taq(5 U/ µl) 0.2 µl 20 SYBR Solution 1.0 µl 50 ROX Reference Dye* - 本实验应用 ET108 配置的 SYBR Rase-Free ddh 2 O 至 20 µl Green 荧光定量试剂对人 Hela 细胞 反应程序 总 RA 的 GAPDH 进行荧光定量 结果,cDA 合成应用 FastQuant 阶段 循环 温度 时间 内容 荧光信 RT Kit (KR106) 试剂盒,cDA 用号采集量相当于 20 ng -2 pg 的总 RA 预变性 min 预变性 否 PCR 反应 sec 变性 否 sec 退火 / 延伸 是 熔解曲线 熔解曲线 是 产品简介 目录号 包装 价格 ET U,5 U/ µl 450 元 ET U,5 U/ µl 830 元 124 量 荧

24 二PCR RT 及荧光定更多信息请参见 : 免费电话 : people@tiangen.com 多重 PCR 扩增试剂盒 Multi PCR Kit 超高活性高特异的耐热 DA 聚合酶 产品包装 试剂盒组成 50 次 100 次 (250U) (500U) Multi HotStart DA Polymerase 250 U 500 U 10 Multi HotStart PCR Buffer 1.8 ml 1.8 ml 超纯 dtps (2.5 mm) 240 µl 500 µl MgCl 2 (25 mm) 1.8 ml 1.8 ml ddh 2 O 2 1 ml 5 ml 量保存条件活性定义主要技术参数 -20 保存 产品简介 1 单位 (U) HotStart Taq DA Polymerase 活力定义为在 min 内, 以活性化的大马哈鱼精子 DA 作为模板 / 引物, 将 10 nmol 脱氧核苷酸掺入到酸不溶物质所需的酶量 有 5-3 外切核酸酶活性, 无 3-5 外切酶活性, 具有最强的特异性 PCR 产物 3 端为 A, 可直接用于 TA 克隆 反应举例以人基因组为模板, 扩增 7 个不同片段 (100 bp-1000 bp) 125 Template 100 ng 10XPrimer mix(2 µm each) 5 µl 10xMutli HotStart Buffer 5 µl dtps 200 µm Multi HotStart(5U/µl) 1 µl ddh 2 O up to 50 µl 目录号产品名称包装价格 KT 次 (250 U) 1200 元多重 PCR 扩增试剂盒 KT 次 (500 U) 2300 元 该试剂盒是专门为多重 PCR 研发的专项产品, 包含多重 PCR 实验所需的全套试剂 其中 Multi HotStart DA Polymerase 是目前发现的所有热启动酶中性能最好的耐热聚合酶 该酶利用化学修饰实现热启动, 必须 95 加热 15 min 才能充分释放酶活, 保证了极高的特异性 可以满足多组 PCR 引物在同一体系中进行良好的扩增, 灵敏的进行多重 PCR 反应 该酶在低温或常温无聚合酶活性, 可在常温进行 PCR 体系配制 高纯度 dtps 可以进一步保证扩增的特异性 如果模板特殊, 可以通过调节 Mg 2+ 的浓度改善扩增效果 产品特点 高特异性 : 化学修饰的热启动酶, 激活时间长达 15 min, 保证高特异扩增 高灵敏性 : 可以实现低拷贝扩增和多重 PCR 的高效扩增 操作简便 : 该酶在低温和常温下无活性, 可在室温进行试 剂的配制 适用范围 多重 PCR 实验 高特异性检测实验 低拷贝扩增实验 复杂结构模板的 PCR 扩增 ( 如结构复杂的 genomic DA, cda 等 ) min sec sec 40 Cycles sec min 注意 :1 多重 PCR 时扩增不同长度的延伸时间确定 : 扩增小于 500 bp 片段延伸 60 sec; 扩增 bp 片段延伸 90 sec; 扩增 2000 bp 以上片段延伸 120 sec 2 热启动必须保证 95 加热 15 min, 以确保酶活释放充分

25 光定一管便捷式 PCR MasterMix 由于 PCR 极高的灵敏性, 此技术最令人头痛的问题是易污染, 极其微量的污染即可产生假阳性反应, 从而影响检测结 果的准确度 随着 PCR 技术的日益普及, 人们试图努力使 PCR 过程更加简化和 PCR 结果更加精确 许多生物技术 公司开始寻找能使耐热 DA 聚合酶在 PCR 反应体系中和在室温下更加稳定的活性增强剂和稳定剂 由于多种稳定剂 的发现, 稳定高效预配好的 PCR 混合液不仅简化了操作程序而且减少了在配制过程中多种溶液被 PCR 核酸模板污染 的可能性, 同时也大大减少在加样过程中人为造成的误差, 有效地提高了 PCR 反应的特异性 制出一管便捷式 PCR MasterMix 和双组分简单型 PCR 反应系统 (Golden PCR System) 该产品与国内外几家生物 技术公司生产的同类产品比较, 具有以下显著特点 : 灵敏度高 可扩增 2 个拷贝的目的模板 这主要是由于优质的 PCR 聚合酶和最适的反应体系 特异性强 PCR MasterMix 中加入了高性能 PCR 增强剂和优化剂, 适用于常规 PCR 反应和一些结构复杂的模板, 如 GC 含 量高 (>80%), 有二级结构等, 也可有效扩增 降低了对 PCR 条件的要求, 增加了 PCR 反应的特异性, 使实 验结果更加精确 产品列表 目录号 产品名称 包装 价格 KT Taq PCR MasterMix 1 ml 150 元 KT ( 含染料, 蓝色 ) 5 1 ml 600 元 KT Taq PCR MasterMix 1 ml 150 元 KT ( 不含染料, 无色 ) 5 1 ml 600 元 KP Pfu PCR MasterMix 1 ml 180 元 KP ( 含染料, 蓝色 ) 5 1 ml 850 元 KP Pfu PCR MasterMix 1 ml 180 元 KP ( 不含染料, 无色 ) 5 1 ml 850 元 KT Taq Plus PCR MasterMix 1 ml 180 元 KT ( 含染料, 蓝色 ) 5 1 ml 850 元 KT Taq Plus PCR MasterMix 1 ml 180 元 KT ( 不含染料, 无色 ) 5 1 ml 850 元 KT HotStart Taq PCR MasterMix 1 ml 270 元 KT ( 含染料, 蓝色 ) 5 1 ml 1250 元 KT HotStart Taq PCR MasterMix 1 ml 270 元 KT ( 不含染料, 无色 ) 5 1 ml 1250 元 KT Taq Platinum PCR MasterMix 1 ml 270 元 KT ( 含染料, 蓝色 ) 5 1 ml 1250 元 KT Taq Platinum PCR MasterMix 1 ml 270 元 KT ( 不含染料, 无色 ) 5 1 ml 1250 元 KT GC-Rich PCR MasterMix( 含染料 ) 500 µl 150 元 KT GC-Rich PCR MasterMix( 不含染料 ) 500 µl 150 元 公司科技人员查阅了大量的国外文献, 在国外科学家现有的研究成果基础上, 经过大量的科学实验, 自行研 126 量 荧

26 二PCR RT 及荧光定更多信息请参见 : 免费电话 : people@tiangen.com 技术参数 每种预混体系主要参数与体系中所使用的相对应的聚合酶相同 Taq MasterMix Pfu MasterMix 量用量举例 Taq Plus MasterMix HotStart Taq MasterMix Taq Platinum MasterMix 2 GC-Rich MasterMix 应用最广泛, 灵敏度最高 保真度最高 稳定性最好 兼高保真和高效率为一体 有效减少背景 增强特异性 特异性强, 保真度高 应用于高 GC 模板的扩增 使用一管便捷式 PCR MasterMix 产品, 反应体系为 50 µl ( 如 反应体系不同, 可按此比例增加或减少用量 ) Template <1 µg Primer 1 (10 µm) 2 µl Primer 2 (10 µm) 2 µl 2 MasterMix 25 µl ddh 2 O up to 50 µl 一管便捷式 MasterMix 所含成分的反应终浓度 10 mm Tris-HCl (ph8.3) 50 mm KCl 1.5 mm MgCl µm dtp each 0.05 U Polymerase/µl ddh 2 O 其它稳定剂和增强剂 127 KT PCR Reagent( 含染料 ) 1 ml 280 元 KT HotMaster PCR MasterMix 1 ml 270 元 KT ( 含染料, 蓝色 ) 5 1ml 1250 元 质量控制检测经检测无外源核酸酶活性 ;PCR 方法检测无宿主 使用流程简介 DA 残留 ; 能有效地扩增人基因组中的单拷贝基因 ; 室温存放一周, 无明显活性改变 产品稳定性一管便捷式 PCR MasterMix 系列所有产品在 -20 条件下可保存一年以上, 多次冻融或长期放于 4 不影响活性 4 放置三个月, 无明显活性改变 Step 1: 按比例混合各种组分 Step 2: 马上开始实验 Step 3: 含染料 Mix 直接电泳 Step 4: 满意的实验结果 2XMasterMix 模板引物 一管便捷式 PCR MasterMix

27 光定2 GC-Rich PCR MasterMix 适用高 GC 模板扩增的高保真 PCR MasterMix ( 不含染料 ) 产品简介 产品特点 本产品包含 Taq Plus DA 聚合酶 dtps MgCl 2 高效扩增高 GC 含量目的片段 : 优化的缓冲体系与独特配 反应缓冲液 PCR 反应的增强剂和优化剂以及稳定剂, 方有助于 GC 含量高模板解链, 最大限度发挥酶的扩增效 浓度为 2 具有快速简便 灵敏度高 特异性强 稳 率 (60%-75%GC 含量 ) 定性好等优点, 可最大限度的减少人为误差 适用于 对复杂模板 二级结构非常有效 保真度较高的 PCR 反应和结构复杂的模板如 GC 含量 高保真度 :PCR MasterMix 中采用高保真酶, 保证扩增的 高, 有二级结构等的扩增, 对简单模板可有效扩增长 准确性 达 20 kb, 对复杂模板也可达 10 kb 高效 超强稳定的预混系统, 可最大限度的减少人为误差 保存条件 -20 保存 2x PCR Reagent 扩增灵敏性与兼容性超强 专供于 DA 提取扩增套装试剂盒的 PCR 试剂 目录号 产品名称 包装 价格 KT PCR Reagent( 含染料 ) 1 ml 280 元 产品简介 产品特点 2 PCR Reagent 是一种扩增灵敏性与兼容性很强 广泛应用于扩增各种来源样本 DA, 如植物叶片 植物 专供于 DA 提取扩增套装试剂盒的 PCR 试剂, 无需 种子 动物组织 细菌来源等样本, 特别适合于扩增复杂 彻底去除蛋白等杂质, 便能进行高效特异扩增, 该试 样本 DA 或低含量 DA 样本, 如革兰氏阳性细菌 病毒 剂包含 Taq Plus DA 聚合酶 dtps MgCl 等来源样本 PCR 扩增 2 反应 显著提高 PCR 反应的特异性和灵敏度, 还能有效扩增缓冲液 PCR 反应的增强剂和优化剂及稳定剂 具有 GC 含量高 二级结构等复杂模板 最低可扩增 2 个拷贝快速简便 灵敏度高 特异性强 稳定性好等特点, 的目的模板, 使实验结果更加精确 特别适合于高通量的筛选 独创的 2 PCR Reagent 配方使整个反应体系非常的稳 定, 多次冻融或长期放于 4 亦不会影响活性 保存条件 稳定高效预配好的 PCR 混合液快速简便, 大大降低劳动 -20 保存 强度和取样误差, 而且加入了高性能的 PCR 增强剂和优 化剂, 降低了对 PCR 条件的要求 含染料的 2 PCR Reagent 产品在 PCR 结束后可以直接 电泳, 无需加入上样缓冲液 目录号 产品名称 包装 价格 KT GC-Rich PCR MasterMix ( 含染料 ) 500 µl 150 元 KT GC-Rich PCR MasterMix 500 µl 150 元 128 量 荧

28 二PCR RT 及荧光定更多信息请参见 : 免费电话 : people@tiangen.com 2 HotStart Taq PCR MasterMix 产品简介 量产品说明 目录号产品名称包装价格 KT HotStart Taq PCR MasterMix 1 ml 270 元 KT ( 含染料 ) 5 1 ml 1250 元 KT HotStart Taq PCR MasterMix 1 ml 270 元 KT ( 不含染料 ) 5 1 ml 1250 元 本产品包含 HotStart Taq DA 聚合酶 dtps MgCl 2 反应缓冲液 PCR 反应的增强剂和优化剂以及稳定剂, 浓度 为 2 具有快速简便 灵敏度高 特异性强 稳定性好等优点, 可最大限度的减少人为误差 适用于高特异性 PCR 反应 复杂模板如 GC 含量高 (>60%), 有二级结构等的扩增和大规模基因检测 一管便捷式 HotStart Taq MasterMix ( 国家高新技术产品认证 ) 显著提高 PCR 反应的特异性和灵敏度, 还能有效扩增 GC 含量高 二级结构等复杂模板 最低可扩增 2 个拷贝的目 的模板, 使实验结果更加精确 独创的 HotStart Taq MasterMix 配方使整个反应体系非常稳定, 多次冻融或长期放于 4 亦不会影响活性 稳定高效预配好的 PCR 混合液快速简便, 大大降低劳动强度和取样误差, 而且加入了高性能的 PCR 增强剂和优化剂, 降低了对 PCR 条件的要求 分成含染料和不含染料两种体系 含染料的 MasterMix 产品在 PCR 结束后可以直接电泳, 无需加入上样缓冲液 129

29 光定2 HotMaster PCR MasterMix 特异片段扩增的最佳选择 二PCR RT 及产品简介 产品特点 更多信息请参见 : 免费电话 : people@tiangen.com HotMaster Taq DA 聚合酶采用了创新的合成亲和性配体技 简单快捷 : 稳定高效预配好的 PCR 混合液快速 术, 该配体可以以一种温度依赖性的方式来可逆性地阻断酶的 简便, 大大降低了劳动强度和取样误差, 分含染 活性, 利用抑制性配体通过温度调节方式封闭聚合酶的底物结 料和不含染料两种体系, 含染料的体系在 PCR 合位点, 温度低于 40 时, 形成非活性的酶 - 抑制剂复合物, 结束后可以直接电泳, 无需加入上样缓冲液 当温度升高至引物特异性的退火温度时, 结合平衡向模板 - 特 超强扩增 : 采用独特的 PCR 缓冲液, 超强扩增 异性引物复合物形成方向移动, 可最大限度的减少 PCR 扩增 超高灵敏度 : 添加特殊研制 PCR 增强剂和优化剂, 全程中的非特异性扩增产物产生, 大大提高了 PCR 反应的精 降低 PCR 要求, 可扩增低至 2 拷贝模板 确性 稳定高效 : 独创的 PCR MasterMix 配方使整个 2 HotMaster PCR MasterMix 包含 HotMaster Taq DA 聚 反应体系非常稳定, 多次冻融或长期放于 4 亦 合酶 dtps MgCl 2 反应缓冲液 PCR 反应的增强剂和 不会影响活性 优化剂以及稳定剂, 浓度为 2 具有快速简便 灵敏度高 超强特异性 : 采用了创新的合成亲和性配体技术, 特异性强 稳定性好等优点, 可最大限度的减少人为误差 适 该配体可以以一种温度依赖性的方式来可逆性地 用于高灵敏度和有较强背景的基因组扩增 DA 序列测定 阻断酶的活性 能最大限度的减少 PCR 扩增全 MultiPlex PCR TA 克隆等 程中的非特异性扩增产物产生, 大大提高了 PCR 反应的精确性与特异性 实验例 特异性扩增实验 灵敏度扩增实验 稳定性扩增实验 M HotMaster A-HotStart Taq MIX M 10ng 1ng 0.1ng 0.01ng 0.001ng TC M 10 次 15 次 20 次 25 次 30 次 TC 以 50 ng 人类基因组为模板 (50 μl 以 λda 为模板 (50 μl PCR 体系 ), 设置 以 100 ng 人类基因组为模板 (50 μl PCR 体系 ), PCR 体系 ), 扩增 2 kb 有较强非特 ng,0.01 ng,0.1 ng,1 ng,10 ng 五个模板梯 以 SRY 基因特异引物扩增 201βρ 特异片段, 异扩增的目的片段, 设置 2 Hot- 度, 每个模板设置 2 个实验重复, 并设置无菌 设置 2 HotMaster PCR MasterMix 反复冻融 10 Master PCR MasterMix, 国外 A 公 水阴性对照, 以 λ1500 特异引物为引物, 用 次,15 次,20 次,25 次,30 次 5 个反复冻融梯 司 HotStart MasterMix 和 Taq PCR 2 HotMaster PCR MasterMix 扩增 1500 bp 特 度, 每个冻融实验设置 2 个重复, 结果显示, MasterMix 对照, 每种 MasterMix 异片段, 结果显示, 即使模板低至 ng 仍 2 HotMaster PCR MasterMix 反复冻融高达 30 实验设置 2 个重复,8 μl PCR 产物 有较强扩增, 不同模板扩增显示出较好的产物 次后,PCR 结果一致, 说明 PCR MasterMix 产 的琼脂糖凝胶电泳结果, 结果显示 梯度, 显示出 2 HotMaster PCR MasterMix 超 品中独特的稳定成分能在反复冻融中很好的保护 出了 2 HotMaster PCR MasterMix 强扩增能力 MasterMix 中的耐热聚合酶, 最大限度的保持酶 较强特异性 活性 目录号产品名称包装价格 KT KT HotMaster PCR MasterMix( 含染料 ) 1 ml 5 1 ml 270 元 1250 元 130 量 荧

30 二PCR RT 及荧光定更多信息请参见 : 免费电话 : people@tiangen.com Golden Easy PCR System 双组分简单型 PCR 反应系统 产品包装 量保存条件用量举例 KT KT 组成 KT KT Golden DA Polymerase 250U 500U 2 Reaction Mix( 含染料 ) 5ml 2 5 ml -20 保存 目录号产品名称包装价格 使用双组分简单型 PCR 反应系统 (Golden Easy PCR System) 产品, 反应体系为 50 µl( 如反应体系不同, 可按此比例增加或减少用量 ) Template <1 µg Golden DA Polymerase(2.5U/ µl) 0.5 µl Primer 1(10 µm) 2 µl Primer 2(10 µm) 2 µl 2 Reaction Mix 25 µl ddh 2 O up to 50 µl 质量控制检测经检测无外源核酸酶活性 ;PCR 方法检测无宿主 DA 残留 ; 能有效地扩增人基因组中的单拷贝基因 ; 室温存放一周, 无明显活性改变 产品稳定性使用双组分简单型 PCR 反应系统 (Golden Easy PCR System) 产品, 可在 4 放置一个月, 无明显活性改变 131 Golden Easy PCR System ( 含染料 ) 产品特点 250 元 400 元 稳定性好 : 独特的配方使整个反应体系非常稳定 该 系统含有效 PCR 扩增所需组分如耐热 DA 聚合酶 dtps MgCl 2 和缓冲溶液, 还含有多种特殊的稳定剂, 使酶和 dtp 在常温和 4 条件下稳定性大大增加 快速简便 : 使用方法简单快捷, 只需将两种组分按比 例混合后加入模板和引物即可 省去了一一加入各种 PCR 反应组分的烦恼, 节省您宝贵的时间 最大限度减少取样错误和交叉污染, 不同批次之间误差很小, 可用于半定量实验 应用广泛, 灵敏度高 每种反应系统中都含有染料, 让你的 PCR 和电泳步骤无时间的阻隔, 快速省力 反应终浓度 10 mm Tris-HCl (ph8.3) 50 mm KCl 1.5 mm MgCl µm dtp each U Polymerase/µl ddh 2 O 其它稳定剂和增强剂 使用流程简介 Step 1: 按比例混合各种组分 Step 2: 马上开始实验 Step 3: 含染料 Mix 直接电泳 Step 4: 满意的实验结果 组分 Ⅰ 组分 Ⅱ 组分 Ⅰ:250 U 组分 Ⅱ:5 ml 组分 Ⅰ:500 U 组分 Ⅱ:2 5 ml 模板和引物 双组分简单型 PCR 反应系统 (Golden Easy PCR System)

31 光定快速定点突变试剂盒 Fast Site-Directed Mutagenesis Kit 快速在目标载体上对靶基因进行单点或多点突变 二PCR RT 及产品包装 产品简介 体外定点突变技术是当前生物 医学各领域研究中的一种重要实验试剂盒组成 20 次手段, 多用于改造 优化目的基因 ; 探索启动子的调节位点 ; 以及 FastAlteration DA Polymerase 30 µl 研究蛋白质结构和功能之间的复杂关系 本试剂盒采用目前领先技 (2.5 U/µl) 更多信息请参见 : 免费电话 : people@tiangen.com 5 FastAlteration Buffer 200 µl 术, 可在目标载体上直接对靶基因进行单点突变, 多点突变及插入 Dpn I restriction enzyme(20 U/µl) 20 µl 或缺失突变, 并且单点突变的突变率可达 90% 以上 另外, 与以往 4.5 kb Control plasmid(5 ng/µl) 40 µl 的突变试剂盒需要多轮 PCR 及亚克隆等耗时耗力的步骤不同, 本试 Control primers(5 µm, each) 80 µl 剂盒的操作更为简便, 从未突变菌株到突变菌株的构建只需要 4 步 FDM competent cells µl 产品特点 简便快速 : 试剂盒采用非链取代式质粒扩增技术, 只需 4 步即 保存条件 可实现由非突变菌株到突变菌株的转变, 而不需要多轮 PCR 及 -20 保存 亚克隆等耗时耗力的步骤 FDM competent cells:-80 保存 高效引物 : 试剂盒采用部分重叠的引物设计原则, 可以扩增得 到更多的突变质粒 应用广泛 : 本试剂盒不但可进行单点突变, 还可以进行多点突变, 且突变点数可达 5 个 适应性强 : 本试剂盒最大可对 10 kb 的质粒进行定点突变, 基 本覆盖所有常用质粒 突变率高 : 本试剂盒具有体外和体内双重消化甲基化质粒模板 的功能, 可以保证更高的突变率 点突变反应体系配制及反应程序 在进行单引物多位点突变时, 由于增加了突变位点个数, 所以突变率较单点突变时会有所降低, 根据我们的实验数据, 当突变位点个数达到 5 个时, 突变阳性率会降低到 50% 因此建议客户要增加验证的克隆子数 本试剂盒支持多引物多位点突变, 这样可以在基因内更广泛的范围内同时进行突变实验 突变位点个数的上限仍然 是 5 个 建议在进行新的突变实验时要带上试剂盒附带的对照质粒和引物, 以便于对实验问题进行分析 反应程序 组成成分 50 µl 体系 阶段 循环 温度 时间 内容 DA Template 10~100 ng 预变性 min 预变性 正向突变引物 (10 µm) 2 µl PCR 反应 sec 变性 反向突变引物 (10 µm) 2 µl sec 退火 5 FastAlteration Buffer 10 µl min 延伸 FastAlteration DA Polymerase 补充延伸 min 补充延伸 1.5 µl (2.5 U/µl) 模板消化 37 1 h Dpn I 消化质粒模板 Rase-Free ddh 2 O 至 50 µl 目录号 包装 价格 KM 次 1300 元 132 量 荧

32 二PCR RT 及荧光定更多信息请参见 : 免费电话 : people@tiangen.com 引物设计原则 1 两条引物上都要包含突变位点, 且除突变位点以外的碱基都要与质粒模板互补配对 2 若引物中只有一个突变位点, 则需采用图中 A 的设计原则 此类引物包括 5 重叠区和 3 延伸区两部分 引物总 长度大约为 30 nt, 其中 5 重叠区为 nt,3 延伸区至少为 10 nt 突变位点在正向突变引物的重叠区以后, 反向突变引物的 5 末端 3 若引物上含有 2-5 个突变位点, 则需采用图中 B 的 设计原则 此类引物的两条序列完全互补, 分为突变区和非突变区两部分 引物总长度大约为 40 nt, 其中突变区为 nt, 非突变区至少为 10 nt 根据实验需求可在突变区内设计 2-5 个突变位点 4 为保证高突变率, 突变引物需通过 FPLC 或 PAGE 方式纯化 量常见问题及解决办法 1 转化效率低或菌落数少 原因 反应体系中扩增出的突变质粒量不足增加转化体系的量至 10 µl PCR 反应体系中模板质粒量不足 2 对照组突变率低或者菌落数少 PCR 程序不适宜 原因 解决办法 将模板质粒进行琼脂糖凝胶电泳及定量分析, 以确定质粒的质量和浓度是 否符合试剂盒要求 解决办法 确定 PCR 程序适宜对照组要求, 并用确定后的程序再进行一次对照组实 验以彻底排除 PCR 程序的影响 扩增产物不足可将 PCR 反应的循环数增加至 25 个 感受态细胞保存不当 X-gal 和 IPTG 的用量不足 5 PCR 反应 Buffer 反复冻融 3. 实验组突变率低或者菌落数少 133 PCR 程序不适宜 反应体系混合不均匀 原因 加入 Dpn I 后未混匀充分 转化体系中质粒模板过剩 5 PCR 反应 Buffer 反复冻融 收到试剂盒以后应第一时间将感受态细胞转入 -70 冰箱中保存, 且应将 感受态放于冰箱的里面而不要放在门口 对本试剂盒而言, 应在氨苄抗性的平板上, 涂布 20 µl 0.2 M 的 IPTG 和 40 µl 40 mg/ml 的 X-gal, 才能保证阳性突变株的菌落变为蓝色 此 Buffer 中含有 dtp 等容易降解的成分, 反复冻融会加速这些物质的 降解, 因此, 在实际操作中应尽量避免对 5 PCR 反应 Buffer 的反复冻融 解决办法 确定 PCR 程序适宜实验组要求, 并用确定后的程序再进行一次对照组 实验以彻底排除 PCR 程序的影响 用移液器轻轻吸打将反应体系混合混匀 酶切阶段, 加入 Dpn I 后一定要用移液器轻轻吸打多次以保证 Dpn I 与 PCR 体系混合均匀 质粒模板过剩会极大的影响突变效率 若排除其他影响后, 突变率仍然 很低, 可以考虑增加 Dpn I 的用量至 2 µl 或延长酶切时间至 1.5 h 此 Buffer 中含有 dtp 等容易降解的成分, 反复冻融会加速这些物质的 降解, 因此, 在实际操作中应尽量避免对 5 PCR 反应 Buffer 的反复冻融

33 光定GeneGreen 核酸染料 GeneGreen ucleic Acid Dye 安全无毒高灵敏的 EB 替代染料 产品包装 二PCR RT 试剂盒组成及分子, 降低了传统花菁类核酸染料在电泳过程中对核酸迁移 10,000 GeneGreen ucleic Acid Dye 500 µl 率的影响, 不会产生电泳条带弯曲现象 该染料不能穿透细胞膜进入活体细胞内, 不易挥发而被吸入人体, 诱变性远远低于 EB 可在蓝色可见光激发装置下进行切胶回收, 安全方便, 是一种安全无毒 高灵敏的全新核酸染料 产品特点 安全无毒 : 独特的油性大分子特点使其不能穿透细胞膜进入细胞内, 该染料的诱变性远小于 EB 完美兼容 : 既适用于 254 nm 紫外凝胶成像系统, 也适用于蓝色可见光激发装置 在蓝光下进行切胶操作时, 既可避免紫外切胶对操作人员眼睛和皮肤造成的伤害, 又可避免核酸产物长时间暴露在紫外光下发生损伤 灵敏度高 : 荧光信号强, 背景信号低, 具有高信噪比 实验例 GeneGreen 核酸染料配合天根的切胶仪 (OSE-470) 的使用效果 GeneGreen 染色紫外成像效果 GeneGreen 染色蓝光观察效果 EB 染色紫外成像效果 2 倍梯度稀释 Marker III, 包括原浓度共 6 个梯度,DA 上样量 6 µl, 最亮条带 (1200 bp) 依次为 100 ng,50 ng,25 ng,12.5 ng,6.25 ng,3.125 ng 结论 : 在紫外成像下,GeneGreen 与 EB 灵敏度相当, 但 GeneGreen 在蓝光下灵敏度比 EB 染色紫外成像灵敏度更高, 使用也更加灵活方便 更多信息请参见 : 免费电话 : people@tiangen.com 保存条件 2-8 避光保存 产品简介 GeneGreen 核酸染料是一种以花菁为基础进行改良的油性大 目录号 包装 价格 RT µl 550 元 134 量 荧

34 二PCR RT 及荧光定更多信息请参见 : 免费电话 : people@tiangen.com dtp 高质量的脱氧核糖核苷酸 产品列表 量保存条件产品简介 -20 保存 高质量的脱氧核糖核苷酸 (dtp) 对 cda 合成 测序和标记等反应的成功非常重要 本产品经严格的质量检测, 不含 有 Rase 和 Dase 产品类型 HPLC 纯度适用范围 超纯 dtp (Super Pure dtp) dtp (High Pure dtp) 产品组成 达到 99.9% 达到 99% 可用于要求较高的 PCR 反应 ( 如 RealTime PCR) DA 序列测定, 分子标记 cda 合成等 可用于要求较高的 PCR 反应及常规 PCR 反应 可靠 : 经过 PCR 检测的脱氧核苷酸确保使用所有 公司的耐热聚合酶均有满意的结果 超纯 :dtp 纯度均达到 99% 以上, 不含 Dase 和 Rase 超纯 dtp /dtp (2.5 mm each) : 是 datp dgtp dctp dttp 的等摩尔混合物, 可作为 DA 聚合酶的底物使用 进行 PCR 反应时, 不用稀释即可直接使用 用于 PCR 的标准使用量是每 100 µl 反应液用 8 µl( 终浓度为各 200 µm) 超纯 dtp /dtp (10 mm each) : 是 datp dgtp dctp dttp 的等摩尔混合物, 按实验需要, 直接用适当的 缓冲液稀释即可使用 作为 PCR 反应底物时, 请用无菌超纯水稀释成适当浓度使用 产品特点 135 目录号产品名称包装价格 CD CD CD CD CD CD CD CD CD CD CD CD Super pure dtps (2.5 mm each) Super pure dtps (10 mm each) Super pure datp (100 mm) Super pure dgtp (100 mm) Super pure dctp (100 mm) Super pure dttp (100 mm) dtps (2.5 mm each) dtps (10 mm each) 1 ml 5 1 ml 1 ml 80 元 360 元 300 元 5 1 ml 1350 元 0.5 ml 0.5 ml 0.5 ml 0.5 ml 1 ml 5 1 ml 1 ml 5 1 ml 350 元 350 元 350 元 350 元 50 元 220 元 180 元 800 元

35 光定PCR 引物 引物信息 二PCR RT 及引物 序列 适用范围 更多信息请参见 : 免费电话 : people@tiangen.com Oligo(dT) TTTTTTTTTTTTTTT-3 适用于具有 Poly A 尾巴的 RA, 建议每 20 µl 反应体系加入 µg Oligo dt 保存条件 -20 保存 规格 浓度为 10 µm, 溶于 10 mm Tris-HCl (ph7.5),1 mm EDTA 中 PCR Enhancer 目录号包装价格 RP µl 90 元 产品介绍 PCR 增强剂能与所有的耐热 DA 聚合酶共同作用促进许多 DA 模板的有效扩增, 增加 PCR 反应的灵敏度和特异性 在 PCR 反应中,PCR 增强剂主要通过提高 DA 聚合酶的热稳定性, 降低 DA 的二级结构起作用 因此在遇到一些 复杂模板时 ( 如 GC 含量高 ), 可通过提高退火温度, 极大地减少 DA 二级结构对 PCR 的影响, 同时对酶的活性没 有改变 产品特点 Enhancer 适合灵敏度要求较高的 PCR RT-PCR MultiPlex PCR PCR 条件的优化和 GC 含量很高的 DA 扩增 用法 : 使用时将 PCR 增强剂按比例加入反应体系即可 目录号产品名称包装价格 CD106 Oligo (dt) µl(10 µg 即 10 µm) 30 元 公司提供的 PCR 引物, 均为经过 PAGE 纯化的高质量多核苷酸, 可直接用于 PCR 扩增和序列测定等实验 136 量 荧

36 二PCR RT 及荧光定更多信息请参见 : 免费电话 : people@tiangen.com 去离子水 Deionized Water 目录号包装价格 产品介绍 量产品介绍 公司提供的去离子水是利用逆渗透技术, 通过多次交换柱和滤膜去除重金属盐 细菌 有机物 内毒素等杂 质后得到的超纯产品 可用于分子生物学实验 细胞培养 药物研究和仪器分析等 技术指标电阻率 18.2 MΩ.cm ;TOC<5ppb 内毒素 <0.001 EU/ml Dase/Rase-Free 去离子水 Dase/Rase-Free Deionized Water RT ml 30 元 RT ml 70 元 目录号 包装 价格 RT ml 35 元 RT ml 90 元 超纯的去离子水通过中空纤维超滤柱达到降低热源, 内毒素和核酸酶的水平, 可以代替 DEPC 处理过的水使用 经检 测无核酸酶和蛋白酶活性, 可用于 cda 合成 体外转录 RA 提取等对核酸酶敏感的分子生物学实验 137

37 光定快速 DA 提取扩增套装 TIAcombi DA Lyse&Amp PCR Kit DA 提取到 PCR 扩增的直达 1 号 二PCR RT 及产品包装 产品简介 更多信息请参见 : 免费电话 : people@tiangen.com 本试剂盒采用独特的缓冲体系, 包含了快速制备基因组 DA 和 试剂盒组成 50 次 200 次 PCR 扩增的所有试剂, 适用于从植物组织 种子 细菌和动物 裂解缓冲液 12 ml 40 ml 组织一步法提取基因组 DA 并用于 PCR 扩增 整个提取过程 蛋白酶 K 500 µl 2 1 ml 无需液氮研磨, 无需有机溶剂抽提, 无需无水乙醇沉淀, 具有 2 PCR Reagent 500 µl 2 1 ml 快速简便 灵敏度高 特异性强 稳定性好等特点, 特别适合 研磨杵 5 支 5 支 于高通量的筛选 保存条件 产品特点 裂解缓冲液 Proteinase K: 室温 (15-25 ) 保存 简单快速 : 无需液氮研磨,20 min 可以提取到各种组织 2 PCR Reagent: -20 保存 DA 并进行 PCR 实验 应用广泛 : 适用各种植物叶片 种子 细菌 (G + 和 G - 菌 ) 产品应用 动物组织等 快速 DA 提取和 PCR 检测 安全无毒 : 无需酚 氯仿等有机溶剂抽提, 无需无水乙醇沉淀 样本量少 : 只需 10 mg 样本量, 对于样本量少的实验非常适合 功能强大 : 试剂盒包含了快速制备基因组 DA 和 PCR 扩增 的所有试剂 实验例 ( 提取各种材料 DA, 并应用各自特异引物进行 PCR 扩增结果 ) 1 应用植物材料 2 应用动物材料: 3 应用细菌材料: 玉米 大豆 水稻 M 鼠尾 P M G + G - TC M 1 2 P 1 2 P 1 2 P 取 10 mg 玉米 大豆 水稻的叶片 取 10 mg 鼠尾材料进行 分别取 800 µl 生长状态良好, 过夜培养的 和种子材料分别进行 DA 提取扩 DA 提取扩增实验, 图片 大肠杆菌和金黄葡萄球菌进行 DA 提取 增实验, 图片为以快速 DA 提取 为以提取的 DA 为模板 扩增实验, 图片为以提取的 DA 为模板 扩增套装提取的 DA 为模板分别 用 GAPDH 基因特异引物 分别用 16 s rra 基因特异引物进行 PCR 用玉米 (zein 基因 ) 大豆(lectin 进行 PCR 实验后 (2 次实 实验后 (4 次实验重复 ),5 µl PCR 产物 基因 ) 水稻( 第 12 条染色体的 验重复 ),5 µl PCR 产物 的琼脂糖电泳结果, 并用无菌水做阴性对 694 bp 片段 ) 的相应特异引物进行 的琼脂糖电泳结果, 并用 照 ; PCR 实验后,5 µl PCR 产物的琼脂 离心柱型动物组织基因组 M:Marker 糖电泳结果, 并用离心柱型植物基 试剂盒提取 DA 的扩增 G + : 金黄葡萄球菌 因组试剂盒提取 DA 的扩增结果 结果做阳性对照 ; G - : 大肠杆菌 做阳性对照 ; M:Marker TC: 阴性对照 M:Marker 1: 叶片 P: 阳性对照 2: 种子 P: 阳性对照 目录号 包装 价格 KG 次 600 元 KG 次 1920 元 138 量 荧

38 二PCR RT 及荧光定更多信息请参见 : 免费电话 : people@tiangen.com 快速 DA 提取检测试剂盒 TIAcombi DA Lyse & Det PCR Kit 可从多种材料中快速提取 DA 进行 PCR 检测 产品包装 试剂盒组成 50 次 200 次 缓冲液 B1 6 ml 24 ml 缓冲液 B2 6 ml 24 ml 2x Det PCR MasterMix 500 µl µl 量下游应用保存条件实验例 研磨杵 10 个 20 个 基因检测 : 适合大规模的基因检测 -20 保存 产品简介 本试剂盒采用独特的包装体系, 包含了快速制备基因组 DA 和 PCR 扩增的所有试剂, 适用于从植物组织 种子 动物组织 血液样品 酵母和细菌中一步法提取基因组 DA 并用于后续的 PCR 扩增和检测 整个提取过程不包含去蛋白 去 RA 及其它 次生代谢物的过程, 无需有机溶剂抽提, 无需无水乙醇沉淀, 简便 快捷, 而且质量稳定可靠 本试剂盒提供的 2x Det PCR MasterMix 是一种扩增兼容性很强的 PCR 试剂, 无需彻底去除蛋白等杂质, 便能进行高效特异扩增, 该试剂包含 Taq DA 聚合酶 dtps MgCl 2 反应缓冲液 PCR 反应的增强剂和优化剂及稳定剂 具有快速简便 灵敏度高 特异性强 稳定性好等特点, 特别适合于高通量的筛选 产品特点 玉米小麦水稻大豆棉花 M M M M 取 5mg 玉米 小麦 水稻 大豆 棉花的叶片和种子材料, 分别进行基因组的粗提, 再以相应的特异引物进行 PCR 检测,20µl 体系取 6µl 电泳结果 1: 基因组阳性对照 ;2: 叶片样品 ;3: 种子样品 ;4: TC;M: D2000 EDTA 抗凝血血凝块 M 目录号 包装 价格 KG 次 600 元 KG 次 1920 元 简单快速 : 无需液氮,5 min 即可快速提取各种组织 DA 材料广泛 : 适用于植物叶片 种子 动物组织 血液样品 ( 新鲜血 抗凝血 血凝块 干血斑等 ) 酵母和细菌等材料 兼容性强 :PCR 试剂适用于提取的各种来源样本的 DA 扩增 干血斑 M M: D2000;1: 阳性对照 ;2-7: 滤纸片血斑的个数依次为 1-6 个 ;8: 阴性对照 以 3 mm 打孔器取滤纸片血斑为材料进行提取检测实验,20 µl PCR 体系取 6 µl 电泳结果 M: D2000;1: 阳性对照 ( 基因组作模板 ); 2-7: 血液的加入量依次为 10 µl, 20 µl,30 µl,40 µl,50 µl 和 60 µl; 8-13: 血液的加入量依次为 10 µl,20 µl, 30 µl,40 µl,50 µl 和 60 µl; 14:TC 20 µl PCR 体系取 6 µl 电泳结果 注意事项 对于类似于棉花叶片这种含有酚类较多的样品, 应严格控制样品处理量不超过 0.4 mg, 否则会影响 PCR 反应 139

39 G 目录号 无需提取 直接以血液为模板快速扩增目的基因 IA T 产品组成 100 次 500 次 (20 μl 体系 ) (20 μl 体系 ) 2 Blood Direct PCR MasterMix 1 ml 5 1 ml Rase-free ddh2o 1 ml 5 1 ml E 下游应用 G G IA 基因分型 如基因缺失 等研究 T 实验例 T G IA A I T IA T G TI A I A TI 具有超强抗 PCR 抑制物能力 可直接以血液 / 培养细胞为模板 G 进行 PCR 扩增 操作简便 无需进行 DA 的纯化或样品前处 理等繁琐步骤 试剂盒的 PCR 组分为 2 预混 Mix 只需加入 A I T 血液模板和相应检测引物即可进行反应 适于人 小鼠 猪 产品特点 E E G E T 更多信息请参见 : G 简便快捷 直接以血液为模板进行 PCR 鉴定 告别样本前 处理和 DA 提取等繁琐步骤 纯度高 不需前处理和 DA 提取过程 避免样本交叉污染问题 通量高 配合 96/384 孔 PCR 板使用 可进行大规模样本 的 PCR 鉴定工作 普适性强 有效扩增高 GC 或具有复杂二级结构的片段 扩 增长度可达 5 kb 抗逆性强 适用于多物种 多种不同保存方式的血液样品 G A I IA T E Whatman903 和 FTA Elute 商用卡上的干血斑等样本 PCR 检测 G E E G A E 扩增人基因组中的单拷贝基因 配合精心优化的 Buffer 体系 E G T E G 本试剂盒利用基因工程改造的抗抑制性 DA 聚合酶 能有效地 A I T G A I T E E T A I T 800 元 3600 元 血 抗凝血 (EDTA 柠檬酸盐 肝素 ) 液化的血凝块及贮存在 2-8 条件下可储存 3 个月 长期保存请置于 -20 避免反复冻融 100 次 500 次 牛等哺乳动物和禽类等物种的培养细胞 新鲜及 4 储存冷冻全 于基因组 DA 片段的扩增检测 高通量遗传分析和 保存条件 G KG KG E PCR 产物 3 端为 A 可直接用于 TA 载体克隆 可用 IA A I T 产品简介 价格 及荧光定量 RT G 产品包装 E 包装 PCR E E 二 血液直接 PCR 试剂盒 Blood Direct PCR Kit 免费电话 : T G A E GI T A I E E G T A I E G E E G G A I TTIA TIA people@tiangen.com 140

40 二PCR RT 及荧光定更多信息请参见 : 免费电话 : people@tiangen.com GMO 作物提取检测试剂盒 GMO Crop Extraction & Amplification Kit 特别适合 GMO 作物转基因 PCR 检测 产品包装 A 部分 缓冲液 PL 量下游应用 Rase A 洗脱缓冲液 TE B 部分 2 GMO PCR Buffer 141 自备试剂巯基乙醇 苯酚 氯仿 异戊醇 异丙醇 70% 乙醇 保存条件 A 部分 : 室温 (15-25 ) 保存 B 部分 :-20 保存 该产品可对主要的 GMO 作物, 如小麦 玉米 水稻 棉花和大豆等进行高质量基因组 DA 的 提取, 并针对 GMO 作物进行转基因 PCR 检测 实验例 200 次 160 ml 1.25 ml(100 mg/ml) 2 15 ml 400 次 4 ml GMO DA Polymerase 400U(2.5U/µl) 分别对水稻 玉米 大豆 棉花和小麦的叶片进行基因组 DA 提取, 重复 2 次 100 µl 洗脱, 取 3 µl 电泳效果 D15000: D15000 DA Marker 目录号 包装 价格 KG202 A 部分 : 200 次 1280 元 B 部分 : 400 次 产品简介本产品是特别针对 GMO 作物 PCR 检测所开发的试剂盒 试剂盒 A 部分所含有的独特裂解液可针对性地将小麦 玉米 水稻 棉花和大豆五种主要作物的组织充分裂解, 释放出核酸 蛋白质等相关组分, 后续通过特效的 RA 酶和酚 / 氯仿抽提可以最大限度的将 RA 蛋白质 金属离子等杂质除去, 获得纯度和得率均良好的基因组 DA, 以便于后续的 PCR 检测 试剂盒 B 部分为双组分简单型 PCR 反应系统, 包含 2 GMO PCR Buffer 和 GMO DA Polymerase GMO DAPolymerase 是采用抗体修饰的耐热聚合酶,2 GMO PCR Buffer 中含有 MgCl 2 dtps PCR 反应稳定剂 优化剂和增强剂等多种成分, 浓度为 2 具有快速简便 灵敏度高 特异性强 稳定性好等优点, 与本试剂盒的 A 部分配合使用适用于 GMO 作物的转基因 PCR 检测 产品特点 适用性广 : 可对五大主要 GMO 作物进行高质量基因组 DA 的提取 简单快速 : 可在 2 h 内完成 GMO 作物基因组 DA 的提取 无需 大型冷冻离心机, 对仪器设备要求较低, 适于各级研究 机构对 GMO 作物进行快速基因组 DA 提取 高效特异 : 独特的抗体 Taq 聚合酶的缓冲液确保聚合酶高效扩增, 比普通 Taq 聚合酶特异性更强 基因组 DA 提取 PCR 检测 D15000 水稻玉米大豆棉花小麦 D15000 水稻玉米大豆棉花小麦 分别对大豆 小麦 水稻 玉米和棉花的基因进行扩增, 重复 2 次 20 µl PCR 反应体系, 取 6 µl 电泳效果 MIII: MarkerIIIDA Marker

41 光定甲基化特异性 PCR 试剂盒 Methylation-specific PCR(MSP)Kit 甲基化特异性 PCR 专用检测试剂盒 产品包装 二PCR RT 及试剂盒组成客户所开发的试剂盒 试剂盒组分简单, 包含 MSP DA Polymerase,10 MSP PCR Buffer 和 dtps 其中,MSP DA MSP DA Polymerase(2.5 U/µl) 400 U 10 MSP PCR Buffer 1 ml Polymerase 是采用抗体修饰的耐热聚合酶,10 MSP PCR dtps(2.5 mm) 1 ml Buffer 是特别为 MSP 反应所优化的 PCR 缓冲液 适于与 TIA- 更多信息请参见 : 免费电话 : people@tiangen.com 保存条件 GE 重亚硫酸盐处理试剂盒 (DP215-02) 搭配使用 -20 保存 下游应用 产品特点 适用于甲基化特异性 PCR(MSP) 方法分析基 本产品具有快速简便 灵敏度高 特异性强 稳定性好等优点 因组 DA 的甲基化特点 实验例 Bio-2 引物 -1 引物 -2 引物 -3 引物 -4 引物 -5 引物 M M M M M M :A 公司处理的样品 ;2: B 公司处 理的样品 ;3: 处理的样 品 ;4:TC;M:D2000 Bio2-F/R P16-Me-F/R M : 6 个重复 ; 7:A 公司处理 样品 ;8:TC; Bio2-F/R 和 P16- Me-F/R: 两种检测引物 1. 使用甲基化特异性 PCR 试剂盒, 以重亚硫酸盐 2. PCR 反应循环的设置 : 处理后的基因组 DA 为模板, 扩增 400 bp 的 95 5 min 片段, 反应体系为 20 µl sec 反应体系配置 sec 35 cycles 组成成分 体积 sec Template < 500 ng 72 5 min Primer 1(10 µm) 1 µl Primer 2(10 µm) 1 µl dtps (2.5 mm) 1.6 µl 注意事项 MSP DA Polymerase 1 U 反复冻融的 (2.5 U/µl) DA 模板会影响扩增, 尽量不要反复冻融 DA 10 MSP PCR Buffer 2 µl 模板 ; 如需多次实验, 可分装后进行冻存, 减少冻融次数 ddh 2 O 补至 20 µl 产品简介 目录号包装价格 EM U 680 元 本产品是特别针对通过 PCR 方法研究基因组 DA 甲基化特点的 142 量 荧