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3 南京诺唯赞生物科技有限公司 (Vazyme Biotech Co.,Ltd) 致力于酶和抗体的研发和生产, 产品涵盖体外诊断 高通量测序和生命科学研究等领域 公司坐落于六朝古都南京, 背靠风景秀丽的栖霞山, 依托国家级南京经济技术开发区的区域辐射力, 以先进的研发能力和领先的技术力量, 书写全新的民族生物科技格局 InnoVation in Enzyme Technology

4 公司概况 国际领先的研发能力及人才储备 诺唯赞以前瞻的眼光和国际领先的技术要求, 耗费巨资建立了超过 平方米的研发基地和 4000 平方米达到国际 GMP 标准的 IVD 无菌净化生产车间, 同时在上海 北京 广州 南京 杭州 武汉 济南等城市设有营销中心并建立起了遍布全国的销售网络 为进一步提升公司的技术研发能力及成果转化能力, 诺唯赞成立了生物技术产业研究院 研究院具有雄厚的研发实力, 拥有硕士以 上学历百余人, 团队中还包含了毕业于国内外顶尖学府的博士以及国家 千人计划 人才等 同时与美国多所大学具有广泛深入的 合作, 专注于前瞻性 战略性的技术开发与储备 诺唯赞的研发团队由分子生物学 酶学 免疫学 生物信息学等多领域的科学家组成, 其中多名科学家曾在国际知名生物技术医药 相关企业担任研发工作, 具有非常成熟的行业经验, 思想活跃, 创新十足, 这为诺唯赞源源不断地推出有市场竞争力的产品提供了 持续动力 南京诺唯赞生物科技有限公司 Nanjing Vazyme Biotech Co.,Ltd.

5 打破国外技术壁垒, 领跑民族生物行业 诺唯赞始终秉持创新, 致力突破, 坚持从技术源头开始研发, 将制备出具有世界一流品质的产品作为目标 通过多年孜孜以求, 诺唯赞人在酶工程以及抗体制备两大技术平台上实现了关键性的技术突破, 目前诺唯赞已经成功对 30 多种酶进行改造, 在酶的催化活性 半衰期 稳定性 耐热性 抗干扰等方面均达到国际一流水准 精湛的重组蛋白及抗体的生产和纯化技术, 使诺唯赞开发出来的高通量测序相关试剂 临床分子诊断试剂和科研试剂等一系列产品, 具有与国际同行业媲美的产品品质, 得到了业内客户的广泛认可 不懈创新与使命责任 精英团队, 专业服务 (Experts for Experts) 是诺唯赞人不懈奋斗的宗旨, 我们专注于品质和创新, 致力于为生物医药领域和生命科学研究领域提供性能卓越的产品和优质的服务 公司已经与国内多家知名企业建立了战略合作关系, 联合开发满足市场需求的新产品, 同时为多家国内外大型工业客户和试剂厂商提供产品解决方案 在做强做深产品及技术链的同时, 诺唯赞一直不忘恪守自己的使命, 用优质的产品和一流的服务为客户创造价值, 以奋斗者为本, 为员工提供广阔的发展平台, 吸引全国乃至全世界最优秀的人才加入, 推动中国生物技术产业的整体发展与提升, 实现民族产业的做强做大

6 订购指南 南京诺唯赞生物科技有限公司 生命科学产品目录 南京总部 江苏省南京经济技术开发区科创路红枫科技园 C2 栋 电话 : 邮箱 北京办事处北京市昌平区北清路 1 号院珠江摩尔大厦 6 号楼 1 单元 812 室电话 : 上海办事处上海市浦东新区创新西路 76 号 44 栋电话 : 邮箱 :caoxiaobiao@vazyme.com 邮箱 :sales_sh@vazyme.com 广州办事处 广东省广州市天河区车陂路 330 号 M1501 室 电话 : 邮箱 :laidongmei@vazyme.com 杭州办事处浙江省杭州市西湖区古墩路 673 号瑞博国际 A 座 906 电话 : 南京办事处江苏省南京市秦淮区大行宫日月大厦 2804 电话 : 武汉办事处湖北省武汉市洪山区珞喻路 1 号鹏程国际 A 座 1517 室电话 : 福建办事处福建省福州市仓山区闽江大道 20 号中联水岸名居 1#1003 电话 : 邮箱 :yangmici@vazyme.com 邮箱 :wangdan@vazyme.com 邮箱 :wanglibing@vazyme.com 邮箱 :linyuxiang@vazyme.com 山东办事处山东省济南市华能路 138 号 3 号楼 6 单元 902 室电话 : 扬州办事处江苏省扬州市维扬区东方百合园 33 栋 501 电话 : 苏州办事处江苏省苏州市工业园区莲花新村五区 113 栋电话 : 邮箱 :wangdandan@vazyme.com 邮箱 :songqin@vazyme.com 邮箱 :liudeli@vazyme.com 代理商渠道江苏省南京经济技术开发区科创路红枫科技园 C2 栋电话 : 海外事业部 Mobile: 邮箱 :xiaoyunxiao@vazyme.com wangdong@vazyme.com 销售渠道 Sales Channels

7 订购指南 南京诺唯赞生物科技有限公司 生命科学产品目录 一 订购需知 1 诺唯赞有指定的销售渠道, 为了保障您的权益, 请从正规渠道购买 2 到货周期 : 本地仓库有现货,2 个工作日内送货上门 ; 本地仓库无现货, 下订单后 2-3 个工作日进行发货 3 当您收到货时, 请仔细清点与核对 二 客户服务与技术支持 如果您在产品使用过程中有任何技术问题, 您可通过以下方式获取技术支持 技术支持热线 : 技术支持邮箱 :support@vazyme.com 另外, 您可以登录官方网站 了解更多产品和技术信息 三 运输说明 1 运输条件 产品运输全程采用冰袋控温, 冰袋在使用前经过 -30,72 h 冷冻处理, 确保在运输过程中保证产品质量 2 保存条件 酶类产品建议保存条件为 -20 在产品生产过程中, 公司严格按照 ISO9001:2015 标准进行全程把控, 我们承诺您收到的每个产品质量都经过严格 的检测, 保证产品质量, 并提供从订单直至售后的全方位服务 四 产品保质期 为了保证产品性能, 我们承诺您收到的产品至少有 6 个月保质期 ( 保质期在 6 个月内的产品除外 )

8 明星产品 南京诺唯赞生物科技有限公司 生命科学产品目录 Phanta Max 超保真 DNA 聚合酶 (Vazyme #P505) 本产品超强的扩增能力, 可以实现 ( 细菌 / 真菌等微生物 多种全血 培养细胞 植物 / 动物组织裂解液 食品裂解液等 ) 粗品的直接扩增, 大大节约时间成本, 提高实验的成功率 超高保真度 保真度是 Taq DNA Polymerase 的 53 倍, 每扩增 300,000 个碱基, 错配少于 5 个 超强扩增力 适用于各种 GC 含量片段扩增, 对 PCR 抑制剂具有超强的耐受度, 可用于多种样本的直接 PCR ClonExpress 一步法克隆技术高效省时 (Vazyme #C115) 打破传统酶切连接, 让克隆摆脱限制性内切酶限制, 实现新型克隆设计简单插入片段无需酶切, 不用考虑其自身携带的酶切位点, 随心所欲 操作便捷 线性化载体和 PCR 产物可不进行纯化直接克隆 克隆高效 不依赖于连接酶及磷酸酶, 克隆阳性率可达 95% 以上 Fast-T1 化学感受态细胞 (Vazyme #C505) 生长超快速感受态细胞 生长快速 氨苄抗性的平板 8-9 h;2 ml LB 培养液摇菌 4-5 h, 可进行小量质粒 DNA 的提取 兼容抗性 具有 T1 和 T5 噬菌体抗性 HiScript II Reverse Transcriptase (Vazyme #R201) 具有超强耐热性和延伸效率的新一代逆转录酶 通过专利的体外分子进化技术, 获得的全新的逆转录酶, 热稳定性大幅度提升, 大大提高了逆转录的成功率 Mix 预混液, 减少实验操作过程, 降低污染风险

9 明星产品 南京诺唯赞生物科技有限公司 生命科学产品目录 ChamQ TM Universal SYBR qpcr Master Mix (Vazyme #Q711) 通用型 qpcr 预混液 特殊的 ROX 参比染料, 适用于所有 qpcr 仪, 无需在不同的仪器上调整 ROX 浓度 全新优化的 Buffer 和专利特异性促进因子, 实现结果的高特异性和高灵敏度 CCK-8 Cell Counting Kit (Vazyme #A311) 细胞增殖检测试剂 操作简便 即开即用, 无需配制其他试剂 灵敏度高 灵敏度 线性相关性高, 重复性好 Exfect 2000 Transfection Reagent (Vazyme #T202) 高效转染试剂 基于阳离子脂质体的高效转染试剂, 适用于 DNA 的转染及共转体系, 对大多数真核 细胞 ( 贴壁或悬浮 ) 具有很高的转染效率 独特的结构及配方, 使得血清和抗生素 的存在不会影响转染效率, 从而减少去除血清对细胞的影响 AceQ Universal U + Probe Master Mix V2 (Vazyme #Q513) 通用型防污染探针法 qpcr 预混液 优秀的线性关系及卓越的灵敏度 在宽广的模板量区间内具有良好的线性关系, 可轻松检测单拷贝数模板 dutp/udg 防污染系统 引入 dutp/ Heat-labile UDG 防污染系统, 在室温条件下即可发挥作用, 去伪存真, 确保结果真实可信 广泛的平台适用性 特殊的 ROX 参比染料, 能够满足不同仪器对不同浓度 ROX 的校正需求

10 明星产品 南京诺唯赞生物科技有限公司 生命科学产品目录 TruePrep TM DNA Library Prep Kit V2 for Illumina (Vazyme #TD501/502/503) 基于转座酶 (Tn5) 的超快速 DNA 文库制备试剂盒 流程极简 一步酶促反应替代繁琐的 DNA 片段化 末端修复 末端加 A 和接头连接步骤, 降低了起始模板的投入量并缩短了文库构建时间 应用广泛 适用于常规基因组测序 单细胞转录组测序 表观遗传测序 ( 如 ATAC-seq 等 ) 以及其他前沿研究应用 VAHTS TM Universal DNA Library Prep Kit for Illumina (Vazyme #ND607) 通用型 DNA 文库制备试剂盒 操作简便 优化的末修 buffer, 高效整合末修,5 磷酸化和 3 加 A 一步完成, 提高文库转化率, 简化流程 文库产出量高 全新优化的扩增酶和 buffer, 实现扩增平台期和扩增灵敏度的双提升, 提高文库产出 VAHTS TM AmpSeq Library Prep Kit V2 (Vazyme #NA201) 扩增子靶向测序制备试剂盒 超多重 PCR 扩增技术 在超多重 PCR 的基础上引入扩增子末端引物消化技术, 实现在单管内完成多重扩增 引物消化 接头连接等多步反应, 同时兼容 Ion Torrent 和 Illumina 测序平台 极高的 On-Target Rate On-Target 比例均高于 95%, 且多次实验结果的一致性良好 VAHTS TM Stranded mrna-seq Library Prep Kit for Illumina V2 (Vazyme #NR612) 链特异性转录组文库制备试剂盒 物种适应性广 适用于人 动物 植物 真菌等真核生物 文库大小控制精准 基于温度和时间的控制提供 4 种片段打断方案以及基于磁珠用量提供的 4 种文库分选方案

11 明星产品 南京诺唯赞生物科技有限公司 生命科学产品目录 VAHTS TM Small RNA Library Prep Kit for Illumina (Vazyme #NR801) 小 RNA 文库制备试剂盒 样本兼容类型广 动 植物细胞 / 组织总 RNA, 分离纯化的 Small RNA, 以及其他类型 RNA, 如外泌体 RNA 均可作为起始模板 文库丰度高 接头污染少, 有效文库比例高,miRNA 比例高 覆盖种类多, 文库数据质量可靠 Discover-sc WTA Kit (Vazyme #N711) 单细胞全转录组扩增试剂盒 全长 cdna 扩增产物 利用 Discover-sc Reverse Transcriptase 的 Template-switching 活性, 获取全长的 cdna, 保留整个 mrna 信息, 从而避免了 5 或 3 端的偏好性 扩增灵敏度高 使用 LNA 技术及精心优化的反应体系, 大幅度增加了低表达基因的检出量 VAHTS TM HiFi Amplification Mix (Vazyme #N616) 重新打造的新型高保真 PCR 扩增预混液 高保真度 扩增错配率仅是 Taq DNA Polymerase 的 1/52, 是 Pfu DNA Polymerase 的 1/6, 有效保障了文库扩增的真实性 高扩增效率 极大提高扩增平台期和灵敏度 VAHTS TM DNA Clean Beads (Vazyme #N411) 高通量测序建库首选磁珠 集纯化与分选于一体 基于 SPRI (Solid Phase Reverse Immobilization) 原理, 适合于高通量测序文库构建中 DNA 纯化与片段大小分选 无缝替代 AMPure XP Beads 使用方式相同, 无需要做任何改变

12 参考文献 关联产品 南京诺唯赞生物科技有限公司 生命科学产品目录 01 Wu N, Ming X, Xiao J, et al. (2015). TBX6 Null Variants and a Common Hypomorphic Allele in Congenital Scoliosis. The New England journal of medicine,372(4): if:54.42 (Vazyme #C112) 02 Zhao Q, Wang M, Xu D, et al. (2015). Metabolic coupling of two small-molecule thiols programs the biosynthesis of lincomycin A. Nature, 518(7537): IF: (Vazyme #P505/515) 03 Ge J, Li W, Zhao Q, et al. (2015). Architecture of the mammalian mechanosensitive Piezo1 channel. Nature, 527(7576): IF: (Vazyme #C112) 04 Wu J, Xu J, Liu B, et al. Chromatin analysis in human early development reveals epigenetic transition during ZGA[J]. Nature, 2018: 1. IF: (Vazyme #TD502) 05 Huang X, Yang S, Gong J, et al. Genomic architecture of heterosis for yield traits in rice.[j]. Nature, 2016, 537(7622): IF: (Vazyme #TD501) 06 Wu J, Huang B, Chen H, et al. The landscape of accessible chromatin in mammalian preimplantation embryos.[j]. Nature, 2016, 534(7609):652. IF: (Vazyme #TD501) 07 Ma Z, Zhu L, Song T,et al. (2017). A paralogous decoy protects Phytophthora Sojae Apoplastic effector PsXEG1 from a host inhibitor. Science,355(6326): IF: (Vazyme #P501/511) 08 Zhang XO, Wang HB, Zhang Y, et al. (2014). Complementary sequence-mediated exon circularization. Cell, 159(1): IF: (Vazyme #C112) 09 He YM, Li X, Perego M, et al. Transitory presence of myeloid-derived suppressor cells in neonates is critical for control of inflammation. Nature medicine IF: (Vazyme #NR603) 10 Han X P, Wang R Y, Zhou Y C, et al. Mapping the Mouse Cell Atlas by Microwell-Seq[J]. Cell, 2018, 172(5):1091. IF: (Vazyme #TD513/ P515) 11 Zheng C, Zheng L, Yoo J K, et al. Landscape of Infiltrating T Cells in Liver Cancer Revealed by Single-Cell Sequencing[J]. Cell, 2017, 169(7):1342. IF: (Vazyme #TD503) 12 Xing Y H, Yao R W, Zhang Y, et al. (2017). SLERT Regulates DDX21 Rings Associated with Pol I Transcription.[J]. Cell, 2017, 169(4):664. IF: (Vazyme #C215) 13 Cao S, Yu S, Li D, et al. Chromatin accessibility dynamics during chemical induction of pluripotency[j]. Cell stem cell, 2018, 22(4): e5. IF: (Vazyme #ND102/NQ101) 14 Li D W, Liu J, Yang X J, et al. Chromatin Accessibility Dynamics during ipsc Reprogramming[J]. Cell Stem Cell, 2017, 21(6):819. IF: (Vazyme # NQ101/ND102) 15 Zhang M Y, Dong Y, Hu F X, et al. Transcription factor Hoxb5 reprograms B cells into functional T lymphocytes[j]. Nature Immunology, 2018, 19(2). IF: (Vazyme #ND604,N601) 16 Xu L, Cao Y, Xie Z, et al. The transcription factor TCF-1 initiates the differentiation of TFH cells during acute viral infection[c]. Nature Immunology, 2015:991. IF: (Vazyme #Q111) 17 Liu X, Wei W, Li X, et al. BMI1 and MEL18 Promote Colitis-Associated Cancer in Mice via REG3B and STAT3[J]. Gastroenterology, IF: (Vazyme #Q311) 常见问题 (FAQ) 18 Qin X, Liu S, Lu Q, et al. Heterotrimeric G Stimulatory Protein α Subunit Is Required for Intestinal Smooth Muscle Contraction in Mice.[J]. Gastroenterology, 2017, 152(5):1114. IF: (Vazyme #NR601) 19 Qiu W L, Zhang Y W, Feng Y, et al. Deciphering Pancreatic Islet β Cell and α Cell Maturation Pathways and Characteristic Features at the Single-Cell Level.[J]. Cell Metabolism, 2017, 25(5):1194. IF: (Vazyme #Q111) 20 Zhou H, Liu J, Zhou C, et al. In vivo simultaneous transcriptional activation of multiple genes in the brain using CRISPR-dCas9- activator transgenic mice.[j]. Nature Neuroscience, IF: (Vazyme #R222 Vazyme #Q111) 21 Yang L, Wang W H, Qiu W L, et al. A single-cell transcriptomic analysis reveals precise pathways and regulatory mechanisms underlying hepatoblast differentiation.[j]. Hepatology, 2017, 66(5):1387. IF: (Vazyme #N411/TD502) 22 Wu H, Yin QF, Luo Z, et al. (2016). Unusual Processing Generates SPA LncRNAs that Sequester Multiple RNA Binding Proteins. Molecular Cell, 64(3), IF: (Vazyme #P501/511)

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17 Vazyme 目录 PCR 系列 18 克隆 / 点突变系列 58 核酸电泳系列 73 逆转录系列 77 qpcr 系列 99 提取纯化系列 127 细胞 / 蛋白系列 150 基因编辑系列 177 速溶颗粒系列 183 NGS 文库构建系列 185 常见问题 (FAQ) 240 附录 263 产品价格列表 273

18 Vazyme 基础科研试剂 PCR 系列产品 普通 PCR Taq DNA Polymerase Taq Master Mix Taq DNA Polymerase for PAGE Green Taq Mix 高产量 PCR Taq Plus DNA Polymerase 2 Taq Plus Master Mix 快速 PCR 2 Rapid Taq Master Mix 30 长片段 PCR Vazyme LAmp DNA Polymerase 2 Vazyme LAmp Master Mix 高保真 PCR Phanta Super-Fidelity DNA Polymerase 2 Phanta Master Mix Phanta HS Super-Fidelity DNA Polymerase 2 Phanta HS Master Mix Phanta EVO Super-Fidelity DNA Polymerase Phanta EVO HS Super-Fidelity DNA Polymerase Phanta Max Super-Fidelity DNA Polymerase 2 Phanta Max Master Mix

19 Vazyme 基础科研试剂 PCR 系列产品 热启动 PCR AceTaq DNA Polymerase 2 AceTaq Master Mix Champagne Taq TM DNA Polymerase Champagne Taq TM Antibody 等温扩增 PCR Bst DNA Polymerase Large Fragment 45 多重 PCR Multiplex PCR Kit 46 直接扩增 PCR One Step Mouse Genotyping Kit One Step U + Probe Mouse Genotyping Kit Blood Direct PCR Kit V2 Plant Direct PCR Kit 一代测序样本制备 Colony-direct Plasmid Amplification Kit 52 PCR 相关附件 PCR Enhancer dntp Mix Heat-labile UDG E.coli UDG Uracil Excision Kit

20 PCR 系列 PCR 技术背景 PCR (Polymerase Chain Reaction) 又叫做聚合酶链式反应, 是 1983 年由美国人 Mullis 发明的 因其在灵敏度 特异性 产量以 及简便性等方面有着极大的优势, 从而迅速成为分子生物学研究中应用最为广泛的方法之一 PCR 技术的原理 PCR 是一种将 DNA 片段在体外合成放大的技术, 可以快速特异地在体外扩增特定的 DNA 序列 如图所示,PCR 反应主要包括三个步骤 : 5' 3' 1 变性 (Denaturation): 升高温度, 使模板 DNA 双链间的氢键断裂, 双链解 链成单链 ; 2 退火 (Annealing): 降低温度, 引物与模板 DNA 互补配对 ; 3 延伸 (Extension): 以 dntps 为原料, 以引物为延伸起点, 在 DNA 聚合 酶的催化作用下合成出与模板 DNA 链互补的 DNA 子 链 * 上述三个步骤为一个循环, 每一循环的产物均可作为下一个循环的模板, 通 过多次循环反应, 使目的 DNA 得以迅速扩增 5' 3' 3' 5' 5' 3' 3' 5' 3' 5' 95, 变性 cycles 72, 延伸 5' 3' 5' 5' 3' 5' 60, 退火 5' 3' 5' 5' 3' 5' PCR 引物的设计 PCR 引物的正确设计是影响反应成功的关键条件, 好的引物可以很大程度上避免非特异产物的产生, 同时也可以影响最终的扩增产 量 所以, 我们在设计引物时一般会遵循以下几个原则 : 引物长度 一般设计的引物长度在 18 bp~24 bp 最佳,16 bp~40 bp 次之 引物过短, 会降低产物的特异性, 每增加一个核苷酸, 引物特异性可以提高 4 倍 引物过长, 会使退火过程不完全, 与模板结合不充分, 以至引起扩增产物的明显减少 引物末端 引物 3 端最后一个碱基最好为 G 或者 C; 引物 3 端应避免出现发夹结构 引物 G+C 含量 引物的 GC 含量控制在 40%-60% 之间 Tm 值 引物额外附加序列, 即与模板非互配对序列, 不应参与引物 Tm 的值计算 ; 正向引物和反向引物的 Tm 值相差不超过 1 为佳,Tm 值调整至 为佳 ( 引物 Tm 值推荐使用 Primer Premier 5 进行计算 ) 碱基的分布 引物 A G C T 整体分布要尽量均匀, 避免使用 GC 或者 AT 含量高的区域 ; 引物内部或者两条引物之间避免有 5 个碱基以上的互补序列, 两条引物的 3 端避免有 3 个碱基以上的互补序列 引物设计完毕请使用 NCBI BLAST 功能检索引物特异性, 以避免非特异性扩增产生

21 PCR PCR 系列 PCR 的操作步骤及条件优化 1. 操作步骤 所有操作须在冰上进行 加入反应体系中的各均应 -20 保存, 使用前须解冻并充分混匀, 且用完之后应及时放回 -20 保存 向 PCR 反应管中分别加入 PCR 反应缓冲液 (Buffer) dntps 引物 DNA 模板和 DNA 聚合酶, 充分混匀后将反应管置于 PCR 仪中开始反应 反应程序按照变性 (Denaturation), 退火 (Annealing), 延伸 (Extension) 进行, 每一循环的产物再作为下一循环的 DNA 模板, 整个 PCR 反应一般会进行 30 个循环, 并最终得到我们想要的产物 具体的反应如下 : PCR 反应要素 PCR 仪 DNA 模板 DNA 模板引物 dntps Buffer Mg 2+ DNA 聚合酶 94 变性 55 退火 72 延伸 次循环 目的片段扩增 2 倍 2. 条件优化 PCR 技术看似操作简便, 其实影响最终产量的因素非常多, 如果在具体的反应中, 结果并不是很理想, 可以对反应条件进行优化, 以获得最好的结果 (1) PCR 程序 (a) 推荐大多数模板的预变性温度为 95 若扩增子超过 10 kb, 预变性温度可降至 92, 时间不超过 2 min (b) 对于大多数模板,95 变性时间设为 5-10 sec 即可 若扩增子超过 10 kb, 变性温度可降至 92, 并延长变性时间至 15 sec (c) 一般来说, 退火温度设置为引物 Tm 值 ±3 范围之内即可 如果需要可以建立一个温度梯度反应区寻找引物模板结合的最适温度 退火时间过长可能导致扩增产物呈弥散状 因此, 推荐退火时间设置为 10 sec 即可, 对于一些困难模板, 退火时间可在 sec 之间调整 (2) 反应增强剂当 PCR 反应结果表现出弥散或者条带暗淡等情况, 我们向 PCR 反应中加入一定浓度的增强剂 ( 例如 1%~10% 二甲基亚砜 (DMSO) 5%~20% 甘油等 ) 可适当的提高反应特异性和产量 在 PCR 过程中, 高 GC 含量的 DNA 片段有可能形成比较稳固的二级结构, 往往很难扩增 在普通 PCR 反应条件下,DNA 聚合酶很难甚至根本不能介入到高 GC 含量的二级结构中 Vazyme 最新研发的 PCR Enhancer (Vazyme #P021) 是一种由多种成分组成的混合添加剂, 能够有效降低高 GC 模板和具有复杂二级结构模板的解链温度 当优化 PCR 程序后仍无法有效扩增目的片段时, 加入 PCR Enhancer 往往能得到意想不到的结果 (3) 热启动 PCR 当 PCR 的反应温度低于引物的 Tm 值时, 会产生引物二聚体和非特异性配对, 所以在配制反应体系时一般会要求冰上操作, 操作起来相对比较麻烦, 而使用热启动 PCR 方法可以减少这种情况的发生 例如 Vazyme 的 AceTaq DNA Polymerase (Vazyme #P401) 就是一种经过化学修饰的 Taq DNA Polymerase, 当反应液的温度低于 80 C 时, 酶的活性被封闭, 只有经过 95 C 加热后活性才被释放, 可防止在样品准备及反应升温阶段产生非特异扩增和引物二聚体

22 PCR 系列 PCR 选购指南 普通 PCR 特异性 PCR Taq Green Taq Mix 高产量快速长片段热启动 Taq Plus Rapid Taq Vazyme LAmp AceTaq Champagne Taq TM 特性 扩增长度 5 kb 5 kb 人基因组 : 10 kb λdna: 15 kb 人基因组 : 5 kb λdna: 10 kb >20 kb 的基因组 cdna 片段 5 kb 5 kb 退火温度 Tm - 1~2 Tm - 1~2 Tm - 1~2 Tm - 3~5 Tm - 1~2 ( 片段大于 5 kb, 推荐两步法 ) Tm - 1~2 Tm - 1~2 延伸时间 (/kb) sec sec sec 15 sec sec sec sec PCR 产物末端结构 3 da 3 da 3 da 3 da 3 da 3 da 3 da 保真度 ( Taq) '-3' 外切酶活性有有有有有有有 应用 菌落 PCR 富含 GC 模板 多重 PCR 无须提取 DNA 的 PCR 剂型 热启动 预混液 直接凝胶上样 页码 P24~P26 P27 P28~P29 P30 P31~P32 P41~P42 P43 备注 : 表示配套有 PCR Enhancer (Vazyme #P021)

23 PCR PCR 系列 特异性 PCR 高保真 PCR 多重小鼠直扩血液 PCR 植物直扩 Multiplex PCR Kit One Step Mouse Genotyping Kit Blood Direct PCR Kit V2 Plant Direct PCR Kit Phanta Phanta HS Phanta EVO Phanta EVO HS Phanta Max 特性 人基因组 : 6 kb 人基因组 : 6 kb 人基因组 : 20 kb 人基因组 : 20 kb 人基因组 : 20 kb 1.5 kb 2 kb 10 kb 5 kb cdna: 4 kb cdna: 4 kb cdna: 5 kb cdna: 5 kb cdna: 10 kb 质粒 : 15 kb 质粒 : 15 kb 质粒 : 40 kb 质粒 : 40 kb 质粒 : 40 kb Tm Tm - 1~2 Tm Tm 或者 Tm + 2~4 Tm ± 3 Tm ± 3 Tm + 3 Tm + 3 Tm sec 30 sec 30 sec 30 sec sec sec sec sec sec 3 da 3 da 平末端平末端平末端平末端平末端平末端平末端 有有无无无无无无无 应用 (19 重 ) (4 重 ) 剂型 含有单独的染料含有单独的染料含有单独的染料含有单独的染料含有单独的染料含有单独的染料 P46 P48 P50 P51 P33~P34 P35~P36 P37 P38 P39~P

24 PCR 系列 普通 PCR Taq DNA Polymerase 高纯度耐热 DNA 聚合酶 优化的缓冲体系, 便于快速得到理想的扩增结果 提供即用型的预混液, 最大程度地减少实验步骤 保存条件 :-20 保存 产品概述 本产品由克隆有 Thermus aquaticus DNA Polymerase 基因的大肠杆菌表达并经过多步纯化精制得到, 不含核酸内切酶 核酸外切酶以及细菌 DNA Taq DNA Polymerase 具有 5 3 聚合酶活性和 5 3 外切酶活性, 但无 3 5 外切酶活性 PCR 产物的 3 端带 A, 10 Taq Buffer (Mg 2+ plus) dntp Mix (10 mm each) Taq DNA Polymerase (5 U/μl) P101-01/d1 4 ml -/800 µl 200 µl P101-02/d2 5 P101-01/d1 P101-03/d3 10 P101-01/d1 可克隆至 T 载体, 并适用于 ClonExpress 和拓扑克隆试剂盒 (C112/C113/C115/C601) 10 Taq Buffer (Mg 2+ free) 25 mm MgCl 2 dntp Mix (10 mm each) Taq DNA Polymerase (5 U/μl) P102-01/d1 4 ml 4 ml -/800 µl 200 µl P102-02/d2 5 P102-01/d1 P102-03/d3 10 P102-01/d1 体系 ( 以 P101 为例 ) ddh 2 O 10 Taq Buffer (Mg 2+ plus) 25 mm MgCl 2 dntp Mix (10 mm each) 5 PCR Enhancer 模板 DNA Primer1 (10 μm) Primer2 (10 μm) Taq DNA Polymerase (5 U/μl) to 50 μl 5 μl 可选 1 μl 可选可选 2 μl 2 μl 0.5 μl 程序 min ( 预变性 ) 30 sec 30 sec 60 sec/kb 7 min ( 彻底延伸 ) cycles Taq DNA Polymerase (Mg 2+ plus Buffer) 1,000 U 5,000 U 10,000 U P P P ,400 Taq DNA Polymerase (Mg 2+ free Buffer) 1,000 U 5,000 U 10,000 U P P P ,400 Taq DNA Polymerase (Mg 2+ plus Buffer, with dntp) 1,000 U 5,000 U 10,000 U P101-d1 P101-d2 P101-d ,440 2,680 Taq DNA Polymerase (Mg 2+ free Buffer, with dntp) 1,000 U 5,000 U 10,000 U P102-d1 P102-d2 P102-d ,440 2,

25 普通 PCR 2 Taq Master Mix 高纯度耐热 DNA 聚合酶 PCR 系列 优化的缓冲体系, 便于快速得到理想的扩增结果 提供即用型的预混液, 最大程度地减少实验步骤 保存条件 :-20 保存 产品概述 本产品由克隆有 Thermus aquaticus DNA Polymerase 基因的大肠杆菌表达并经过多步纯化精制得到, 不含核酸内切酶 核酸外切酶以及细菌 DNA Taq DNA Polymerase 具有 5 3 聚合酶活性和 5 3 外切酶 2 Taq Master Mix ddh 2 O P111-01/w1 5 1 ml -/5 ml P111-02/w ml -/3 5 ml P111-03/w ml -/10 5 ml 活性, 但无 3 5 外切酶活性 PCR 产物的 3 端带 A, 可克隆至 T 载体, 并适用于 ClonExpress 和拓扑克隆试剂盒 (C112/C113/C115/C601) 2 Master Mix 包含 Taq DNA Polymerase dntps 以及优化的缓冲体系, 2 Taq Master Mix (Dye Plus) ddh 2 O P112-01/w1 5 1 ml -/5 ml P112-02/w ml -/3 5 ml P112-03/w ml -/10 5 ml 只需加入引物和模板即可进行扩增, 减少了移液操作, 提高了通量和结果的重现性 含染料的 2 Master Mix 可在 PCR 反应结束后直接进行电泳 体系 ddh 2 O 2 Taq Master Mix Primer1 (10 µm) Primer2 (10 µm) Template DNA To 50 µl 25 µl 2 µl 2 µl x µl 程序 min ( 预变性 ) 30 sec 30 sec 60 sec/kb 7 min ( 彻底延伸 ) cycles 2 Taq Master Mix 5 ml 15 ml 50 ml P P P ,650 2 Taq Master Mix (with ddh 2 O) 5 ml 15 ml 50 ml P111-w1 P111-w2 P111-w ,000 2 Taq Master Mix (Dye Plus) 5 ml 15 ml 50 ml P P P ,650 2 Taq Master Mix (Dye Plus, with ddh 2 O) 5 ml 15 ml 50 ml P112-w1 P112-w2 P112-w ,

26 PCR 系列 普通 PCR Taq DNA Polymerase for PAGE 产物适合于聚丙烯酰胺凝胶电泳的 DNA 聚合酶 优化的缓冲体系, 便于快速得到理想的扩增结果 提供即用型的预混液, 最大程度地减少实验步骤 保存条件 :-20 保存 产品概述 本产品由克隆有 Thermus aquaticus DNA Polymerase 单酶 基因的大肠杆菌表达并经过多步纯化精制得到, 不含核酸内切酶 核酸外切酶以及细菌 DNA Taq DNA Polymerase 具有 5 3 外切酶活性, 但无 3 5 外切酶活性 PCR 产物的 3 端带 A, 可克隆至 T 载体, 并适用于 ClonExpress 和拓扑克隆试剂盒 (C112/ C113/C115/C601) 本产品附带的 10 Taq Buffer 经 10 Taq Buffer for PAGE (Mg 2+ plus) dntp Mix (10 mm each) Taq DNA Polymerase (5 U/μl) 6 DNA Loading Buffer P103-01/d1 1.2 ml 5 -/1.2 ml 500 µl 1 ml 过特殊优化,PCR 产物适合于聚丙烯酰胺凝胶电泳及琼脂糖凝胶电泳 预混液 P113/P P113/P P113/P Taq Master Mix for PAGE 2 Taq Master Mix for PAGE (Dye plus) 5/- ml -/5 ml 15/- ml -/15 ml 50/- ml -/50 ml 体系 ( 以 P113 为例 ) ddh 2 O 2 Taq Master Mix for PAGE Primer1 (10 µm) Primer2 (10 µm) Template DNA To 50 µl 25 µl 2 µl 2 µl x µl 程序 min ( 预变性 ) 30 sec 30 sec 60 sec/kb 7 min ( 彻底延伸 ) cycles Taq DNA Polymerase for PAGE 2,500 U P Taq DNA Polymerase for PAGE (with dntp) 2,500 U P103-d Taq Master Mix for PAGE 5 ml 15 ml 50 ml P P P ,650 2 Taq Master Mix for PAGE (Dye plus) 5 ml 15 ml 50 ml P P P ,

27 普通 PCR Green Taq Mix 扩增性能极强的 DNA 聚合酶 PCR 系列 模板适应性强, 可兼容多种复杂模板 优化的缓冲体系, 有效抑制非特异性扩增 带绿色染料, 反应结束后产物可直接进行电泳 保存条件 :-20 保存 产品概述 本产品是一款包含 Taq DNA Polymerase dntps 以及优化缓冲体系的 2 Master Mix, 只需加入引物和模板即可进行反应, 减少了移液操作引起的误差, 同时提高了通量和结果的重现性 经过优化的缓冲体系 Green Taq Mix ddh 2 O P131-01/w1 5 ml -/5 ml P131-02/w2 15 ml -/15 ml P131-03/w3 50 ml -/50 ml 能够有效抑制非特异性扩增和引物二聚体的产生 体 系中加入的保护剂使得 Mix 经过反复冻融后仍可保持稳定的活性 本品中含有绿色染料, 可在反应结束后直接进行电泳 PCR 产物的 3 端带 A, 可克隆至 T 载体, 并适用于 ClonExpress 和拓扑克隆试剂盒 (C112/ C113/C115/C601) 体系 ddh 2 O Green Taq Mix Primer1 (10 µm) Primer2 (10 µm) Template DNA To 50 µl 25 µl 2 µl 2 µl x µl 性能展示 M 棉花 2.0 KB 0.8 KB 3.0 KB 0.5 KB 人 1.1 KB 2.6 KB 0.5 KB 拟南芥 1.5 KB 2.5 KB 水稻 2.8 KB 2.0 KB 0.8 KB cdna 3.0 KB 2.0 KB 1.0 KB M 程序 min ( 预变性 ) 30 sec 30 sec 60 sec/kb 7 min ( 彻底延伸 ) cycles 烟草 大豆 小麦 小鼠裂解液 菌液 M 0.5 KB 2.0 KB 3.0 KB 1.0 KB 2.0 KB 2.5 KB 1.0 KB 1.4 KB 3.3 KB 1.0 KB 2.4 KB 3.0 KB 1.0 KB 1.6 KB 2.0 KB M 以烟草 棉花 小麦 水稻 拟南芥 大豆 人的基因组, HeLa 细胞 cdna, 菌液和小鼠裂解液为模板扩增 0.5 kb-3.3 kb 的目的片段, 在默认条件下, 所有片段均可实现高效扩增 Green Taq Mix 对不同的模板都有较好的兼容性 Green Taq Mix 5 ml 15 ml 50 ml P P P ,780 Green Taq Mix (with ddh 2 O) 5 ml 15 ml 50 ml P131-w1 P131-w2 P131-w ,

28 PCR 系列 高产量 PCR Taq Plus DNA Polymerase 比普通 Taq 酶具有更高的扩增效率和保真度 加入 3 5 外切酶活性 提高扩增产量和长度 保真度是 Taq DNA Polymerase 的 6 倍 提供即用型的预混液, 最大程度地减少实验步骤 保存条件 :-20 保存 产品概述 Taq Plus DNA Polymerase 是 Taq DNA Polymerase 与一种含有 3 5 外切酶活性 ( 校对活性 ) 的蛋白组成的混合酶, 保真度是 Taq DNA Polymerase 的 6 倍 对于长度在 5 kb 以内的目的片段, 与 Taq DNA Polymerase 相比,Taq Plus DNA Polymerase 具有更 10 Taq Plus Buffer (Mg 2+ plus) dntp Mix (10 mm each) Taq Plus DNA Polymerase (5 U/μl) P201-01/d1 1 ml -/200 µl 50 µl P201-02/d2 4 ml -/800 µl 200 µl P201-03/d3 3 P201-02/d2 强的扩增性能 灵敏度和杂质耐受度 如下图所示, Taq Plus DNA Polymerase 可以扩增长达 10 kb 的人基因组片段, 以及 15 kb 的 λdna 片段 PCR 产物的 3 端带 A, 可克隆至 T 载体, 并适用于 ClonExpress 和拓扑克隆试剂盒 (C112/C113/C115/C601) 性能展示人基因组 λdna M 6 kb 10 kb 15 kb 体系 ddh 2 O 10 Taq Plus Buffer (Mg 2+ plus) 25 mm MgCl 2 dntp Mix (10 mm each) 5 PCR Enhancer 模板 DNA Primer1 (10 μm) Primer2 (10 μm) Taq Plus DNA Polymerase (5 U/μl) to 50 μl 5 μl 可选 1 μl 可选可选 2 μl 2 μl 0.5 μl 程序 min ( 预变性 ) 30 sec 30 sec 60 sec/kb 7 min ( 彻底延伸 ) cycles 使用 Taq Plus DNA Polymerase 分别扩增 6 kb 和 10 kb 的人基因组 DNA 片段以及 15 kb 的 λdna 片段 M: DL15,000 DNA Marker Taq Plus DNA Polymerase 250 U 1,000 U 3,000 U P P P ,900 Taq Plus DNA Polymerase (with dntp) 250 U 1,000 U 3,000 U P201-d1 P201-d2 P201-d ,

29 高产量 PCR 2 Taq Plus Master Mix 比普通 Taq 酶具有更高的扩增效率和保真度 PCR 系列 加入 3 5 外切酶活性 提高扩增产量和长度 保真度是 Taq DNA Polymerase 的 6 倍 提供即用型的预混液, 最大程度地减少实验步骤 保存条件 :-20 保存 产品概述 Taq Plus DNA Polymerase 是 Taq DNA Polymerase 与一种含有 3 5 外切酶活性 ( 校对活性 ) 的蛋白组成的混合酶, 保真度是 Taq DNA Polymerase 的 6 倍 对于长度在 5 kb 以内的目的片段, 与 Taq DNA Polymerase 相比,Taq Plus DNA Polymerase 具有更强的扩增性能 灵敏度和杂质耐受度 如下图所示, Taq Plus DNA Polymerase 可以扩增长达 10 kb 的人基因组片段, 以及 15 kb 的 λdna 片段 PCR 产物的 3 端带 A, 可克隆至 T 载体, 并适用于 ClonExpress 和拓扑克隆试剂盒 (C112/C113/C115/C601) 2 Master Mix 包含 Taq Plus DNA Polymerase dntps 以及优化的缓冲体系, 只需加入引物和模板即可进行扩增, 减少了移液操作, 提高了通量和结果的重现性 含染料的 2 Master Mix 可在 PCR 反应结束后直接进行电泳 性能展示 人基因组 λdna M 6 kb 10 kb 15 kb P211/212/ Taq Plus Master Mix 5/-/- ml 2 Taq Plus Master Mix (Dye Plus) -/5/- ml 2 Taq Plus Master Mix II (Dye Plus) -/-/5 ml 体系 ddh 2 O 2 Taq Plus Master Mix Primer1 (10 µm) Primer2 (10 µm) Template DNA 程序 P211/212/ P211/212/ /-/- ml 50/-/- ml -/15/- ml -/50/- ml -/-/15 ml -/-/50 ml To 50 µl 25 µl 2 µl 2 µl x µl 5 min ( 预变性 ) 30 sec 30 sec cycles 60 sec/kb 7 min ( 彻底延伸 ) 使用 Taq Plus DNA Polymerase 分别扩增 6 kb 和 10 kb 的人基因组 DNA 片段以及 15 kb 的 λdna 片段 M: DL15,000 DNA Marker 2 Taq Plus Master Mix 5 ml 15 ml 50 ml P P P ,500 2 Taq Plus Master Mix (Dye Plus) 5 ml 15 ml 50 ml P P P ,500 2 Taq Plus Master Mix II (Dye Plus) 5 ml 15 ml 50 ml P P P ,

30 PCR 系列 快速 PCR 2 Rapid Taq Master Mix 速度与性能, 并驾齐驱 扩增速度快 操作便捷 稳定性好 15 sec/kb,1 kb 以内极限扩增速度可达 1 sec/kb 加入引物和模板即可进行扩增, 无需冰上操作, 产物含有染料可直接进行电泳 反复冻融 50 次, 活性未见明显降低 保存条件 :-20 保存 ; 解冻后 4 可存放 3 个月 产品概述 本产品包含 Taq DNA Polymerase 延伸促进因子 dntp 以及优化的缓冲体系, 扩增速度可达 15 sec/ kb, 适用于快速 PCR 反应,1 kb 以内的极限扩增速度可达 1 sec/kb, 大幅节省 PCR 反应时间 预先配 2 Rapid Taq Master Mix ddh 2 O P222-01/w1 5 x 1 ml -/5 ml P222-02/w2 15 x 1 ml -/3 x 5 ml P222-03/w3 50 x 1 ml -/10 x 5 ml 制的 2 Master Mix 用于 PCR 反应时只需加入引物和模板即可进行扩增, 减少了移液操作, 提高了检测 体系 通量和结果的重现性 本品扩增性能优, 保存稳定性高, 适用于 5 kb 以内以基因组为模板的 PCR 扩增以及 10 kb 以内以质粒和 λdna 为模板的 PCR 扩增 扩增体系中加入的保护剂使得 2 Master Mix 反复冻融后仍可保持稳定活性 本品含有电泳缓冲液和绿色染 ddh 2 O 2 Rapid Taq Master Mix Primer1 (10 µm) Primer2 (10 µm) Template DNA To 50 µl 25 µl 2 µl 2 µl x µl 料, 可在反应结束后直接进行电泳, 使用方便 PCR 产物的 3 端带 A, 可直接克隆至 T 载体, 并适用于 ClonExpress 和拓扑克隆试剂盒 (C112/C113/C115/ C601) 使用 程序 min ( 预变性 ) 15 sec 15 sec 15 sec/kb 5 min ( 彻底延伸 ) cycles 性能展示 扩增速度可达 1 sec/kb 扩增特异性强, 产量高 Human genome 1.1 kb Human cdna 1.1 kb Mouse genome 1.0 kb Wheat genome 0.8 kb Rice genome 0.8 kb Colony 2.1 kb 菌液 2.1 kb M λdna 1.1 kb NTC A B C D E F G R M Hg 2 Kb Rg 3.3. Kb A-G: 7 家其它公司的 2 Taq Mix 产品 R: Vazyme 的 2 Rapid Taq Master Mix 分别以人基因组 DNA 人 cdna 小鼠基因组 DNA 小麦基因组 DNA 水稻基因组 DNA 菌落 菌液 λdna 为模板扩增 1 kb-2 kb 片段, 延伸时间仅设置为 1 sec/kb,pcr 反应结束后取 10 ul 反应产物进行电泳检测 以人基因组和水稻基因组 DNA 为模板, 分别扩增长度为 2 kb 3.3 kb 的目的片段, 延伸时间分别设置为 30 s 60 s,pcr 反应结束后取 10 ul 反应产物进行电泳检测 可见 2 Rapid Taq Master Mix 具有优异的扩增 性能和极高特异性及产量优势 2 Rapid Taq Master Mix 5 ml 15 ml 50 ml P P P ,898 2 Rapid Taq Master Mix (with ddh 2 O) 5 ml 15 ml 50 ml P222-w1 P222-w2 P222-w ,

31 长片段 PCR Vazyme LAmp DNA Polymerase 长距离 PCR 的明灯 PCR 系列 高效扩增 >20 kb 的基因组 cdna 片段 广泛的 GC 适应性 极高的扩增灵敏度, 对于低纯度模板具有很强的耐受度 提供即用型的预混液, 最大程度地减少实验步骤 保存条件 :-20 保存 产品概述 在长片段 PCR 过程中,Taq 酶由于缺乏 3 5 外切酶活性 ( 校对活性 ), 不能切除掺入的错配核苷酸, 因此会在错配处停滞, 导致扩增终止 Vazyme LAmp DNA Polymerase 由 Taq DNA Polymerase 与一种含有校对活性的蛋白按特定比例混合而成, 极大提高了扩增效率, 并且将保真度提高至 Taq 酶的 6 倍 配合优化的缓冲体系,Vazyme LAmp DNA Polymerase 可高效扩增超过 20 kb 的基因组 cdna 片段, 并且 P301-01/d1 10 Vazyme LAmp Buffer (Mg 2+ plus) 500 μl 10 Vazyme LAmp Buffer (Mg 2+ free) - 25 mm MgCI 2 - Vazyme LAmp DNA Polymerase (5 U/μl) 25 μl dntp Mix (10 mm each) -/100 μl 5 PCR Enhancer 125 μl 10 Loading buffer 1.25 ml P301-02/d2 2 1 ml μl -/400 μl 500 μl ml P302-d1-500 μl 1 ml 25 μl 100 μl 125 μl 1.25 ml P302-d2-2 1 ml 2 1 ml 100 μl 400 μl 500 μl ml 对于低拷贝 低纯度以及不同 GC 含量的模板都具有 很高的成功率 PCR 产物的 3 端带 A, 可克隆至 T 载体, 并适用于 ClonExpress 和拓扑克隆试剂盒 (C112/ C113/C115/C601) 性能展示超强的扩增灵敏度 M 500 ng 200 ng 100 ng 50 ng 10 ng 5 ng 1 ng 0.5 ng NTC 体系 ( 以 P302 为例 ) ddh 2 O 10 Vazyme LAmp Buffer 25 mm MgCl 2 dntp Mix (10 mm each) 5 PCR Enhancer 模板 DNA Primer1 (10 μm) Primer2 (10 μm) Vazyme LAmp DNA Polymerase (5 U/μl) to 50 μl 5 μl 3-4 μl 1 μl optional optional 2 μl 2 μl 0.5 μl 程序 目的片段 < 5 kb 以 500 ng-0.5 ng 的棉花基因组 DNA 为模板, 扩增 17.2 kb 的 片段 PCR 反应结束后取 10 μl 反应产物进行电泳检测 广泛的模板适用性 min ( 预变性 ) 30 sec 30 sec 30 sec/kb 7 min ( 彻底延伸 ) cycles 目的片段 > 5 kb min ( 预变性 ) 10 sec sec/kb 7 min ( 彻底延伸 ) cycles 以 10 ng 人 水稻 大豆 棉花基因组 DNA 为模板, 扩增 3.6 kb-21 kb 的片段,PCR 反应结束后取 10 μl 反应产物进行电泳 检测 Vazyme LAmp DNA Polymerase (Mg 2+ plus buffer) 125 U 500 U P P Vazyme LAmp DNA Polymerase (Mg 2+ plus buffer, with dntp) 125 U 500 U P301-d1 P301-d Vazyme LAmp DNA Polymerase (Mg 2+ free buffer, with dntp) 125 U 500 U P302-d1 P302-d

32 PCR 系列 长片段 PCR 2 Vazyme LAmp Master Mix 长距离 PCR 的明灯 高效扩增 >20 kb 的基因组 cdna 片段 广泛的 GC 适应性 极高的扩增灵敏度, 对于低纯度模板具有很强的耐受度 提供即用型的预混液, 最大程度地减少实验步骤 保存条件 :-20 保存 产品概述 在长片段 PCR 过程中,Taq 酶由于缺乏 3 5 外切酶活性 ( 校对活性 ), 不能切除掺入的错配核苷酸, 因此会在错配处停滞, 导致扩增终止 Vazyme LAmp DNA Polymerase 由 Taq DNA Polymerase 与一种含 2 Vazyme LAmp Master Mix 2 Vazyme LAmp Master Mix (Dye Plus) P311/ /- ml -/1 ml P311/ /- ml -/5 ml P311/ /- ml -/15 ml 有校对活性的蛋白按特定比例混合而成, 极大提高了 扩增效率, 并且将保真度提高至 Taq 酶的 6 倍 配合优化的缓冲体系,Vazyme LAmp DNA Polymerase 可高效扩增超过 20 kb 的基因组 cdna 片段, 并且对于低拷贝 低纯度以及不同 GC 含量的模板都具有很高的成功率 PCR 产物的 3 端带 A, 可克隆至 T 载体, 并适用于 ClonExpress 和拓扑克隆试剂盒 (C112/ 体系 ddh 2 O 2 Vazyme LAmp Master Mix Primer1 (10 µm) Primer2 (10 µm) Template DNA To 50 µl 25 µl 2 µl 2 µl x µl C113/C115/C601) 提供含红色染料的 2 Master Mix, 只需加入引物和模板即可进行扩增, 提高了通量和结果的重现性 程序目的片段 < 5 kb 性能展示超强的扩增灵敏度 M 500 ng 200 ng 100 ng 50 ng 10 ng 5 ng 1 ng 0.5 ng NTC min ( 预变性 ) 30 sec 30 sec 30 sec/kb 7 min ( 彻底延伸 ) cycles 目的片段 > 5 kb 以 500 ng-0.5 ng 的棉花基因组 DNA 为模板, 扩增 17.2 kb 的 片段 PCR 反应结束后取 10 μl 反应产物进行电泳检测 min ( 预变性 ) 10 sec sec/kb 7 min ( 彻底延伸 ) cycles 广泛的模板适用性 以 10 ng 人 水稻 大豆 棉花基因组 DNA 为模板, 扩增 3.6 kb-21 kb 的片段,PCR 反应结束后取 10 μl 反应产物进行电泳 检测 2 Vazyme LAmp Master Mix 1 ml 5 ml 15 ml P P P ,600 2 Vazyme LAmp Master Mix (Dye Plus) 1 ml 5 ml 15 ml P P P ,

33 高保真 PCR Phanta Super-Fidelity DNA Polymerase 卓越保真度和扩增能力的高保真 DNA 聚合酶 PCR 系列 扩增速度是常规聚合酶的 倍 优化的缓冲体系广泛适用于各种模板 提供 PCR Enhancer 以帮助扩增高 GC 含量的模板 提供即用型的预混液, 最大程度地减少实验步骤 保真度是 Taq DNA Polymerase 的 52 倍, 是 Pfu DNA Polymerase 的 6 倍保存条件 :-20 保存 产品概述 Phanta Super-Fidelity DNA Polymerase 是基于 Pfu DNA Polymerase 改造而成的新一代超保真 DNA 聚合酶, 具有极高的扩增效率 广泛的模板适应性以及高超的行进能力, 即使是非常复杂的模板, 也能准确快速的完成反应 而且其错配率是普通 Taq 酶的 1/52 对于基因组或 cdna 等复杂模板,Phanta Super-Fidelity DNA Polymerase 的延伸速度可以达到 15 sec/kb; 而对于 λdna 或质粒等简单模板, 其极 P501-d1 5 SF Buffer (with 10 mm MgSO 4 ) 1.25 ml 25 mm MgSO 4 1 ml dntp Mix (10 mm each) 100 μl Phanta Super-Fidelity DNA Polymerase (1U/μl) 100 μl 5 PCR Enhancer 500 μl DMSO 100 μl 10 Loading buffer 1.25 ml P501-d2 5 P501-d1 P501-d3 10 P501-d1 限速度更能达到 0.5 sec/kb Phanta Super-Fidelity DNA Polymerase 具有 5 3 聚合酶活性和 3 5 外切酶活性, 扩增产物为平端, 适用于 ClonExpress 和拓扑克隆试剂盒 (C112/C113/C115/C601) 性能展示图 1. 使用 Phanta Super- Fidelity DNA Polymerase, 以 λdna 为模板扩增长度分别为 200 bp 600 bp 800 bp 1 kb 1.2 kb 2.0 kb 的目标片段, 延伸时间设置为 1 s, 所有片段均可实现高效扩增 M: Marker Ⅲ 图 2. 使用 Phanta Super- Fidelity DNA Polymerase 以 λdna 为模板扩增长度分别为 5 kb 8 kb 10 kb 12 kb 15 kb 的目标片段, 延伸时间设置为 3 min, 所有片段均可实现高效扩增 体系 ddh 2 O 5 SF Buffer (with 10 mm MgSO 4 ) dntp Mix (10 mm each) 25 mm MgSO 4 Primer1(10 μm) Primer2 (10 μm) 模板 DNA Phanta Super-Fidelity DNA Polymerase (1U/μl) 程序 sec-3 min ( 预变性 ) 5-10 sec sec sec/kb 5-10 min ( 彻底延伸 ) to 50 μl 10 μl 1 μl 可选 2 μl 2 μl x μl 1 μl cycles M: DL15,000 DNA Marker Phanta Super-Fidelity DNA Polymerase 100 U 500 U 1,000 U P501-d1 P501-d2 P501-d ,500 2,

34 PCR 系列 高保真 PCR 2 Phanta Master Mix 卓越保真度和扩增能力的高保真 DNA 聚合酶 扩增速度是常规聚合酶的 倍 优化的缓冲体系广泛适用于各种模板 提供 PCR Enhancer 以帮助扩增高 GC 含量的模板 提供即用型的预混液, 最大程度地减少实验步骤 保真度是 Taq DNA Polymerase 的 52 倍, 是 Pfu DNA Polymerase 的 6 倍保存条件 :-20 保存 产品概述 Phanta Super-Fidelity DNA Polymerase 是基于 Pfu DNA Polymerase 改造而成的新一代超保真 DNA 聚合酶, 具有极高的扩增效率 广泛的模板适应性以及高超的行进能力, 即使是非常复杂的模板, 也能准确快速的完成反应, 而且其错配率是普通 Taq 酶的 1/52 对于基因组或 cdna 等复杂模板,Phanta Super-Fidelity DNA Polymerase 的延伸速度可以达到 15 sec/kb; 而对于 λdna 或质粒等简单模板, 其极限速度更能达到 0.5 sec/kb Phanta Super-Fidelity DNA Polymerase 具有 5 3 聚合酶活性和 3 5 外切酶活性, 扩增产物为平端, 适用于 ClonExpress 和拓扑克隆试剂盒 (C112/C113/C115/C601) P P P Phanta Master Mix 体系 ddh 2 O 2 Phanta Master Mix Primer1 (10 μm) Primer2 (10 μm) 模板 DNA 程序 1 ml 5 ml 15 ml to 50 μl 25 μl 2 μl 2 μl x μl 性能展示 ~ sec-3 min ( 预变性 ) 5-10 sec sec sec/kb 5-10 min ( 彻底延伸 ) cycles 图 1. 使用 Phanta Super-Fidelity DNA Polymerase, 以 λdna 为 模板扩增长度分别为 200 bp 600 bp 800 bp 1 kb 1.2 kb 2.0 kb 的目标片段, 延伸时间设置为 1 s, 所有片段均可实现高 效扩增 M: Marker Ⅲ 图 2. 使用 Phanta Super-Fidelity DNA Polymerase 以 λdna 为 模板扩增长度分别为 5 kb 8 kb 10 kb 12 kb 15 kb 的目标 片段, 延伸时间设置为 3 min, 所有片段均可实现高效扩增 M: DL15,000 DNA Marker 2 Phanta Master Mix 1 ml 5 ml 15 ml P P P ,286 3,

35 高保真 PCR Phanta HS Super-Fidelity DNA Polymerase 热启动版高保真 DNA 聚合酶 PCR 系列 添加了单克隆抗体, 可进行高特异性的热启动 PCR 扩增速度是常规聚合酶的 倍 优化的缓冲体系广泛适用于各种模板 提供 PCR Enhancer 以帮助扩增高 GC 含量的模板 提供即用型的预混液, 最大程度地减少实验步骤 保真度是 Taq DNA Polymerase 的 52 倍, 是 Pfu DNA Polymerase 的 6 倍保存条件 :-20 保存 产品概述 Phanta HS Super-Fidelity DNA Polymerase 是 Phanta Super- Fidelity DNA Polymerase 的热启动版本, 在原有基础上添加了在常温下能够抑制 5 3 聚合酶活性和 3 5 外切酶活性的两种单克隆抗体, 可进行高特异性的热启动 (Hot Start) PCR P502-d1 P502-d3 5 SF Buffer (with 10 mm MgSO4) 25 mm MgSO4 dntp Mix (10 mm each) Phanta HS Super-Fidelity DNA Polymerase (1 U/μl) 5 PCR Enhancer DMSO 10 Loading buffer 1.25 ml 1 ml 100 µl 100 µl 500 µl 100 µl 1.25 ml 10 P502-d1 体系 ddh 2 O 5 SF Buffer (with 10 mm MgSO 4 ) 25 mm MgSO 4 dntp Mix (10 mm each) DMSO 5 PCR Enhancer 模板 DNA* Primer1 (10 μm) Primer2 (10 μm) Phanta HS Super-Fidelity DNA Polymerase (1 U/μl) to 50 μl 10 μl 可选 1 μl 可选可选可选 2 μl 2 μl 1 μl * 不同模板最佳反应浓度有所不同, 下表为 50 μl 体系推荐模板使用量 : 目的片段长度 <1 kb 1-10 kb >10 kb 基因组 DNA 质粒或病毒 DNA cdna 50 ng-250 ng 100 ng-300 ng 10 pg-20 ng 10 pg-20 ng 1-5 μl ( 不超过 PCR 反应总体积的 1/10) 150 ng-400 ng 1 ng-30 ng 程序 sec-3 min ( 预变性 ) 5-10 sec sec sec/kb 5-10 min ( 彻底延伸 ) cycles Phanta HS Super-Fidelity DNA Polymerase 100 U 1,000 U P502-d1 P502-d ,

36 PCR 系列 高保真 PCR 2 Phanta HS Master Mix 热启动版高保真 DNA 聚合酶 添加了单克隆抗体, 可进行高特异性的热启动 PCR 保真度是 Taq DNA Polymerase 的 52 倍, 是 Pfu DNA Polymerase 的 6 倍 扩增速度是常规聚合酶的 倍 优化的缓冲体系广泛适用于各种模板 提供 PCR Enhancer 以帮助扩增高 GC 含量的模板 提供即用型的预混液, 最大程度地减少实验步骤 保存条件 :-20 保存 产品概述 Phanta HS Super-Fidelity DNA Polymerase 是 Phanta Super- Fidelity DNA Polymerase 的热启动版本, 在原有基础上添加了在常温下能够抑制 5 3 聚合酶活性和 3 5 外切酶活性的两种单克隆抗体, 可进行高特异性的热启动 (Hot Start) PCR P P Phanta HS Master Mix 1 ml 5 ml 体系 ddh 2 O 2 Phanta HS Master Mix Primer1 (10 μm) Primer2 (10 μm) 模板 DNA * to 50 μl 25 μl 2 μl 2 μl x μl * 不同模板最佳反应浓度有所不同, 下表为 50 μl 体系推荐模板使用量 : 目的片段长度 <1 kb 1-10 kb >10 kb 基因组 DNA 质粒或病毒 DNA cdna 50 ng-250 ng 100 ng-300 ng 10 pg-20 ng 10 pg-20 ng 1-5 μl ( 不超过 PCR 反应总体积的 1/10) 150 ng-400 ng 1 ng-30 ng 程序 sec-3 min ( 预变性 ) 5-10 sec sec sec/kb 5-10 min ( 彻底延伸 ) cycles 2 Phanta HS Master Mix 1 ml 5 ml P P ,

37 高保真 PCR Phanta EVO Super-Fidelity DNA Polymerase 超高保真度的 DNA 聚合酶 PCR 系列 有效扩增 20 kb 的基因组片段和 40 kb 的质粒片段 保真度是 Taq DNA Polymerase 的 69 倍, 是 Pfu DNA Polymerase 的 8 倍 扩增速度是常规聚合酶的 倍, 速度可达 15 sec/kb 优化的缓冲体系广泛适用于各种类型模板 提供 PCR Enhancer 以帮助扩增高 GC 含量的模板 提供即用型的预混液, 最大程度地减少实验步骤 保存条件 :-20 保存 产品概述 Phanta EVO Super-Fidelity DNA Polymerase 是 Phanta Super-Fidelity DNA Polymerase 的升级版本 与上一代产品相比,Phanta EVO 中添加了独特的延伸因子, 并对反应体系进行了深度优化, 使其扩增稳定性 保真度以及对长片段的扩增能力得到了进一步提升 使用 λdna 质粒等简单模板,Phanta EVO 可以有效扩增长达 40 kb 的片段 ; 使用基因组 DNA 等复杂模板,Phanta EVO 也可以有效扩增长达 20 kb 的片段 其扩增错配率是普通 Taq 聚合酶的 1/69, 且扩增速度可以达到 15 sec/kb 此外, Phanta EVO 对 PCR 抑制剂有良好的抵抗能力, 可用于细菌 真菌 植物组织 动物组织或全血样品的直接 PCR 该酶具有 5 3 聚合酶活性和 3 5 外切酶活性, 扩增产物为平端, 适用于 ClonExpress 和拓扑克隆试剂盒 (C112/C113/C115/C601) 单酶 P503-d1 P503-d3 Phanta EVO Super-Fidelity DNA Polymerase (1 U/μl) 100 µl 5 EVO Buffer (with 10 mm MgCl 2 ) 1.25 ml 25 mm MgCl 2 1 ml 10 P503-d1 dntp Mix (10 mm each) 100 µl 5 PCR Enhancer 500 µl 10 Loading buffer 1.25 ml 预混液 P P Phanta EVO Master Mix 1 ml 5 ml 5 PCR Enhancer 200 µl 1 ml 体系 ( 以 P513 为例 ) 性能展示 M 0.5 kb 1.2 kb Human Genome (100 ng/50 μl reaction) 1.7 kb 3.1 kb 4.1 kb 4.8 kb 7.2 kb 8.0 kb 8.5 kb 12.1 kb 15.4 kb M ddh 2 O 2 Phanta EVO Master Mix 5 PCR Enhancer Primer1 (10 μm) Primer2 (10 μm) 模板 DNA to 50 μl 25 μl 可选 2 μl 2 μl x μl 程序 以人基因组为模板扩增 0.5 kb 1.2 kb 1.7 kb 3.1 kb 4.1 kb 4.8 kb 7.2 kb 8.0 kb 8.5 kb 12.1 kb 15.4 kb 目标基因,PCR 反应结束后取 10 ul 进行 sec/3 min 15 sec 15 sec 15/30 sec/kb 7 min cycles 电泳检测 可见,Phanta EVO Super-Fidelity DNA Polymerase 具有高效的扩增性能 Phanta EVO Super-Fidelity DNA Polymerase 100 U 1,000 U P503-d1 P503-d ,235 2 Phanta EVO Master Mix 1 ml 5 ml P P ,

38 PCR 系列 高保真 PCR Phanta EVO HS Super-Fidelity DNA Polymerase 超高保真度的热启动 DNA 聚合酶 添加了单克隆抗体, 可进行高特异性的热启动 PCR 保真度是 Taq DNA Polymerase 的 69 倍, 是 Pfu DNA Polymerase 的 8 倍 扩增速度是常规聚合酶的 倍 优化的缓冲体系广泛适用于各种类型模板 提供 PCR Enhancer 以帮助扩增高 GC 含量的模板 提供即用型的预混液, 最大程度地减少实验步骤 保存条件 :-20 保存 产品概述 Phanta EVO HS Super-Fidelity DNA Polymerase 是 Phanta HS Super-Fidelity DNA Polymerase 的升级版本 Phanta EVO HS Super-Fidelity DNA Polymerase 添加了独特的延伸因子, 并对反应体系进行了深度优化, 使其扩增稳定性 保真度以及对长片段的扩增能力得到了进一步提升 单酶 P504-d1 P504-d3 Phanta EVO HS Super-Fidelity DNA Polymerase (1 U/μl) 100 µl 5 EVO Buffer (with 10 mm MgCl 2 ) 1.25 ml 25 mm MgCl 2 1 ml 10 P504-d1 dntp Mix (10 mm each) 100 µl 5 PCR Enhancer 500 µl 10 Loading buffer 1.25 ml 预混液 P P P Phanta EVO HS Master Mix 5 PCR Enhancer 1 ml 200 µl 5 ml 1 ml P 体系 ( 以 P514 为例 ) ddh 2 O 2 Phanta EVO HS Master Mix 5 PCR Enhancer Primer1 (10 μm) Primer2 (10 μm) 模板 DNA to 50 μl 25 μl 可选 2 μl 2 μl x μl 程序 sec/3 min 15 sec 15 sec sec/kb 7 min cycles Phanta EVO HS Super-Fidelity DNA Polymerase 100 U 1,000 U P504-d1 P504-d ,015 2 Phanta EVO HS Master Mix 1 ml 5 ml 15 ml P P P ,006 5,

39 高保真 PCR Phanta Max Super-Fidelity DNA Polymerase 最强模板兼容性的新一代高保真 DNA 聚合酶 PCR 系列 超保真度 扩增更快 扩增更长 适应度广 保真度是 Taq DNA Polymerase 的 53 倍,Pfu DNA Polymerase 的 6 倍极限速度可达 0.5 sec/kb,30 sec/kb 可高效扩增绝大多数片段质粒 λdna 等简单模板有效扩增长度可达 40 kb,cdna 有效扩增长度可达 10 kb, 基因组有效扩增长度可达 20 kb 适用于各种 GC 含量片段扩增, 对 PCR 抑制剂具有超强的耐受度, 可用于多种样本的直接 PCR 保存条件 :-20 保存 产品概述 Phanta Max Super-Fidelity DNA Polymerase 中 添加了独特的延伸因子 特异性促进因子以及平台 期解抑制因子, 使其长片段扩增能力 扩增特异性 以及扩增产量方面得到了大幅度提升 Phanta Max Super-Fidelity DNA Polymerase 对 PCR 抑制剂具 有良好的抵抗能力, 可用于细菌 真菌 植物组织 P505-d1 Phanta Max Super-Fidelity DNA Polymerase 100 μl 2 Phanta Max Buffer ml dntp Mix (10 mm each) 100 μl 10 Loading buffer 1.25 ml P505-d2 5 P505-d1 P505-d3 10 P505-d1 动物组织以及全血样品的直接 PCR Phanta Max Super-Fidelity DNA Polymerase 中添加了在常温 体系 下能够抑制其 5 3 聚合酶活性和 3 5 外切酶 活性的两种单克隆抗体, 可进行高特异性的热启动 PCR 该酶具有 5 3 聚合酶活性和 3 5 外切 酶活性, 扩增产物为平端, 适用于 ClonExpress 和 拓扑克隆试剂盒 (C112/C113/C115/C601) ddh 2 O 2 Phanta Max Buffer dntp Mix (10 mm each) Primer1 (10 μm) Primer2 (10 μm) Phanta Max Super-Fidelity DNA Polymerase 模板 DNA up to 50 μl 25 μl 1 μl 2 μl 2 μl 1 μl x μl 性能展示 稳定的粗品扩增能力 程序 Direct or Lysates PCR M M Lane 1: Human whole blood, 1,229 bp Lane 2: Cultured cell, 1,606 bp Lane 3: Yeast colony, 673 bp Lane 4: Bacteria colony, 935 bp Lane 5: Plant leaf, 1,445 bp Lane 6: Mouse tail lysates, 410 bp sec/3 min 15 sec 15 sec sec/kb 5 min cycles 优异的高 GC 扩增能力 以人基因组为模板扩增 654 bp 900 bp 800 bp 1,200 bp 1,400 bp 426 bp 目标片段, 各扩增子 GC 含量均高于 68% GC-rich Amplicons M M Lane 1: 654 bp, 68.1% GC Content Lane 2: 900 bp, 69.4% GC Content Lane 3: 800 bp, 71.3% GC Content Lane 4: 1,200 bp, 73.5% GC Content Lane 5: 1,400 bp, 74.7% GC Content Lane 6: 426 bp, 76.8% GC Content Phanta Max Super-Fidelity DNA Polymerase 100 U 500 U 1,000 U P505-d1 P505-d2 P505-d ,258 4,

40 PCR 系列 高保真 PCR 2 Phanta Max Master Mix 最强模板兼容性的新一代高保真 DNA 聚合酶 超保真度 扩增更快 扩增更长 适应度广 保真度是 Taq DNA Polymerase 的 53 倍,Pfu DNA Polymerase 的 6 倍极限速度可达 0.5 sec/kb,30 sec/kb 可高效扩增绝大多数片段质粒 λdna 等简单模板有效扩增长度可达 40 kb,cdna 有效扩增长度可达 10 kb, 基因组有效扩增长度可达 20 kb 适用于各种 GC 含量片段扩增, 对 PCR 抑制剂具有超强的耐受度, 可用于多种样本的直接 PCR 保存条件 :-20 保存 产品概述 Phanta Max Super-Fidelity DNA Polymerase 中添加了独特的延伸因子 特异性促进因子以及平台期解抑制因子, 使其长片段扩增能力 扩增特异性以及扩增产量方面得到了大幅度提升 Phanta Max Super-Fidelity DNA Polymerase 对 PCR 抑制剂具有良好的抵抗能力, 可用于细菌 真菌 植物组织 动物组织以及全血样品的直接 PCR Phanta Max Super-Fidelity DNA Polymerase 中添加了在常温下能够抑制其 5 3 聚合酶活性和 3 5 外切酶活性的两种单克隆抗体, 可进行高特异性的热启动 PCR 该酶具有 5 3 聚合酶活性和 3 5 外切酶活性, 扩增产物为平端, 适用于 ClonExpress 和拓扑克隆试剂盒 (C112/C113/C115/C601) P P P Phanta Max Master Mix 体系 ddh 2 O 2 Phanta Max Master Mix Primer1 (10 μm) Primer2 (10 μm) 模板 DNA 程序 1 ml 5 1 ml 15 1 ml up to 50 μl 25 μl 2 μl 2 μl x μl 性能展示 稳定的粗品扩增能力 Direct or Lysates PCR M M Lane 1: Human whole blood, 1,229 bp Lane 2: Cultured cell, 1,606 bp Lane 3: Yeast colony, 673 bp Lane 4: Bacteria colony, 935 bp Lane 5: Plant leaf, 1,445 bp Lane 6: Mouse tail lysates, 410 bp sec/3 min 15 sec 15 sec sec/kb 5 min cycles 优异的高 GC 扩增能力 以人基因组为模板扩增 654 bp 900 bp 800 bp 1,200 bp 1,400 bp 426 bp 目标片段, 各扩增子 GC 含量均高于 68% GC-rich Amplicons M M Lane 1: 654 bp, 68.1% GC Content Lane 2: 900 bp, 69.4% GC Content Lane 3: 800 bp, 71.3% GC Content Lane 4: 1,200 bp, 73.5% GC Content Lane 5: 1,400 bp, 74.7% GC Content Lane 6: 426 bp, 76.8% GC Content 2 Phanta Max Master Mix 1 ml 5 ml 15 ml P P P ,670 4,

41 热启动 PCR AceTaq DNA Polymerase 化学修饰热启动 Taq 酶, 提供最高的严谨性 PCR 系列 采用化学修饰,80 以下酶活被封闭 95 加热 5 min 即可释放酶活 适用于从复杂模板 ( 基因组,cDNA) 中扩增低拷贝基因 保存条件 :-20 保存 产品概述 AceTaq DNA Polymerase 是经过化学修饰的 Taq DNA Polymerase, 在温度低于 80 时活性被封闭, 可防止在样品准备及反应升温阶段产生非特异扩增和引物二聚体 只有经过 95 加热后活性才被释放 与其它热启动方法相比,AceTaq DNA Polymerase 10 AceTaq Buffer (Mg 2+ Plus) dntp Mix (10 mm each) AceTaq DNA Polymerase (5 U/μl) P401-d1 1 ml 200 µl 50 µl P401-d2 4 ml 800 µl 200 µl P401-d3 P401-d2 3 具有最高的严谨性 ; 与现有化学修饰的热启动 Taq 酶相比,AceTaq DNA Polymerase 的激活只需要 5 体系 min, 兼容现有的 PCR 程序 AceTaq DNA Polymerase 配合优化的缓冲体系, 可最大程度的减少非特异扩增和引物二聚体, 带来最高的灵敏度, 非常适合从复杂模板 ( 基因组,cDNA) 中扩增低拷贝基因 PCR 产物的 3 端带 A, 可克隆至 T 载体, 并适用于 ClonExpress 快速克隆试剂盒 (C112/C113/C115/C601) ddh 2 O 10 AceTaq Buffer (Mg 2+ Plus) 25 mm MgCl 2 dntp Mix (10 mm each) 5 PCR Enhancer 模板 DNA Primer1 (10 μm) Primer2 (10 μm) AceTaq DNA Polymerase (5 U/μl) to 50 μl 5 μl optional 1 μl optional optional 2 μl 2 μl 0.5 μl 性能展示 Taq AceTaq M EGFR IFN8R IL-8 ILGF-1 p53 EGFR IFN8R IL-8 ILGF-1 p53 以 10 ng 人胎盘总 RNA 进行逆转录 将所得 cdna 的 1/10 体积作为模板, 分别用 Taq 和 AceTaq 扩增 EGFR IFN8R IL-8 ILGF-1 p53 基因 35 个循环后, 取 1/4 PCR 产物进行电泳 可以看出, 对于中等拷贝数的 IFN8R IL-8 和 p53 基因, 热启动的 AceTaq 可极大提高特异性和产量 ; 对于低拷贝的 EGFR 和 ILGF-1 基因, 只有用 AceTaq 才能实现扩增 M: DL2,000 Plus DNA Marker AceTaq DNA Polymerase 250 U 1,000 U 3,000 U P401-d1 P401-d2 P401-d ,100 3,

42 PCR 系列 热启动 PCR 2 AceTaq Master Mix 化学修饰热启动 Taq 酶, 提供最高的严谨性 采用化学修饰,80 以下酶活被封闭 95 加热 5 min 即可释放酶活 适用于从复杂模板 ( 基因组,cDNA) 中扩增低拷贝基因 提供即用型的预混液, 最大程度地减少实验步骤 保存条件 :-20 保存 产品概述 AceTaq DNA Polymerase 是经过化学修饰的 Taq DNA Polymerase, 在温度低于 80 时活性被封闭, 可防止在样品准备及反应升温阶段产生非特异扩增和 2 AceTaq Master Mix P ml P ml P ml 引物二聚体 只有经过 95 加热后活性才被释放 与其它热启动方法相比,AceTaq DNA Polymerase P P P 具有最高的严谨性 ; 与现有化学修饰的热启动 Taq 酶相比,AceTaq DNA Polymerase 的激活只需要 5 2 AceTaq Master Mix (Dye Plus) 1 ml 5 1 ml 15 1 ml min, 兼容现有的 PCR 程序 AceTaq DNA Polymerase 配合优化的缓冲体系, 可最大程度的减少非特异扩增和引物二聚体, 带来最高的灵敏度, 非常适合从复杂模板 ( 基因组,cDNA) 中扩增低拷贝基因 PCR 产物的 3 端带 A, 可克隆至 T 载体, 并适用于 ClonExpress 快速克隆试剂 体系 ddh 2 O 2 AceTaq Master Mix Primer1 (10 µm) Primer2 (10 µm) Template DNA To 50 µl 25 µl 2 µl 2 µl x µl 盒 (C112/C113/C115/C601) 2 Master Mix 包含 AceTaq DNAPolymerase dntps 以及优化的缓冲体系, 只需加入引物和模板即可进行扩增, 减少了 程序 移液操作, 提高了通量和结果的重现性 含染料的 2 Master Mix 可在 PCR 反应结束后直接进行电泳 性能展示 Taq AceTaq min ( 预变性 ) 30 sec 30 sec 60 sec/kb 7 min ( 彻底延伸 ) cycles M EGFR IFN8R IL-8 ILGF-1 p53 EGFR IFN8R IL-8 ILGF-1 p53 以 10 ng 人胎盘总 RNA 进行逆转录 将所得 cdna 的 1/10 体积作为模板, 分别用 Taq 和 AceTaq 扩增 EGFR IFN8R IL-8 ILGF-1 p53 基因 35 个 循环后, 取 1/4 PCR 产物进行电泳 可以看出, 对 于中等拷贝数的 IFN8R IL-8 和 p53 基因, 热启动 的 AceTaq 可极大提高特异性和产量 ; 对于低拷贝 的 EGFR 和 ILGF-1 基因, 只有用 AceTaq 才能实 现扩增 M: DL2,000 Plus DNA Marker 2 AceTaq Master Mix 1 ml 5 ml 15 ml P P P ,400 2 AceTaq Master Mix (Dye Plus) 1 ml 5 ml 15 ml P P P ,

43 热启动 PCR Champagne Taq TM DNA Polymerase 分子诊断首选热启动 Taq 酶 PCR 系列 95 加热 30 s 即可完全释放 Taq 酶活性 极高的特异性和扩增灵敏度 对各种 PCR/qPCR 体系具有极佳的兼容性 保存条件 :-20 保存 产品概述 Champagne Taq TM DNA Polymerase 是由 Champagne Taq TM Antibody 与 Taq 酶经过最佳比例混合得到的热启 动 Taq 酶 基于 Champagne Taq TM Antibody 的热稳定 特性,Champagne Taq TM DNA Polymerase 在 55 下 仍可保持严格的封闭性, 使得在混样和体系升温阶段非 特异扩增被抑制到最低程度 当反应在 95 保持 30 s 10 Champagne Taq TM Buffer (Mg 2+ plus) dntp Mix (10 mm each) Champagne Taq TM DNA Polymerase (2.5 U/μl) Champagne Taq TM DNA Polymerase (5 U/μl) Champagne Taq TM DNA Polymerase (10 U/μl) P122-d1 2 ml 400 µl 200 µl - - P122-d2 2 ml 400 µl µl - P122-d3 2 ml 400 µl µl 以上时,Champagne Taq TM Antibody 彻底失活,Taq 酶活性被完全释放, 保证了 PCR 体系具有最高的扩增 效率和灵敏度 Champagne Taq TM DNA Polymerase 的 激活不受缓冲液 ph 离子强度等因素的影响, 因此具 有更好的 PCR 体系兼容性, 是基于 PCR/qPCR 分子诊 断试剂的首选用热启动 Taq 酶 性能展示 Champagne Taq TM DNA Polymerase Taq DNA Polymerase 体系 ddh 2 O 10 Champagne Taq Buffer for PAGE (Mg 2+ plus) dntp Mix (10 mm each) 5 PCR Enhancer 模板 DNA Primer1 (10 μm) Primer2 (10 μm) Champagne Taq TM DNA Polymerase (2.5 U/μl) to 50 μl 5 μl 1 μl optional optional 2 μl 2 μl 1 μl M h pre-incubation 55 O C 24 h pre-incubation 程序 sec ( 预变性 ) 30 sec 30 sec 60 sec/kb 7 min ( 彻底延伸 ) cycles 以 pg-1 ng 小鼠基因组为模板, 用 Champagne Taq TM DNA Polymerase 和 Taq DNA Polymerase 扩增 tpa 基因 300 bp 片段 混样后立刻开始 PCR 反应 (0 h), 或者在 55 放置 24 h 后再开始 PCR 反应 可以看到, Champagne Taq TM DNA Polymerase 可以保证高度的特 异性, 而且检测灵敏度可以达到 pg 基因组 ( 相当 于 10 拷贝 ) 1-6:31.25 pg-1 ng 小鼠基因组 ;7:NTC( 无模板对照 ) M: DL2,000 Plus DNA Marker Champagne Taq TM DNA Polymerase 500 U (2.5 U/μl) 500 U (5 U/μl) 500 U (10 U/μl) P122-d1 P122-d2 P122-d

44 PCR 系列 热启动 PCR Champagne Taq TM Antibody 热稳定 Taq 酶单抗, 具有极高特异性 最耐热的 Taq 酶单抗, 提供最高的特异性 悬浮细胞发酵生产带来最高的质量 与不同品牌的 Taq 酶均有很好的兼容性 保存条件 :-20 保存 产品概述 Champagne Taq TM Antibody 是抗 Taq 酶的单克隆抗体, 与 Taq 酶结合后可抑制 DNA 聚合酶活性 Champagne Taq TM Antibody 与 Taq 酶的亲和力非常高, 在 65 下仍然可以封闭 Taq 酶的活性, 因此可以非常有效的抑制引物二聚体和非特异性扩增 Champagne Taq TM Antibody 在 95 只需加热 30 s 即可失活, 完全释放 Taq 酶活性, 适用于各种基于 Taq 酶的热启动 PCR qpcr 反应 不同于小鼠腹水生产的单抗,Champagne Taq TM Antibody 采用大规模悬浮细胞发酵生产, 最大程度上减少了宿主抗体 核酸等残留, 因此具有极高的纯度和批次稳定性 P Champagne Taq TM Antibody (5 U/μl) 100 µl 使用方法将 Taq DNA Polymerase (5 U/μl) 和 Champagne Taq TM Antibody (5 U/μl) 等体积混合后, 下放置约 10 min, 即为热启动型 Taq DNA Polymerase (2.5 U/μl) 性能展示 120 pe rc e nt activity (%) Taq Champagne Taq TM FastStart TM Taq Time/min 将 Champagne Taq TM Taq 以及化学修饰的 FastStart TM Taq 在 95 加热不同时间后, 按标准方法检测 Taq 酶活性 Champagne Taq TM Antibody 在 95 加热 30 s 后即可完全失活, 释放超过 95% 的 Taq 酶活性, 而化学修饰的 FastStart TM Taq 即使经过 95 长时间加热也只能恢复 40% 左右的活性 Champagne Taq TM Antibody 500 U P

45 等温扩增 PCR Bst DNA Polymerase Large Fragment 等温扩增首选用酶 PCR 系列 具有很强的链置换活性, 但缺失 5 3 核酸外切酶活性 保存条件 :-20 保存 产品概述 Bst DNA Polymerase Large Fragment 是 Bacillus stearothermophilus DNA 聚合酶的一部分, 具有 5 3 DNA 聚合酶活性, 以及很强的链置换 (strand displacement) 活性, 但缺失 5 3 核酸外切酶活性 Bst DNA Polymerase Large Fragment 可用于等温扩增反应, 例如 LAMP (Loop-mediated isothermal amplification), RCA (Rolling-circle amplification) 等 P P Bst DNA Polymerase Large Fragment (8 U/μl) 10 ThermoPol Buffer MgSO 4 (100 mm) 100 μl 1 ml 1 ml 1 ml 3 1 ml 2 1 ml 体系 10 ThermoPol Buffer 2.5 μl MgSO 4 (100 mm) 1.5 μl dntp Mix(10 mm) 3.5 μl FIP/BIP Primers 4 μl F3/B3 Primers 0.5 μl LoopF/LoopB Primers 2 μl Bst DNA Polymerase Large Fragment 1 μl 模板 DNA x μl Nuclease-free Water up to 25 μl 程序 60 C-65 C 恒温孵育 1 h Bst DNA Polymerase Large Fragment 800 U 8,000 U P P ,

46 PCR 系列 多重 PCR Multiplex PCR Kit 特异性扩增可达 19 重 多重性 检测重数可达 19 重甚至更高 特异性 扩增缓冲高度优化, 最大程度上抑制非特异性扩增 均一性 扩增稳定均一, 靶点偏好性极低 灵敏性 使用基因组 DNA 作为模板, 扩增灵敏度可达 1 ng 适应性 广泛兼容各种 GC 含量和长度的扩增子, 随酶附赠 GC Enhancer 保存条件 :-20 保存 产品概述 Multiplex PCR Kit 是一款专门针对多重 PCR 扩增深度优化的试剂盒 试剂盒基于 Multiplex DNA Polymerase, 是一种新型的化学修饰热启动 DNA 聚合酶 该酶具有特异性好 灵敏度高 扩增均一 GC 含量适应性广等诸多优势, 是多重 PCR 用酶的最佳选择 配以精心优化的多重 PCR 专用扩增缓冲 2 Multiplex Buffer,Multiplex PCR Kit 能够在默认条件下稳定 高效的完成绝大多数扩增反应, 从而为使用者节省繁琐的体系优化过程中不必要的人力物力消耗 PM PM PM Multiplex DNA Polymerase 2 Multiplex Buffer 5 Multiplex GC Enhancer 体系 Nuclease-free water 模板 10 Primer Mix 2 Multiplex Buffer 5 Multiplex GC Enhancer ( 可选 ) Multiplex DNA Polymerase 50 μl 1.25 ml 700 μl 200 μl ml μl PM up to 50 μl x μl 5 μl 25 μl 5-10 μl 1 μl 程序 min ( 预变性 ) 30 sec 90 sec 60 sec/kb 10 min ( 彻底延伸 ) cycles 性能展示 M 1 ng 10 ng 100 ng 500 ng M Multiplex PCR Kit 具有值得信赖的扩增能力和灵敏度, 能在默认条件下高效完成绝大多数多重扩增反应 如图所示, 以人基因组为模板进行 19 重检测, 扩增子长度范围为 70 bp-916 bp 可见, 在 1 ng-500 ng 的模板量范围内 Multiplex PCR Kit 都可以均一的对各位点进行多重扩增 Multiplex PCR Kit 具有优秀的片段长度兼容性 如图所示, 以小鼠基因组 DNA 为模板, 扩增 1.55 kb 1.07 kb 0.45 kb 三个长度差异较大的目标位点 可见, 试剂盒能在单个反应体系中兼顾各种长度的扩增子 1: 三重 PCR;2-4: 单重 PCR;5-7: 两重 PCR M: DL5,000 DNA Marker M: 100 bp DNA Ladder Multiplex PCR Kit 50 rxn 200 rxn 1,000 rxn PM PM PM ,200 13,

47 直接扩增 PCR 直接扩增 PCR PCR 系列 无需提取基因组 DNA, 直接对动物组织 植物组织 全血样本进行快捷 PCR 反应 全血 配置 PCR 体系 PCR 反应 鼠尾 / 脚趾 / 耳朵 裂解液 叶片 / 种子

48 PCR 系列 直接扩增 PCR One Step Mouse Genotyping Kit 动物组织直接进行 PCR 反应的试剂盒 基于蛋白酶 K 的特制裂解液 裂解产物直接用于 PCR 扩增, 无需提取基因组 广泛适用于 2 kb 以内目标片段扩增, 并适用于 4 对引物以内的多重 PCR 反应保存条件 :1 Mouse tissue Lysis Buffer 4 保存 ; 其余 -20 保存 产品概述 本试剂盒包含整套的 DNA 粗提取以及 PCR 扩增体系, 适用于小鼠基因型快速鉴定 (Rapid Genotyping) 可用于从小鼠尾巴 耳朵以及脚趾等组织中快速释放基因组 DNA, 产物可直接进行 PCR 扩增, 无需匀浆 破碎 过夜消化 酚氯仿抽提 DNA 沉淀或柱式纯化等操作, 极大缩短了实验耗时 试剂盒中配有 2 Taq 1 Mouse tissue Lysis Buffer Proteinase K 2 Taq Plus Master Mix (Dye Plus) 25 mm MgCl 2 5 PCR Enhancer PD ml 800 μl 5 ml 500 μl 2 ml Plus Master Mix (Dye Plus), 包含高性能的 Taq Plus DNA Polymerase,dNTP 以及优化的缓冲体系,PCR 反应时只需加入引物和模板即可进行扩增, 减少了开 体系 管 / 移液等操作, 显著降低了样品交叉污染并且提高了检测通量和结果的重现性 独特的保护剂使得 Taq Plus Master Mix 经过反复冻融后仍可保持稳定的活性 体系中预混有电泳缓冲液和染料, 可在反应结束后直接进行电泳, 使用方便快捷 ddh 2 O 2 Taq Plus Master Mix (Dye Plus) Primer1 (10 μm) Primer2 (10 μm) 裂解产物 to 50 μl 25 μl 2 μl 2 μl 2-5 μl 性能展示 M 程序 min ( 预变性 ) 30 sec 30 sec 30 sec/kb 7 min ( 彻底延伸 ) cycles 使用 One Step Mouse Genotyping Kit 以同一个粗提样 品为模板, 扩增 17 个不同的基因 ( 长度为 200 bp-800 bp 之间 ) 所有片段均可以实现特异性高产量扩增 M: DL2,000 Plus DNA Marker One Step Mouse Genotyping Kit 200 rxn PD ,

49 直接扩增 PCR One Step U + Probe Mouse Genotyping Kit 基于 UDG 防污染探针法 qpcr 的快速基因分型检测试剂盒 PCR 系列 可对动物组织进行快速处理 短暂加热后的裂解液直接作为模板进行基于热敏感 UDG 防污染的双探针法定量 PCR 检测, 对应基因型可直接由仪器软件输出, 避免人工核对数据引入错误 操作简单便利, 有效防止移液污染及 DNA 气溶胶污染 保存条件 :1 x Mouse tissue Lysis Buffer 4 保存 ; 其余 -20 保存 产品概述 本试剂盒包含整套的 DNA 粗提取以及优化的 AceQ U + Probe Master Mix 和高低浓度的校正用 ROX 溶液 适用于基于双探针荧光定量 PCR 体系的小鼠基因型快速鉴定 (Rapid Genotyping) 可用于从小鼠尾巴 耳朵以及脚趾等组织中快速释放基因组 DNA, 产物直接进行 qpcr 扩增, 避免多次开盖移液等操作, 基因型 1 Mouse tissue Lysis Buffer Proteinase K 2 AceQ U + Probe Master Mix 50 ROX Reference Dye 1 50 ROX Reference Dye 2 PD x 20 ml 800 μl 2 x 1.25 ml 100 μl 100 μl 结果直接由软件分析得出, 避免人工核对输入引入错 误, 并能极大缩短实验耗时 试剂盒中配备优化的防污染探针法 qpcr Master Mix, 试剂中引入的 dutp/ 体系 UDG 防污染系统可在室温下将含 U 的污染物迅速降解, 完全消除扩增产物产生的气溶胶对其它 qpcr 反应的影响 使用方便, 反应时只需加入适量水 引物 模板和探针即可进行扩增, 显著降低气溶胶污染并提高检测通量和结果的重现性 性能展示 Allelic Discrimination Plot 灭菌蒸馏水 2 Genotyping Probe Master Mix Primer 1F(10μM) Primer 1R(10μM) Primer 2F(10μM) Primer 2R(10μM) Taqman Probe 1(10μM) Taqman Probe 2(10μM) ROX Reference Dye 模板 DNA To 20 μl 10 μl 0.4 μl 0.4 μl 0.4 μl 0.4 μl 0.2 μl 0.2 μl 0.4 μl x μl 程序 mut 污染消化 Reps:1 预变性 Reps:1 循环反应 Reps: min 5-10 min 10 sec 30 sec WT Legend Homozygous WT/WT Heterozygous WT/mut NTC Homozygous mut/mut 以 FAM 和 HEX 分别标记等位基因上的野生型对应探针 和突变型对应探针, 对纯合 杂合及野生型小鼠进行探 针法 Genotyping, 得到如上直方图, 对应小鼠基因型 可由仪器直接输出 One Step U + Probe Mouse Genotyping Kit 200 rxn PD ,

50 PCR 系列 直接扩增 PCR Blood Direct PCR Kit V2 升级版全血直扩 PCR 试剂盒 基于改造的 Phanta Blood Super-Fidelity DNA Polymerase, 具有极强的扩增效率和 PCR 抑制物耐受度 适用各种血液样本, 兼容常规抗凝剂 可耐受高达 40% 的全血模板 可从全血中高效扩增长达 7.5 kb 的基因组片段保存条件 :-20 保存 产品概述 Blood direct PCR Kit V2 可以直接对全血样本进行 PCR, 无需进行 DNA 纯化或样品预处理 可用于直接 扩增的血样类型包括 : 新鲜血液 4 贮存血液 冷冻 血液以及储存在 Whatman 903 和 FTA 商用卡上的干 血渍, 且兼容所有常规抗凝剂 (EDTA 柠檬酸盐 肝 素等 ) 试剂盒中包含 Phanta Blood Super-Fidelity DNA Polymerase, 该酶对全血样品中的 PCR 抑制剂 PD Phanta Blood Super-Fidelity DNA Polymerase (1 U/μl) 75 µl 2 Phanta Blood Buffer V ml Positive control primer mix (10 μm each) 50 µl 10 mm each dntps 50 µl 10 Loading buffer 1.25 ml PD µl 1.25 ml 4 50 µl 200 µl 1.25 ml 具有超强的抵抗力, 可扩增全血浓度高达 40% 配以 精心优化的 2 Phanta Blood Buffer,Blood Direct 体系 PCR Kit 能够从全血样品中高效扩增长达 7.5 kb 的基 因组片段 试剂盒配有与哺乳动物和其他许多脊椎动 ddh 2 O 2 Phanta Blood Buffer V μl 25 μl 物兼容的引物预混液 Positive control primer mix, 可 用于进行阳性对照反应 10 mm each dntps Primer1 (10 μm) Primer2 (10 μm) 1 μl 2 μl 2 μl Phanta Blood Super-Fidelity DNA Polymerase (1 U/μl) 1.5 μl 性能展示 全血 5 μl 广泛的物种兼容性 分别从人 大鼠 小鼠 猪 狗 兔 鸡 鸟 牛的 -20 存储 程序 的肝素抗凝全血中扩增 237 bp 的 DNA 片段 所有血样的血液模板使用浓度为 10% 其中 NTC: No Template Control;PC: Positive Control, 使用纯化过的人基因组 DNA 作为扩增模板 PCR 反应结束后进行 PCR 电泳检测 M Huma n Mous e Rat Rabbi t pig Dog Cow Bird Chicken NTC PC min ( 预变性 ) 15 sec 15 sec 30 sec/kb 5 min ( 彻底延伸 ) 35 cycles 优秀的扩增性能 以人 -20 存储的肝素抗凝血为模板, 扩增不同长度 DNA 片段 PCR 结束后电泳显示,Blood Direct PCR Kit V2 可以高效扩增 长达 7.5 kb 的片段 M 237 bp 492 bp 501 bp 1.0 kb 1.1 kb 1.5 kb 2.0 kb 2.5 kb 3.8 kb 7.5 kb Blood Direct PCR Kit V2 50 rxn 200 rxn PD PD ,

51 直接扩增 PCR Plant Direct PCR Kit 高效的植物直扩试剂盒 PCR 系列 独特的超强耐受 DNA 聚合酶 宽广的样本兼容性 极高的稳定性 操作便捷 经过定向进化改造的直扩 DNA 聚合酶, 对植物中的 PCR 抑制物具有极强的耐受性, 同时保持了极高的扩增性能适合各种常见植物叶片及种子粗品的扩增反复冻融 50 次活性未见明显降低无需繁琐的 DNA 提取步骤, 使用少量叶片或简单裂解, 即可进行 PCR, 节约大量时间 保存条件 :2 Plant Direct Master Mix 置于 -20 保存 ;Plant Direct Lysis Buffer 可置于 -20 或 2-8 保存 产品概述 本产品适用于对植物叶片 种子等进行直接扩增, 可用于非多糖 多酚类植物样品高通量筛选 经过定向进化改造的直扩 DNA 聚合酶, 对植物中的 PCR 抑制物具有极强的耐受性, 同时保持了极高的扩增性能, 适用于 5 kb 以内 DNA 片段的扩增 ; 试剂盒中的独特 2 Plant Direct Master Mix Plant Direct Lysis Buffer A Plant Direct Lysis Buffer B PD ml 5 ml 5 ml PD ml 20 ml 20 ml 裂解缓冲液 A 可用于裂解新鲜或冻存的植物组织, 操作简单, 所得裂解物无需纯化即可作为扩增模板 裂 体系 解液中加入的保护剂使得粗品多次冻融后仍可有效扩增 预先配置的 2 Plant Direct Master Mix 只需加入引物和模板即可进行扩增反应, 减少了移液操作, 提高了检测通量和结果的重现性 扩增产物为平末端, 适用于 ClonExpress 同源重组和拓扑克隆试剂盒 ddh 2 O 2 Plant Direct Master Mix Primer1 (10 μm) Primer2 (10 μm) 植物叶片 粗提样本 to 50 μl 25 μl 2 μl 2 μl mm 叶圆片 /x μl (C112/C113/C115/C601) 使用 性能展示 程序 min ( 预变性 ) 10 sec 15 sec 30 sec/kb 5 min ( 彻底延伸 ) 35 cycles 以研磨法所得烟草叶片粗品 拟南芥叶片粗品 小麦 叶片粗品 水稻叶片粗品及玉米种子粗品为模板, 同 时以 CTAB 法提取的上述五种植物基因组 DNA 为对照, 使用 2 Plant Direct Master Mix 分别扩增长度为 0.5 kb 2.0 kb 0.3 kb 1.5 kb 2.3 kb 0.8 kb 0.3 kb 的 7 个不同目的片段, 均可成功扩增 可见 2 Plant Direct Master Mix 宽广的样本兼容性及超强的抑制剂 耐受性 Plant Direct PCR Kit 50 rxn 200 rxn PD PD ,

52 PCR 系列 一代测序样本制备 Colony-direct Plasmid Amplification Kit 一代测序样本快速制备试剂盒 快速扩增质粒, 直接用于测序反应 节约摇菌时间与成本, 简化样本制备流程 保存条件 :-20 保存, 除 Enzyme Mix v2 外, 其余解冻后可在 4 保存 2 周 产品概述本试剂盒使用具有极高保真度的 DNA 聚合酶和优化的反应体系, 用于快速从菌液或者菌落中扩增质粒得到可用于测序反应的 DNA 应用本试剂盒用于测序反应的质粒 DNA 制备, 可以省去大量的摇菌时间和成本, 简化样本制备流程, 加快收到样品到结果产出的速度 正常情况下每个反应可产生 1.5 μg-2.5 μg 质粒 DNA 产物 DNA 可直接用于测序反应 S S S Sample Buffer v3 2 Reaction Buffer v3 Enzyme Mix v2 5 ml 5 ml 500 μl 2 25 ml 2 25 ml 5 1 ml S x 5 性能展示 使用方案 各使用前震荡混匀 取待扩增菌落 / 液样品加入到 5 µl Sample Buffer v3 中 菌液 : 直接取 µl 菌液加入到含 5 µl Sample Buffer v3 的 PCR 管中 菌落 : 挑一小部分菌落到含 5 µl Sample Buffer v3 的 PCR 管中, 注意避免挑到培养基, 只需轻触菌落即可得到足够样品 离心收集,95 3 min 变性样品 Colony-direct Plasmid Amplification Kit 对不同抗性的不同质粒的扩增产物电泳图, 结果显示 Colony-direct 置于冰上冷却 Plasmid Amplification Kit 对不同抗性的不同质粒没有偏好性 M: DL15,000 DNA Marker 配制反应混合液 2 Reaction Buffer v3 Enzyme Mix v2 总体积 5 µl 0.5 µl 5.5 µl 30 孵育 3 h 65 孵育 5 min 取 1 µl 扩增产物用于测序反应 Colony-direct Plasmid Amplification Kit 1,000 rxn 10,000 rxn 50,000 rxn S S S ,000 20,000 85,

53 PCR 相关 PCR Enhancer 有效促进困难模板的扩增 PCR 系列 保存条件 :-20 保存 产品概述在进行 PCR 分析时, 高 GC 含量的 DNA 片段往往很难扩增, 因为其可能形成比较稳固的二级结构 在普通 PCR 反应条件下,DNA 聚合酶很难甚至根本不能介入到高 GC 含量的二级结构中 PCR Enhancer 是一种由多种成分组成的混合添加剂, 能够有效降低高 GC 模板和具有复杂二级结构模板的解链温度 当优化 PCR 程序后仍无法有效扩增目的片段时, 加入 PCR Enhancer 往往能得到意想不到的结果 P PCR Enhancer 500 µl 适用范围高 GC 含量的 DNA 片段的 PCR 扩增 性能展示 - Enhancer +Enhancer M Primer pair 1 Primer pair 2 Primer pair 1 Primer pair 2 以质粒为模板,primer pair 1 和 primer pair 2 为引物, 分别扩增两段大小均为 690 bp,gc 含量均为 72% 的片段 结果显示, 只有加入 PCR Enhancer 的实验组才能扩增出如图所示的目的片段 M: 100 bp DNA Ladder PCR Enhancer 500 μl P

54 PCR 系列 PCR 相关 dntp Mix 保存条件 :-20 保存 产品概述高纯度的 dntp 对于成功的 PCR 非常重要, 因为体系中任何杂质或抑制物都会导致 PCR 扩增的灵敏度和产量下降 dntp Mix (PCR Grade) 每个批次都经过了纯度检测及功能性质控实验, 同时还提供了两种浓度 :10 mm each 及 2.5 mm each 的包装, 适合于各种 PCR 相关反应 P P P P dntp Mix (10 mm each ) dntp Mix (2.5 mm each) 1 ml - 5 ml ml - 5 ml 适用范围 用于高灵敏度和高重复性的 PCR 和 RT-PCR dntp Mix (10 mm each) 1 ml 5 ml P P dntp Mix (2.5 mm each) 1 ml 5 ml P P

55 PCR 相关 Heat-labile UDG 有效控制 PCR 污染 PCR 系列 min 快速失活 兼容常见的 PCR 反应体系 保存条件 :-20 保存 产品概述 UDG (Uracil-DNA Glycosylase, 尿嘧啶 -DNA 糖基化酶 ) 可催化水解含有 du 的 DNA 单链或双链的尿嘧啶碱基和糖磷酸骨架的 N- 糖苷键, 释放游离尿嘧啶, 由此产生的无碱基位点很容易被水解断裂 Heat-labile Uracil DNA Glycosylase 来源于嗜冷海洋细菌, 对高温敏感, min 就可以使酶不可逆失活 Heat-labile UDG 在多种常见的 PCR Buffer 中都有很高的活性, 适用于 PCR/qPCR RT-PCR/RT-qPCR 体系 P P Heat-labile UDG (1 U/μl) 100 ul 500 µl 体系 ddh 2 O to 50 μl 10 Taq Buffer (with 20 mm MgCl2) 5 μl 25 mm MgCl 2 optional dutp 0.6 mm datp/dctp/dgtp 0.2 mm each 模板 DNA optional Primer1 (10 μm) 2 μl Primer2 (10 μm) 2 μl Taq DNA Polymerase (5 U/μl) 0.5 μl Heat-labile UDG (1 U/μl) 1 μl 程序 PCR 反应 10 min 降解含 U 模板 2 min UDG 失活, 模板变性 Heat-labile UDG 100 U 500 U P P ,

56 PCR 系列 PCR 相关 E.coli UDG 有效控制 PCR/qPCR 污染 经过严格的质量控制 保存条件 :-20 保存 产品概述 E. coli 尿嘧啶 -DNA 糖基化酶 (UDG) 催化含尿嘧啶的 DNA 释放尿嘧啶 UDG 能有效地水解单链或双链 DNA 上的尿嘧啶, 但不能从 6 碱基或更少的寡核苷酸上水解尿嘧啶 P P E. coli UDG (5 U/μl) 100 ul 1 ml 体系 ddh 2 O 10 Taq Buffer (with 20 mm MgCl 2 ) 25 mm MgCl 2 dutp datp/dctp/dgtp 模板 DNA Primer1 (10 μm) Primer2 (10 μm) Taq DNA Polymerase (5 U/μl) E. coli UDG (5 U/μl) to 50 μl 5 μl optional 0.6 mm 0.2 mm each optional 2 μl 2 μl 0.5 μl 0.2 μl 程序 PCR 反应 10 min 降解含 U 模板 2 min UDG 失活, 模板变性 E.coli UDG 500 U 5,000 U P P ,

57 PCR 相关 Uracil Excision Kit 特异性尿嘧啶切除试剂盒 PCR 系列 特异性切除尿嘧啶 形成单核苷酸缺口 适用于 ssdna 和 dsdna 保存条件 :-20 保存 产品概述 Uracil Excision Kit 使用的 Uracil Excision Enzyme 可以特异性地切除尿嘧啶并形成一个单核苷酸缺口 Uracil Excision Enzyme 包含有两种酶 : 尿嘧啶 -DNA 糖基化酶 (UDG) 和内切酶 VIII(Endo VIII) UDG 催化从含尿嘧啶的 DNA 上释放尿嘧啶, 产生一个脱碱基位点 Endo VIII 会裂解这个脱碱基位点处的磷酸二酯键而形成一个单核苷酸缺口 本产品既可以切割 ssdna, 也可以切割 dsdna UDG N Uracil Excision Enzyme (1 U/μl) 100 ul 10 Excision Buffer 1 ml 体系 ddh 2 O to 10 μl 10 Excision Buffer 1 μl 单链 DNA ( 含有 1 个尿嘧啶,10 μm) 1 μl Uracil Excision Enzyme (1 U/μl) 1 μl G C T A U T G C C G A T A A C G Endo VIII 程序 37, 孵育 15 min G C T A T G C C G A T A A C G G C T A T G C C G A T A A C G Uracil Excision Kit 100 rxn N ,

58 Vazyme 基础科研试剂 克隆 / 点突变系列产品 克隆 ClonExpress II One Step Cloning Kit ClonExpress MultiS One Step Cloning Kit ClonExpress Ultra One Step Cloning Kit 5min TM TA/Blunt-Zero Cloning Kit T4 DNA Ligase 定点突变 Mut Express II Fast Mutagenesis Kit V2 Mut Express MultiS Fast Mutagenesis Kit V 感受态细胞 DH5α 化学感受态细胞 XL10 化学感受态细胞 Fast-T1 化学感受态细胞 BL21 (DE3) 化学感受态细胞

59 克隆 / 点突变系列产品 技术背景 克隆 (Clone) 在生物学上, 是指选择性地复制出一段 DNA 序列 ( 分子克隆 ) 细胞 ( 细胞克隆 ) 或个体 ( 个体克隆 ) 在 DNA 水平上的分子克隆称为基因克隆 (DNA 克隆 ) 其基本原理是: 将编码某一多肽或蛋白质的基因 ( 外源基因 ) 组装到细菌质粒 ( 质粒是细菌染色体外的双链环状 DNA 分子 ) 中, 再将这种质粒 ( 重组质粒 ) 转入大肠杆菌体内, 这样重组质粒就随大肠杆菌的增殖而复制, 从而表达出外源基因编码的相应多肽或蛋白质 片段 载体 克隆 / 点突变系列 杂合子 目前, 大多数的分子克隆研究, 都需要使克隆 DNA 片段按照既定的顺序插入载体, 即定向克隆 常见的基因克隆技术 : 1 TA 克隆 : 是把 PCR 片段与一个具有 3 -T 突出的载体 DNA 连接起来的方法 利用 PCR 反应中所使用聚合酶的末端转移活性, 通常所得 PCR 产物会在 3' 端加上 A 突出 ; 与经过特殊处理的具有 3 -T 突出末端的 DNA 片段通过 T/A 配对进行连接 (Clark 1988;Holton and Graham 1991;Marchuk et al.1991; 综述见 Trower and Elgar1994;Zhou and Gomez-Sanchez 2000) 这种方法高效, 快捷 ; 但是克隆不定向, 应用范围较窄 T T PCR 产物 TA 克隆载体 A A 2 酶切连接法 : 是最为经典的基因克隆方法, 建立在限制性内切酶的基础上展开, 通常需要线性化载体的黏性末端具有两个特点 : 与另一端不一致, 与靶 DNA 的末端一致 首先, 在目的基因片段的两端引入酶切位点, 将 PCR 产物酶切后回收 ; 其次, 是质粒载体的处理, 大多数的质粒载体都具有多克隆位点, 使用限制性内切酶将质粒载体线性化 ; 之后使用 T4 连接酶将二者重组 该方法可实现定向克隆, 亦可变换质粒载体 ; 但有时会找不到一个适合的载体 靶 DNA 限制性内切酶的组合; 并且限制性内切酶很难切开 DNA 末端的位点 质粒含目的基因的外源 DNA 限制性酶切 DNA 连接酶目的基因 重组质粒 非转化酶 转化 筛选 受体菌 转化酶 扩增 3 Gateway 克隆 : Gateway 克隆系统 (Life Technologies 公司 ) 是使用两种不同的酶混合物, 它们各自完成一种不同类型的重组反应 其中,BP 克隆酶混合物对 attb 位点和 attp 位点进行重组, 产生 attl 和 attr 位点 ; 而 LR 克隆酶混合物则催化逆反应 对于每一个目的 DNA 片段, 首先需要通过 BP Gateway 克隆反应克隆到 供体载体 从而构建 入门克隆, 随后通过 Gateway LR 克隆反应转移到各种类型的 目的载体 中 该系统最大的优势是, 通过一个高效的单步过程, 就可以将两侧含有序列特异性重组位点的 DNA 片段转移到一个目的载体中 BP 反应 attb gene attb attp ccdb attp attl gene attl attr ccdb attr attb-flanked PCR product or attb expression clone donor vector BP Clonase TM entry clone by-product LR 反应 attl gene entry clone attl attr ccdb destination vector attr LR Clonase TM attb gene expression clone attb attp ccdb by-product attp

60 克隆 / 点突变系列产品 克隆 / 点突变系列 4 TOPO 克隆 : 利用拓扑异构酶的催化连接反应来完成目的 DNA 片段与附加线性载体的连接 PCR 产物每个末端的 5 -OH 可以攻击载体 DNA 和 TOPO 之间的磷酸酪氨酸键, 导致 TOPO 分子的释放和双切口环装重子的产生 (Life Technologies 公司 ) 该方法高效, 简单, 可以很容易实现平端克隆和 TA 克隆 5 同源重组克隆 : 在该系统中, 需要预先创建同源区域, 通过正向和反向 PCR 引物外延部分碱基, 这些碱基与线性化质粒载体已知序列的末端完全匹配 In-Fusion 重组系统 (Clontech 公司 ) 可以通过链置换 核苷酸的外切去除和同源重组等活性, 识别 15 bp 的同源区域进而实现重组 而 Vazyme 的 ClonExpress 重组克隆系列核心酶 Exnase, 可以识别 15 bp-20 bp 的同源序列并发挥重组功能 ( 如图 ), 最终创建成环状重组质粒 该方法快速, 高效, 不依赖于酶切和连接, 可以选择构建任何目标载体而不用担心酶切位点的选择问题, 极容易实现定向无缝克隆 Topoisomerase Tyr-274 +Exanse O P OH CCCTT GGGA A PCR Product HO A AGGG TTCCC P O Tyr-274 Topoisomerase Vazyme 助力科研, 为您提供全面 便捷 专业 高效的克隆试剂盒, 包含基于同源重组技术的无缝克隆产品, 以及优化改造后的 拓扑异构酶法克隆产品 ; 亦有基于 TA 克隆法的高效 T4 连接系统可供灵活选择 ; 除此之外, 搭配各种高效的化学感受态 一体化服 务, 让您的克隆再无烦恼 同源重组技术 同源重组是一种简单 快速且高效的 DNA 无缝克隆技术, 利用重组酶特异性识别载体和片段末端相同序列进行重组 载体 / 片段制备 2 h 重组 0.5 h 转化 1 h 半个工作日, 轻松做克隆 实验流程 引物设计 ( 官网引物设计软件 CE Design V1.04) PCR 扩增目的片段 (Phanta Max) 回收片段 ( 可选步骤 ) 载体线性化 ( 双酶切 / 单酶切 / 反向 PCR) 回收线性化载体 ( 可选步骤 ) 测序 阳性菌落鉴定 ( 菌落 PCR/ 酶切 ) 化学转化至 克隆感受态细胞 重组反应 min

61 克隆 / 点突变系列产品 系 列 原理同源重组 选购指南 分产品名称货号规格适用条件用途产品特点页码类 单片段多片段 可将外源 ClonExpress II One 1 个片段基因重组 Step Cloning Kit C rxn/50 rxn (50 bp 长度 10 kb) 到载体任意部位 2-5 个片段一步完成 ClonExpress MultiS C xn/25 rxn (50 bp 总长度 10 多片段的 One Step Cloning Kit kb) 连接 简单 快速 高效, 适用于任何载体 无需考虑插入片段携带的酶切位点 可高效克隆 50 bp -10 kb 的 DNA 片段 P62 线性化克隆载体和 PCR 产物可不纯化直接克隆 无连接酶, 自连背景极低, 阳性率 >95% 可在几乎任何载体的任意位点进行多片段拼接克隆 无需考虑插入片段携带的酶切位点 P63 可一次实现二至五个插入片段的无缝顺序拼接 克隆 / 点突变系列 克 隆 一 体 化 ClonExpress Ultra One Step Cloning Kit C rxn/50 rxn 1-5 个片段 (50 bp 总长度 10 kb) 单个或多个片段均可一步克隆 兼容入门克隆 单片段 多片段克隆 重组时间更短 ccdb 自杀基因实现零背景 P64 拓扑克隆 单 片 段 5min TM TA/Blunt-Zero Cloning Kit. C rxn/50 rxn 1 个片段 (50 bp 长度 20 kb) 高效率克 隆, 用于 测序 兼容 : 能够同时兼容 TA 克隆与平末端克隆 简单 : 加入片段即可 快速 : 仅需 5 min 高效 : 克隆效率高且阳性率 > 95% P65 TA 克 隆 连 接 T4 DNA Ligase C301 40,000 U - dsdna 末 端连接 纯度大于 99%, 无外源核酸酶活性残留 经典的缓冲液成分, 使连接反应可以高效进行 P66 提供保真度超高的高保真酶 Phanta Max Super-Fidelity DNA Polymerase, 最大程度降低突变率 定点突变 同源重组 单点突变多点突变 Mut Express II Fast Mutagenesis Kit V2 Mut Express MultiS Fast Mutagenesis Kit V2 C214 C rxn/25 rxn 10 rxn/25 rxn 1-2 个突变位点 (1 个位点, 1 bp-50 bp 范围 ) 3-5 个突变位点 (1 个位点, 1 bp-50 bp 范围 ) 定点突变 定点突变 Phanta Max Super-Fidelity DNA Polymerase 卓越的长片段扩增能力, 广泛适用于 40 kb 以内的任何质粒扩增 扩增产物经 DpnI 消化后可直接用于重组反应 扩增以指数方式进行, 极大减少了模板使用量 ( 只需 1-5 ng 模板 ), 有利于原始甲基化模板的彻底降解 可对目标质粒上单个位点或两个不连续位点 ( 相距超过 50 bp) 同时进行定点突变 提供保真度超高的高保真酶 Phanta Max Super-Fidelity DNA Polymerase, 最大程度降低突变率 Phanta Max Super-Fidelity DNA Polymerase 卓越的长片段扩增能力, 广泛适用于 40 kb 以内的任何质粒扩增 扩增产物经 DpnI 消化后可直接用于重组反应 扩增以指数方式进行, 极大减少了模板使用量 ( 只需 1-5 ng 模板 ), 有利于原始甲基化模板的彻底降解 可对目标质粒上 3-5 个不连续位点 ( 相距超过 50 bp) 同时进行定点突变 P67 P68 enda1,reca1 突变, 确保外源 DNA 在宿主菌中的稳定性, 有 常规 DH5α 化学感受态细胞 C μl 10/20 < 15 kb 质粒常规克隆 利于高质量质粒 DNA 提取 可用于对重组质粒进行蓝白斑筛选 无外源质粒 DNA 残留, 转化效率 10 8 cfu/μg puc19 质粒 P69 XL10 品系, 具有四环素 (Tet r ) 和氯霉素 (Cam r ) 抗性, 新型克 隆菌株 感受态细胞 克隆 大质粒快速转化 XL10 化学感受态细胞 Fast-T1 化学感受态细胞 C μl 10/20 > 10 kb 质粒 大片段克隆 C μl 10/20 < 15 kb 质粒 快速克隆 适用于各种来源的甲基化 / 非甲基化 DNA 的高效转化 enda1,reca1 突变, 确保外源 DNA 在宿主菌中的稳定性, 有利于高质量质粒 DNA 提取 Hte 基因型, 增强大片段 DNA 转化效率, 并使宿主菌细胞生长速度大幅度提高 无外源质粒 DNA 残留, 转化效率 10 8 cfu/μg puc19 质粒 生长快速 : 在氨苄青霉素抗性平板上, 培养 8-9 h 可见克隆 ; 过夜培养的单克隆在 2 ml 的 LB 液体培养基中, 培养 4-5 h 可进行小量质粒 DNA 提取 兼容抗性 : 具有 T1 和 T5 噬菌体抗性 操作简便 : 对于含氨苄青霉素抗性质粒及连接产物,5 min 完成快速转化 P70 P71 遗传背景明确 表达 常规 BL21 (DE3) 化学感受态细胞 C μl 10/20 非毒性蛋白重组表达蛋白表达 BL21 (DE3) 品系, 以 T7 RNA 聚合酶为表达系统的高效蛋白表达宿主 适合非毒性蛋白重组表达 P

62 克隆 克隆 / 点突变系列 ClonExpress II One Step Cloning Kit 非连接酶依赖型单片段快速克隆试剂盒 简单 快速 高效, 适用于任何载体 线性化克隆载体和 PCR 产物可不纯化直接克隆 无需考虑插入片段携带的酶切位点 无连接酶, 无自连, 阳性率 >95% 可高效克隆 50 bp-10 kb 的 DNA 片段 保存条件 :-20 保存 产品概述 ClonExpress 技术是一种简单 快速并且高效的 DNA 无缝克隆技术, 可将插入片段定向克隆至任意载体的任意位点 ClonExpress II 是新一代重组克隆试剂盒, 包含增强的重组酶 Exnase II 使用任意方式将载体进行线性化 ; 在插入片段正 / 反向 PCR 引物 5 端引入线性化载体的末端序列, 使得 PCR 产物 5 和 3 最末端分别带有和线性化载体两末端一致的序列 (15 bp-20 bp) 这种两端带有载体末端序列的 PCR 产物和线性化载体按一定比例混合后, 在 Exnase II 重组酶的催化下, 仅需反应 30 min 即可进行转化, 完成定向克隆, 阳性率可达 95% 以上 性能展示重组反应转化板阴性对照转化板 5 CE II Buffer Exnase II 500 bp control insert (25 ng/μl) puc19 control vector, linearized (50 ng/μl) 体系 线性化载体 插入片段 5 CE II Buffer Exnase II ddh 2 O a a 重组反应 X μl Y μl 4 μl 2 μl to 20 μl 阴性对照 -1 b C (25 rxn) 100 μl 50 μl a. X / Y 根据公式计算得到载体用量和插入片段用量 b. 阴性对照 -1 可用来确认线性化克隆载体有无环状质粒残留, 推荐进行 c. 阴性对照 -2 当插入片段扩增模板是与克隆载体抗性相同的环状质粒时, 推荐进行 d. 阳性对照反应可用来排除其他实验材料及操作因素的影响 X μl 0 μl 0 μl 0 μl to 20 μl 5 μl 5 μl 阴性对照 -2 c 0 μl Y μl 0 μl 0 μl to 20 μl C (50 rxn) 200 μl 100 μl 5 μl 5 μl d 阳性对照 1 μl 1 μl 4 μl 2 μl to 20 μl 操作流程 图 : 重组产物转化后平板上一般可形成数百至数千个单克隆, 而无插入片段的阴性对照反应转化后只有数个单克隆形成 M P D P D P D P D P D P D P P P P D D D D P: Plasmid; D: EcoRI and HindIII digest product 图 : 酶切鉴定结果表明, 克隆阳性率可达 95% 以上 Fragments Preparation (2 h) Recombination (30 min) Transformation (1 h) A C D B 用于重组反应的载体必须线性化 可通过酶切或反向 PCR 获得线性化载体 ( 图 A) 插入片段由 PCR 扩增制备, 所用引物在其 5 端添加线性化载体末端序列 ( 红色和蓝色标记 ), 使得扩增产物 5 和 3 端分别带上和线性化载体末端一致的序列 ( 图 B) 将线性化载体和插入片段按比例混合, 在 Exnase II 催化下,37 反应 30 min 即可完成重组反应, 实现两线性化 DNA 的体外环化 ( 图 Exnase II C) 重组产物直接进行转化, 平板上会形成数百个单克隆供后期阳性筛选 ( 图 D) 图 :ClonExpress II 实验流程 ClonExpress II One Step Cloning Kit 25 rxn 50 rxn C C ,

63 克隆 ClonExpress MultiS One Step Cloning Kit 非连接酶依赖型的多片段一步克隆技术 可在几乎任何载体的任意位点进行多片段拼接克隆 可一次实现二至五个插入片段的顺序拼接 无需考虑插入片段自身携带的酶切位点 线性化克隆载体和 PCR 产物可不进行纯化直接克隆保存条件 :-20 保存 克隆 / 点突变系列 产品概述 ClonExpress 技术是一种简单 快速并且高效的 DNA 无缝克隆技术, 可将多个插入片段定向克隆至任何载体的任意位点 ClonExpress MultiS 是针对多片段克隆开发的试剂盒, 使用任意方式将载体进行线性化, 使用专门的引物设计软件 CE Design( 登陆 Vazyme 官方首页 可下载 ) 获得各个片段的扩增引物序列, 扩增后相邻两片段之间 两侧片段与载体之间各有一段相同的序列 (15 bp-20 bp), 将各片段 PCR 产物与线性化载体按一定比例混合后, 在 Exnase MultiS 重组酶的催化下, 仅需反应 30 min 即可进行转化, 完成定向克隆, 阳性率可达 95% 以上 性能展示 5 CE MultiS Buffer Exnase MultiS puc19 control vector, linearized (50 ng/μl) Control insert Mix * *. 0.5 kb, 10 ng/μl; 1 kb, 20 ng/μl; 2 kb, 40 ng/μl 体系 线性化载体 a n 个插入片段 5 CE MultiS Buffer Exnase MultiS ddh 2 O a 重组反应 X μl Y 1 -Y n μl 4 μl 2 μl to 20 μl 阴性对照 -1 b X μl 0 μl 0 μl 0 μl to 20 μl C (10 rxn) 40 μl 20 μl 5 μl 5 μl 阴性对照 -2 c 0 μl Y 1 -Y n μl 0 μl 0 μl to 20 μl C (25 rxn) 100 μl 50 μl 5 μl 5 μl d 阳性对照 1 μl 1 μl 4 μl 2 μl to 20 μl 重组反应转化板 阴性对照转化板 a. X/Y 根据公式计算得到载体用量和各插入片段用量 b. 阴性对照 - 1 可用来确认线性化克隆载体中有无环状质粒残留, 推荐进行 c. 阴性对照 - 2 当插入片段扩增模板是与克隆载体抗性相同的环状质粒时, 推荐进行 建议将线性化载体与插入片段的环状质粒残留检测独立进行 d. 阳性对照反应可用来排除其他实验材料及操作因素的影响 操作流程 图 : 重组产物转化后平板上一般可形成数百个单克隆, 而无插 入片段的阴性对照反应转化后只有数个单克隆形成 图 : 酶切鉴定结果表明, 克隆阳性率可达 95% 以上 Fragments Preparation (2 h) Recombination (30 min) Transformation (1 h) A B B B C Exnase MultiS D 图 :ClonExpress MultiS 多片段拼接克隆技术原理 用于重组反应的载体必须首先线性化, 可通过酶切或反向 PCR 获得线性化载体 ( 图 A) 插入片段由 PCR 制备, 所用扩增引物在设计时需在其 5 端添加同源序列 ( 图中以深蓝色 深灰色 浅蓝色和红色标记 ), 使得扩增产物之间以及扩增产物与线性化载体之间各有一段同源序列 ( 图 B) 在 Exnase MultiS 的催化下, 线性化载体和插入片段只需在 37 反应 30 min 即可转化, 实现多片段顺序拼接并克隆至目标载体 ( 图 C) 重组产物直接进行转化, 平板上会形成数百个单克隆供后期阳性筛选 ( 图 D) ClonExpress MultiS One Step Cloning Kit 10 rxn 25 rxn C C ,

64 克隆 克隆 / 点突变系列 ClonExpress Ultra One Step Cloning Kit 灵活多变的一体化超快速克隆试剂盒 快速 5 min-15 min 快速重组 兼容 单片段 多片段 入门克隆三合一 简单 一管式 Mix, 操作简便 零背景 提供零背景 氨苄 / 卡那双抗性载体 高效 高效克隆 50 bp~10 kb 片段, 阳性率 >95% 保存条件 :-20 保存 产品概述 ClonExpress Ultra One Step Cloning Kit 是新一代的重组克隆试剂盒, 可快速高效的将 1-5 个片段定向克隆至任意载体的任意位点, 高度优化的 2 ClonExpress Mix,50 反应 5 min-15 min 完成重组, 操作简单快捷 2 ClonExpress Mix pce-zero vector, linearized (50 ng/μl)* 500 bp control insert (20 ng/μl) C (25 rxn) 125 μl 25 μl 5 μl C (50 rxn) μl 50 μl 5 μl 性能展示 *. 双抗性载体 :Amp*, Kan* 试剂盒能够高效克隆 50 bp-10 kb 片段 不同长度单片段 :50 bp 1 kb 2 kb 4.5 kb 7.5 kb 10 kb; 多片段 : 四个片段 (3 kb) 三个片段 (10 kb) 体系 重组反应 阴性对照 -1 阴性对照 -2 阳性对照 五个片段 (3 kb) 五个片段 (6 kb), 纯化后分别与 pce-zero Vector 进行同源重组, 重组产物转化化学感受态细胞 DH5α (Vazyme #C502), 菌落数如 ( 图一 ) 所示 线性化载体 X μl n 个插入片段 Y 1 +Y 2...+Y n μl 2 ClonExpress Mix 5 μl ddh 2 O to 10 μl X μl 0 μl 0 μl to 10 μl 0 μl Y 1 +Y 2...+Y n μl 0 μl to 10 μl 1 μl 1 μl 5 μl to 10 μl 试剂盒独特的非连接酶依赖体系, 无载体自连, 克隆阳性率高达 95% 以上 重组产物转化平板后, 各挑 操作流程 取 50 个单克隆进行菌落 PCR 鉴定, 不同长度插入片段阳性率如 ( 图二 ) 所示 A: 载体线性化 B: 获得插入片段 C: 同源重组 :50,5-15 min D: 转化感受态细胞 单片段重组反应转化板 四个片段重组反应转化板 图一 阴性对照转化板 图 :ClonExpress Ultra 实验流程图 不同长度片段克隆阳性率 图二 ClonExpress Ultra One Step Cloning Kit 25 rxn 50 rxn C C ,

65 克隆 5min TM TA/Blunt-Zero Cloning Kit 兼容 能够同时兼容 TA 克隆和平末端克隆 快速 加入片段, 反应 5 min 即可 基于拓扑异构酶的超快速克隆试剂盒 高效克隆效率高且阳性率 >95% 保存条件 :-20 保存 克隆 / 点突变系列 产品概述本产品是第二代 TOPO 克隆试剂盒, 包含第二代 Topoisomerase 含有自杀基因 ccdb 的载体以及平末端因子 使用第二代 Topoisomerase, 配合最适的 buffer, 活性更高, 进一步提高克隆效率, 室温 5 min 完成高效连接 使用含有自杀基因 ccdb 的载体, 当插入片段与载体成功连接时, 破坏 ccdb 正确表达, 宿主细胞能够正常生长, 否则宿主细胞不能正常生长, 从而实现 Zero 背景 添加平末端化因子, 使得本产品能够同时兼容 TA 克隆与平末端克隆 性能展示 5 TA/Blunt-Zero Cloning Mix a 500 bp Control insert(20 ng/μl) M13 Primer Mix(10 μm) b a. 包含 Topoisomerase 和 pce2 TA/Blunt-Zero Vector( 双抗性载体 :Amp +,Kan + ) b. 包含 M13 Forward Primer 和 M13 Reverse Primer 体系 5 TA/Blunt-Zero Cloning Mix PCR 纯化产物 ddh 2 O C (25 rxn) 25 μl 5 μl 200 μl C (50 rxn) 2 25 μl 10 μl 400 μl 体积 1 μl 1-4 μl to 5 μl 操作流程 使用 1 kb 插入片段测试组进行菌检 : 阳性率 100% 图 B-1:TA-Zero Cloning 图 B-2:Blunt-Zero Cloning 图 B-1:TA-Zero Cloning 将 3 端带 A 的扩增产物加入到 5 TA/Blunt-Zero Cloning Mix 中, 室温反应 5 min Mix 中的平末端化因子将末端的 A 碱基去掉, 形成平末端化产物 平末端化产物 5 -OH 进攻 Topo 酶与载体之间的磷酸键,Topo 酶被释放出来, 载体与片段形成环形重组子 图 B-2:Blunt-Zero Cloning 将平末端的扩增产物加入到 5 TA/Blunt-Zero Cloning Mix 中, 室温反应 5 min 平末端产物 5 -OH 进攻 Topo 酶与载体之间的磷酸键,Topo 酶被释放出来, 载体与片段形成环形重组子 5min TM TA/Blunt-Zero Cloning Kit 25 rxn 50 rxn C C ,

66 克隆 克隆 / 点突变系列 T4 DNA Ligase 催化 dsdna 平末端或粘性末端连接反应 纯度大于 99%, 无外源核酸酶活性残留 经典的缓冲液成分, 使连接反应可以高效进行保存条件 :-20 保存 产品概述 T4 DNA Ligase 可催化 dsdna 平末端或粘性末端相邻核苷酸的 5 磷酸末端和 3 羟基末端形成磷酸二酯键, 还可催化 RNA 和双链中的 ssdna 或 RNA 链连接, 但不能催化全单链核苷酸连接 适用于标记 RNA 3 末端, 环化 RNA 和 DNA 寡聚核苷酸, 克隆长片段 cdna 等核酸操作 10 Ligase Buffer * T4 DNA Ligase (400 U/μl) *Buffer 在融解时, 如果出现少量沉淀属正常现象, 请颠倒混匀后使用 体系 C ,000 U 1 ml 100 μl 灭菌蒸馏水 10 Ligase Buffer 插入片段 * 1 载体 DNA* 2 T4 DNA Ligase (400 U/μl) To 10 μl 1 μl 0.3 pmol 0.03 pmol 1 μl *1. 插入片段与载体的摩尔比应在 3:1 ~ 10:1 之间 *2. 平末端载体与 DNA 片段进行连接时, 应首先将载体进行去磷酸化处理, 以防止其自身环化 T4 DNA Ligase 40,000 U C

67 定点突变 Mut Express II Fast Mutagenesis Kit V2 Phanta Max Super-Fidelity DNA Polymerase 高保真酶提供保真度超高的 PCR 反应 扩增以指数方式进行, 模板使用量极低, 有利于原始甲基化模板的彻底降解 扩增产物经 DpnI 消化后可直接用于重组反应 可对目标质粒上单个位点或两个不连续位点 ( 相距超过 50 bp) 同时进行定点突变 一步法单 / 双点突变试剂盒 克隆 / 点突变系列 保存条件 :-20 保存 产品概述 Mut Express II Fast Mutagenesis Kit V2 是基于 ClonExpress 快速克隆技术的定点突变系统 使用本试剂盒, 目标质粒扩增产物经 DpnI 消化 Exnase 重组环化后直接进行转化即可完成定点突变 该试剂盒由 Phanta Max Super- Fidelity DNA Polymerase 扩增模块和 ClonExpress 快速克隆模块组成 Phanta Max Super-Fidelity DNA Polymerase 超高的保真度显著降低了扩增过程中引入新突变的可能 2 Max Buffer dntp Mix (10 mm each) Phanta Max Super-Fidelity DNA Polymerase DpnI (10 U/μl) 5 CE II Buffer Exnase II C (10 rxn) 1.25 ml 20 μl 20 μl 20 μl 40 μl 20 μl C (25 rxn) 1.25 ml 50 μl 50 μl 50 μl 100 μl 50 μl 性,ClonExpress 快速克隆系统利用高效同源重组反应替 代了传统的退火成环反应 高度优化的反应缓冲液 快捷的操作流程以及极高的成功率, 使得 Mut Express II Fast 体系 Mutagenesis Kit V2 成为 DNA 定点突变首选试剂盒 目标质粒扩增 : 突变流程 Forward Primer Original Vector (Methylated ) Amplification (Phanta Mix) Reverse Primer Complementary Region Mutation point Methylated Templates Digestion (Dpnl) A Forward Primer A Reverse Primer Mutation point A Mutation point B Original Vector (Methylated ) Amplification (Phanta Mix) B Forward Primer B Reverse Primer Methylated Templates Digestion (Dpnl) ddh 2 O 2 Max Buffer dntp Mix (10 mm each) 模板 DNA 引物 1 (10 μm) 引物 2 (10 μm) Phanta Max Super-Fidelity DNA Polymerase 重组反应体系 : ddh 2 O 5 CE II Buffer DpnI 消化产物 Exnase II Up to 50 μl 25 μl 1 μl Optional 2 μl 2 μl 1 μl Up to 20 μl 4 μl 50~400 ng 2 μl Complementary Region Linear Amplicon (Non-Methylated ) Linear Amplicon (Non-Methylated ) Homologous Recombination (Exnase II) Homologous Recombination (Exnase II) 图一 : 使用 Mut Express II 进行单点突变实验流程 Mutated Vector (Non-Methylated ) Transformation into Competent Cell Mutated Vector (Methylated ) 图一 Mutated Vector (Non-Methylated ) Transformation into Competent Cell Mutated Vector (Methylated ) 图二 设计部分反向互补的引物, 对原始质粒进行反向扩增 (I) 扩增产物经 DpnI 消化 (I) 后, 进行重组环化 (II) 重组产物直接进行转化即可完成定点突变 (III) 图一 : 使用 Mut Express II 进行不连续双点突变实验流程以待突变位点 A B 为界, 将质粒分为 AB 段和 BA 段 在每个待突变位点处设计部分反向互补的引物 以原始质粒为模板, 分别扩增 AB 段 (A Forward Primer 和 B Reverse Primer) 和 BA 段 (A Reverse Primer 和 B Forward Primer) (I) 扩增产物经 DpnI 消化 (I) 后, 进行重组环化 (II) 重组产物直接进行转化即可完成双点突变 (III) Mut Express II Fast Mutagenesis Kit V2 10 rxn 25 rxn C C ,

68 定点突变 克隆 / 点突变系列 Mut Express MultiS Fast Mutagenesis Kit V2 Phanta Max Super-Fidelity DNA Polymeras 高保真酶提供保真度超高的 PCR 反应 扩增以指数方式进行, 模板使用量极低, 有利于原始甲基化模板的彻底降解 扩增产物经 DpnI 消化后可直接用于重组反应 可一步实现目标质粒上三至五个不连续位点 ( 相距超过 50 bp) 的定点突变 一步法多点突变试剂盒 保存条件 :-20 保存 产品概述 Mut Express MultiS Fast Mutagenesis Kit V2 是基于 ClonExpress 快速克隆技术的多位点定点突变系统 使用本试剂盒, 可一次性向目标质粒上三至五个不连续位点同时引入定点突变 该试剂盒由 Phanta Max Super- Fidelity DNA Polymerase 扩增模块和 ClonExpress 快速克隆模块组成 Phanta Max Super-Fidelity DNA Polymerase 超高的保真度显著降低了扩增过程中引入新 2 Max Buffer dntp Mix (10 mm each) Phanta Max Super-Fidelity DNA Polymerase DpnI (10 U/μl) 5 CE MultiS Buffer Exnase MultiS C (10 rxn) 1.25 ml 50 μl 50 μl 50 μl 40 μl 20 μl C (25 rxn) ml 125 μl 125 μl 125 μl 100 μl 50 μl 突变的可能性 ClonExpress 快速克隆系统利用高效同 源重组技术替代了传统的退火成环反应, 大大提高了环化效率 使用 Mut Express MultiS 定点突变试剂盒进行 体系 DNA 定点突变时, 引物设计灵活 模板需求量低, 且如扩增产物特异,DpnI 消化后可不进行 DNA 纯化而直接用于重组反应 专门针对多位点定点突变而优化的重组酶 高度优化的反应缓冲液 快捷的操作流程以及惊人的定点突变效率, 使得 Mut Express MultiS Fast Mutagenesis Kit V2 成为 DNA 多点突变首选试剂盒 突变流程 目标质粒扩增体系 : ddh 2 O 2 Max Buffer dntp Mix (10 mm each) 模板 DNA 引物 1 (10 μm) 引物 2 (10 μm) Phanta Max Super-Fidelity DNA Polymerase Up to 50 μl 25 μl 1 μl Optional 2 μl 2 μl 1 μl Mutation point A Mutation point B Mutation point C 反应条件 : A Forward Primer B Forward Primer C Forward Primer 温度 时间 循环数 A Reverse Primer B Reverse Primer Original Vector (Methylated ) C Reverse Primer Amplification (Phanta Mix) Methylated Templates Digestion (Dpnl) Linear Amplicon (Non-Methylated ) Homologous Recombination (Exnase MultiS) ~ sec 15 sec 15 sec sec/kb 5 min 重组反应体系 : Mutated Vector (Methylated ) Transformation into Competent Cell Mutated Vector (Non-Methylated ) 使用 Mut Express MultiS 进行不连续三点突变实验流程 以待突变位点 A B C 为界, 将质粒分为 AB BC 和 CA 三段 在每个待突变位点处设计部分反向互补的引物 以原始质粒为模板, 分别扩增 AB 段 (A Forward Primer 和 B Reverse Primer) BC 段 (B Forward Primer 和 C Reverse Primer) 和 CA 段 (C Forward Primer 和 A Reverse Primer) (I) 扩增产物经 DpnI 消化 (I) 后, 进行重组环化 (II) 重组产物直接进行转化即可完成定点突变 (III) ddh 2 O 5 CE MultiS Buffer AB 段 DpnI 消化产物 BC 段 DpnI 消化产物 CA 段 DpnI 消化产物 Exnase MultiS DpnI 消化产物使用量 = [0.02 片段碱基对数 ] ng (0.03 pmol) Up to 20 μl 4 μl x ng x ng x ng 2 μl Mut Express MultiS Fast Mutagenesis Kit V2 10 rxn 25 rxn C C ,280 2,

69 感受态细胞 DH5α 化学感受态细胞 适合 PCR 产物 cdna 以及其他来源的非甲基化 DNA 的高效转化 enda1,reca1 突变, 确保外源 DNA 在宿主菌中的稳定性, 有利于高质量质粒 DNA 提取 可用于对重组质粒进行蓝白斑筛选 转化效率 10 8 cfu/μg puc19 DNA 克隆 / 点突变系列 保存条件 :-80 保存 产品概述本品为使用大肠杆菌 DH5α 菌株制备的化学转化超级感受态细胞, 转化效率超过 10 8 cfu/μg, 广泛适用于质粒转化 基因克隆 蓝白斑筛选等用途 基因型 deor enda1 gyra96 hsdr17 (r - k m + k )reca1 rela1 supe44 thi-1 Δ(lacZYA-argF)U169 Φ80lacZ ΔM15F - λ - C C DH5α Competent cell μl μl 操作流程 1 将 DH5α 感受态细胞从 -70 拿出, 迅速置于冰上融化, 加入目的 DNA( 质粒或连接产物 ) 并轻弹 EP 管底轻轻混匀 ( 避免用枪吸打 ), 冰上静置 30 min 2 42 水浴热激 45 sec, 迅速置于冰上并静置 2 min, 切勿摇动离心管 3 向离心管中加入 900 μl 不含抗生素的 LB 或 SOC 培养基, 混匀后 37,200 rpm 复苏 60 min 4 根据实验要求( 质粒或重组连接产物转化 ): 若是质粒, 可颠倒混匀直接取 100 μl 感受态涂布在含相应抗生素的 LB 培养基平板上 ; 若是重组连接产物, 建议 2,500 g 离心 3 min, 弃掉 900 μl 上清, 用剩余培养基将菌体重悬均匀涂布在含有正确抗生素的培养基平板上 5 将平板正置于 37 培养箱 10 min, 待菌液被完全吸收后, 倒置平板, 过夜培养 DH5α 化学感受态细胞 100 μl x μl x 20 C C

70 感受态细胞 克隆 / 点突变系列 XL10 化学感受态细胞 XL10 品系, 具有四环素 (Tet r ) 和氯霉素 (Cam r ) 抗性, 新型克隆菌株 适合 PCR 产物 cdna 以及其他来源的非甲基化 DNA 的高效转化 enda1,reca1 突变, 确保外源 DNA 在宿主菌中的稳定性, 有利于高质量质粒 DNA 提取 Hte 基因型, 增强大片段 DNA 转化效率, 并使宿主菌细胞生长速度大幅度提高 无外源质粒 DNA 残留, 转化效率 10 8 cfu/μg puc19 保存条件 :-80 保存 产品概述本品为克隆用化学感受态细胞使用改良 Inoue 法制备, 增强大片段 DNA 转化效率, 并使宿主菌细胞生长速度大幅度提高 转化效率超过 10 8 cfu/μg, 广泛适用于质粒转化 基因克隆 蓝白斑筛选等用途 基因型 Δ(mcrA)183 Δ(mcrCB-hsdSMR-mrr)173 enda1 supe44 thi-1 reca1 gyra96 rela1 lactet r Hte [F proab laci q ZΔM15 Tn10(Tet r ) Amy Cam r ] C C XL10 competent cell μl μl 操作流程 1. 将感受态细胞从 -80 中取出, 置于冰水浴中融化 2. 将待转化 DNA 加入到 100 μl 感受态细胞中, 轻轻弹匀, 冰上孵育 30 分钟 3. 将离心管置于 42 水浴, 不要晃动, 准确热激 90 秒后, 立刻置于冰水浴中, 静置 2-3 分钟 4. 向离心管中加入 900 μl LB 或 SOC 培养基,37 水浴锅中静置 10 分钟 rpm, 37 振荡培养 45 分钟, 使菌体复苏, 抗性基因表达 6. 2,500 g 离心 5 分钟, 去掉 900 μl 上清 用剩余培养基将菌体重悬, 用无菌涂布棒在含有正确抗性的平板上轻轻涂匀 室温正置 10 分钟 待菌液被平板吸收后,37 倒置培养过夜 注 : 也可直接吸取 100 μl-200 μl 孵育后的菌液涂板 剩余菌液可在 4 保存, 一周之内都可重新涂板 XL10 化学感受态细胞 100 μl x μl x 20 C C

71 感受态细胞 Fast-T1 化学感受态细胞 快速转化化学感受态细胞 生长快速在氨苄青霉素抗性平板上, 培养 8-9 h 可见克隆 ; 过夜培养的单克隆在 2 ml 的 LB 液体培养基中, 培养 4-5 h 可进行小量质粒 DNA 提取 兼容抗性具有 T1 和 T5 噬菌体抗性 操作简便对于含氨苄青霉素抗性质粒及连接产物,5 min 完成快速转化保存条件 :-80 保存 克隆 / 点突变系列 产品概述 Fast-T1 是目前生长速度最快的感受态细胞 外膜受体突变 (tona) 赋予感受态细胞对裂解噬菌体 T1 和 T5 的抗性 ; 缺失核酸内切酶 (enda) 提高了质粒 DNA 的产量和质量 ; 重组酶缺陷型 (reca) 减少了插入片段的同源重组概率, 保证了插入 DNA 的稳定性 ;laczδm15 使 Fast-T1 感受态细胞可用于蓝白斑筛选 Fast-T1 感受态细胞经过特殊工艺制备, 广泛适用于高效的 DNA 克隆和质粒扩增, 使用 puc19 质粒 DNA 检测, 转化效率 >10 8 cfu/μg C C Fast-T1 competent cell μl μl 操作流程 高效转化流程 2 h 加入质粒 / 连接产物 冰上静置 30 min 42 热激 30 s 冰上静置 2 min 加入培养基 37 摇床孵育 1 h 离心收集菌体后涂板培养 VS 快速转化流程 < 10 min 加入质粒 / 连接产物 冰上静置 3 min 42 热激 30 s 冰上静置 2 min 涂板培养 Fast-T1 化学感受态细胞 100 μl x μl x 20 C C

72 感受态细胞 克隆 / 点突变系列 BL21 (DE3) 化学感受态细胞 遗传背景明确 BL21 (DE3) 品系, 以 T7 RNA 聚合酶为表达系统的高效蛋白表达宿主 适合非毒性蛋白重组表达 可靠的表达菌株 保存条件 :-80 保存 产品概述本品为使用大肠杆菌 BL21 (DE3) 菌株制备的化学转化超级感受态细胞, 转化效率超过 10 7 cfu/μg 适用于 T7 启动子系统的表达载体 ( 如 pet 系列 ), 基因型 F-ompThsdS(rB - mb - )galdcm (DE3) C C BL21(DE3) competent cell μl μl BL21(DE3) 化学感受态细胞 100 μl x μl x 20 C C

73 Vazyme 基础科研试剂 核酸电泳系列产品 Ultra GelRed Nucleic Acid Stain (10000 ) DNA Marker/Ladder 75 76

74 核酸电泳系列产品 背景介绍 胶浓度与 DNA 长度的关系 核酸电泳系列 DNA 片段长度 <200 bp 200 bp-2,000 bp 2,000 bp-5,000 bp 胶浓度 >3% 2%-3% 1%-2% 适用的 DNA Marker 100 bp DNA Ladder DL2000 Plus DNA Marker DL5000 DNA Marker >5,000 bp <1% DL15000 DNA Marker/1 kb DNA Ladder 凝胶电泳实验注意事项 1 电泳图像的质量与琼脂糖凝胶 电泳缓冲液有关 请使用高质量的琼脂糖 新配制的琼脂糖凝胶, 并及时更换电泳缓冲液, 以 免影响电泳结果 2 琼脂糖凝胶的浓度对于 DNA 片段的分离效果至关重要 较高浓度的琼脂糖凝胶有利于短片段 DNA 的分离, 而较低浓度的琼脂 糖凝胶有利于长片段 DNA 的分离 可依据实际情况选择合适浓度的琼脂糖凝胶进行电泳 3 若使用 EB 作为核酸染料, 需注意 EB 与 DNA 的电性相反, 所以, 电泳时 EB 与 DNA 迁移方向相反 如在配制琼脂糖凝胶时 预先添加了 EB, 当跑较小的片段时, 避免长时间电泳, 以免出现着色较淡 条带模糊现象

75 核酸电泳系列产品 Ultra GelRed Nucleic Acid Stain (10000 ) 高安全性跑胶助手 无毒性 稳定性高 操作简单产品概述 Ultra GelRed 的大分子特点使其不能穿透细胞膜进入细胞内适用于使用微波或其它加热方法制备琼脂糖凝胶与 EB 一样, 在预制胶和电泳过程中染料不降解 ; 而电泳后染色过程也只需 30 min 且无需脱色或冲洗, 即可直接用紫外凝胶透射仪观察保存条件 : 室温避光保存 核酸电泳系列 Ultra GelRed 是一种可以替代溴化乙锭 (EB) 的新型核酸凝胶染色试剂, 其灵敏度高 毒性低 热稳定性强 采用琼脂糖凝胶电泳检测 DNA 时,Ultra GelRed 对低浓度 微量 DNA 表现出更高的灵敏度, 尤其是小分子量 DNA 在紫外光透射下 DNA 呈现绿色荧光, 可用于琼脂糖和聚丙烯酰胺凝胶电泳中的 dsdna ssdna 及 RNA 染色 性能展示 SYBR Green SYBR Safe 和 Ultra GelRed 细胞膜通透性实验 由图可知,Ultra GelRed 不能进入细胞内 1 SYBR Green 1 SYBR Safe 1 Ultra GelRed Ultra GelRed Nucleic Acid Stain (10000 ) 注意事项 1. 鉴于 Ultra GelRed 的高灵敏性, 建议减少样品的上样量, 推荐已知浓度样品的上样量为 ng/ 泳道 2. 电泳时电压不宜超过 150 V 3. 为了避免染料对核酸迁移的影响, 推荐使用泡染法进行染色 4. 若条带分离效果不理想, 建议使用泡染法确认是否系染料影响核酸迁移所致 如果泡染 后问题依旧, 建议重新制备样品重复试验 GR 染料无需低温冷藏, 请于室温下避光储存, 以避免低温沉淀 GR GR ml 5 ml 50 ml 5 min 30 min Ultra GelRed Nucleic Acid Stain (10000 ) 0.5 ml 5 ml 50 ml GR GR GR ,300 56,

76 核酸电泳系列产品 DNA Marker/Ladder 稳定 清晰 精准的 DNA Marker 稳定性好 : 室温可存放 6 个月, 所有条带清晰 致密 操作简便 : 即用型产品, 跑胶时可直接取适量本产品进行电泳 核酸电泳系列 产品概述 DNA Marker/Ladder 由特定分子量的双链 DNA 片段组成, 已混有含蓝色染料的上样缓冲液, 适用于琼脂糖凝胶电泳时作为 DNA 分子量标准 DNA Marker/Ladder 中所有片段均由质粒经酶切 纯化后获得, 电泳时 Marker/Ladder 的条带更加清晰 致密 ; 条带之间的 DL2000 Plus DNA Marker DL5000 DNA Marker DL15000 DNA Marker 100 bp DNA Ladder 保存条件 :-20 保存 ; 融化后于 4 保存, 避免反复冻融 250 μl (50 rxn, 5 μl/rxn) MD MD MD MD μl (100 rxn, 5 μl/rxn) MD MD MD MD 质量比更精确 真实 DL2000 Plus DNA Marker 中的 1 kb DNA Ladder MD MD bp 片段 DL5000 DNA Marker 中的 1,000 bp 片段 100 bp DNA Ladder 中的 500 bp 片段以及 1 kb DNA Ladder 中的 5 kb 片段的 DNA 浓度为 100 ng/5 μl, 显 示亮带 ; 其余所有条带的 DNA 浓度为 50 ng/5 μl DL2000 Plus DL5000 DL bp 1 kb Load 5 μl DNA Marker Load 5 μl DNA Marker Load 5 μl DNA Marker Load 5 μl DNA Ladder Load 5 μl DNA Ladder 50 ng 2,000 bp 50 ng 1,500 bp 50 ng 1,000 bp 100 ng 750 bp 50 ng 500 bp 50 ng 250 bp 50 ng 100 bp 2.0% TAE Agarose Gel 50 ng 5,000 bp 50 ng 3,000 bp 50 ng 2,000 bp 50 ng 1,500 bp 100 ng 1,000 bp 50 ng 750 bp 50 ng 500 bp 50 ng 250 bp 50 ng 100 bp 1.0% TAE Agarose Gel 50 ng 50 ng 50 ng 50 ng 50 ng 50 ng 50 ng 15,000 bp 10,000 bp 7,500 bp 5,000 bp 2,500 bp 1,000 bp 250 bp 0.8% TAE Agarose Gel 50 ng 15,00 bp 50 ng 10,00 bp 50 ng 900 bp 50 ng 800 bp 50 ng 700 bp 50 ng 600 bp 100 ng 500 bp 50 ng 50 ng 50 ng 50 ng 400 bp 300 bp 200 bp 100 bp 2.0% TAE Agarose Gel 50 ng 50 ng 50 ng 50 ng 50 ng 100 ng 50 ng 50 ng 50 ng 50 ng 10 kb 9 kb 8 kb 7 kb 6 kb 5 kb 4 kb 3 kb 2 kb 1 kb 0.8% TAE Agarose Gel Vazyme DNA Marker/Ladder DL2000 Plus DNA Marker 250 μl 500 μl MD MD DL5000 DNA Marker 250 μl 500 μl MD MD DL15000 DNA Marker 250 μl 500 μl MD MD bp DNA Ladder 250 μl 500 μl MD MD kb DNA Ladder 250 μl 500 μl MD MD

77 Vazyme 基础科研试剂 逆转录系列产品 逆转录单酶 HiScript II Reverse Transcriptase HiScript Reverse Transcriptase M-MLV (H-) Reverse Transcriptase Murine RNase inhibitor 一链合成试剂盒 HiScript II 1st Strand cdna Synthesis Kit HiScript II 1st Strand cdna Synthesis Kit (+gdna wiper) HiScript 1st Strand cdna Synthesis Kit RT-qPCR 专用预混液 HiScript II Q RT SuperMix for qpcr HiScript II Q RT SuperMix for qpcr (+gdna wiper) HiScript II Q Select RT SuperMix for qpcr HiScript II Q Select RT SuperMix for qpcr(+gdna wiper) HiScript Q RT SuperMix for qpcr HiScript Q RT SuperMix for qpcr (+gdna wiper) HiScript Q Select RT SuperMix for qpcr HiScript Q Select RT SuperMix for qpcr (+gdna wiper) 一步法逆转录 RT-PCR HiScript II One Step RT-PCR Kit HiScript II One Step RT-PCR Kit (Dye Plus) 单细胞预扩增 Single Cell Sequence Specific Amplification Kit 97 mirna 逆转录专用预混液 mirna 1st Strand cdna Synthesis Kit (by stem-loop) 98

78 逆转录系列产品 技术背景 复制 逆转录 (Reverse transcription) 是以 RNA 为模板合成 DNA 的过程, 即 RNA 指导下的 DNA 合成 逆 转录过程由逆转录酶催化, 该酶也称依赖 RNA 的 DNA 聚合酶, 即以 RNA 为模板催化 DNA 链的合成 转录 DNA 合成的 DNA 链称为与 RNA 互补 DNA (complementary DNA,cDNA) RNA 蛋白质 翻译 中心法则 逆转录系列 选购指南 试剂盒 特性 规格 cdna 合成 针对 RT-qPCR 通用型 长链 cdna 合成 即用型预混液 基因组去除 Oligo dt/ N6 Mix 引物单独成管 20 μl 反应体系 页码 一链合成试剂盒 HiScript II 1st Strand cdna Synthesis Kit (+gdna wiper) (R212) 50/100 次反应 P85 HiScript II 1st Strand cdna Synthesis Kit (R211) 50/100 次反应 P84 HiScript 1st Strand cdna Synthesis Kit (R111) 50/100 次反应 P86 HiScript II Q RT SuperMix for qpcr (+gdna wiper) (R223) 100 次反应 P88 HiScript II Q RT SuperMix for qpcr (R222) 100 次反应 P87 RT-qPCR 专用 预混液 HiScript II Q Select RT SuperMix for qpcr(+gdna wiper) (R233) 100 次反应 P90 HiScript II Q Select RT SuperMix for qpcr (R232) 100 次反应 P89 HiScript Q RT SuperMix for qpcr (+gdna wiper) (R123) 100 次反应 P92 HiScript Q RT SuperMix for qpcr (R122) 100 次反应 P91 HiScript Q Select RT SuperMix for qpcr (+gdna wiper) (R133) 100 次反应 P94 HiScript Q Select RT SuperMix for qpcr (R132) 100 次反应 P93 单酶 反应温度热稳定性 RNase H 活性 cdna 合成长度 高 GC 或复杂模板的适用性 规格 页码 HiScript II Reverse Transcriptase(R201) 无可长至 20 kb 2,000/10,000 U P80 HiScript Reverse Transcriptase(R101) 无 5-10 kb 2,000/10,000 U P81 M-MLV(H-) Reverse Transcriptase (R021) 无 2-3 kb 10,000 U P82 一步法试剂盒 针对的模板类型 特性 页码 HiScript II One Step RT-PCR Kit (P611) 微量总 RNA 超强扩增性能 P95 HiScript II One Step RT-PCR Kit (Dye Plus) (P612) 微量总 RNA 超强扩增性能, 产物直接电泳检测, 简单便捷 P96 Single Cell Sequence Specific Amplification Kit (P621) 单细胞或者微量总 RNA 单细胞或者微量总 RNA 中转录本的扩增 P

79 逆转录系列产品 针对 mirna 的逆转录试剂 产品名称针对的模板类型特性页码 mirna 1st Strand cdna Synthesis Kit (by stem-loop)(mr101) 总 RNA 或者 mirna 基于茎环法开发的逆转录试剂盒, 检测特异性高 P98 试剂盒的选择 实验需求首选其他可选 逆转后续做 qpcr 实验 R122,R123,R222,R223 R132,R133,R232,R233, R111,R211,R212 逆转录系列 逆转后续做 PCR 扩增 逆转后续做 qpcr 和 PCR 扩增 PCR 片段 <3 kb R111,R211,R212 R132,R133,R232,R233 PCR 片段 >3 kb R111,R211,R212 - PCR 片段 <3 kb R111,R211,R212 R132,R133,R232,R233 PCR 片段 >3 kb R111,R211,R212 - 注 :1. 标红的货号是最适的产品 2. 如果是单细胞样品或微量 RNA 转录本, 可以采用 Single Cell Sequence Specific Amplification Kit (Vazyme #P621) 进行逆转录, 无需提取 RNA 质量控制 核酸外切酶残留检测核酸内切酶残留检测 RNase 残留检测大肠杆菌 DNA 残留检测功能检测 1 功能检测 2 功能检测 U 本品和 50 pmol 单链 DNA 底物在 37 下孵育 16 h, 经变性 PAGE 电泳,DNA 的电泳谱带不发生变化 200 U 本品和 0.3 μg pbr322 DNA 在 37 下孵育 4 h, 经琼脂糖凝胶电泳, 质粒的电泳谱带不发生变化 200 U 本品和 1 μg 293 细胞 RNA 在 37 下孵育 30 min, 经琼脂糖凝胶电泳,RNA 的电泳谱带不发生变化 60 U 本品中残留的核酸经 E.coli gdna 特异性的 TaqMan qpcr 检测,E.coli 基因组残留低于 10 拷贝 逆转录体系中加入 200 U 本酶, 以 1 μg HeLa 细胞总 RNA 为模板,Oligo (dt) 23 为引物,50 反应 45 min 取 1/10 cdna 产物进行 PCR 扩增 VIN 基因 琼脂糖凝胶电泳,EB 染色, 可见有单一的 4.6 kb 条带 逆转录体系中加入 200 U 本酶, 以 1 pg HeLa 细胞总 RNA 为模板,Oligo (dt) 23 为引物,50 反应 30 min 取 1/10 cdna 产物进行 PCR 扩增 GAPDH 基因 琼脂糖凝胶电泳,EB 染色, 可见有单一的 550 bp 条带 以 500 ng HeLa 细胞总 RNA 为模板, 以 Oligo (dt) 23 VN 为引物,50 反应 45 min 取 1/10 cdna 产物 进行 PCR 扩增 Polε 基因 琼脂糖凝胶电泳,EB 染色, 可见有单一的 7.1 kb (GC-rich) 条带

80 逆转录单酶 HiScript II Reverse Transcriptase 具有超强耐热性和延伸效率的新一代逆转录酶 50 半衰期超过 240 min,55 半衰期可达 60 min 5 min 即可合成长达 10 kb 的 cdna, 适合快速逆转录反应 更高的杂质耐受度 更高的检测灵敏度, 分子诊断首选逆转录酶保存条件 :-20 保存 ; 浓度 :200 U/μl 产品概述 逆转录系列 通过专利的体外分子进化技术, 在 HiScript Reverse Transcriptase 的基础上, 获得的一个全新的逆转录酶突变体 HiScript II Reverse Transcriptase, 其热稳定性大幅提高 HiScript II Reverse Transcriptase 在 50 的半衰期超过 240 min, 并可在 55 长时间反应而保持稳定, 提高了具有复杂二级结构模板的逆转录成功率, 可获得长至 20 kb 的 cdna 同时, 高温下保持的高活性能够带来更高的 cdna 产量 性能展示极高的热稳定性 5 HiScript II Buffer HiScript II Reverse Transcriptase (200 U/μl) 操作流程 ( 该体系和程序适用于后续做 qpcr, 后续实验做 PCR, 程序和体系参照本产品说明书 ) a. 配制第一链 cdna 合成反应液 在 RNase-free 离心管中配制如下混合液 : RNase free ddh 2 O 5 HiScript II Buffer dntp Mix (10 mm each) HiScript II Reverse Transcriptase (200 U/μl) RNase inhibitor (40 U/μl) Oligo (dt) 23 VN (50 μm) Random hexamers (50 ng/μl) Total RNA or Poly A + RNA R ,000 U 500 μl 10 μl R ,000 U 500 μl 50 μl to 20 μl 4 μl 1 μl 1 μl 1 μl 1 μl 1 μl 10 pg-1 μg 10 pg-100 ng 用移液器轻轻吹打混匀 b. 按下列条件进行第一链 cdna 合成反应 * 85 5 min 15 min 2 min *. 如果模板具有复杂二级结构或高 GC 区域, 可将反应温度提高至 55, 有助于提高产量 更强的杂质耐受度以 1 μg HeLa 细胞总 RNA 为模板, 用不同的酶进行逆转录, 同时在体系中加入不同浓度的各种反应抑制物 取 1 μl cdna 为模板,AceQ qpcr SYBR Green Master Mix 扩增 human B2M 基因, 比较各种条件下 CT 值大小 更小的 CT 值代表更高的逆转录效率, 即更高的杂质耐受度 更高的检测灵敏度以 1 μg-1 pg HeLa 细胞总 RNA 为模板, 用 HiScript II Reverse Transcriptase (R201) 做逆转录, 取 1 μl cdna 为模板, 用 AceQ qpcr SYBR Green Master Mix 分别扩增 B2M 基因 (A) 和 EGFR 基因 (B) HiScript II Reverse Transcriptase 2,000 U 10,000 U R R

81 逆转录单酶 HiScript Reverse Transcriptase 热稳定的逆转录酶 耐受 50 的反应温度, 适用于具有二级结构的 RNA 模板 模板的亲和力强, 可获得更多全长的 cdna 高度灵敏, 可检测到低至 1 pg 的总 RNA 保存条件 :-20 保存 ; 浓度 :200 U/μl 产品概述 HiScript Reverse Transcriptase 是在 M-MLV (RNase H-) Reverse Transcriptase 基础上经过多点突变得到的全新逆转录酶 HiScript Reverse Transcriptase 在 50 下活性最高, 可用于具有二级结构的 RNA 模板的逆转录 增强与模板的亲和力, 可获得更多全长的 5 HiScript Buffer HiScript Reverse Transcriptase (200 U/μl) R ,000 U 500 μl 10 μl R ,000 U 500 μl 50 μl 逆转录系列 cdna, 并可检测到低至 1 pg 的总 RNA, 适合少量模 板以及低拷贝基因的逆转录 性能展示 超高的灵敏度 操作流程 ( 该体系和程序适用于后续做 qpcr, 后续实验做 PCR, 程序和体系参照本产品说明书 ) a. 配制第一链 cdna 合成反应液 在 RNase-free 离心管中配制如下混合液 RNase free ddh 2 O to 20 μl 5 HiScript Buffer 4 μl dntp Mix (10 mm each) 1 μl HiScript Reverse Transcriptase (200 U/μl) 1 μl RNase inhibitor (40 U/μl) 1 μl Oligo (dt) 18 (50 μm) 1 μl Random hexamers (50 ng/μl) 1 μl Total RNA 10 pg-1 μg or Poly A+ RNA 10 pg-100 ng 使用不同逆转录酶在 50 反应 30 min, 将 100 ng 至 1 pg 小鼠肝脏总 RNA 逆转录为 cdna 取 1/10 cdna 为模板, 用 Ace Taq DNA Polymerase 扩增 β-actin 基因 HiScript 具有最高的 cdna 产量和最高的检测灵敏度 b. 按下列条件进行第一链 cdna 合成反应 25 C 50 C * 85 C *. 如果模板具有复杂二级结构或高 GC 区域, 可将反应温度提高至 55, 有助于提高产量 5 min 15 min 5 min HiScript Reverse Transcriptase 2,000 U 10,000 U R R

82 逆转录单酶 M-MLV (H-) Reverse Transcriptase 稳定可靠的逆转录酶 点突变消除 RNase H 活性以获得更高质量的 cdna 产物 对于 100 ng 以上的 RNA 模板具有稳定可靠的逆转录表现 保存条件 :-20 保存 ; 浓度 :200 U/μl 产品概述 逆转录系列 野生型 M-MLV (Moloney Murine Leukemia Virus) 具有以下几种活性 : 依赖于 RNA 的 DNA 聚合酶活性, 依赖于 DNA 的 DNA 聚合酶活性和 RNase H 活性 由于 RNase H 活性能够催化降解 RNA/DNA 杂合体中的 RNA, 因此在 cdna 第一条链的合成反应中可能会降解模板 RNA M-MLV (H-) Reverse Transcriptase 是通过定点突变得到的 RNase H 活性缺失的 M-MLV 突变体 与常见的通过删除 RNase H 结构域方法得到的突变体相比, 本产品保留了完整的蛋白结构, 因此具有与野生型相同的聚合酶活性, 可用于较长的 cdna 合成以及全长 cdna 文库的构建等 5 RT Buffer M-MLV (H-) Reverse Transcriptase (200 U/μl) 操作流程在 RNase-free 离心管中配制如下混合液 RNase free ddh 2 O 5 RT Buffer dntp Mix (10 mm each) Oligo (dt) 18 (50 μm) or Random hexamers (50 ng/μl) or Gene Specific Primers (2 μm) RNase inhibitor (40 U/μl) M-MLV (H-) Reverse Transcriptase (200 U/μl) Total RNA or Poly (A)+ RNA R ,000 U 500 μl 50 μl to 20 μl 4 μl 1 μl 1 μl 1 μl 1 μl 100 pg-5 μg 10 pg-500 ng 按下列条件进行第一链合成反应 : 使用 Oligo (dt) min* 5 min 使用 Random hexamers min 45 min* 5 min 使用 Gene Specific Primers min* 5 min *. 可在 30 min-60 min 间调整 延长逆转录时间可能有助于获得更长的 cdna (>5 kb) M-MLV(H-) Reverse Transcriptase 10,000 U R

83 逆转录单酶 Murine RNase inhibitor 更高抗氧化活性的 RNase 抑制剂 增强的抗氧化能力 高纯度 不会形成人源蛋白在氧化条件下会产生的二硫键 大肠杆菌可溶性表达, 无 RNase 残留, 与 RT-PCR/qPCR 系统兼容 保存条件 :-20 保存 ; 浓度 :40 U/μl 产品概述 Murine RNase inhibitor 是以可溶形式在大肠杆菌中表达纯化的重组鼠源 RNase 抑制剂, 能够广泛抑制各种 RNase (RNase A, B,C) Murine RNase inhibitor 经过 RT-PCR RT-qPCR 检验, 能与各类商业化逆转录酶及各种 DNA Polymerase 兼容 与人源 RNase inhibitor 相比, 鼠源 RNase inhibitor 不含两个对氧化非常敏感的半胱氨酸, 因而具有更高的抗氧化活性, 且更加适合于对高 DTT 敏感的实验 ( 如 qpcr) Murine RNase Inhibitor (40 U/μl) 单位定义 : R ,000 U 50 μl 抑制 5 ng RNase A 活性的 50% 所需要的酶量定义为 1 个活性单位 (U) RNase A 的活性通 过水解 Cyclic 2, 3 -CMP 生成 3 -CMP 定量求得 R ,000 U 250 μl R ,000 U 500 μl 逆转录系列 操作流程 1 在 RNase free 离心管中配制如下混合液 : RNase free ddh 2 O 5 HiScript Buffer Oligo (dt) 18 (50 μm) dntp Mix (10 mm each) Murine RNase Inhibitor (40 U/μl) HiScript Reverse Transcriptase (200 U/μl) 模板 RNA to 20 μl 4 μl 1 μl 1 μl 1 μl 1 μl 10 pg-2.5 μg 2. 轻轻混匀 C 45 min, 70 C 15 min 4. 产物于 -20 保存 Murine RNase inhibitor 2,000 U 10,000 U 20,000 U R R R ,

84 一链合成试剂盒 HiScript II 1st Strand cdna Synthesis Kit 高效 cdna 一链合成试剂盒 基于高效的 HiScript II Reverse Transcriptase, 超强的温度耐受能力确保在高温条件下能打开 RNA 复杂二级结构, 得到更长的 cdna 宽广的模板起始量范围, 从 1 pg-5 μg 总 RNA, 并且可扩增片段长达 15 kb 以上 Anchored Oligo(dT) 23 VN 设计结合位点锚定, 特异性高, 保证第一链 cdna 合成效率和成功率 针对不同下游应用选择不同的引物, 合成的一链 cdna 广泛应用于分子克隆 杂交 PCR 扩增及 qpcr 反应等保存条件 :-20 保存 逆转录系列 产品概述本产品是基于高效的 HiScript II Reverse Transcriptase 从总 RNA 或 Poly (A) + mrna 合成一链 cdna 的试剂盒 含有一链 cdna 合成所需的全部试剂, 其中 HiScript II Reverse Transcriptase 具有更高的 cdna 合成效率及模板的杂质耐受度, 更加适合具有复杂二级结构或低丰度的 RNA 模板的逆转录 Anchored Oligo (dt) 23 VN 设计结合位点锚定, 特异性高, 保证第一链 cdna 合成效率和成功率 合成的一链 cdna 可广泛应用于二链 cdna RNase free ddh 2 O 2 RT Mix a HiScript II Enzyme Mix b Oligo (dt) 23 VN (50 μm) Random hexamers (50 ng/μl) a. 包含 1 mm each dntp b. 包含 RNase inhibitor R rxn (20 μl/rxn) 1 ml 500 μl 100 μl 50 μl 50 μl R rxn (20 μl/rxn) 1 ml 1 ml 200 μl 100 μl 100 μl 合成 杂交 PCR 法扩增等 特别适用于全长 cdna 文库制作 高纯度全长 cdna 合成等 性能展示以 1 μg HeLa 细胞总 RNA 或小鼠骨骼肌细胞总 RNA (for Nebulin) 为模板,Oligo(dT) 23 VN 为引物进行逆转录 取 1 μl cdna 为模板, 用 Vazyme LAmp DNA Polymerase 扩增 M: DL Marker. 图. R211 可完整逆转录长达 20 kb 的 RNA 模板 操作流程 ( 该体系和程序适用于后续做 qpcr, 后续实验做 PCR, 程序和体系参照本产品说明书 ) 1. 配制第一链 cdna 合成反应液 在 RNase-free 离心管中配制如下混合液 : RNase free ddh 2 O to 20 μl 2 RT Mix 10 μl HiScript II Enzyme Mix 2 μl Oligo (dt) 23 VN (50 μm) 1 μl Random hexamers (50 ng/μl) 1 μl Total RNA 1 pg-1 μg or Poly A + RNA 10 pg-100 ng 用移液器轻轻吹打混匀 2. 按下列条件进行第一链 cdna 合成反应 * 85 5 min 15 min 2 min *. 如果模板具有复杂二级结构或高 GC 区域, 可将反应温度提高至 55, 有助于提高产量 图. R211 对 qpcr 具有宽广且灵敏的线性逆转录范围以 1 μg-1 pg HeLa 细胞总 RNA 为模板做逆转录, 使用 Random hexamers 和 Oligo(dT) 23 VN 共同逆转录, 取 1 μl cdna 为模板, 分别用 AceQ qpcr SYBR Green Master Mix 扩增 ACTB 基因和 CBR3 基因 HiScript II 1st Strand cdna Synthesis Kit 50 rxn (20 μl/rxn) 100 rxn (20 μl/rxn) R R ,

85 一链合成试剂盒 HiScript II 1st Strand cdna Synthesis Kit (+gdna wiper) 高效 cdna 一链合成试剂盒 ( 去基因组 ) 基于高效的 HiScript II Reverse Transcriptase, 超强的温度耐受能力确保在高温条件下能打开 RNA 复杂二级结构, 得到更长的 cdna 宽广的模板起始量范围, 从 10 pg-5 μg 总 RNA, 可扩增片段长达 15 kb 以上 Anchored Oligo(dT) 23 VN 设计结合位点锚定, 特异性高, 保证第一链 cdna 合成效率和成功率 针对不同下游应用选择不同的引物, 合成的一链 cdna 广泛应用于分子克隆 杂交 PCR 扩增及 qpcr 反应等 gdna wiper Mix 可迅速彻底去除基因组污染保存条件 :-20 保存 产品概述本产品是使用 HiScript II Reverse Transcriptase 从 Total RNA 或 Poly (A) + mrna 合成一链 cdna 的试剂盒, 含有一链 cdna 合成所需的全部试剂,HiScript II Reverse Transcriptase 具有更高的 cdna 合成效率及模板的杂质耐受度, 更加适合具有复杂二级结构或低丰度的 RNA 模板的逆转录 Anchored Oligo(dT) 23 VN 设计结合位点锚定, 特异性高, 保证第一链 cdna 合成效 RNase free ddh 2 O 4 gdna wiper Mix 10 RT Mix a HiScript II Enzyme Mix b Oligo (dt) 23 VN (50 μm) Random hexamers (50 ng/μl) R rxn (20 μl/rxn) 1 ml 200 μl 120 μl 100 μl 50 μl 50 μl R rxn (20 μl/rxn) 1 ml 400 μl 240 μl 200 μl 100 μl 100 μl 逆转录系列 率和成功率 产品中的 4 gdna wiper 可在逆转录步骤前快速彻底去除基因组污染, 提高实验结果的可信度 a. 包含 1 mm each dntp b. 包含 RNase inhibitor 性能展示 DNA remaining (%) Efficiency of gdna wiper/remover 80 Supplier T Vazyme (gdna wiper) ng 50 ng 5 ng 分别投入 500 ng 50 ng 5 ng HeLa gdna 使用 Vazyme #R212 和 Supplier T 中基因组去除模块做清除效率检测, 结果显示, 相对于竞品,Vazyme #R212 中的 4 gdna wiper 可清除高达 500 ng 的基因组残留, 并且清除效率达到 99% 以上 操作流程 ( 该体系和程序适用于后续做 qpcr, 后续实验做 PCR, 程序和体系参照本产品说明书 ) gdna wiper Mix RT Mix 42 2 min min 2 min RNA contaminated with gdna RNA cdna 1. 基因组 DNA 去除 在 RNase-free 离心管中配制如下混合液 : RNase free ddh 2 O to 16 μl 4 gdna wiper Mix 4 μl Oligo (dt) 23 VN (50 μm) 4 μl Random hexamers (50 ng/μl) 1 μl Total RNA 10 pg-1 μg or Poly A + RNA 10 pg-100 ng 用移液器轻轻吹打混匀 42 2 min 2. 配制第一链 cdna 合成反应液 在 RNase-free 离心管中配制如下混合液 : 上一步的混合液 10 RT Mix HiScript II Enzyme Mix 用移液器轻轻吹打混匀 *. 该产品亦适用于基因特异性引物 (GSP) 引发的逆转录, 为避免 gdna wiper 对 GSP 的潜在影响, 请在该步骤体系中加入基因特异性引物 (2 pmol) 3. 按下列条件进行第一链 cdna 合成反应 16 μl 2 μl 2 μl 50 * min 2 min *. 如果模板具有复杂二级结构或高 GC 区域, 可将反应温度提高至 55, 有助于提高产量 HiScript II 1st Strand cdna Synthesis Kit (+gdna wiper) 50 rxn (20 μl/rxn) 100 rxn (20 μl/rxn) R R ,

86 一链合成试剂盒 HiScript 1st Strand cdna Synthesis Kit cdna 一链合成试剂盒 HiScript Reverse Transcriptase 提供可靠的逆转录表现 宽泛的模板量范围, 可成功逆转录从 10 pg-5 μg 总 RNA 高效的合成能力 : 可合成长达 10 kb 的 cdna 针对不同下游应用可选择不同引物, 合成的一链 cdna 可广泛应用于分子克隆 杂交 PCR 扩增及 qpcr 反应等保存条件 :-20 保存 逆转录系列 产品概述本产品是使用 HiScript Reverse Transcriptase 从 Total RNA 或 Poly (A)+ mrna 合成 1st Strand cdna 的试剂盒 HiScript Reverse Transcriptase 是在 M-MLV (Moloney Murine Leukemia virus) 基础上经过多点突变得到的新型逆转录酶 该酶能够有效合成长达 10 kb 的 cdna, 适用于常规 RNA 富含 GC 区域或具有复杂二级结构 RNA 模板的逆转录 本产品基于 HiScript Reverse Transcriptase, 包含合成高质量第一链 cdna 所需的所有成分, 适合于后续的 PCR qpcr 实验 RNase free ddh 2 O 2 RT Mix a HiScript Enzyme Mix b Oligo (dt) 18 (50 μm) Random hexamers (50 ng/μl) a. 包含 1 mm each dntp b. 包含 RNase inhibitor R rxn (20 μl/rxn) 1 ml 500 μl 100 μl 50 μl 50 μl R rxn (20 μl/rxn) 1 ml 1 ml 200 μl 100 μl 100 μl 性能展示 ACTB CT 值 40 Vazyme #R111 Supplier T LOG (CON) 40 Supplier G Vazyme #R 操作流程 ( 该体系和程序适用于后续做 qpcr, 后续实验做 PCR, 程序和体系参照本产品说明书 ) a. 配制第一链 cdna 合成反应液在 RNase-free 离心管中配制如下混合液 : RNase free ddh 2 O to 20 μl 2 RT Mix 10 μl HiScript Enzyme Mix 2 μl Oligo (dt) 18 (50 μm) 1 μl Random hexamers (50 ng/μl) 1 μl Total RNA 10 pg-1 μg or Poly A+ RNA 10 pg-100 ng 用移液器轻轻吹打混匀 b. 按下列条件进行第一链 cdna 合成反应 CT 值 * 85 *. 如果模板具有复杂二级结构或高 GC 区域, 可将反应温度提高至 55, 有助于提高产量 5 min 15 min 5 min LOG (CON) 以 HeLa 细胞总 RNA 为模板, 使用 Vazyme #R111 分别和其他公司的逆转录试剂 Supplier T,Supplier G 在各自说明书所提供的反应体系及反应条件下逆转 1 pg-1 ug 总 RNA, 用 qpcr 检测基因 ACTB 结果显示, 与同类产品相比,Vazyme #R111 呈现良好的线性关系, 并且检测灵敏度低至 1 pg HiScript 1st Strand cdna Synthesis Kit 50 rxn (20 μl/rxn) 100 rxn (20 μl/rxn) R R ,

87 RT-qPCR 专用预混液 HiScript II Q RT SuperMix for qpcr 预混液形式的两步法 RT-qPCR 首选试剂 基于高效的 HiScript II Reverse Transcriptase, 逆转录效率更高 Anchored Oligo (dt) 23 VN 设计独特, 确保反应特异性, 提高第一链 cdna 合成效率和成功率 即用型的 SuperMix 预混液使用方便省时保存条件 :-20 保存 产品概述 本产品是以高性价比的 HiScript II Reverse Transcriptase 为基础的两步法 qpcr 试剂盒 比例优化的 Random primers/oligo (dt) 23 VN primer mix, 使 cdna 合成可从 RNA 转录本的各个区域起始并具有相同的逆转录效率, 最大程度保证了 qpcr 结果的真实性和可重复性 本试剂盒为即用型的 SuperMix, 将合成高质量第一链 cdna 所需的所有成分合并为一管 5 SuperMix, 同时对反应体系进行大幅简化, 只需加入 RNA 和水即可进行逆转录反应, 且 SuperMix 在 -20 不会冻结, 使用方便 RNase free ddh 2 O 5 HiScript II qrt SuperMix a 5 No RT Control Mix b R rxn (20 μl/rxn) 2 1 ml 400 μl a. 包含 Buffer dntp HiScript II Reverse Transcriptase RNase inhibitor Random primers/ Oligo (dt) 23 VN primer mix b. 除不含 HiScript II Reverse Transcriptase 外, 其余成分与 5 HiScript II qrt SuperMix 相同, 用于配制 No RT Control 反应 操作流程 40 μl 逆转录系列 性能展示 qrt SuperMix 逆转录效率 -ACTB Supplier T Vazyme-R 配制第一链 cdna 合成反应液 RNA min 85 5 sec cdna CT 值 20 在 RNase-free 离心管中配制如下混合液 不同模板梯度 RNase free ddh 2 O 5 HiScript II qrt SuperMix 模板 RNA 用移液器轻轻吹打混匀 to 20 μl 4 μl Total RNA: 1 pg-1 μg CT 值 逆转录效率 -B2M 不同模板梯度 Supplier T Vazyme-R222 No RT Control 反应 ( 可选 ) No RT Control 是指不加逆转录酶的逆转录阴性对照反应, 用于检验 RNA 模板中是否有基因组 DNA 残留 在 RNase-free 离心管中配制如下混合液 RNase free ddh 2 O to 20 μl 5 No RT Control Mix 4 μl 模板 RNA Total RNA: 1 pg-1 μg 用移液器轻轻吹打混匀 以 HeLa 细胞总 RNA 为模板, 使用 Vazyme #R222 和 Supplier T 同类产品, 在各自说明书所提供的反应体系及反应条件下逆转 1 pg-1 ug 总 RNA, 然后用 qpcr 检测基因 ACTB 和 B2M 结果表明与同类产品相比, Vazyme #R222 在扩增效率和扩增线性上表现都较优异 2. 进行逆转录反应 50 * 85 *. 如果模板具有复杂二级结构或高 GC 区域, 可将反应温度提高至 55, 有助于提高产量 15 min 5 sec HiScript II Q RT SuperMix for qpcr 100 rxn (20 μl/rxn) R ,

88 RT-qPCR 专用预混液 HiScript II Q RT SuperMix for qpcr (+gdna wiper) 预混液形式的两步法 RT-qPCR 首选试剂 ( 去基因组 ) 基于高效的 HiScript II Reverse Transcriptase, 逆转录效率更高 Anchored Oligo (dt) 23 VN 设计独特, 确保反应特异性, 提高第一链 cdna 合成效率和成功率 即用型的 SuperMix 预混液使用方便省时 gdna wiper Mix 可迅速彻底去除基因组污染保存条件 :-20 保存 逆转录系列 产品概述本产品是以高性价比的 HiScript II Reverse Transcriptase 为基础的两步法 qpcr 试剂盒 试剂盒中的 4 gdna wiper Mix 可彻底去除残留的基因组 DNA 污染, 保证后续定量结果更加可靠 5 HiScript II qrt SuperMix II 中含有逆转录反应所需的所有, 加入模板 RNA 和水即可迅速进行反应, 同时终止 gdna wiper 作用, 保证 cdna 的完整性 本产品针对 qpcr 进行特别优化, 逆转录产物兼容 SYBR Green I 和探针法 qpcr, 可以根据实验目的, 选择相应的试剂配合使用, 进行高性能的基因表达分析 RNase free ddh 2 O 4 gdna wiper Mix 5 HiScript II qrt SuperMix II a 5 No RT Control Mix b R rxn (20 μl/rxn) 2 1 ml 400 μl 400 μl a. 包含 Buffer dntp HiScript II Reverse Transcriptase RNase inhibitor Random primers/oligo (dt) 23 VN primer mix 注意 : 与 HiScript II Q RT SuperMix for qpcr (Vazyme #R222-01) 中所带的 5 HiScript II qrt SuperMix 成分不同, 不可以混用 b. 除不含 HiScript II Reverse Transcriptase 外, 其余成分与 5 HiScript II qrt SuperMix II 相同, 用于配制 No RT 对照反应 40 μl 性能展示 CT 值 CT 值 逆转录效率 -ACTB 不同模板梯度逆转录效率 -CBR Supplier Ta Supplier Tg Vazyme #R223 Supplier Ta Supplier Tg Vazyme #R 不同模板梯度以 HeLa 细胞 RNA 为模板, 使用 Vazyme #R223 和 Supplier Ta Supplier Tg 同类产品, 在各自说明书所提供的反应体系及反应条件下进行逆转录, 然后用 qpcr 检测基因 ACTB 和 CBR3 结果表明与同类产品相比, Vazyme #R223 在扩增效率和扩增线性上表现都较优异 操作流程 gdna wiper Mix qrt SuperMix II 42 2 min min 85 5 sec RNA contaminated with gdna RNA cdna 1. 基因组 DNA 去除在 RNase-free 的离心管中配制如下混合液 RNase free ddh 2 O 4 gdna wiper Mix 模板 RNA 用移液器轻轻吹打混匀 42 2 min 2. 配制逆转录反应体系 在第 1 步的反应管中直接加入 5 HiScript II qrt SuperMix II 5 HiScript II qrt SuperMix II 第 1 步的反应液 用移液器轻轻吹打混匀 No RT Control 反应 ( 可选 ) to 16 μl 4 μl Total RNA: 1 pg-1 μg No RT Control 是指不加逆转录酶的逆转录阴性对照反应, 用于检验 RNA 模板中是否有基因组 DNA 残留 在 RNase-free 离心管中配制如下混合液 5 No RT Control Mix 第 1 步的反应液 用移液器轻轻吹打混匀 3. 进行逆转录反应 50 * 85 *. 如果模板具有复杂二级结构或高 GC 区域, 可将反应温度提高至 55, 有助于提高产量 4 μl 16 μl 4 μl 16 μl 15 min 5 sec HiScript II Q RT SuperMix for qpcr (+gdna wiper) 100 rxn (20 μl/rxn) R ,

89 RT-qPCR 专用预混液 HiScript II Q Select RT SuperMix for qpcr 可灵活选择逆转录引物的两步法 RT-qPCR 首选预混液 基于高效的 HiScript II Reverse Transcriptase, 逆转录效率更高 针对不同实验设计可灵活使用不同类型的逆转录引物 即用型 SuperMix 预混液使用方便省时保存条件 :-20 保存 产品概述 本产品以高性价比的 HiScript II Reverse Transcriptase 为基础, 使用设计独特的 Oligo(dT) 23 VN 引物, 提高了反应特异性及灵敏度, 获得质量更好的 cdna 针对不同实验设计可灵活使用不同类型的逆转录引物, 满足多样化的实验需求, 可根据逆转录后续实验需要选择 Oligo (dt) 23 VN primer/random Hexamers 或基因特异性引物 (GSP) 同时对反应体系进行大幅简化,5 HiScript II SelectqRT SuperMix 含有反转录反应除引物以外所需的全部试剂且在 -20 不会冻结, 使用方便 RNase free ddh 2 O 5 HiScript II Select qrt SuperMix a Oligo (dt) 23 VN (10 μm) Random hexamers (50 ng/μl) 5 Select No RT Control Mix b a. 包含 Buffer dntp Mix HiScript II Reverse Transcriptase RNase inhibitor R rxn (20 μl/rxn) 2 1 ml 400 μl 100 μl 100 μl b. 除不含 HiScript II Reverse Transcriptase 外, 其余成分与 5 HiScript II Select qrt SuperMix 相同, 用于配制 No RT 对照反应 40 μl 逆转录系列 操作流程 RNA 1. 在 RNase-free 离心管中配制如下混合液 qrt SuperMix min 85 5 sec cdna RNase free ddh 2 O 5 HiScript II Select qrt SuperMix Oligo (dt) 23 VN (10 μm) or Random hexamers (50 ng/μl) or Gene specific primers (2 μm) 模板 RNA to 20 μl 4 μl 1 μl Total RNA: 1 pg-1 μg 用移液器轻轻吹打混匀 No RT Control 反应 ( 可选 ) No RT Control 是指不加逆转录酶的逆转录阴性对照反应, 用于检验 RNA 模板中是否有基因组 DNA 残留 在 RNase-free 离心管中配制如下混合液 RNase free ddh 2 O 5 Select No RT SuperMix Oligo (dt) 23 VN (10 μm) or Random hexamers (50 ng/μl) or Gene specific primers (2 μm) 模板 RNA to 20 μl 4 μl 1 μl Total RNA: 1 pg-1 μg 用移液器轻轻吹打混匀 2. 进行逆转录反应 50 * min 5 sec *. 如果模板具有复杂二级结构或高 GC 区域, 可将反应温度提高至 55, 有助于提高产量 HiScript II Q Select RT SuperMix for qpcr 100 rxn (20 μl/rxn) R ,

90 RT-qPCR 专用预混液 HiScript II Q Select RT SuperMix for qpcr(+gdna wiper) 可灵活选择逆转录引物的两步法 RT-qPCR 首选预混液 ( 去基因组 ) 基于高效的 HiScript II Reverse Transcriptase 针对不同实验设计可灵活使用不同类型的逆转录引物 gdna wiper Mix 可迅速彻底去除基因组污染 保存条件 :-20 保存 产品概述 逆转录系列 本产品以高性价比的 HiScript II Reverse Transcriptase 为基础, 使用设计独特的 Oligo(dT) 23 VN 引物, 提高了反应特异性及灵敏度, 获得质量更好的 cdna 针对不同实验设计可灵活使用不同类型的逆转录引物, 满足多样化的实验需求, 可根据逆转录后续实验需要选择 Oligo (dt) 23 VN primer/random Hexamers 或基因特异性引物 (GSP) 同时对反应体系进行大幅简化,5 HiScript II Select qrt SuperMix 含有反转录反应除引物以外所需的全部试剂且在 -20 不会冻结, 使用方便 试剂盒中的 4 gdna wiper Mix 可彻底去除残留的基因组 DNA 污染, 保证后续定量结果更加可靠 逆转录得到的产物可用于 SYBR Green qpcr 分析法和探针分析法, 进行高性能的基因表达分析 RNase free ddh 2 O 4 gdna wiper Mix 5 HiScript II Select qrt SuperMix II a Oligo (dt) 23 VN(10 μm) Random hexamers (50 ng/μl) 5 Select No RT Control Mix b a. 包含 Buffer dntp Mix HiScript II Reverse Transcriptase RNase inhibitor R rxn (20 μl/rxn) 2 1 ml 400 μl 400 μl 100 μl 100 μl 注意 : 与 HiScript II Q Select RT SuperMix for qpcr (R232-01) 中所带的 5 HiScript II Q Select qrt SuperMix 成分不同, 不可以混用 b. 除不含 HiScript II Reverse Transcriptase 外, 其余成分与 5 HiScript II Select qrt SuperMix II 相同, 用于配制 No RT 对照反应 操作流程 40 μl gdna wiper Mix qrt SuperMix II 42 2 min min 85 5 sec RNA contaminated with gdna RNA cdna 1. 基因组 DNA 去除 在 RNase free 的离心管中配制如下混合液 RNase free ddh 2 O 4 gdna wiper Mix Oligo (dt) 23 VN (10 μm) or/and Random hexamers (50 ng/μl) or Gene specific primers (2 μm) 模板 RNA to 16 μl 4 μl 1 μl 1 μl 1 μl Total RNA: 1 pg-1 μg 用移液器轻轻吹打混匀 42 2 min 2. 配制逆转录反应体系 在第 1 步的反应管中直接加入 5 HiScript II Select qrt SuperMix II 5 HiScript II Select qrt SuperMix II 第 1 步的反应液 4 μl 16 μl 用移液器轻轻吹打混匀 No RT Control 反应 ( 可选 ) No RT Control 是指不加逆转录酶的逆转录阴性对照反应, 用于检验 RNA 模板中是否有基因组 DNA 残留 在 RNase-free 离心管中配制如下混合液 5 Select No RT Control Mix 第 1 步的反应液 用移液器轻轻吹打混匀 4 μl 16 μl 3. 进行逆转录反应 50 * min 5 sec *. 如果模板具有复杂二级结构或高 GC 区域, 可将反应温度提高至 55, 有助于提高产量 HiScript II Q Select RT SuperMix for qpcr (+gdna wiper) 100 rxn (20 μl/rxn) R ,

91 RT-qPCR 专用预混液 HiScript Q RT SuperMix for qpcr 预混液形式的两步法 RT-qPCR 试剂 即用型的 SuperMix 预混液使用方便省时 保存条件 :-20 保存 产品概述 HiScript 两步法 RT-qPCR 试剂盒以高性价比的 HiScript Reverse Transcriptase 为基础, 对反应体系进行大幅简化, 即用型的 SuperMix 将合成高质量第一链 cdna 所需的所有成分合并为一管 5 SuperMix, 只需加入 RNA 和水即可进行逆转录反应,RNA 体积最多可加至反应总体积的 80%, 非常适合于低浓度 RNA 模板的逆转录反应, 且 SuperMix 在 -20 不会冻结, 使用方便 RNase free ddh 2 O 5 qrt SuperMix a 5 No RT Control Mix b R rxn (20 μl/rxn) 2 1 ml 400 μl a. 包含 Buffer dntp HiScript Reverse Transcriptase RNase inhibitor Random primers/oligo dt primer mix b. 除不含 HiScript Reverse Transcriptase 外, 其余成分与 5 qrt SuperMix 相同, 用于配制 No RT 对照反应 40 μl 逆转录系列 操作流程 1. 配制第一链 cdna 合成反应液 RNA 在 RNase-free 离心管中配制如下混合液 qrt SuperMix min 85 2 min cdna RNase free ddh 2 O 5 qrt SuperMix 模板 RNA to 20 μl 4 μl Total RNA: 1 pg-1 μg 用移液器轻轻吹打混匀 No RT Control 反应 ( 可选 ) No RT Control 是指不加逆转录酶的逆转录阴性对照反应, 用于检验 RNA 模板中是否有基因组 DNA 残留 在 RNase-free 离心管中配制如下混合液 RNase free ddh 2 O 5 No RT Control Mix 模板 RNA to 20 μl 4 μl Total RNA: 1 pg-1 μg 用移液器轻轻吹打混匀 2. 进行逆转录反应 50 * min 2 min *. 如果模板具有复杂二级结构或高 GC 区域, 可将反应温度提高至 55, 有助于提高产量 HiScript Q RT SuperMix for qpcr 100 rxn (20 μl/rxn) R ,

92 RT-qPCR 专用预混液 HiScript Q RT SuperMix for qpcr (+gdna wiper) 预混液形式的两步法 RT-qPCR 试剂 ( 去基因组 ) 即用型的 SuperMix 预混液使用方便省时 gdna wiper Mix 可迅速彻底去除基因组污染 保存条件 :-20 保存 产品概述 逆转录系列 HiScript 两步法 RT-qPCR 系列试剂盒 ( 含 gdna 去除模块 ) 以高性价比的 HiScript Reverse Transcriptase 为基础, 对反应体系进行大幅简化, 即用型的 SuperMix 将合成高质量第一链 cdna 所需的所有成分合并为一管 5 SuperMix, 只需加入 RNA 和水即可进行逆转录反应, 且 SuperMix 在 -20 不会冻结, 使用方便 产品中包含的 4 gdna wiper 可在逆转录前快速彻底去除体系中潜在的基因组干扰 本产品操作简便, 降低操作过程中的污染机率 合成的 cdna 可以用于 SYBR Green qpcr 分析法和探针分析法, 进行高性能的基因表达分析 RNase free ddh 2 O 4 gdna wiper Mix 5 qrt SuperMix II a 5 No RT Control Mix b R rxn (20 μl/rxn) 2 1 ml 400 μl 400 μl a. 包含 Buffer dntp Mix HiScript Reverse Transcriptase RNase inhibitor Random primers/oligo dt primer mix 注意 : 本产品与 HiScript Q RT SuperMix for qpcr (Vazyme #R122-01) 中所带的 5 qrt SuperMix 成分不同, 不可以混用 b. 除不含 HiScript Reverse Transcriptase 外, 其余成分与 5 qrt SuperMix II 相同, 用于配制 No RT 对照反应 40 μl 操作流程 gdna wiper Mix qrt SuperMix II 42 2 min min 85 2 min RNA contaminated with gdna RNA cdna 1. 基因组 DNA 去除在 RNase-free 的离心管中配制如下混合液 RNase free ddh 2 O 4 gdna wiper Mix 模板 RNA 用移液器轻轻吹打混匀 42 2 min 2. 配制逆转录反应体系 在第 1 步的反应管中直接加入 5 qrt SuperMix II 5 qrt SuperMix II 第 1 步的反应液 用移液器轻轻吹打混匀 No RT Control 反应 ( 可选 ) to 16 μl 4 μl Total RNA: 1 pg-1 μg No RT Control 是指不加逆转录酶的逆转录阴性对照反应, 用于检验 RNA 模板中是否有基因组 DNA 残留 在 RNase-free 离心管中配制如下混合液 4 μl 16 μl 5 No RT Control Mix 第 1 步的反应液用移液器轻轻吹打混匀 3. 进行逆转录反应 50 * 85 4 μl 16 μl 15 min 2 min *. 如果模板具有复杂二级结构或高 GC 区域, 可将反应温度提高至 55, 有助于提高产量 HiScript Q RT SuperMix for qpcr (+gdna wiper) 100 rxn (20 μl/rxn) R ,

93 RT-qPCR 专用预混液 HiScript Q Select RT SuperMix for qpcr 可灵活选择逆转录引物的两步法 RT-qPCR 预混液 针对不同实验设计可灵活使用不同类型的逆转录引物 保存条件 :-20 保存 产品概述 HiScript 两步法 Select RT-qPCR 预混液以高性价比的 HiScript Reverse Transcriptase 为基础, 针对不同实验设计提供不同类型的逆转录引物, 满足多样化的实验需求 可根据逆转录后续实验需要选择 Oligo (dt) 18 primer/random Hexamers 或基因特异性引物 (GSP) 5 qrt SuperMix 含有反转录反应除引物以外所需的全部试剂且在 -20 不会冻结, 使用方便 RNase free ddh 2 O 5 Select qrt SuperMix a Oligo (dt) 18 (10 μm) Random hexamers (50 ng/μl) 5 Select No RT Control Mix b a. 包含 Buffer dntp Mix HiScript Reverse Transcriptase RNase inhibitor R rxn (20 μl/rxn) 2 1 ml 400 μl 100 μl 100 μl b. 除不含 HiScript Reverse Transcriptase 外, 其余成分与 5 Select qrt SuperMix 相同, 用于配制 No RT 对照反应 40 μl 逆转录系列 操作流程 RNA qrt SuperMix min 85 2 min cdna 1. 在 RNase-free 离心管中配制如下混合液 RNase free ddh 2 O 5 Select qrt SuperMix Oligo (dt) 18 (10 μm) or Random hexamers (50 ng/μl) or Gene specific primers (2 μm) 模板 RNA to 20 μl 4 μl 1 μl T otal RNA: 1 pg-1 μg 用移液器轻轻吹打混匀 No RT Control 反应 ( 可选 ) No RT Control 是指不加逆转录酶的逆转录阴性对照反应, 用于检验 RNA 模板中是否有基因组 DNA 残留 在 RNase-free 离心管中配制如下混合液 RNase free ddh 2 O 5 Select No RT Control Mix Oligo (dt) 18 (10 μm) or Random hexamers (50 ng/μl) or Gene specific primers (2 μm) 模板 RNA to 20 μl 4 μl 1 μl Total RNA: 1 pg-1 μg 用移液器轻轻吹打混匀 2. 进行逆转录反应 50 * min 2 min *. 如果模板具有复杂二级结构或高 GC 区域, 可将反应温度提高至 55, 有助于提高产量 HiScript Q Select RT SuperMix for qpcr 100 rxn (20 μl/rxn) R ,

94 RT-qPCR 专用预混液 HiScript Q Select RT SuperMix for qpcr (+gdna wiper) 可灵活选择逆转录引物的两步法 RT-qPCR 预混液 ( 去基因组 ) 针对不同实验设计可灵活使用不同类型的逆转录引物 gdna wiper Mix 可迅速彻底去除基因组污染 保存条件 :-20 保存 产品概述 逆转录系列 HiScript 两步法 Select RT-qPCR 预混液 ( 含 gdna 去除模块 ) 以高性价比的 HiScript Reverse Transcriptase 为基础, 针对不同实验设计可灵活使用不同类型的逆转录引物, 满足多样化的用户需求 可根据逆转录后续实验需要选择 Oligo (dt) 18 primer/random Hexamers 或基因特异性引物 (GSP) 产品中的 4 gdna wiper 可在逆转录步骤前快速彻底去除体系中潜在的基因组干扰,5 qrt SuperMix 含有反转录反应除引物以外所需的全部试剂且在 -20 不会冻结, 使用方便 本产品操作简便, 降低操作过程中的污染机率 合成的 cdna 可以用于 SYBR Green qpcr 分析法和探针分析法, 进行高性能的基因表达分析 RNase free ddh 2 O 4 gdna wiper Mix 5 Select qrt SuperMix II a Oligo (dt) 18 (10 μm) Random hexamers (50 ng/μl) 5 Select No RT Control Mix b a. 包含 Buffer dntp HiScript Reverse Transcriptase RNase inhibitor R rxn (20 μl/rxn) 2 1 ml 400 μl 400 μl 100 μl 100 μl 注意 : 与 HiScript Q Select RT SuperMix for qpcr (Vazyme #R132-01) 中所带的 5 Select qrt SuperMix 成分不同, 不可以混用 b. 除不含 HiScript Reverse Transcriptase 外, 其余成分与 5 Select qrt SuperMix II 相同, 用于配制 No RT 对照反应 操作流程 40 μl gdna wiper Mix qrt SuperMix II 42 2 min min 85 5 sec RNA contaminated with gdna RNA cdna 1. 基因组 DNA 去除 在 RNase free 的离心管中配制如下混合液 RNase free ddh 2 O 4 gdna wiper Mix Oligo (dt) 18 (10 μm) or/and Random hexamers (50 ng/μl) or Gene specific primers (2 μm) 模板 RNA to 16 μl 4 μl 1 μl 1 μl 1 μl Total RNA: 1 pg-1 μg 用移液器轻轻吹打混匀 42 2 min 2. 配制逆转录反应体系 在第 1 步的反应管中直接加入 5 Select qrt SuperMix II 5 Select qrt SuperMix II 第 1 步的反应液 4 μl 16 μl 用移液器轻轻吹打混匀 No RT Control 反应 ( 可选 ) No RT Control 是指不加逆转录酶的逆转录阴性对照反应, 用于检验 RNA 模板中是否有基因组 DNA 残留 在 RNase-free 离心管中配制如下混合液 5 Select No RT Control Mix 第 1 步的反应液 用移液器轻轻吹打混匀 4 μl 16 μl 3. 进行逆转录反应 50 * min 5 sec *. 如果模板具有复杂二级结构或高 GC 区域, 可将反应温度提高至 55, 有助于提高产量 HiScript Q Select RT SuperMix for qpcr (+gdna wiper) 100 rxn (20 μl/rxn) R ,

95 一步法逆转录 RT-PCR HiScript II One Step RT-PCR Kit 一步法高效 RT-PCR 试剂盒 逆转录和 PCR 在同一管内进行 检测灵敏度可达 0.1 pg 总 RNA 可扩增超过 10 kb 的长片段 保存条件 :-20 保存 产品概述 本试剂盒专为以 RNA 为模板 ( 如 RNA 病毒 ) 的终点法 PCR 检测而设计 使用基因特异引物 (GSP), 逆转录和 PCR 反应在一管内完成, 不需要额外的开管 / 移液操作, 大大提高了检测通量, 并降低了污染的风险 整合 HiScript II Reverse Transcriptase 以及 Champagne Taq TM DNA Polymerase 的优越性能, 配合经过优化的缓冲体系,HiScript II One Step RT- PCR Kit 可扩增片段长达 10 kb 以上 试剂盒以便捷的 Master Mix 形式提供 2 One Step Mix 包含优化的缓冲体系和 dntps;one Step Enzyme Mix 包含比例优化的 HiScript II Reverse Transcriptase RNase inhibitor 以及 Champagne Taq TM DNA Polymerase, 操作简单快捷 性能展示 RNase free ddh 2 O 2 One Step Mix a One Step Enzyme Mix b 10 Loading buffer a. 包含 dntp b. 包含 RNase inhibitor HiScript II Reverse Transcriptase 以及 Champagne Taq plus DNA Polymerase 操作流程 1. 在 RNase-free 离心管中配制如下混合液 RNase free ddh 2 O 2 One Step Mix One Step Enzyme Mix Gene Specific Primer Forward (10 μm) Gene Specific Primer Reverse (10 μm) 模板 RNA* 注 : 可根据实验需要, 调整反应体积, 各用量只需等比例做相应调整即可 P rxn (50 μl/rxn) 2 1 ml μl 125 μl 1.25 ml to 50 μl 25 μl 2.5 μl 2 μl 2 μl Total RNA: 1 pg-1 μg 逆转录系列 以 HeLa 细胞总 RNA 为模板, 用 HiScript II One Step RT-PCR Kit (P611) 扩增 555 bp GAPDH 片段 检测灵敏度可达到 100 fg 以猪蓝耳病毒 PRRSV RNA 为模板, 用 HiScript II One Step RT-PCR Kit (P611) 扩增 660 bp 片段 检测灵敏度可达到 0.2 TCLD50 以 1 μg HeLa 细胞总 RNA 为模板, 用 HiScript II One Step RT-PCR Kit (P611) 扩增不同长度的片段 可以看到,HiScript II One Step RT-PCR Kit 可成功扩增长达 12.1 kb 的 UTRN 片段 *. RNA 模板变性有助于打开二级结构, 可在很大程度上提高第一链 cdna 的产量 对于长度超过 5 kb 的 cdna 片段, 请在上述步骤前对 RNA 模板单独进行变性处理 : 65 加热 5 min, 迅速置于冰上骤冷, 并 在冰上静置 2 min 后作为模板配制反应体系 2. 按下列条件进行 One Step RT-PCR 反应目的片段 <5 kb 50 a ~72 b 目的片段 >5 kb 50 a b 72 4 a 如果模板具有复杂二级结构或高 GC 区域, 可将反应温度提高至 55, 有助于提高产量 b 退火温度需要根据引物退火温度调整, 一般设置成低于引物退火温度 1-2 即可 对于 >5 kb 的片段, 推 荐使用长引物,Tm 值在 68-70, 把退火 / 延伸温度合并为 68 这样可以显著提高扩增特异性 c 对于 <5 kb 的片段, 延伸时间最少设置为 20 sec/kb; 对于 >5 kb 的片段, 延伸时间最少设置为 1 min/kb 一般来说, 延伸时间的延长有利于提高扩增产量 3. 产物用琼脂糖凝胶电泳检测 30 min 3 min 30 sec 30 sec min/kb c 5 min Hold 30 min 3 min 10 sec 1 min/kb c 5 min Hold cycles cycles HiScript II One Step RT-PCR Kit 50 rxn (50 μl/rxn) P

96 一步法逆转录 RT-PCR HiScript II One Step RT-PCR Kit (Dye Plus) 一步法高效 RT-PCR 试剂盒 ( 预混 Loading buffer) 逆转录和 PCR 在同一管内进行 检测灵敏度可达 0.1 pg 总 RNA 可扩增长达 10 kb 以上的长片段 PCR 产物可直接加样电泳 保存条件 :-20 保存 产品概述 逆转录系列 本试剂盒专为以 RNA 为模板 ( 如 RNA 病毒 ) 的终点法 PCR 检测而设计 使用基因特异引物 (GSP), 逆转录和 PCR 反应在一管内完成, 不需要额外的开管 / 移液操作, 大大提高了检测通量, 并降低了污染的风险 试剂盒以便捷的 Master Mix 形式提供 2 One Step Mix (Dye Plus) 包含优化的缓冲体系 dntp 及加样用染料成分, 使用更加方便快捷 RNase free ddh 2 O 2 One Step Mix (Dye Plus) a One Step Enzyme Mix b a. 包含 dntp 甘油及染料 b. 包含 RNase inhibitor P rxn (50 μl/rxn) 2 1 ml μl 125 μl 操作流程 1. 在 RNase-free 离心管中配制如下混合液 RNase free ddh 2 O 2 One Step Mix (Dye Plus) One Step Enzyme Mix Gene Specific Primer Forward (10 μm) Gene Specific Primer Reverse (10 μm) 模板 RNA to 50 μl 25 μl 2.5 μl 2 μl 2 μl Total RNA: 1 pg-1 μg 注 : 可根据实验需要, 调整反应体积, 各用量只需等比例做相应调整即可 2. 按下列条件进行 One Step RT-PCR 反应 目的片段 <5 kb 50 C a 94 C 94 C 55 C~72 C b 72 C 72 C 4 C 30 min 3 min 30 sec 30 sec min/kb c 7 min Hold cycles 目的片段 >5 kb 50 C a 30 min 94 C 3 min 94 C 30 sec cycles 68 C b 1 min/kb c 72 C 7 min 4 C Hold a 如果需扩增基因的 RNA 模板具有复杂二级结构或高 GC 区域, 可将逆转录步骤反应温度提高至 55 C, 有助于提高产量 b 退火温度需要根据引物退火温度调整, 一般设置成低于引物退火温度 1-2 C 即可 对于 >5 kb 的片段, 推荐使用长引物,Tm 值在 C, 把退火 / 延伸温度合并为 68 C 这样可以显著提高扩增特异性 c 对于 <5 kb 的片段, 延伸时间最少设置为 0.5 min/kb; 对于 >5 kb 的片段, 延伸时间最少设置为 1 min/kb 一般来说, 延伸时间的延长有利于提高扩增产量 3. 产物用琼脂糖凝胶电泳检测 HiScript II One Step RT-PCR Kit (Dye Plus) 50 rxn (50 μl/rxn) P

97 单细胞预扩增 Single Cell Sequence Specific Amplification Kit 单细胞或微量总 RNA 中转录组的扩增试剂盒 适用于 个细胞 一步法 RT-PCR 预扩增 最高可扩增 500 个靶基因 扩增产物适合用任何实时荧光定量 PCR 仪分析 高灵敏度, 低成本 保存条件 :-20 保存 产品概述 Single Cell Squence Specific Amplification Kit 是基于一步 RT-PCR 的扩增方法, 实现单细胞或者微量总 RNA 中转录组的扩增, 检测单个细胞之间不同基因的表达水平 本试剂盒实现了细胞裂解 RNA 逆转录和 PCR 反应在同一管内完成, 不需要额外的移管操作, 具有节约时间 减少实验误差 降低污染 提高灵敏度等优势 2 Reaction Mix a RT/Taq enzyme b Nuclease free 水 a. 包含 dntp Mix, Mg 2+ 特异性增强因子 b. 包含 Hiscript II Reverse Transcriptase RNase inhibitor Champagne Taq TM DNA Polymerase P (200 rxn) 500 μl 20 μl 1.25 ml 2 逆转录系列 操作流程 -80, 2 min 3' 5' RNA RT cdna Preamplification cycles 5' 3' 5' 3' 3' 5' 5' 3' 3' 5' 5' 3' 3' 5' 3' 5' Preamplofocation product qpcr Single Cell Sequence Specific Amplification Kit 200 rxn P ,

98 mirna 逆转录专用预混液 mirna 1st Strand cdna Synthesis Kit (by stem-loop) microrna 逆转录试剂盒 ( 茎环法 ) 优秀的线性关系 优越的反应体系 简便的引物设计 在宽广的模板区间内具有良好的线性关系, 可检出低至 pg 级 RNA 模板 最适的 Buffer 及浓度, 更适用于 microrna 的逆转录 提供配套的引物设计软件, 使得引物设计更加简便 保存条件 :-20 保存 产品概述 逆转录系列 mirna 1st Strand cdna Synthesis Kit (by stem-loop) 是适用于茎环法 mirna cdna 一链合成的专用试剂盒, 含基因组 DNA 去除步骤, 可以在 42 2 min 条件下快速去除基因组 DNA 的污染, 保证后续结果更加可靠 试剂盒基于的 HiScript II Reverse Transcriptase 具有极高的热稳定性, 配以针对优化的缓冲体系, 均有利于 mirna 特异性逆转录产物的生成 cdna 产物后续定量, 推荐使用本公司的 mirna Universal SYBR qpcr Master Mix (Vazyme # MQ101), 以获得最优的实验结果 同时, 配套推出 mirna 逆转录茎环引物和定量引物的设计软件, 操作简单, 为 mirna 实验保驾护航 性能展示优秀的线性关系以小鼠肝脏组织 Total RNA 的 10 倍稀释梯度 (10 pg-1 μg) 为模板, 使用 mirna 1st Strand cdna Synthesis Kit (by stem-loop) (Vazyme #MR101) 进行逆转录, 得到的 cdna 使用 mirna Universal SYBR qpcr Master Mix (Vazyme #MQ101) 扩增 mmu-mir-16 基因 结果显示, 在宽广的模板区间内, 该配套产品具有优秀的线性关系 RNase free ddh 2 O 5 gdna Wiper Mix 10 RT Mix a HiScript II Enzyme Mix b a. 包含 dntp b. 包含 RNase inhibitor 操作流程 ( 以 QuantStudio TM 6 为测试机型 ) 1. 基因组 DNA 去除 a. 在 RNase free 离心管中配制如下混合液 : RNase free ddh 2 O 5 gdna Wiper Mix Total RNA 用移液器轻轻吹打混匀 b. 按下列条件进行基因组 DNA 去除反应 : 42 2 min 2. 第一链 cdna 合成 a. 在 RNase free 离心管中配制如下混合液 : RNase free ddh 2 O 上一步的混合液 Stem-loop primer (2 μm) * 10 RT Mix HiScript II Enzyme Mix 用移液器轻轻吹打混匀 MR (50 rxn / 20 μl reaction) 1 ml 100 μl 100 μl 100 μl MR (100 rxn / 20 μl reaction) 1 ml 200 μl 200 μl 200 μl to 10 μl 2 μl 10 pg -1 μg to 20 μl *. 茎环引物推荐使用本公司 mirna Design 软件进行设计, 此时,cDNA 产物后续定量产品 mirna Universal SYBR qpcr Master Mix (Vazyme # MQ101) 中配套的逆向 qpcr 引物可直接使用, 无需另外 设计合成 10 μl 1 μl 2 μl 2 μl b. 按下列条件进行第一链 cdna 合成反应 : 25 C 50 C * 85 C 5 min 15 min 5 min *. 如果模板具有复杂二级结构或高 GC 区域, 可将反应温度提高至 55, 有助于提高产量 产物可立即用于 qpcr 反应, 或在 -20 保存, 并在半年内使用 ; 长期存放建议分装后在 -80 保存 ;cdna 应避免反复冻融 mirna 1st Strand cdna Synthesis Kit (by stem-loop) 50 rxn (20 μl/rxn) 100 rxn (20 μl/rxn) MR MR ,

99 Vazyme 基础科研试剂 qpcr 系列产品 染料法荧光定量专用预混液 化学修饰 SYBR 系列产品 AceQ qpcr SYBR Green Master Mix 系列 AceQ Universal SYBR qpcr Master Mix 抗体修饰 SYBR 系列产品 ChamQ TM SYBR qpcr Master Mix 系列 ChamQ TM SYBR Color qpcr Master Mix 系列 ChamQ TM Universal SYBR qpcr Master Mix 探针法荧光定量专用预混液 AceQ qpcr Probe Master Mix AceQ U + Probe Master Mix AceQ Universal U + Probe Master Mix V 一步法荧光定量专用预混液 HiScript II One Step qrt-pcr SYBR Green Kit HiScript II One Step qrt-pcr Probe Kit HiScript II U + One Step qrt-pcr Probe Kit mirna 染料法定量专用预混液 mirna Universal SYBR qpcr Master Mix 125

100 qpcr 系列产品 技术背景 qpcr 系列产品 1 Real-time PCR 概述聚合酶链式反应 (PCR) 是分子生物学领域功能最强大的技术之一 采用 PCR 技术, 利用序列特异性寡核苷酸 热稳定性 DNA 聚合酶和热循环, 可将 DNA 或 cdna 模板内的特异性序列拷贝或 扩增 数千至数百万倍 在传统 ( 终点 )PCR 中, 扩增序列的检测和定量是在反应结束, 即最后一次 PCR 循环完成后进行的, 且需要 PCR 后分析, 如凝胶电泳和图像分析 在实时荧光定量 PCR (qpcr) 中, 每次循环均检测 PCR 产物 通过监测指数扩增期的反应, 用户可以确定靶点的起始量, 且精度极高 在实时荧光定量 PCR 中, 每次循环结束后通过荧光染料检测 DNA 量, 荧光染料产生的荧光信号与生成的 PCR 产物分子 ( 扩增片段 ) 数成正比 利用反应指数期采集的数据, 生成有关扩增靶点起始量的定量信息 实时荧光定量 PCR 使用的荧光报告基团包括双链 DNA (dsdna) 结合染料或在扩增过程中掺入 PCR 产物的 与 PCR 引物或探针结合的染料分子 qpcr 系列 实时荧光定量 PCR 的优点包括 : 能够实时监控 PCR 反应的进程 能够精确测定每个循环的扩增片段数量, 从而对样本中的起始样本量进行准确定量 具有更大的检测动态范围 在单管中实现扩增和检测, 无需 PCR 后处理 2 Real-time PCR 检测原理 Real-time PCR 是通过检测反应体系中的荧光强度来检测 PCR 扩增产物, 其荧光检出方法可以分为荧光染料法与荧光探针法两 大类 荧光染料法 (SYBR Green I) SYBR Green I 是一种 DNA 小沟非饱和性结合染料, 与 DNA 结合时发光 / 不结合 ( 游离 ) 时不发光 每形成一条 DNA 双链, 就会有一定数量的染料结合上去, 染料一且与 DNA 双链结合, 就会产生荧光信号 信号强度与 DNA 分子总数目成正比 1 热变性 Primer F F F F F 荧光物质 DNA Polymerase F F 2 引物退火 F F F 3 延伸反应 F F F F F

101 qpcr 系列产品 荧光探针法 (TaqMan Probe 法 ) TaqMan Probe 是一种水解探针 (5 Reporter, 3 Quencher), 探针完整时不发光 / 水解后发光 每形成一条 DNA 双链, 就会 水解一条探针 ; 每水解一条探针, 就会产生一个单位荧光信号 荧光信号强度与结合过探针的 DNA 分子总数目成正比 上游引物 R TaqMan 探针 Q 3' 5' 5' 3' R 下游引物 Q 3' 5' 5' 3' 两种荧光检测方法的比较 : SYBR TaqMan 优点 价格便宜操作方便适用性广 特异性高支持多重荧光定量 qpcr 系列 引物要求高 价格贵 缺点 特异性稍差 只适合特定目标 不能进行多重定量 3 Real-time PCR 基本名词 Real-time PCR 扩增曲线的两种图谱及四个时期 平台期线性增长期 平台期 指数增长期 线性增长期 指数增长期 基线期 基线期 Real-time PCR 常见名词 基线 基线是指在 PCR 的最初几个循环中 ( 一般为第 3 至 15 个循环 ) 的信号水平, 此阶段的荧光信号变化极小 低水平的基线信号 相当于反应的背景或 噪声 基线 基线

102 qpcr 系列产品 阈值 阈值为基线荧光值标准差的 10 倍高度对应荧光强度值 穿过阈值与 X 轴平行的直线称为阈值线 阈值 阈值线 基线 标准偏差 C T 值 C T 值是阈值线与扩增曲线的交点对应在 X 轴上的值 qpcr 系列 C T C T C T C T C T C T 融解曲线 ( 针对于染料法 ) 融解曲线图表示了随着反应温度的升高, 当结合染料分子的双链 DNA (dsdna) 解离成单链 DNA (ssdna) 时, 观察到的荧光强度的变化 例如, 当加热结合有 SYBR Green I 染料的双链 DNA 达到熔点 (Tm) 后, 由于 DNA 链的解离和染料的释放, 检测的荧光强度会出现突然下降 左图为融解曲线的一次曲线, 右图为融解曲线的负一次微分曲线, 通常使用融解曲线的负一次微分曲线 扩增后对融解曲线进行分析, 可以简单 直接地检查实时荧光定量 PCR 反应中是否存在非特异性产物, 进而确保反应的特异性 荧光 荧光 温度 融解曲线原始图谱 温度 融解曲线负一次微分图谱

103 qpcr 系列产品 mirna 系列产品 1 什么是 mirna mirnas(micrornas) 是一种不编码蛋白质 大小约 21 nt-23 nt 的单链小分子 RNA 它具有在翻译水平或转录后水平调控基因表达 的功能 2 mirna 形成机制 mirna 通常来源于大小约为 1000 nt 的长链 RNA 初极体 Pi-miRNA,Pri-miRNA 分子在细胞核中经过双链 RNA 特异 RNase lll- Drosha 作用下形成 70 nt-100 nt 的具有茎环结构的 RNA 分子 Pre-miRNA Pre-miRNA 在 exportin-5 的作用下转运至胞质中, 被另一个双链 RNA 特异性 RNase lll-dicer 识别, 被进一步切割成 19 nt-23 nt 小分子 RNA, 即成热的 mirna 基因组 DNA 7 mgpppg Pri-miRNA (1000 nt) AAAA Pre-miRNA 成熟 mirna (70~100 nt) Drosha Dicer 解链 mir-risc (19-23 nt) qpcr 系列 3 mirna 生物学功能参与调控胚胎发生, 发育时序, 器官分化参与调控信号通路和代谢过程参与调控疾病的发生和发展 mirna 可作为代谢标志物 mirna 可作为疾病标志物 mirna 可作为药物进行疾病治疗 mirna 与肿瘤发生 / 抑制关系密切 4 mirna 逆转录常见方法 因为 mirna 序列很短, 只有 21 nt - 23 nt, 所以其反转录产物不能通过常规的 PCR 进行反应 mirna 逆转录过程中, 通过 5' 端 延长的逆转录即可得到人为加长的 mirna 的 cdna 序列 对于加长的 mirna 逆转录引物常见有两种方法 : 茎环法与加 A 尾法 Total RNA Mature-miRNA 5' 3' Poly (A) add 5' PolyA polymerase 3' AAAAAAAAAA... RT Reaction 5' 3' Anneal OligodT-adaptor and then RT reaction AAAAAAAAAA... VTTTTTTTTT 3' 5' Forward primer Step 2: Real-time PCR cdna productor 3' TTTTTTTTT cdna templatc ready for qpcr 5' SYBR Green I Reverse primer qpcr test 3' TTTTTTTTT Universal Adaptor PCR Primer 5' 茎环法 加尾法

104 qpcr 系列产品 两种逆转录方法的比较 : 检测方法检测灵敏度检测特异性实验成本检测通量实验设计难度 茎环法 特异性反转录, 一次反转录仅能检测一个 mirna 或内参, 操作较繁琐需设计茎环反转录引物,qPCR 上游检测引物 加尾法 高通量反转录, 一次反转录即可检测多种 mirna 及内参, 操作便捷仅需设计上游检测引物 产品选购指南 染料法荧光定量专用预混液 qpcr 系列 染料法荧光定量专用预混液 ChamQ 高灵敏 AceQ 高特异 ChamQ TM ChamQ TM Color ChamQ TM Universal AceQ AceQ Universal Q311 Q411 Q111 Q321 Q421 Q121 Q711 Q331 Q431 Q131 Q341 Q441 Q141 灵敏示踪通用特异通用 页码 P110~P111 P112~P113 P114~P115 P106~P107 P108~P109 Q511 探针法荧光定量专用预混液 探针法荧光定量专用预混液 AceQ AceQ Probe AceQ U + Probe AceQ Universal U + Probe Q112 Q113 Q513 防污染 通用 + 防污染 页码 P116 P117 P118~P119 质量控制 纯度检测 功能检测 所有经检测均无核酸外切酶 核酸内切酶 核酸残留 以质粒及 HeLa 细胞总 RNA 逆转录产物的稀释液为模板, 扩增 6 个基因, 每个基因的融解曲线为单峰, 特异性好, 扩增曲线在批次间产品中相近

105 qpcr 系列产品 一步法荧光定量专用预混液 一步法荧光定量专用预混液 HiScript Ⅱ One Step HiScript Ⅱ One Step SYBR HiScript Ⅱ One Step Probe HiScript Ⅱ U + One Step Probe Q221 Q222 Q223 一步法染料 qrt-pcr 一步法探针 qrt-pcr 一步法探针防污染系统 qrt-pcr 页码 P120~P121 P122~123 P124 质量控制 纯度检测 功能检测 所有经检测均无核酸外切酶 核酸内切酶及 RNase 残留 以 HeLa 细胞总 RNA 为模板,1 pg-1μg 起始量中的 4 个浓度梯度, 扩增 3 个不同丰度基因, 扩增效率在 之间, 且模板量为 1 pg 时 B2M 基因的扩增 C T 值在 35 以内 mirna 系列产品 mirna 系列产品 mirna 茎环法逆转录 MR101 mirna 染料法荧光定量 MQ101 页码 P98 P125~P126 qpcr 系列 质量控制 纯度检测 功能检测 所有经检测均无核酸外切酶 核酸内切酶 核酸残留 以质粒及 HeLa 细胞总 RNA 逆转录产物的稀释液为模板, 扩增 6 个基因, 每个基因的融解曲线为单峰, 特异性好, 扩增曲线在批次间产品中相近

106 化学修饰 SYBR 系列产品 AceQ qpcr SYBR Green Master Mix 系列 高特异性染料法定量 PCR 检测试剂盒 严谨的热启动酶 优化的反应体系 卓越的扩增性能 基于化学法热启动的 AceTaq DNA Polymerase, 提供完美的扩增特异性 专利缓冲液配方, 最大程度抑制非特异扩增和引物二聚体, 无需反复优化条件 重复可靠的定量结果, 满足高水平杂志的数据要求 保存条件 :-20 避光储存 产品概述 AceTaq DNA Polymerase 是经过化学修饰的 Taq DNA Polymerase, 室温下活性被完全封闭, 只有经过 95 加热 5 min 后活性才被释放, 可有效防止在样品准备及反应升温阶段产生非特异扩增和引物二聚体 2 AceQ qpcr SYBR Green Master Mix * 50 ROX Reference Dye 1 50 ROX Reference Dye 2 Q (500 rxn/20 μl reaction) ml *. 包含 dntp,mg 2+,AceTaq DNA Polymerase,SYBR Green I 等 200 μl 200 μl Q (2,500 rxn / 20 μl reaction) 5 Q qpcr 系列 AceQ 染料法荧光定量 PCR 专用预混液是使用 SYBR Green I 嵌合荧光法进行 qpcr 的专用试剂 其基于热启动 AceTaq DNA Polymerase, 配合针对 qpcr 优化的最适 Buffer, 可以有效抑制非特异扩增, 适用于进行高特异性的 qpcr 反应 使用本品进行 qpcr 反应, 可以在宽广的定量区域内得到良好的标准曲线, 对靶基因进行准确定量 检测, 重复性好, 可信度高 2 AceQ qpcr SYBR Green Master Mix (Without ROX) * Q (500 rxn/20 μl reaction) ml *. 包含 dntp,mg 2+,AceTaq DNA Polymerase,SYBR Green I 等 2 AceQ qpcr SYBR Green Master Mix (Low ROX Premixed) * Q (500 rxn/20 μl reaction) ml Q (2,500 rxn / 20 μl reaction) 5 Q Q (2,500 rxn / 20 μl reaction) *. 包含 dntp,mg 2+,AceTaq DNA Polymerase,SYBR Green I,ROX Reference Dye 2 等 5 Q 性能展示宽广的定量区间以 HeLa 细胞 Total RNA 10 倍稀释梯度 (1 μg-10 pg) 为模板, 使用 HiScript Q RT SuperMix for qpcr (Vazyme #R122) 进行逆转录得到 cdna, 使用 AceQ qpcr SYBR Green Master Mix 扩增 human B2M 基因 可以看到,AceQ qpcr SYBR Green Master Mix 在宽广的模板量区间内具有良好的线性关系, 且扩增高度特异 2 AceQ qpcr SYBR Green Master Mix (High ROX Premixed) * Q (500 rxn/20 μl reaction) ml Q (2,500 rxn / 20 μl reaction) *. 包含 dntp,mg 2+,AceTaq DNA Polymerase,SYBR Green I,ROX Reference Dye 1 等 5 Q

107 化学修饰 SYBR 系列产品 AceQ qpcr SYBR Green Master Mix 系列 卓越的重复性和精准性以 HeLa 细胞 Total RNA 2 倍稀释梯度 (100 ng-0.78 ng) 为模板, 使用 HiScript Q RT SuperMix for qpcr (Vazyme #R122) 逆转录得到 cdna, 使用 AceQ qpcr SYBR Green Master Mix 扩增 human TBP 基因, 每个梯度设置 6 个重复 可以看到,AceQ qpcr SYBR Green Master Mix 能精确分辨 2 倍的模板量差异, 且扩增具有高度重复性 操作流程 1. 在 qpcr 管中配制如下混合液 2 AceQ qpcr SYBR Green Master Mix Primer1 (10 μm) Primer2 (10 μm) 50 ROX Reference Dye * Template DNA/cDNA ddh 2 O 10.0 μl 0.4 μl 0.4 μl 0.4 μl x μl To 20.0 μl *. 若使用 Q121/Q131/Q141 预混液, 无需添加 50 ROX Reference Dye, 总体系用 ddh 2 O 补齐至 20.0 μl 即可 反应体系中各的量可根据以下原则自行调整 : 一般来说, 反应体系中引物终浓度为 0.2 μm 即可得到较好的扩增效果 当反应性能比较差时, 可以在终浓度 μm 范围内调整引物浓度 qpcr 灵敏度极高, 建立反应体系时加入模板量的准确程度对最终定量结果会有很大的影响 推荐将模板稀释后加入反应体系中, 这样可以有效提高实验的重复性 如模板类型为未稀释 cdna 原液, 使用体积不应超过 qpcr 反应总体积的 1/10 2. 按下列条件进行 qpcr 反应 qpcr 系列 Stage 1 Stage 2 Stage 3 预变性 a 循环反应 融解曲线 b c Reps: 1 Reps: 40 Reps: min 10 sec 30 sec 15 sec 60 sec 15 sec a AceTaq DNA Polymerase 需要热激活处理以恢复酶活, 请至少设置 PCR 反应预变性条件为 95 5 min 如果模板的 GC 含量较高, 可将预变性时间延长至 10 min b 延伸时间请根据您使用的 Real-time PCR 仪所需要的数据采集最短时间限制自行调整 : 如使用 ABI 7700 和 7900HT 时至少 30 sec; 使用 ABI 7000 和 7300 时至少 31 sec; 使用 ABI 7500 时至少 34 sec; 使用 ABI StepOnePlus TM 时至少 10 sec c 仪器类型不同, 融解曲线采集程序不尽相同, 使用仪器默认融解曲线采集程序即可 AceQ qpcr SYBR Green Master Mix 500 rxn (20 μl/rxn) 2,500 rxn (20 μl/rxn) Q Q ,200 5,410 AceQ qpcr SYBR Green Master Mix (Without ROX) 500 rxn (20 μl/rxn) 2,500 rxn (20 μl/rxn) Q Q ,200 5,410 AceQ qpcr SYBR Green Master Mix (Low ROX Premixed) 500 rxn (20 μl/rxn) 2,500 rxn (20 μl/rxn) Q Q ,200 5,410 AceQ qpcr SYBR Green Master Mix (High ROX Premixed) 500 rxn (20 μl/rxn) 2,500 rxn (20 μl/rxn) Q Q ,200 5,

108 化学修饰 SYBR 系列产品 AceQ Universal SYBR qpcr Master Mix 通用型高特异性染料法定量 PCR 检测试剂盒 全平台通用特殊的 ROX 参比染料, 适用于所有的 qpcr 仪, 无需在不同的仪器上调整 ROX 浓度 严谨的热启动酶基于化学法热启动的 AceTaq DNA Polymerase, 提供完美的扩增特异性 优化的反应体系专利缓冲液配方, 最大程度抑制非特异扩增和引物二聚体, 无需反复优化条件 卓越的扩增性能重复可靠的定量结果, 满足高水平杂志的数据要求保存条件 :-20 避光储存 产品概述 qpcr 系列 本产品是使用 SYBR Green I 嵌合荧光法进行 qpcr 的专用试剂, 采用化学法修饰的热启动 DNA 聚合酶 AceTaq DNA Polymerase, 配合针对 qpcr 优化的最适 Buffer, 可以有效抑制非特异扩增, 从而显著提高扩增效率, 适用于进行高特异性的 qpcr 反应 本产品是一种含有 qpcr 反应最适浓度 SYBR Green I 的 2 预混试剂, 可以在宽广的定量区域内得到良好的标准曲线, 对靶基因进行准确定量 检测, 重复性好, 可信度高 另外, 产品中含有特殊的 ROX Passive Reference Dye, 适应于所有 qpcr 仪器, 无需在不同仪器上调整 ROX 的浓度, 只需在配制反应体系时加入引物和模板即可进行扩增 性能展示广阔的定量阈以 HeLa 细胞 cdna 为稀释液, 将 puc19 质粒进行 7 个 10 倍梯度稀释, 第 7 个稀释梯度中质粒拷贝数浓度约为 7 copies/4 μl 使用 AceQ Universal 预混液对各稀释梯度中的 puc19 质粒进行检测, 每孔模板使用量为 4 μl 可以看到, AceQ Universal 预混液在宽广的模板量区间内具有优秀的线性关系, 可轻松检测出个位数拷贝的待测模板 2 AceQ Universal SYBR qpcr Master Mix* Q (500 rxn/20 μl reaction) ml Q (2,500 rxn / 20 μl reaction) 5 Q * 包含 dntp,mg 2+,AceTaq DNA Polymerase,SYBR Green I,Specific ROX Passive Reference Dye 等 操作流程 1. 在 qpcr 管中配制如下混合液 2 AceQ Universal SYBR qpcr Master Mix Primer1 (10 μm) Primer2 (10 μm) Template DNA/cDNA ddh 2 O 反应体系中各的量可根据以下原则自行调整 : 10.0 μl 0.4 μl 0.4 μl x μl To 20.0 μl 一般来说, 反应体系中引物终浓度为 0.2 μm 即可得到较好的扩增效果 当反应性能比较差时, 可以在终浓度 μm 范围内调整引物浓度 qpcr 灵敏度极高, 建立反应体系时加入模板量的准确程度对最终定量结果会有很大的影响 推荐将模板稀释后加入反应体系中, 这样可以有效提高实验的重复性 如模板类型为未稀释 cdna 原液, 使用体积不应超过 qpcr 反应总体积的 1/10 2. 按下列条件进行 qpcr 反应 Stage 1 Stage 2 Stage 3 预变性 a 循环反应 融解曲线 b c Reps: 1 Reps: 40 Reps: min 10 sec 30 sec 15 sec 60 sec 15 sec a AceTaq DNA Polymerase 需要热激活处理以恢复酶活, 请至少设置 PCR 反应预变性条件为 95 5 min 如果模板的 GC 含量较高, 可将预变性时间延长至 10 min b 延伸时间请根据使用的 Real-time PCR 仪所需要的数据采集最短时间限制自行调整 : 如使用 ABI 7700 和 7900HT 时至少 30 sec; 使用 ABI 7000 和 7300 时至少 31 sec; 使用 ABI 7500 时至少 34 sec; 使用 ABI StepOnePlus TM 时至少 10 sec c 仪器类型不同, 融解曲线采集程序不尽相同, 使用仪器默认融解曲线采集程序即可

109 化学修饰 SYBR 系列产品 AceQ Universal SYBR qpcr Master Mix 卓越的特异性 对随机选取的 38 个体系进行 qpcr 检测, 验证 AceQ Universal 预混液扩增特异性 通过对融解曲线分析可知,38 个体系均无非特异性扩增 说明 AceQ Universal 预混液拥有卓越的特异性 全平台通用 使用 AceQ Universal 预混液在不同类型的 qpcr 仪 ( 机型 :StepOnePlus QuantStudio TM 3 LightCycler 96) 上扩增 GAPDH 基因, 定量结果优秀 说明 AceQ Universal 预混液仪器适用性广, 无需针对不同仪器调整 ROX 浓度 qpcr 系列 StepOnePlus TM (High ROX) QuantStudio TM 3(Low ROX) LightCycler 96(Withoout ROX) AceQ Universal SYBR qpcr Master Mix 500 rxn (20 μl/rxn) 2,500 rxn (20 μl/rxn) Q Q ,200 5,

110 抗体修饰 SYBR 系列产品 ChamQ TM SYBR qpcr Master Mix 系列 高灵敏度染料法定量 PCR 检测试剂盒 高效热启动酶 扩增高度特异 扩增性能优异 新型抗体法热启动酶 Champagne Taq TM DNA Polymerase, 扩增能力强 灵敏度高专利特异性促进因子 Exactor TM, 最大程度抑制非特异扩增和引物二聚体提供 C T 值 5-35 的宽广线性范围和个位数拷贝的检测灵敏度扩增稳定 定量结果具有高度重复性 保存条件 :-20 避光储存 ; 解冻后可于 4 避光条件下稳定存放 6 个月 Master Mix 解冻后可能出现些许白色沉淀, 室温放置片刻并上下颠倒, 沉淀即会溶解 请确认沉淀完全溶解, 并充分混匀后使用 产品概述 qpcr 系列 ChamQ TM SYBR qpcr Master Mix 采用的 Champagne Taq TM DNA Polymerase 是一种新型的抗体法热启动聚合酶, 具有兼容性广 扩增性能强 灵敏度高等诸多优点, 配以 Vazyme 独有的专利特异性促进因子 Exactor TM, 完美的平衡了扩增特异性和扩增效率之间的矛盾 在不失扩增特异性的同时,ChamQ TM 检测体系可以轻松检测到个位数拷贝的基因表达, 对目标基因定量准确, 可信 2 ChamQ SYBR qpcr Master Mix * 50 ROX Reference Dye 1 50 ROX Reference Dye 2 Q (500 rxn/20 μl reaction) ml 200 μl 200 μl *. 包含 dntp,mg 2+,Champagne Taq DNA Polymerase,SYBR Green I 等 2 ChamQ SYBR qpcr Master Mix (Without ROX) * Q (500 rxn/20 μl reaction) ml * 包含 dntp,mg 2+,Champagne Taq DNA Polymerase,SYBR Green I 等 Q (2,500 rxn / 20 μl reaction) 5 Q Q (2,500 rxn / 20 μl reaction) 5 Q 性能展示广阔的定量域以 HeLa 细胞 cdna 为稀释液, 将 puc19 质粒进行 8 个 10 倍梯度稀释, 第 8 个稀释梯度中质粒拷贝数浓度约为 5 copies/4 μl 使用 ChamQ TM 预混液对各稀释梯度中的 puc19 质粒进行检测, 每孔模板使用量为 4 μl 可以看到,ChamQ TM 预混液在宽广的模板量区间内具有优秀的线性关系, 可轻松检测出个位数拷贝的待测模板 2 ChamQ SYBR qpcr Master Mix (Low ROX Premixed) * Q (500 rxn/20 μl reaction) ml Q (2,500 rxn / 20 μl reaction) 5 Q * 包含 dntp,mg 2+,Champagne Taq DNA Polymerase,SYBR Green I,ROX Reference Dye 2 等 2 ChamQ SYBR qpcr Master Mix (High ROX Premixed) * Q (500 rxn/20 μl reaction) ml Q (2,500 rxn / 20 μl reaction) 5 Q * 包含 dntp,mg 2+,Champagne Taq DNA Polymerase,SYBR Green I,ROX Reference Dye 1 等

111 抗体修饰 SYBR 系列产品 ChamQ TM SYBR qpcr Master Mix 系列 精准的分辨力以 HeLa 细胞 cdna 原液以及 10 个两倍稀释梯度共计 11 个样品为模板, 使用 ChamQ TM 预混液检测 P450C17 基因的表达, 每个模板设置 6 个复孔 可以看到,ChamQ TM 预混液可以在宽广的范围内精确分辨 2 倍的模板浓度差异, 且扩增高度特异 统计结果显示, 各稀释度之间的平均 C T 为 1.09,SD 值仅为 0.08 操作流程 1. 在 qpcr 管中配制如下混合液 2 ChamQ SYBR qpcr Master Mix 10.0 μl Primer1 (10 μm) 0.4 μl Primer2 (10 μm) 0.4 μl 50 ROX Reference Dye * 0.4 μl Template DNA/cDNA x μl ddh 2 O To 20.0 μl *. 若使用 Q321/Q331/Q341, 无需添加 50 ROX Reference Dye, 总体系用 ddh 2 O 补齐至 20.0 μl 即可 卓越的特异性以 HeLa 细胞 cdna 为模板, 使用 ChamQ TM 预混液随机测试 48 个基因, 用以检测扩增特异性 通过对融解曲线分析可知,48 个体系中 ChamQ TM 预混液可完成 46 个 (95%) 目标基因检测, 说明 ChamQ TM 预混液拥有卓越的特异性 反应体系中各成分的量可根据以下原则自行调整 : 一般来说反应体系中引物终浓度为 0.2 μm 即可得到较好的扩增效果 当反应性能比较差时, 可以在终浓度 μm 范围内调整引物浓度 qpcr 灵敏度极高, 建立反应体系时加入模板量的准确程度对最终定量结果会有很大的影响 推荐将模板稀释后加入反应体系中, 这样可以有效提高实验的重复性 如模板类型为未稀释 cdna 原液, 使用体积不应超过 qpcr 反应总体积的 1/10 2. 按下列条件进行 qpcr 反应 Stage 1 Stage 2 Stage 3 预变性 a 循环反应 融解曲线 b c Reps: 1 Reps: 40 Reps: sec 10 sec 30 sec 15 sec 60 sec 15 sec a 该预变性条件适合绝大多数扩增反应, 如模板结构复杂, 可将预变性时间延长至 3 min 以提高预变性效果 qpcr 系列 b 对于 300 bp 以内的扩增子而言, 延伸时间设置为 30 sec 即可 ; 超过 300 bp 的扩增子, 推荐延长延伸时 间至 60 sec c 仪器类型不同, 融解曲线采集程序不尽相同, 使用仪器默认融解曲线采集程序即可 ChamQ TM SYBR qpcr Master Mix 500 rxn (20 μl/rxn) 2,500 rxn (20 μl/rxn) Q Q ,200 5,410 ChamQ TM SYBR qpcr Master Mix (Without ROX) 500 rxn (20 μl/rxn) 2,500 rxn (20 μl/rxn) Q Q ,200 5,410 ChamQ TM SYBR qpcr Master Mix (Low ROX Premixed) 500 rxn (20 μl/rxn) 2,500 rxn (20 μl/rxn) Q Q ,200 5,410 ChamQ TM SYBR qpcr Master Mix (High ROX Premixed) 500 rxn (20 μl/rxn) 2,500 rxn (20 μl/rxn) Q Q ,200 5,

112 抗体修饰 SYBR 系列产品 ChamQ TM SYBR Color qpcr Master Mix 系列 模板示踪型高灵敏度染料法定量 PCR 检测试剂盒 减少移液错误 扩增高度特异 扩增性能卓越 通过提供不同颜色的试剂, 利用移液过程中的变色效应, 追踪移液过程, 减少移液错误新型抗体法热启动酶 Champagne Taq TM DNA Polymerase, 配以优化的 Buffer 和专利特异性促进因子 Exactor TM, 有效避免引物二聚体和非特异性扩增的产生可以检测到个位数拷贝的基因表达, 对目标基因定位准确 可信 保存条件 :-20 避光储存 ;Master Mix 解冻后可于 4 避光条件下稳定存放 6 个月 Master Mix 解冻后可能出现些许白色沉淀, 室温放置片刻并上下颠倒, 沉淀即会溶解 请确认沉淀完全溶解, 并充分混匀后使用 产品概述 qpcr 系列 该产品通过扩增模板加入后的变色反应, 实现了加样过程的可视化, 极大的提高了加样效率 其采用的 Champagne Taq TM DNA Polymerase 是一种新型的抗体法热启动 DNA 聚合酶, 具有兼容性广 扩增性能强 灵敏度高等诸多优点, 配以针对 Real-time PCR 优化的最适 Buffer 以及专利特异性促进因子 Exactor TM, 完美的平衡了扩增特异性和扩增效率之间的矛盾 性能展示广阔的定量域图 A 是将 puc19 质粒进行 8 个 10 倍梯度稀释, 图 B 是根据图 A 的 C T 值绘制的标准曲线 第 8 个梯度稀释中质粒拷贝数浓度约为 5 copies/4 μl, 使用 ChamQ TM Color 预混液对各稀释梯度中的 puc19 质粒进行检测, 每孔模板使用量为 4 μl 可以看到,ChamQ TM Color 预混液在宽广的模板量区间具有优秀的线性关系, 可以检测出具有个位数拷贝的待测模板, 灵敏度极高 2 ChamQ SYBR Color qpcr Master Mix a 10 Dilution Buffer b 50 ROX Reference Dye 1 50 ROX Reference Dye 2 Q (2,500 rxn / 20 μl reaction) a. 包含 dntp,mg 2+,Champagne Taq DNA Polymerase,SYBR Green I, 蓝色显色染料等 b.10 黄色浓缩模板稀释液 2 ChamQ SYBR Color qpcr Master Mix (Without ROX) a 10 Dilution Buffer b Q (500 rxn/20 μl reaction) ml 1.25 ml 200 μl 200 μl 5 Q Q (2,500 rxn / 20 μl reaction) a. 包含 dntp,mg 2+,Champagne Taq DNA Polymerase,SYBR Green I, 蓝色显色染料等 b.10 黄色浓缩模板稀释液 Q (500 rxn/20 μl reaction) ml 1.25 ml 2 ChamQ SYBR Color qpcr Master Mix (Low ROX Premixed) a ml 10 Dilution Buffer b 5 Q Q (2,500 rxn / 20 μl reaction) 5 Q a. 包含 dntp,mg 2+,Champagne Taq DNA Polymerase,SYBR Green I,ROX Reference Dye 2, 蓝色显色染料等 b.10 黄色浓缩模板稀释液 Q (500 rxn/20 μl reaction) 1.25 ml 2 ChamQ SYBR Color qpcr Master Mix (High ROX Premixed) a 10 Dilution Buffer b Q (2,500 rxn / 20 μl reaction) 5 Q a. 包含 dntp,mg 2+,Champagne Taq DNA Polymerase,SYBR Green I,ROX Reference Dye 1, 蓝色显色染料等 b.10 黄色浓缩模板稀释液 Q (500 rxn/20 μl reaction) ml 1.25 ml ChamQ TM SYBR Color qpcr Master Mix 500 rxn (20 μl/rxn) 2,500 rxn (20 μl/rxn) Q Q ,200 5,410 ChamQ TM SYBR Color qpcr Master Mix (Without ROX) 500 rxn (20 μl/rxn) 2,500 rxn (20 μl/rxn) Q Q ,200 5,410 ChamQ TM SYBR Color qpcr Master Mix (Low ROX Premixed) 500 rxn (20 μl/rxn) 2,500 rxn (20 μl/rxn) Q Q ,200 5,410 ChamQ TM SYBR Color qpcr Master Mix (High ROX Premixed) 500 rxn (20 μl/rxn) 2,500 rxn (20 μl/rxn) Q Q ,200 5,

113 抗体修饰 SYBR 系列产品 ChamQ TM SYBR Color qpcr Master Mix 系列 卓越的特异性以 HeLa 细胞 cdna 为模板, 使用 ChamQ TM Color 预混液以及市售其他品牌染料法试剂 ( 分别来自 Supplier R A T I) 在同样的反应条件下测试 48 个随机挑选的基因, 用以检测扩增特异性 统计结果显示 ChamQ TM Color 预混液在默认条件下能够完成超过 95%(46/48) 的目标基因检测, 特异性极高 Melt Curve 实验流程 Mix 中包含蓝色染料,10 Dilution Buffer 中包含黄色 染料 当 Mix ( 蓝色 ) 中加入了用 Dilution Buffer 稀释的 扩增模板 ( 黄色 ) 后会产生蓝色 绿色的变色效应 Dilution Buffer 稀释的扩增模板 + ChamQ SYBR Color qpcr Master Mix = 已加入模板的体系颜色 9 ul 模板 +1 ul 10 x Dilution Buffer=Template DNA/cDNA Temperature ( ) ChamQ Color Supplier R Supplier A Supplier T Supplier I 稳健的重复性以 HeLa 细胞 cdna 为模板, 用 ChamQ TM Color 预混液检测 B2M 基因的表达, 设置 48 孔重复, 用以检测扩增稳定性 可以看到,ChamQ TM Color 预混液实验结果重复性极高 应用实例 1. 在 qpcr 管中配制如下混合液 2 ChamQ SYBR Color qpcr Master Mix Primer1 (10 μm) Primer2 (10 μm) 50 ROX Reference Dye* Template DNA/cDNA ddh 2 O 反应体系中各成分的量可根据以下原则自行调整 : 10.0 μl 0.4 μl 0.4 μl 0.4 μl x μl To 20.0 μl *. 若使用 Q421/Q431/Q441, 无需添加 50 ROX Reference Dye, 总体系用 ddh 2 O 补齐至 20.0 μl 即可 一般来说反应体系中引物终浓度为 0.2 μm 即可得到较好的扩增效果 当反应性能比较差时, 可以在终浓度 μm 范围内调整引物浓度 qpcr 灵敏度极高, 建立反应体系时加入模板量的准确程度对最终定量结果会有很大的影响 推荐将模板稀释后加入反应体系中, 这样可以有效提高实验的重复性 特别提醒 1: 当模板中已经包含 1 Dilution Buffer 时, 模板加入体积切勿超出 2-5 μl/20 μl reaction 范围 推荐范围内模板使用体积越大, 颜色变化越明显 特别提醒 2: 当模板类型为未稀释 cdna 原液时, 不论其是否包含 1 Dilution Buffer, 使用体积均不应超过 qpcr 反应总体积的 1/10, 即 2 μl/20 μl reaction qpcr 系列 精准的分辨力以 HeLa 细胞 cdna 原液以及 10 个 2 倍稀释梯度共计 11 个样品为模板, 使用 ChamQ TM Color 预混液检测 P450C17 基因的表达, 每个模板设置 6 个复孔 可以看到,ChamQ TM Color 预混液可以在宽广的范围内, 精确分辨 2 倍的模板浓度差异, 且扩增高度特异 2. 按下列条件进行 qpcr 反应 Stage 1 Stage 2 Stage 3 预变性 a 循环反应 融解曲线 b c Reps: 1 Reps: 40 Reps: sec 10 sec 30 sec 15 sec 60 sec 15 sec a 该预变性条件适合绝大多数扩增反应, 如模板结构复杂, 可将预变性时间延长至 3 min 以提高预变性效果 b 对于 300 bp 以内的扩增子而言, 延伸时间设置为 30 sec 即可 ; 超过 300 bp 的扩增子, 推荐延长延伸时间至 60 sec c 仪器类型不同, 融解曲线采集程序不尽相同, 使用仪器默认融解曲线采集程序即可

114 抗体修饰 SYBR 系列产品 ChamQ TM Universal SYBR qpcr Master Mix 通用型高灵敏度染料法定量 PCR 检测试剂盒 广泛的平台适用性 超高的扩增特异性 卓越的扩增灵敏度 特殊的 ROX 参比染料, 适用于所有 qpcr 仪, 无需在不同的仪器上调整 ROX 浓度使用新型抗体法热启动酶 Champagne Taq TM DNA Polymerase, 配以优化的 Buffer 和专利特异性促进因子 Exactor TM, 有效避免引物二聚体和非特异性扩增的产生预混液在宽广的模板区间内具有优秀的线性关系, 同时可检测出具有个位数拷贝的待测模板 保存条件 :-20 避光储存 ; 解冻后可于 4 避光条件下稳定存放 6 个月 Master Mix 解冻后可能出现些许白色沉淀, 室温放置片刻并上下颠倒, 沉淀即会溶解 请确认沉淀完全溶解, 并充分混匀后使用 产品概述 qpcr 系列 本产品是使用 SYBR Green I 嵌合荧光法进行 qpcr 反应的专用预混液, 其中 Champagne Taq TM DNA Polymerase 为一种新型的抗体法热启动 DNA 聚合酶, 具有特异性强 检测灵敏度高等诸多优点, 配以针对 qpcr 优化的最适 Buffer 以及专利特异性促进因子 Exactor TM, 非常适合于进行高特异性 高灵敏度的 qpcr 反应 本产品中含有特殊的 ROX Passive Reference Dye, 适用于所有 qpcr 仪器, 无需在不同的仪器上调整 ROX 的浓度, 只需在配制反应体系时加入引物和模板即可进行扩增 性能展示卓越的特异性以 HeLa 细胞 cdna 为模板, 使用 ChamQ TM Universal SYBR qpcr Master Mix (Vazyme #Q711) 和 Vazyme #Q311 预混液及市售其它品牌染料法 qpcr 试剂 ( 分别来自 Supplier T R N), 在相同条件下测试 25 个随机挑选的基因, 用以检测扩增特异性 统计结果显示 :Vazyme #Q711 预混液能够完成超过 96% (24/25) 的目标基因检测, 特异性极高 2 ChamQ Universal SYBR qpcr Master Mix * Q (500 rxn/20 μl reaction) ml Q (2,500 rxn / 20 μl reaction) 5 Q * 包含 dntp,mg 2+,Champagne Taq DNA Polymerase,SYBR Green I,Specific ROX Reference Dye 等 操作流程 1. 在 qpcr 管中配制如下混合液 2 ChamQ Universal SYBR qpcr Master Mix Primer1 (10 μm) Primer2 (10 μm) Template DNA/cDNA ddh 2 O 反应体系中各成分的量可根据以下原则自行调整 : 10.0 μl 0.4 μl 0.4 μl x μl To 20.0 μl 一般来说反应体系中引物终浓度为 0.2 μm 即可得到较好的扩增效果 当反应性能比较差时, 可以在终浓度 μm 范围内调整引物浓度 qpcr 灵敏度极高, 建立反应体系时加入模板量的准确程度对最终定量结果会有很大的影响 推荐将模板稀释后加入反应体系中, 这样可以有效提高实验的重复性 如模板类型为未稀释 cdna 原液, 使用体积不应超过 qpcr 反应总体积的 1/10 2. 按下列条件进行 qpcr 反应 Stage 1 Stage 2 Stage 3 预变性 a 循环反应 融解曲线 b c Reps: 1 Reps: 40 Reps: sec 10 sec 30 sec 15 sec 60 sec 15 sec a 该预变性条件适合绝大多数扩增反应, 如模板结构复杂, 可将预变性时间延长至 3 min 以提高预变性效果 b 对于 200 bp 以内的扩增子, 延伸时间最短可设为 10 sec; 超过 200 bp 时, 推荐延伸时间为 30 sec c 仪器类型不同, 融解曲线采集程序不尽相同, 使用仪器默认融解曲线采集程序即可

115 抗体修饰 SYBR 系列产品 ChamQ TM Universal SYBR qpcr Master Mix 全平台通用使用 ChamQ TM Universal SYBR qpcr Master Mix (Vazyme #Q711) 在不同类型的 qpcr 仪 ( 机型 : StepOnePlus QuantStudio TM 3 CFX Connect ) 上扩增 GAPDH 基因, 定量结果优秀 说明 Vazyme #Q711 预混液仪器适用性广, 无需针对不同仪器调整 ROX 浓度 宽广的定量阈图 A 是将 pemt 质粒进行 8 个 10 倍梯度稀释, 图 B 是根据图 A 的 C T 值得出的标准曲线 第 8 个梯度中质粒拷贝数浓度约为 6 copies/4 μl, 使用 ChamQ TM Universal SYBR qpcr Master Mix(Vazyme #Q711) 预混液对各稀释梯度中的 pemt 质粒进行检测, 每孔模板使用量为 4 μl 结果显示,Vazyme #Q711 预混液在宽广的模板量区间内具有优秀的线性关系, 可以检测出个位数拷贝的待测模板, 灵敏度极高 StepOnePlus TM (High ROX) qpcr 系列 QuantStudio TM 3 (Low ROX) CFX Connect (Without ROX) ChamQ TM Universal SYBR qpcr Master Mix 500 rxn (20 μl/rxn) 2,500 rxn (20 μl/rxn) Q Q ,200 5,

116 探针法荧光定量专用预混液 AceQ qpcr Probe Master Mix 高灵敏度探针法定量 PCR 检测试剂盒 卓越的扩增灵敏度 稳健的重复性 基于热启动的 AceTaq DNA Polymerase, 提供完美的扩增性能和灵敏度 重复可靠的定量结果, 满足高水平杂志的数据要求 保存条件 :-20 避光储存 产品概述 qpcr 系列 AceQ qpcr Probe Master Mix 专为高特异性 高灵敏度实时定量 PCR 而设计 预混液含有 AceTaq DNA Polymerase, 配合优化的反应体系, 可以有效抑制非特异性 PCR 扩增, 从而显著提高 PCR 反应的扩增效率, 使定量 PCR 可以在宽广的定量区域内获得良好的线性关系 兼容各类荧光探针 ( 如 TaqMan, TaqMan MGB,Molecular Beacon 等 ), 适合于高特异性的检测体系, 并可用于多重荧光定量 PCR 检测 性能展示优越的扩增性能及检测灵敏度以 HeLa 细胞 cdna 为稀释液, 将 puc19 质粒进行 7 个 10 倍梯度稀释, 第 7 个稀释梯度中质粒拷贝数浓度约为 8 copies/4 μl 使用 AceQ qpcr Probe Master Mix 预混液对各稀释梯度中的 puc19 质粒进行检测, 每孔模板使用量为 4 μl 可见,AceQ qpcr Probe Master Mix 预混液在宽广的模板量区间内具有优秀的线性关系 : 扩增效率 98%,R 2 =0.9991, 可轻松检测出个位数拷贝的待测模板 2 AceQ qpcr Probe Master Mix * 50 ROX Reference Dye 1 50 ROX Reference Dye 2 *. 包含 dntp,mg 2+,AceTaq DNA Polymerase 等 操作流程 1. 在 qpcr 管中配制如下混合液 2 AceQ qpcr Probe Master Mix Primer1 (10 μm) Primer2 (10 μm) TaqMan Probe (10 μm) 50 ROX Reference Dye* Template DNA/cDNA ddh 2 O Q (500 rxn/20 μl reaction) ml 200 μl 200 μl Q (2,500 rxn / 20 μl reaction) 5 Q *. 根据不同 qpcr 机型, 选择添加不同浓度 ROX Reference Dye 或不添加 ROX Reference Dye 反应体系中各成分的量可根据以下原则自行调整 : 10.0 μl 0.4 μl 0.4 μl 0.2 μl 0.4 μl x μl To 20.0 μl 一般来说反应体系中引物终浓度为 0.2 μm 即可得到较好的扩增效果 当反应性能比较差时, 可以在终浓度 μm 范围内调整引物浓度 探针终浓度可以在 50 nm-250 nm 之间调整 qpcr 灵敏度极高, 建立反应体系时加入模板量的准确程度对最终定量结果会有很大的影响 推荐将模板稀释后加入反应体系中, 这样可以有效提高实验的重复性 如模板类型为未稀释 cdna 原液, 使用体积不应超过 qpcr 反应总体积的 1/ 按下列条件进行 qpcr 反应 Stage 1 Stage 2 预变性 a 循环反应 b Reps: 1 Reps: min 10 sec 30 sec a AceTaq DNA Polymerase 需要热激活处理以恢复酶活, 请至少设置 PCR 反应预变性条件为 95 5 min 如果模板的 GC 含量较高, 可将预变性时间延长至 10 min b 延伸时间请根据您使用的 Real-time PCR 仪所需要的数据采集最短时间限制自行调整 : 如使用 ABI 7700 和 7900HT 时至少 30 sec; 使用 ABI 7000 和 7300 时至少 31 sec; 使用 ABI 7500 时至少 34 sec; 使用 ABI StepOnePlus TM 时至少 10 sec AceQ qpcr Probe Master Mix 500 rxn (20 μl/rxn) 2,500 rxn (20 μl/rxn) Q Q ,200 5,

117 探针法荧光定量专用预混液 AceQ U + Probe Master Mix 基于 dutp/heat-labile UDG 防污染探针法定量 PCR 检测试剂盒 卓越的扩增灵敏度 可靠的定量结果 稳健的重复性 基于热启动的 AceTaq DNA Polymerase, 提供完美的扩增性能和灵敏度 引入 Heat-labile UDG 防污染体系, 有效防止 PCR 产物污染 重复可靠的定量结果, 满足高水平杂志的数据要求 保存条件 :-20 避光储存 产品概述 AceQ U + Probe Master Mix 是以 DNA 为模板进行探针法荧光定量 PCR 的专用试剂, 适用于高灵敏度的探针法 qpcr 反应 该试剂在 AceQ qpcr Probe Master Mix 的基础上引入了 dutp/heat-labile UDG 防污染系统 Heat-labile UDG 在室温下即可将含 U 的污染物迅速降解, 完全消除了扩增产物污染对 qpcr 反应的影响 2 AceQ U + Probe Master Mix * 50 ROX Reference Dye 1 50 ROX Reference Dye 2 Q (500 rxn/20 μl reaction) ml 200 μl 200 μl *. 包含 dntp/dutp Mix,Mg 2+,AceTaq DNA Polymerase,Heat-labile UDG 等 Q (2,500 rxn / 20 μl reaction) 5 Q 性能展示高效清除体系中的污染模板向 Vazyme #Q113/Q112 qpcr 体系内分别添加 0 ng/0.004 ng/ 0.04 ng/0.4 ng/4 ng 的含 U 碱基模板, 分别检测 Vazyme #Q113 对于污染核酸的清除效率 ( 横坐标为含 U 碱基模板添加量, 纵坐标为扩增 C T 值 ) 从扩增 C T 值中可以看出,Vazyme #Q113 中 U + 防污染体系可高效清除体系中的污染物, 确保 qpcr 结果真实可靠 操作流程 1. 在 qpcr 管中配制如下混合液 2 AceQ U + Probe Master Mix Primer1 (10 μm) Primer2 (10 μm) TaqMan Probe (10 μm) 50 ROX Reference Dye * Template DNA/cDNA ddh 2 O *. 根据不同 qpcr 机型, 选择添加不同浓度 ROX Reference Dye 或不添加 ROX Reference Dye 反应体系中各成分的量可根据以下原则自行调整 : 10.0 μl 0.4 μl 0.4 μl 0.2 μl 0.4 μl x μl To 20.0 μl 一般来说反应体系中引物终浓度为 0.2 μm 即可得到较好的扩增效果 当反应性能比较差时, 可以在终浓度 μm 范围内调整引物浓度 探针终浓度可以在 50 nm-250 nm 之间调整 qpcr 灵敏度极高, 建立反应体系时加入模板量的准确程度对最终定量结果会有很大的影响 推荐将模板稀释后加入反应体系中, 这样可以有效提高实验的重复性 如模板类型为未稀释 cdna 原液, 使用体积不应超过 qpcr 反应总体积的 1/10 qpcr 系列 2. 按下列条件进行 qpcr 反应 Stage 1 Stage 2 Stage 3 污染消化 预变性 a 循环反应 b Reps: 1 Reps: 1 Reps: min 5 min 10 sec 30 sec a AceTaq DNA Polymerase 需要热激活处理以恢复酶活, 请至少设置 PCR 反应预变性条件为 95 5 min 如果模板的 GC 含量较高, 可将预变性时间延长至 10 min b 延伸时间请根据使用的 Real-time PCR 仪所需要的数据采集最短时间限制自行调整 : 如使用 ABI 7700 和 7900HT 时至少 30 sec; 使用 ABI 7000 和 7300 时至少 31 sec; 使用 ABI 7500 时至 34 sec; 使用 ABI StepOnePlus TM 时至少 10 sec AceQ U + Probe Master Mix 500 rxn (20 μl/rxn) 2,500 rxn (20 μl/rxn) Q Q ,650 7,

118 探针法荧光定量专用预混液 AceQ Universal U + Probe Master Mix V2 通用型基于 Heat-labile UDG 防污染的探针法定量 PCR 检测试剂盒 卓越的扩增灵敏度 优秀的线性关系 dutp/udg 防污染系统 广泛的平台适用性 严谨的化学法热启动酶 AceTaq DNA Polymerase, 配合精心优化的缓冲体系, 可以检测出低至单拷贝模板在宽广的模板区间内具有良好的线性关系, 扩增效率高达 99% 引入 Heat-labile UDG 防污染体系, 在室温下即可发挥作用, 去伪存真, 确保结果真实可信特殊的 ROX 参比染料, 适用于所有 qpcr 仪, 无需在不同的 qpcr 仪器上调整 ROX 浓度 保存条件 :-20 避光储存 产品概述 qpcr 系列 AceQ Universal U + Probe Master Mix V2 采用严谨的化学修饰 AceTaq DNA Polymerase, 配合精心优化的缓冲体系, 能够极大程度提高探针法定量的灵敏度 AceQ Universal U + Probe Master Mix V2 添加了 dutp/heat-labile UDG 防污染系统, 降低因探针法的高灵敏度造成的假阳性, 最大限度保证了结果的真实性 同时,AceQ Universal U + Probe Master Mix V2 还采用了特殊的 ROX Passive Reference Dye, 适用于所有的 qpcr 仪, 无需调整 ROX 浓度, 使用方便 性能展示优秀的线性关系以质粒 Puc57-Kan 为模板, 进行 7 个 10 倍梯度稀释, 第 7 个稀释梯度中质粒拷贝数浓度约为 8 copies/4 μl 使用 AceQ Universal U + Probe Master Mix V2(Vazyme #Q513) 对各稀释梯度中的 Puc57-Kan 进行检测, 每孔模板使用量为 4 μl 可以看到,Vazyme #Q513 预混液在宽广的模板量区间内具有优秀的线性关系, 可以轻松检测出个位数拷贝的待测模板 2 AceQ Universal U + Probe Master Mix V2 * 操作流程 1. 在 qpcr 管中配制如下混合液 2 AceQ Universal U + Probe Master Mix V2 Primer1 (10 μm) Primer2 (10 μm) TaqMan Probe (10 μm) Template DNA/cDNA ddh 2 O 反应体系中各成分的量可根据以下原则自行调整 : 10.0 μl 0.4 μl 0.4 μl 0.2 μl x μl To 20.0 μl 一般来说反应体系中引物终浓度为 0.2 μm 即可得到较好的扩增效果 当反应性能比较差时, 可以在终浓度 μm 范围内调整引物浓度 探针终浓度可以在 50 nm-250 nm 之间调整 qpcr 灵敏度极高, 建立反应体系时加入模板量的准确程度对最终定量结果会有很大的影响 推荐将模板稀释后加入反应体系中, 这样可以有效提高实验的重复性 如模板类型为未稀释 cdna 原液, 使用体积不应超过 qpcr 反应总体积的 1/10 2. 按下列条件进行 qpcr 反应 Q (500 rxn/20 μl reaction) ml Q (2,500 rxn / 20 μl reaction) 5 Q a. 包含 dntp/dutp Mix, Mg 2+, AceTaq DNA Polymerase, Heat-labile UDG, Specific ROX Reference Dye Stage 1 Stage 2 Stage 3 污染消化 预变性 a 循环反应 b Reps: 1 Reps: 1 Reps: min 5 min 10 sec 30 sec a AceTaq DNA Polymerase 需要热激活处理以恢复酶活, 请至少设置 PCR 反应预变性条件为 95 5 min 如果模板的 GC 含量较高, 可将预变性时间延长至 10 min b 延伸时间请根据您使用的 Real-time PCR 仪所需要的数据采集最短时间限制自行调整 : 如使用 ABI 7700 和 7900HT 时至少 30 sec; 使用 ABI 7000 和 7300 时至少 31 sec; 使用 ABI 7500 时至 34 sec; 使用 ABI StepOnePlus TM 时至少 10 sec

119 探针法荧光定量专用预混液 AceQ Universal U + Probe Master Mix V2 dutp/heat-labile UDG 防污染系统 AceQ Universal U + Probe Master Mix V2 (Vazyme #Q513) 引入 dutp/ Heat-labile UDG 防污染系统, 室温条件下即可有效清除体系中存在的污染物, 同时当反应体系升温至 时,Heat-labile UDG 迅速彻底失活, 可维持 cdna 的完整性, 确保检测灵敏度不受影响 在反应体系内分别添加 4 /40 /400 pg 的含 U 模板, 测试 Vazyme #Q513 预混液对污染模板的清除效率 结果可见,Vazyme #Q513 预混液对污染模板的清除效率高达 99.6% 以上, 可有效保证实验结果的准确度 广泛的平台适用性 以 HeLa 细胞 cdna 为模板, 进行 3 个 10 倍梯度稀释, 使用 AceQ Universal U + Probe Master Mix V2 (Vazyme #Q513) 在不同类型 qpcr 仪 ( 机型 : StepOnePlus TM LightCycler 96 QuantStudio TM 6) 上扩增不同稀释梯度 cdna 的 GAPDH 基因, 定量结果优秀 说明 Vazyme #Q513 预混液仪器适用性广, 无需针对不同仪器调整 ROX 浓度 qpcr 系列 AceQ Universal U + Probe Master Mix V2 500 rxn (20 μl/rxn) 2,500 rxn (20 μl/rxn) Q Q ,650 7,

120 一步法荧光定量专用预混液 HiScript II One Step qrt-pcr SYBR Green Kit 以 RNA 为模板的一步法染料 qrt-pcr 试剂盒 卓越的特异性 超高的检测灵敏度 特殊的添加剂成分, 最大程度抑制引物二聚体的产生, 定量结果更准确 兼顾高扩增效率, 可检测低至 1 pg 的总 RNA 模板 保存条件 :-20 避光储存 产品概述 qpcr 系列 HiScript II One Step qrt-pcr SYBR Green Kit 是使用 SYBR Green I 嵌合荧光法, 专为以 RNA 为模板 ( 如 RNA 病毒 ) 的定量 PCR 检测而设计 使用基因特异引物 (GSP), 逆转录和 PCR 反应在一管内完成, 不需要额外的开管 / 移液操作, 大大提高了检测通量, 并降低了污染的风险 整合 HiScript II Reverse Transcriptase 以及 Champagne Taq TM DNA Polymerase 的优越性能, 配合经过优化的缓冲体系, 检测灵敏度可达到 1 pg 总 RNA 缓冲液中加入的专利特异性增强因子, 可以有效减少引物二聚体的形成, 提高反应特异性 RNase-free ddh 2 O 2 One Step SYBR Green Mix a One Step SYBR Green Enzyme Mix b 50 ROX Reference Dye 1 50 ROX Reference Dye 2 a. 包含 dntp Mix, Mg 2+, SYBR Green I 等 Q (250 rxn/20 μl reaction) ml ml b. 包含 HiScript Ⅱ Reverse Transcriptase RNase inhibitor 以及 Champagne Taq DNA Polymerase 操作流程 1. 在 RNase-free 离心管中配制如下混合液 RNase-free ddh 2 O 2 One Step SYBR Green Mix One Step SYBR Green Enzyme Mix 50 ROX Reference Dye * Gene Specific Primer Forward (10 μm) Gene Specific Primer Reverse (10 μm) 模板 RNA 250 μl 100 μl 100 μl To 20.0 μl 10.0 μl 1.0 μl 0.4 μl 0.4 μl 0.4 μl Total RNA: 1 pg-1 μg *. 根据不同 qpcr 机型, 选择添加不同浓度 ROX Reference Dye 或不添加 ROX Reference Dye 注 : 反应体系中各成分的量可根据以下原则自行调整 : 一般来说反应体系中引物终浓度为 0.2 μm 即可得到较好的扩增效果 当反应性能比较差时, 可以在 μm 范围内调整引物浓度 qpcr 灵敏度极高, 建立反应体系时加入模板量的准确程度对最终定量结果会有很大的影响 因此推荐您将模板稀释后 ( 如稀释至 2-5 μl/ 样本 ) 加入反应体系中, 这样可以有效提高实验的重复性 扩增产物长度请选择在 100 bp-500 bp 范围内, 尤其推荐 100 bp-200 bp 之内 2. 按下列条件进行 One Step qrt-pcr 反应 Stage 1 Stage 2 Stage 3 Stage 4 逆转录预变性循环反应融解曲线 Reps: 1 Reps: 1 Reps: 40 Reps: 1 50 a default 3 min b 5 min 10 sec 30 sec c a 对于具有复杂二级结构或高 GC 区域的模板, 将逆转录温度提高到 55, 有助于提高扩增效率和灵敏度 b 逆转录时间可延长至 15 min, 有助于提高 cdna 产量 c 延伸时间请根据您使用的 Real Time PCR 仪所需要的数据采集最短时间限制自行调整 : 如使用 ABI 7700 和 7900HT 时至少 30 秒 ; 使用 ABI 7000 和 7300 时至少 31 秒 ; 使用 ABI 7500 时至少 34 秒

121 一步法荧光定量专用预混液 HiScript II One Step qrt-pcr SYBR Green Kit 性能展示 以 HeLa 细胞总 RNA 为模板, 使用 HiScript II One Step qrt-pcr SYBR Green Kit 及市售其他品牌试剂同时扩增 B2M (A) 和 GUSB (B) 基因 与市售其他 品牌试剂相比,HiScript II One Step qrt-pcr SYBR Green Kit 扩增效率更高, 具有更小的 C T 值, 且在低模板量下几乎没有引物二聚体产生 A qpcr 系列 B HiScript II One Step qrt-pcr SYBR Green Kit 250 rxn (20 μl/rxn) Q ,

122 一步法荧光定量专用预混液 HiScript II One Step qrt-pcr Probe Kit 以 RNA 为模板的一步法探针 qrt-pcr 试剂盒 超高的检测灵敏度 支持多重检测 可检测到个位数拷贝的模板或 0.1 pg 总 RNA 支持多重探针定量 保存条件 :-20 避光储存 产品概述 qpcr 系列 低拷贝数模板或弱阳性样本的检出率仍然是临床诊断的挑战之一 HiScript II One Step qrt-pcr Probe Kit 含有最佳比例的 HiScript II Reverse Transcriptase 和 Champagne Taq TM DNA Polymerase, 以及充分优化的缓冲体系, 无论是总 RNA, 体外转录 RNA, 或者是病毒 RNA,HiScript II One Step qrt-pcr Probe Kit 都具有极高的灵敏度, 提供稳定可靠的扩增表现 无需过多优化, 亦可实现多重扩增 RNase-free ddh 2 O 2 One Step Q Probe Mix a One Step Q Probe Enzyme Mix b 50 ROX Reference Dye 1 50 ROX Reference Dye 2 a. 包含 dntp Mix,Mg 2+ Q (250 rxn/20 μl reaction) ml ml b. 包含 HiScript II Reverse Transcriptase RNase inhibitor 以及 Champagne Taq DNA Polymerase 操作流程 1. 在 RNase-free 离心管中配制如下混合液 RNase-free ddh 2 O 2 One Step Q Probe Mix One Step Q Probe Enzyme Mix 50 ROX Reference Dye * Gene Specific Primer Forward (10 μm) Gene Specific Primer Reverse (10 μm) TaqMan Probe (10 μm) 模板 RNA 250 μl 100 μl 100 μl To 20.0 μl 10.0 μl 1.0 μl 0.4 μl 0.4 μl 0.4 μl 0.2 μl Total RNA: 1 pg-1 μg *. 根据不同 qpcr 机型, 选择添加不同浓度 ROX Reference Dye 或不添加 ROX Reference Dye 反应体系中各成分的量可根据以下原则自行调整 : 一般来说反应体系中引物终浓度为 0.2 μm 即可得到较好的扩增效果 当反应性能比较差时, 可以在 μm 范围内调整引物浓度 探针终浓度可以在 50 nm-250 nm 之间调整 qpcr 灵敏度极高, 建立反应体系时加入模板量的准确程度对最终定量结果会有很大的影响 推荐将模板稀释后 ( 如稀释至 2-5 μl/ 样本 ) 加入反应体系中, 这样可以有效提高实验的重复性 扩增产物长度请选择在 80 bp-200 bp 范围内 2. 按下列条件进行 One Step qrt-pcr 反应 标准程序 ( 可获得最高的扩增灵敏度 ) Stage 1 逆转录 Reps: 1 Stage 2 预变性 Reps: 1 Stage 3 循环反应 Reps: a min 30 sec 10 sec 30 sec b 快速程序 ( 可满足大部分应用 ) Stage 1 逆转录 Reps: 1 50 a 5 min Stage 2 预变性 Reps: sec Stage 3 循环反应 Reps: sec sec c a 对于具有复杂二级结构或高 GC 区域的模板, 将逆转录温度提高到 55, 有助于提高扩增效率和灵敏度 b 延伸时间请根据您使用的 Real-time PCR 仪所需要的数据采集最短时间限制自行调整 : 如使用 ABI 7700 和 7900HT 时至少 30 秒 ; 使用 ABI 7000 和 7300 时至少 31 秒 ; 使用 ABI 7500 时至少 34 秒 c 仅部分 Real-time PCR 仪支持快速扩增循环 ( 如 ABI QuantStudio 6), 请与仪器供应商确认后进行相关实验

123 一步法荧光定量专用预混液 HiScript II One Step qrt-pcr Probe Kit 性能展示 A. Total RNA B. 体外转录 RNA C. 尿囊液病毒 RNA qpcr 系列 A. 以 1 ng-0.1 pg HeLa 细胞总 RNA 为模板, 扩增 RFLPO 基因, 线性范围达 5 个数量级, 灵敏度可达 0.1 pg B. 以 拷贝体外转录的 RNA 为模板, 扩增 HCV 基因, 线性范围达 7 个数量级, 灵敏度可达 10 拷贝 C. 以 稀释度的鸡胚尿囊液病毒 RNA 为模板, 扩增新城疫病毒特异基因, 可稳定检测到 10-7 稀释度 以鸡胚尿囊液病毒 RNA 为模板, 使用 HiScript II One Step qrt-pcr Probe Kit 同时扩增禽流感 F 和 M 基因 荧光通道为 FAM (M 基因 ) 和 HEX (F 基因 ) 可见, 双重 PCR 体系中,F 和 M 基因的扩增效率和灵敏度均与单重 PCR 体系中基本一致 HiScript II One Step qrt-pcr Probe Kit 250 rxn (20 μl/rxn) Q ,

124 一步法荧光定量专用预混液 HiScript II U + One Step qrt-pcr Probe Kit 基于 dutp/heat-labile UDG 防污染系统的一步探针 qrt-pcr 试剂盒 UDG 防污染系统 超高的检测灵敏度 支持多重检测产品概述 Heat-labile UDG 室温下迅速降解含 U 的双链 DNA 污染物,Heat-labile UDG 在 迅速彻底失活, 维持 cdna 的完整性可检测到个位数拷贝的模板或 0.1 pg 总 RNA 支持多重探针定量保存条件 :-20 避光储存 qpcr 系列 dutp/udg 防污染系统是一种非常有效的控制 PCR 扩增产物污染的手段 常用的 E. coli UDG 在通常的逆转录温度 (42-55 ) 下仍具有较高的活性, 会降解 cdna, 导致 One Step RT-PCR/qPCR 的检测灵敏度降低 HiScript II U + One Step qrt-pcr Probe Kit 含有比例优化的 dutp/dntp Mix, 并加入了来源于嗜冷海洋细菌的 Heat-labile UDG Heat-labile UDG 在室温下具有很高的活性, 在反应体系混合过程中即可充分降解含 U 的双链 DNA 当反应体系升温至 (HiScript II Reverse Transcriptase 的最适反应温度 ) 时,Heatlabile UDG 迅速彻底失活, 维持 cdna 的完整性, 保证检测灵敏度不受影响 性能展示 RNase-free ddh 2 O 2 One Step U + Mix a One Step U + Enzyme Mix b 50 ROX Reference Dye 1 50 ROX Reference Dye 2 a. 包含 dntp/dutp Mix,Mg 2+ Q (250 rxn/20 μl reaction) ml ml 250 μl 100 μl 100 μl b. 包含 HiScript II Reverse Transcriptase RNase inhibitor Heat-labile UDG 以及 Champagne Taq DNA Polymerase 操作流程 1. 在 RNase-free 离心管中配制如下混合液 RNase-free ddh 2 O 2 One Step U + Mix One Step U + Enzyme Mix 50 ROX Reference Dye* Gene Specific Primer Forward (10 μm) Gene Specific Primer Reverse (10 μm) TaqMan Probe (10 μm) 模板 RNA To 20.0 μl 10.0 μl 1.0 μl 0.4 μl 0.4 μl 0.4 μl 0.2 μl Total RNA: 1 pg-1 μg *. 根据不同 qpcr 机型, 选择添加不同浓度 ROX Reference Dye 或不添加 ROX Reference Dye RNA du contained dsdna Heat-labile UDG HiScript II Reverse Transcriptase Champagne TM Taq DNA Polymerase HiScript II U + One Step qrt-pcr Probe Kit 工作原理以 HeLa 细胞总 RNA 为模板, 用 HiScript II U + One Step qrt-pcr Probe Kit 扩增 RFLPO 基因 由图可见, 优化的 dutp 浓度以及 Heat-labile UDG 使得扩增效率和灵敏度不会受到影响 相比之下,E.coli 来源的 UDG 会严重影响 One Step RT-qPCR 的检测灵敏度 反应体系中各成分的量可根据以下原则自行调整 : 一般来说反应体系中引物终浓度为 0.2 μm 即可得到较好的扩增效果 当反应性能比较差时, 可以在 μm 范围内调整引物浓度 探针终浓度可以在 50 nm-250 nm 之间调整 qpcr 灵敏度极高, 建立反应体系时加入模板量的准确程度对最终定量结果会有很大的影响 推荐将模板稀释后 ( 如稀释至 2-5 μl/ 样本 ) 加入反应体系中, 这样可以有效提高实验的重复性 扩增产物长度请选择在 80 bp-200 bp 范围内 2. 按下列条件进行 One Step qrt-pcr 反应 标准程序 ( 可获得最高的扩增灵敏度 ) Stage 1 Stage 2 Stage 3 逆转录 预变性 循环反应 Reps: 1 Reps: 1 Reps: a min 30 sec 10 sec 30 sec b HiScript II One Step qrt-pcr Probe Kit R 2 : Eff: 97.0% HiScript II One Step qrt-pcr Probe Kit ( 将 dttp 替换为 dutp) R 2 : Eff: 93.1% HiScript II U + One Step qrt-pcr Probe Kit R 2 : Eff: 98.8% HiScript II One Step qrt-pcr Probe Kit + E. coli UDG R 2 : Eff: 91.3% 快速程序 ( 可满足大部分应用 ) Stage 1 逆转录 Reps: 1 50 a 5 min Stage 2 预变性 Reps: sec Stage 3 循环反应 Reps: sec sec c a 对于具有复杂二级结构或高 GC 区域的模板, 将逆转录温度提高到 55, 有助于提高扩增效率和灵敏度 b 延伸时间请根据您使用的 Real-time PCR 仪所需要的数据采集最短时间限制自行调整 : 如使用 ABI 7700 和 7900HT 时至少 30 秒 ; 使用 ABI 7000 和 7300 时至少 31 秒 ; 使用 ABI 7500 时至少 34 秒 c 仅部分 Real-time PCR 仪支持快速扩增循环 ( 如 ABI QuantStudio 6), 请与仪器供应商确认后进行相关实验 HiScript II U + One Step qrt-pcr Probe Kit 250 rxn (20 μl/rxn) Q ,

125 mirna 染料法定量专用预混液 mirna Universal SYBR qpcr Master Mix mirna 染料法定量专用预混液 超高的扩增特异性 优越的反应体系 宽广的平台兼容 基于化学法热启动的 AceTaq DNA Polymerase,95 C 前完全封闭酶活, 配以专利特异性促进因子 Exactor TM, 扩增特异性更高最适的 Buffer 及浓度, 更适用于 microrna qpcr 实验特殊的 ROX 参比染料, 适用于所有的 qpcr 仪, 无需在不同的仪器上调整 ROX 浓度保存条件 :-20 避光储存 产品概述 本产品是使用 SYBR Green I 嵌合荧光法进行 mirna 定量反应的专用预混液 由于 mirna 序列短, 且同一家族的 mirna 序列往往高度相近, 故在定量时对特异性要求极高 本品基于化学法热启动的 AceTaq DNA Polymerase, 配以优化的 Buffer, 能够极大地减少非特异性扩增 ; 同时, 特殊的 ROX Reference Dye, 使得预混液适用于所有 qpcr 仪器, 无需在不同的仪器上调整 ROX 浓度, 只需在配制反应体系时加入引物和模板即可进行扩增 性能展示超高的扩增特异性 microrna 序列短, 同一家族不同成员序列极其相似, 有些仅有单个碱基差别, 因此特异性对 microrna 定量至关重要 mirna Universal SYBR qpcr Master Mix 以化学法热启动 AceTaq DNA Polymerase 为核心酶, 配以优化的 Buffer, 能够最大限度区分 microrna 同一家族不同成员间单个碱基的差异, 实现高特异性定量 2 mirna Universal SYBR qpcr Master Mix a mq Primer R (10 μm) b 反应体系中各成分的量可根据以下原则自行调整 : MQ (500 rxn / 20 μl reaction) ml a. 包含 dntp,mg 2+,AceTaq DNA Polymerase,SYBR Green I,Specific ROX Reference Dye 等 b. 序列为 AGTGCAGGGTCCGAGGTATT 操作流程 1. 在 qpcr 管中配制如下混合液 2 mirna Universal SYBR qpcr Master Mix Specific Primer (10 μm) mq Primer R (10 μm)* Template DNA/cDNA ddh 2 O MQ (125 rxn / 20 μl reaction) 1.25 ml 70 μl 250 μl 10.0 μl 0.4 μl 0.4 μl x μl To 20.0 μl * mq Primer R 与本公司 mirna Design 软件设计的逆转录引物配套, 所用茎环序列为 GTCGTATCCAGTG CAGGGTCCGAGGTATTCGCACTGGATACGAC; 当使用不同的茎环序列时, 需自行设计合成 qpcr 逆向引物 一般来说反应体系中引物终浓度为 0.2 μm 即可得到较好的扩增效果 当反应性能比较差时, 可以在终浓度 μm 范围内调整引物浓度 qpcr 灵敏度极高, 建立反应体系时加入模板量的准确程度对最终定量结果会有很大的影响 推荐将模板稀释后加入反应体系中, 这样可以有效提高实验的重复性 如模板类型为未稀释 cdna 原液, 使用体积不应超过 qpcr 反应总体积的 1/10 qpcr 系列 2. 按下列条件进行 qpcr 反应 Stage 1 Stage 2 Stage 3 预变性 循环反应 融解曲线 * Reps: 1 Reps: 40 Reps: min 10 sec 30 sec 15 sec 60 sec 15 sec * 仪器类型不同, 融解曲线采集程序不尽相同, 使用仪器默认融解曲线采集程序即可 let7 家族成员序列极其相似, 红色标出为差异碱基 以合成的不同 microrna 为模板, 使用各成员引物进行交叉扩增 可见, 当引物与模板完全匹配时, 定量结果为 100%; 不完全匹配时, 大多无法扩增

126 mirna 染料法定量专用预混液 mirna Universal SYBR qpcr Master Mix 卓越的扩增灵敏度 以 HeLa 细胞 Total RNA 为模板逆转录, 扩增 hsa-mir-15 hsa-mir-29 hsa-mir-155 hsa-mir-200 基因 ; 以小鼠肝脏组织 Total RNA 样本进行逆转录, 扩增 mmu-mir-16 mmu-mir-20 mmu-mir-21 基因 结果显示, 与同类产品相比,miRNA 1st Strand cdna Synthesis Kit (by stem-loop) (Vazyme #MR101) 配套 mirna Universal SYBR qpcr Master Mix (Vazyme #MQ101) 的反应体系, 均有优异的表现 宽广的平台兼容性 使用 mirna Universal SYBR qpcr Master Mix (Vazyme #MQ101) 在不同 qpcr 仪上扩增同一基因, 在 StepOnePlus QuantStudio TM 3 CFX Connect 均具有优秀的定量结果, 说明 Vazyme #MQ101 仪器适用性广, 无需针对不同仪器调整 ROX 浓度 qpcr 系列 mirna Universal SYBR qpcr Master Mix 125 rxn (20 μl/rxn) 500 rxn (20 μl/rxn) MQ MQ ,

127 Vazyme 基础科研试剂 提取纯化系列 核酸提取 RNA Keeper Tissue Stabilizer RNA Keeper-ICE Tissue Transition Buffer RNA isolater Total RNA Extraction Reagent Bacteria RNA Plus Reagent Bacteria RNA Extraction Kit FastPure TM Cell/Tissue Total RNA Isolation Mini Kit FastPure TM Plant Total RNA Isolation Kit (Polysaccharides&Polyphenolics-rich) MiPure Cell/Tissue mirna Kit FastPure TM Blood DNA Isolation Mini Kit FastPure TM Cell/Tissue DNA Isolation Mini Kit Lysozyme FastPure TM Bacteria DNA Isolation Mini Kit FastPure TM FFPE DNA Isolation Kit FastPure TM Plasmid Mini Kit FastPure TM EndoFree Plasmid Maxi Kit FastPure TM Gel DNA Extraction Mini Kit 外泌体提取 VEX TM Exosome Isolation Reagent (from cell culture media) VEX TM Exosome Isolation Reagent (from serum) VEX TM Exosome Isolation Reagent (from plasma)

128 核酸提取 技术背景 细胞内的核酸包括 DNA 与 RNA 两种分子, 均与蛋白质结合成核蛋白 (nucleoprotein) 其中真核生物的 DNA 又有染色体 DNA 与细胞器 DNA 之分 前者位于细胞核内, 约占 95%, 为双链线性分子 ; 后者存在于线粒体或叶绿体等细胞器内, 约占 5%, 为双链环状分子 除此之外, 在原核生物中还有双链环状的质粒 DNA; 在非细胞型的病毒颗粒内,DNA 的存在形式多种多样, 有双链环状, 单链环状, 双链线状和单链线状之分 RNA 是以 DNA 的一条链为模板, 通过碱基互补配对原则, 转录而形成的一条单链, 主要功能是实现遗传信息在蛋白质上的表达, 是遗传信息向表型转化过程中的桥梁 在此过程中,tRNA 携带与三联体密码子对应的氨基酸残基, 与正在进行翻译的 mrna 结合, 而后 rrna 将各个氨基酸残基通过肽键连接成肽链进而构成蛋白质分子 相对来讲,RNA 分子比 DNA 分子要小很多, 其种类, 大小结构和功能均更加多样化 大多数的分子生物学实验都是从核酸的分离纯化开始, 进而展开下游的实验, 如 RT-PCR qpcr 及酶促反应等等 核酸的纯度 产量 质量都会直接影响下游实验 因此, 有效地去除各种杂质残留和污染, 并保证核酸的完整性, 是完成下游实验最基本的条件, 这也说明了核酸的分离纯化在分子生物学中的重要地位 核酸分离与纯化的方法很多, 应根据具体生物材料的性质与起始量, 以及分离核酸的性质与用途而采取不同的方案 目前, 常见的核酸抽提纯化方法主要三类 : 溶液型的抽提方法 ( 酚氯仿抽提 盐析等 ) 柱式抽提方法 ( 离子交换 硅胶柱等 ) 磁珠纯化方法 方法工作原理优点缺点 提取纯化系列 酚氯仿抽提 硅胶柱法抽提 硅胶柱法抽提 如 :Trizol 法 核酸存在于上层水相中, 吸取上层水相加入醇类即可实现核酸的富集沉淀, 再通过洗涤 干燥 溶解等步骤即可得到核酸 一般情况下极性较大的物质易被硅胶吸附, 极性较弱的物质不易被硅胶吸附, 进而达到核酸分离提纯的目的 通过纳米磁珠材料的表面预先包被二氧化硅或正离子等材料, 使得磁珠在一定的条件下可以选择性的吸附核酸, 从而起到分离纯化的目的 经济 实惠, 整个过程不需要特殊的设备, 并且均为常规试剂 将核酸的分离纯化变成简单的过滤操作 性价比高, 毒性小 无离心操作步骤, 在磁场中即能够实现分离纯化 在操作过程中会接触到过多的有害物质, 操作时间较长成本较高成本最高 选购指南 分类系列适用范围产品名货号页码 血液 FastPure TM Blood DNA Isolation Mini Kit DC101 P137 细胞 / 组织 FastPure TM Cell/Tissue DNA Isolation Mini Kit DC102 P138 柱式 DNA 提取 细菌 FastPure TM Bacteria DNA Isolation Mini Kit DC103 P140 DNA 试剂盒分离纯化 溶菌酶 Lysozyme DE103 P139 FFPE FastPure TM FFPE DNA Isolation Kit DC105 P141 质粒 DNA 提取 质粒小提 FastPure TM Plasmid Mini Kit DC201 P142 质粒大提 FastPure TM EndoFree Plasmid Maxi Kit DC202 P143 产物 DNA 回收胶回收 /DNA 纯化 FastPure TM Gel DNA Extraction Mini Kit DC301 P144 组织保存 新鲜组织 RNA 保存剂 解冻冷冻组织 RNA 保存剂 RNA Keeper Tissue Stabilizer R501 P129 RNA Keeper-ICE Tissue Transition Buffer R502 P130 RNA 试剂盒分离纯化 传统总 RNA 提取 柱式 RNA 抽提 Toral RNA RNA isolater Total RNA Extraction Reagent R401 P131 细菌裂解液 Bacteria RNA Plus Reagent R402 P132 细菌 Toral RNA Bacteria RNA Extraction Kit R403 P133 细胞 / 组织 Total RNA FastPure TM Cell/Tissue Total RNA Isolation Mini Kit RC101/RC111 P134 细胞 / 组织 mirna MiPure Cell/Tissue mirna Kit RC201 P136 植物 Total RNA FastPure TM Plant Total RNA Isolation Kit(Polysaccharides&Polyphenolics-rich) RC401 P

129 核酸提取 RNA Keeper Tissue Stabilizer 用于保护新鲜组织 RNA 完整性的保存剂 样本无需液氮速冻 快速渗透到组织中, 稳定并保护 RNA 不被降解 可长期保存组织样本 保存条件 : 室温 产品概述 RNA Keeper Tissue Stabilizer 是一种无毒的溶液, 可迅速渗入组织内部, 灭活内源 RNase, 立即稳定并保护 RNA 的完整性 新鲜的组织样本无需液氮速冻, 只要浸入 RNA Keeper Tissue Stabilizer 中, 即可在 37 保存 1 天, 室温保存 1 周,4 保存 4 周或在 -20 /-80 长期保存, 且反复冻融不会显著影响 RNA 的完整性 RNA Keeper Tissue Stabilizer 中存放的样本可直接使用 RNA isolater 总 RNA 提取试剂 (Vazyme #R401) 或离心柱法 (Vazyme #RC101,Vazyme #RC111) 提取 RNA RNA Keeper Tissue Stabilizer 可用于脑 心脏 肝脏 胰脏 肾脏 脾脏 肌肉等软性组织的保存, 不适用于表面有蜡质或硬壳类的生物体样本保存 性能展示 37 1 day 25 1 week 4 4 weeks R RNA Keeper Tissue Stabilizer 操作流程 1 样品处理 : 1 动物组织 : 把动物组织切成 0.5 cm 左右见方的组织块, 加入 5 倍体积的 RNA Keeper 2 培养细胞 白细胞 : 按照标准实验操作方法收集细胞, 用 PBS 清洗后加入 5~10 倍体积的 RNA Keeper 3 酵母 : 收集大约 10 8 个细胞 (12,000 g,2 min), 弃上清 加入 0.5 ml~1 ml 的 RNA Keeper 长期保存时应将 酵母细胞置于 RNA Keeper 中, 室温或 4 放置 1 h, 然后离心收集细胞 (12,000 g,5 min), 弃上清, 再置于 -80 保存 2 样品保存 : 100 ml 样品一般可在 4 稳定保存 4 周 若要在 -20 /-80 长期保存, 需要将样品浸入 RNA Keeper 后,4 放置过夜, 使溶液充分渗入到组织中后, 再转移至 -20 /-80 提取纯化系列 将小鼠肝脏组织 (1) 和脾脏组织 (2) 保存在 RNA Keeper 中, 分别在 37 放置 1 天, 室温放置 1 周,4 放置 4 周后, 用 RNA isolater (Vazyme #R401) 提取总 RNA 电泳结果表明,28S 18S 5S 条带均清晰可见, 说明 RNA 具有很好的完整性,RNA Keeper Tissue Stasilizer 可有效保证样本中 RNA 不被降解且样本可在 RNA Keeper Tissue Stasilizer 中稳定储存 3 RNA 提取 1 除去 RNA Keeper: 组织块可以直接用灭菌镊从 RNA Keeper 中取出 ; 细胞应先离心 (>5,000 g,5 min), 收集细胞沉淀 由于 RNA Keeper 密度较大, 此时需要使用大于普通介质的离心力 2 组织样品可用灭菌镊将多余的 RNA Keeper 挤掉, 并用吸水纸轻轻吸掉表面的液体 ; 立即置于裂解液中匀浆 3 使用各种常见的 RNA 抽提试剂盒提取 RNA RNA Keeper Tissue Stabilizer 100 ml R

130 核酸提取 RNA Keeper-ICE Tissue Transition Buffer 用于解冻冰冻组织的 RNA 保存剂 像处理新鲜组织一样处理冰冻组织, 无需液氮研磨 可在室温下对组织进行切割和称重 保存条件 : 室温 产品概述 RNA Keeper-ICE 是一种新型试剂, 能使冰冻组织解冻并转变到易于匀浆方法处理的状态, 从而提取高质量的 RNA 当浸没在 RNA Keeper-ICE 中的组织从坚硬的冰冻状态变柔软的过程中, 该溶液可渗入组织, 使 RNase 失活 组织一旦经 RNA Keeper-ICE 溶液处理, 就能在室温下操作而不用担心 RNA 降解 样品可在常温下称重, 切割, 或者进行多种实验而不影响 RNA 质量 R RNA Keeper-ICE Tissue Transition Buffer 100 ml 操作流程 1 将 RNA Keeper-ICE 在 -70 或 -80 预冷 性能展示 2 样品保存 : 1 动物组织 : 按 100 mg 组织比不小于 1 ml RNA Keeper-ICE 的比例, 将冰冻组织浸没于预冷的 RNA Keeper-ICE 中 注意, 组织块的厚度应不超过 0.5 cm, 否则会影响 RNA Keeper-ICE 的渗透效率, 导致 RNA 稳定效果变差 提取纯化系列 小鼠肝脏冰冻组织经过 RNA Keeper-ICE 解冻后研磨, 提取的 RNA 进行琼脂糖凝胶电泳 电泳结果表明, 28S,18S,5S 均清晰可见, 说明 RNA 具有良好的完整性 RNA Keeper-ICE 可有效保证 RNA 完整度的同时对冰冻组织进行解冻 2 培养细胞 白细胞 : 按照标准实验操作方法收集细胞, 用 PBS 清洗后加入至少 10 倍体积 RNA Keeper-ICE, 盖紧管盖, 上 下颠倒数次 此时沉淀是否被完全悬浮对实验无影响 3 将浸没于 RNA Keeper-ICE 的组织转移至 -20 存放 至少 16 h 后, 组织即可进行匀浆 ; 若不立即匀浆, 组织可继续在 -20 稳定存放 6 个月 这个过程中, 组织可从溶液中取 出, 在室温进行切割 称重等操作 ( 注意在室温暴露的时间不要超过 30 min) 之后继续 浸没在 RNA Keeper-ICE 中保存 4 RNA 提取 将组织取出, 用镊子轻轻挤掉多余的 RNA Keeper-ICE 溶液, 置于裂解液中, 立刻匀浆 如果是细胞样品,10000 g, 4 离心 1 min, 弃上清, 加入裂解液 RNA Keeper-ICE Tissue Transition Buffer 100 ml R

131 核酸提取 RNA isolater Total RNA Extraction Reagent 细胞 / 组织总 RNA 提取试剂 基于异硫氰酸胍和酚, 对细胞 / 组织裂解能力强 优化的裂解液配方, 具有广泛的样本适应性样本 保存条件 :4 避光保存 产品概述 RNA isolater Total RNA Extraction Reagent 基于异硫氰酸胍和酚, 具有极强的裂解能力, 可在短时间内裂解细胞和组织样本, 及时保护 RNA 的完整性 RNA isolater 总 RNA 提取试剂广泛适用于培养细胞 动物组织 微生物 R RNA isolater Total RNA Extraction Reagent 100 ml 操作流程 性能展示 组织 培养细胞 在 RNA isolater 里匀浆或在液氮里研碎, 用 RNA isolater 溶解 加入 RNA isolater 用移液器吹打裂解 分别将小鼠的心脏 肝脏组织以及 HEK293 细胞进行 Total RNA 提取, 将提取得到的 RNA 进行琼脂糖凝胶 电泳检测 加入 1/5 体积的氯仿, 剧烈混匀,4 静置 5 min 12,000 g 4 离心 15 min 提取纯化系列 吸取上清, 加入等体积异丙醇,4 静置 10 min 12,000 g 4 离心 10 min 75% 乙醇洗涤 12,000 g 4 离心 5 min 弃上清, 晾干 ; 溶解沉淀 电泳检测 RNA 完整性, 分光光度计检测 RNA 纯度和浓度 RNA isolater Total RNA Extraction Reagent 100 ml R

132 核酸提取 Bacteria RNA Plus Reagent 原核生物总 RNA 提取优化小助手 大幅提高细菌 ( 革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌 ) 总 RNA 提取量 保证良好的 RNA 产物质量, 更易满足后续实验需求 操作简便, 省时, 无需溶菌酶或超声等破壁处理, 排除操作可能引入的 RNA 降解 无细菌基因组 DNA 污染保存条件 : 常温保存, 请勿放于 4 或 -20 若试剂在存放过程中有沉淀析出, 请于 65 加热片刻, 使沉淀充分溶解, 混匀后使用 产品概述 提取纯化系列 Bacteria RNA Plus Reagent 为针对细菌 ( 革兰氏阴性和革兰氏阳性细菌 ) 总 RNA 提取优化的辅助试剂, 配合 RNA isolater Total RNA Extraction Reagent (Vazyme #R401) 使用, 可大幅提高原核生物 RNA 提取产量和质量 Bacteria RNA Plus Reagent 含有优化的缓冲体系, 螯合剂及温和的蛋白变性剂等成分, 提取细菌 RNA 时, 在常规操作前加一步高温预处理, 配合 RNA isolater Total RNA Extraction Reagent 即能高效抑制内源性 RNase, 促进蛋白变性, 从而提高细菌 RNA 的产量及质量 本试剂也适用于酵母等真菌 RNA 提取 R Bacteria RNA Plus Reagent 20 ml 操作流程离心收集对数期细菌 1 ml-1.5 ml( 约 10 8 个 ) 4 10,000 g 离心 3 min 去上清 加入 200 μl 提前在 95 预热的 Bacteria RNA Plus Reagent, 重悬 注 : 细胞不足 , 可使用 100 μl Bacteria RNA Plus Reagent 处理 95 水浴 4 min 注 : 裂解时间不可小于 3 min 且不可超过 5 min 向上一步液体中加入 1 ml RNA isolater Total RNA Extraction Reagent, 移液器吹打混匀, 冰置 5 min 经 RNA isolater 裂解后的细菌悬液可直接进行后续 RNA 提取或 -80 保存 Bacteria RNA Plus Reagent 20 ml R

133 核酸提取 Bacteria RNA Extraction Kit 原核生物总 RNA 提取试剂 针对原核生物 ( 革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌 ) 及真菌 ( 非孢子 ) 总 RNA 提取而定向优化 前处理液与基于异硫氰酸胍 / 酚的裂解液连用, 大幅度提高 RNA 产量和纯度 操作简便, 省时, 无需溶菌酶或超声处理保存条件 :RNA Isolater Total RNA Extraction Reagent 4 避光保存,Bacteria RNA Plus Reagent 室温存放 如果试剂在存放过程中有沉淀析出, 请于 65 加热片刻溶解并混匀 产品概述 Bacteria RNA Extraction Kit 是针对从细菌 ( 革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌 ) 中分离总 RNA 的简便, 稳定的方法 试剂盒由 Bacteria RNA Plus Reagent 和 RNA isolater Total RNA Extraction Reagent 组成 Bacteria RNA Plus Reagent RNA isolater Total RNA Extraction Reagent R (100 rxn) 20 ml 100 ml Bacteria RNA Plus Reagent 含有优化的缓冲体系, 螯合剂及蛋白变性剂等成分, 能够高效抑制细菌内源 RNase, 同时使蛋白质变性 RNA Isolater 总 RNA 提 操作流程 离心收集对数期细菌 1 ml-1.5 ml( 约 10 8 个 ) 取试剂基于异硫氰酸胍和酚, 具有极强的裂解能力, 可在短时间内裂解样本, 即时保护 RNA 的完整性 二者连用, 可以从细菌中高效地提取总 RNA, 保证产 4 10,000 g 离心 3 min 量和质量的最大化 提取的总 RNA 适用于 Real-time PCR (qpcr), RT-PCR, Northern Blotting 等下游实验 本试剂也适用于酵母等真菌 RNA 提取 性能展示 样本编号 OD 260/280 OD 260/230 浓度 (ng/μl) A B 去上清加入 200 μl 提前在 95 预热的 Bacteria RNA Plus Reagent, 重悬注 : 细胞不足 , 可使用 100 μl Bacteria RNA Plus Reagent 处理 95 水浴 4 min 注 : 裂解时间不可小于 3 min 且不可超过 5 min 提取纯化系列 C D B A C D 向上一步液体中加入 1 ml RNA isolater Total RNA Extraction Reagent, 移液器吹打混匀, 冰置 5 min 加入 1/5 体积的氯仿, 剧烈混匀,4 静置 5 min 23S 16S 12,000 g 4 离心 15 min 5S 吸取上清, 加入等体积异丙醇,4 静置 10 min 使用 Bacteria RNA Plus Reagent 配合 RNA isolater Total RNA Extraction Reagent 提取大肠杆菌 DH5α 总 RNA A:1x10 8 菌量,200 μl Bacteria RNA Plus Reagent 预处理 B:5 x10 7 菌量,200 μl Bacteria RNA Plus Reagent 预处理 C:5 x10 7 菌量,200 μl DEPC 水预处理 D:5 x10 7 菌量, 不做预处理以上洗脱体积均为 25 μl 从图可以看出,Bacteria RNA Extraction Kit 可高效提 取细菌总 RNA 12,000 g 4 离心 10 min 75% 乙醇洗涤 12,000 g 4 离心 5 min 弃上清, 晾干 ; 溶解沉淀电泳检测 RNA 完整性, 分光光度计检测 RNA 纯度和浓度 Bacteria RNA Extraction Kit 100 rxn R

134 核酸提取 FastPure TM Cell/Tissue Total RNA Isolation Mini Kit 细胞 / 组织总 RNA 提取试剂盒 (RC101/RC111) 纯度高 基因组残留少 简单快速 通用性强 获得的 RNA 纯度高, 可直接用于下游纯度要求高的实验配有基因组 DNA 吸附柱和 DNase 膜上消化模块, 可有效去除 DNA 污染无需配备其他试剂 无需酚 / 氯仿抽提 常温操作即可适用于多种不同类型的细胞 组织 RNA 的提取 保存条件 :DNase I 置于 -20 保存 ;Buffer RL1 在加入 β- 巯基乙醇后, 可在 4 保存 1 个月 其余均可在常温 (15-25 ) 干燥条件下保存 产品概述本试剂盒可从动物细胞或组织中快速提取总 RNA 试剂盒基于硅胶柱纯化技术, 提取过程中无需使用有毒的酚 / 氯仿抽提, 全程仅需 30 min 试剂盒中 gdna-filter Columns 能够有效的分离上清和组织裂解物并吸附去除 gdna;rnapure Columns 能高效的结合 RNA, 配以优化后的 Buffer 溶液, 使得到的总 RNA 纯度高, 无蛋白和其他杂质污染, 可用于 RT-PCR Real-time PCR 芯片分析等多种下游实验 性能展示 Buffer RL1 Buffer RL2 Buffer RW1 Buffer RW2 RNase-free ddh 2 O Buffer RDD * DNase I, RNase-free * gdna-filter Columns (each in a 2 ml Collection Tube) RNAPure Columns (each in a 2 ml Collection Tube) RNase-free Collection Tubes 1.5 ml RC101-01/RC (50 rxn) 30 ml 15 ml 60 ml 36 ml 10 ml 6 ml 250 μl 50 个 50 个 50 个 提取纯化系列 V T 分别使用 Vazyme #RC101 和 T 公司同类试剂提取 个 293 细胞总 RNA, 使用 100 μl 洗脱体积, 取 1 ul 提取产物进行琼脂糖凝胶电泳 从图中可以看出,Vazyme #RC101 提取 RNA 浓度高于 T 公司同类产品 *. RC111 中不含 Buffer RDD 与 DNase I 操作流程 步骤一动物组织 :10-20 mg 组织匀浆 :500 μl Buffer RL1 步骤一收集细胞 : 个细胞裂解细胞 :500 μl Buffer RL1 步骤二转移组织匀浆液或细胞裂解液至 gdna-filter Columns, 13,000 g 离心 2 min 后收集滤液 步骤三添加 1.6 倍体积 Buffer RL2 至收集滤液中 步骤四将上述混合液加至 RNAPure Columns 中,13,000 g 离心 1 min, 弃废液 步骤五去蛋白 : 加入 500 μl Buffer RW1 (13,000 g 离心 1 min), 弃废液脱盐 : 加入 700 μl Buffer RW2 (13,000 g 离心 1 min), 弃废液步骤六 ( 可选 ) 去除 gdna 残留 : 向膜中央加入 70 μl 的 DNase I 反应液, 室温静置 min, 重复步骤五 步骤七加入 700 μl Buffer RW2(13,000 g 离心 1 min) 去除残留乙醇 :13,000 g 空管离心 2 min 步骤八洗脱 : μl RNase-free ddh 2 O 室温孵育 2-5 min,13,000 g 离心 2 min, 收集 RNA FastPure TM Cell/Tissue Total RNA Isolation Mini Kit 50 rxn RC101 1,120 FastPure TM Cell/Tissue Total RNA Isolation Mini Kit (-DNase) 50 rxn RC

135 核酸提取 FastPure TM Plant Total RNA Isolation Kit (Polysaccharides/Polyphenolics-rich) 多糖多酚植物总 RNA 提取试剂盒 纯度高 通用性强 简单快速 基因组残留少 获得的 RNA 纯度高, 可直接用于下游纯度要求高的实验适用于富含多糖多酚植物组织与非多糖多酚植物组织中快速提取总 RNA 无需配备其他试剂 无需酚氯仿抽提 常温下操作即可配有基因组 DNA 吸附柱, 可有效去除 DNA 污染 保存条件 : 常温 (15 ~25 ) 保存 产品概述 本试剂盒适用于植物组织, 特别是富含多糖多酚植物组织 ( 如棉花叶片 成熟水稻叶片 松针 杨树 枇杷叶片 马铃薯块茎 棉叶根 香蕉 葡萄 苹果 梨 月季 荞麦种子 拟南芥种子 烟草等 ) 中快速提取总 RNA, 可同时处理大量不同样品 试剂盒采用硅胶柱纯化技术, 提取过程中无需使用酚氯仿等有毒试剂, 也无需耗时的醇类沉淀 Fastpure gdna-filter Column Ⅱ 能够有效的分离上清和组织裂解物并吸附去除基因组,Fastpure RNA Column Ⅳ 能高效的结合 RNA, 配以优化后的 Buffer 溶液, 使得到的总 RNA 纯度高, 无蛋白和其他杂质污染, 可用于 RT-PCR Real Time RT-PCR 芯片分析 Northern Blot Dot Blot PolyA 筛选 体外翻译 RNase 保护分析和分子克隆等多种下游实验 Buffer PRL Buffer PRLPlus Buffer PRW1 Buffer PRW2 RNase-free ddh 2 O FastPure gdna-filter Columns Ⅱ (each in a 2 ml Collection Tube) FastPure RNA Columns Ⅳ (each in a 2 ml Collection Tube) Collection Tubes 2 ml RNase-free Collection Tubes 1.5 ml Buffer PRL: 提供植物组织裂解所需的环境 ; Buffer PRLPlus: 提供 RNA 和 DNA 分离所需的环境 ; Buffer PRW1: 去除 RNA 中的蛋白质 DNA 等杂质 ; Buffer PRW2: 去除 RNA 中的盐离子残留 ; RNase-free ddh 2 O: 洗脱纯化柱膜上的总 RNA; Fastpure gdna-filter Columns Ⅱ:DNA 和 RNA 吸附柱, 并去除裂解杂质 ; Fastpure RNA Columns Ⅳ: 特异性吸附 RNA; Collection Tubes 2 ml: 滤液收集管 ; RNase-free Collection Tubes 1.5 ml:rna 收集管 RC (50 rxn) 30 ml 25 ml 40 ml 12 ml 10 ml 50 个 50 个 50 个 50 个 提取纯化系列 操作流程 液氮研磨 :50 mg~100 mg 植物样本 裂解组织 : 加 500 μl 已于 65 预热 Buffer PRL( 已加 β- 巯基乙醇 ),65 水浴 5 min,12,000 rpm 离心 10 min, 取上清 吸附 RNA 和 DNA: 加 0.5 倍上清体积的无水乙醇至上清, 转移混合液至 FastPure gdna-filter Column Ⅱ 中,12,000 rpm 离心 2 min, 弃滤液 洗脱 RNA: 加 500 μl Buffer PRLPuls 至 FastPure gdna-filter Column Ⅱ 中, 12,000 rpm 离心 30 sec, 收集滤液 调节上柱环境 : 加 0.5 倍滤液体积的无水乙醇至滤液, 转移混合液至 FastPure RNA Column Ⅳ 中,12,000 rpm 离心 2 min, 弃滤液 去除蛋白残留 :700 μl Buffer PRW1, 室温放置 1 min,12,000 rpm 离心 30 sec 去除离子残留 :500 μl Buffer PRW2( 已加无水乙醇 ),12,000 rpm 离心 30 sec( 重复一次 ) 去除乙醇残留 : 空柱 12,000 rpm 离心 2 min RNA 洗脱 :30 μl-100 μl 的 RNase-free ddh 2 O,12,000 rpm 离心 1 min FastPure TM Plant Total RNA Isolation Kit (Polysaccharides/Polyphenolics-rich) 50 rxn RC401 1,

136 核酸提取 MiPure Cell/Tissue mirna Kit ( 离心柱型 ) 细胞 / 组织 mirna 提取试剂盒 mirna 提取效率高, 起始量范围广 大分子 RNA 及基因组 DNA 残留更少 操作简便, 兼容性强 保存条件 :Box 1:4 避光保存 ;Box 2: 室温保存 产品概述 MiPure Cell/Tissue mirna Kit 是基于硅胶柱吸附法开发的 mirna 提取分离试剂盒, 能有效提取长度 20 nt-200 nt 的小片段 RNA, 包括 mirna sirna 等 高效的裂解液能轻松裂解各种动物组织和细胞, 减少蛋白和杂质对产物的干扰, 优化的硅胶吸附填料高效去除基因组 DNA 和大分子 RNA, 保证产物的高产量和高质量 试剂盒适合于从 <5 x 10 6 真核培养细胞, <100 mg 动物组织提取小分子 RNA, 得到的小分子 Box 1 Box 2 RNA Isolater Buffer mirw1 Buffer mirw2 RNase-free ddh 2 O MiPure RNAspin Column MiPure mirna Column 2 ml Collection Tube RC201 (50 rxn) 60 ml 30 ml 20 ml 30 ml 50 个 50 个 100 个 RNA 可直接用于芯片分析,Northern 杂交,RT-PCR 等 试剂盒也可用于提取总 RNA,>200 nt 的大分子 操作流程 RNA 满足客户的不同需求 性能展示 动物组织 : mg 组织处理 : 加入 1 ml RNA Isolater 匀浆 收集细胞 : 裂解细胞 : 加入 1 ml RNA isolater 吹打混匀 提取纯化系列 M mirna Kit Trizol 加入氯仿抽提去除蛋白质和 DNA 离心后将上清转移至新的离心管 mirna Kit Trizol M 加入乙醇混匀转移至 MiPure RNAspin Column 中 离心去除大分子 RNA 收集滤液 再次加入乙醇并混匀 使用 MiPure Cell/Tissue mirna Kit 与 Total RNA 提取试剂 ( 如 Trizol) 分别从等量样本 ( 细胞或小鼠肝脏组织 ) 中提取 mirna Total RNA, 琼脂糖凝胶电泳检测等量产物, 结果如图所示 : 对于细胞或小鼠组织, MiPure Cell/Tissue mirna Kit 提取得到的产物中不含有大分子 RNA, 如 18S 28S RNA 转移至 MiPure mirna Column 中 离心吸附小分子 RNA 加入去除蛋白及盐的洗涤液 Buffer mirw1 和 Buffer mirw2 洗涤去除杂质 加入 RNase-free ddh 2 O 洗脱小分子 RNA 通过 qpcr 实验检测等量产物中 mir-16 基因, 结 果显示,MiPure Cell/Tissue mirna Kit 对于小片段 RNA( 包含 mirna) 的提取产量优于 Trizol 法 MiPure Cell/Tissue mirna Kit ( 离心柱型 ) 50 rxn RC201 2,

137 核酸提取 FastPure TM Blood DNA Isolation Mini Kit 血液基因组 DNA 提取试剂盒 适用性广 得率高, 完整性好 纯度高 兼容多种类型的新鲜或冻存的抗凝血液 提取的基因组 DNA 产量高, 且片段大 兼容下游 PCR qpcr 高通量测序等各种实验要求 保存条件 : 除 Hiactive Protease K 外, 其他可在室温 (15 25 ) 保存 Hiactive Protease K 可在室温 (15 25 ) 保存 3 个月, 长期保存时需置于 2-8 请勿置于 -20 保存 若低温保存, 溶液容易产生沉淀 在使用前务必将试剂盒内的溶液在室温中放置一段时间, 必要时可在 37 水浴锅中预热 10 min, 溶解沉淀, 混匀后再使用 产品概述 本试剂盒采用的 Hiactive Protease K 以及独特的上柱缓冲体系, 可以快速提取抗凝的新鲜血液和冻存血液样本 试剂盒采用 DNA-Specific Columns 特异性 DNA 吸附膜, 大大简化了血液基因组的提取, 并最大限度的去除 RNA, 杂蛋白 脂类及其他抑制性蛋白污染 提取的基因组 DNA 片段大, 纯度高, 质量稳定, 可用于酶切 PCR qpcr 文库构建及 Southern 杂交等下游实验 一般情况下, 一个离心柱的最大承载量为 80 μg DNA 性能展示 Hiactive PK Buffer Hiactive Protease K ACK Lysis Buffer Binding Buffer Buffer PA Buffer PB Elution Buffer DNA-Specific Columns Collection Tubes 2 ml Hiactive PK Buffer: 提供样本酶解环境 ; ACK Lysis Buffer: 裂解血液中的红细胞 ; Buffer PA : 去除 DNA 中的蛋白及 RNA 等杂质 ; Buffer PB : 去除 DNA 中的盐离子 ; Elution Buffer: 洗脱结合柱上的 DNA; Collection Tubes 2 ml: 滤液收集管 Hiactive Protease K: 酶解组织样本 ; Binding Buffer: 提供 DNA 上柱缓冲环境 ; DC (100 rxn) 30 ml 2.5 ml 200 ml 30 ml 50 ml 30 ml 50 ml 100 个 100 个 DNA-Specific Columns: 特异性吸附样本中的基因组 DNA; 提取纯化系列 使用 FastPure Blood DNA Isolation Mini Kit 分别提取人血 (200 μl) 羊血 (200 μl) 鸡血 (5 μl) 及兔血 (200 μl) 的抗凝血基因组 DNA 1% 琼脂糖凝胶电泳检测, 结果显示本试剂盒适用于多种不同类型的抗凝血液样本, 且提取产物片段长, 质量高 M:DL15000 DNA marker (Vazyme #MD103) 操作流程 非肝素抗凝血 V < 200 µl ( 无核红细胞抗凝血 ) 5 µl V 20 µl ( 有核红细胞抗凝血 ) 加入 Hiactive PK Buffer 补齐至 300 µl 200 µl V 1 ml ( 无核红细胞抗凝血 ) 肝素抗凝血 50 µl V 1 ml 肝素抗凝血 ( 无核红细胞抗凝血 ) 2 倍体积 ACK Lysis Buffer,12,000 x g 离 1 min, 去上清, 再加入 300 µl 的 Hiactive PK Buffer 裂解细胞 :20 µl 的 Hiactive Protease K,65 10 min 调节上柱环境 :300 µl Binding Buffer,65 10 min 120 µl 无水乙醇, 震荡混匀 吸附 : 基因组 DNA 与 DNA-Specific Columns 膜结合 (13,000 x g 离心 1 min) 去除蛋白残留 :500 µl Buffer PA,13,000 x g 离心 1 min 去除离子残留 :700 µl Buffer PB,13,000 x g 离心 1 min( 两次 ) 去除乙醇残留 : 空管 13,000 x g 离心 1 min 基因组洗脱 :100 µl-200 µl 预热的 Elution Buffer,13,000 x g 离心 1 min FastPure TM Blood DNA Isolation Mini Kit 100 rxn DC

138 核酸提取 FastPure TM Cell/Tissue DNA Isolation Mini Kit 细胞 / 组织基因组 DNA 提取试剂盒 简单快速 适应性广 纯度高 安全性高 组织消化完全后,1 h 内即可获得超高纯度的基因组 DNA 适用多种动物组织 培养的细胞 唾液 牛奶等液体样本获得的 DNA 纯度高, 可直接用于 PCR 文库构建等分子实验无需添加酚氯仿等有机溶剂 保存条件 : 本产品除 Proteinase K 和 RNase Solution 外的其他于 15 ~25 保存 Proteinase K 干粉和 RNase Solution 可室温运输, 收到产品后请保存于 -20 溶解后的 Proteinase K 溶液请分装保存于 -20 产品概述 提取纯化系列 本产品适用于 1 mg-20 mg 动物组织和小于 培养细胞样品中基因组 DNA 的提取 试剂盒基于硅胶柱纯化技术, 提取过程中无需使用酚 / 氯仿有机溶剂抽提 醇类沉淀, 仅需 30 min-60 min 即可得到高纯度 高产量基因组 DNA, 后续可直接用于酶切反应 PCR qpcr 文库构建及 Southern 杂交等实验 性能展示 Buffer GA Buffer GB RNase Solution Proteinase K Proteinase K Dissolve Solution Washing Buffer A Washing Buffer B Elution Buffer gdna Columns Collection Tubes 2 ml Buffer GA: 提供样本酶解环境 ; RNase Solution: 酶解样本中的 RNA; DC (100 rxn) 40 ml 40 ml 1.1 ml 44 mg 4 ml 26 ml 40 ml 40 ml 100 个 100 个 Proteinase K Dissolve Solution:Proteinase K 稀释缓冲液 ; Washing Buffer A: 去除基因组中的蛋白等杂质 ; Washing Buffer B: 去除基因组 DNA 中盐离子 ; gdna Columns: 基因组 DNA 吸附柱 ; Buffer GB: 失活 Proteinase K, 提供上柱环境 ; Proteinase K: 酶解组织样本 ; Elution Buffer: 洗脱结合柱上的基因组 DNA; Collection Tubes 2 ml: 滤液收集管 分别选用小鼠肝脏 / 尾尖 / 肺 / 肌肉 / 脾脏 / 肾脏 / 心脏 / 脑进行基因组 DNA 提取, 琼脂糖凝胶电泳进行检测 M: DL15000 DNA Marker (Vazyme #MD103) 操作流程 组织样本 : 1-20 mg 剪碎的动物组织 230 μl Buffer GA 20 µl PK 工作液 55 水浴至组织完全酶解 细胞样本 : 离心收集小于 的细胞 220 μl PBS 10 μl RNase Solution 20 μl PK 工作液室温静置 15 min 以上 液体样本 : 250 μl 样本 20 μl PK 工作液 以上述提取的小鼠组织基因组为模板分别进行 PCR 扩 增, 目的条带大小为 490 bp, 琼脂糖凝胶电泳进行检测 M: DL2000 Plus DNA Marker (Vazyme #MD101) 组织样本 : 加入 250 μl Buffer GB, 涡旋混匀,70 水浴 10 min 细胞及液体样本 : 加入 250 μl Buffer GB, 涡旋混匀,65 水浴 min 调节上柱条件 : 加入 250 μl 无水乙醇吹打混匀转移混合液至吸附柱 12,000 x g 离心 1 min 去除蛋白残留 : 加入 500 µl Washing Buffer A 至吸附柱,12,000 x g 离心 1 min 去除离子残留 : 加入 650 µl Washing Buffer B 至吸附柱,12,000 x g 离心 1 min ( 两次 ) 去除乙醇残留 : 空管 12,000 x g 离心 2min 基因组洗脱 : µl 预热的 Elution Buffer FastPure TM Cell/Tissue DNA Isolation Mini Kit 100 rxn DC

139 核酸提取 Lysozyme 高效能溶菌酶 活性高, 裂解能力强 配备优化的高效缓冲液 保存条件 :Lysozyme 干粉保存于 2 ~8 产品概述 Lysozyme( 溶菌酶 ) 是一种能水解细菌中黏多糖的碱性酶, 主要通过破坏细胞壁中的 N- 乙酰胞壁酸和 N- 乙酰氨基葡糖之间的 β-1,4 糖苷键, 使细胞壁不溶性黏多糖分解成可溶性糖肽, 导致细胞壁破裂内容物逸出而使细菌溶解 主要用于 DNA RNA 制备过程中革兰氏阳性菌细胞壁的消化 Lysozyme Lysozyme Buffer 使用方案 DE mg 10 ml 取 20 mg Lysozyme 干粉, 溶解于 1 ml Lysozyme Buffer 中, 配制成 20 mg/ml 的工作溶液 提取纯化系列 Lysozyme 200 mg DE

140 核酸提取 FastPure TM Bacteria DNA Isolation Mini Kit 细菌基因组提取试剂盒 得率高, 完整性好 纯度高 安全性高 提取的基因组 DNA 产量高, 且完整性好获得的 DNA 纯度高, 可直接用于下游实验无需添加酚氯仿等有机溶剂保存条件 :RNase A 及 Proteinase K 干粉于 -30 ~ -15 保存, 其他常温 (15 ~ 25 ) 保存 产品概述 本试剂盒主要适用于从各种来源的细菌 ( 革兰氏阴性 革兰氏阳性 ) 培养液中提取基因组 DNA 试剂盒采用硅胶膜纯化技术, 提取过程中无需使用酚氯仿等有毒试剂, 也无需进行耗时的醇类沉淀, 并最大限度的去除 RNA, 杂蛋白 脂类及其他抑制性杂质 提取的基因组 DNA 纯度高, 质量稳定, 可用于酶切 PCR Southern 杂交等下游实验 一般情况下, 得到的 DNA 包括有基因组 DNA 和质粒 DNA Buffer GA Proteinase K Proteinase K Dissolve Solution RNase A Buffer GB Buffer PB Buffer PW Elution Buffer FastPure gdna Mini Columns III Collection Tubes 2 ml DC (100 rxn) 40 ml 44 mg 4 ml 400 μl 40 ml 26 ml 40 ml 40 ml 100 个 100 个 提取纯化系列 Buffer GA: 提供样本酶解环境 ; Proteinase K: 酶解细菌样本 ; Proteinase K Dissolve Solution:Proteinase K 稀释缓冲液 ; RNase A: 酶解样品中的 RNA; Buffer GB: 失活 Proteinase K, 提供上柱环境 ; Buffer PB: 去除 DNA 中的蛋白及 RNA 等杂质 ; Buffer PW: 去除 DNA 中的盐离子 ; Elution Buffer: 洗脱结合柱上的 DNA; FastPure gdna Mini Columns III: 吸附基因组 DNA; Collection Tubes 2 ml: 滤液收集管 操作流程 阳性菌 收集细菌 : 取细菌培养液 1 ml-5 ml ( 小于 个细菌 ),10,000 rpm 离心 1 min, 弃培养液 阴性菌 裂解细胞 : 加入 180 μl Lysozyme,37 水浴 30 min( 革兰氏阳性菌 ) 加入 230 μl Buffer GA, 振荡混匀 ( 革兰氏阴性菌 ) 加入 4μl RNase A, 室温放置 5 min-15 min ( 可选 ) 加入 20 μl Proteinase K, 振荡混匀 调节上柱环境 : 加入 250 μl Buffer GB,70 水浴 10 min 加入 250 μl 无水乙醇, 振荡混匀 吸附 : 转移混合液至 FastPure gdna Columns III,12,000 g 离心 1 min 去除蛋白残留 : 加入 500 μl Buffer PB,12,000 g 离心 1 min 去除离子残留 : 加入 600 μl Buffer PW,12,000 g 离心 1 min (2 次 ) 去除乙醇残留 : 空管 12,000 g 离心 2 min 基因组洗脱 :50 μl-100 μl Elution Buffer,12,000 g 离心 1 min FastPure TM Bacteria DNA Isolation Mini Kit 100 rxn DC

141 核酸提取 FastPure TM FFPE DNA Isolation Kit FFPE 样本 DNA 提取试剂 安全无毒 快速 高效 高产量 提取过程采用无毒性脱蜡液脱蜡, 不涉及二甲苯等有机试剂, 安全无毒无需过夜孵育消化就可完成数个样品的提取工作独特的裂解液和特异的吸附柱提高 DNA 纯度最佳的提取流程确保回收效率高 保存条件 : 除 Proteinase K 以外的其他可在 15 ~ 25 条件下保存 12 个月, 若需更长时间保存, 则置于 2 ~ 8 2 ~ 8 保存条件下若溶液产生沉淀, 使用前应将试剂盒内溶液室温放置一段时间, 上下颠倒直至沉淀完全溶解 ; 必要时可在 37 水浴中预热 10 min, 以溶解沉淀 产品概述 本产品适用于从福尔马林固定 石蜡包埋组织中分离纯化基因组 DNA, 克服了福尔马林交联造成的抑制效应 该试剂盒使用的脱蜡液, 较之二甲苯更安全 ; 并通过特异性结合 DNA 的离心吸附柱和独特的缓冲液系统, 可得到高品质的 DNA 整个提取过程只需 20 min( 除消化时间 ), 提取的基因组完整性好, 纯度高, 质量稳定可靠, 可用于多种下游应用, 如 PCR qpcr 文库构建等实验 Deparaffinization Solution Buffer FTL Buffer FL Buffer FW1 Buffer FW2 Proteinase K Proteinase K Dissolve Solution Elution Buffer FFPE DNA Mini Columns 2 ml Collection Tubes Deparaffinization Solution: 去除样本中石蜡 ; Buffer FTL: 悬浮样本并裂解组织细胞 ; Buffer FL: 提供 DNA 上柱缓冲环境 ; Buffer FW1: 去除 DNA 中的蛋白 ; Buffer FW2 : 去除 DNA 中的盐离子 ; Proteinase K: 酶解组织样本 ; Proteinase K Dissolve Solution: 溶解 Proteinase K 干粉 ; Elution Buffer: 洗脱结合柱上的 DNA; FFPE DNA Mini Columns: 特异性吸附样本中基因组 DNA; 2 ml Collection Tubes: 滤液收集管 DC105 (50 rxn) 40 ml 15 ml 15 ml 13 ml 20 ml 22 mg 2 ml 10 ml 50 个 50 个 提取纯化系列 操作流程 取石蜡切片 (5 μm~10 μm 厚,1 1 cm 2 大小 )5~8 张 (<20 mg); 加入 0.6 ml Deparaffinization Solution; 56 水浴 6 min; 14,000 g 离心 2 min, 弃上清 加入 200 μl Buffer FTL 和 20 μl Proteinase K 工作液 ; 56 水浴 1 h ( 至样品消化完全 ); 90 水浴 1 h ( 去除 DNA 与蛋白质交联 ); 加入 200 μl Buffer FL 和 200 μl 无水乙醇 转移混合液至吸附柱,10,000 g 离心 30 sec~60 sec, 弃滤液 ; 加入 500 μl Buffer FW1( 已加乙醇 ) 至吸附柱,10,000 g 离心 30 sec~60 sec, 弃滤液 ; 加入 650 μl Buffer FW2( 已加乙醇 ) 至吸附柱,10,000 g 离心 30 sec~60 sec, 弃滤液 ; 空离吸附柱,10,000 g 离心 3 min 加入 15 μl~50 μl Elution Buffer 室温放置 1 min,10,000 g 离心 1 min, 收集滤液 FastPure TM FFPE DNA Isolation Kit 50 rxn DC

142 核酸提取 FastPure TM Plasmid Mini Kit 质粒 DNA 小提试剂盒 简单快速 纯度高 产量高 无需柱平衡, 操作简单快速,30 min 即可完成多个样品的抽提工作 提取的质粒可直接进行测序 酶切 PCR 等实验 每个吸附柱可吸附高达 35 μg 的质粒 DNA 保存条件 : RNase A 保存于 -20, 其他室温 (15-25 ) 保存 若低温保存, 溶液容易产生沉淀 在使用前务必将试剂盒内的溶液在室温放置一段时间, 必要时可在 37 水浴锅中预热 10 min, 溶解沉淀, 混匀后再使用 产品概述本产品适用于提取 1-5 ml 过夜培养的菌液, 采用优化的 SDS- 碱裂解法裂解细胞, 提取过程无需酚 / 氯仿抽提 乙醇沉淀等步骤, 仅需 30 min 即可完成多个样品的抽提工作 本品采用独特的离心吸附柱, 可高效特异的结合溶液中的质粒 DNA, 并最大限度的去除蛋白质 基因组 RNA 和其他杂质, 进而得到高质量 高纯度的质粒 DNA 后续可直接用于酶切 PCR 测序 转化等生物学实验 RNase A Buffer P1 Buffer P2 Buffer P3 Buffer PW1 Buffer PW2 Elution Buffer FastPure DNA Mini Columns Collection Tubes 2 ml DC (100 rxn) 150 μl 30 ml 30 ml 40 ml 60 ml 2 20 ml 20 ml 100 个 100 个 提取纯化系列 性能展示使用 FastPure Plasmid Mini Kit 分别提取大小为 3.0 kb 5.4 kb 7.0 kb 10.0 kb 不同大小质粒, 琼脂糖凝胶电泳进行检测 结果显示本试剂盒针对不同大小的质粒均具有较好的提取效果, 提取产量高 RNase A:50 mg/ml; Buffer P1: 细菌悬浮液 第一次使用前将 RNase A 加入 Buffer P1 中 ; Buffer P2: 细菌裂解液 ( 含 SDS/NaOH); Buffer P3: 中和液 ; Buffer PW1: 洗涤液, 可以有效去除残留的蛋白污染 ; Buffer PW2: 去盐液 Elution Buffer: 洗脱液 ; FastPure DNA Mini Columns: 质粒 DNA 吸附柱 ; Collection Tube 2 ml: 滤液收集管 操作流程 M: 1 kb DNA Ladder (Vazyme #MD105) 5.4 kb 10.0 kb M 加入 250 μl Buffer P1 加入 250 μl Buffer P2 加入 350 μl Buffer P3 重悬 裂解 中和 加入 500 μl Buffer PW1 ( 可选 ) 加入 600 μl Buffer PW2 加入 600 μl Buffer PW2 结合 洗涤 将上述提取的 5.4 kb 10.0 kb 质粒分别进行单酶切, 琼脂糖凝胶电泳进行检测 结果显示提取的质粒纯度 高, 对下游酶切反应无抑制作用 加入 μl Elution Buffer 或去离子水 洗脱 M: DL15000 DNA Marker (Vazyme #MD103) FastPure TM Plasmid Mini Kit 100 rxn DC

143 核酸提取 FastPure TM EndoFree Plasmid Maxi Kit 质粒大提试剂盒 内毒素含量极低, 后续可做转染级别实验 产量高, 高拷贝质粒产量达到 0.2 mg-1.5 mg 操作简便 保存条件 : 试剂盒除 RNase A 和内毒素清除剂外, 其他室温保存 ;RNase A 保存于 -30 ~-15 ; 内毒素清除剂 2-8 可以保存一个月, 长期保存放 -30 ~-15 若低温保存, 溶液容易产生沉淀 在使用前务必将试剂盒内的溶液在室温中放置一段时间, 必要时可在 37 水浴锅中预热 10 min, 溶解沉淀, 混匀后再使用 产品概述 本试剂盒适用于提取 150 ml-300 ml 过夜培养的菌液, 采用改进的 SDS- 碱裂解法裂解细胞, 粗提物通过独特的内毒素清除剂选择性结合离心去除内毒素, 然后离心吸附柱内的硅基质膜在高盐 低 ph 值状态下选择性地结合溶液中的质粒 DNA, 再通过漂洗液将杂质和其它细菌成分去除, 最后用低盐 高 ph 值的洗脱缓冲液将纯净质粒 DNA 从硅基质膜上洗脱 离心吸附柱内硅基质膜全部采用进口世界著名公司特制吸附膜, 柱与柱之间吸附量差异极小, 可重复性好, 克服了国产试剂盒膜质量不稳定的弊端 不需要使用有毒的苯酚, 氯仿等试剂, 也不需要乙醇沉淀, 可快速提取 0.2 mg-1.5 mg 纯净的高拷贝质粒 DNA, 提取率达 80-90% 独特工艺配方清除内毒素, 内毒素含量极低 (<0.1 EU/μg DNA), 细胞转染效果极佳 也可直接用于酶切 PCR 体外转录 转化 测序 等各种分子生物学实验 RNase A Buffer P1 Buffer P2 Buffer P4 内毒素清除剂 Buffer PW Buffer TB FastPure DNA Maxi Columns(each in a 50 ml Collection Tube ) DC (10 rxn) 750 μl 75 ml 75 ml 75 ml 25 ml 2 22 ml 20 ml 10 个 提取纯化系列 操作流程 加入 7.5 ml Buffer P1 加入 7.5 ml Buffer P2 加入 7.5 ml Buffer P4 重悬 裂解 中和 加入 0.1 倍体积内毒素清除剂 去内毒素 加入 0.5 倍体积异丙醇 加入 10 ml Buffer PW 加入 10 ml Buffer PW 结合 洗涤 加入 1-2 ml Buffer TB 或无内毒素水 洗脱 FastPure TM EndoFree Plasmid Maxi Kit 10 rxn DC

144 核酸提取 FastPure TM Gel DNA Extraction Mini Kit 胶回收 /DNA 纯化试剂盒 简单快速 一盒两用 回收效率高 回收 DNA 片段范围广 只需加入 1 倍体积溶胶液, 无需柱平衡, 操作简单快速,10 min-15 min 即可完成纯化工作不仅可用于 DNA 凝胶回收, 也可用于 DNA 粗品纯化回收效率可高达 80% 适用于 70 bp-20 kb 的 DNA 片段回收 保存条件 : 室温 (15-25 ) 保存 若低温保存, 溶液容易产生沉淀 在使用前务必将试剂盒内的溶液在室温中放置一段时间, 必要时可在 37 水浴锅中预热 10 min, 溶解沉淀, 混匀后再使用 产品概述 本产品采用优化的缓冲体系及硅胶柱纯化技术, 可从各种浓度的 TAE 或 TBE 琼脂糖凝胶中回收 70 bp-20 kb 的 DNA 片段,DNA 回收效率高达 80% 此外, 本产品仍可对 PCR 产物 酶促反应体系或其它各种方法获得的 DNA 粗制品中 DNA 片段进行纯化, 同时去除蛋白质 Buffer GDP Buffer GW Elution Buffer FastPure DNA Mini Columns-G DC (100 rxn) 80 ml 2 20 ml 20 ml 100 个 有机化合物 无机盐离子及寡核苷酸引物等杂质 纯化 Collection Tubes 2 ml 100 个 时间仅需 10 min-15 min 后续可直接用于连接 转化 Buffer GDP:DNA 结合液 ; 酶切 体外转录 PCR 测序 微注射等分子生物学研究 Buffer GW: 漂洗液, 使用前按瓶上指定体积加入无水乙醇 ; Elution Buffer: 洗脱缓冲液 ; FastPure DNA Mini Columns-G:DNA 吸附柱 ; 提取纯化系列 性能展示 Collection Tubes 2 ml: 滤液收集管 操作流程 PCR 反应液 计算凝胶体积 (100 mg 相当于 100 μl) 分别对 50 bp 486 bp 1 kb 2 kb 4.5 kb 7.5 加入等倍体积 Buffer GDP 溶胶 kb 10 kb 12 kb PCR 产物进行纯化, 将纯化前后的片段同时进行琼脂糖凝胶电泳检测 结果显示本试 50~55 加热 剂盒在 50 bp-12 kb 片段范围均具有较好的回收效果 M:1 kb DNA Ladder (Vazyme #MD105) 加入 300 μl Buffer GDP 加入 600 μl Buffer GW 加入 600 μl Buffer GW 结合 洗涤 M Vazyme Q T A 加入 7-30 μl Elution Buffer 或去离子水 洗脱 分别使用 Vazyme Q 公司 T 公司 A 公司胶回收试剂盒对 5.4 kb 片段进行切胶回收, 将回收产物进行琼脂糖凝胶电泳检测 结果显示基因组 DNA 回收效率远高于 Q T 和 A 公司 M:DL15000 DNA Marker (Vazyme #MD103) FastPure TM Gel DNA Extraction Mini Kit 100 rxn DC

145 外泌体提取 技术背景 Exosome( 外泌体 ) 是一类由细胞分泌的直径大约在 nm 的囊泡, 其表面可高表达主要组织相容性复合体以及整合素等四分子交联体超蛋白家族, 如 CD9,CD81,CD63 除了这些标志性的蛋白外, 其内还含有大量蛋白及 mirna lncrna 及其他各类非编码 RNA Exosome 携带着这些物质在细胞间进行通讯, 参与机体免疫应答 细胞迁移 细胞分化 肿瘤侵袭等各种过程 形成释放过程 质膜内吞形成内体 合成的蛋白质 mirna 等移动至内体 内体膜向内凹陷形成管腔内膜泡 (ILV) 内体变为多囊泡体 (MVB) MVB 在 GTPase 家族 RAB27 蛋白 作用下运输并对接到质膜上 引起 MVB 胞吐并释放外泌体 此过程中内体对内容物进行拣选, 用于外泌体装载和释放 Secreting cells ILV formatoin Early exosomes Endocytosis Transferrin receptors 提取纯化系列 MVB ESCRT Late exosomes Exosomes 30 nm-150 nm Recipient cells Fusion Microvesicles 100 nm-1 μm Degradation Exocytosis Endocytic uptake Lysosomes RNA, Cytosolic proteins 目前外泌体的功能已受到越来越多的关注, 而要对外泌体进行研究, 首先要从各种样本中提纯分离外泌体 VEX TM Exosome Isolation Reagent 是专门用于分离提取细胞培养液上清 (Vazyme #R601) 血清 (Vazyme #R602) 以及血浆 (Vazyme #R603) 样本中外泌体的试剂, 通过简单的较低速度离心即可从样本中分离出大量外泌体 与传统的超高速离心相比, 使用 VEX TM Exosome Isolation Reagent 试剂提取的样本中的外泌体所受压力较小, 可以保持完整的形态 ; 同时提取时间更短 样本起始量更低 提取效率更高 使用 VEX TM Exosome Isolation Reagent 获得的外泌体可适用于多种下游应用, 如蛋白研究 RNA 分析 高通量测序等

146 外泌体提取 选购指南 系列适用范围产品名货号页码 细胞培养液上清 VEX TM Exosome Isolation Reagent (from cell culture media) R601 P147 外泌体的分离纯化 血清 VEX TM Exosome Isolation Reagent (from serum) R602 P148 血浆 VEX TM Exosome Isolation Reagent (from plasma) R603 P149 使用流程 针对细胞培养液上清 (Vazyme #R601) 收集细胞培养液上清 过滤获得上清 离心去除残留细胞及碎片 提取纯化系列 针对血清样本 (Vazyme #R602) 收集血清 离心去除残留细胞及碎片 上清与 VEX TM Exosome lsolation Reagent 混匀 2-8 孵育 离心获得 Exosome 针对血浆样本 (Vazyme #R603) 收集血浆 离心去除残留细胞及碎片 加入 1 PBS 锅旋混匀

147 外泌体提取 VEX TM Exosome Isolation Reagent (from cell culture media) 细胞培养液上清外泌体提取试剂 操作简单快捷 兼容低量样本 产量稳定可靠 无需超高速离心机, 一步沉淀 细胞培养上清可低至 1 ml 较低的离心力沉淀, 获得的外泌体结构更完整, 较传统提取方法具有更高产量 保存条件 :2-8 保存 产品概述 VEX TM Exosome Isolation Reagent(from cell culture media) 是专门用于分离提取细胞培养液上清样本中外泌体的试剂, 通过简单的较低速度离心即可从样本中分离出大量外泌体 本产品与传统的超高速离心相比, 样本中的外泌体所受到的压力较小, 可以保持较完整的形态 ; 同时提取过程所需要的时间更短 所需要的样本起始量更低 提取效率更高 使用本产品获得的外泌体可适应于多种下游应用, 如 RNA 分析 高通量测序 细胞共培养等 VEX Exosome Isolation Reagent (from cell culture media) 适用范围细胞培养液上清 R ml 性能展示 HeLa 细胞传代培养 48 h 后, 取细胞培养液上清, 分别使用 R 公司 L 公司 S 公司以及 VEX TM Exosome Isolation Reagent (from cell culture media) (Vazyme #R601) 进行外泌体的提取, 后进行 NTA 分析和 Western Blot 分析, 并用所得外泌体进行 RNA 提取及 mirna-qpcr 检测 提取纯化系列 结果可见 :VEX TM Exosome Isolation Reagent (from cell culture media) (Vazyme #R601) 提取得到的颗粒直径峰, 峰形更窄, 分布更好 ( 图 A), 产量更高 ( 图 B) 与同类产品 L 处理后的样本检测结果高度一致, 且效率略高于 L 公司 ( 图 C) Western Blot 显示均能检测到外泌体标志性蛋白 CD63 ( 图 D) VEX TM Exosome Isolation Reagent (from cell culture media) 50 ml R601 4,

148 外泌体提取 VEX TM Exosome Isolation Reagent (from serum) 血清外泌体提取试剂 操作简单快捷 兼容低量样本 产量稳定可靠 无需超高速离心机, 一步沉淀 起始样本血清量可低至 500 μl 较低的离心力沉淀, 获得的外泌体结构更完整, 较传统提取方法具有更高产量 保存条件 : 保存于 2-8 产品概述本产品是专门用于分离血清样本中外泌体的试剂, 只需通过简单的较低速度离心即可从样本中分离出大量外泌体 与传统的超高速离心相比, 样本中的外泌体所受到的压力较小, 可以保持较完整的形态 ; 同时提取过程所需要的时间更短 所需要的样本起始量更低 提取效率更高 使用本产品获得的外泌体可用于蛋白研究 RNA 分析 高通量测序等下游研究 VEX Exosome Isolation Reagent (from serum) 适用范围动物血清 R ml 性能展示 提取纯化系列 分别使用 R 公司 L 公司 S 公司以及 VEX TM Exosome Isolation Reagent (from serum) (Vazyme #R602) 进行血清中外泌体的提取, 后进行 NTA 分析和 Western Blot 分析, 并用所得外泌体进行 RNA 提取及 mirna-qpcr 检测 结果可见 :VEX TM Exosome Isolation Reagent (from serum) ((Vazyme #R602)) 提取得到的颗粒直径峰, 其主峰落在 nm 之间 ( 图 A), 并且在获得的数量和纯度上表现优异 ( 图 B) 与同类产品 L 处理后的样本有十分接近且趋势一致的 C T 值 ( 图 C) Western Blot 显示均能检测到外泌体标志性蛋白 CD63( 图 D) VEX TM Exosome Isolation Reagent (from serum) 10 ml R602 4,

149 外泌体提取 VEX TM Exosome Isolation Reagent (from plasma) 血浆外泌体提取试剂 操作简单快捷 兼容低量样本 产量稳定可靠 无需超高速离心机, 一步沉淀 起始样本血浆量可低至 500 μl 较低的离心力沉淀, 获得的外泌体结构更完整, 较传统提取方法具有更高产量 保存条件 :VEX Exosome Isolation Reagent (from plasma) 保存于 2-8 Proteinase K 保存于 -15 ~-30 产品概述本产品是专门用于分离血浆样本中外泌体的试剂, 只需通过简单的较低速度离心即可从样本中分离出大量外泌体 与传统的超高速离心相比, 样本中的外泌体所受到的压力较小, 可以保持较完整的形态 ; 同时提取过程所需要的时间更短 所需要的样本起始量更低 提取效率更高 使用本产品获得的外泌体可用于蛋白研究 RNA 分析 高通量测序等下游研究 VEX Exosome Isolation Reagent (from plasma) Proteinase K (20 mg/ml ) 适用范围动物血浆 R ml μl 性能展示 分别使用 R 公司 L 公司 S 公司以及 Vazyme 公司血浆外泌体提取试剂 VEX TM Exosome Isolation Reagent (from plasma) (Vazyme #R603) 进行血浆中外泌体的提取, 后进行 NTA 分析和 Western Blot 分析, 并用所得外泌体进行 RNA 提取及 mirna-qpcr 检测 提取纯化系列 结果可见 :VEX TM Exosome Isolation Reagent (from plasma) (Vazyme #R603) 提取得到的颗粒直径峰, 其主峰落在 nm 之间, 峰形更窄 ( 图 A), 并且在获得的数量和纯度上较其它试剂更好 ( 图 B) 与同类产品 L 的 C T 值比较接近, 且有一组 Vazyme 比 L 小 0.8 ( 图 C) Western Blot 显示均能检测到外泌体标志性蛋白 CD63 ( 图 D) VEX TM Exosome Isolation Reagent (from plasma) 10 ml R603 4,

150 Vazyme 基础科研试剂 细胞 / 蛋白系列产品 细胞凋亡 TUNEL FITC Apoptosis Detection Kit TUNEL BrightGreen Apoptosis Detection Kit TUNEL BrightRed Apoptosis Detection Kit Annexin V-FITC/PI Apoptosis Detection Kit 细胞增殖检测 CCK-8 Cell Counting Kit 159 细胞转染 Exfect Transfection Reagent Exfect 2000 Transfection Reagent 支原体检测 / 清除 Myco-Blue TM Mycoplasma Detector Myco-Off TM Mycoplasma Cleaner 双萤光素酶检测 Dual Luciferase Reporter Assay Kit 169 Western Blot 试剂 高敏型 ECL 化学发光检测试剂盒 ( 即用型 ) 增强型 ECL 化学发光检测试剂盒 蛋白定量 Bradford Protein Quantification Kit Detergent Compatible Bradford Protein Quantification Kit BCA Protein Quantification Kit

151 细胞凋亡 细胞凋亡技术 研究发现, 不论是单细胞生物还是多细胞生物, 其细胞死亡往往受到细胞内某种由遗传机制决定的 死亡程序 控制, 所以也被称 为程序性细胞死亡 ( Programmed Cell Death,PCD) PCD 最初是发育生物学中提出的概念, 其含义是发育过程中发生的某类 细胞的大量死亡, 而这种细胞死亡要求特定的基因表达 动物细胞的程序性死亡 动物细胞的死亡方式有 3 种 : 凋亡 (apoptosis) 坏死 ( Necrosis) 和自噬 ( autophagy) 其中动物细胞凋亡的特征 机制和生物学功能的研究较为深入 细胞凋亡的概念和特征 Kerr 于 1965 年最早发现细胞凋亡现象 他观察到在局部缺血的情况下, 大鼠肝细胞持续的转化为小的圆形的细胞质团 这些细胞质团由质膜包裹的细胞碎片 ( 包括细胞器和染色质 ) 组成 起初他称这种现象为 皱缩型坏死, 后来发现这一现象与坏死有本质区别 1972 年 Kerr 将这一现象命名为细胞凋亡并确定了细胞凋亡的概念 此后, 细胞凋亡很快受到各国生物学家的重视, 并迅速成为 20 世纪 90 年代生命科学的一大研究热点 动物细胞凋亡的过程, 在形态学上分为 3 个阶段 : 凋亡的起始这阶段的形态学变化变现为 : 细胞表面的特化结构如微绒毛消失, 细胞间接触消失 但细胞质膜依然完整, 未失去选择通透性 ; 细胞质中, 线粒体大体完整, 但核糖体逐渐与内质网脱离, 内质网囊腔膨胀, 并逐渐与质膜融合 ; 细胞核内染色质固缩, 形成新月形帽状结构, 沿着核膜分布 这一阶段历时数分钟, 然后进入第二阶段 凋亡小体的形成首先, 核染色质断裂成为大小不等的片段, 与某些细胞器如线粒体等聚集在一起, 被反折的细胞质膜所包围, 形成凋亡小体 从外观上看, 细胞表面发泡, 产生了许多泡状或芽状突起, 随后逐渐分离, 形成单个凋亡小体 凋亡小体逐渐被邻近的细胞或体内吞噬细胞所吞噬, 凋亡细胞的残余物质被消化后重新利用从细胞凋亡起始至凋亡小体的出现不过数分钟, 而整个细胞凋亡的过程可能持续 4-9 h 动物细胞凋亡最重要的特征是整个过程中细胞质膜始终保持完整, 细胞内含物不发生细胞外泄露, 因此也不引发机体炎症反应 由于凋亡是受到严格调控的细胞主动性自杀过程, 因此需要 ATP 提供能量, 是一个耗能过程 细胞 / 蛋白系列 凋亡过程模式图 1 正常细胞 2 细胞凋亡的起始 3 凋亡中的细胞 4 凋亡小体被邻近吞噬细胞吞噬

152 细胞凋亡 细胞坏死 对于动物细胞, 细胞坏死是区别于细胞凋亡的另一种典型细胞死亡方式 长期以来细胞坏死被认为是一种被动的死亡方式, 当细胞受到意外损伤, 如极端的物理 化学因素或严重的病理性刺激的情况下细胞坏死才会发生 此时细胞内 ATP 浓度已下降到无达维持细胞存活的水平 细胞坏死时, 细胞质出现空泡, 细胞质膜破损, 细胞内含物, 包括膨大和破碎的细胞器以及染色质片段释放到胞外, 引起周围组织的炎症反反应 与细胞凋亡不同, 细胞坏死过程中染色质不发生凝集, 也不产生有规律的 200 bp 的 DNA 降解片段, 而是被随机降解 琼脂糖凝胶电泳时呈现弥散性分布, 俗称 拖尾 现象 细胞凋亡的检测方法 细胞凋亡具有明显的形态学和生理生化特征 常用的检测方法如下 : A 形态学检测 应用各种染色法可观察凋亡细胞的形态学特征, 有些染料如台盼蓝为活细胞所排斥, 但可使死细胞着色 DAPI, 是常用的一种与 DNA 结合的荧光染料 用 DAPI 染色并借助荧光显微镜, 可以观察到细胞核的形态变化 Giemsa 染色法可使染色质着色, 便于在普通光学显微镜下观察到染色质固缩 趋边 凋亡小体的形成等凋亡过程 control stage I stage IIa stage IIb DAPI 染色 B 细胞凋亡早期检测 (1) Annexin V 检测 细胞 / 蛋白系列 在正常细胞中, 磷脂酰丝氨酸 (PS) 只分布在细胞膜脂质双层的内侧, 而在细胞凋亡早期, 细胞膜中的磷脂酰丝氨酸 (PS) 由脂膜内侧翻向外侧 这一改变被认为是特导性的, 并且可作为凋亡细胞表面改变的标记 Annexin V 是一类广泛分布于真核细胞胞浆内的 Ca 2+ 依赖性的磷脂结合蛋白, 分子量为 kda, 能与细胞凋亡过程中翻转到膜外的 PS 高亲和力特异性结合, 被作为检测细胞凋亡早期的灵敏指标之一 用标记了 FITC 的 Annexin V 作为荧光探针, 利用流式细胞仪或荧光显微镜可检测细胞凋亡的发生, 正常细胞和早期凋亡细胞的细胞膜是完整的 Propidium Iodide (PI) 是一种核酸染料, 它不能透过完整的细胞膜, 但在凋亡中晚期的细胞和死细胞,PI 能够透过细胞膜与细胞核结合呈现红色 对于坏死细胞, 由于细胞膜的完整性已被破坏,Annexin V-FITC 可以进入到细胞浆内, 与位于细胞膜内侧的磷脂酰丝氨酸结合, 进而使坏死细胞也呈现绿色荧光 因此将 Annexin V 与 PI 匹配使用, 可将处于不同凋亡时期的细胞区分开来 (2) 线粒体膜通透性变化的检测现在已经确认, 线粒体膜通透性的改变是细胞发生凋亡的重要特征之一 在凋亡研究的早期, 从形态学观测线粒体没有明显的变化 随着凋亡机制研究的深入, 发现线粒体凋亡也是细胞凋亡的重要组成部分 发生很多生理变化 活体细胞线粒体膜通道孔 (MPTP) 红色荧光 (TMRM) 检测试剂是一种旨在通过四甲基罗丹明甲酯染料, 对此改变非常敏感, 呈现出不同的荧光染色 正常细胞中, 它在线粒体中形成聚集体, 发出强烈的红色荧光 凋亡细胞中, 因线粒体穿膜电位的改变, 它以单体形式存在于细胞液中, 发出绿色荧光 用荧光显微镜或流式细胞仪可清楚地分辨这两种不同的荧光信号 (3) 凋亡蛋白酶 (Caspase) 活力的检测凋亡蛋白酶是一类半胱氨酸蛋白质酶, 具有特异性水解底物分子天冬氨酸 (Asp) 残基 C 端肽键功能, 是近年随着凋亡研究的深入而发现的重要凋亡分子 迄今已有 13 个分子得到命名, 分别为凋亡蛋白质酶 1-13 目前不同公司开发了用于检测 Caspase 家族分子活性的试剂盒, 可以通过显色或荧光两种检测方法来检测

153 细胞凋亡 C 细胞凋亡晚期检测 片段化的 DNA 被视为是细胞凋亡的典型生化特征之一 细胞凋亡晚期中, 核酸内切酶 ( 某些 Caspase 的底物 ) 在核小体之间剪切核 DNA, 产生大量长度在 (180 bp-200 bp)n;(n 1) 的 DNA 片段 对于这一现象的检测通常用有三种方法 : (1) TUNEL 法 TUENL 测定法是指末端脱氧核苷酸转移酶介导的 dutp 缺口末端标记法 这一方法能对 DNA 分子断裂切口中的 3 -OH 进行原位标记 借助一种可观测的标记物, 如荧光素, 能对凋亡细胞的核 DNA 中产生的 3 -OH 末端进行原位标记, 用荧光显微镜即可进行观察 TUNEL 直接标记步骤少, 操作简便 而间接标记有信号放大的作用, 检测灵敏度高, 是目前检测细胞凋亡最为常用 最为普遍的检测方法之一 (2) DNA Ladder 电泳法细胞凋亡时, 细胞内特异性核酸内切酶变化, 染色质 DNA 在核小体间被特异性切割,DNA 降解成 180 bp-200 bp 或其整数倍变化 因此凋亡细胞中提取的 DNA 在进行常规的琼脂糖凝胶电泳, 并用溴乙锭进行染色时, 这些大小不同的 DNA 片段就呈现出梯状条带 到目前为止,DNA 梯状条带仍然是鉴定细胞凋亡最简便可靠的方法 (3) mrna 水平的检测研究者们发现了很多在细胞凋亡时表达异常的基因, 检测这些特异基因的表达水平也成为检测细胞凋亡的一种常用方法 据报道,Fas 蛋白结合受体后能诱导癌细胞中的细胞毒性 T 细胞 ( cytotoxic T cells) 等靶细胞 Bcl-2 和 bcl-x( 长的 ) 作为抗凋亡 (bc1-2 和 bcl-x) 的调节物, 它们的表达水平比例决定了细胞是凋亡还是存活 一般多采用 Northern 杂交和 RT-PCR 跑胶对它们进行检测 随着近年来荧光定量 PCR 技术的发展, 用定量 PCR 技术来检测基因表达水平无疑比之前者更快更准确 凋亡系列产品选购指南 TUNEL 试剂盒 Annexin V/PI 检测试剂盒 A111 A112 A113 A211 荧光颜色 绿色 增强型绿色 增强型红色 绿色 检测范围 晚期凋亡检测 区分早期凋亡和晚期凋亡 样本形式 细胞 : 细胞爬片 细胞涂片组织 : 石蜡切片 冰冻切片 细胞 : 悬浮细胞 贴壁细胞 检测方式 荧光显微镜 ( 优先选择 ) 流式细胞仪 注意 抗淬灭能力稍弱 含有 Bright 因子, 荧光强度高 复染不能够使用 PI 页码 P154 P155 P156 P157 细胞 / 蛋白系列

154 细胞凋亡 TUNEL FITC Apoptosis Detection Kit 绿色荧光检测凋亡 绿色荧光标记 适用于细胞爬片 石蜡切片和冰冻切片 保存条件 :-20 保存 ;FITC-12-dUTP Labeling Mix 避光保存 产品概述 细胞 / 蛋白系列 细胞凋亡的一个显著特点是细胞染色体的 DNA 被内源核酸内切酶有规律的降解成长度约为 180 bp- 200 bp 的整倍数的片段 本试剂盒采用 TUNEL (TdT mediated dutp Nick End Labeling) 法, 应用末端脱氧核糖核苷酸转移酶 (Terminal Deoxynucleotidyl Transferase,TdT) 在凋亡细胞断裂的 DNA 的 3 - 羟基 (3 -OH) 末端催化掺入荧光素 -12- 脱氧三磷酸尿苷 (FITC-12-dUTP) FITC-12-dUTP 标记的 DNA 可以用荧光显微镜直接观察或者用流式细胞仪定量 试剂盒对标记反应进行了优化, 采用最佳比例的 FITC-12- dutp 和未标记 dntp 进行 3 -OH 末端的核苷酸掺入, 使得同一个断裂的 DNA 片段末端可以形成更长的 标记尾巴 该 标记尾巴 减少了相邻掺入 dntp 上标记基团的空间位阻, 增加每个断裂片段上的荧光基团数目, 降低荧光基团相邻后可能造成的聚集和淬灭, 从而提高检测灵敏度, 减少非特异性反应 性能展示 5 Equilibration Buffer FITC-12-dUTP Labeling Mix Recombinant TdT Enzyme Proteinase K (2 mg/ml) DNase I (2 U/μl) 10 DNase I Buffer 操作流程 A rxn 1.25 ml 100 μl 20 μl 40 μl 5 μl 100 μl A rxn ml 250 μl 50 μl 100 μl 13 μl 260 μl 石蜡切片冰冻切片贴壁细胞悬浮细胞 脱蜡和水化 通透 ( 蛋白酶 K) 固定 细胞涂片 / 爬片 固定 通透 (Triton X-100/ 蛋白酶 K) 洗涤样本 2-3 次 平衡 ( 室温,10-30 min) 标记 (37,60 min) 1 PBS 1 Equilibration Buffer: 100 μl A rxn ml μl 2 50 μl μl 25 μl 500 μl 样 本 预 处 理 ddh 2 O 34 μl 5 Equilibration Buffer 10 μl FITC-12-dUTP Labeling Mix 5 μl Recombinant TdT Enzyme 1 μ 图 1. 果蝇三龄幼虫视盘 (eye disc) 凋亡诱导基因 Hid 终止 / 洗涤 1 PBS 在特异性启动子驱动下在果蝇视盘的远端诱导出大量 凋亡细胞 A. TUNEL 染色, 标记凋亡细胞 染色 ( 室温复染 5 min) PI/DAPI 选 做 B. ELAV 染色, 标记所有的感光细胞 洗涤样本 2-3 次 1 PBS C. Merge 分析样品 TUNEL FITC Apoptosis Detection Kit 20 rxn 50 rxn 100 rxn A A A ,580 2,680 4,

155 细胞凋亡 TUNEL BrightGreen Apoptosis Detection Kit 更亮 更稳定的绿色荧光 专利的 Bright 因子, 使得荧光更亮, 抗淬灭能力更强 高活性的重组 TdT 酶保证荧光掺入效率 适用于细胞爬片 石蜡切片和冰冻切片 保存条件 :-20 保存 ;BrightGreen Labeling Mix 避光保存 产品概述 TUNEL BrightGreen Apoptosis Detection Kit 是 TUNEL FITC Apoptosis Detection Kit (A111) 的升级版本 试剂盒中的 BrightGreen Labeling Mix 包含 FITC-12-dUTP 以及专利的 Bright 因子 这种独特的小分子化合物可与 FITC 非共价结合, 增强其稳定性, 并使其信号放大, 从而使标记物更亮, 抗淬灭能力更强 BrightGreen 在强激光下连续照射 6 min, 仍可以保持很强的荧光强度 5 Equilibration Buffer BrightGreen Labeling Mix Recombinant TdT Enzyme Proteinase K (2 mg/ml) DNase I (2 U/μl) 10 DNase I Buffer A rxn 1.25 ml 100 μl 20 μl 40 μl 5 μl 100 μl A rxn ml 250 μl 50 μl 100 μl 13 μl 260 μl A rxn ml μl 2 50 μl μl 25 μl 500 μl 性能展示 操作流程 石蜡切片冰冻切片贴壁细胞悬浮细胞 图 1. 小鼠肝脏组织 组织切片经 DNase I 处理后 TUNEL 染色 A-C 分别为 BrightGreen 染色后于紫外光 (460 nm) 下照射 1 min 3 min 6 min 后拍照 D-F 分别为 FITC 染色后于紫外光 (460 nm) 下照射 1 min 3 min 6 min 后拍照 脱蜡和水化 通透 ( 蛋白酶 K) 固定 细胞涂片 / 爬片 固定 通透 (Triton X-100/ 蛋白酶 K) 洗涤样本 2-3 次 平衡 ( 室温,10-30 min) 1 PBS 1 Equilibration Buffer: 100 μl 样本预处理 细胞 / 蛋白系列 标记 (37,60 min) dh 2 O 5 Equilibration Buffer BrightGreen Labeling Mix Recombinant TdT Enzyme 34 μl 10 μl 5 μl 1 μ 终止 / 洗涤 1 PBS 染色 ( 室温复染 5 min) 洗涤样本 2-3 次 PI/DAPI 1 PBS 选 做 分析样品 TUNEL BrightGreen Apoptosis Detection Kit 20 rxn 50 rxn 100 rxn A A A ,780 3,080 4,

156 细胞凋亡 TUNEL BrightRed Apoptosis Detection Kit 更亮 更稳定的红色荧光 专利的 Bright 因子, 使得荧光更亮, 抗淬灭能力更强 高活性的重组 TdT 酶保证荧光掺入效率 适用于细胞爬片 石蜡切片和冰冻切片 保存条件 :-20 保存 ;BrightRed Labeling Mix 避光保存 产品概述本试剂盒采用 TUNEL (TdT mediated dutp Nick End Labeling) 法, 应用末端脱氧核糖核苷酸转移酶 (TdT) 在凋亡细胞断裂的 DNA 的 3 - 羟基 (3 -OH) 末端催化掺入四甲基罗丹明 - 脱氧三磷酸尿苷 (TMR red-dutp) 试剂盒对标记反应进行了优化, 采用最佳比例的 TMR red-dutp 和未标记 dntp 进行 3 -OH 末端的核苷酸掺入, 使得同一个断裂的 DNA 片段末端可以形成更长的 标记尾巴 该 标记尾巴 减少了相邻掺入 dntp 上标记基团的空间位阻, 增加每个断裂片段上的荧光基团数目, 降低荧光基团相邻后可能造成的聚集和淬灭, 从而提高检测灵敏度, 减少非特异性反应 试剂盒中的 BrightRed Labeling Mix 包含 TMR red-dutp 以及专利的 Bright 因子 这种独特的小分子化合物可与 TMR red 非共价结合, 增强其稳定性, 并使其信号放大, 从而使标记物更亮, 抗淬灭能力更强 性能展示 5 Equilibration Buffer BrightRed Labeling Mix Recombinant TdT Enzyme Proteinase K (2 mg/ml) DNase I (2 U/μl) 10 DNase I Buffer 操作流程 A rxn 1.25 ml 100 μl 20 μl 40 μl 5 μl 100 μl A rxn ml 250 μl 50 μl 100 μl 13 μl 260 μl 石蜡切片冰冻切片贴壁细胞悬浮细胞 脱蜡和水化 通透 ( 蛋白酶 K) 固定 细胞涂片 / 爬片 固定 通透 (Triton X-100/ 蛋白酶 K) A rxn ml μl 2 50 μl μl 25 μl 500 μl 样 本 预 处 理 细胞 / 蛋白系列 图 1. 人肝细胞 WRL-68 阳性处理后产生的凋亡 洗涤样本 2-3 次 平衡 ( 室温,10-30 min) 标记 (37,60 min) 1 PBS 1 Equilibration Buffer: 100 μl ddh 2 O 5 Equilibration Buffer BrightRed Labeling Mix Recombinant TdT Enzyme 34 μl 10 μl 5 μl 1 μ A. TUNEL BrightRed 染色, 箭头所指为凋亡细胞 终止 / 洗涤 1 PBS B. Merge, 蓝色为 DAPI 标记所有细胞 染色 ( 室温复染 5 min) DAPI 选 做 洗涤样本 2-3 次 1 PBS 分析样品 TUNEL BrightRed Apoptosis Detection Kit 20 rxn 50 rxn 100 rxn A A A ,780 3,080 4,

157 细胞凋亡 Annexin V-FITC/PI Apoptosis Detection Kit 早期凋亡检测的首选 绿色荧光标记 兼容流式细胞仪和荧光显微镜检测 保存条件 :4-8 保存, 长期不用可将 Annexin V-FITC 保存在 -20 产品概述 在正常细胞中, 磷脂酰丝氨酸 (PS) 只分布在细胞膜脂质双层的内侧, 而在细胞凋亡早期, 细胞膜中的磷脂酰丝氨酸 (PS) 由脂膜内侧翻向外侧 Annexin V 是一种分子量为 kda 的 Ca 2+ 依赖性磷脂结合蛋白, Annexin V-FITC PI Staining Solution 1 Binding Buffer A rxn 250 μl 250 μl 25 ml A rxn 500 μl 500 μl 2 25 ml 与磷脂酰丝氨酸有高度亲和力, 因此 Annexin V 被公 认为检测细胞早期凋亡的灵敏指标之一 操作流程 将 Annexin V 进行绿色荧光 (FITC) 标记, 以标记了的 Annexin V 作为探针, 利用荧光显微镜或流式细胞仪可 悬浮细胞 贴壁细胞 检测细胞凋亡的发生 碘化丙啶 (Propidium Iodide, PI) 是一种核酸染料, 它不能透过正常细胞或早期凋 亡细胞完整的细胞膜, 但对凋亡中晚期的细胞和坏死 收集细胞 300 g, 4,5 min 不含 EDTA 的胰酶消化 收集细胞 300 g, 4,5 min 细胞,PI 能够透过细胞膜而使细胞核染红 因此将 Annexin V 与 PI 匹配使用, 就可以将处于不同凋亡时 期的细胞区分开来 预冷 PBS 洗两遍, 收集细胞 300 g, 4,5 min 加入 100 μl 1 Binding Buffer 加入 5 μl Annexin V-FITC 和 5 μl PI Staining Solution 避光 室温反应 10 min 性能展示 加入 400 μl 1 Binding Buffer, 混匀, 检测 细胞 / 蛋白系列 PI 10 2 Cell Number 100 M1 M2 PI 10 2 Cell Number 100 M1 M Annexin V-FITC Annexin V-FITC Annexin V-FITC Annexin V-FITC A B 图 A. 未经喜树碱诱导的 Jurkat 细胞, 用 Annexin V-FITC 和碘化丙啶 (PI) 双染后流式二维图 ( 左 ) 与直方图 ( 右 ); 图 B. 用终浓度为 4 μm 的喜树碱诱导 Jurkat 细胞凋亡 4 h, 用 Annexin V-FITC 和碘化丙啶 (PI) 双染后流式二维图 ( 左 ) 以及直方图 ( 右 ) Annexin V-FITC/PI Apoptosis Detection Ki 50 rxn 100 rxn A A ,000 1,

158 细胞增殖检测 细胞增殖检测技术 检测细胞增殖能力的方法 : 一种是直接的方法, 通过直接测定进行分裂的细胞数来评价细胞的增殖能力 一种是间接的方法, 即 细胞活力 (cell viability) 检测方法, 通过检测样品中正常细胞的数目来评价细胞的增殖能力 直接计数 利用计数板或计数仪得出细胞的数目, 然后对数目进行比较 优点 : 缺点 : (1) 简单 : 不需要特定的试剂和仪器 (1) 不适合样品数量多的情况 (2) 准确 (2) 不适合评估特定的亚群 四唑盐 (MTT) 法细胞生长分析检测试剂盒 MTT 检测法主要反映细胞的能量代谢, 是检测细胞增殖活力的一种简便准确的方法 其原理是在活细胞生长和增殖过程中, 线粒体内的脱氢酶可将黄色的 MTT 分解成水不溶性的甲臜产物 (Formazan), 并沉积在细胞中, 死细胞无此功能 二甲基亚砜 (DMSO) 能溶解细胞中的甲臜产物, 用酶联免疫检测仪在 490 nm 波长处测定吸光值, 可间接反映活细胞数量 在一定细胞数范围内,MTT 结晶形成的量与细胞数和细胞活力成正比 MTT 方法用于判断药物 外源性基因 小 RNA 蛋白 抗体 细胞因子 血清等对于细胞的作用, 以明确上述因子对于细胞生物学行为的影响 ( 如细胞活力 增殖 凋亡等方面 ) 细胞 / 蛋白系列 WST-1 法细胞增殖分析试剂盒 WST-1 法检测的原理与 MTT 相似, 也是通过活细胞线粒体中的脱氢酶将外源性的 WST-1 剪切生成 Formazan, 在一定细胞范围内, 结晶物形成的量与活细胞数量成正比 用微孔读板机在 440 mm 处读出 OD 值 该方法同样用于检测在药物 生长因子 有丝分裂原等作用下, 细胞的生长增殖情况 CCK-8 细胞增殖分析试剂盒 CCK-8 法是一种基于 WST 8, 广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的快速 高灵敏度的检测方法 CCK-8 细胞活性检测试剂中含有 WST 8, 在电子耦合试剂存在的情况下, 可以被线粒体内的一些脱氢酶还原生成橙黄色的甲臜产物 Formazan 细胞增殖越多越快, 则颜色越深 ; 细胞毒性越大, 则颜色越浅 对于同样的细胞, 颜色的深浅和细胞数目呈线性关系 用酶联免疫检测仪在 450 nm 波长处测定其光吸收值, 可间接反映活细胞数量 该方法已被广泛用于一些生物活性因子的活性检测 大规模的抗肿瘤药物筛选 细胞增殖试验 细胞毒性试验以及药敏试验等 ATP 检测 细胞内的 ATP 含量受到了严格调控, 检测 ATP 也可以得到细胞增殖的信息 死亡细胞或即将死亡的细胞几乎不含 ATP, 在细胞溶解物或提取物中测得的 ATP 浓度与细胞数之间存在严格的线性关系 利用荧光素酶 luciferase 及其底物荧光素 luciferin 的 ATP 检测, 能够提供非常灵敏的结果 如果有 ATP, 存在荧光素酶就会发光, 而且其发光强度与 ATP 浓度成正比, 用能读取发光信号的光度计和酶标仪都可以方便的进行检测 这种方法非常适用于高通量细胞增殖检测和筛选

159 细胞增殖检测 CCK-8 Cell Counting Kit 即开即用, 灵敏低毒 操作简便 : 即开即用, 无需配制其他试剂 灵敏度高 : 灵敏度 线性相关性高, 重复性好 对细胞毒性极低 保存条件 :4 避光保存 产品概述 CCK-8 Cell Counting Kit, 简称 CCK-8 试剂盒, 是依赖于 WST-8 (2-(2- 甲氧基 -4- 硝苯基 )-3-(4- 硝苯基 )- 5-(2,4- 二磺基苯 )-2H- 四唑单钠盐 ) 而广泛应用于细 CCK-8 Solution A rxn (10 μl/rxn) 5 ml A ,000 rxn (10 μl/rxn) 10 ml 胞增殖和细胞毒性检测的快速 高灵敏度 无放射性 的比色检测试剂盒 WST-8 在电子耦合载体 1-Methoxy PMS 的作用下可被线粒体内的一些脱氢酶还原成高度 水溶性的橙黄色甲臜产物 (Formazan), 生成的甲臜的 颜色深浅与细胞增殖成正比, 与细胞毒性成反比 使用酶标仪在 450 nm 波长处测得吸光值, 该测定值可 间接反映活细胞的数量 本试剂盒的 CCK-8 Solution 为即用型试剂, 可直接加入到细胞样品中, 孵育一定 时间后即可检测, 不需要预配各种成分 性能展示 CCK-8 检测悬浮 HEK293 细胞 操作流程 细胞悬浮液 R 2 = Absorbance (450 nm) R 2 = R 2 = Cell number per well (96-well) 绘制标准曲线细胞活性检测细胞增殖 / 毒性检测 细胞梯度稀释加 CCK-8 Solution 孵育加入待测药物培养 细胞 / 蛋白系列 T Y Vazyme 线性 (T) 线性 (Y) 线性 (Vazyme) 以 HEK293 悬浮细胞为样本铺 96 孔板, 单组三个复孔设 9 个细胞数梯度, 每组细胞数分别为 : / 孔, 以细胞数量对吸光值绘制标准曲线, 与其他公司同类产品相比,CCK-8 Solution 相关性为 R 2 > 0.99 加 CCK-8 Solution 孵育酶标仪检测加 CCK-8 Solution 孵育 酶标仪检测 酶标仪检测 CCK-8 Cell Counting Kit 500 rxn 1,000 rxn A A ,

160 细胞转染 细胞转染技术 瞬时转染与稳定转染 将 DNA 导入真核细胞有两种不同的方法 : 瞬时转染与稳定转染 在瞬时转染中, 重组 DNA 导入易感的细胞系, 目的基因产生短暂但高水平的表达, 转染的 DNA 不一定整合进入宿主染色体 当需要在短时间内分析大量的样品时, 瞬时转染是优先选择的方式 通常情况下, 在转染后 1~4 天收获细胞, 得到的细胞裂解物用于检测目的基因表达 稳定转染用于建立克隆细胞系, 此时转染的目的基因整合进入染色体 DNA 并指导目的蛋白的合成, 表达量通常为中等 一般而言 ( 取决于细胞类型 ), 形成稳定转染细胞的效率比瞬时转染要低 1~2 个数量级 采用可选择的遗传标记有利于从大量未转染的细胞中分离出少数的稳定转染体 物理方法 ( 显微注射 电穿孔及基因枪 ) (1) 显微注射法 (2) 电穿孔法 (3) 基因枪法 该法虽然费力, 但却是非常有效的将核酸导入细胞或细胞核的方法 这种方法常用来制备转基因动物, 但不适用于需要大量转染细胞的研究 利用高压电脉冲对细胞膜的干扰, 使其形成利于核酸进入的微孔 电穿孔技术可用于瞬时转染和稳定转染, 可方便地用于悬浮细胞, 重现性好, 但需要较多的细胞 该法依靠携带了核酸的高速粒子而将核酸导入细胞内, 这种方法适用于培养的细胞 化学转染法 细胞 / 蛋白系列 (1) 磷酸钙共沉淀转染法磷酸钙沉淀法是基于磷酸钙 -DNA 复合物的一种将 DNA 导入真核细胞的转染方法, 磷酸钙被认为有利于促进外源 DNA 与靶细胞表面的结合 磷酸钙 -DNA 复合物粘附到细胞膜并通过胞饮作用进入靶细胞, 被转染的 DNA 可以整合到靶细胞的染色体中从而产生有不同基因型和表型的稳定克隆 (2) DEAE- 葡聚糖法 最早应用哺乳动物细胞转染的试剂之一 DEAE- 葡聚糖是阳离子多聚体, 它与带负电的核酸结合后接近细胞膜而被摄取 DEAE- 葡聚糖转染已成功地应用于瞬时转染 (3) 脂质体转染法阳离子脂质体表面带正电荷, 能与核酸的磷酸根通过静电作用, 将 DNA 分子包裹入内, 形成 DNA- 脂质体脂复合物, 也能被表面带负电的细胞膜吸附, 再通过融合或细胞内吞进入细胞 脂质体转染适用于把 DNA 转染入悬浮或贴壁培养细胞中, 是目前实验室最方便的转染方法之一, 其转染率较高, 优于磷酸钙法 优化和特殊注意事项 无论采用何种方法将 DNA 导入细胞, 瞬时转染或稳定转染的效率很大程度上取决于采用的细胞类型 对一种类型的培养细胞效果 很好的方法可能对另一种细胞行不通 当采用其他细胞系时, 应注意比较几种不同方法的转染效率

161 细胞转染 Exfect Transfection Reagent 低毒性的高分子聚合物转染试剂 对多种细胞均有很好的转染效果, 结果重复性好 低细胞毒性 培养基可含或不含血清, 可以用 PBS 或无血清培养基稀释质粒, 转染过程中不需换液保存条件 : 4-8 C 保存, 不可冷冻 产品概述 Exfect Transfection Reagent 是一种基于生物可降解的高分子树枝状聚合物的转染试剂, 适用于多种细胞的 DNA 转染 由于所使用的活化树枝状聚合物具有均一的大小和确定的形状, 因此可实现高重复性的转染结果 Exfect Transfection Reagent 携带 DNA 进入细胞后, 可迅速释放 DNA, 并被快速降解, 极大的降低了对细胞的毒性 转染试剂 -DNA 复合物可以直接加入完全培养基中, 血清和抗生素不影响其转染效果, 转染前后都不需要更换培养基, 操作十分简便 T T Exfect Transfection Reagent 1 ml 4 1 ml 性能展示 HEK293 HepG-2 MCF-7 NIH 3T3 操作流程 细胞接种 Lipo2000 无血清培养基分别稀释 DNA 和转染试剂, 孵育 5-10 min Lipo3000 Exfect Lipo2000 HCT-116 WRL-68 A549 HeLa 与细胞共孵育 2-4 h 后换新鲜培养基 ( 可选 ) 转染试剂滴加到质粒 DNA 中, 孵育 min 将 DNA 复合物与细胞共孵育 h 不换液 细胞 / 蛋白系列 Lipo3000 荧光显微镜观察 Exfect 使用本品及商用 lipofectamine 系列产品转染 pegfp-c1 质粒至 HEK293 HepG-2 MCF-7 NIH 3T3 HCT-116 WRL-68 A549 以及 HeLa 细胞 24 h 后, 绿色荧光蛋白表达情况 所有转染均在 24 孔板中进行, 转染质粒量为 1 μg/ 孔 Exfect Transfection Reagent 1 ml 4 ml T T ,680 5,

162 细胞转染 Exfect 2000 Transfection Reagent 高效 低毒 抗血清转染试剂 转染效率高, 在多种细胞上均有较高转染效率 细胞毒性低, 对细胞的正常生理状态损害较小 支持共转染体系, 可同时高效转染若干种质粒 保存条件 :4-8 C 保存, 不可冷冻 产品概述 Exfect2000 是一种基于阳离子脂质体的高效转染试剂, 适用于 DNA 的转染及共转体系, 对大多数真核细胞 ( 贴壁或悬浮 ) 具有很高的转染效率 独特的结构及配方, 使得血清和抗生素的存在不会影响转染效率, 从而减少去除血清对细胞的影响 细胞转染后,24-48 h 内无需去除核酸 -Exfect2000 复合物或更换培养基 T T T ExFect2000 Transfection Reagent 0.5 ml 1 ml 5 ml 性能展示 操作流程 CHOK1 HEK293 NIH3T3 WRL68 Exfect2000 Day 0 接种细胞, 待细胞汇合度达到 60%-80% 时进行转染 CELL Lipo2000 Lipo3000 分别用 opti-mem 稀释 DNA 和转染试剂, 轻柔混匀 细胞 / 蛋白系列 Day 1 将稀释的 DNA 滴加至稀释的转染试剂中 (1:1), 轻柔混匀 室温, 孵育 5 min Mix 5 min 将 DNA- 转染试剂复合物滴加至细胞中, 置于细胞培养箱中培养 5-10 min 使用各种试剂在 24 孔板中转染 CHOK1 HEK293 NIH3T3 和 WRL68 细胞, 转染 24 h 后分析 GFP 的表达 在四种细胞系中,Exfect2000 试剂均比 Lipo2000 和 Lipo3000 试剂具有更高的转染效率 Day 2-4 对细胞进行后续实验处理 Exfect 2000 Transfection Reagent 0.5 ml 1 ml 5 ml T T T ,098 1,870 8,

163 支原体检测 / 清除 支原体检测 / 清除技术 支原体是一种大小仅为 μm, 无细胞壁, 可透过一般过滤膜 ( μm) 的原核生物 在细胞长期培养过程中经常出现且不易消除, 据调查及研究显示, 实验室 30%-60% 细胞都被支原体污染过, 因而细胞培养过程中被支原体污染是一个世界性的难题 支原体污染初期, 高倍镜下观察细胞无明显变化, 但有细小黑色颗粒 ; 随培养时间延长, 尽管培养液不浑浊, 但 ph 值变化明显 颜色变黄, 在污染后期引起细胞变形, 对后续科研产生严重影响, 因此在细胞培养过程中进行支原体检测与防治十分必要 常见的支原体检测方法有直接培养法和间接法, 其中间接法包括 DNA 染色法 聚合酶链式反应 (polymerase chain reaction, PCR) 法及恒温法等 支原体检测技术 电子显微镜观察电镜中可看到支原体的多种增殖方式 : 有像细菌一样的二分裂繁殖 ; 有像毛膜病毒那样的出芽繁殖方式 多分布在细胞周围和细胞间隙, 有的直接吸附在细胞表面膜上 ; 在细胞基质内未见支原体存在 该技术快速 简便 省时省力, 但敏感性不够高, 能作为筛查方法, 而对于可疑或阳性的细胞株, 需要用其他方法检测鉴定 培养法此法是将待测细胞株的上清液接入特定液体培养基, 经过 4-7 天的 37 培养, 根据培养基 PH 值的变化来判定结果 但因培养基 PH 值受内外干扰较多, 仍需进行第二步培养, 即将上步培养液接入固体培养基中, 继续培养 如果确有支原体污染, 则会有典型的 荷包蛋 式菌落长出 DNA 染色法利用荧光试剂 Hoechst33258 标记细胞和支原体 DNA, 在紫外光 ( 波长为 630 nm) 激发下产生黄绿色荧光, 利用荧光显微镜观察支原体是否存在 正常细胞核区见边缘整齐清晰的荧光, 胞质区无荧光 支原体污染的细胞不仅在细胞核而且在细胞核外及细胞膜上均可见散在荧光 该方法操作较为简便, 但轻度污染不易检出, 可能由于细胞碎片染色被误认为是支原体染色所致造成假阳性或由于支原体污染较轻而造成假阴性 一般要求培养无污染的指示细胞作为对照 细胞 / 蛋白系列 PCR 法根据常见污染细胞的支原体的保守序列 16S rrna 设计引物, 经过合适的 PCR 反应程序后, 电泳, 判定最终结果 PCR 检测的最大优点是快捷, 通常 2 h 左右即可得出结果 目前基于 PCR 检测的研究主要集中在如何更好去除抑制物 设计引物 优化 PCR 程序等 此种方法主要问题在于容易造成假阴性和假阳性结果, 对于重要样品的结果判定还需依赖于培养法和 DNA 染色法 恒温法恒温法是采用独特的等温扩增技术 使用非常简单, 只需要吸取 1 μl 细胞培养上清加入到反应体系中, 在恒定温度中孵育 1 h 若细胞培养物被支原体污染, 支原体 DNA 的保守序列会被等温 DNA 聚合酶特异性扩增, 使反应液颜色发生变化, 肉眼观察, 即可判定结果 恒温法检测灵敏度 准确性远远高于 PCR 法

164 支原体检测 / 清除 支原体污染的去除方法 一般情况下, 一经发现有支原体污染, 最好是及时灭活丢弃 但对于一些珍贵细胞系等被污染后还应难免会考虑将支原 体清除 以下列举了最常用的四种方法 : 1 抗生素处理法抗生素处理目前是最有效 实验室最常用的一种方法 由于支原体没有细胞壁, 所以培养细胞时通常加入的那些抗生素如青链霉素等对其杀伤效果不大 目前市场针对支原体污染的抗生素主要有 BM-cyclin MC-210 M-lasmocin 等 用抗生素处理污染的细胞株时会出现一些问题, 如处理周期比较长 有一定的复发率 2 加热处理法 支原体在 56 条件下,30 s 内半数死亡 ; 在 45 环境中,15 min-30 min 内全部死亡 将污染了的细胞培养物持续加热, 依据 支原体种类的不同, 加热时间亦有所不同, 直至支原体死亡, 培养细胞虽然也会发生形态的变化, 但降到正常温度后可复原 3 巨噬细胞吞噬法 此法适用于救治支原体严重污染的各种珍贵细胞株, 一般经过连续几轮的巨噬细胞吞噬处理后, 即可消除污染并恢复细胞活力 但由于要经过小鼠腹腔, 所以有带入鼠类病毒污染的可能性 4 多肽法 它能够破坏支原体膜结构并直接毒杀支原体, 而不是抑制其增殖, 这样的作用原理使其能够有效地杀灭支原体这种抗生素不敏 感的污染物 细胞 / 蛋白系列

165 支原体检测 / 清除 Myco-Blue TM Mycoplasma Detector 一台水浴锅就可以快速完成支原体的日常检测 取 1 μl 培养上清直接检测, 不需要样品预处理 颜色区分明显, 无弱阳性 / 假阴性 产物不需要电泳, 避免出现假阳性 准确性媲美 qpcr 法, 优于 PCR 法 保存条件 :-20 保存 产品概述 Myco-Blue TM Mycoplasma Detector 是专门针对细胞培养物的支原体污染快速检测试剂, 其核心为 Vazyme 独特的等温扩增技术 Myco-Blue TM Mycoplasma Detector 使用非常简便, 只需吸取 1 μl 细胞培养上清加入到反应体系中, 在 60 孵育 1 h 若细胞培养物被支原体污染, 支原体 DNA 的保守序列会被等温 Myco-Blue Buffer Myco-Blue Enzyme Positive Control 石蜡油 D rxn 480 μl 20 μl 10 μl 500 μl D rxn 1.2 ml 50 μl 25 μl 1.25 ml DNA 聚合酶特异性扩增, 使反应液由紫色变成天蓝色, 肉眼观察, 即可判定结果 无需 PCR 仪 /qpcr 仪, 操作流程 无需电泳, 在细胞房内就可以轻松完成 非常适合于生物制药企业 疫苗生产企业 单抗生产企业 细胞治疗 / 胚胎实验室以及科研实验室的日常支原体检测 配制反应体系 Myco-Blue Buffer Myco-Blue Enzyme 单次反应体积 (μl) 24 1 样品数 a 1.1 b a. 可根据需要, 每次实验加上一个阴性对照 一个阳性对照 ; b. 移液器存在移液误差, 多出的 10% 是为了保证分装时每管都能分到足够的量 取 1 μl 待测培养上清放入反应管,60 孵育 60 min, 观察颜色变化 ; 具体操作 下图 : 细胞 / 蛋白系列 性能展示 qpcr 结果 ( 阳性用拷贝数 (copies/μl 上清 ) 表示, 阴性用 - 表示 ) PCR 结果 Myco-Blue TM 结果 随机挑选 16 个细胞培养物, 用三种方法检测支原体, 对结果进行比较 Myco-Blue TM Mycoplasma Detector 20 rxn 50 rxn D D

166 支原体检测 / 清除 Myco-Off TM Mycoplasma Cleaner 更快 更高效清除支原体污染 可直接杀死支原体, 而非抑制其生长 只需 3-7 天即可获得很好的支原体清除效果 低细胞毒性, 适用于多种常见细胞系及原代细胞 保存条件 :-20 保存 产品概述 Myco-Off TM Mycoplasma Cleaner 是最新一代的支原体清除试剂, 主要用于清除细胞 血清 培养基中的支原体 本产品与通常使用的抗生素不同, 其清除原理是通过破坏支原体的膜结构, 引发支原体破裂死亡 ; 能有效的清除抗生素耐受型支原体, 而不产生耐药性 ; 对于常见的革兰氏阴性和阳性菌也有一定的抑制作用 使用本产品 3-7 天, 便可以完全清除细胞内和细胞外的支原体, 而且 4 个月内无支原体的二次污染 Myco-Off TM Mycoplasma Cleaner 能够清除大部分种类的支原体, 而对细胞本身无毒 ; 适用于目前常用的细胞系如小鼠胚胎干细胞或 ips 细胞 人胚胎干细胞或 ips 细胞 HEK293 HeLa HepG2 HCT116 COS-7 Vero Huh-7 MDCK PANC-1 SW620 与 U2OS 等 D D D Myco-Off Mycoplasma Cleaner 100 μl μl μl 操作流程 (1)Myco-Off Mycoplasma Cleaner 稀释 : 用新鲜细胞培养液按 1:1000 稀释本产品, 现 用现配, 不可存放 (2) 弃掉细胞培养液, 加入稀释好的 Myco-Off Mycoplasma Cleaner (3) 正常情况下,3 天内能够成功清除支原体 (4) 处理后的细胞培养物需要用本公司的支原体检测试剂盒 (Vazyme #D101) 检测支原 体是否彻底清除 (5) 当支原体彻底清除后, 应用无清除试剂的培养基培养细胞 细胞 / 蛋白系列 Myco-Off TM Mycoplasma Cleaner 100 μl 500 μl 1,000 μl D D D ,050 5,

167 双萤光素酶检测 双萤光素酶检测技术 报道基因系统简介 报道基因可以作为细胞转录活性的指示剂, 因而报道基因系统常被用于分析基因的调控元件 标准的重组方法一般是将感兴趣的调控序列与报道基因或表达载体上的标签相连接 然后将此重组体导入合适的细胞系中, 通过测量报道基因的蛋白或分析报道基因的酶相关催化活性来测定它的表达 一个理想的报道基因既要在感兴趣的细胞中没有内源性表达, 又要易于对其检测, 检测方法要兼顾敏感性 可定量 快速化 可重复性和安全性 在这些条件下, 转染的细胞群中报道蛋白的活性与稳态的 RNA 水平大致上是成比例的 双萤光素酶检测原理某些萤光素酶检测系统包括两种物种的萤光素酶, 它们具有不同生化特性和 / 或不同底物 另外, 每种萤光素酶都由不同的载体表达 若用一种萤光素酶作为 对照组, 则另一种即为 实验报告组 对照组萤光素酶的表达用于对实验报告组的结果标准化, 如变异的细胞数或转染效率 当把对照组的载体与实验组的载体共转染时, 对照组的报道基因由组成型启动子驱动 另一种情况是同一质粒表达出两种萤光素酶, 这种情况下实验组基因与萤火虫萤光素酶相连, 组成型真核启动子与对照萤光素酶相连 最常用的双报道基因是检测萤火虫和花虫的萤光素酶活性 这些萤光素酶使用不同的底物 ( 萤火虫和花虫的萤光素酶的底物分别是甲虫萤光素和 coelantrazine), 因此根据各自的酶活特性, 可以将这些萤光素酶的活性进行区分 这种方法需要每个样本依次加入两种试剂, 并在每次加入试剂后均检测所发出的荧光 在加入可以产生稳定萤光信号的化学试剂之后, 萤火虫萤光素酶的活性被第一个检测 随后加入第二种化学试剂, 在淬灭萤火虫萤光素酶活性的同时, 激活海肾萤光素酶的反应 在加入这个试剂 1 s 时间内, 萤火虫萤光素酶的淬灭速度至少是伴随着的海肾萤光素酶激活速度的 10 5 倍 ( 这里的淬灭指的是剩余荧光强度 0.001%) 这个试剂同样可以稳定海肾萤光素酶信号, 使得在测量过程中信号的衰减速度降低 这个方法快速 灵敏 特异性强, 两种报道基因在任何检测的宿主细胞中不存在内源活性, 萤火虫萤光素酶线性检测灵敏度可 1fg( 约 mol), 海肾萤光素酶活性的检测灵敏度可达约 30 g( 约 mol) 两个完全独立的萤光素酶活性同时被检测, 而两者的萤光强度的比值可以作为报道基因活性的检测方法 细胞 / 蛋白系列 图 : 由萤火虫和 Renilla 萤光素酶催化的生物发光

168 双萤光素酶检测 双萤光素酶检测流程 在培养的细胞中加入 cell Lysis buffer 加入萤火虫萤光素酶反应液 检测萤光虫萤光素发光 加入海肾萤光素酶反应液 检测腔肠素发光 离心取上清液 注意事项 共转的质粒中的启动子的反式作用很有可能影响报道基因的表达, 尤其是当启动子的活性很强的时候 在实验前优化转染混合物中载体 DNA 的量和报道基因的比例是一个十分明智的做法 萤火虫萤光素酶和海肾萤光素酶检测实验的敏感性, 以及荧光光度计检测的宽大线性范围 ( 一般有 5~6 个数量级 ) 可以精确测定差距很大的实验组和对照组的荧光光度值 因此, 可以加入相对少量的对照组报道基因来得到一个低水平和组成性表达的对照组萤光素酶活性 (1) 如果细胞裂解后不能立即对提取物进行检测, 样品可以在冰上保存大约 5 个小时, 在 -70 可保存数月 (2) 在萤光素酶活性较高的情况下, 导致信号超出线性范围, 可用裂解液将样品进行稀释 (3) 一些荧光仪在进行检测前需要 1-2 秒的稳定, 因此, 我们建议在开机后过一段时间再进行检测操作 细胞 / 蛋白系列

169 双萤光素酶检测 Dual Luciferase Reporter Assay Kit 双萤光检测 结果更可靠 萤光信号强 检测范围宽 灵敏度高 保存条件 : -20 保存 ; 溶解分装后的 Luciferase Substrate 可于 -80 长期保存, 或 -20 短期保存不超过 1 个月 产品概述 Dual Luciferase Reporter Assay Kit 用于检测报告质粒转染细胞后 Luciferin 底物萤光强度, 从而反映萤光素酶的表达量, 达到检测基因调控的目的 首先以萤光素 (Luciferin) 为底物检测萤火虫萤光素酶 (Firefly luciferase), 后以腔肠素为底物检测海肾萤光素酶 (Renilla luciferase), 实现双萤光素酶报告基因检测 双萤光素酶检测试剂盒通过检测萤火虫萤光素酶活性, 评价调控元件受刺激物诱导的作用强弱 ;Renilla luciferase 作为校正转染效率的内参, 消除孔间细胞数量和转染效率的差异, 确保结果可靠 性能展示 5 Cell Lysis Buffer Reaction Buffer II (Luciferase) Luciferase Substrate (Lyophilized) Stop & Reaction Buffer (Renilla) Renilla Substrate 操作流程 在培养的细胞中加入 cell Lysis buffer 离心取 20 μl 上清液 DL rxn 10 ml 10 ml 1 vial ( 小瓶 ) 10 ml 200 μl 加入 100 μl 萤火虫萤光素酶反应液 分别构建 Firefly luciferase 表达载体及 Renilla luciferase 表达载体, 共同转染 HEK293 细胞 使用不同公司试剂盒裂解细胞并检测 Luciferin 及 Coelenterazine 萤光强度 结果显示 :Vazyme 的双萤光素酶检测试剂盒中两种底物的萤光强度与 P 公司一致, 均显著高于 T/B/Y 公司同款产品 检测萤光虫萤光素发光 加入 100 μl 海肾萤光素酶反应液 细胞 / 蛋白系列 用细胞裂解液将萤火虫萤光素酶梯度稀释到 mol~10-18 mol, 使用 Vazyme 的 Dual Luciferase Reporter Assay Kit 检测 Luciferin 萤光强度, 线性关系达到 8 个数量级 (R 2 >0.99), 检测灵敏度可低至 mol 检测腔肠素发光 Dual Luciferase Reporter Assay Kit 100 rxn DL ,

170 Western Blot 试剂 Western Blot 技术 1975 年,Southern 建立了将 DNA 转移到硝酸纤维素膜 (NC 膜 ) 上, 并利用 DNA - DNA 杂交检测特定的 DNA 片段的方法, 称为 Southern 印迹法 而后人们用类似的方法, 对 RNA 和蛋白质进行印迹分析, 对 RNA 的印迹分析称为 Northern 印迹法, 对单向电泳后的蛋白质分子的印迹分析称为 Western 印迹法 收集蛋白样品 提取细胞或组织蛋白, 多是利用将细胞裂解 破碎 使蛋白质释放的原理 对于 Wertern Blot 实验来说, 获得好的 蛋白样品是最关键的步骤 检测蛋白浓度 Western Blot 作为一项半定量实验技术, 电泳前, 必须尽量使各组之间总蛋白量基本一致 ; 蛋白质总量不足可能妨碍对目的蛋白的鉴定 ; 蛋白质含量太高则影响此电泳方法的分辨力 ; 基于以上两方面原因, 在进行蛋白电泳之前, 先要对提取的总蛋白进行含量测定 目前常用的有五种经典的方法 : 即定氮法 双缩脲法 (Biuret 法 ) BCA 紫外吸收法以及考马斯亮蓝法(Bradford 法 ) 其中 Bradford 法和 BCA 法灵敏度最高, 比紫外吸收法灵敏 10~20 倍, 比 Biuret 法灵敏 100 倍以上 定氮法虽然比较复杂, 但较准确, 往往以定氮法测定的蛋白质作为其他方法的标准蛋白质 细胞 / 蛋白系列 在选择方法时应考虑 : 1 实验对测定所要求的灵敏度和精确度 ;2 蛋白质的性质 ;3 溶液中存在的干扰物质 ;4 测定所要花费的时间 电泳 (1) SDS-PAGE 凝胶配制 SDS 聚丙烯酰胺凝胶的有效分离范围取决于灌胶的聚丙烯酰胺的浓度和交联度 ;SDS 聚丙烯酰胺凝胶的有效分离范围如下表 : 分子量在 15 KD 以下的蛋白, 在电泳中的迁移率会异常 主要是他们 的电荷质比和大的蛋白质不同 可以用蛋白质尿素胶部分解决 丙烯酰胺浓度 (%) 线性分离范围 /KD (2) 样品处理 在收集的蛋白样品中加入适量浓缩的 SDS-PAGE 蛋白上样缓冲液

171 Western Blot 试剂 (3) 上样与电泳 将蛋白冷却至室温后, 直接上样到 SDS-PAGE 胶加样孔内即可 电泳时可以采用恒压的方式, 通常把电压设置在 100V, 然后设定时间为 90 min-120 min 设置定时可以避免经常发生的电泳 过头, 通常电泳时溴酚蓝到达胶的底端附近即可停止电泳 (4) 转膜凝胶电泳结束后, 将凝胶上分离的蛋白条带通过转移电泳方式转印至固相支持物上, 常用的固相支持物有 NC( 硝酸纤维素 ) 膜 尼龙膜及 PVDF( 聚偏二氟乙烯 ) 膜 价格便宜硝酸纤维素酶 (NC) 简单快速封闭非特异性抗体结合膜的选择需要用甲醇浸泡聚偏二氟乙烯膜 (PVDF) 价格昂贵 具体的转膜时间要根据目的蛋白的大小而定, 目的蛋白的分子量越小, 需要的转膜时间越短, 目的蛋白的分子量越大, 需要的转 膜时间越长 在转膜过程中, 通常会有非常严重的发热现象, 最好把转膜槽放置在冰浴中进行转膜 (5) 封闭转膜完毕后, 立即把蛋白膜放置到预先准备好的 Western 洗涤液中, 漂洗 1 min-2 min, 洗去膜上的转膜液 从转膜完毕后所有的步骤, 一定要注意膜的保湿, 避免膜的干燥, 否则极易产生较高的背景 吸尽洗涤液, 加入 Western 封闭液, 在摇床上缓慢摇动, 室温封闭 60 min 对于一些背景较高的抗体, 可以在 4 封闭过夜 (6) 一抗孵育按照适当比例用 Western 一抗稀释液稀释一抗 吸尽封闭液, 立即加入稀释好的一抗, 室温或 4 在摇床上缓慢摇动孵育 1 h 如果 1 h 效果不佳, 可以在 4 缓慢摇动孵育过夜 加入 Western 洗涤液, 缓慢摇动洗涤 5 min-10 min 吸尽洗涤液后, 再加入洗涤液, 洗涤 5 min-10 min 共洗涤 3 次 如果背景较高可以适当延长洗涤时间并增加洗涤次数 细胞 / 蛋白系列 (7) 二抗孵育按照适当比例用 Western 二抗稀释液稀释辣根过氧化物酶 (HRP) 标记的二抗 吸尽洗涤液, 立即加入稀释好的二抗, 室温或 4 在摇床上缓慢摇动孵育 1 h 加入 Western 洗涤液, 缓慢摇动洗涤 5 min-10 min 吸尽洗涤液后, 再加入洗涤液, 洗涤 5 min-10 min 共洗涤 3 次 如果背景较高可以适当延长洗涤时间并增加洗涤次数 (8) 蛋白检测 1)DAB 显色 : 灵敏度低, 现在基本不用 2) 化学发光 ( Chemiluminescence): 指的是利用底物被二抗体的 HRP 分解时生成的有色物对目的蛋白的有无及蛋白量进行检测 (9) 图像分析 将胶片进行扫描或拍照, 用凝胶图象处理系统分析

172 Western Blot 试剂 高敏型 ECL 化学发光检测试剂盒 ( 即用型 ) 灵敏, 锁定你的目的蛋白 高质量的 Western 显影试剂 抗淬灭能力强 优化的配方, 增强发光强度 兼容胶片曝光和 CCD 扫描 保存条件 :2-8 避光保存 如果长期不用, 可以 -20 避光保存 产品概述本试剂盒以化学发光方法检测蛋白质或核酸类生物大分子 蛋白质或核酸类生物大分子在电泳后转移到印迹膜上, 分别用一抗和辣根过氧化物酶 (horseradish peroxidase,hrp) 标记的二抗顺序结合膜上的目的蛋白 ; 或以 HRP 标记的探针直接或间接结合膜上的目的核酸 洗膜后用新鲜配制的 ECL 工作液, 在室温下避光孵育膜 2 min-3 min, 将印迹膜用保鲜膜包被粘贴固定于 X 光片曝光暗盒, 然后转入暗室将 X 光胶片压在膜上曝光时长可为数秒到数小时 显影定影后蛋白质或核酸条带可清晰显示在 X 光胶片上, 也可不进行 X 光胶片曝光显影步骤, 直接对印迹膜进行 CCD 扫描 本试剂盒采用了独特的发光底物系统, 有效降低曝光背景 提高检测灵敏度, 并在检测持久性和信噪比方面与 ECL 增强型发光试剂盒 (Vazyme #E411) 相比有显著改善 ECL Substrate A Peroxide Solution B 操作流程 WB 二抗反应 E ml 50 ml 50 ml PBST 或 TBS/TBST 洗涤二抗 配制 ECL 工作液 ECL 工作液均匀滴加至印迹膜, 孵育 2 min-3 min E ml 250 ml 250 ml 弃去 ECL 工作液 细胞 / 蛋白系列 将印迹膜置于二层保鲜膜之间 放于 X 光胶片暗盒内, 曝光 性能展示 (ng/ul) (ng/ul) Vazyme Vazyme T 公司 M 公司 B ( 极超敏 ) Q 公司 B ( 特超敏 ) 图 1. 不同品牌的 ECL 试剂进行 Western 检测结果本实验设置了 4 个不同浓度梯度的蛋白质,Vazyme 的高敏型 ECL 化学发光试剂的检测灵敏度 发光强度 持久性均显著优于竞品试剂 图 2. 不同品牌的 ECL 试剂进行 Western 检测结果 本实验设置了 3 个不同浓度梯度的蛋白质,Vazyme 的高敏型 ECL 化学发光试剂的检测灵敏度 发光强度 持久性均显著优于竞品试剂 高敏型 ECL 化学发光检测试剂盒 ( 即用型 ) 2 50 ml (A/B) ml (A/B) E E ,

173 Western Blot 试剂 增强型 ECL 化学发光检测试剂盒 高质量的 Western 显影试剂 高质量的 Western 显影试剂 优化的配方, 增强发光强度 抗淬灭能力强 保存条件 :2-8 C 保存 产品概述 本试剂盒以化学发光方法检测蛋白质或核酸类生物大分子 其原理是, 蛋白质或核酸在电泳后转移到印迹膜上, 以一抗及辣根过氧化物酶 HRP 标记的二抗结合膜上的目的蛋白, 或以 HRP 标记的探针直接或间接结 Buffer A (20 ) Buffer B (20 ) E ml 5 ml 5 ml E ml 10 ml 10 ml E ml 25 ml 25 ml 合膜上的核酸 洗膜后用本产品配制的 ECL 工作液, 在可见光下室温孵育膜数分钟, 将印迹膜用保鲜膜包 E ml E ml E ml 被粘贴固定于 X 光片曝光暗盒 然后转入暗室将 X 光胶片压在膜上曝光数秒到数分钟至数小时 显影定影 Buffer A (2 ) Buffer B (2 ) 30 ml 30 ml 60 ml 60 ml 250 ml 250 ml 后蛋白质或核酸条带可清晰显示在 X 光胶片上 也可 不进行 X 光胶片曝光直接对印迹膜进行 CCD 扫描 操作流程 WB 二抗反应 PBST 洗涤二抗 配制 ECL 工作液 ECL 工作液均匀滴加至印迹膜, 孵育 1 min-2 min 弃去 ECL 工作液 将印迹膜置于二层保鲜膜之间 细胞 / 蛋白系列 放于 X 光胶片暗盒内, 曝光 增强型 ECL 化学发光检测试剂盒 5 ml (20 A/B) 10 ml (20 A/B) 25 ml (20 A/B) E E E ,500 增强型 ECL 化学发光检测试剂盒 ( 即用型 ) 30 ml (2 A/B) 60 ml (2 A/B) 250 ml (2 A/B) E E E ,

174 蛋白定量 Bradford Protein Quantification Kit 高灵敏的蛋白定量试剂 检测蛋白的灵敏度高, 操作简便 线性关系好 稳定性好,BSA 标准蛋白更纯 保存条件 :2 Bradford Reagent 2 ~8 保存,BSA Standard -30 ~-15 保存 产品概述 Bradford 法 ( 考马斯亮蓝法 ), 是目前灵敏度最高的蛋白质浓度测定方法之一 当 Bradford 染色液 ( 考马斯亮蓝 G250) 和蛋白在酸性条件下结合时, 溶液颜色由棕黑色转为蓝色, 最大吸光值波长由 456 nm 转为 595 nm, 吸光值与蛋白质的含量在一定浓度范围内有较好的线性关系 通过测定吸光值大小并对照标准蛋白的吸光值, 推算出蛋白浓度, 实现了蛋白浓度测定的快速, 稳定和高灵敏度 Bradford 染色液为 2 倍浓缩母液, 便于储存 BSA Standard (1 mg/ml) 2 Bradford Reagent 操作流程 1. 取一块酶标板, 按下表数据加入试剂 : E rxn 2 1 ml 50 ml 孔号 蛋白标准 (μl) 去离子水 (μl) Bradford Reagent (μl) 对应的蛋白含量 (μg) E ,000 rxn 2 1 ml 100 ml 2. 振荡混匀后, 室温放置 5 min-10 min 3. 用酶标仪测定 A595 nm 处的吸光值, 以不含 BSA 的光吸收值为空白对照 4. 以蛋白含量 (μg) 为横坐标, 吸光值为纵坐标, 绘制标准曲线 细胞 / 蛋白系列 5. 样品测定 : 将待测蛋白样品用去离子水稀释至适当浓度 取 10 μl 样品, 加入 100 μl 2 Bradford Reagent 和 90 μl 的去离子水, 混匀后放置 5 min-10 min, 然后以 0 号孔为对照, 测定样品在 A595 nm 处的吸光值 6. 根据测得的吸光值, 在标准曲线上即可查得样品的蛋白含量 7. 计算蛋白浓度 : 以查得的蛋白含量除以样品体积 10 μl, 再乘以相应的稀释倍数即可得到待测样品的实际浓度 Bradford Protein Quantification Kit 500 rxn 1,000 rxn E E

175 蛋白定量 Detergent Compatible Bradford Protein Quantification Kit 通用型蛋白定量试剂 检测蛋白的灵敏度高, 操作简便 线性关系好 对去垢剂有很强的耐受性, 可兼容很高浓度的去垢剂 保存条件 :Bradford Reagent 2 ~8 保存,BSA Standard -30 ~-15 保存 产品概述 Bradford 法 ( 考马斯亮蓝法 ), 是目前灵敏度最高的蛋白质浓度测定方法之一 当 Bradford 染色液 ( 考马斯亮蓝 G250) 和蛋白在酸性条件下结合时, 溶液颜色由棕黑色转为蓝色, 最大吸光值波长由 456 nm 转为 595 nm, 吸光值与蛋白质的含量在一定浓度范围内有较好的线性关系 通过测定吸光值大小并对照标准蛋白的吸光值, 推算出蛋白浓度, 实现了蛋白浓度测定的快速, 稳定和高灵敏度 本试剂通过研发升级, 对蛋白提取中常见的去垢剂有很高的耐受性 本试剂盒和常规的 Bradford 蛋白浓度测定试剂盒相比, 可以兼容一系列常见的去垢剂, 克服了 Bradford 法对去垢剂敏感的缺点 ; 和 BCA 法相比, 能够兼容高浓度的还原剂, 并且检测速度极快, 在检测含去垢剂样品蛋白浓度时, 更加快捷 BSA Standard (20 mg/ml) Bradford Reagent 操作流程 1. 取一块酶标板, 按下表数据加入试剂 : 孔号 G F E D C B A 蛋白标准 (μl) Bradford Reagent (μl) 对应的蛋白含量 (μg) 振荡混匀后, 室温放置 5 min-10 min 3. 用酶标仪测定 A595 nm 处的吸光值, 以不含 BSA 的光吸收值为空白对照 E rxn 2 1 ml 150 ml 4. 以蛋白含量 (μg) 为横坐标, 吸光值为纵坐标, 绘制标准曲线 6. 样品测定 : 将待测蛋白样品用去离子水稀释至适当浓度 取 10 μl 样品, 加入 300 μl Bradford Reagent, 混匀后放置 5 min-10 min, 然后以 0 号孔为对照, 测定样品在 A595 nm 处的吸光值 7. 根据测得的吸光值, 在标准曲线上即可查得样品的蛋白含量 8. 计算蛋白浓度 : 以检测的样品蛋白的吸光值为 Y 值, 带入标曲方程计算出 X 的值即为样品蛋白浓度 细胞 / 蛋白系列 Detergent Compatible Bradford Protein Quantification Kit 500 rxn E

176 蛋白定量 BCA Protein Quantification Kit 精准 快速的蛋白定量试剂 灵敏度高 兼容性广 标准曲线线性关系高 保存条件 :BCA Reagent A/B 2-8 C 保存,BSA Standard C 保存 产品概述 BCA 蛋白浓度测定试剂盒 (BCA Protein Quantification Kit), 是目前灵敏度最高的蛋白质测定方法之一 在碱性条件下, 蛋白质将 Cu 2+ 还原为 Cu +,Cu + 与独特的 BCA Reagent A( 含有 BCA) 相互作用产生敏感的颜色反应, 形成紫色的络合物 该水溶性的复合物在 A562 nm 处显示强烈的吸光性, 吸光度和蛋白质浓度在广泛范围内有良好的线性关系, 根据吸光值可以推算出蛋白浓度 因此, 使用酶标仪测定其在 A562 nm 处的吸收值, 并与标准曲线对比, 即可计算待测蛋白的浓度 常用浓度的去垢剂 SDS,Triton X-100,Tween-20 等不影响检测结果, 但受螯合剂 (EDTA,EGTA) 还原剂 (DTT, 巯基乙醇 ) 和脂类的影响 实验中, 若发现样品稀释液或裂解液本身背景值较高, 可使用 Bradford 蛋白浓度测定试剂盒 BSA Standard (1 mg/ml) BCA Reagent A BCA Reagent B 操作流程 E rxn 2 1 ml 50 ml 1 ml 标准品绘制 : 取一块酶标板, 按下表数据加入试剂 : E rxn 孔号 蛋白标准 (μl) 去离子水 (μl) BCA 工作液 (μl) 对应的蛋白含量 (μg) 反应颜色 : 4 1 ml 100 ml 2 1 ml 细胞 / 蛋白系列 标准曲线 BCA Protein Quantification Kit 250 rxn 500 rxn E E

177 Vazyme 基础科研试剂 基因编辑系列产品 体外转录 T7 High Yield RNA Transcription Kit T7 RNAi Transcription Kit 基因编辑 Cas9 Nuclease T7 Endonuclease I

178 基因编辑系列 基因编辑技术 基因编辑技术能够让人类对目标基因进行 编辑, 从而实现对特定 DNA 片段的敲除 加入等 在过去几年中, 以 ZFN (zinc-finger nucleases) 和 TALEN (transcription activator-like effector nucleases) 为代表的序列特异性核酸酶技术以其能够高效率地进行定点基因组编辑, 在基础研究 基因治疗和遗传改良等方面展示出了巨大的潜力 但是, 由于 ZFN 和 TALEN 技术本身所存在的多种技术瓶颈, 这两种技术并不能实现快速发展并满足各种科研和临床需求 CRISPR/Cas9 技术自问世以来, 就有着其它基因编辑技术无可比拟的优势, 技术不断改进后, 更被认为能够在活细胞中最有效 最便捷地 编辑 任何基因 与 ZFN 和 TALEN 技术相比, 其成本低 制作简便 快捷高效的优点, 让它迅速风靡于世界各地的实验室, 成为科研 医疗等领域的有效工具 体外转录技术 转录通常发生在生物体内, 如果我们用 DNA 作为模板, 加入 RNA 转录酶 NTP 等原料, 在体外无细胞系统中模仿体内转录过 程生成 RNA, 这样的技术则能够控制转录的基因 转录的过程和转录后 RNA 的用途, 该技术被称为体外转录 应用 (1) RNA 结构与功能研究 (2) RNA 酶保护 (3) 探针杂交 (4) 显微注射 (5) 体外翻译 (6) 基因编辑 合成目的 RNA 用于研究 RNA 结构或者与蛋白互作合成与目的 RNA 相互互补的 RNA RNA 探针合成 mrna 合成 mrna 在体外或者细胞内表达相应的蛋白合成 sgrna 基因编辑系列 (7) RNAi 合成长片段的 dsrna 或者 sirna 选购指南 产品 应用 特点 T7 High Yield RNA Transcription Kit 合成 ssrna 只包含转录试剂, 需自备纯化模块 体外转录试剂盒 T7 RNAi Transcription Kit 合成 dsrna/sirna 试剂盒中配有的 RNA 磁珠可快速高效 的纯化转录产物

179 体外转录 T7 High Yield RNA Transcription Kit 用于体外 RNA 合成 优化的反应体系 每个反应产生高达 μg 的 RNA 产物 保存条件 :-20 保存 产品概述 T7 High Yield Transcription Kit 是优化的体外转录试剂盒,T7 RNA Polymerase 从模板 DNA T7 的启动子下游开始合成与 DNA 中一条链互补的 RNA, 简单快速获得大量的 RNA 分子, 转录时可在底物中加入修饰的核苷酸, 制备生物素或染料标记的 RNA 本试剂盒以 0.5 μg 的模板投入量可以产生 150 μg-200 μg 的 RNA, 转录合成的 RNA 可用于诸如 RNA 结构与功能研究 RNA 酶保护 探针杂交 RNAi 显微注射及体外翻译等多方面的下游应用 T7 RNA Polymerase Mix 10 Reaction Buffer ATP Solution UTP Solution GTP Solution CTP Solution DNase I Control Template (0.5 μg/μl) RNase-free H 2 O TR rxn 100 μl 100 μl 100 μl 100 μl 100 μl 100 μl 50 μl 10 μl 1 ml TR rxn 200 μl 200 μl 200 μl 200 μl 200 μl 200 μl 100 μl 20 μl 2 1 ml T7 启动子 转录起始位点 5'-TAATACGACTCACTATAGGG 3'-ATTATGCTGAGTGATATCCC -3' A 链 -5' B 链 反应体系 ( 非修饰 RNA 体系 ) 5 -GGG 转录 -3' B 链互补 RNA 体积 性能展示 μg RNA/Reaction μg RNA/Reaction RNA 转录方案 Template DNA (/ng) 模板 (1.4 kb) 投入量与产量的关系 kb kb kb Reaction time (/minutes) 反应时间与产量的关系 10 Reaction Buffer ATP Solution GTP Solution UTP Solution CTP Solution DNA 模板 T7 RNA Polymerase Mix RNase-free H 2 O 操作流程 取各反应振荡离心, 冰上备用按上表配置反应体系混匀各, 短暂离心,37 孵育 2 h 加入 1 μl 的 DNase I,37 孵育 15 min 合成的 RNA 经电泳分析 纯化后, 用于下游实验 可选 2 μl 2 μl 2 μl 2 μl 2 μl x μl 2 μl up to 20 μl 基因编辑系列 0.3 kb 0.8 kb 2 kb 3 kb 5 kb 10 kb 不同长度转录产物电泳图 T7 High Yield RNA Transcription Kit 50 rxn 100 rxn TR TR ,300 4,

180 体外转录 T7 RNAi Transcription Kit 用于体外 dsrna 合成 可以转录 sirna 和长片段 dsrna 产量高达 μg 试剂盒中配有的 RNA 磁珠可快速高效的纯化转录产物 保存条件 :Box 1 于 -20 保存,Box 2 于 4 保存 产品概述 T7 RNA ploymerase 可识别带有 T7 启动子的 DNA 模版, 以四种 NTP 为底物, 体外转录合成 RNA T7 RNAi Transcription Kit 是在 T7 High Yield RNA Transcription Kit 基础上为转录双链 RNA 而设计优化的版本, 可用于转录 21 bp 的 sirna 和长片段的 dsrna 转录产物经纯化后可用于阳离子脂质体 磷酸钙共沉淀 电穿孔 DEAE- 葡聚糖及显微注射等方法介导的 RNAi 实验 一般情况下, 一个反应可产生 20 μg-80 μg 的 RNA Box 1 T7 Enzyme Mix 10 Transcription Buffer 10 Annealing Buffer NTP Mix DNase I RNase T1(100 U/μl) RNase T1 Dilution Buffer Control Template* TR rxn 50 μl 50 μl 250 μl 200 μl 25 μl 25 μl 300 μl 5 μl TR rxn 100 μl 100 μl 500 μl 400 μl 50 μl 50 μl 600 μl 10 μl 性能展示 500 bp dsrna 2% 琼脂糖凝胶电泳图 RNase-free H 2 O 5 ml Box 2 RNA Clean Beads 2 ml * 本试剂盒提供的 Control Template 为 500 bp 双端含 T7 启动子的 PCR 产物, 浓度为 0.5 μg/μl 5 ml 4 ml M 操作流程 基因编辑系列 750 bp 500 bp M:DL2,000 Plus DNA Marker; 1 和 3: 分别为 500 bp dsrna 酶解前后产物 ( 双端转 ); 2 和 4: 分别为 500 bp dsrna 酶解前后产物 ( 混合转 ) sirna 12% PAGE 电泳检测结果 sirna 干扰绿色荧光蛋白表达 1:siRNA 转录产物 ; 2:siRNA 转录双酶消化产物 ; 3: 单链模板 ; 4: 双链退火模板 转录长链的 dsrna 单端启动子模板制备 双端启动子模板制备 转录 sirna 模板 1 模板 2 模板 3 PCR 扩增体外转录模板示意图 Oligonucleotides A1 5 -GATCAC Oligonucleotides A2 3 -CTAGTG UU-3 正义链 5 -GGG TT-3' AA-5' 5 -AA 3 -TT 转录 模板 1 5 -GGG -3-3 模板 3 5 -GGG 退火杂交 酶解 GGG ds RNA 转录实验流程 UU -3 反义链 模板 2 转录 -3 反义链 GTGATC-3' Oligonucleotides B1 CACTAG-5' Oligonucleotides B2 5 -GATCAC TT-3' 5'-AA GTGATC-3' 模板 1 3 -CTAGTG AA-5' 3'-TT CACTAG-5' 模板 2 转录转录 正义链 5 -GGG 退火 5 -GGG 退火 退火杂交 左图为 GFP 质粒与 negative control GFP sirna 共转染 24 h 后 的 293T 细胞 ; 右图为 GFP 质粒和 positive GFP sirna 共转染 24 h 后的 293T 细胞 5 -GGG UU UU GGG-5' 酶解 UU UU sirna sirna 转录示意图 T7 RNAi Transcription Kit 25 rxn 50 rxn TR TR ,350 2,

181 基因编辑 Cas9 Nuclease 高纯度高活性的 Cas9 蛋白 保存条件 :-20 保存 产品概述 本产品是克隆 Streptococcus pyogenes 的 Cas9 基因后在大肠杆菌中表达纯化的高纯度 Cas9 活性蛋白 Cas9 Nuclease 是一个 RNA 导向的序列特异性双链 DNA 内切酶 向导 RNA 通过与靶序列互补来识别靶 Cas9 Nuclease Cas9 Nuclease Reaction Buffer (10 ) EN (50 pmol) 50 µl 1 ml EN (250 pmol) 250 µl 1 ml 位点, 并将 Cas9 Nuclease 带到靶 DNA 上 Cas9 Nuclease 有两个切割活性中心, 分别切割靶 DNA 的 体系 两条链从而产生 DNA 双链断裂 切割位点为靶向区域内与 NGG(PAM) 相距三个碱基处 Nuclease-free water Cas9 Nuclease Reaction Buffer (10 ) 300 nm sgrna 1 µm Cas9 Nuclease 总体积 20 µl 3 µl 3 µl 1 µl 27 µl 性能展示 操作流程 Cas9 Nuclease 将上述体系 37 孵育 10 min 加入 3 µl DNA( 30 nm) sgrna 震荡混匀, 短暂离心 M1 DNA only DNA+ sgrna+ DNA+ Cas9 Nuclease Cas9 Nuclease DNA+ sgrna M2 37 孵育 1 h Input DNA: 10,937 bp Fragment 1: 8,050 bp Fragment 2: 2,887 bp 检测反应产物 琼脂糖凝胶电泳分析 10,937 bp 双链 DNA 片段被 Cas9 Nuclease 体外切割后的结果 M1: DL15,000 DNA Marker, M2: DL5,000 DNA Marker 适用范围 体外 sgrna 效率验证, 可在体外进行基因组改造 基因编辑系列 Cas9 Nuclease 50 pmol 250 pmol EN EN ,

182 基因编辑 T7 Endonuclease I T7 核酸内切酶 I 检测灵敏度高 产物可直接电泳检测 保存条件 :-20 保存 产品概述 T7 Endonuclease I 是克隆重组 T7 核酸内切酶 I (T7 Endonuclease I) 基因后在大肠杆菌中表达纯化的高活性蛋白, 能识别并切割不完全配对 DNA 十字型结构 DNA Holliday 结构或 DNA 分叉点 异源双链 DNA 及低速切割带切割位点的双链 DNA 该酶切割位点为错配 5 端的第一 第二或第三个磷酸二酯键 性能展示 T7 Endonuclease I T7 Endonuclease I Reaction Buffer(10 x ) Control template 体系 EN U 25 μl 1 ml 10 μl 阳性细胞阴性细胞阳性对照 EN ,250 U 125 μl 1 ml 20 μl 无模板对照 靶细胞 PCR 产物 (200 ng) 阴性细胞 PCR 产物 (200 ng) Control template T7 Endonuclease I Reaction Buffer(10 x) Nuclease-free Water x µl 0 µl 0 µl 2 µl To 19 µl 0 µl x µl 0 µl 2 µl To 19 µl 0 µl 0 µl 2 µl 2 µl To 19 µl 0 µl 0 µl 0 µl 2 µl To 19 µl 操作流程 PCR 扩增带有突变位点的 DNA 片段 按上表配制反应体系 在 PCR 中进行如下退火程序 基因编辑系列 M 实验组对照组 Input DNA:656 bp Fragment 1:378 bp Fragment 2:278 bp 95 5 min /sec /sec 4 在退火产物中加 1 μl 的 T7 Endonuclease I 37 孵育 15 min 加 1.5 μl 的 0.25 M EDTA 终止酶切反应 电泳检测酶切产物 T7 Endonuclease I 250 U 1,250 U EN EN ,

183 Vazyme 基础科研试剂 速溶颗粒系列产品 1 PBS 速溶颗粒 (PH 7.4) 1 TAE 速溶颗粒 (PH 8.3) 1 TBE 速溶颗粒 (PH 8.5)

184 速溶颗粒系列 速溶颗粒 速溶 方便 精准 稳定的常用缓冲液预配料 简单快速 稳定高效 无需计算 称量 调节 PH 等繁琐过程, 即取即用 规模化全自动生产流程, 生物与只要相结合生产工艺, 极大保证产品稳定性和均一性 保存条件 : 常温 产品概述即用型速溶颗粒系列产品在生物与制药相结合的基础上, 通过技术创新和生产工艺的改造升级, 实现了规模化的全自动生产流程, 极大的提升了产品的稳定性, 确保实验的可重复性 其应用在常规的实验中, 使实验者摆脱天平 称量纸 PH 仪的束缚, 能够极大的节省时间, 快速高效的开展实验 使用方法 1 取一包预配产品, 加至 1L ddh 2 O 中, 充分搅拌混匀, 即为 1 缓冲液 ; 2 高压灭菌后备用 速溶颗粒系列 1 PBS 速溶颗粒 (PH 7.4) 10 1L G TAE 速溶颗粒 (PH 8.3) 10 1L G TBE 速溶颗粒 (PH 8.5) 10 1L G

185 Vazyme NGS 文库构建系列 NGS 文库构建系列 DNA-seq VAHTS TM Universal DNA Library Prep Kit for Illumina V3 (ND607) TruePrep TM DNA Library Prep Kit V2 for Illumina (TD501/502/503) VAHTS TM AmpSeq Library Prep Kit V2 (NA201) VAHTS TM AmpSeq General Library Prep Kit V2 (NA203) VAHTS TM AmpSeq Cancer HotSpot Panel (NA102) VAHTS TM Mate Pair Library Prep Kit for Illumina V2 (ND105) RNA-seq VAHTS TM mrna-seq V3 Library Prep Kit for Illumina (NR611) VAHTS TM Stranded mrna-seq Library Prep Kit for Illumina V2 (NR612) VAHTS TM Total RNA-seq (H/M/R) Library Prep Kit for Illumina (NR603) VAHTS TM Small RNA Library Prep Kit for Illumina (NR801) 单细胞扩增 Discover-sc Single Cell Kit (N601) Discover-sc Single Cell Kit V2 (N602) Discover-sc WTA Kit V2 (N711)

186 Vazyme NGS 文库构建系列 NGS 文库构建系列 模块与单酶原料 Phanta Uc Super-Fidelity DNA Polymerase for Library Amplification (P507) VAHTS TM Universal End preparation Module for Illumina (N203) VAHTS TM Universal Adapter Ligation Module for Illumina (N204) VAHTS TM HiFi Amplification Mix (N616) VAHTS TM mrna Capture Beads (N401) VAHTS TM 2 Frag/Prime Buffer (N402) Ribo-off TM rrna Depletion Kit (Human/Mouse/Rat) (N406) Ribo-off TM rrna Depletion Kit (Bacteria) (N407) T4 DNA polymerase (N101) T4 Polynucleotide Kinase (N102) T4 DNA ligase (Rapid) (N103) DNA polymerase I Klenow fragment (N104) DNA polymerase I Klenow fragment exo- (N105) Phi29 MAX DNA Polymerase (N106) 分离与检测 VAHTS TM DNA Clean Beads (N411) VAHTS TM RNA Clean Beads (N412) VAHTS TM Library Quantification Kit for Illumina (NQ ) Equalbit TM dsdna HS Assay Kit (EQ111) Equalbit TM RNA HS Assay Kit (EQ211) Equalbit TM RNA BR Assay Kit (EQ212) VAHTS TM Blood Collection Tube for cell-free DNA Preservation (N901) VAHTS TM Serum/Plasma Circulating DNA Kit (N902)

187 NGS 文库构建系列 NGS 文库构建系列 生命科学产品目录 Vazyme NGS 文库构建试剂 产品总图 常规快速流程 DNA 文库构建方案 VAHTS TM Universal DNA DNA 文库构建方案 基于转座酶的超快速 DNA 文库构建方案 TruePrep TM Series 多重扩增文库构建方案 VAHTS TM AmpSeq Mate-Pair DNA 文库构建方案 VAHTS TM Mate Pair 常规转录组建库方案 VAHTS TM mrna-seq RNA 文库构建方案 链特异性转录组建库方案 VAHTS TM Stranded mrna-seq 去除 rrna 的建库方案 VAHTS TM Total RNA-seq 小 RNA 建库方案 VAHTS TM Small RNA-seq 单细胞扩增 单细胞基因组扩增方案 Discover-sc Single Cell 单细胞转录组扩增方案 Discover-sc WTA 片段化模块 末端修复加 A 尾模块 接头与扩增引物 模块及单酶原料 连接模块 文库扩增富集 mrna 捕获磁珠 Ribo-off TM 核糖体 RNA (rrna) 去除试剂盒 ( 原核 / 真核 ) DNA 纯化 分选磁珠 RNA 纯化磁珠 分离与检测 文库定量系列 (qpcr 定量 ) 文库定量系列 (Qubit 定量 ) 游离 DNA 的保存及提取 NGS 文库构建系列

188 DNA-seq NGS 文库构建系列 生命科学产品目录 二代测序 (NGS) 文库制备试剂 高质量的文库是保障二代测序实验成功的必要前提 随着二代测序的样品类型的增加及应用范围的不断拓展, 文库制备的试剂盒 也需要不断地进行扩充和完善 为了满足用户需求, 诺唯赞一直致力于 Illumina 测序平台建库试剂的升级和拓展 质量控制 试剂盒中提供的所有试剂都经过严格的质量控制和功能验证, 最大程度上保证了文库构建的稳定性和重复性 便捷性 诺唯赞建库系列产品提供多种规格的包装 诺唯赞可提供完整工作流程所需的所有试剂 试剂盒具有最快速和最精简的实验流程, 并兼容最宽的样品类型与起始量范围 多样性 除了提供建库流程所需的完整试剂盒外, 各产品还可以单模块形式销售, 以供自由组合使用 为了满足您在前沿研究或其他方面的特殊需求, 诺唯赞可提供定制流程与产品, 详情请与 联 系 DNA 文库构建方案 DNA 产品选择 Vazyme 提供行业领先的 DNA 文库构建产品, 包括常规文库构建试剂 基于转座酶法的文库构建试剂 Mate-Pair 文库构建试剂 扩增子文库构建试剂以及其他全面的配套产品, 可为高通量测序客户提供文库构建的完整解决方案, 可广泛应用于医学检测 科 学研究等各个领域 NGS 文库构建系列 Vazyme 长期致力于产品品质的提升, 通过对酶的改造与整体优化, 赋予产品以高成功率 易操作的特点 丰富的产品种类和服 务形式让不同需求的客户有了更加灵活的选择

189 DNA-seq NGS 文库构建系列 生命科学产品目录 基因组 de novo 测序 VAHTS TM Mate Pair Library Prep Kit for Illumina V2 ND105 基因组测序 转座酶法 TruePrep TM DNA Library Prep Kit V2 for Illumina TD501~TD503 基因组重测序 常规方法 VAHTS TM Universal DNA Library Prep Kit for Illumina V3 ND607 DNA 测序 ChIP-seq VAHTS TM Universal DNA Library Prep Kit for Illumina V3 ND607 ATAC-seq TruePrep TM DNA Library Prep Kit V2 for Illumina TD501~TD503 TruePrep TM DNA Library Prep Kit V2 for Illumina TD501~TD503 目标区域捕获 VAHTS TM Universal DNA Library Prep Kit for Illumina V3 VAHTS TM AmpSeq Library Prep Kit V2 ND607 NA201 VAHTS TM AmpSeq General Library Prep Kit V2 NA203 常规文库构建 VAHTS TM DNA Adapters set1 for Illumina VAHTS TM DNA Adapters set2 for Illumina VAHTS TM DNA Adapters set3 - set6 for Illumina VAHTS TM Multiplex Oligos set4 for Illumina VAHTS TM Multiplex Oligos set5 for Illumina N801-01/02 N802-01/02 N805/N806/N807/N808 N321 N322 配套接头 转座酶法文库构建 TruePrep TM Index Kit V2/V3 for Illumina TruePrep TM Index Kit V4 for Illumina TD202/TD203 TD204/TD205/TD206/TD207 扩增子文库构建 VAHTS TM AmpSeq Adapters 1-96 for Illumina VAHTS TM AmpSeq Adapters 1-96 for Ion Torrent NA111 NA121 常规法 DNA 文库制备实验流程 : DNA 片段化末端修复 3' 末端加 da 尾接头连接 PCR 扩增及纯化 NGS 文库构建系列

190 DNA-seq NGS 文库构建系列 生命科学产品目录 VAHTS TM Universal DNA Library Prep Kit for Illumina V3 高效的 DNA 文库快速制备试剂盒 建库耗时短 建库效率高 样本兼容性广 模板兼容范围宽 数据质量佳 单个文库构建最短仅需 75 min 文库转化率和扩增产出双提升兼容 gdna,ffpe,cfdna,amplicons 等样本适用于 100 pg-4 μg Input DNA 高效建库优秀的覆盖度和均一度 产品概述 操作流程 VAHTS TM Universal DNA Library Prep Kit for Illumina V3 是针对 Illumina 测序平台优化而成的快速 高效的 DNA 文库构建试剂盒, 试剂采用 Mix 形式, 使建库操 5 3 Input DNA 3 5 作简单 快捷,2.5 h 内即可成功构建文库 VAHTS TM Universal DNA Library Prep Kit for Illumina V3 通过 对末端修复模块 连接模块和文库扩增模块的整体改 进, 使文库转化率和扩增文库产出大幅提升, 进一步提高起始量的兼容性 (100 pg-4 μg), 同时兼容多种模板类型 (gdna,ffpe,cfdna,amplicons 等 ), 可无缝衔接靶向捕获流程 试剂盒中提供的所有试剂都经过了严格的质量控制和功能验证, 最大程度上保证 End Preparation 了文库构建的稳定性和重复性 性能展示更高的分子多样性 5 T A Adapter Ligation A T 3 以等量的片段化 DNA 为模板, 参照各公司建库流程构建 PCR-Free 文库, 再进行 qpcr 文库定量 VAHTS TM Universal DNA Library Prep Kit for Illumina V3(#ND607) 相比同类产品和上一代产品 (#ND606) 在文库转化率上表现更优越, 确保了文库的丰富度 5 P5 3 Library Amplification PCR-Free Library ends here 5 IX P VAHTS DNA Adapter for IIIumina Compatible T DNA ChIP-DNA RNA (non-small RNA) T 5' Phosphate 3' da Tail 3' da Tail IX, Index P5 sequence P7 sequence NGS 文库构建系列

191 DNA-seq NGS 文库构建系列 生命科学产品目录 VAHTS TM Universal DNA Library Prep Kit for Illumina V3 卓越的文库扩增效率 以等量的片段化 DNA 为模板, 参照各公司建库流程进行文库构建, 再用 Qubit 进行文库定量 结果表明 VAHTS TM Universal DNA Library Prep Kit for Illumina V3 (#ND607) 在相同的循环数下比同类产品及上一代产品 (#ND606) 文库产量有了极大的提高, 可以有效的降低高循环数引入的扩增偏好性的可能 图 :VAHTS TM Universal DNA Library Prep Kit for Illumina V3 与同类型产品及 ND606 文库产出对比 完美兼容 FFPE cfdna 样本 以 cfdna 和不同质量的 FFPE 样本为模板, 参照各公司建库流程进行文库构建, 用 Qubit 法检测文库浓度,VAHTS TM Universal DNA Library Prep Kit for Illumina V3(#ND607) 在相同循环数下, 文库产出高于同类产品及上一代产品 (#ND606), 避免了稀有模板样本量不足的情况 业内领先的测序数据质量 图 :ND607 与同类型产品及 ND606 FFPE 和 cfdna 文库产出对比 Samples Clean_reads Clean_GC Q20 Q30 Dup Sequencing depth Mapping rate Coverage ND607 ND606 K N % 40.66% 41.45% 40.58% 95.00% 95.03% 95.07% 94.91% 89.25% 89.31% 89.36% 89.12% 15.70% 15.80% 15.03% 16.77% % 91.2% 92.9% 92.7% 99.65% 99.53% 99.66% 99.65% 以 500 ng 片段化拟南芥 gdna 为模板, 参照各公司建库流程进行文库构建, 使用 HiSeq X ten PE150 进行测序 结果显示,VAHTS TM Universal DNA Library Prep Kit for Illumina V3(#ND607) 在测序数据质量, 包括碱基分布和质量值分布, 与 K 产品 N 产品及上一代产品 ND606 相比表现更优越 搭配产品 样品质控 - Qubit 货号 :Equalbit TM dsdna HS Assay Kit (Vazyme #EQ111) 接头 货号 :VAHTS TM DNA Adapters set1/set2 for Illumina (Vazyme #N801/802) VAHTS TM DNA Multiplex Oligos set4/set5 for Illumina (Vazyme #N321/322) VAHTS TM DNA Adapters set3-set6 for Illumina (Vazyme #N805-N808) DNA Clean Beads 货号 :VAHTS TM DNA Clean Beads (Vazyme #N411) 文库定量 - Qubit 货号 :Equalbit TM dsdna HS Assay Kit (Vazyme #EQ111) 文库定量 - qpcr 货号 :VAHTS TM Library Quantification Kit for Illumina (Vazyme #NQ ) VAHTS TM Universal DNA Library Prep Kit for Illumina V3 VAHTS TM Universal DNA Library Prep Kit for Illumina V3 ( 不含扩增模块 ) 24 rxn 96 rxn 24 rxn 96 rxn ND ND ND ND ,600 18,000 5,400 17,000 NGS 文库构建系列

192 DNA-seq NGS 文库构建系列 生命科学产品目录 TruePrep TM DNA Library Prep Kit V2 for Illumina 基于转座酶的超快速 DNA 文库制备试剂盒 建库流程快速便捷 最低的起始需求量 多种规格自由选择 更高的建库通量 扩增反应高度均一 单个样品建库时间少于 90 min 单管酶促反应, 片段化和加接头反应同时进行建库起始 DNA 量最低仅需 1 ng 根据起始 DNA 量分类, 提供共计 3 种不同规格试剂盒适用于自动化建库平台文库扩增专用聚合酶, 配以精心优化的反应缓冲, 最大程度上保证了文库扩增的高效性和均一性 产品概述 TruePrep TM Series 是针对 Illumina 高通量测序平台定向开发的专用试剂盒, 针对微量 DNA 样品有不同的规格可以选择 和传统文库构建方法相比, TruePrep TM 试剂盒采用新型的转座酶法进行 DNA 片段化, 将繁琐的 DNA 片段化 末端修复和接头连接反应等步骤简化为一步 10 min 的酶促反应, 显著降低了起始模板的投入量并缩短了文库构建时间 试剂盒中所有试剂都经过严格的质量控制和功能验证, 最大程度上保证了文库构建的稳定性和重复性 操作流程 TruePrep Tagment Enzyme Mix Adapter 1 Adapter 2 Tagmentation of input DNA P5 N5 Index 2 (i5) Strand Displacement and Limited-Cycle PCR Size-Selection and Purification Index 1 (i7) N7 P7 i5 Index Read Read 1 Sequencing Strategy i7 Index Read Read 2 NGS 文库构建系列 Adapter 1 and Adapter 2, two oligos embedded in TruePrep Tagment Enzyme P5 and P7, two universal PCR Primers N5 and N7, two index primers containing index 2 (i5) and index 1 (i7) respectively

193 DNA-seq NGS 文库构建系列 生命科学产品目录 TruePrep TM DNA Library Prep Kit V2 for Illumina 性能展示 文库质量分析 - 重测序 Library_Id Cluester_Num Clean_Base_Num Q20_Percent Q30_Percent Alignment_Percent Coverage_Percent (20 ) TruePrep-1 TruePrep-2 Nextera-1 Nextera ; ; ; ; ; ; ; ; % 98.20% 97.57% 98.14% 使用 TruePrep TM DNA Library Prep Kit V2 for Illumina (TruePrep-1 和 TruePrep-2) 以及 Nextera DNA Sample Preparation Kit (Nextera-1 和 Nextera-2) 制备 的 Ecoli.DH10B 基因组文库, 文库平均长度为 bp, 起始 DNA 量为 50 ng; 构建好的文库在 HiSeq 2500 上进行测序, 测序模式为 PE 150, 数据预 定量为 0.5 G/ 样品 ; 测序数据采用重测序比对方案进行分析, 参考基因组序列为 NCBI 提供的 Ecoli.DH10B 基因组序列 文库质量分析 -De Novo 测序 Library_Id Scaffold_ Num In Scaffold Contig_Num Total Scaffold _Length Average Scaffold _Length Longest Sacffold _Length N50 N90 Weak Points TruePrep-1 TruePrep-2 Nextera-1 Nextera 使用 TruePrep TM DNA Library Prep Kit V2 for Illumina (TruePrep-1 和 TruePrep-2)) 以及 Nextera DNA Sample Preparation Kit (Nextera-1 和 Nextera-2) 制备的 Ecoli.DH10B 基因组文库, 文库平均长度为 bp, 起始 DNA 量为 50 ng; 构建好的文库在 HiSeq2500 上进行测序, 测序模式 为 PE 150, 数据预定量为 0.5 G/ 样品 ; 测序数据采用 De Novo 拼接方案进行分析 搭配产品 样品质控 - Qubit 货号 :Equalbit TM dsdna HS Assay Kit (Vazyme #EQ111) 接头 货号 :TruePrep TM Index Kit V2 for Illumina (Vazyme #TD202) TruePrep TM Index Kit V4 for Illumina (Vazyme #TD204-TD207) TruePrep TM Index Kit V3 for Illumina (Vazyme #TD203) DNA Clean Beads 货号 :VAHTS TM DNA Clean Beads (Vazyme #N411) 文库定量 - Qubit 货号 :Equalbit TM dsdna HS Assay Kit (Vazyme #EQ111) 文库定量 - qpcr 货号 :VAHTS TM Library Quantification Kit for Illumina (Vazyme #NQ ) TruePrep TM DNA Library Prep Kit V2 for Illumina 24 rxn 96 rxn 24 rxn 96 rxn 24 rxn 96 rxn TD TD TD TD TD TD ,200 24,000 6,200 24,000 6,200 24,000 NGS 文库构建系列

194 DNA-seq NGS 文库构建系列 生命科学产品目录 VAHTS TM AmpSeq Library Prep Kit V2 多重 PCR 靶向测序文库制备试剂盒 数据均一度高 末端引物消化 双平台兼容 广泛的样本类型 模板起始量低 均一度 >95% 引物消化减少已知序列浪费兼容主流的 Illumina 和 Ion Torrent 平台 gdna FFPE DNA cfdna 样本起始模板投入量低至 1 ng 产品概述靶向测序是指利用新一代测序技术对特定基因组位点或区域进行深度分析, 针对性强, 测序深度高, 广泛应用于肿瘤检测 遗传易感性研究等领域 VAHTS TM AmpSeq Library Prep Kit V2 是在超多重 PCR 的基础上, 引入扩增子末端引物消化技术和专有的双平台接头技术等多个关键核心技术, 实现在单管内完成多重扩增 引物消化 接头连接等全套多步反应, 同时兼容 Ion Torrent 和 Illumina 双测序平台 相比于上一代产品, 本试剂盒在保证扩增子文库覆盖度和均一度的基础上, 对 FFPE cfdna 等复杂样本兼容性有了极大提高, 优化的多重扩增 Mix, 操作更简便, 结果更稳定 可靠 若 Panel 为非修饰引物, 请另购 VAHTS TM AmpSeq General Library Prep Kit V2 (Vazyme #NA203) 操作流程 Multiplex PCR Forward Primer Multiplex PCR Reverse Primer DNA Multiplex PCR Amplicons Digestion Digested Amplicons Adapters with barcode Ligation Library NGS 文库构建系列 性能展示 优秀的测序数据结果 Samples Reads Q30 (%) gdna- Vazyme gdna-t FFPE-Vazyme FFPE-T cfdna-vazyme cfdna-t 3,164,077 3,107,666 1,302,127 1,292, , , 分别以 gdna FFPE 和 cfdna 为模板, 使用 VAHTS TM AmpSeq Cancer HotSpot Panel 为引物,VAHTS TM AmpSeq Library Prep Kit V2 和 T 公司同 类产品进行文库构建, 采用 HiSeq X10 PE150 测序, 结果表明 Vazyme 和 T 公司的文库下机数据在 Mapped Rate(%),On-Target Rate(%),Target Coverage (%) 和 Uniformity(%) 等指标一致性良好 Average _ Depth Mapped _Rate(%) On-Target Rate (%) Target Coverage (%) Uniformity(%)

195 DNA-seq NGS 文库构建系列 生命科学产品目录 VAHTS TM AmpSeq Library Prep Kit V2 宽泛的样本 GC 兼容性 极高的 On-Target Rate 大量不同 GC 含量的扩增子在一个反应体系中同时扩增容易造成偏好性 用 VAHTS TM AmpSeq Cancer HotSpot Panel 为引物,VAHTS TM AmpSeq Library Prep Kit V2 扩增 207 个不同 GC 含量扩增子, 绝大多数扩增子测序深度均超过 20% 平均测序深度, 显示出卓越的 GC 兼容性 分别以 gdna FFPE 和 cfdna 为模板, 使用 VAHTS TM AmpSeq Cancer HotSpot Panel 为引物,VAHTS TM AmpSeq Library Prep Kit V2 和 T 公司同类产品进行文库构建, 分析 结果表明 :On-Target 比例均高于 95%, 且多次实验结果的一致性良好 卓越的数据均一性 以 gdna 为模板, 使用 VAHTS TM AmpSeq Cancer HotSpot Panel 为引物,VAHTS TM AmpSeq Library Prep Kit V2 和 T 公司同类产品进行文库构建, 分 析结果表明 :95% 以上扩增子的测序深度都超过了 20% 平均测序深度,Vazyme 的多重扩增建库试剂在均一性上与 T 公司产品表现基本一致 搭配产品样品质控 - Qubit 货号 :Equalbit TM dsdna HS Assay Kit (Vazyme #EQ111) 引物 panel 货号 :VAHTS TM AmpSeq Cancer HotSpot Panel (Vazyme #NA102) 接头 货号 :VAHTS TM AmpSeq Adapters 1-96 for Illumina (Vazyme #NA111) VAHTS TM AmpSeq Adapters 1-96 for Ion Torrent (Vazyme #NA121) DNA Clean Beads 货号 :VAHTS TM DNA Clean Beads (Vazyme #N411) 文库定量 - Qubit 货号 :Equalbit TM dsdna HS Assay Kit (Vazyme #EQ111) 文库定量 - qpcr 货号 :VAHTS TM Library Quantification Kit for Illumina (Vazyme #NQ ) VAHTS TM AmpSeq Library Prep Kit V2 VAHTS TM AmpSeq General Library Prep Kit V2 24 rxn 96 rxn 24 rxn 96 rxn NA NA NA NA ,600 30,000 7,500 26,000 NGS 文库构建系列

196 DNA-seq NGS 文库构建系列 生命科学产品目录 VAHTS TM AmpSeq Cancer HotSpot Panel 肿瘤相关热点基因引物 panel 产品概述 VAHTS TM AmpSeq Cancer HotSpot Panel 包含可用于扩增人类肿瘤相关基因热点突变区域的 207 个引物对, 产物覆盖共 50 个原癌基因和抑癌基因的 2800 个常见突变位点 本产品与 VAHTS TM AmpSeq Library Prep Kit V2 (Vazyme #NA201) 配合使用, 可对目标区域进行高均一性多重扩增子建库, 同时提供 VAHTS TM AmpSeq Adapters 1-96 for Illumina (Vazyme #NA111) 和 VAHTS TM AmpSeq Adapters 1-96 for Ion Torrent (Vazyme #NA121) 两种接头供不同测序平台选择 预混的引物 Panel 节约了研究者设计 准备引物的时间, 并适用于低至 10 ng 的起始 DNA 模板量和多种复杂模板, 如 FFPE 样本和 cfdna 使用本产品的扩增产物片段大小在 bp 之间 靶基因列表 ABL1 AKT1 ALK APC ATM BRAF CDH1 CDKN2A CSF1R CTNNB1 EGFR ERBB2 ERBB4 EZH2 FBXW7 FGFR1 FGFR2 FGFR3 FLT3 GNA11 GNAS GNAQ HNF1A HRAS IDH1 IDH2 JAK2 JAK3 KDR KIT KRAS MET MLH1 MPL NOTCH1 NPM1 NRAS PDGFRA PIK3CA PTEN PTPN11 RB1 RET SMAD4 SMARCB1 SMO SRC STK11 TP53 VHL 适用范围 与 VAHTS TM AmpSeq Library Prep Kit V2 (Vazyme #NA201) 或与其他同类扩增子建库试剂搭配使用, 供不同测序平台的文库构建 NGS 文库构建系列 VAHTS TM Ampseq Cancer HotSpot Panel 24 rxn NA ,

197 DNA-seq NGS 文库构建系列 生命科学产品目录 VAHTS TM Mate Pair Library Prep Kit for Illumina V2 从头测序 MP 文库制备试剂盒 起始 DNA 量可低至 1 μg-4 μg 更长的插入片段 更高的文库多样性和数据质量 胶回收方案和非胶回收方案可供选择 仅需 2 天即可完成 mate pair 文库构建 产品概述 VAHTS TM Mate Pair Library Prep Kit for Illumina V2 试剂盒是将基因组中较大跨度 (2-10 kb) 片段两端的序列进行环化, 环化的接口处连接识别序列, 然后打断, 富集含有识别序列的 DNA, 再进行双向测序 本试剂盒主要应用于基因组从头测序, 解决无参物种信息拼接问题的试剂盒 此外, 试剂盒提供两种回收方案 采用非胶回收方案可以得到插入片段大小介于 2-15 kb 的 Mate Pair 文库, 主要集中在 3-5 kb; 采用胶回收方案得到的 mate pair 文库, 插入片段大小取决于切胶回收所得到的片段 性能展示 操作流程 A Genomic DNA B B B VAHTS Tagmentase DNA 片段化反应 B B 链置换反应 第 B B B B 片段大小选择 ( 可选 ) 环化 一天 消化未环化片段 B B 环化分子片段化 第 二 B B 磁珠富集纯化生物素标记的 Mate Pair 片段 天 使用 VAHTS TM Mate Pair Library Prep Kit for Illumina 制备的 E.coli 基因组文库 ;A 边使用非胶回收方案制备文库插入片段长度统计,B 图为胶回收方案切胶回收 5-10K 片段制备文库插入片段长度统计 Read 1 B B Read 2 末端修复加 A, 加接头 PCR 扩增 测序 搭配产品 样品质控 - Qubit 货号 :Equalbit TM dsdna HS Assay Kit (Vazyme #EQ111) DNA Clean Beads 货号 :VAHTS TM DNA Clean Beads (Vazyme #N411) 文库定量 - Qubit 货号 :Equalbit TM dsdna HS Assay Kit (Vazyme #EQ111) 文库定量 - qpcr 货号 :VAHTS TM Library Quantification Kit for Illumina (Vazyme #NQ ) NGS 文库构建系列 VAHTS TM Mate Pair Library Prep Kit for Illumina V2 48 rxn ND ,

198 RNA-seq NGS 文库构建系列 生命科学产品目录 RNA 文库构建方案 RNA 文库制备 RNA 测序借助高通量测序技术颠覆了传统基因表达与调控等层面的研究 为了满足该领域的需求,Vazyme 提供了一系列应用于 Illumina 测序平台的高质量 RNA 文库构建的产品 Vazyme 的 RNA 文库构建试剂盒兼容多种样本类型及宽泛的样本起始量, 并对低质量样本也有适合的构建方案, 同时可以满足基于 mrna 非编码 RNA 以及 Small RNA 等多种研究对象和目的的需求 根据具体样本和研究目的的不同, 可参照下表灵活选择合适的建库试剂产品 Kit VAHTS TM mrna-seq V3 Library Prep Kit for Illumina VAHTS TM DNA Clean Beads NR611 N411 普通转录组建库 adapter VAHTS TM RNA Adapters set1-set6 for Illumina VAHTS TM RNA Multiplex Oligos set1-set2 for Illumina N803/N804 & N809 ~N812 N323/N324 module VAHTS TM mrna Capture Beads N401 Kit VAHTS TM Stranded mrna-seq Library Prep Kit for Illumina V2 VAHTS TM DNA Clean Beads NR612 N411 链特异性转录组建库 adapter VAHTS TM RNA Adapters set1-set6 for Illumina VAHTS TM RNA Multiplex Oligos set1-set2 for Illumina N803/N804 & N809 ~N812 N323/N324 module VAHTS TM mrna Capture Beads N401 RNA 测序 Kit VAHTS TM Total RNA-seq(H/M/R)Library Prep Kit for Illumina VAHTS TM RNA Clean Beads VAHTS TM DNA Clean Beads NR603 N412 N411 去除 rrna 转录组建库 adapter VAHTS TM RNA Adapters set1-set6 for Illumina VAHTS TM RNA Multiplex Oligos set1-set2 for Illumina N803/N804 & N809 ~N812 N323/N324 module Ribo-off TM rrna Depletion Kit (Human/Mouse/Rat) Ribo-off TM rrna Depletion Kit (Bacteria) N406 N407 Small RNA 建库 Kit VAHTS TM Small RNA Library Prep Kit for Illumina VAHTS TM DNA Clean Beads NR801 N411 adapter VAHTS TM Small RNA Index Primer Kit for Illumina N813 ~ N816 NGS 文库构建系列 长链 RNA 文库构建实验流程 : rrna 去除 / mrna 分离 3' 端加 da 尾 mrna 片段化 接头连接 cdna 第一链合成 PCR 富集 cdna 第二链合成 末端修复

199 RNA-seq NGS 文库构建系列 生命科学产品目录 VAHTS TM mrna-seq V3 Library Prep Kit for Illumina 常规转录组文库制备试剂盒 广泛的物种适用性 更宽模板兼容范围 更短建库耗时 更精准文库大小控制 适用于人, 动物, 植物及真菌等真核生物兼容 μg Total RNA 8 小时工作时间完成文库制备提供 4 种片段打断方案与文库分选方案 产品概述 VAHTS TM mrna-seq V3 Library Prep Kit for Illumina 是一种常规转录组建库试剂盒, 适用于 Illumina 高通量测序平台 本试剂盒适用于起始模板量为 μg 完整度良好的动 植物及真菌等真核生物的总 RNA 总 RNA 样品经过 mrna 分离 mrna 片段化 双链 cdna 合成 末端修复 接头连接 连接产物纯化和片段大小分选 文库扩增等步骤, 最终得到适用于 Illumina 平台的测序文库 本试剂盒利用磁珠分选的方式, 可以快速获得特定长度的文库, 能够满足不同实验的个性化需求 试剂盒包括 NR1 NR21 和 NR31 三个独立的包装, 包含文库构建过程所需要的所有酶和缓冲液, 所有都经过了严格的质量控制和功能验证, 最大程度上保证了文库构建的稳定性和重复性 性能展示广泛的物种适用性选择不同物种 不同起始量 不同完整度的总 RNA 模板, 用 VAHTS TM mrna-seq V3 Library Prep Kit for Illumina (NR611) 构建插入片段大小约为 bp 的转录组文库 文库用 Agilent 2100 Bioanalyzer 进行分析 操作流程 1.mRNA 分离 2. 片段化 随机引物结合 m7g 3. cdna 第一链合成 4.cDNA 第二链合成 / 纯化 5' 3' m7g 5. 末端修复 5' NNNNN 6. 接头连接 纯化 分选 Total RNA TTTTTTT NNNNN 3' NNNNN 5' NNNN 3' 3' P 3' 5' 5' 3' AAAAAAAAA 5' OH AAAAA 3' 5' 3' 5' 3' 5' OH P 5' 5 3 3' 3 7. 文库 PCR 扩增 / 纯化 T A A T 5 NGS 文库构建系列

200 RNA-seq NGS 文库构建系列 生命科学产品目录 VAHTS TM mrna-seq V3 Library Prep Kit for Illumina 高质量数据 Samples Read_length Raw_reads Clean_reads Raw_Q20 Clean_Q20 Raw_Q30 Clean_Q30 V-1000 V-100 V-10 N-1000 N-100 N bp 150 bp 150 bp 150 bp 150 bp 150 bp % 96.14% 95.55% 94.90% 94.99% 95.55% 95.93% 96.18% 95.91% 94.91% 95.03% 95.90% 90.97% 91.37% 90.46% 89.26% 89.41% 90.59% 90.94% 91.40% 90.87% 89.26% 89.45% 91.03% 不同起始量的 293T Total RNA 分别用 VAHTS TM mrna-seq V3 Library Prep Kit for Illumina 和 N 公司同类产品构建文库 文库用 Qubit 定量后, 按照相 同浓度混样, 用 Hiseq X ten 测序 可以看到, 用 Vazyme 和 N 公司产品有非常近似的数据产出和数据质量 稳定的数据均一性 高度的表达重复相关性 100 ng 293T Total RNA 分别用 VAHTS TM mrna-seq V3 Library Prep Kit for Illumina 构建文库 文库用 Qubit 定量后, 按照相同浓度混样, 用 Hiseq X ten 测序 对下机数据比对结果做分布均一性统计 可以看出, 用 Vazyme 产品构建的文库数据分布均匀, 没有 5 或 3 偏好性 左图表示 Vazyme 建库试剂在 100 ng 和 1 μg 293T Total RNA 起始量下的表达重复相关性 ; 右图表示 1 μg 293T Total RNA 起始量下的表达重复相关性 搭配产品 样品质控 - Qubit 货号 :Equalbit TM RNA HS Assay Kit (Vazyme #EQ211) Equalbit TM RNA BR Assay Kit (Vazyme #EQ212) 接头货号 :VAHTS TM RNA Adapters for Illumina (Vazyme #N803/804;Vazyme #N ;Vazyme #N323/N324) DNA Clean Beads 货号 :VAHTS TM DNA Clean Beads (Vazyme #N411) 文库定量 - Qubit 货号 :Equalbit TM dsdna HS Assay Kit (Vazyme #EQ111) NGS 文库构建系列 文库定量 - qpcr 货号 :VAHTS TM Library Quantification Kit for Illumina (Vazyme #NQ ) 单模块 1) mrna Capture Beads 货号 :VAHTS TM mrna Capture Beads (Vazyme #N401) 2) 2 Frag/Prime Buffer 货号 :VAHTS TM 2 Frag/Prime Buffer (Vazyme #N402) 产品名称 产品规格 产品货号 目录价 ( 元 ) VAHTS TM mrna-seq V3 Library Prep Kit for Illumina 24 rxn 96 rxn NR NR ,800 34,

201 RNA-seq NGS 文库构建系列 生命科学产品目录 VAHTS TM Stranded mrna-seq Library Prep Kit for Illumina V2 链特异性转录组文库制备试剂盒 保留了 mrna 的链方向性, 更加准确的获得基因的结构以及基因表达信息 广泛的物种适用性, 可以适用于人, 动物, 植物, 真菌等不同物种 RNA 起始量可低至 10 ng 高质量的数据结果 产品概述 操作流程 VAHTS TM Stranded mrna-seq Library Prep Kit for Illumina V2 是针对 Illumina 高通量测序平台定向开发的链特异型转录组文库构建专用试剂盒 本试剂盒适用于起始模板量为 μg 完整度良好的动 植物及真菌等真核生物的总 RNA 的链特异转录组文库构建 与常规转录组文库构建的差别是, 总 RNA 样品经 mrna 分离 片段化 第一链 cdna 合成后, 在第二链 cdna 合成时掺入 dutp 对其进行标记, 同时在此步完成了末端修复 加 A- 尾, 接着进行接头连接 连接产物片段大小分选 文库扩增等步骤, 在 PCR 扩增富集文库前将带 U 标记的第二链模板用 UDG 酶消化 因此最终的测序信息都来自于第一链 cdna, 从而保留了 mrna 的链方向性, 测序后的数据分析可确定转录本是来自正义还是反义 DNA 链 本试剂盒利用磁珠分选的方式, 可以快速获得特定长度的文库, 能够满足不同实验的个性化需求 试剂盒包含的所有酶和缓冲液都经过了严格的质量控制和功能验证, 最大程度上保证了文库构建的稳定性和重复性 本试剂盒是在 VAHTS TM Stranded mrna-seq Library Prep Kit for Illumina 的升级版本, 极大的简化了操作流程, 提高了文库转化效率, 能兼容更低起始投入量, 对不同起始量的 RNA 都有均一的覆盖度 NGS 文库构建系列

202 RNA-seq NGS 文库构建系列 生命科学产品目录 VAHTS TM Stranded mrna-seq Library Prep Kit for Illumina V2 性能展示 稳定的数据均一性和链特异性比例 图 A. 100 ng Universal human referance RNA 用 VAHTS TM Stranded mrna-seq Library Prep Kit for Illumina V2 构建文库, 用 Hiseq X ten PE150 测序, 分析数据均一性分布 可以看出文库数据分布均匀, 没有 5 或 3 偏好性 图 B. 1 ug Universal human referance RNA 分别用 VAHTS TM mrna-seq V3 Library Prep Kit for Illumina,VAHTS TM Stranded mrna-seq Library Prep Kit for Illumina V2, 用 Hiseq X ten PE150 测序, 可以看到, 链特异性文库有超过 99% 的 Reads 比对到正义链上 搭配产品 样品质控 - Qubit 货号 :Equalbit TM RNA HS Assay Kit (Vazyme #EQ211) Equalbit TM RNA BR Assay Kit (Vazyme #EQ212) 接头货号 :VAHTS TM RNA Adapters for Illumina (Vazyme #N803/804;Vazyme #N ;Vazyme #N323/N324) DNA Clean Beads 货号 :VAHTS TM DNA Clean Beads (Vazyme #N411) 文库定量 - Qubit 货号 :Equalbit TM dsdna HS Assay Kit (Vazyme #EQ111) 文库定量 - qpcr 货号 :VAHTS TM Library Quantification Kit for Illumina (Vazyme #NQ ) NGS 文库构建系列 单模块 1) mrna Capture Beads 货号 :VAHTS TM mrna Capture Beads (Vazyme #N401) 2) 2 Frag/Prime Buffer 货号 :VAHTS TM 2 Frag/Prime Buffer (Vazyme #N402) 产品名称 产品规格 产品货号 目录价 ( 元 ) VAHTS TM Stranded mrna-seq Library Prep Kit for Illumina V2 24 rxn 96 rxn NR NR ,800 38,

203 RNA-seq NGS 文库构建系列 生命科学产品目录 VAHTS TM Total RNA-seq (H/M/R) Library Prep Kit for Illumina 去除核糖体 RNA 的链特异性文库制备试剂盒 rrna 去除效率高达 99.9% 完美保留 mrna 与 lncrna 广泛的物种兼容性, 可以兼容人 小鼠 大鼠等多个物种 产品概述 VAHTS TM Total RNA-seq (H/M/R) Library Prep Kit for Illumina 是一种去除 rrna 的链特异性转录组建库试剂盒, 适用于 Illumina 高通量测序平台 该试剂盒适用于起始模板量为 μg 的人 小鼠 大鼠的总 RNA 与常规转录组文库的区别在于, 本试剂盒可将 rrna( 包括细胞质 28S,18S,5S rrna 以及线粒体 16S,12S,5.8S rrna) 从总 RNA 中去除, 保留 mrna 和其它非编码 RNA, 可用于 LncRNA 等非编码 RNA 的分析 ; 降解的 RNA 样本也可用本试剂盒进行文库构建 本试剂盒在第二链 cdna 合成时, 掺入 dutp 对其标记, 至 PCR 前将标记的第二链用 UDG 酶消化, 因此测序信息都来自于第一链 cdna, 保证了 RNA 的链方向性, 分析测序数据即可确定转录本是由正义或反义 DNA 链而来 试剂盒包括 NR4 NR5 和 NR6 三个独立的包装, 包含文库构建过程所需要的所有酶和缓冲液, 所有都经过严格的质量控制和功能验证, 最大程度上保证了文库构建的稳定性和重复性 操作流程 1 总 RNA 中有超过 80% 的 rrna 2 单链 DNA 探针与 rrna 特异性杂交 3 RNase H 特异性降解 rrna/dna 杂交双 链中的 rrna 4 DNase I 降解单链 DNA 探针 5 rrna 被去除,mRNA/IncRNA 得到富集 6 RNA 文库构建 性能展示 可以兼容人 小鼠 大鼠等多个物种 Homo sapiens Mus musculus Rattus norvegicus Bos Taurus Canis Iupus familiaris Equus caballus Gallus gallus 人小鼠大鼠牛狗马鸡猴 Macaca mulatta Sus scrofa 猪 Danio rerio 斑马鱼 NGS 文库构建系列

204 RNA-seq NGS 文库构建系列 生命科学产品目录 VAHTS TM Total RNA-seq (H/M/R) Library Prep Kit for Illumina 高达 99.9% 的 rrna 去除率 1 μg Universal Human Referance RNA(UHRR) 分别用 Oligo dt 磁珠纯化 mrna 后构建文库和用 VAHTS TM Total RNA-seq (H/M/R) Library Prep Kit for Illumina 构建文库, 用 Hiseq 2500 测序, 数据与人类基因组数据库 hg19 进行比对 稳定的数据均一性分布 测序数据和 Illumina 官方试剂具有高度的表达重复相关性 1 μg Universal Human Referance RNA(UHRR) VAHTS TM Total RNAseq (H/M/R) Library Prep Kit for Illumina,Illumina TrueSeq Standard Total RNA Library Prep Kit (Human/Mouse/Rat) 以及 NEBNext rrna Depletion Kit (Human/Mouse/Rat) 构建文库, 用 Hiseq 2500 测序, 分析数据均一性分布 可以看出, 本产品构建的文库数据分布均匀, 没有 5 或 3 偏好性, 并且与 Illumina 及 NEB 对应产品高度一致 1 μg Universal Human Reference RNA(UHRR) 分别用 VAHTS TM Total RNA-seq (H/M/R) Library Prep Kit for Illumina 和 Illumina TrueSeq Standard Total RNA Library Prep Kit (Human/Mouse/Rat) 构建文库, 用 Hiseq 2500 测序, 比较表达重复相关性, 以 spearman 相关系数 r 表示 可以看出, 两者之间的相关系数 r 大于 0.96, 说明本试剂盒与 Illumina 官方试剂具有极好的表达重复相关性 搭配产品 样品质控 - Qubit 货号 :Equalbit TM RNA HS Assay Kit (Vazyme #EQ211) Equalbit TM RNA BR Assay Kit (Vazyme #EQ212) 接头 货号 :VAHTS TM RNA Adapters for Illumina (Vazyme #N803/804;Vazyme #N ;Vazyme #N323/N324) 磁珠 货号 :VAHTS TM DNA Clean Beads (Vazyme #N411) VAHTS TM RNA Clean Beads (Vazyme #N412) 文库定量 - Qubit 货号 :Equalbit TM dsdna HS Assay Kit (Vazyme #EQ111) 文库定量 - qpcr 货号 :VAHTS TM Library Quantification Kit for Illumina (Vazyme #NQ ) NGS 文库构建系列 单模块 1) rrna 去除 货号 :Ribo-off TM rrna depletion kit (H/M/R) (Vazyme #N406) Ribo-off TM rrna depletion kit (Bacteria) (Vazyme #N407) Vazyme #N406( 适用于人 小鼠和大鼠 );Vazyme #N407( 适用于细菌 ) 2) 2 Frag/Prime Buffer 货号 :VAHTS TM 2 Frag/Prime Buffer (Vazyme #N402) 产品名称 产品规格 产品货号 目录价 ( 元 ) VAHTS TM Total RNA-seq (H/M/R) Library Prep Kit for Illumina 24 rxn 96 rxn NR NR ,500 76,

205 RNA-seq NGS 文库构建系列 生命科学产品目录 VAHTS TM Small RNA Library Prep Kit for Illumina Small RNA 文库制备试剂盒 样本兼容范围广 种类广 : 动 植物细胞 / 组织总 RNA, 分离纯化的 Small RNA, 以及其他类型总 RNA( 如外泌体总 RNA) 均可作为起始模板 ; 起始量广 : 起始模板投入低至 100 ng 的总 RNA, 外泌体 RNA 投入兼容范围可低至 5 ng 文库丰度高接头污染少, 有效文库比例高 ;mirna 比例高 覆盖种类多, 文库数据质量可靠 两种纯化方式可选试剂盒包含文库构建所需的所有, 提供磁珠分选和 PAGE 胶分离两种文库纯化方式, 可根据起始文库质量任意选择 精心优化的反应体条单管操作, 文库产量高, 重复相关性好 产品概述 VAHTS TM Small RNA Library Prep Kit for Illumina 是针对 Illumina 高通量测序平台定向开发的 Small RNA 文库构建专用试剂盒 本试剂盒适用模板类型广泛, 动 植物总 RNA, 以及分离纯化的 Small RNA 均可作为起始模板 Small RNA 的 3 /5 端分别加上通用接头, 再经过逆转录 PCR 扩增以及 PAGE 胶或磁珠纯化等步骤, 最终得到适用于 Illumina 平台的测序文库 试剂盒包含文库构建所需的酶和缓冲液, 所有都经过了严格的质量控制和功能验证, 最大程度上保证了文库构建的稳定性和重复性 操作流程 NGS 文库构建系列

206 RNA-seq NGS 文库构建系列 生命科学产品目录 VAHTS TM Small RNA Library Prep Kit for Illumina 性能展示 文库质量分析 - 文库分布 图 A: 以 1 μg 小鼠肝脏总 RNA 为起始模板的 Small RNA 文库 ; 图 B: 图 A 的文库经 PAGE 分离后的最终文库 ; 图 C: 以 80 ng Hela 细胞培养物上清外泌 体总 RNA 为起始模板的 Small RNA 文库 A B C 文库质量分析 - 表达重复相关性 A B C 相同起始模板投入的文库重复相关性均大于 0.99, 不同起始模板投入的文库之间相关性大于 0.98, 表明 VAHTS TM Small RNA Library Prep Kit for Illumina 构建的 Small RNA 文库在表达重复相关性方面表现优越 文库质量分析 - 长度分布统计 NGS 文库构建系列 图 A 为 1 ug 起始的 Small RNA 文库 ; 图 B 为 100 ng 起始的 Small RNA 文库 A B

207 RNA-seq NGS 文库构建系列 生命科学产品目录 VAHTS TM Small RNA Library Prep Kit for Illumina 文库质量分析 -srna 注释及碱基偏向性分析 A Pie chart for annotation_v1-1-total trna (108835) mirna ( ) exon_sense (29343) rrna (117917) repeat (13179) snrna (11535) snorna (155246) intron_antisense (2458) scrna (72913) unann (565199) pirna (7781) intron_sense (10973) exon_antisense (1081) srprna (9) mirna first nucleotide bias Percent (%) (1210) (510) (28659) (189740) ( ) ( ) (90416) (1662) (787) (1) (3) Length (nt) mirna nucleotide bias at each position Percent (%) G C A U G C A U nt Position B Percent (%) mirna first nucleotide bias Pie chart for annotation_v1-100-total srprna (26) scrna (71337) snrna (14751) exon_sense (30539) mirna ( ) rrna (165313) pipna (13803) exon_antisense (2149) trna (104228) snorna (123018) repeat (17714) intron_antisense (3160) unann (567202) intron_sense (11711) (2274) (136) (27211) (177420) ( ) (828285) (58761) (591) (271) (7) (7) (5) Length (nt) mirna nucleotide bias at each position Percent (%) G C A U G C A U 20 图 A 为 1 ug 起始的 Small RNA 文库 ; 图 B 为 100 ng 起始的 Small RNA 文库 nt Position 搭配产品 样品质控 - Qubit 货号 :Equalbit TM RNA HS Assay Kit (Vazyme #EQ211) Equalbit TM RNA BR Assay Kit (Vazyme #EQ212) 接头 货号 :VAHTS TM Small RNA Index Primer Kit for Illumina (Vazyme #N813-N816) DNA Clean Beads 货号 :VAHTS TM DNA Clean Beads (Vazyme #N411) 文库定量 - Qubit 货号 :Equalbit TM dsdna HS Assay Kit (Vazyme #EQ111) 文库定量 - qpcr 货号 :VAHTS TM Library Quantification Kit for Illumina (Vazyme #NQ ) 产品名称 产品规格 产品货号 目录价 ( 元 ) NGS 文库构建系列 VAHTS TM Small RNA Library Prep Kit for Illumina 24 rxn 96 rxn NR NR ,500 39,

208 文库接头推荐 NGS 文库构建系列 生命科学产品目录 文库接头推荐 DNA 接头 ND607 搭配接头 : 货号 规格 目录价 ( 元 ) N801-01/02 N802-01/02 N805-N808 N302-01/02 N303-01/02 N321 N μl each/40 μl each 10 μl each/40 μl each 20 μl each 24 rxn/96 rxn 24 rxn/96 rxn 192 rxn 192 rxn 1,200/4,600 1,200/4,600 4,600 each 24 rxn/96 rxn 24 rxn/96 rxn 11,520 11,520 VAHTS TM DNA Adapters set1 for Illumina (Vazyme #N801) VAHTS TM DNA Adapters set2 for Illumina (Vazyme #N802) VAHTS TM DNA Adapters set3-set6 for Illumina (Vazyme #N805-N808) VAHTS TM Multiplex Oligos set1 for Illumina (Vazyme #N302) VAHTS TM Multiplex Oligos set2 for Illumina (Vazyme #N303) VAHTS TM Multiplex Oligos set4 for Illumina (Vazyme #N321) VAHTS TM Multiplex Oligos set5 for Illumina (Vazyme #N322) TD 搭配接头 : 货号 规格 目录价 ( 元 ) TD202 TD203 TD204-TD 种 384 种 192 rxn 1,400 5,600 1,400 each TruePrep TM Index Kit V2 for Illumina (Vazyme #TD202) TruePrep TM Index Kit V3 for Illumina (Vazyme #TD203) TruePrep TM Index Kit V4 for Illumina (Vazyme #TD204-TD207) NA201/NA203 搭配接头 : 货号 规格 目录价 ( 元 ) NA111 NA rxn rxn 33,600 33,600 VAHTS TM AmpSeq Adapters 1-96 for Illumina (Vazyme #NA111) VAHTS TM AmpSeq Adapters 1-96 for Ion Torrent (Vazyme #NA121) RNA 接头 NR611/NR612/NR603 搭配接头 : 货号 规格目录价 ( 元 ) N803-01/02 N804-01/02 N809-N812 N323 N μl each/40 μl each 10 μl each/40 μl each 20 μl each 192 rxn 192 rxn 400/1, /1,600 1,600 each 7,680 7,680 VAHTS TM RNA Adapters set1 for Illumina (Vazyme #N803) VAHTS TM RNA Adapters set2 for Illumina (Vazyme #N804) VAHTS TM RNA Adapters set3-set6 for Illumina (Vazyme #N809-N812) VAHTS TM RNA Multiplex Oligos set1 for Illumina (Vazyme #N323) VAHTS TM RNA Multiplex Oligos set2 for Illumina (Vazyme #N324) NR801 搭配接头 : NGS 文库构建系列 货号 N813-N816 规格 48 rxn each 目录价 ( 元 ) 960 each VAHTS TM Small RNA Index Primer Kit for Illumina (Vazyme #N813-N816)

209 单细胞扩增 NGS 文库构建系列 生命科学产品目录 单细胞建库方案 单细胞及微量样本扩增 随着现代生物学的发展, 细胞群体的研究已不再能满足科研需求 同时, 针对一些肿瘤细胞 神经细胞以及干细胞等, 由于细胞的异质性高的特点, 以及循环肿瘤细胞等样本核酸量少的特点, 单细胞扩增技术应运而生 为了满足该领域不断增长的需求, Vazyme 提供了一系列应用于 Illumina 平台的单细胞建库方案 Vazyme 单细胞扩增技术可对低至一个细胞以及微量样本进行全基因组水平和全转录组水平的扩增, 从而解决了用组织样本测序的细胞异质性或样本少时建库不足的难题 单细胞测序为科学家研究解析单个细胞的行为 机制 与机体的关系等提供了新方向 不带检测模块 Discover-sc Single Cell Kit N601 单细胞基因组扩增 单细胞基因组测序 带检测模块 Discover-sc Single Cell Kit V2 转座酶法 TruePrep TM DNA Library Prep Kit V2 for Illumina N602 TD501 建库 常规方法 VAHTS TM Universal DNA Library Prep Kit for Illumina V3 ND607 单细胞测序 Discover-sc WTA Kit V2 N711 单细胞全转录组扩增 单细胞全转录组测序 Single Cell Full Length mrna Amplication Kit N712 建库 TruePrep TM DNA Library Prep Kit V2 for Illumina TD502/TD503 NGS 文库构建系列

210 单细胞扩增 NGS 文库构建系列 生命科学产品目录 Discover-sc Single Cell Kit 单细胞全基因组扩增试剂盒 高灵敏度 高覆盖度 高均一度 高保真度 高产量 操作简单 设备要求低 可以从单个细胞或极微量的基因组样本中实现全基因组扩增单细胞基因组经扩增后可达到 95% 以上的覆盖度基于无偏好性 MDA 扩增, 可实现全基因组的均一扩增 Phi29 DNA 聚合酶具有优于目前大多数高保真酶的保真度 6-8 h 的反应可以产生 μg 的基因组 DNA 仅需 3 步反应, 操作时间短只需水浴锅即可完成整个反应 产品概述 Discover-sc Single Cell Kit 使用基于多重链置换扩增 (MDA) 的 Phi29 等温扩增体系 Phi29 DNA 聚合酶是从噬菌体中克隆的 DNA 聚合酶, 具有很强的链置换活性, 可以在体外进行不依赖于热循环的恒温 MDA 聚合反应, 单次聚合反应可以实现长达 100 kb 的连续聚合延伸 Phi29 DNA 聚合酶还具有很强的 3-5 外切酶活性, 其保真度是 Taq 酶的 1000 倍, 这保证了 DNA 合成的高保真性 本试剂盒使用优化的 Phi29 DNA 聚合酶反应体系实现高灵敏度的单细胞全基因组恒温扩增 适用于从单细胞 少量组织或者微量纯化的基因组 DNA 进行全基因组扩增, 以得到大量的高覆盖度的基因组 DNA 操作流程 随机引物模板 DNA 新合成的 DNA 随机引物结合于模板的多个位点 Phi29 DNA 聚合酶在多个引物结合位点同时起始 DNA 复制 行进中的链合成反应置换前面遇到的正在合成的 DNA 链后继续延伸, 同时产生了被置换出的单链 DNA 被置换出的单链 DNA 作为模板被随机引物结合 随机引物起始新的 DNA 合成和链置换反应, 合成高分子量的双链的 DNA 性能展示 扩增产物的广泛适用性反应体系的高灵敏度! 高覆盖度! 高均一度! M C D G M NGS 文库构建系列 M:marker C: 单细胞扩增产物 2027 D: 基因组扩增产物 1000 G: 未经扩增的基因组 DNA Discover-sc 单细胞试剂盒扩增产物电泳结果 Discover-sc Single Sell Kit 扩增产物分布于 kb, 平均产物大小大于 20 kb, 广泛适用于二代测序 大片段拷贝数变异分析 微卫星分析 qpcr 分析 基因芯片分析 Array CGH 等多种下游分析 M C D G NC M 10 ng 5 ng 2 ng 1 ng G NC M:marker;C: 单细胞扩增产物 ;D: 基因组扩增产物 ;G: 未经扩增的基因组 DNA;NC: 阴性对照 Discover-sc Single Cell Kit 使用优化的反应体系, 可以实现单细胞的全基因组扩增, 在保证 覆盖度与均一度的情况下, 对纯化的真核生物基因组 DNA 的扩增灵敏度可达 1 ng, 细菌基 因组可达 10 pg 右图是 Discover-sc Single Cell Kit 全基因组扩增产物均一度与覆盖度检测 结果 使用分布于不同染色体的 8 对引物通过多重 PCR 检测 Discover-sc Single Cell Kit 全 基因组扩增产物均一度与覆盖度 扩增产物显示与未扩增基因组一致的均一度与覆盖度

211 单细胞扩增 NGS 文库构建系列 生命科学产品目录 Discover-sc Single Cell Kit 稳定的反应体系! 均匀的产物累积! M 1 h 2 h 4 h 6 h 8 h 12 h 16 h 24 h G NC M:marker;G: 未经扩增的基因组 DNA;NC: 阴性对照 Discover-sc Single Cell Kit 可以在微量样本的扩增中, 实现产物均匀累积, 扩增可以根据时间及产量需要在不同时间结束并拿到高覆盖度高均一度的全基因 组 DNA 并且在 30 下反应 24 小时不影响产物质量 上图是单细胞经不同时间扩增后产物基因组覆盖度与均一度检测结果 极高的扩增产量 Discover-sc Single Cell Kit 单个扩增反应可以产生 µg 的全基因组 DNA, 可以进行大量的平行实验分析 上图是分别以单细胞和 10 ng 纯化的基因组 DNA 为起始模板的扩增产物累积曲线图 搭配产品 样品及扩增产物质控 - Qubit 货号 :Equalbit TM dsdna HS Assay Kit (Vazyme #EQ111) 建库试剂盒 货号 :VAHTS TM Universal DNA Library Prep Kit for Illumina V3 (Vazyme #ND607) TruePrep TM DNA Library Prep Kit V2 for Illumina (Vazyme #TD ) 接头 货号 :VAHTS TM DNA Adapters set1/set2 for Illumina (Vazyme #N801/802) VAHTS TM DNA Adapters set3-set6 for Illumina (Vazyme #N ) VAHTS TM DNA Multiplex Oligos set1-set2 for Illumina (Vazyme #N321/322) TruePrep TM Index Kit V2 for Illumina (Vazyme #TD202) TruePrep TM Index Kit V3 for Illumina (Vazyme #TD203) TruePrep TM Index Kit V4 for Illumina (Vazyme #TD ) DNA Clean Beads 货号 :VAHTS TM DNA Clean Beads (Vazyme #N411) 文库定量 - Qubit 货号 :Equalbit TM dsdna HS Assay Kit (Vazyme #EQ111) 文库定量 - qpcr 货号 :VAHTS TM Library Quantification Kit for Illumina (Vazyme #NQ ) 产品名称 产品规格 产品货号 目录价 ( 元 ) NGS 文库构建系列 Discover-sc Single Cell Kit 24 rxn 96 rxn N N ,000 17,

212 单细胞扩增 NGS 文库构建系列 生命科学产品目录 Discover-sc Single Cell Kit V2 单细胞全基因组扩增试剂盒 产品概述 Discover-sc Single Cell Kit V2 与 Discover-sc Single Cell Kit 原理及流程一致, 均是使用基于 MDA 的等温扩增体系, 可以以单个细胞或者微量样本为模板实现全基因组的无差别扩增 差别在于 :Discoversc Single Cell Kit V2 含有对扩增产物进行 qpcr 检测的, 中提供的 16 对引物可检测人源 DNA 的完整性 操作流程 纯化 DNA 样品 DNA(1 ng-10 ng) μl Nuclease-free H 2 O up to 2.5 μl 加入 2.5 μl Buffer D 孵育 3 min 加入 5 μl Buffer N1 细胞样品细胞 ( cells) μl PBS up to 4 μl 加入 3 μl Buffer D2 65 C 孵育 10 min 加入 3 μl Buffer N 性能展示 qpcr 检测结果使用分布在 16 条不同染色体上的 qpcr 引物进行质控 取部分扩增产物稀释到 5 ng/μl 进行实验, 同时设置一个阴性对照 ( 即无模板对照 ) 以监测 qpcr 引物 qpcr 试剂以及整个反应中可能存在的污染, 设置一个阳性对照 ( 基因组 ) 以确认 qpcr 检测的效果 上一步产物 Nuclease-free H 2 O Discover-sc Reaction Buffer Discover-sc DNA Polymerase 30 C 孵育 6 h,65 C 孵育 5 min 10 μl 8 μl 30 μl 2 μl Discover-sc Single Cell Kit V2 单细胞基因组扩增流程图 样品扩增产物 阳性对照 ( 基因组 ) 阴性对照 (H 2 O) CT 阴性对照反应不能生成明显的信号, 表明 qpcr 过程中不存在 污染, 针对每个样本的反应 CT 值落在 之间较为准确, 若 CT 值大于 32 时则可以认为 qpcr 检测无效 搭配产品 Primer 1 Primer 2 Primer 3 Primer 4 Primer 5 Primer 6 Primer 7 Primer 8 Primer 9 Primer 10 Primer 11 Primer 12 Primer 13 Primer 14 Primer 15 Primer 16 稀释到 5 ng/μl Discover-sc AceQ Master Mix Primer ROX Dye 模板 H 2 O qpcr 检测 扩增产物完整性检测流程图 10 μl 0.8 μl 0.4 μl 1 μl 7.8 μl 样品及扩增产物质控 - Qubit 货号 :Equalbit TM dsdna HS Assay Kit (Vazyme #EQ111) 建库试剂盒 货号 :VAHTS TM Universal DNA Library Prep Kit for Illumina V3 (Vazyme #ND607) TruePrep TM DNA Library Prep Kit V2 for Illumina (Vazyme #TD ) 接头 货号 :VAHTS TM DNA Adapters set1/set2 for Illumina (Vazyme #N801/802) VAHTS TM DNA Adapters set3-set6 for Illumina (Vazyme #N ) VAHTS TM DNA Multiplex Oligos set1-set2 for Illumina (Vazyme #N321/322) TruePrep TM Index Kit V2 for Illumina (Vazyme #TD202) TruePrep TM Index Kit V3 for Illumina (Vazyme #TD203) TruePrep TM Index Kit V4 for Illumina (Vazyme #TD ) NGS 文库构建系列 DNA Clean Beads 货号 :VAHTS TM DNA Clean Beads (Vazyme #N411) 文库定量 - Qubit 货号 :Equalbit TM dsdna HS Assay Kit (Vazyme #EQ111) 文库定量 - qpcr 货号 :VAHTS TM Library Quantification Kit for Illumina (Vazyme #NQ ) 产品名称 产品规格 产品货号 目录价 ( 元 ) Discover-sc Single Cell Kit V2 24 rxn 96 rxn N N ,690 23,

213 单细胞扩增 NGS 文库构建系列 生命科学产品目录 Discover-sc WTA Kit V2 单细胞全转录组扩增试剂盒 模板起始量低 扩增灵敏度高 产物完整性好 操作成功率大 体积兼容性广 单个细胞或 10 pg Total RNA 即可作为起始模板, 进行高效扩增使用 LNA 技术及精心优化的反应体系, 大幅度增加了低表达基因的检出量通过双端引物扩增全长 cdna, 获得整个 mrna 信息, 避免了 5 和 3 偏好性单管操作, 大大减少了 RNA 样品的处理, 最大限度避免了样品损失的风险, 提高了操作成功率样品兼容体积高达 5 μl, 能够兼容不同浓度的模板进行扩增 产品概述 Discover-sc WTA Kit V2 能以 个细胞或 10 pg-10 ng 总 RNA 为模板, 通过第一链 cdna 合成及扩增, 获取足够的用于序列分析的样本, 从而解决了诸如单细胞等微量样本因 RNA 含量过低导致的无法使用常规 mrna-seq 进行测序分析的技术难题 试剂盒以 Oligo dt Primer 为逆转录引物进行 cdna 合成, 并利用 Discover-sc Reverse Transcriptase 的 Template-switching 活性在 cdna 的 3 端添加一段接头序列, 通过该接头序列进行后续的 PCR 扩增, 获得全长 cdna 扩增产物, 有效避免了 cdna 合成过程中的 3 偏好性和 rrna 的污染 Discover-sc WTA Kit V2 具有检测灵敏度高 体积兼容性广的特点, 适合低丰度基因及低浓度模板的检测 一般情况下, 一个反应可以产生 2-20 ng 的 cdna 扩增产物 操作流程 Single-cell isolation Discover-sc TS Oligo V2 ##### 5' mrna Single-cell Iysis poly A 3' Discover-sc TS Oligo V2 ##### 5' ##### First-strand synthesis Template-switching Oligo dt Primer Discover-sc WTA PCR Primer ##### ##### PCR amplification Discover-sc WTA PCR Primer NGS 文库构建系列

214 单细胞扩增 NGS 文库构建系列 生命科学产品目录 Discover-sc WTA Kit V2 性能展示 模板起始量低, 扩增产物 cdna 完整性好 [FU] [bp] 以 10 pg 293T 细胞 Total RNA 为模板, 用 Discover-sc WTA Kit V2 进行扩增, 取 1 μl cdna 扩增产物用 Agilent 2100 Bioanalyzer 进行分析 试剂盒在不去 除 rrna 的情况下以 Oligo dt Primer 为逆转录引物, 并利用 Discover-sc Reverase Transcriptase 的 Template-switching 活性在 cdna 的 3 端添加一段接头序列, 避免了 RNA 污染 数据分布均一, 无偏好性 表达重复相关性高 左图为 Vazyme-1 测序片段在基因上的分布结果, 右图为 C-1 测序片段在 基因上的分布结果, 数据显示 Discover-sc WTA Kit V2 扩增很好的保证 了基因 5 和 3 的覆盖 左图为 Vazyme-1 和 Vazyme-2 表达重复相关性分析, 右图为 C-1 和 C-2 表达重复性相关性分析 数据结果表明表达重复相关性高于 C 公司 搭配产品 样品质控 - Qubit 货号 :Equalbit TM RNA HS Assay Kit (Vazyme #EQ211) Equalbit TM RNA BR Assay Kit (Vazyme #EQ212) 扩增产物质控 - Qubit 货号 :Equalbit TM dsdna HS Assay Kit (Vazyme #EQ111) 建库试剂盒货号 :TruePrep TM DNA Library Prep Kit V2 for Illumina (Vazyme #TD ) 接头 货号 :TruePrep TM Index Kit V2 for Illumina (Vazyme #TD202) TruePrep TM Index Kit V4 for Illumina (Vazyme #TD ) TruePrep TM Index Kit V3 for Illumina (Vazyme #TD203) NGS 文库构建系列 DNA Clean Beads 货号 :VAHTS TM DNA Clean Beads (Vazyme #N411) 文库定量 - Qubit 货号 :Equalbit TM dsdna HS Assay Kit (Vazyme #EQ111) 文库定量 - qpcr 货号 :VAHTS TM Library Quantification Kit for Illumina (Vazyme #NQ ) 产品名称 产品规格 产品货号 目录价 ( 元 ) Discover-sc WTA Kit V2 12 rxn 24 rxn 96 rxn N N N ,000 27,000 72,

215 模块与单酶原料 NGS 文库构建系列 生命科学产品目录 模块与单酶原料 文库构建是 NGS 测序的关键步骤, 文库质量的好坏直接关系到测序数据的优劣 Vazyme 除了提供完整的建库试剂盒外, 同时还提供诸多建库模块及单酶原料, 供客户进行更加弹性的选择 Vazyme 提供了多种 PCR 扩增的 DNA 聚合酶, 具有优秀地文库覆盖均一性以及高保真度, 因此能最大程度的降低文库扩增的偏好性 末端修复模块和接头连接模块能够将打断后的 DNA 片段进行末端修复和接头连接, 连接效率高, 连接完成后可直接进行扩增富集文库, 最大程度上保证文库产出 Vazyme 致力为文库构建的各个环节开发具有创新性的高质量的酶产品, 为科学团队提供最领先的研究工具 Phanta Uc Super-Fidelity DNA Polymerase for Library Amplification 耐 U 高保真酶 使用含 dutp 的引物进行高保真文库扩增 使用含 dutp 的模板进行高保真文库扩增 使用含 dutp 的 dntp 进行高保真文库扩增 保存条件 :-20 保存 产品概述 Phanta Uc Super-Fidelity DNA Polymerase 是一种基于 Pfu DNA Polymerase 改造而成的新一代高保真 DNA 聚合酶, 具有极高的扩增效率和广泛的模板适应性 和 Pfu DNA Polymerase 相比,Phanta Uc Super-Fidelity DNA Polymerase 的行进性得到的大幅度提升, 即使是非常复杂的模板也能快速准确的完成 PCR 反应 其错配率是 Taq DNA Polymerase 的 1/52, 是 Pfu DNA Polymerase 的 1/6, 且完全克服了常规高保真酶无法以 dutp 为原料进行聚合反应 无法使用含有 dutp 的扩增引物以及无法使用含有 dutp 的 DNA 作为扩增模板等诸多弊病 配以精心优化的文库扩增专用反应缓冲,Phanta Uc Super-Fidelity DNA Polymerase for Library Amplification 可以实现高通量测序文库的低偏好性 高效 高稳定性扩增 扩增产物为平端, 可直接用于平端克隆 NGS 文库构建系列 Phanta Uc Super-Fidelity DNA Polymerase for Library Amplification 100 U 500 U P P ,

216 模块与单酶原料 NGS 文库构建系列 生命科学产品目录 VAHTS TM Universal End preparation Module for Illumina 末端修复模块 单管式末端修复 加 da 尾反应 末端修复加 A 耗时更短, 仅需 30 min 试剂采用 Mix 形式, 兼容自动化建库设备 模板量兼容范围更宽, 可以高效修复 100 pg-1 μg Input DNA 样本类型兼容范围更广, 适用于 cfdna FFPE 和片段化 DNA 保存条件 :-20 保存 产品概述 VAHTS TM Universal End preparation Module for Illumina 是针对 Illumina 高通量测序平台文库构建定向优化而成的末端修复模块 使用本试剂盒可以高效修复 100 pg-1 μg 片段化 DNA 的末端, 修复产物 5 端包含磷酸基团且 3 端带有 da 突出 和常规建库方法相比,VAHTS TM Universal End preparation Module for Illumina 采用一步法反应流程, 将末端修复和加 da 尾步骤合并, 同时降低了各步骤的反应时间, 因此显著降低了起始 DNA 模板的最少需求量, 缩短了实验耗时 试剂采用 Mix 的形式, 使移液操作更加方便, 兼容自动化建库设备 试剂盒中提供的所有试剂都经过严格的质量控制和功能验证, 最大程度上保证了文库构建的稳定性和重复性 VAHTS TM Universal End preparation Module for Illumina 24 rxn 96 rxn N N ,100 6,900 VAHTS TM Universal Adapter Ligation Module for Illumina 文库连接模块 高效连接 100 pg-1 μg Input DNA 与接头 无需纯化, 可直接在 da-tailing 反应产物中进行连接反应 保存条件 :-20 保存 产品概述 NGS 文库构建系列 VAHTS TM Universal Adapter Ligation Module for Illumina 是针对 Illumina 高通量测序平台文库构建定向优化而成的连接模块 使用本试剂盒可以将包含 dt 突出的接头高效连接至 5 端包含磷酸基团且 3 端带有 da 突出的修复产物末端 与常规方法相比,VAHTS TM Universal Adapter Ligation Module for Illumina 采用一管式反应, 片段化 DNA 经 VAHTS TM Universal End Preparation Module for Illumina (Vazyme #N203) 处理后可直接进行接头连接反应, 无需多余的产物纯化步骤 因此显著降低了起始 DNA 模板的最少需求量, 缩短了实验耗时 试剂盒中提供的所有试剂都经过严格的质量控制和功能验证, 最大程度上保证了文库构建的稳定性和重复性 VAHTS TM Universal Adapter Ligation Module for Illumina 24 rxn 96 rxn N N ,400 11,

217 模块与单酶原料 NGS 文库构建系列 生命科学产品目录 VAHTS TM HiFi Amplification Mix 文库扩增模块 偏好性低 灵敏度高 扩增效率高 兼容多种类型文库扩增 保存条件 :-20 保存 产品概述 VAHTS TM HiFi Amplification Mix 是一种新型高保真 PCR 扩增预混液, 适用于高通量测序文库的 PCR 扩增 预混液基于 VAHTS TM HiFi DNA Polymerase, 该酶是由 Pfu DNA Polymerase 改造而成的新一代高产量高保真 DNA 聚合酶, 灵敏度大幅提升, 具有极高的扩增效率 广泛的模板适应性, 极大提高了扩增产出和平台期 同时, 其扩增错配率是 Taq DNA Polymerase 的 1/52, 是 Pfu DNA Polymerase 的 1/6, 保证了文库扩增的真实性 配以精心优化的缓冲体系,VAHTS TM HiFi Amplification Mix 可以实现高通量测序文库的低偏好性 宽模板投入范围 高产量 高稳定性扩增 本品包含 PCR 扩增所需所有, 并包含针对 Illumina 测序平台的文库扩增引物, 只需加入文库模板即可进行反应, 使用便捷 ; 包含特殊的保护剂, 长期存放或反复冻融后仍能保持稳定的活性 扩增产物为平端, 可直接用于平端克隆 性能展示 卓越的扩增效率 使用 VAHTS TM Universal DNA Library Prep Kit for Illumina V3 (Vazyme#ND607) 建库试剂盒, 分别构建 100 pg,1 ng,1 μg 起始的 HEK293 细胞基因 组 DNA 文库 使用 VAHTS TM HiFi Amplification Mix (Vazyme#N616) 和 K N A 公司的文库扩增试剂分别在其推荐程序下扩增以上文库, 循环数分别为 cycles 由图可知, VAHTS TM HiFi Amplification Mix 对于不同起始量的 DNA 文库, 在相同扩增循环数下, 其产量均高于其他同类产品 卓越的扩增效率 使用 VAHTS TM Universal DNA Library Prep Kit for Illumina V3 (Vazyme#ND607) 建库试剂盒, 构建 HEK293 细胞基因组 DNA 文库 使用 VAHTS TM HiFi Amplification Mix (Vazyme#N616) 和 K N A 公司的文库扩增试剂分别在其推荐程序下进行文库扩增, 起始文库投入量为 50 ng, 扩增循环数分别为 cycles, 通过 Qubit 检测文库产出 由图可知,VAHTS TM HiFi Amplification Mix 的平台期可达 7 μg, 显著优于其他同类产品 NGS 文库构建系列 VAHTS TM HiFi Amplification MiX 24 rxn 96 rxn N N ,

218 模块与单酶原料 NGS 文库构建系列 生命科学产品目录 VAHTS TM mrna Capture Beads mrna 分离磁珠 产品概述 VAHTS TM mrna Capture Beads 是偶联了 Oligo (dt) 的 1 μm 顺磁性微球, 适合于从纯化的总 RNA 中分离 poly (A) + RNA 磁性分离技术可从小体积样 品中分离出完整的 mrna, 避免了 mrna 沉淀的步骤 整个操作过程可在一小时内完成 此法抓取 mrna 对 RNA 样品的完整度要求较高 适用范围 适用于将 poly (A) RNA 从 μg 完整度良好的总 RNA (RIN 值 8) 中分离出来, 不完整或降解的总 RNA 模板会导致部分 poly (A) RNA 信息的丢失 分离的 mrna 可用于 : 1. 测序文库构建实验 : 可配套 VAHTS TM mrna-seq V3 Library Prep Kit for Illumina 试剂盒 (Vazyme #NR611) 或 VAHTS TM Standard mrna-seq Library Prep Kit for Illumina V2 试剂盒 (Vazyme#NR612) 使用, 只需要按照对于说明书加入相应体积的 Frag/Prime Buffer, 即可进行文库构建 2. 其他实验 VAHTS TM mrna Capture Beads 24 rxn 96 rxn N N ,300 VAHTS TM 2 Frag/Prime Buffer RNA 打断 buffer 产品概述 VAHTS TM 2 Frag/Prime Buffer 是针对 Illumina 高通量测序平台转录组文库构建定向优化的一款产品 在高温条件下, 通过 Mg 2+ 作用将 RNA 随机打断 至短片段 NGS 文库构建系列 适用范围 适用于 VAHTS TM mrna-seq V3 Library Prep Kit for Illumina (Vazyme #NR611) VAHTS TM Stranded mrna-seq Library Prep Kit for Illumina V2 (Vazyme #NR612) VAHTS TM Total RNA-seq (H/M/R) Library Prep Kit for Illumina (Vazyme #NR603) 建库时 RNA 的片段化 VATHS TM 2 Frag/Prime Buffer 96 rxn N

219 模块与单酶原料 NGS 文库构建系列 生命科学产品目录 Ribo-off TM rrna Depletion Kit (Human/Mouse/Rat) 去除 rrna 试剂盒 产品概述 Ribo-off TM rrna depletion kit (H/M/R) 适用于去除人 小鼠和大鼠总 RNA 中的 rrna ( 包括细胞质 28S,18S,5S rrna 以及线粒体 12S,5.8S rrna), 保留 mrna 以及其它非编码 RNA; 该试剂盒同时适用于完整的和部分降解的 RNA 样本 ( 例如 FFPE RNA), 得到的 rrna-depleted RNA 可用于 mrna 和非编码 RNA ( 例如 lncrna) 分析 Ribo-off TM rrna Depletion Kit (Bacteria) 去除 rrna 试剂盒 产品概述 Ribo-off TM rrna depletion kit (Bacteria) 适用于去除革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌总 RNA 中的 rrna ( 包括 16S 和 23S rrna), 保留 mrna 以及其它非编码 RNA; 该试剂盒同时适用于完整的和部分降解的 RNA 样本 ( 例如 FFPE RNA), 得到的 rrna-depleted RNA 可用于 mrna 和非编码 RNA ( 例如 lncrna) 分析 本试剂盒可适用于 1-5 μg 的总 RNA 中 rrna 的去除, 所得的产物适用于 RNA 文库及其他实验 Ribo-off rrna 去除原理 1 总 RNA 中有超过 80% 的 rrna 2 单链 DNA 探针与 rrna 特异性杂交 3 RNase H 特异性降解 rrna/dna 杂交双 链中的 rrna 4 DNase I 降解单链 DNA 探针 5 rrna 被去除,mRNA/IncRNA 得到富集 Ribo-off TM rrna Depletion kit 去除 rrna 总耗时低于 2 h Ribo-off TM rrna Depletion Kit ( Human/Mouse/Rat ) Ribo-off TM rrna Depletion Kit (Bacteria) 24 rxn 96 rxn 12 rxn 24 rxn N N N N ,700 38,000 9,500 17,300 NGS 文库构建系列

220 模块与单酶原料 NGS 文库构建系列 生命科学产品目录 T4 DNA polymerase 切除 3 突出结构 补平 5 突出结构 保存条件 :-20 保存 产品概述 在模板及引物存在的条件下,T4 DNA 聚合酶催化沿 5-3 方向合成 DNA 此酶还具有 3-5 核酸外切酶活性, 该活性比 DNA 聚合酶 I 强 与 DNA 聚合酶 I 不同, T4 DNA 聚合酶不具有 5-3 核酸外切酶活性 性能展示 纯度检测 BSA T4 DNA Polyermase 2 μg 1 μg 0.5 μg 0.2 μg 1 μg 2 μg 10 μg 20 μg 核酸内切酶残留检测 批次 A 批次 B Storage Buffer 阴性 经 SDS-PAGE 电泳, 考马斯亮蓝染色, T4 DNA Polymerase 的蛋白纯度 >90% T4 DNA Polymerase 与质粒混合孵育后, 超螺旋不发生降解 T4 DNA Polymerase 无内切酶活性 核酸残留检测 y=-3.408x 标曲 R 2 = 大肠杆菌基因组线性范围 :10 fg/μl-10 ng/μl, 相关性 R 2 =0.999 NGS 文库构建系列 T4 DNA polymerase 2000 U N ,

221 模块与单酶原料 NGS 文库构建系列 生命科学产品目录 T4 Polynucleotide Kinase DNA 或 RNA 5 末端磷酸化, 以便进行连接反应 DNA 或 RNA 的末端标记, 用作探针 保存条件 :-20 保存 产品概述 T4 Polynucleotide Kinase 能够催化 ATP 的 γ- 磷酸基团转移到寡核苷酸链 ( 双链或单链 DNA 或 RNA) 的 5 - 羟基末端以及 3 - 单磷酸核苷上 T4 Polynucleotide Kinase 还具有 3 - 磷酸酶活性, 将 3 - 磷酸基团从寡核苷酸的 3 磷酸末端 脱氧 3 - 单磷酸核苷和脱氧 3 - 二磷酸核苷上水解掉 适用于文库构建及末端标记制作探针 性能展示 纯度检测 BSA T4 PNK 2 μg 1 μg 0.5 μg 0.2 μg 1 μg 2 μg 10 μg 20 μg 经 SDS-PAGE 电泳, 考马斯亮蓝染色,T4 PNK 的蛋白纯度 >95% 核酸内切酶残留检测 核酸外切酶残留检测 批次 A 批次 B Storage Buffer 阴性 批次 A 批次 B Storage Buffer 阴性 核酸残留检测 T4 PNK 与质粒混合孵育后, 电泳谱带不发生变化 T4 PNK 无内切酶活性 T4 PNK 与单链和双链片段混合孵育后, 电泳谱带不发生变化 T4 PNK 无外切酶活性 y= x R 标曲 2 = 大肠杆菌基因组线性范围 :10 fg/μl-10 ng/μl, 相关性 R 2 =0.999 NGS 文库构建系列 T4 Polynucleotide Kinase U N ,

222 模块与单酶原料 NGS 文库构建系列 生命科学产品目录 T4 DNA ligase (Rapid) 适用于快速连接粘性末端或平末端 兼容 T/A 克隆 可用于 dsdna 切刻修复 保存条件 :-20 保存 产品概述 T4 DNA Ligase 催化双链 DNA 或 RNA 上相邻的 5 - 磷酸末端和 3 - 羟基末端形成磷酸二酯键 该酶不仅能够催化平齐末端或粘性末端之间的连接, 还可 以修复双链 DNA RNA 或 DNA/RNA 杂交双链中的单链切割 性能展示 纯度检测 BSA T4 DNA Ligase 2 μg 1 μg 0.5 μg 0.2 μg 1 μg 2 μg 10 μg 20 μg 经 SDS-PAGE 电泳, 考马斯亮蓝染色,T4 DNA Ligase 的蛋白纯度 >95% 核酸内切酶残留检测 核酸外切酶残留检测 批次 A 批次 B Storage Buffer 阴性批次 A 批次 B Storage Buffer 阴性 T4 DNA Ligase 与质粒混合孵育后, 电泳谱带不发生变化 T4 DNA Ligase 无内切酶活性 T4 DNA Ligase 与单链和双链片段混合孵育后, 电泳谱带不发生变化 T4 DNA Ligase 无外切酶活性 核酸残留检测 NGS 文库构建系列 y=-3.546x 标曲 R 2 = 大肠杆菌基因组线性范围 :10 fg/μl-10 ng/μl, 相关性 R 2 =0.999 T4 DNA Ligase (Rapid) U N ,

223 模块与单酶原料 NGS 文库构建系列 生命科学产品目录 DNA polymerase I Klenow fragment 用随机引物制备探针 切除 3 突出端补平 5 突出端, 形成平末端 保存条件 :-20 保存 产品概述 DNA 聚合酶 I, 大片段 (Klenow 片段 ) 是 E.coli DNA 聚合酶 I 的蛋白酶水解产物, 具有 5-3 DNA 聚合酶活性和 3-5 核酸外切酶活性, 但缺失了 5-3 核 酸外切酶活性 Klenow 片段既保留了全酶的高保真性, 又不会降解 DNA 5 末端 性能展示 纯度检测 BSA Klenow 核酸内切酶残留检测 批次 A 批次 B Storage Buffer 阴性 2 μg 1 μg 0.5 μg 0.2 μg 1 μg 2 μg 10 μg 20 μg 经 SDS-PAGE 电泳, 考马斯亮蓝染色,Klenow 的蛋白纯度 >95% Klenow 与质粒混合孵育后, 电泳谱带不发生变化 Klenow 无内切酶活性 核酸残留检测 y= x 标曲 R 2 = 大肠杆菌基因组线性范围 :10 fg/μl-10 ng/μl, 相关性 R 2 =0.999 NGS 文库构建系列 DNA polymerase I Klenow fragment 5000 U N ,

224 模块与单酶原料 NGS 文库构建系列 生命科学产品目录 DNA polymerase I Klenow fragment exo- 3 末端加 da 尾 随机引物制备探针 保存条件 :-20 保存 产品概述 Klenow 片段 (3-5 exo-) 是 DNA 聚合酶 I 的 N 末端截短物, 它保留了 DNA 聚合酶活性, 但失去了 5-3 核酸外切酶活性 ; 该酶经突变 (D355A,E357A) 进一步去除了其 3-5 的核酸外切酶活性, 适用于 DNA 3 末端加 A 尾和制备探针 性能展示 纯度检测 BSA Klenow xo- 2 μg 1 μg 0.5 μg 0.2 μg 1 μg 2 μg 10 μg 20 μg 经 SDS-PAGE 电泳, 考马斯亮蓝染色,Klenow exo- 的蛋白纯度 >95% 核酸内切酶残留检测 批次 A 批次 B 批次 C Storage Buffer 阴性 核酸外切酶残留检测 Klenow exo- 与质粒混合孵育后, 电泳谱带不发生变化 Klenow exo- 无内切酶活性 Klenow exo- 与 500 bp dsdna 片段混合孵育后, 用 PicoGreen 检测荧 光值, 与阴性对照无显著差异 Klenow exo- 无外切酶活性 核酸残留检测 NGS 文库构建系列 y= x 标曲 R 2 = 大肠杆菌基因组线性范围 :10 fg/μl-10 ng/μl, 相关性 R 2 =0.999 DNA polymerase I Klenow fragment exo U N ,

225 模块与单酶原料 NGS 文库构建系列 生命科学产品目录 Phi29 MAX DNA Polymerase 卓越的链置换活性 超高保真的复制能力 适用于质粒的体外制备和全基因组合成 保存条件 :-20 保存 产品概述 Phi29 MAX DNA Polymerase 是从 Bacillus subtilis 噬菌体 phi29 中克隆的 DNA 聚合酶 Phi29 MAX DNA Polymerase 具有很强的链置换活性, 可以实现对 DNA 复杂结构解链与复制, 在体外进行不依赖于热循环的等温 DNA 聚合反应 Phi29 MAX DNA Polymerase 具有很强的链亲合力, 单次聚合反应可以实现长达 100 kb 的连续聚合延伸, 另外,Phi29 MAX DNA Polymerase 还具有很强的 3-5 外切校对活性, 其保真度是 Taq 酶的 1000 倍, 高于目前绝大多数高保真酶的保真度, 非常适用于质粒的体外制备和全基因组合成 NGS 文库构建系列 Phi29 MAX DNA Polymerase 250 U 1250 U N N ,

226 分离与检测 NGS 文库构建系列 生命科学产品目录 分离与检测 在文库构建过程中, 文库的纯化和分选是必不可少的步骤, 同时为了提高建库成功率, 需精确模板投入量, 测序时, 为提高测序准确性 减少测序过程中的风险, 要求测序前测定文库样品的浓度和片段大小分布, 确定合适的 pooling 以及上机方案 常规的检测包括文库的浓度检测和片段大小检测 对于纯化和分离,Vazyme 推出了高质量的 DNA/RNA 磁珠, 同时对于浓度检测, Vazyme 提供了适用于 Qubit 的 EQ 系列产品以及基于 qpcr 染料法的 NQ 系列产品 磁珠系列产品是 Vazyme 以高质量生产工艺制备而成, 并按照 NGS 文库制备的要求进行严格测试, 使得 Vazyme 文库试剂具有行业领先的表现 NQ 系列产品是使用 qpcr 染料法对 Illumina 平台高通量测序文库进行浓度测定的专用试剂盒, 具有特异性高 扩增效率高 GC 含量适应性广 检测灵敏度高等诸多优势, 非常适合进行文库浓度的绝对定量 EQ 系列产品基于荧光染料法, 能够特异性地识别核酸, 并不受蛋白质 盐类等杂质的干扰 并且包含可以特异结合 dsdna 或 RNA 的试剂盒, 从而实现对不同类型的产品进行精确的浓度测定 Vazyme 游离 DNA 保存用采血管以及提取试剂盒以高质量的生产工艺获得, 并进行严格测试, 分离得到的游离 DNA 可用于后续的 PCR 检测或文库构建等实验 NGS 文库构建系列

227 分离与检测 NGS 文库构建系列 生命科学产品目录 VAHTS TM DNA Clean Beads DNA 纯化分选磁珠 产品概述 VAHTS TM DNA Clean Beads 基于 SPRI (Solid Phase Reverse Immobilization) 原理, 适合于高通量测序文库构建中 DNA 纯化与片段大小分选 本产品可兼容各品牌的 DNA,RNA 建库试剂盒, 和目前广泛使用的 AMPure XP Beads 使用方式完全相同, 因此无需重新摸索条件 同时在文库的产量 大小分布指标上也与 AMPure XP Beads 高度一致, 可以无缝替代 AMPure XP Beads, 有效降低建库成本 分选流程 文库大小分选条件参考 用 TruePrep TM DNA Library Prep Kit V2 for Illumina (Vazyme #TD501) 构建 DNA 文库 文库初始大小为 bp, 用 VAHTS TM DNA Clean Beads 按下 表的条件对 PCR 产物进行分选, 得到不同大小的文库, 用 Agilent 2100 Bioanalyzer 进行分析 第一轮体积比 (Beads: DNA) 第二轮体积比 (Beads: DNA) 文库平均长度 (bp) NGS 文库构建系列 VAHTS TM DNA Clean Beads 5 ml 60 ml 450 ml N N N ,000 6,400 26,

228 分离与检测 NGS 文库构建系列 生命科学产品目录 VAHTS TM RNA Clean Beads RNA 纯化磁珠 产品概述 VAHTS TM RNA Clean Beads 基于 SPRI (Solid Phase Reverse Immobilization) 原理, 可有效去除蛋白质 盐离子和其它杂质, 适用于文库构建实验中 RNA 样品的纯化 在纯化的同时, 可以保持 RNA 稳定不降解 VAHTS TM RNA Clean Beads 和目前广泛使用的 AGENCOURT RNACLEAN XP 使用方式完全相同, 可以无缝替代 AGENCOURT RNACLEAN XP, 有效降低建库成本 适用范围 本产品适用于从各种体外反应体系中纯化得到 RNA, 可用于文库构建实验中 RNA 的纯化, 但不适用于从细胞或组织中直接提取 RNA, 说明如下 : 1. 用于去核糖体转录组文库构建实验, 可与 VAHTS TM Total RNA-seq (H/M/R) Library Prep Kit for Illumina 直接配套使用 ; 2. 在普通转录组文库构建或链特异性转录组文库构建过程中, 如需在 RNA 状态设置检测节点, 可用本产品进行纯化后检测 Agencourt "RNA Clean" XP VAHTS TM RNA Clean Beads 100 ng UHRR(Universal Human Reference RNA) 在 85-5 min 条件下打断后, 分别用 2.2 VAHTS TM RNA Clean Beads 和 Agencourt RNAClean XP 纯化后检测 Agilent 2100 Bioanalyzer 结果 NGS 文库构建系列 VAHTS TM RNA Clean Beads 5 ml 40 ml 450 ml N N N ,200 4,600 42,