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1 11-03 高成功率 PCR 酶 KOD FX (Code No.KFX-101) 使用说明书 科研用 TOYOBO CO., LTD. Life Science Department OSAKA JAPAN
2 目录 1 简介 PCR 实验步骤 进行实验的注意事项 性能数据 实验例 常见问题 相关产品 注意 该系列产品为科研用试剂 请勿作为诊断 临床试剂用 此外, 对于本产品的有害性调查还不 十分全面, 因此, 在使用时, 请严格遵守实验室的一般注意事项, 适当使用保护用品, 安全操作 所有组分请均保存于 -20 条件下 保存 NOTICE TO PURCHASER: LIMITED LICENSE Use of this product is covered by one or more of the following US patents and corresponding patent claims outside the US: 5,079,352, 5,789,224, 5,618,711, 6,127,155 and claims outside the US corresponding to US Patent No. 4,889,818. The purchase of this product includes a limited, non-transferable immunity from suit under the foregoing patent claims for using only this amount of product for the purchaser s own internal research. No right under any other patent claim (such as the patented 5 Nuclease Process claims in US Patents Nos. 5,210,015 and 5,487,972), no right to perform any patented method, and no right to perform commercial services of any kind, including without limitation reporting the results of purchaser's activities for a fee or other commercial consideration, is conveyed expressly, by implication, or by estoppel. This product is for research use only. Diagnostic uses under Roche patents require a separate license from Roche. Further information on purchasing licenses may be obtained by contacting the Director of Licensing, Applied Biosystems, 850 Lincoln Centre Drive, Foster City, California 94404, USA. The use of betaine in DNA polymerase reactions is covered by intellectual property, including U.S. Patent No. 6,270,962 and related patents issued or pending in other countries ("I.P."), exclusively licensed to EPICENTRE Technologies Corporation, 726 Post Road, Madison, WI 53713, USA ("EPICENTRE"). The right to use betaine in conjunction with KOD DNA Polymerase in PCR is sublicensed by EPICENTRE to TOYOBO Co., Ltd. solely for research purposes. The purchase of this product conveys to the buyer a limited, non-exclusive, non-transferable right under the I.P. to use the purchased product containing betaine and KOD DNA Polymerase in PCR solely for research purposes. No rights are granted to resell, repackage, or further sublicense. No other license is granted to the buyer, whether expressly, by implication, by estoppel or otherwise.
3 1 简介 本产品是在高保真性 PCR 酶 KOD DNA Polymerase 基础上开发的高效率 高保真性 Long PCR 酶 在酶本身固有的高 保真性 以外, 还显示了优良的 延伸性 扩增效率 可靠性, 在各种 PCR 实验中可得到确实有效的结果 此外, 本酶中还混合了抑制 Polymerase 活性与 3 5 Exonuclease 活性的 2 种单克隆抗体, 可简便地进行高特异性的 Hot start PCR 特征 优良的保真性实际测序结果表明, 在 KOD FX 的 PCR 过程中, 产生碱基错配的频率 ( 错误率 )144,535 个碱基中仅为 19 个, 由此可见,KOD FX 的保真性是 Taq DNA Polymerase 或其他公司 Long PCR 用酶的约 11 倍 出色的延伸性 ( 扩增可能链长 ) 以 λdna 为模板可以扩增出 40kb, 以人基因组 DNA 为模板可扩增出 24kb, 以 cdna 为模板可扩增出 13.5kb 超群的扩增效率与以往的 PCR 酶相比, 得率大幅提高, 因此即便模板量很少也可进行扩增 高可靠性 (PCR 成功率 ) 对高 GC 含量的目的片段 全血等可直接扩增,PCR 成功率非常高 1
4 东洋纺 ( 上海 ) 生物科技有限公司 产品组成 KFX-101(200 次份 ) KFX-101B KFX-101C KOD FX (1.0 U/μl) 2 PCR Buffer for KOD FX* 2mM dntps 200μl 1 支 1.7ml 3 支 1ml 2 支 200 次份 次份 10 * 2 PCR Buffer for KOD FX 在 -20 保存仍为液体状态 ( 不会冻结 ) -20 以下保存 时可能会冻结, 但不会影响品质, 请放心使用 此时, 请于融解并充分搅拌后再使用 安全上的注意事项本产品为科研用试剂 请勿作为诊断 临床检测试剂使用 使用本产品请严格遵守实验室的一般注意事项, 注意安全 在相关实验中, 有可能还会用到对人体有害的试剂 请务必注意各试剂添附的组分及其相关注意事项, 并遵守各仪器 器具添附的使用说明书的指示, 使用必要的保护用具, 注意安全 性能 品质 各批号的 KOD FX 均以人基因组 DNA 为模板, 对 tpa 基因的 24kb 进行扩增确认实验后 再销售 ( tpa: tissue-type plasminogen activator ) 垂询电话 :
5 2 PCR 实验步骤 (1) PCR 反应液的配制 配制反应液前, 请充分混匀除 KOD FX( 酶液 ) 以外的各试剂 冻结的试剂请于 完全解冻后再使用 使用量 终浓度 2x PCR buffer for KOD FX 25 μl 1 2mM dntps 10 μl 0.4mM each 10pmol /μl Primer #1 1.5 μl 0.3μM 10pmol /μl Primer #2 1.5 μl 0.3μM Template DNA 1 μl Genomic DNA ~200 ng / 50μl Plasmid DNA ~50 ng / 50μl cdna ~200 ng (RNA 相当量 ) / 50μl KOD FX (1.0U/μl) 1 μl 1.0 U / 50μl Autoclaved, distilled water up to 50 μl KOD FX( 酶液 ) 请在最后添加, 反应液请用 Vortex 等充分混匀,spin down 后再 进行 PCR (2) PCR 循环条件 一般情况下请按以下两步法进行 两步法循环无法确认到扩增或引物的 Tm 值不 满 73 时, 请尝试三步法 此外, 扩增 10kb 以上的长片段出现杂带或弥散时, 请尝 试 Step down PCR 两步法 三步法 Predenature : 94, 2min. Predenature : 94, 2min. Denature : 98, 10sec. 25~40 Denature : 98,10sec. Extension : 68, 1min. /kb cycles Annealing : (Tm-5), 30sec. Extension : 68, 1min. /kb 25~40 cycles Step down Predenature : 94,2min. Denature : 98,10sec. Extension : 74,1min. /kb Denature : 98,10sec. Extension : 72,1min. /kb Denature : 98,10sec. Extension : 70,1min. /kb Denature : 98,10sec. Extension : 68,1min. /kb Extension : 68,7min. 5 cycles 5 cycles 5 cycles 15 ~ 25 cycles 3
6 东洋纺 ( 上海 ) 生物科技有限公司 延伸时间 (Extension) 请按照 1min./kb 设定 按 30sec./kb 设定在一般情况下也能 确认到扩增, 但有时会出现扩增量及扩增可靠性低下的情况 ( 请参考 P.9 探讨例 3) 由于本产品具有出色的扩增效率, 通常 25~30 个循环即可得到充分的扩增 目的片 段的拷贝数较少或对 10kb 以上的片段进行 PCR 时, 请尝试 30~40 循环 3 进行实验的注意事项 1. 为了保证 PCR 顺利进行 1) 反应用离心管请尽量使用薄壁管 同时, 推荐 PCR 反应液为 total 50μl 2) 灭菌水 引物请事先分装成小份保存, 建议每次实验都用完 3)dNTPs 请务必使用本品中添附的组分, 或用本公司单独销售的 dntps Mixture(2mM) (Code No.:NTP-201) 4) 引物请使用 GC 含量不高的 22~35mer(Tm 值 >60 ) 同时, 设计引物时要注意不要产生二级结构或引物二聚体 5) 进行长目的片段扩增时, 请尽量使用引物设计软件, 请设计成 25~35mer Tm 值在 65 以上 并请注意, 在引物的 3 端避免 GC rich 6) 模板 DNA 的长度与纯度对 PCR 的结果有很大的影响 模板量充裕的情况下, 建议事先进行电泳以确认其品质 2.PCR 产物的克隆 1) 用本酶扩增的 PCR 产物末端为平滑末端 因此, 对该 PCR 产物进行克隆时, 需要使用事先磷酸化的引物, 或将 PCR 产物的末端磷酸化后再进行平滑末端克隆 进行 TA 克隆时, 如果使用本公司的 KOD 专用 TA 克隆试剂盒 TArget Clone -Plus-(Code No.:TAK-201), 则可对未经纯化的 PCR 产物进行简便的 TA 克隆 垂询电话 :
7 2) 对于用本酶扩增的 PCR 产物, 用限制性内切酶处理, 再利用该突出末端进行克隆时, 请在限制性内切酶处理前对扩增产物进行纯化 KOD FX(DNA Polymerase) 有残留的情况下, 本酶所具有的 3 5 Exonuclease 活性会将限制性内切酶处理中的突出末端削去 扩增产物的纯化, 在苯酚 / 氯仿处理后, 进行乙醇沉淀, 或用本公司生产的利用磁珠的 DNA 纯化试剂盒 MagExtractor -PCR & Gel Clean up-(code No.:NPK-601) 4 性能数据 1. 扩增成功率 (GC rich 目的片段 粗样品 ) GC rich 目的片段的扩增 用 KOD FX 可对其他公司 PCR 酶无法扩增的 GC rich 目的片段进行扩增 人 TGF-β2.3kb (GC 含量约 70%) 人 IGF2R 基因 [NM_000876] 8.9kb (GC 含量约 90% 区域的 mrna) M M2 M M2 M1:1kb DNA Ladder 1: KOD FX 2: KOD -Plus- 3: KOD -Plus-+5% DMSO 4: A 公司酶 5: B 公司酶 6: C 公司酶 7: Taq DNA Pol. M2:λ/ Hind III digest M1:1kb DNA Ladder 1: KOD FX 2: A 公司酶 3: D 公司酶 4: E 公司 GCrich 用酶 5: F 公司 GCrich 用酶 6: G 公司 GCrich 用酶 M2:λ/ Hind III digest 模板 : 人基因组 DNA10ng / 50μl 反应体系 模板 : 人 cdna(hela Total RNA50ng 相当 )/ 50μl 反应体系 直接以全血为样品进行 PCR 用 KOD FX, 以全血为样品 ( 模板 ) 可扩增 8.5kb M M2 模板 : 人全血 2μl / 50μl 反应体系 M1:1kb DNA Ladder 1: β-globin 1.3kb 2: β-globin 3.6kb 3: β-globin 8.5kb M2:λ/ Hind III digest 5
8 东洋纺 ( 上海 ) 生物科技有限公司 2. 扩增效率用 KOD FX 和其他公司的酶进行模板 DNA 量和扩增效率的比较 以 0.1ng~100ng 的基因组 DNA 为模板,Human β-globin 2.8kb 为目的片段, 在 50μl 反应体系中, 用 15pmoles 引物 KOD FX 1U 2 step cycle 进行 30cycle 扩增反应 结果可见, 与以往的 PCR 酶及其他公司的 PCR 酶相比较, 用 KOD FX 可得到更明亮更好的效果, 得率大幅提高, 因此即便模板量很少也可进行扩增 KOD FX KOD -Plus- A 公司酶 B 公司酶 C 公司酶 Taq DNA Pol. M M M M M M M 模板 : 人基因组 DNA 1: 模板量 0.1ng / 50μl 反应体系 2: 1 ng 3: 10 ng 4: 100 ng 目的片段 :β-globin 2.8kb PCR 循环条件 : 94 2min. 30 cycles 68 3min. M:1kb DNA Ladder * 其他公司酶按其说明书进行了 30 循环 3. 延伸性 ( 扩增可能链长 ) 用 KOD FX 以 λdna 为模板可以扩增出 40kb, 以人基因组 DNA 为模板可扩增出 24kb, 以 cdna 为模板可扩增出 13.5kb 垂询电话 :
9 Template:λDNA Template: 人基因组 DNA M M2 M M2 模板 :λdna 10ng / 50μl 反应体系 M1:1kb DNA Ladder 1: 5kb 2: 10kb 3: 20kb 4: 30kb 5: 40kb M2:λ/ Hind III digest 模板 : 人基因组 DNA 50~200ng / 50μl 反应体系 M1:1kb DNA Ladder 1: β-globin 1.3kb 2: β-globin 3.6kb 3: β-globin 8.5kb 4: β-globin 17.5kb 5: tpa 24.0kb M2:λ/ Hind III digest Template: 逆转录反应液 (cdna) M M2 模板 : 逆转录反应液 ( 人 cdna) total RNA100ng 相当 / 50μl 反应体系 M1:1kb DNA Ladder 1: Homo sapiens polymerase (DNA directed), epsilon [NM_006231] 6.8kb 2: Homo sapiens insulin-like growth factor 2 receptor [NM_000876] 8.9kb 3: Homo sapiens dystrophin [NM_004006] 13.5kb M2:λ/ Hind III digest 4. 保真性以人基因组 DNA 为模板, 对 β-globin 基因 2.4kb 进行扩增,PCR 产物用 TArget Clone -Plus-(Code No.:TAK-201) 进行 TA 克隆 然后, 选择 96 个克隆测序, 确认序列 结果可见, 在 KOD FX 的 PCR 过程中, 产生碱基错配的频率 ( 错误率 )144,535 个碱基中仅为 19 个 保真性是 Taq DNA Polymerase 及其他公司 Long PCR 用酶的约 10 倍 PCR 错误率 ( 每 100,000 个碱基的错误个数 ) 7 KOD -Plus- KOD FX Pfu DNA Polymerase A 公司 Long PCR 用试剂 Taq DNA Polymerase
10 东洋纺 ( 上海 ) 生物科技有限公司 5. 探讨例 探讨例 1: 循环条件的探讨之一 123M 模板 : 逆转录反应液 ( 人 cdna) Human Adult Skeletal Muscle total RNA 100ng 相当 / 50μl 反应体系目的片段 :Homo sapiens dystrophin [NM_004006] 13.5kb PCR 循环条件 : 94 2min. 130 cycles cycles 68 14min. M:λ/ Hind III digest 探讨例 2: 循环条件的探讨之二 1 2 M 模板 : 人基因组 DNA 200ng / 50μl 反应体系目的片段 :tpa 24kb PCR 循环条件 : min. 94 2min min. 30 cycles 74 24min min min min. 68 7min. M:λ/ Hind III digest 20 cycles 垂询电话 :
11 探讨例 3: 模板 DNA 的量与延伸时间的探讨 目的片段 :β-globin 8.5kb M M:1kb DNA Ladder 模板 : 人基因组 DNA 1: 6ng / 50μl 反应体系 2: 12ng 3: 25ng 4: 50ng 5: 100ng 6: 200ng 7: 400ng 8: 800ng PCR 循环条件 : min. 94 2min min. 30 cycles 68 9min. 30 cycles 目的片段 :tpa 24kb M min min min min min. 68 7min. 20 cycles min min min min min. 68 7min. 20 cycles M:λ/ Hind III digest 9
12 东洋纺 ( 上海 ) 生物科技有限公司 5 实验例 实验例 1: 用碱裂解法配制的小鼠尾巴裂解液的扩增例 将碱裂解法配制的小鼠尾巴裂解液 0.5μl, 直接添加到 PCR 反应液中, 以 Mouse membrane glycoprotein(thy-1) gene(m10246) 为目的片段, 采用两步法, 进行 30 个循环的 扩增 小鼠尾巴 (3mm 左右 ) 50 mm NaOH 180μl Vortex 充分振荡 95, 10 min. 温育 1 M Tris-HCl (ph 8.0) 20μl Vortex 充分振荡 离心 12,000 rpm, 10 min. 上清 ( 模板 ) 取 0.5~2μl 添加到 50μl PCR 反应液中 小鼠尾巴切片时, 请浸入碱溶液再切 接触热碱性溶液时, 请十分注意 处理后, 小鼠尾巴不会也无需完全溶解 小鼠尾巴表面溶解即可 不建议将用 Proteinase K 配制的裂解液直接用于 PCR Proteinase K 和 SDS 对 PCR 可能会有不好的影响, 使用时, 请事先纯化 如要将裂解液直接用于 PCR, 推荐以上的碱裂解法 结果可见, 只有在用 KOD FX 的情况下, 才能确认到明亮的扩增条带 相比使用 Proteinase K 的方法, 碱裂解法所花工夫较少, 可更简便地进行转基因小鼠的基因分析 垂询电话 :
13 实验例 2: 用一步法配制的植物裂解液的扩增例 将一步法配制的番茄叶 烟草叶 稻叶以及精米的裂解液各 1μl, 直接添加到 PCR 反应液, 以 rbcl 为目的片段, 采用两步法, 进行 30 个循环的扩增 溶解 Buffer 植物叶 (3mm 左右小块 精米一粒 ) 100mM Tris-HCl (ph9.5) 溶解 Buffer 100μl 1M KCl Vortex 充分振荡 10mM EDTA 95, 10 min. 温育 Vortex 充分振荡上清 ( 模板 ) 取 0.5~2μl 添加到 50μl PCR 反应液中 用本方法处理后, 植物组织不会也无需完全溶解 参考文献 :Biotechniques.19:394(1995) 结果可见, 只有在用 KOD FX 的情况下, 所有的样品才都能确认到明亮的扩增条带 用一步法结合 KOD FX, 即可大大简化植物基因分析的步骤 实验例 3: 全血 培养细胞 酵母等 按如下量向 50μl PCR 反应液直接添加样品, 进行 PCR 全血 1~4μl 培养细胞 ~ cells( 例 : 取悬浊在 RPMI/10%FCS 中的 cells/μl 细胞悬浊液 2μl) 酵母 用接种针挑少许即可 ( 菌落直接 PCR 无需通过酶处理溶解酵母细胞壁 ) 11
14 东洋纺 ( 上海 ) 生物科技有限公司 6 常见问题 问题 可能原因 对策 循环条件 用三步法, 退火温度降为 Tm-10 增加 2~5 个循环 < 参考探讨例 1> 无法确认到扩增产物或扩增产物很少 出现弥散 杂带时 引物 确认引物的品质 再配制 再合成 重新设计引物 确认模板 DNA 的纯度 ( 特别要确认模板是否被模板 DNA 的纯度 RNA 等污染 ) 提高模板 DNA 的纯化级别 量使用适量的模板 DNA < 参考探讨例 3> 循环条件 减少 2~5 个循环 < 参考探讨例 1> 进行 Step down PCR < 参考探讨例 2> 引物 确认引物的品质 再配制 再合成 重新设计引物 模板 DNA 量 使用适量的模板 DNA < 参考探讨例 3> 酶量 酶的使用量降为 0.5~0.8U/ 50μl 7 相关产品 品名 包装 保存温度 Code No. < 高保真性 PCR 酶 > KOD DNA Polymerase 250 U 1-20 KOD-101 < 热启动 高保真性 PCR 酶 > KOD -Plus- < 高保真性 PCR 酶 ( 高保真性的同时 PCR 成功率 UP)> KOD -Plus- Ver U 1 (200 U 1) U 1 (200 U 1) KOD-201 KOD-201B KOD-211 KOD-211B dntps Mixture(2mM) 1 ml -20 NTP-201 <KOD 专用高效率 TA 克隆试剂盒 > TArget Clone -Plus- 10 次份 -20 TAK-201 < 利用磁珠纯化 DNA fragment 试剂盒 > MagExtractor -PCR & Gel Clean up- 200 次份 室温 NPK-601 垂询电话 :
15 [ 制造 销售商 ] 东洋纺 ( 上海 ) 生物科技有限公司上海市浦东新区张杨路 188 号汤臣商务中心 C 座 310 室邮编 : 交货期限 订货相关咨询 Tel: Fax: sales@bio-toyobo.cn 产品内容 技术相关咨询 Tel: Fax: tech@bio-toyobo.cn 代理商资料 :
PCR专题改.doc
Primer3 http://frodowimitedu/cgi-bin/primer3/primer3_wwwcgi Primer5 Oligo665 Primer5 http://wwwbioonnet/dispbbsasp?boardid=25&id=38536 Oligo667 http://wwwbioonnet/dispbbsasp?boardid=25&id=40898 1 PCR 1
2004级研究生现代免疫学实验技术结业报告
PCR PCR PCR RT-PCR PCR (Polymerase Chain Reaction,PCR) 80 DNA, DNA PCR PCR PCR DNA PCR -- -- DNA DNA 93 DNA PCR DNA DNA ( ) DNA 55 DNA DNA -- TaqDNA dntp DNA -- -- PCR PCR DNA DNA Y (1 X) n Y DNA X (Y)
Applied Biosystems StepOne™ Real-Time PCR System User Bulletin: StepOne™ System Updates (PN A / SN 117UB20-01)
Applied Biosystems StepOne Real-Time PCR System ЪßÕ ³Ê Applied Biosystems StepOne Real-Time PCR System StepOne 2007 3............................................................... 2...............................................................
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摘要
中 華 民 國 第 五 十 一 屆 中 小 學 科 學 展 覽 會 作 品 說 明 書 科 別 : 生 物 科 組 別 : 高 中 組 作 品 名 稱 : 不 給 糖 就 搗 蛋 - 蛀 牙 細 菌 的 抑 制 關 鍵 詞 :Bacillus horikoshii 轉 糖 鏈 球 菌 蛀 牙 編 號 : 摘 要 : 本 實 驗 的 目 的 是 希 望 能 找 出 人 類 牙 齒 上 的 主 要 菌
荧光定量PCR
荧 光 定 量 PCR 荧 光 定 量 PCR 原 理 荧 光 定 量 PCR 最 早 称 TaqMan PCR, 后 来 也 叫 Real-Time PCR, 是 美 国 PE(Perkin Elmer) 公 司 1995 年 研 制 出 来 的 一 种 新 的 核 酸 定 量 技 术 该 技 术 是 在 常 规 PCR 基 础 上 加 入 荧 光 标 记 探 针 或 相 应 的 荧 光 染 料
标题
吉林农业大学学报 ２０１６ ３８ １ ８７ ９１ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｊｉｌｉｎ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｈｔｔｐ ｘｕｅｂａｏ ｊｌａｕ ｅｄｕ ｃｎ Ｅ ｍａｉｌ ｊｌｎｄｘｂ ｖｉｐ ｓｉｎａ ｃｏｍ 神 经 生 长 因 子 ｍｒｎａ 在 鹅 等 级 前 卵 泡 中 的 表达 刘璐璐 隋玉健 朱海洋 武惠岩 杨 辉 孙永峰 吉林农业大学动物科学技术学院 长春 １３０１１８
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自 然 与 科 学 技 术 哲 学 名 词 索 引 上 海 交 通 大 学 可 信 任 数 字 技 术 实 验 室 制 Copyright 2009 Trust Digital Technology Laboratory, Shanghai Jiao Tong University. Permission is hereby granted, free of charge, to any person
Phire Hot StartII DNA 聚合酶
重 要 提 示 Phusion 人 源 样 本 直 接 PCR 试 剂 盒 产 品 货 号 :F-150,200rxns x 20μl 变 性 温 度 为 98 C 退 火 温 度 与 众 多 常 规 DNA 聚 合 酶 ( 如 Taq DNA 聚 合 酶 ) 不 同, 具 体 请 参 照 6.3 延 伸 时, 若 扩 增 子 片 段 1kb, 则 延 伸 时 间 设 定 为 15s 即 可 ; 若
Ｃｏｄｅ Ｎｏ
13-01 KOD SYBR qpcr Mix (Code No.QKD-201,QKD-201T) 使用说明书 科研用 TOYOBO CO., LTD. Life Science Department OSAKA JAPAN 目录 1 简介... 1 2 本产品的组成... 2 3 其他必需品... 3 4 使用方法... 7 5 使用例 (Ⅰ) 长链 / GC Rich 目的片段的定量 PCR...
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 40 94 88 82 77 72 67 62 57 53 48 44 40 37 33 29 26 23 20 17 14 11 8 39 94 88 82 77 71 66 61 57 52 48 44 40 36 32 28 25 22 18 15 12 9 7 38 94 88
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福建农业学报 材料与方法 试验菌株 引物 主要仪器 主要试剂 细菌培养 模板的制备 反应条件 扩增产物的检测 特异性试验 敏感性试验 分离菌株检测 产物的克隆及序列测定 结果与分析
* * 2
* * 2 3 4 6 p 1234567 bl bm bn bo bp bq bk 9 8 cl ck bt bs br 1 0 2 3 4 5 6 7 8 9 bk bl bm bn bo bp bq br bs p bt ck 8 2 4 6 cl cm cn co co cn cm 10 . co cn cm cl ck bt bs 1 2 34567 8 9 bk bl bm bn
第 2 章 按用途分类的产品流程图 想克隆 DNA 片段 高保真的扩增 DNA 模板入手 基因组 DNA 抽提试剂盒 (6-4 页 ) MagExtractor -Genome- MagExtractor -Plant Genome- 高保真性 PCR 酶 (2-12 页 ) KOD -Plus-
第 2 章 INDEX 第 2 章目录 2-1 第 2 章按用途分类的产品流程图 2-2 PCR 及 PCR 周边技术 2-4 cdna 的合成 2-10 常见问题 2-11 PCR KOD -Plus- Neo 2-12 KOD -Plus- / KOD -Plus- Ver.2 2-14 KOD FX Neo 2-16 KOD FX 2-18 KOD DNA Polymerase 2-20 Blend
Protein Labeling and Detection
ECL plex Product Specialist 1/ Western Blot 2/ Western Blotting- PI 3/ Western Blotting 1. 2 1 2. 3. 4. Y 3 4 5. 4/ 1. SDS- (SDS-PAGE) SDS ( β- ) --SDS 5/ SDS-PAGE - - - (Tris-HCL ph 6.8) glycine/chloride
材料與方法
10-12 250-350 Sprague-Dawley rat ( SD ) 12 ( AM 8 00-PM 8 00 ) (Control group) (HS) (Heat shock group) 15 0 4 6 16 24 (PAE) ( Pulmonary air embolism group) 20 40 (25 l/min) 40 17 20 (HS&PAE) 15 4 16 20
2
ISSN 0255-6162 GPN 2006900031 287 93 11 20 161-2 02 26531318 http://www.nlfd.gov.tw 1 2 3 287 4 287 5 44 93 13 1 monocrotophos 0.40 ppm 105 1300 99% 6 3 44 106 93 13 1 0.40 ppm 403 40 7 DNA (HPLC) DNA
CPX-900 M-320 多 媒 體 電 腦 伴 唱 機 使 用 說 明 書 目 錄 產 品 特 色 說 明... 產 品 功 能 簡 介... 面 板 背 板 配 置 說 明 圖... 基 本 接 線 法... RX-206 遙 控 器 按 鍵 功 能 介 紹... 點 歌 操 作... 1. 靜 態 功 能 簡 介... 2. 動 態 功 能 簡 介... 簡 易 故 障 排 除... 3
096THU DOC
2-1 DNA 1 DNA(plasmid DNA) pet21ahmyh hmyh (6A C) BL-21 Gold strain, 2003 2-1 pet21ahmyh Qiagen mini-preparation kit DNA DNA DNA( hmyh ) DNA( hmyh ) DNA DNA 2-2 DNA DNA AS-PCR 2 DNA DNA genomic DNA 30
X MGC X 22 X 23 X MGC X BALB/c 26 X MGC X MGC X MGC X..
1 0 3 8 4 9726023 UDC X MGC80-3 2000 7 2000 7 2000 7 2000 6 22.3.4...11..11 12 13 15 15 20 20 X MGC80-3. 22 X 22 X 23 X MGC80-3.23 X BALB/c 26 X MGC80-3.27 X MGC80-3 28 29 29 30 31 32 33 X MGC80-3 34 X..34.35.36
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ZF Friedrichshafen G Special Driveline Technology 2 ZF-Servoplan CG ZF-Duoplan 2K ZF-Ecolift ZF-Tiratron 3 ZF-Servoplan (ZF-Servoplan) (ZF-Duoplan) (ZF-Tiratron). lso available from ZF: Compact gearboxes
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发行说明, 7.0.1 版
发 行 说 明 Websense Web Security Websense Web Filter 7.0.1 版 本 版 本 的 新 特 点 Websense Web Security 和 Websense Web Filter 的 7.0.1 版 本 均 已 本 地 化 为 以 下 语 言 : 法 语 德 语 意 大 利 语 日 语 葡 萄 牙 语 简 体 中 文 西 班 牙 语 繁 体 中 文
实验室常用培养基的配制方法
实验室常用培养基的配制方法 Ampicillin( 氨卡青霉素 )(100 mg/ml) 100 mg/ml Ampicillin 50 ml 配制方法 1. 称量 Ampicillin 置于 50 ml 离心管中 ; 2. 加入 40 ml 灭菌水, 充分混合溶解后, 定容至 50 ml; 3. 用 0.22 µm 过滤膜过滤除菌 ; 4. 小份分装 (1 ml/ 份 ) 后,-20 保存 IPTG(
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TOYOBO 技术讲座 东洋纺 ( 上海 ) 生物科技有限公司 讲座内容 第一部分使用 KOD 酶进行高效率 PCR! 教您高保真性扩增 粗样品 PCR 及 Multiplex PCR 相关的 PCR 酶的基础知识及 PCR 的技巧 第二部分 实践!Realtime PCR! 从 qpcr 试剂的选择到应用 第三部分重要! 逆转录反应! 帮您进行高效率的逆转录反应更简便地进行去除 gdna 及从细胞开始的逆转录
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31 尼 希 米 书 尼 希 米 的 祷 告 以 下 是 哈 迦 利 亚 的 儿 子 尼 希 米 所 1 说 的 话 亚 达 薛 西 王 朝 二 十 年 基 斯 流 月 *, 我 住 在 京 城 书 珊 城 里 2 我 的 兄 弟 哈 拿 尼 和 其 他 一 些 人 从 犹 大 来 到 书 珊 城 我 向 他 们 打 听 那 些 劫 后 幸 存 的 犹 太 人 家 族 和 耶 路 撒 冷 的 情 形
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检 验 过 程 临 床 PCR 检 验 标 本 的 处 理 保 存 及 核 酸 提 取 方 法 医 师 申 请 检 验 项 目 申 请 患 者 准 备 患 者 识 别 样 本 采 集 样 本 运 送 Ⅰ Ⅱ Ⅲ 分 析 测 定 样 本 处 理 分 析 前 分 析 中 分 析 后 报 告 临 床 应 用 烟 台 市 烟 台 山 医 院 赵 善 娜 结 合 临 床 资 料 分 析 结 果 并 确 认 出
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213456!"# $ % # %557;&/55/?5,/ @@@!88>>!"#!$% &'()*+ 武汉市疾病预防控制中心 武汉 /&55, % 华中科技大学同济医学院病原生物学系微生物教研室 武汉 /&55&5 & 武汉市第十一医院 武汉 /&5555,- O ' 0 ' =! 6!, 2 M*34!. 5 '2 ' 0 0* 6) 7 88^9:;0, 6! 89-4 O?@ 7%58
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3 案 件 受 理 3.1 刑 事 案 件 的 送 检 人 员 需 提 供 公 检 法 司, 以 及 保 卫 部 门 的 盖 有 公 章 的 鉴 定 委 托 书 或 公 函, 并 出 示 本 人 的 工 作 证 民 事 案 件 的 送 检 人 员 需 提 供 委 托 单 位 或 个 人 的 委 托
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:TGF-β bfgf 23 KEY WORDS:transforminggrowthfactor-β ;basicfibroblastgrowthfactor; bonemarrow mesenchymalstemcels;eukaryoticexpressionvector; liposomet
2 ( )208 58 JournalofNanchangUniversity(MedicalSciences)208,Vol.58No. TGF-β bfgf,, 2 (., 330006; 2., 5040) : -β (TGF-β ) (bfgf) (BMSCs), SD BMSCs Percol PCR TGF-β bfgf, pcdna3.(+), 3 BMSCs RT-PCR Westernblot
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3 4 5 1 1-20 4 2, 260mOsm/kg 320 mosm/kg HEPES ph 7.2-7.4 ph ph (7.4-7.7), ph (7.0-7.4) NaHCO 3 CO 2 CO 2 CO 2 5 2
1 (1) (2) ( ) (3) (4) (5) (1) (2) (3) 2 (1) ( ) (2) (3) (4) 1 2 1 3 4 5 1 1-20 4 2, 260mOsm/kg 320 mosm/kg HEPES ph 7.2-7.4 ph ph (7.4-7.7), ph (7.0-7.4) NaHCO 3 CO 2 CO 2 CO 2 5 2 NaHCO 3 1.97g/L CO 2
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2. 对 DNA 载 体 的 控 制 元 件 和 选 择 标 记 的 序 列 与 来 源, 如 : 真 核 启 动 子 增 强 子 终 止 序 列 抗 生 素 抗 性 标 记 等 进 行 分 析 建 议 避 免 使 用 抗 青 霉 素 或 其 它 饽 邗 0 房 咕 氐 目 剐 员 昙 牵 好 使
预 防 用 DNA 疫 苗 临 床 前 研 究 技 术 指 导 原 则 一 前 言 DNA 疫 苗 是 将 外 源 目 的 基 因 片 段 构 建 在 DNA 质 粒 中, 重 组 后 的 DNA 导 入 机 体 后 可 表 达 目 的 蛋 白, 目 的 蛋 白 刺 激 机 体 产 生 特 异 性 免 疫 学 反 应 而 达 到 预 防 某 种 疾 病 的 生 物 制 剂 该 指 导 原 适 用 于
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1 1-1 16 mm 3 23 mm 24 mm 1-2 1-1 12~14 mm 2 mm 1-2 2 1 1. 1-3 (1) (2) 2. 1-4 (1) (2) (3) 1-3 1-4 3. (1) 1-5 (2) 1-5 (3) (4) 1-6 1-5 1-6 3 4. 1-7 (1) (2) 1-7 5. 12 6 1-8 1-8 4 1 1-9 1/6 5/6 1-10 1-10 5
经 无 数 次 的 提 取 和 提 纯, 最 终 得 到 一 小 匙 东 西 这 种 东 西 在 显 微 镜 下 呈 现 出 针 状 晶 体 的 形 状, 在 水 中 溶 解 后 得 到 一 种 带 乳 光 的 汁 液 当 他 将 少 许 溶 液 涂 抹 健 康 烟 叶 上 几 天 后, 这 烟 叶
生 命 的 历 程 什 么 是 生 命 生 命 是 什 么? 人 类 是 生 命 体 的 一 类, 他 们 有 组 织 器 官 等 形 体 上 的 相 同 之 处, 但 也 有 性 别 年 龄 肤 色 等 巨 大 的 差 别 ; 我 们 知 道 成 千 上 万 种 动 物 植 物 直 至 微 生 物 都 是 生 命 体, 因 为 它 们 同 人 类 一 样 都 有 产 生 生 长 衰 老 及 消 亡
材料! 方法! # 基因的扩增及其序列分析
生物技术通报 黄艳燕 黄靖华 卢福芝 孙靓 彭立新 周兴 黄日波 利用 的方法从鼠李糖乳杆菌基因组 中扩增到 乳酸脱氢酶基因 并连接到载体 上 构建表达质粒 将重组质粒 转化大肠杆菌 重组菌株经 诱导表达 电泳分 析表明 在大肠杆菌中实现了表达 表达产物的分子量约为 同时采用紫外分光光度法测定 乳酸脱氢酶的酶活 测得重组菌株的 乳酸脱氢酶活力为 最适反应温度为 最适 乳酸脱氢酶 克隆 表达 鼠李糖乳杆菌
去 中 和 ; [3] 消 化 最 好 在 37 培 养 箱 或 室 温 25 以 上 的 环 境 下 进 行 消 化, 消 化 2--5 min 后, 把 培 养 瓶 放 在 显 微 镜 下 观 察, 发 现 胞 质 回 缩 细 胞 间 隙 增 大, 细 胞 变 圆 后, 立 即 将 培 养 瓶
![去 中 和 ; [3] 消 化 最 好 在 37 培 养 箱 或 室 温 25 以 上 的 环 境 下 进 行 消 化, 消 化 2--5 min 后, 把 培 养 瓶 放 在 显 微 镜 下 观 察, 发 现 胞 质 回 缩 细 胞 间 隙 增 大, 细 胞 变 圆 后, 立 即 将 培 养 瓶](/thumbs/42/23090277.jpg "去 中 和 ; [3] 消 化 最 好 在 37 培 养 箱 或 室 温 25 以 上 的 环 境 下 进 行 消 化, 消 化 2--5 min 后, 把 培 养 瓶 放 在 显 微 镜 下 观 察, 发 现 胞 质 回 缩 细 胞 间 隙 增 大, 细 胞 变 圆 后, 立 即 将 培 养 瓶")
第 一 节 细 胞 培 养 的 相 关 技 术 1 细 胞 的 复 苏 概 述 复 苏 细 胞 要 求 快 速 融 化 的 手 段, 这 样 可 以 保 证 细 胞 外 结 晶 在 很 短 的 时 间 内 即 融 化 避 免 由 于 缓 慢 融 化 使 水 分 渗 入 细 胞 内 形 成 胞 内 再 结 晶 对 细 胞 造 成 损 害 用 品 培 养 液 吸 管 离 心 管 培 养 瓶 步 骤 [1]
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1/16 T stg -40 to 125 C V cc 3.8V V dc RH 0 to 100 %RH T a -40 to +125 C -0.3 to 3.6V V -0.3 to VDD+0.3 V -10 to +10 ma (@T = 25 C, @Vdd = 3V) VDD 1.8 3.0 3.6 V (1) 0.08 0.3 µa Idd 300 450 500 µa 0.25
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概述 Muta-direct 定点突变试剂盒使用说明 Muta-direct 定点突变试剂盒可以在克隆于质粒 DNA 序列的特定位点诱导突变, 理论上可以保证突 变率达到 100%, 整个实验过程简单快捷 只有两步, 而不需要用到 M13 载体和甲基化步骤 该试剂盒 可以诱导某个已知基因的特定碱基进行定点突变 再突变成野生型 密码子突变 插入或者缺失等, 因 此可以用于功能基因组学和蛋白质组学的研究
Code No
Code No. RR420A 研究用 TB Green Premix Ex Taq (Tli RNaseH Plus) 说明书 从 Lot. AK7701 开始, 本制品的长期保存温度变更为 -20 具体 信息请查阅 P2 保存 现已将 Takara Bio 的嵌合法 real-time PCR (qpcr) 产品名称变更为 TB Green series 本次只变更产品名称, 产品 Code 和产品性能不受变更影响,
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兩 岸 服 務 業 貿 易 開 放 後, 臺 灣 金 融 服 務 業 之 商 機 與 挑 戰 Part I: 兩 岸 服 務 業 貿 易 開 放 Chung Hua Shen 沈 中 華 Department of Finance National Taiwan Univeristy Chung Hua Shen 1 Chung Hua Shen 2 台 資 銀 行 赴 中 國 大 陸 發 展 歷
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BWO615SS 使 用 及 安 裝 說 明 書 2 Content 1...04 2...05 3...06 BWO615SS BWO615SS 4...07 5...08 6... 09 7... 10 3 1 4 2 ( 3mm) ( ) 5 3 BWO615SS 1. 2. 3. 4. / 5. ( ) 6. ( ) 7. 8. 9. 10. 11. 12. 13. 14. 15. BWO615SS
2,837,000 64.8% 96,00075.3% 2,169,000 73.9% 18,579,000 3,194,000 324.0% 15,221,000
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USPTO Academic research Corporate needs Global/International Inventors Libraries News Media/Publication Patent Attorney or Agent USPTO e (ebusiness Ce
I 2002.03.27 2 http://www.uspto.gov/ http://www.wipo.org/ http://ipdl.wipo.int/ esp@cenet http://www.european-patent-office.org/ http://ep.espacenet.com/ http://www.cpo.cn.net/ 3 4 USPTO USPTO First time
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2003 11 WWW.CEI.GOV.CN TEL01068558355 FAX01068558370 I ---- TEL01068558355 FAX01068558370 II ---- 1 20031-9...2 2 20031-9...3 3...3 4 20031-9...3 5 20031-9...4 6 20031-9...5 7 20031-9...6 8...6 9 20031-9
背 景 资 料 对 于 在 华 经 营 的 企 业 里, 人 力 资 源 管 理 绝 不 是 一 件 轻 松 的 工 作 HR 从 业 者 除 了 要 具 备 猎 人 的 眼 光 心 理 学 家 的 耐 心 谈 判 专 家 的 口 才, 更 为 重 要 的 是, 还 需 要 具 备 专 业 的 法
R Professional Information for You 人 力 资 源 法 务 合 规 系 列 Human Resource Legal Compliance Management Series 深 圳 Shenzhen Putonghua / 普 通 话 9:00am-5:30pm 系 列 一 : 人 力 资 源 合 规 风 险 分 析 与 员 工 关 系 管 理 2013 年 11
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组织样本 mirna 提取细胞样本 mirna 提取全血样本 mirna 提取 TaqMan mirna 反转录试剂盒 通过 HG TaqMan mirna 定量 PCR 试剂盒检测 microrna 1-4 2 3 4 5-6 7-8 7 8 9 B1802 mirna 25T/100T 500/1600 B1803 mirna 25T/100T 500/1600 D1802 HG TaqMan
Qubit-DNA RNA 总浓度测定 dsdna BR Assay Kits 各试剂加样量 : Buffer 标准 1 标准 2 样品 试剂 ( 荧光染色 ) 总量 ( 溶液体积 ) 50 或 250ml 1 或 5ml 1 或 5ml 待测 250µl 或 1.25ml 原始浓度 未知 0 ng
Qubit-DNA RNA 总浓度测定 dsdna BR Assay Kits 各试剂加样量 : 总量 ( 溶液体积 ) 50 或 250ml 1 或 5ml 1 或 5ml 待测 250µl 或 1.25ml 原始浓度 未知 0 ng/μl 100 ng/μl 待测 200 测定时要求浓度 未知 0 ng/μl 5000ng/ml 0~5000 ng/ml 1 备注 -Buffer:Qubit dsdna
市 场 综 述 三 季 度, 上 海 投 资 市 场 交 易 量 持 续 攀 升, 共 有 八 宗 主 要 交 易 达 成, 交 易 金 额 共 计 人 民 币 160 亿 元, 环 比 增 长 59% 投 资 者 尤 其 是 国 际 投 资 者, 逐 渐 增 购 租 金 收 入 稳 定 的 核 心
Savills World Research Shanghai 市场简报 投资 2015年10月 图片 企业天地1号 2号楼 概述 国际投资者调整投资策略 逐渐增加核心资产收购 不再局限于资产增值投资机会 三季度共达成八宗主要成交 交 易总额约人民币160亿元 环比增长 59% 国际投资者的重心逐渐转向核 心资产 十幅土地高价成交 成交楼面价均 超每平方米人民币20,000元 平均溢价 率为49.5%
Background 2006 年 2 月 我 国 新 企 业 会 计 准 则 的 颁 布, 标 志 着 与 国 际 惯 例 趋 同 的 中 国 新 会 计 准 则 体 系 的 建 立, 自 2007 年 1 月 1 日 起 首 先 在 境 内 上 市 的 公 司 施 行, 自 2008 年 1 月
The Analysis and Application of CAS & U.S. GAAP & IFRS Jeremy Zhang ( 章 晓 虎 ) PEO Contracted Trainer 深 圳 2013 年 7 月 18-19 日 ( 周 四 / 五 ) 9:00am - 5:00pm 普 通 话, 中 文 教 材 Background 2006 年 2 月 我 国 新 企 业 会
一 法 律 1 中 华 人 民 共 和 国 证 券 法 中 华 人 民 共 和 国 证 券 法 (1998 年 12 月 29 日 第 九 届 全 国 人 民 代 表 大 会 常 务 委 员 会 第 六 次 会 议 通 过 根 据 2004 年 8 月 28 日 第 十 届 全 国 人 民 代 表
广 东 君 信 律 师 事 务 所 地 址 : 广 州 市 农 林 下 路 83 号 广 东 发 展 银 行 大 厦 20 楼 邮 政 编 码 :510080 电 话 :(020)87311008 传 真 :(020)87311808 网 址 : http://www.junxin.com Kingson Law Firm Add: 20/F.,GuangFa Bank Centre 83 Nonglinxia
INTRODUCTION
EV BUS PROJECT INTRODUCTION / 1-8, Hibikino, Wakamatsu-ku, Kitakyushu-shi, Fukuoka, 808-0135 Japan TEL. (+81)93(691)1177 FAX.(+81)93(695)3499 http://www.price-management.jp/ http://www.pmj-china.com/
輔導企業管理運用智慧財產權之實例探討 R&D ( ) / (IP Audit) / SWOT / / / 1 ( ---- ) 21 (1) 1 SWOT (Strength) (Weakness) (Opportunity) (Threat) SWOT 36 智慧財產權月刊 74 期 94.02
(Intellectual Property Right) ( ) 93 12 20 ( ) 94.02 智慧財產權月刊 74 期 35 輔導企業管理運用智慧財產權之實例探討 R&D ( ) / (IP Audit) / SWOT / / / 1 ( ---- ) 21 (1) 1 SWOT (Strength) (Weakness) (Opportunity) (Threat) SWOT 36 智慧財產權月刊
过, 同 样 加 快 了 扩 散 速 度 溶 剂 则 是 从 低 浓 度 溶 液 中 通 过 渗 透 膜 向 高 浓 度 溶 液 中 扩 散 溶 液 的 浓 度 越 高, 渗 透 压 就 愈 大 随 着 温 度 升 高, 渗 透 压 逐 渐 增 加, 导 致 蛋 黄 失 水 率 增 加 [4] 因
![过, 同 样 加 快 了 扩 散 速 度 溶 剂 则 是 从 低 浓 度 溶 液 中 通 过 渗 透 膜 向 高 浓 度 溶 液 中 扩 散 溶 液 的 浓 度 越 高, 渗 透 压 就 愈 大 随 着 温 度 升 高, 渗 透 压 逐 渐 增 加, 导 致 蛋 黄 失 水 率 增 加 [4] 因](/thumbs/42/22980499.jpg "过, 同 样 加 快 了 扩 散 速 度 溶 剂 则 是 从 低 浓 度 溶 液 中 通 过 渗 透 膜 向 高 浓 度 溶 液 中 扩 散 溶 液 的 浓 度 越 高, 渗 透 压 就 愈 大 随 着 温 度 升 高, 渗 透 压 逐 渐 增 加, 导 致 蛋 黄 失 水 率 增 加 [4] 因")
F * 迟 玉 杰, 胥 伟, 刘 振 宇 150030 摘 要 : 关 键 词 : 近 年 来, 世 界 蛋 品 开 发 和 蛋 制 品 加 工 有 了 长 足 的 发 展, 欧 美 发 达 国 家 投 入 大 量 的 资 金 和 科 技 力 量 进 行 研 究 和 开 发, 许 多 发 达 国 家 禽 蛋 制 品 深 加 工 比 重 已 达 其 禽 蛋 总 量 的 20-25%, 其 产 品 多