QUANTA LiteTM M2 EP（MIT3）

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1 QUANTA Lite M2 EP (MIT3) ELISA 体 外 诊 断 用 试 剂 CLIA 复 杂 性 : 高 用 途 QUANTA Lite M2 EP(MIT3)ELISA 是 一 种 半 定 量 检 测 人 血 清 中 线 粒 体 抗 体 的 酶 联 免 疫 (ELISA) 检 测 试 剂 盒 线 粒 体 抗 体 的 存 在, 结 合 临 床 结 果 和 其 它 实 验 室 检 测 结 果, 可 帮 助 诊 断 原 发 性 胆 汁 性 肝 硬 变 概 述 和 检 测 说 明 原 发 性 胆 汁 性 肝 硬 变 (PBC) 是 一 种 慢 性 肝 脏 疾 病, 其 特 征 是 肝 内 小 胆 管 破 坏 进 行 性 胆 管 的 破 坏 会 导 致 肝 脏 功 能 受 损, 并 且 随 时 间 推 移, 可 以 导 致 肝 衰 竭 并 需 要 进 行 肝 移 植 1, 2 尽 管 遗 传 因 素 和 一 些 其 它 因 素 可 1, 3, 4 能 是 该 疾 病 发 展 的 重 要 原 因, 但 是 PBC 的 病 因 学 目 前 还 不 清 楚 PBC 通 常 发 生 在 30 到 65 岁 的 人 群 中, 并 且 更 容 易 影 响 女 性 ( 女 性 与 男 性 的 患 病 率 比 例 大 约 为 9:1) 3, 4 PBC 在 PBC 患 者 一 级 亲 属 中 的 发 病 率 在 1.3% 到 6.4% 之 间 4, 5 PBC 在 所 有 种 族 中 都 有 发 生, 并 且 在 世 界 各 地 都 有 病 例 据 报 道 世 界 各 地 PBC 的 发 病 率 差 异 很 大, 日 本 和 澳 大 利 亚 每 100,000 人 大 约 有 2 例, 美 国 每 100,000 人 大 约 有 40 例 3, 6 血 清 学 检 测 是 重 要 的 PBC 诊 断 和 鉴 别 的 辅 助 手 段, 因 为 许 多 与 PBC 相 关 的 抗 体 会 在 明 显 的 症 状 出 现 之 前 出 现 7-9 抗 线 粒 体 抗 体 (AMA), 通 常 采 用 间 接 免 疫 荧 光 分 析 (IFA) 检 测, 是 经 典 的 PBC 血 清 学 标 志 物 10 尽 管 有 研 究 报 道 90-95% 的 PBC 患 者 会 出 现 AMA, 但 是 此 方 法 的 检 出 率 却 相 对 很 低 11 采 用 IFA 法 检 测 AMA 高 度 依 赖 于 观 察 者 的 技 巧 分 析 的 技 术 成 分 以 及 其 它 会 混 淆 IFA 判 读 或 者 引 起 结 果 模 糊 的 抗 体 的 存 在 早 期 的 研 究 共 发 现 了 9 个 亚 型 的 线 粒 体 抗 原, 分 别 命 名 为 M1-M9 12 由 PBC 患 者 血 清 所 识 别 的 主 要 自 身 抗 原 是 M2 亚 型 M2 亚 型 抗 原 的 主 要 组 分 是 1- 酮 酸 脱 氢 酶 复 合 物 的 成 员 这 种 特 异 性 的 抗 原 被 鉴 定 为 丙 酮 酸 脱 氢 酶 复 合 物 E2 亚 单 位 (PDC-E2) 2- 酮 酸 脱 氢 酶 复 合 物 的 支 链 (BCOADC-E2) 以 及 2- 酮 戊 二 酸 脱 氢 酶 复 合 物 (OGDC-E2) 13 上 述 抗 原 的 发 现 可 用 于 开 发 ELISA 检 测 方 法 ELISA 检 测 方 法 比 IFA 方 法 的 灵 敏 度 更 高 第 一 代 抗 M2 ELISA 检 测 方 法 使 用 PDC-E2 作 为 主 要 底 物 来 检 测 PBC 特 异 性 的 抗 体 而 只 有 80-90% 的 组 织 学 证 明 的 PBC 患 者 有 PDC-E2 抗 体, 大 约 有 10% 的 PBC 患 者 只 与 BCOADC-E2 和 / 或 OGDC-E2 反 应 18,19 Gershwin 和 Leung 开 发 了 一 种 三 表 达 杂 交 克 隆 ( MIT3 ), 该 杂 交 克 隆 可 以 表 达 11, 15, 16, 19 PDC-E2 BCOADC-E2 和 OGDC-E2 三 种 免 疫 显 性 表 位, 他 们 还 对 这 种 克 隆 申 请 了 专 利 研 究 表 明, 基 于 MIT3 建 立 的 ELISA 方 法 与 IFA 或 传 统 的 基 于 PDC-E2 建 立 的 ELISA 方 法 相 比 具 有 更 优 异 的 性 能, 并 可 以 在 超 过 三 分 之 二 的 AMA 阴 性 (IFA 法 检 测 ) 的 PBC 患 者 中 检 测 到 AMA 15, 16 由 于 AMA 是 先 于 疾 病 症 状 出 现 的, 因 此 可 以 更 加 准 确 的 鉴 定 PBC 标 记 物 的 存 在, 使 得 诊 断 和 治 疗 更 早, 从 而 延 缓 疾 病 的 进 程 7,8, CHN

2 检 测 原 理 在 维 持 抗 原 天 然 状 态 的 条 件 下, 将 经 亲 和 层 析 纯 化 的 重 组 抗 原 (MIT3)( 包 括 PDC-E2 BCOADC-E2 和 OGDC-E2 的 免 疫 显 性 部 分 ) 结 合 到 聚 苯 乙 烯 微 孔 板 的 孔 中 将 预 先 稀 释 的 质 控 品 和 稀 释 的 患 者 血 清 分 别 加 入 到 不 同 的 微 孔 中, 使 其 中 的 线 粒 体 抗 体 结 合 到 固 定 的 抗 原 上 洗 去 未 结 合 的 样 本, 并 将 酶 标 记 的 抗 人 IgG 结 合 物 加 入 到 微 孔 板 的 每 个 孔 中 进 行 第 二 次 温 育, 使 酶 标 记 的 抗 人 IgG 抗 体 与 已 吸 附 到 微 孔 中 的 患 者 抗 体 结 合 在 洗 去 未 结 合 的 酶 标 抗 人 IgG 抗 体 之 后, 加 入 显 色 底 物, 通 过 检 测 所 发 出 的 颜 色 强 度 来 测 量 残 留 的 酶 活 性 通 过 分 光 光 度 法 对 患 者 孔 中 所 发 出 的 颜 色 强 度 和 质 控 品 孔 中 所 发 出 的 颜 色 强 度 进 行 测 定 和 对 比, 由 此 对 检 测 结 果 进 行 评 估 试 剂 1. ELISA 用 聚 苯 乙 烯 微 孔 板, 包 被 有 纯 化 的 重 组 MIT3 抗 原 ( 孔 ), 与 微 孔 板 固 定 器 一 起 装 在 含 有 干 燥 剂 的 锡 箔 纸 袋 中 2. ELISA 阴 性 质 控 品, 一 支, 含 有 防 腐 剂 和 人 血 清 ( 无 人 线 粒 体 M2 抗 体 ) 的 缓 冲 液, 已 预 先 稀 释, 1.2mL 3. M2 EP(MIT3)ELISA 低 值 阳 性 质 控 品, 一 支, 含 有 防 腐 剂 和 人 血 清 ( 含 线 粒 体 M2 抗 体 ) 的 缓 冲 液, 已 预 先 稀 释,1.2mL 4. M2 EP(MIT3)ELISA 高 值 阳 性 质 控 品, 一 支, 含 有 防 腐 剂 和 人 血 清 ( 含 线 粒 体 M2 抗 体 ) 的 缓 冲 液, 已 预 先 稀 释,1.2mL 5. HRP 样 本 稀 释 液, 一 支, 粉 色, 含 有 Tris 缓 冲 盐 溶 液 Tween 20 蛋 白 稳 定 剂 和 防 腐 剂,50mL 6. HRP 浓 缩 洗 涤 液, 一 支,40 浓 缩 液, 红 色, 含 有 Tris 缓 冲 盐 溶 液 和 Tween 20,25mL 有 关 稀 释 方 法 的 说 明 参 见 方 法 部 分 7. HRP IgG 结 合 物,( 山 羊 ), 抗 人 IgG, 一 支, 蓝 色, 含 有 缓 冲 液 蛋 白 稳 定 剂 和 防 腐 剂,10mL 8. TMB 显 色 剂, 一 支, 含 有 稳 定 剂,10mL 9. HRP 终 止 液,0.344M 硫 酸, 一 支, 无 色,10mL 警 告 1. 警 告 : 本 品 的 样 本 稀 释 液 质 控 品 和 结 合 物 中 含 有 一 种 化 学 物 质 (0.02% 氯 霉 素 ), 此 化 学 试 剂 在 加 州 被 认 为 是 一 种 致 癌 物 2. 本 品 质 控 品 配 制 过 程 中 使 用 的 所 有 人 源 材 料 均 已 采 用 FDA 批 准 的 方 法 检 测 并 证 实 HIV HbsAg 和 HCV 抗 体 阴 性 但 尚 无 任 何 检 测 方 法 可 以 保 证 材 料 中 绝 对 不 含 HIV HBV HCV 或 其 它 感 染 源 因 此,M2 EP(MIT3)ELISA 低 值 阳 性 质 控 品 M2 EP(MIT3)ELISA 高 值 阳 性 质 控 品 和 ELISA 阴 性 质 控 品 应 同 样 作 为 潜 在 传 染 性 物 质 来 处 理 CHN

3 3. 本 品 使 用 叠 氮 钠 作 为 防 腐 剂 叠 氮 钠 是 有 毒 物 质, 如 摄 入 或 经 皮 肤 眼 睛 吸 收 会 引 起 中 毒 叠 氮 钠 可 与 铅 或 铜 铅 制 品 反 应 而 形 成 具 有 潜 在 爆 炸 危 险 的 叠 氮 金 属 化 合 物 如 使 用 冲 洗 槽 对 试 剂 进 行 处 理, 应 使 用 大 量 的 水 冲 洗, 以 防 止 叠 氮 化 合 物 积 累 4. HRP 结 合 物 含 有 一 种 稀 释 的 有 毒 / 腐 蚀 性 化 学 物 质, 如 大 量 摄 入 会 引 起 中 毒 避 免 接 触 皮 肤 和 眼 睛 以 防 止 可 能 的 化 学 物 质 灼 伤 5. TMB 显 色 剂 含 有 一 种 刺 激 性 物 质, 如 吸 入 摄 入 或 经 皮 肤 吸 收 会 造 成 伤 害 避 免 吸 入 摄 入 或 皮 肤 和 眼 睛 接 触 以 防 止 损 伤 6. HRP 终 止 溶 液 由 稀 释 的 硫 酸 组 成 避 免 触 及 可 与 硫 酸 反 应 的 碱 金 属 或 其 它 复 合 物 硫 酸 具 毒 性 和 腐 蚀 性, 如 摄 入 会 引 起 中 毒 避 免 皮 肤 和 眼 睛 接 触 以 防 止 化 学 灼 伤 7. 在 对 所 提 供 的 试 剂 进 行 操 作 时, 使 用 适 当 的 个 人 防 护 设 备 8. 溅 出 的 试 剂 应 当 立 即 清 除 废 弃 物 的 处 理 应 遵 守 所 有 联 邦 州 和 地 方 环 境 保 护 法 规 注 意 事 项 1. 本 品 为 体 外 诊 断 用 试 剂 2. 使 用 非 本 系 统 提 供 的 试 剂 组 分 替 代 物 可 能 导 致 结 果 不 一 致 3. ELISA 微 孔 板 清 洗 不 完 全 或 不 充 分, 或 微 孔 板 中 的 液 体 去 除 不 彻 底, 会 引 起 精 密 度 下 降 和 / 或 背 景 值 升 高 4. 在 试 验 过 程 中, 如 果 应 用 自 动 样 本 处 理 器 和 其 它 液 体 处 理 装 置 进 行 全 部 或 部 分 操 作, 所 获 得 的 试 验 结 果 可 能 会 与 人 工 操 作 的 结 果 有 差 异 各 实 验 室 有 责 任 验 证 自 动 处 理 器 的 检 测 结 果 在 可 接 受 的 范 围 内 5. 许 多 因 素 影 响 测 试 性 能, 包 括 试 剂 的 初 始 温 度 环 境 温 度 移 液 操 作 的 准 确 性 和 重 现 性 ELISA 微 孔 板 清 洗 的 充 分 程 度 孔 内 液 体 去 除 的 彻 底 程 度 用 于 结 果 检 测 的 分 光 光 度 计 以 及 试 验 过 程 中 温 育 时 间 的 长 度 需 特 别 注 意 一 致 性 问 题, 以 获 得 准 确 可 重 复 性 结 果 6. 建 议 严 格 遵 守 给 定 的 试 验 方 案 7. 重 新 封 装 含 微 孔 条 和 干 燥 剂 的 拉 链 袋 时, 如 果 密 封 不 完 全, 会 导 致 抗 原 降 解 和 精 密 度 下 降 8. 在 一 段 时 间 内 两 次 或 多 次 使 用 来 自 同 一 瓶 的 酶 结 合 物, 可 能 会 导 致 吸 光 度 数 值 低 于 可 接 受 范 围 遵 守 所 有 给 定 的 HRP 结 合 物 操 作 程 序 对 于 防 止 上 述 情 况 发 生 是 非 常 重 要 的 9. HRP 结 合 物 的 化 学 污 染 可 能 是 由 于 仪 器 或 设 备 不 正 确 的 清 洁 或 冲 洗 造 成 的 来 自 实 验 室 常 用 化 学 物 质, 如 福 尔 马 林 漂 白 液 乙 醇 或 洗 涤 剂 等 的 残 留 物 会 引 起 HRP 结 合 物 在 一 段 时 间 后 降 解 在 使 用 了 化 学 清 洁 剂 / 消 毒 剂 后, 应 彻 底 清 洗 所 有 仪 器 和 设 备 CHN

4 保 存 条 件 1. 所 有 试 剂 保 存 于 2-8 C 请 勿 冷 冻 保 存 按 说 明 书 保 存 和 操 作, 试 剂 在 有 效 期 内 可 保 持 稳 定 2. 未 使 用 的 抗 原 包 被 微 孔 板 条 应 当 重 新 用 含 有 干 燥 剂 的 锡 箔 袋 包 装 并 密 封, 于 2-8 C 保 存 3. 稀 释 的 冲 洗 缓 冲 液 于 2-8 C 保 存, 稳 定 性 可 保 持 1 周 样 本 收 集 本 方 法 适 用 于 血 清 样 本 向 测 试 样 本 中 加 入 叠 氮 化 物 或 其 它 防 腐 剂 可 能 对 检 测 结 果 产 生 不 良 影 响 不 应 使 用 微 生 物 污 染 热 处 理 或 含 有 可 见 的 颗 粒 的 样 本 避 免 使 用 严 重 溶 血 或 脂 血 的 血 清 或 样 本 样 本 收 集 后, 应 将 血 清 从 凝 血 中 分 离 NCCLS 文 件 H18-A3 建 议 按 如 下 条 件 保 存 样 本 :1) 样 本 在 室 温 下 保 存 不 可 超 过 8 小 时 2) 如 果 试 验 时 间 超 过 8 小 时 内, 将 样 本 冷 藏 在 2-8 C 3) 如 果 试 验 程 序 或 样 本 运 输 超 过 48 小 时, 将 样 本 冻 存 于 -20 C 或 更 低 的 温 度 下 冷 冻 样 本 在 复 融 后 和 检 测 前 必 须 充 分 混 匀 检 测 程 序 提 供 的 材 料 1 块 M2 EP(MIT3)ELISA 微 孔 板 ( 孔 ), 带 有 固 定 器 1 支 1.2mL, 预 先 稀 释 的 ELISA 阴 性 质 控 品 1 支 1.2mL, 预 先 稀 释 的 M2 EP(MIT3)ELISA 低 值 阳 性 质 控 品 1 支 1.2mL, 预 先 稀 释 的 M2 EP(MIT3)ELISA 高 值 阳 性 质 控 品 1 支 50mL,HRP 样 本 稀 释 液 1 支 25mL,HRP 浓 缩 洗 涤 液,40 浓 缩 液 1 支 10mL,HRP IgG 结 合 物,( 山 羊 ), 抗 人 IgG 1 支 10mL,TMB 显 色 剂 1 支 10mL,HRP 终 止 液,0.344M 硫 酸 需 要 但 不 随 试 剂 盒 提 供 的 材 料 和 500μL 微 量 移 液 器 一 次 性 微 量 移 液 器 吸 头 用 于 稀 释 患 者 样 本 的 试 管, 体 积 为 4mL 蒸 馏 水 或 去 离 子 水 1L 容 器, 用 于 稀 释 HRP 浓 缩 洗 涤 液 微 孔 板 读 板 器, 可 检 测 波 长 450nm 处 的 OD 值 ( 对 于 双 波 长 测 定, 还 需 检 测 620nm 处 的 OD 值 ) CHN

5 方 法 试 验 开 始 前 的 准 备 工 作 1. 将 所 有 试 剂 和 样 本 回 复 至 室 温 下 (20-26 C), 并 混 合 均 匀 2. 按 1:40 比 例 稀 释 HRP 浓 缩 洗 液, 将 HRP 浓 缩 洗 液 加 入 到 975mL 蒸 馏 水 或 去 离 子 水 中 如 果 近 期 不 需 使 用 全 部 微 孔 板, 可 配 制 较 少 量 的 稀 释 液, 即 每 使 用 16 孔 可 将 2.0mL 浓 缩 液 加 入 到 78mL 蒸 馏 水 或 去 离 子 水 中 稀 释 的 缓 冲 液 可 在 2-8 C 下 稳 定 保 存 1 周 3. 按 1:101 比 例 稀 释 患 者 样 本, 对 于 每 一 份 患 者 样 本, 取 5μL 加 入 到 500μL 的 HRP 样 本 稀 释 液 中 稀 释 后 的 样 本 必 须 在 制 备 后 8 小 时 内 使 用 请 勿 稀 释 M2 EP(MIT3)ELISA 低 值 阳 性 质 控 品 M2 EP (MIT3)ELISA 高 值 阳 性 质 控 品 和 ELISA 阴 性 质 控 品 4. 不 论 采 用 哪 种 单 位 确 定 是 否 存 在 M2(MIT3) 抗 体, 三 个 质 控 品 中 各 需 要 2 个 孔, 每 个 患 者 样 本 需 要 1 个 或 2 个 孔 建 议 对 样 本 做 双 份 检 测 试 验 步 骤 1. 试 验 前, 所 有 试 剂 必 须 回 复 室 温 (20-26 C) 将 所 需 数 量 的 微 孔 板 条 放 在 固 定 器 中 然 后 立 即 将 不 需 要 使 用 的 板 条 放 回 含 干 燥 剂 的 锡 箔 纸 袋 中 并 其 密 封 好, 以 减 少 板 条 暴 露 在 水 蒸 气 中 的 时 间 2. 将 100μL 预 先 稀 释 的 M2 EP(MIT3)ELISA 低 值 阳 性 质 控 品 M2 EP(MIT3)ELISA 高 值 阳 性 质 控 品 ELISA 阴 性 质 控 品 和 稀 释 的 患 者 样 本 加 入 到 各 孔 中 盖 好 微 孔 板 盖, 水 平 放 置, 在 室 温 下 温 育 30 分 钟 在 最 后 一 个 样 本 加 完 之 后, 温 育 便 开 始 3. 清 洗 步 骤 : 彻 底 吸 干 各 孔 内 的 液 体 每 孔 加 入 μL 稀 释 的 HRP 洗 液, 然 后 吸 干 该 步 骤 重 复 两 次, 共 洗 3 次 最 后 一 次 清 洗 后, 将 微 孔 板 倒 置 于 吸 水 材 料 上 轻 敲, 以 彻 底 去 除 孔 内 残 留 液 每 次 清 洗 后 将 各 孔 内 的 液 体 彻 底 吸 干 非 常 重 要 吸 液 顺 序 与 加 样 顺 序 保 持 一 致 4. 每 孔 加 入 100μL HRP IgG 结 合 物 从 试 剂 瓶 中 移 取 结 合 物 应 按 照 良 好 的 实 验 室 操 作 规 范 在 标 准 无 菌 条 件 下 进 行 仅 从 瓶 中 移 取 试 验 所 需 量 的 结 合 物 为 避 免 可 能 的 微 生 物 和 / 或 化 学 污 染, 勿 将 已 移 出 但 未 使 用 的 结 合 物 放 回 瓶 中 按 步 骤 2, 在 室 温 下 将 微 孔 板 温 育 30 分 钟 5. 清 洗 步 骤 : 重 复 步 骤 3 6. 每 孔 加 入 100μL TMB 显 色 剂, 在 室 温 下 避 光 反 应 30 分 钟 7. 每 孔 加 入 100μL HRP 终 止 液 加 入 终 止 液 的 顺 序 和 时 间 与 加 入 TMB 显 色 剂 的 顺 序 和 时 间 保 持 一 致 用 手 指 轻 轻 拍 打 微 孔 板 以 充 分 混 匀 孔 内 液 体 8. 在 终 止 反 应 1 小 时 内, 于 450nm 处 读 取 每 个 孔 的 吸 光 度 (OD) 如 需 双 波 长 测 量, 可 使 用 620nm 作 为 参 考 波 长 CHN

6 质 量 控 制 1. 对 于 每 一 批 样 本, 都 应 使 用 M2 EP(MIT3)ELISA 低 值 阳 性 质 控 品 M2 EP(MIT3)ELISA 高 值 阳 性 质 控 品 和 ELISA 阴 性 质 控 品, 以 确 保 所 有 的 试 剂 和 操 作 都 正 确 执 行 2. 请 注 意,M2 EP(MIT3)ELISA 低 值 阳 性 质 控 品 M2 EP(MIT3)ELISA 高 值 阳 性 质 控 品 和 ELISA 阴 性 质 控 品 已 预 先 稀 释, 因 此 不 能 用 作 与 样 本 稀 释 相 关 的 程 序 性 方 法 的 对 照 3. 按 照 地 方 州 和 / 或 联 邦 法 规 及 其 授 权 机 构 的 要 求 和 指 导 原 则, 可 能 需 要 检 测 附 加 的 质 控 品 适 用 的 附 加 质 控 品 血 清 可 以 通 过 将 混 合 的 人 血 清 样 本 等 量 分 装, 然 后 保 存 于 -20 C 的 方 法 来 制 备 4. 为 了 保 证 检 测 试 结 果 的 有 效 性, 必 须 符 合 下 面 所 列 的 所 有 标 准 如 果 有 任 何 一 项 未 符 合, 该 检 测 被 认 为 无 效, 需 重 新 检 测 a. 预 先 稀 释 的 M2 EP(MIT3)ELISA 高 值 阳 性 质 控 品 的 吸 光 度 必 须 大 于 预 先 稀 释 的 M2 EP (MIT3)ELISA 低 值 阳 性 质 控 品 的 吸 光 度, 后 者 的 吸 光 度 必 须 大 于 预 先 稀 释 的 ELISA 阴 性 质 控 品 的 吸 光 度 b. 预 先 稀 释 的 M2 EP(MIT3)ELISA 高 值 阳 性 质 控 品 的 吸 光 度 必 须 大 于 1.0, 而 预 先 稀 释 的 ELISA 阴 性 质 控 品 的 吸 光 度 不 能 大 于 0.2 c. M2 EP(MIT3)ELISA 低 值 阳 性 质 控 品 的 吸 光 度 必 须 是 ELISA 阴 性 质 控 品 吸 光 度 的 两 倍 以 上, 或 超 过 0.25 d. ELISA 阴 性 质 控 品 和 M2 EP(MIT3)ELISA 高 值 阳 性 质 控 品 用 于 监 测 重 要 试 剂 的 有 效 性 M2 EP(MIT3)ELISA 高 值 阳 性 质 控 品 不 能 保 证 检 测 终 点 的 精 密 度 e. 关 于 正 确 质 量 控 制 操 作 的 其 它 指 导 原 则, 参 见 NCCLS 文 件 C24-A2 21 结 果 计 算 首 先 计 算 每 一 组 重 复 检 测 的 平 均 OD 值 然 后 将 每 个 样 本 的 平 均 OD 值 除 以 M2 EP(MIT3)ELISA 低 值 阳 性 质 控 品 的 平 均 OD 值, 再 将 所 得 结 果 乘 以 M2 EP(MIT3)ELISA 低 值 阳 性 质 控 品 的 单 位 数 ( 标 于 M2 EP (MIT3)ELISA 低 值 阳 性 质 控 品 的 标 签 上 ), 以 计 算 每 个 样 本 的 反 应 性 样 本 OD 样 本 数 值 = M2 EP(MIT3)ELISA 低 值 阳 性 质 控 品 ( 单 位 数 ) M2 EP(MIT3)ELISA 低 值 阳 性 质 控 品 OD ( 单 位 数 ) 反 应 性 与 抗 体 数 量 呈 非 线 性 相 关 当 患 者 体 内 的 抗 体 浓 度 增 加 或 减 少 时, 其 反 应 性 也 相 应 的 上 升 或 下 降, 但 该 变 化 不 成 正 比 ( 即 抗 体 浓 度 加 倍 时, 反 应 性 不 会 加 倍 ) 如 需 对 患 者 抗 体 进 行 更 加 准 确 的 定 量, 应 该 对 患 者 样 本 进 行 系 列 稀 释, 并 进 行 检 测 在 检 测 中 结 果 为 阳 性 的 最 后 一 个 稀 释 点 应 报 告 为 患 者 的 抗 体 滴 度 CHN

7 结 果 分 析 ELISA 是 一 种 非 常 灵 敏 的 检 测 技 术, 可 检 测 到 患 者 之 间 非 常 微 小 的 差 异 下 面 所 列 数 值 仅 为 推 荐 值 每 个 实 验 室 都 应 根 据 各 自 建 立 的 程 序 以 及 自 身 技 术. 质 控 设 备 和 患 者 群 体 来 建 立 自 己 的 正 常 范 围 根 据 下 表, 样 本 可 分 为 阴 性 可 疑 或 阳 性 单 位 阴 性 20 可 疑 阳 性 阳 性 结 果 表 示 存 在 线 粒 体 抗 体, 说 明 可 能 患 有 原 发 性 胆 汁 性 肝 硬 变 2. 阴 性 结 果 表 示 不 存 在 线 粒 体 抗 体, 或 其 水 平 低 于 本 检 测 方 法 的 阴 性 临 界 值 3. 建 议 实 验 室 报 告 检 测 结 果 时, 应 包 含 如 下 声 明 : 本 结 果 是 采 用 INOVA QUANTA Lite M2 EP(MIT3) ELISA 方 法 检 测 得 到 的 采 用 不 同 生 产 商 的 检 测 方 法 所 得 到 的 M2 EP(MIT3) 抗 体 数 值 不 能 相 互 交 换 使 用 本 试 剂 报 告 的 IgG 的 量 度 不 能 与 终 点 滴 度 相 关 联 检 测 的 局 限 性 1. 患 者 样 本 中 存 在 的 免 疫 复 合 物 或 其 它 免 疫 球 蛋 白 聚 集 物 可 能 会 造 成 非 特 异 性 结 合 增 加, 并 在 检 测 中 产 生 假 阳 性 结 果 2. 并 非 所 有 原 发 性 胆 汁 性 肝 硬 变 患 者 都 会 出 现 线 粒 体 抗 体 阳 性 的 结 果 3. 本 检 测 结 果 应 与 临 床 症 状 和 其 它 血 清 学 检 测 结 合 使 用 4. 对 于 除 血 清 之 外 的 基 质, 本 检 测 的 性 能 特 点 尚 未 建 立 期 望 值 在 世 界 各 地 PBC 的 发 病 率 有 所 不 同, 据 估 计 日 本 和 澳 大 利 亚 每 100,000 人 有 2 例, 美 国 每 100,000 人 有 40 例 3, 6 然 而 一 般 认 为, 抗 线 粒 体 抗 体 会 在 90-95% 的 PBC 患 者 中 出 现, 抗 体 的 检 出 率 会 根 据 研 究 人 群 的 不 同 而 有 所 差 异, 其 灵 敏 度 会 在 72% 左 右 11 采 用 IFA 法 检 测 PBC 患 者, 其 AMA 特 异 性 范 围 在 95-97% 11 正 常 值 范 围 在 无 症 状 健 康 人 群 中 的 抗 M2(MIT3) 抗 体 采 用 QUANTA Lite M2 EP(MIT3)ELISA 试 剂 盒 检 测 了 520 份 无 症 状 健 康 人 群 的 M2 EP(MIT3) 抗 体 有 299 份 样 本 已 知 年 龄 和 性 别 年 龄 范 围 从 岁, 其 中 150 位 是 男 性,149 位 是 女 性 该 人 群 的 平 均 值 是 7.6 单 位, 中 位 数 为 6.0 单 位 对 于 正 常 研 究 对 象, 本 检 测 的 特 异 性 为 98.5%(512/520) 另 外 两 份 样 本 采 用 IFA 检 测 时 表 现 非 常 明 显 的 AMA 模 式 CHN

8 特 异 性 性 能 特 征 采 用 QUANTA Lite M2 EP(MIT3)ELISA 试 剂 盒 对 来 自 于 几 个 临 床 队 列 的 980 份 确 诊 为 PBC(978) 或 PBC/ 自 身 免 疫 性 肝 炎 (AIH)(2) 的 样 本 进 行 了 检 测, 所 得 到 的 M2(MIT3) 抗 体 阳 性 的 频 率 列 于 表 1 患 有 AIH 的 样 本, 已 知 AMA 阴 性 的 PBC 患 者 或 者 疑 似 但 是 没 有 确 诊 的 患 者 被 排 除 在 外 本 检 测 的 总 体 灵 敏 度 为 87.3%(856/980), 特 异 性 为 98.7%(590/598) 阳 性 预 测 值 为 99.1%, 阴 性 预 测 值 为 82.6% 非 PBC 或 PBC/AIH 的 平 均 值 和 中 位 数 值 分 别 为 7.5 和 5.9 单 位 表 1:QUANTA Lite TM M2 EP(MIT3)ELISA 试 剂 盒 的 灵 敏 度 N=1578 QUANTA Lite M2 EP(MIT3)ELISA 患 者 组 n= 阳 性 可 疑 阴 性 PBC(967) 或 PBC/AIH(13) 健 康 对 照 (520) 原 发 性 硬 化 性 胆 管 炎 -PSC(47) 其 它 疾 病 对 照 (31) 灵 敏 度 :87.3%(856/980);95% 置 信 区 间 (CI):85.1% 至 89.4% 特 异 性 :98.7%(590/598);95% 置 信 区 间 (CI):97.4% 至 99.4% 交 叉 反 应 采 用 QUANTA Lite M2 EP(MIT3)ELISA 试 剂 盒 对 155 份 来 自 于 患 有 非 PBC 肝 脏 疾 病 (70 份 AIH 46 份 PSC 和 8 份 AIH/PSC) 以 及 自 身 免 疫 性 疾 病 或 感 染 性 疾 病 (3 份 LKM-1 2 份 SLA 3 份 GPA 3 份 染 色 质 3 份 ASCA 2 份 Sm 2 份 RNP 2 份 SS-A 2 份 SS-B 2 份 Scl-70 2 份 Jo-1 1 份 SLE,2 份 HCV 和 2 份 疑 似 非 PBC 肝 脏 疾 病 ) 的 患 者 血 清 进 行 了 检 测, 以 评 估 这 一 检 测 的 特 异 性 QUANTA Lite M2 EP(MIT3)ELISA 试 剂 盒 没 有 检 测 到 自 身 免 疫 性 疾 病 或 感 染 性 疾 病 血 清 有 阳 性 结 果 有 5 份 AIH 样 本 被 检 测 为 阳 性, 但 它 们 可 能 是 未 确 诊 的 或 即 将 确 诊 的 AIH/PBC 综 合 症 所 有 AIH 或 AIH/PSC 样 本 没 有 包 括 在 特 异 性 的 计 算 中 精 密 度 和 重 现 性 通 过 对 6 个 样 本 进 行 检 测, 每 个 样 本 检 测 6 次, 以 评 估 批 内 的 性 能 表 2:QUANTA Lite M2 EP(MIT3)ELISA 试 剂 盒 的 批 内 性 能 A B C D E F 平 均 单 位 数 SD CV % CHN

9 通 过 对 5 个 样 本 试 剂 盒 的 高 值 阳 性 质 控 品 (HPC) 和 阴 性 质 控 品 (NC) 进 行 检 测, 每 个 试 验 做 双 份 检 测, 每 天 检 测 两 次 ( 上 午 检 测 一 次, 下 午 检 测 一 次 ), 连 续 3 天, 以 评 估 批 间 的 性 能 表 3:QUANTA Lite M2 EP (MIT3)ELISA 试 剂 盒 的 批 间 性 能 HPC NC A B C D E 平 均 单 位 数 SD CV % 参 考 文 献 1. Kaplan, M. M. Primary biliary cirrhosis. N Engl J Med 335, (1996). 2. Heathcote, E. J. Management of primary biliary cirrhosis. The American Association for the Study of Liver Diseases practice guidelines. Hepatology 31, (2000). 3. Feld, J. J. & Heathcote, E. J. Epidemiology of autoimmune liver disease. J Gastroenterol Hepatol 18, (2003). 4. Talwalkar, J. A. & Lindor, K. D. Primary biliary cirrhosis. Lancet 362, (2003). 5. Jones, D. E., Watt, F. E., Metcalf, J. V., Bassendine, M. F. & James, O. F. Familial primary biliary cirrhosis reassessed: a geographically-based population study. J Hepatol 30, (1999). 6. Kim, W. R. et al. Epidemiology and natural history of primary biliary cirrhosis in a US community. Gastroenterology 119, (2000). 7. Metcalf, J. V. et al. Natural history of early primary biliary cirrhosis. Lancet 348, (1996). 8. Kisand, K. E. et al. The follow-up of asymptomatic persons with antibodies to pyruvate dehydrogenase in adult population samples. J Gastroenterol 36, (2001). 9. Prince, M., Chetwynd, A., Newman, W., Metcalf, J. V. & James, O. F. Survival and symptom progression in a geographically based cohort of patients with primary biliary cirrhosis: follow-up for up to 28 years. Gastroenterology 123, (2002). 10. Walker, J. G., Doniach, D., Roitt, I. M. & Sherlock, S. Serological Tests in Diagnosis of Primary Biliary Cirrhosis. Lancet 39, (1965). 11. Muratori, P. et al. 'True' antimitochondrial antibody-negative primary biliary cirrhosis, low sensitivity of the routine assays, or both? Clin Exp Immunol 135, (2004). 12. Berg, P. A. & Klein, R. Mitochondrial antigens and autoantibodies: from anti-m1 to anti-m9. Klin Wochenschr 64, (1986). 13. Fussey, S. P., Guest, J. R., James, O. F., Bassendine, M. F. & Yeaman, S. J. Identification and analysis of the major M2 autoantigens in primary biliary cirrhosis. Proc Natl Acad Sci USA 85, (1988). 14. Vergani, D. & Bogdanos, D. P. Positive markers in AMA-negative PBC. Am J Gastroenterol 98, (2003). 15. Miyakawa, H. et al. Detection of antimitochondrial autoantibodies in immunofluorescent AMA-negative patients with primary biliary cirrhosis using recombinant autoantigens. Hepatology 34, (2001). 16. Moteki, S. et al. Use of a designer triple expression hybrid clone for three different lipoyl domain for the detection of antimitochondrial autoantibodies. Hepatology 24, (1996). 17. Fritzler, M. J. & Manns, M. P. Anti-mitochondrial autoantibodies. Clin Appl Immunol Rev 3, (2002). 18. Nishio, A., Keeffe, E. B. & Gershwin, M. E. Immunopathogenesis of primary biliary cirrhosis. Semin Liver Dis 22, (2002). 19. Leung, P. S. et al. Use of designer recombinant mitochondrial antigens in the diagnosis of primary biliary cirrhosis. Hepatology 15, (1992). 20. Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories, Fourth Edition, HHS Pub#(CDC) , (CDC/NIH, 1999). 21. Internal Quality Control: Principles and Definitions, Approved Guidline, NCCLS Doc C24-A2 (National Committee for Clinical Laboratory Standards, 1991) CHN

10 生 产 商 : INOVA Diagnostics 公 司 9900 Old Grove Road San Diego, CA 美 国 技 术 服 务 ( 美 国 & 加 拿 大 ): 技 术 服 务 ( 美 国 以 外 地 区 ): [email protected] 欧 盟 授 权 代 表 : D St. Ingbert, 德 国 电 话 : 传 真 : CHN 2010 年 12 月 第 0 次 修 订 QUANTA Lite 是 注 册 商 标 INOVA Diagnostics, Inc. 版 权 所 有 2010 保 留 所 有 权 利 CHN