上海中医药大学学报第 32 卷第 6 期 2018 年 11 月 57 cell invasion was weaker than that of paclitaxel (0.1 μmol / L) ( P<0.05). Conclusion: UM GLP can effectively inhi

Size: px

Start display at page:

Download "上海中医药大学学报第 32 卷第 6 期 2018 年 11 月 57 cell invasion was weaker than that of paclitaxel (0.1 μmol / L) ( P<0.05). Conclusion: UM GLP can effectively inhi"

辰东
5 years ago
Views:

1 56 DOI: / j x 大分子灵芝多糖对非小细胞肺癌细胞增殖迁移和侵袭能力的抑制作用肖小龙 1 ꎬ 莫观 1 ꎬ 廉云 1 ꎬ 刘运蕾 1 1ꎬ2 ꎬ 李龙飞 1. 沃立美生命科学实验室 ( 深圳 ) 有限公司 ( 广东深圳 )ꎻ2. 西南医科大学药学院 ( 四川泸州 ) 摘要目的 : 探讨超滤管截留得到的大分子量灵芝多糖 ( ultrafiltered macromolecular Ganoderma lucidum polysaccharideꎬ UM GLP) 对非小细胞肺癌细胞增殖迁移和侵袭能力的抑制作用 ꎮ 方法 : 以非小细胞肺癌细胞 A549 和 NCI H1299 作为研究对象 ꎬ 并以空白培养基和紫杉醇 (PTX) 处理分别作为空白对照和阳性对照 ꎮ 采用 MTT 法检测 UM GLP 对 A549 和 NCI H1299 细胞增殖的抑制作用 ꎬ 划痕实验检测 UM GLP 对 A549 和 NCI H1299 细胞迁移能力的抑制作用 ꎬTranswell 实验检测 UM GLP 对 A549 和 NCI H1299 细胞侵袭能力的抑制作用 ꎮ 结果 :MTT 实验结果显示 ꎬ 随着 UM GLP 和 PTX 药物浓度的增加 ꎬ 细胞增殖抑制率明显增加 ꎬUM GLP 浓度在 0.5~ 2.0 mg / ml 时 ꎬ 与 PTX 浓度在 25~ 100 nmol / L 的抑制效果相仿 ꎮ A549 和 NCI H1299 细胞划痕实验结果显示 ꎬ 与空白对照组比较 ꎬUM GLP 组和 PTX 组的迁移距离均明显缩短 ( P< 0.05)ꎮ Transwell 实验结果显示 ꎬ UM GLP(2 mg / ml) 处理后 ꎬ 非小细胞肺癌细胞侵袭数量显著低于空白对照组 ( P<0.05)ꎻ 并且 UM GLP 对 A549 细胞侵袭能力的抑制作用与紫杉醇组 (0.1 μmol / L) 相当 ꎬ 对 NCI H1299 细胞侵袭能力的抑制作用小于紫杉醇组 (0.1 μmol / L)(P<0.05)ꎮ 结论 : 大分子量灵芝多糖可有效抑制非小细胞肺癌细胞 A549 和 NCI H1299 的增殖迁移和侵袭能力 ꎮ 关键词灵芝多糖 ꎻ 超滤管离心 ꎻ 非小细胞肺癌细胞 ꎻ 增殖 ꎻ 迁移 ꎻ 侵袭 Inhibitory effects of macromolecular Ganoderma lucidum polysaccharide on proliferationꎬ migration and invasion of non small cell lung cancer cells XIAO Xiaolong 1 ꎬMO Guan 1 ꎬLIAN Yun 1 ꎬ LIU Yunlei 1 ꎬ LI Longfei 1ꎬ2 1.Wolimei Life Science Laboratory ( Shenzhen) Co.ꎬ Ltd.ꎬ Shenzhen ꎬ Chinaꎻ 2. School of Medicineꎬ Southwest Medical Universityꎬ Luzhou ꎬ China ABSTRACT Objective: To investigate the inhibitory effects of ultrafiltered macromolecular Ganoderma lucidum polysaccharide ( UM GLP) on the proliferationꎬ migration and invasion of non small cell lung cancer cells ( NSCLC). Methods: The non small cell lung cancer cell lines A549 and NCI H1299 were used as the study subjects. Blank culture medium and paclitaxel ( PTX) treatment were used as the blank control and positive controlꎬ respectively. The inhibitory effect of UM GLP on the proliferation of A549 cells and NCI H1299 cells was examined by MTT assay. The inhibitory effect of UM GLP on the migration of A549 cells and NCI H1299 cells was detected by scratch test. The inhibitory effect of UM GLP on the invasion of A549 cells and NCI H1299 cells was evaluated by Transwell assay. Results: The MTT results showed thatꎬ with the increase of UM GLP and PTX concentrationꎬ the inhibition rate of cell proliferation was increased significantly. When the concentration of UM GLP was at mg / mlꎬ the inhibition effect was similar to that of PTX at nmol / L. In the scratch testꎬ compared with the blank control groupꎬ the cell migration distances of A549 cells and NCI H1299 cells were significantly shortened in the UM GLP group and PTX group ( P<0.05). Transwell assay indicated that after treatment with UM GLP (2 mg / ml)ꎬ the number of invaded NSCLC was significantly less than that in the blank control group (P<0.05)ꎬ the inhibitory effect of UM GLP on A549 cell invasion was comparable to that of the paclitaxel (0.1 μmol / L)ꎬ and the inhibitory effect of UM GLP on NCI H1299 [ 基金项目 ] 国家自然科学基金青年基金项目 ( ) [ 作者简介 ] 肖小龙 ꎬ 男 ꎬ 硕士 ꎬ 工程师 ꎬ 主要从事细胞生物工程研究 [ 通信作者 ] 李龙飞 ꎬ 副研究员 ꎻE mail:lee130428@163.com

2 上海中医药大学学报第 32 卷第 6 期 2018 年 11 月 57 cell invasion was weaker than that of paclitaxel (0.1 μmol / L) ( P<0.05). Conclusion: UM GLP can effectively inhibit the proliferationꎬ migration and invasion of NSCLC A549 cells and NCI H1299 cells. KEYWORDS Ganoderma lucidum polysaccharideꎻ ultrafiltration centrifugationꎻ non small cell lung cancer cellꎻ proliferationꎻ migrationꎻ invasion 全球范围内 ꎬ 肺癌的发病率和病死率在恶性肿瘤中始终位居前列 ꎮ 肺癌中 ꎬ 非小细胞肺癌患者约占 85% [1] ꎮ 大部分肺癌患者在确诊时已至中晚期或者已发生转移 ꎬ 导致肺癌的病死率长期居高不下 [2] ꎮ 目前临床上针对手术难以根治的中晚期非小细胞肺癌患者 ꎬ 主要以化疗分子靶向治疗以及免疫治疗为主 [3] ꎬ 其中吉西他滨和多西紫杉醇常被用作一线化疗药物 [4] ꎮ 由于化疗药具有广谱杀伤作用 ꎬ 其在杀死肿瘤细胞的同时 ꎬ 亦对正常组织器官产生严重损伤 ꎬ 因此 ꎬ 寻找新的高效低毒特效化疗药物尤为重要 ꎮ 中医药是我国传统医药瑰宝 ꎬ 许多中草药长期被用作各种肿瘤治疗的一线药物 [5] ꎮ 灵芝 (Ganoderma lucidum) 是具有扶正固本滋补强壮的珍贵中药 ꎮ 临床上 ꎬ 含灵芝成分的肿瘤康胶囊 ꎬ 具有补中益肾养心安神的功效 ꎬ 常被用作中晚期非小细胞肺癌的辅助治疗 ꎬ 不仅可以减轻化疗产生的毒副作用 ꎬ 同时可以提高患者的生存质量 [6] ꎮ 作为灵芝的主要活性成分 ꎬ 灵芝多糖具有免疫调节抗氧化降血糖和降血脂等作用 ꎬ 研究显示 ꎬ 灵芝多糖对包括肝癌乳腺癌白血病和黑色素瘤在内的多种肿瘤均显示较强的抑制作用 [7] ꎮ 然而 ꎬ 灵芝多糖对于非小细胞肺癌的治疗尚缺乏理论依据 ꎮ 鉴于此 ꎬ 本研究以非小细胞肺癌细胞作为研究对象 ꎬ 结合多种生物学检测手段 ꎬ 探讨灵芝多糖对非小细胞肺癌细胞的体外抗肿瘤活性 ꎬ 为灵芝多糖治疗非小细胞肺癌提供实验依据 ꎮ 1 材料与方法 1.1 实验材料细胞株非小细胞肺癌细胞 A549 细胞 NCI H1299 细胞 ꎬ 均购自中国科学院上海细胞库 ꎮ 药物与试剂灵芝子实体 ꎬ 由沃立美生命科学实验室 ( 全南 ) 有限公司提供 ꎻ 紫杉醇 ( PTX)ꎬ 购自北京世纪奥科生物技术有限公司 ꎬ HPLC 99.0%ꎮ F12K 培养基 ꎬ 购自美国 Gibco 公司 ꎻ Matrigelꎬ 购自美国 Thermo Fisher 公司 ( 货号 : )ꎻ MTTꎬ 购自美国 Sigma 公司 ꎻDMSOꎬ 购自国药集团化学试剂有限公司 ꎻ 胎牛血清 ꎬ 购自杭州四季青公司 ꎻ 超滤管 ꎬ 购自美国 Millipore 公司 ꎻ96 孔板 12 孔板和 Transwell 板 ꎬ 购自美国康宁公司 ꎮ 主要仪器荧光倒置显微镜 ( CKX41 / CKX31)ꎬ OLYMPUS 公司 ꎻ 高速冷冻离心机 ( ST 16R)ꎬ Thermo Fisher 公司 ꎻ 超纯水机 ( Milli Q IQ 7000)ꎬMillipore 公司 ꎻ 酶标仪 ( KHB ST 360)ꎬ 上海科华实验系统有限公司 ꎻ 水浴锅 ( HWS 28)ꎬBlue Pard 公司 ꎮ 1.2 大分子灵芝多糖的制备灵芝子实体经破碎机制成粉末 ꎬ 水浸泡 24 h 后进行冷碾压处理 ꎮ 将碾压液进行层析 ꎬ 分离特定区间分子量的灵芝多糖 ꎮ 称取适量灵芝多糖粉末 ꎬ 用超纯水溶解 ꎬ 调节浓度至 1 mg / mlꎮ 采用 0.45 μm 滤膜 ꎬ 砂芯过滤器过滤除去不溶杂质 ꎬ 滤液再采用 50 kd 超滤管在 r / min 离心 30 minꎮ 收集超滤管内浓缩药液 ꎬ 进行冷冻干燥 ꎬ 得到大分子灵芝多糖 ꎮ 1.3 A549 和 NCI H1299 细胞的培养 A549 和 NCI H1299 用含 10% FBS 的培养液 ꎬ 置 37 5% CO 2 细胞培养箱中培养 ꎮ A549 和 NCI H1299 形成致密单层时 ( 细胞融合度约为 80%)ꎬ 即进行细胞传代 ꎮ 1.4 分组和干预根据试验要求设置空白对照组 (F12K 培养基 ) UM GLP 组 ( F12K 培养基溶解的 UM GLP) 阳性对照组(F12K 培养基溶解的 PTX)3 组 ꎬ 每组设置 3 个平行孔 ꎮ 取对数生长期的 A549 和 NCI H1299 细胞 ꎬ 按个 / 孔分别接种于 96 孔培养板中 ꎬF12K 培养基 100 μl / 孔 ꎬ37 培养箱中培养 24 hꎬ 至细胞贴壁后 ꎬ 按要求分别加入浓度梯度的 UM GLP( 和 2.00 mg / ml) 和 PTX( nmol / L) 处理 ꎮ 1.5 检测指标和方法 MTT 法检测细胞存活率药物作用 72 h 后 ꎬ 弃去原 96 孔培养板中培养液 ꎬ 每孔中加入 200 μl 新培养液和 0.5% MTT 储存液 20 μlꎮ 继续培养 4 h 后 ꎬ 小心地吸去孔内培养液 ꎬ 每孔加入 200 μl DMSOꎬ 置于酶标仪上快速振荡 60 sꎬ 使结晶物充分溶解后 ꎬ 用酶标仪检测每孔在 570 nmol / L 处的吸光度 (OD) 值 ꎮ 计算细胞存活率和增殖抑制率 ꎮ 细胞划痕实验检测细胞迁移能力分别接种 A549 和 NCI H1299 细胞于 12 孔板中 ꎬ 待细胞贴壁后汇合度达到 95% 以上后 ꎬ 弃培养基 ꎮ 用 100 μl

3 58 移液枪枪头对孔中的细胞进行十字交叉划线 ꎬ 用 PBS 洗涤 3 次 ꎬ 分为空白对照组 ( 加入含 1% 血清的培养基 ) UM GLP 组 ( 加入含 1% 血清的培养基配置的 UM GLPꎬ 浓度为 2 mg / ml) 和阳性对照组 ( 加入含 1% 血清的培养基配置的 PTXꎬ 浓度为 0.1 μmol / L)ꎮ 分别按照上述 3 组方法处理 A549 和 NCI H1299 细胞 ꎮ 24 h 后 ꎬ 在显微镜下拍照 ꎬ 记录下细胞划痕位置并计算细胞迁移距离 ꎮ Transwell 实验检测细胞侵袭能力小室中加入 Matrigelꎬ 置于 CO 2 培养箱中 1 hꎬ 待 Matrigel 胶凝固后吸走残余的液体 ꎬ 在上室加入用无血清培养基悬浮的非小细胞肺癌细胞 ( NCI H1299 细胞个 ꎬA549 细胞为个 )ꎬ 下室加入含 10% 血清的培养基 ꎮ 按照上述的分组和处理方法分别在 3 组的上室中加入相应的药物 ꎬ 处理 A549 和 NCI H1299 细胞 24 hꎮ 吸走上室未贴壁的细胞 ꎬPBS 清洗 4 次 ꎬ 膜下侧的细胞用 10% 的结晶紫染色 ꎮ 用 PBS 清洗后 ꎬ 置于倒置显微镜下 ꎬ 每孔随机选择 5 个视野进行拍照 ꎬ 采用 Image J 系统进行细胞计数 ꎮ 1.6 统计学方法运用 SPSS 19.0 统计软件进行数据分析 ꎮ 计量资料以 x - ±s 表示 ꎬ 采用方差分析 ꎬ 检验水准为 α = 0.05ꎬP<0.05 为差异有统计学意义 ꎮ 2 结果 2.1 对非小细胞肺癌细胞增殖的抑制作用 MTT 检测结果显示 ꎬ 随着 UM GLP 和 PTX 药物浓度的增加 ꎬ 细胞增殖抑制率明显增加 ꎮ UM GLP 浓度在 0.5 ~ 2.0 mg / ml 之间时 ꎬ 对 A549 和 NCI H1299 细胞的细胞增殖抑制率较浓度在 0 ~ 0.25 mg / ml 之间的抑制率明显增加 ( P < 0.05)ꎻ 在 PTX 组中 ꎬ 浓度在 25 ~ 100 nmol / L 之间时 ꎬPTX 对 A549 和 NCI H1299 细胞的细胞增殖抑制率较浓度在 0 ~ 12.5 nmol / L 之间的抑制率明显增加 (P < 0.05)ꎮ 可见 ꎬ UM GLP 组浓度在 0.5 ~ 2.0 mg / ml 之间时 ꎬ 与 PTX 组浓度在 25 ~ 100 nmol / L 之间的抑制效果相仿 ꎮ 见图 1ꎮ 图 1 UM GLP(A) 和 PTX (B) 对 A549 和 NCI H1299 细胞的增殖抑制作用 (n = 3) 2.2 对非小细胞肺癌细胞迁移的抑制作用 A549 和 NCI H1299 细胞划痕实验结果显示 ꎬ 与空白对照组比较 ꎬUM GLP 组和 PTX 组的迁移距离均明显缩短 (P < 0.05)ꎻUM GLP 组和 PTX 组两组间比较 ꎬ 迁移距离差异无统计学意义 (P > 0.05)ꎮ 见图 2ꎮ 2.3 对非小细胞肺癌细胞侵袭的抑制作用 Transwell 实验结果显示 ꎬ 与空白对照组比较 ꎬA549 和 NCI H1299 细胞的 UM GLP 组和 PTX 组细胞侵袭数量均明显减少 (P<0.05)ꎮ NCI H1299 细胞中 ꎬ PTX 组的细胞侵袭数量较 PTX 组明显减少 (P<0.05)ꎻA549 细胞中 ꎬPTX 组与 NCI H1299 组的细胞侵袭数量差异无统计学意义 ( P>0.05)ꎮ 见图 3 图 4ꎮ 3 讨论的主要原因 ꎮ 肺癌患者在诊断时即发现有转移的占 30% 左右 ꎬ 治疗过程中发生转移的约占 50% ~ 60%ꎮ 伴有癌组织转移的肺癌患者 ꎬ 其病死率高达 80% ~ 90% [8] ꎮ 临床上 ꎬ 化疗药普遍存在的高毒副作用 ꎬ 使得如何降低这些化疗药的毒副作用已成为药物研究者的关注重点 ꎮ 新兴的靶向治疗药物 ꎬ 如 EGFR TKIꎬ 对非小细胞肺癌的靶向治疗取得一定疗效 [9] ꎮ 但由于靶向药物的耐药性以及脱靶效应的存在 ꎬ 使得其在临床的广泛应用受到限制 ꎮ 近年来 ꎬ 免疫治疗 ꎬ 如针对免疫检查点 CTLA4 PD 1 以及 PD L1 等抗体的出现 ꎬ 虽然对肺癌早中期患者有显著疗效 ꎬ 但其适用患者群体受限 ꎬ 同时缺乏相关的疗效评估标准干预时间节点的选择缺乏统一标准 ꎬ 因而 ꎬ 现阶段也是难于在临床普及 [10] ꎮ 癌症转移是造成肺癌治疗失败和极高病死率

上海中医药大学学报第３２卷图２第６期２０１８年１１月５９与空白对照组比较ꎬ Ｐ<０.０５ＵＭＧＬＰ对Ａ５４９ ( Ａ) 和ＮＣＩＨ１２９９( Ｂ) 细胞的迁移抑制作用( ｎ３) 图３图４各组细胞侵袭能力镜下表现( 结晶紫染色ꎬ １０) 与空白对照组比较ꎬ Ｐ<０.０５ꎻ与ＵＭＧＬＰ组比较ꎬ Ｐ<０.

4 上海中医药大学学报第３２卷图２第６期２０１８年１１月５９与空白对照组比较ꎬ Ｐ<０.０５ＵＭＧＬＰ对Ａ５４９ ( Ａ) 和ＮＣＩＨ１２９９( Ｂ) 细胞的迁移抑制作用( ｎ３) 图３图４各组细胞侵袭能力镜下表现( 结晶紫染色ꎬ １０) 与空白对照组比较ꎬ Ｐ<０.０５ꎻ与ＵＭＧＬＰ组比较ꎬ Ｐ<０.０５各组Ａ５４９ ( Ａ) 和ＮＣＩＨ１２９９( Ｂ) 细胞侵袭数量比较( ｎ１５) 中草药是我国传统医学瑰宝ꎬ从中草药中寻找和发现新的高效低毒成分已引起国内外药物研究工作者的关注ꎮ 多糖是中草药中含量较丰富的一种组分ꎬ具有抗病毒抗氧化调节免疫以及抗肿瘤的作用 [１１] ꎮ 涂雪松等 [１２] 研究发现ꎬ人参复方多糖在治疗老年晚期非小细胞肺癌方面显示较强的潜力ꎬ人参复方多糖治疗后ꎬ患者的免疫功能和生活质量得到改善ꎮ 杨美菊等 [１３] 在近期的一项临床研

5 60 究中发现 ꎬ 香菇多糖联合多西他赛和奈达铂化疗可以有效改善肺结核合并非小细胞肺癌患者的肺功能 ꎬ 降低化疗药物的毒副作用的同时 ꎬ 提高了患者 [14] 的生存质量 ꎮ 此外 ꎬ 王洁茹等研究发现 ꎬ 黄芪多糖可以抑制荷瘤小鼠的黑色素瘤的生长 ꎮ 灵芝是多孔菌科真菌灵芝的子实体 ꎬ 是中医药理论和实践中的上乘中药 ꎮ 现代药理学研究证明 ꎬ 灵芝具有广泛的药理学活性 ꎬ 并且其毒副作用甚微 ꎬ 可长期服用 ꎬ 常被用于各种疾病的治疗 ꎮ 临床上 ꎬ 复方灵芝降糖胶囊具有显著降低血糖的疗效 ꎬ 适用于 2 型糖尿病患者的治疗 ꎮ 灵芝复方剂也是临 [15] 床上常用的药物 ꎬ 钟理等发现 ꎬ 该药可以明显抑制白血病细胞系 K562 细胞增殖并向红系分化 ꎮ 近年来 ꎬ 灵芝的抗肿瘤现代药理研究也越来越受到人 [16] 们的关注 ꎬ 如林志彬等研究发现 ꎬ 灵芝可以通过调控机体免疫系统发挥其抗肿瘤作用 ꎮ 灵芝中所含的有效成分包括多糖三萜甾醇和小分子蛋白等 ꎮ 其中 ꎬ 灵芝多糖 ꎬ 作为含量最多的一类成分 ꎬ 具有免疫调节抗肿瘤降血糖等多种活性 ꎮ 研究显示 ꎬ 灵芝多糖可以通过促进淋巴细胞的增殖以及细胞因子的分泌调节免疫系统 ꎬ 达到抗肿瘤的效果 [17] ꎮ 同时 ꎬ 灵芝多糖也可以直接抑制肝癌细胞 HepG2 和人结肠癌细胞的增殖迁移 [18 19] ꎮ 然而 ꎬ 灵芝多糖对非小细胞肺癌的作用尚不明确 ꎮ 前期研究中 ꎬ 我们发现灵芝粗多糖对非小细胞肺癌有一定的抑制作用 ꎻ 进一步研究结合文献调研 ꎬ 我们发现灵芝多糖的抗肿瘤的活性成分主要集中在分子量较大的部分 ꎮ 因此 ꎬ 我们通过超滤管离心的方法获得分子量在 50 kd 以上的灵芝多糖 ꎮ 本研究中 ꎬ 我们以非小细胞肺癌细胞 A549 和 NCI H1299 作为考察对象 ꎬ 并以紫杉醇作为阳性对照 ꎬ 结合 MTT 实验细胞划痕实验和细胞侵袭实验 ꎬ 分别考察大分子灵芝多糖对非小细胞肺癌细胞增殖迁移和侵袭能力的抑制作用 ꎮ 实验结果显示 ꎬ 本研究中分离的大分子灵芝多糖可以显著抑制 A549 和 NCI H1299 细胞增殖迁移和侵袭 ꎬ 提示该灵芝多糖对非小细胞肺癌的直接抑制活性 ꎬ 并为后续的工作奠定实验基础 ꎮ 为全面系统研究该多糖的抗肿瘤活性 ꎬ 未来我们将会从细胞周期阻滞细胞凋亡抗氧化及耐药性等方面观察灵芝多糖对非小细胞肺癌的直接作用 ꎻ 同时 ꎬ 我们将以非小细胞肺癌动物模型为对象 ꎬ 进一步观察大分子灵芝多糖对非小细胞肺癌的体内抗肿瘤作用 ꎮ 此外 ꎬ 我们也将采用多种分子生物学技术手段 ꎬ 探讨该多糖对非小细胞肺癌的抑制作用相关分子机制 ꎬ 为灵芝多糖的临床应用奠定坚实的理论和实验基础 ꎮ 参考文献 : [1] BLANDIN KNIGHT Sꎬ CROSBIE P Aꎬ Balata Hꎬet al. Progress and prospects of early detection in lung cancer[ J].Open Biolꎬ2017ꎬ 7: [2] XU Yꎬ ZHANG Yꎬ WANG Zꎬ et al. The role of serum angiopoietin 2 levels in progression and prognosis of lung cancer[ J]. Medicineꎬ 2017ꎬ96(37):e8063. [3] 胡毅 ꎬ 陶海涛. 晚期非小细胞肺癌的药物治疗进展 [ J]. 中国药物应用与监测 ꎬ2014ꎬ 11(6): [4] 朱洪源 ꎬ 陈成. 晚期非小细胞肺癌的药物治疗进展 [ J]. 中国现代医学杂志 ꎬ2011ꎬ 21(33): [5] 张朋 ꎬ 刘苓霜. 中医药调节肺癌免疫机制研究进展 [J]. 上海中医药大学学报 ꎬ2015ꎬ 29(5): [6] 李斯文 ꎬ 石颖 ꎬ 李晓林 ꎬ 等. 肿瘤康胶囊辅助治疗非小细胞肺癌的 Ⅲ 期临床研究 [J]. 临床肿瘤学杂志 ꎬ2010ꎬ 15(6): [7] 周国亮 ꎬ 宋翼升 ꎬ 辛艳飞 ꎬ 等. 灵芝多糖抗氧化和抗肿瘤活性的研究进展 [J]. 中华中医药学刊 ꎬ2014ꎬ32(5): [8] 刘红雨 ꎬ 陈军. 肺癌转移进展 [ J]. 中国肺癌杂志 ꎬ2008ꎬ11(1): [9] 彭丽姿 ꎬ 郑美蓉. 非小细胞肺癌中 EGFR 基因突变及靶向药物治疗研究进展 [J]. 医疗装备 ꎬ2018ꎬ 31(11): [10] 施博文 ꎬ 乔文亮 ꎬ 韩玉栋 ꎬ 等. 非小细胞肺癌免疫治疗的研究进展 [J]. 现代生物医学进展 ꎬ2016ꎬ16(20): [11] 李婧文 ꎬ 周长林. 多糖的免疫调节作用及多糖药物的研究进展 [J]. 中国生化药物杂志 ꎬ2016ꎬ4(36): [12] 涂雪松 ꎬ 黄福恩 ꎬ 瞿广桥 ꎬ 等. 人参复方多糖对老年晚期非小细胞肺癌患者免疫功能和生活质量的影响 [ J]. 医学综述 ꎬ2016ꎬ 22(8): [13] 杨美菊 ꎬ 程哲. 香菇多糖联合多西他赛与奈达铂化疗治疗肺结核合并非小细胞肺癌的临床疗效研究 [ J]. 癌症进展 ꎬ2017ꎬ15 (5): [14] 王洁茹 ꎬ 王金英 ꎬ 张婷婷 ꎬ 等. 黄芪多糖调节黑色素瘤小鼠 PD 1 / PD Ls 分子表达的研究 [J]. 上海中医药大学学报 ꎬ2014ꎬ25 (5): [15] 钟理 ꎬ 蒋德昭 ꎬ 王绮如. 灵芝复方剂对 K562 白血病细胞增殖分化的影响 [J]. 湖南医科大学学报 ꎬ1999ꎬ24(6): [16] 林志彬. 灵芝抗肿瘤作用的免疫学机制及其临床应用 [ J]. 中国药理学与毒理学杂志 ꎬ2015ꎬ 29(6): [17] 熊川 ꎬ 罗强 ꎬ 金鑫 ꎬ 等. 人工栽培灵芝中多糖的部分理化性质及免疫调节作用 [J]. 微生物学通报 ꎬ2018ꎬ45(4): [18] 陈源红 ꎬ 邹佳峻 ꎬ 李松波. 灵芝多糖对人肝癌细胞 HepG2 增殖及体外迁移的影响 [J]. 广东医学 ꎬ2018ꎬ39(11): [19] 梁曾恩妮. 灵芝多糖对结肠癌细胞增殖抑制和凋亡的影响初步研究 [D]. 长沙 : 湖南农业大学 ꎬ2014. ( 编辑 : 沈蕾 )

12 (autophagy),imagej,,, 3 [1-4] (self-eating) Transwelinvasion, 20μmol L -1 LY A549 [5] PI3K/AKT 24h,PBS, [6-8],, ml -1 ( ) 600μL

12 (autophagy),imagej,,, 3 [1-4] (self-eating) Transwelinvasion, 20μmol L -1 LY A549 [5] PI3K/AKT 24h,PBS, [6-8],, ml -1 ( ) 600μL ( )2017 57 5JournalofNanchangUniversity(MedicalSciences)2017,Vol.57No.5 11 LY294002, (, 330006) : LY294002 PI3K/AKT 0 10 15 20 25 30μmol L -1 LY294002(LY294002 ) A549,PBS CCK8 LY294002 A549 ; Westernblot