386 西华师范大学学报 ( 自然科学版 ) 2016 年霉素, 链霉素, 购于 Gibco 公司, 美国 ); 胰蛋白酶 ( 购于 Amresco 公司, 美国 );Tax(HPLC 99%) 和 RES (HPLC 98%)( 购于瑞芬思公司, 中国 ); 啶橙 (AO)( 购于 Sigma

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梓沈
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1 第 37 卷 Vol37 第 4 期 No4 西华师范大学学报 ( 自然科学版 ) JournalofChinaWestNormalUniversity(NaturalSciences) 2016 年 12 月 Dec.2016 文章编号 : (2016) 紫杉醇与白藜芦醇单体及联合用药诱导人肝癌 HepG2 细胞凋亡的比较研究薛娅 1, 耿文峰 1 1,2, 伍春莲 (1. 西华师范大学西南野生动植物资源保护教育部重点实验室, 四川南充 ; 2. 西南大学三峡库区生态环境与生物资源省部共建国家重点实验室, 重庆北碚 ) 摘要 : 作者旨在对紫杉醇与白藜芦醇单体及联合用药诱导 HepG2 细胞凋亡进行比较研究 CCK8 法测定紫杉醇和白藜芦醇对 HepG2 细胞活性的影响 ;AO/PI 双染色法检测 HepG2 细胞凋亡形态 ;JC1/ 线粒体膜电位检测 HepG2 细胞中线粒体的去极化程度 ; 酶标仪检测 Caspase3/8 的活性 CCK8 法结果显示无论是紫杉醇和白藜芦醇还是两种药物联合对 HepG2 细胞都有抑制作用, 其中联合用药组效果更优, 表现出明显的时间依赖性 ;AO/PI 染色和 JC1 结果表明紫杉醇和白藜芦醇及两种药物联合皆使 HepG2 细胞发生凋亡, 联合用药组效果优于单体组 ;Caspase3/8 的活性检测发现在其凋亡过程中有 Caspase3/8 蛋白酶参与其中得出结论紫杉醇和白藜芦醇两种单体药物以及两种药物联合皆可通过线粒体途径诱导 HepG2 细胞凋亡, 联合用药组药效更强, 且凋亡过程是 caspase3 依赖性关键词 :HepG2; 紫杉醇 ; 白藜芦醇 ;Caspase3/8; 细胞凋亡中图分类号 :Q291 文献标志码 :A DOI: /j.isn 据世界卫生组织统计肝癌是位居我国第二的癌症杀手, 潜伏性高恶性度高病情进展快, 治疗难度大预后不良, 故寻求新的更合理的抗肝癌药物, 对于肝癌的防患与治疗都有重大意义紫杉醇 (Tax,Taxol) 是从太平洋紫杉树分离出来的一种高氧化二萜类天然产物, 是一种广谱抗癌药物 [13], 其抗癌机制是通过抑制微管解聚而阻止细胞有丝分裂引发细胞凋亡 [4] 但很多研究指出 Tax 对人体有毒副作用, 易产生抗药性 [58] 白藜芦醇(Resveratrol,Res) 属于多酚化合物, 白藜芦醇具抗肿瘤 [9] 抗炎症 [1012] [1314] 抗菌等作用, 而且对正常的人体细胞副作用小 [15] 已有报道 Tax Res 及其联合药物通过线粒体途径诱导喉癌细胞 Hep2 凋亡 [16],Tax Res 两者联合应用作用肺癌 PC9 具有协同抗癌作用 [17] 适宜浓度的 Tax 与 RES 联合应用可显著增强药物对 HepG2 细胞的抑制作用 [18] 目前没有关于 Tax Res 单体及联合用药时对人肝癌细胞 HepG2 的形态学和其诱导细胞调亡的分子机理的研究因此, 本研究以人肝癌细胞 HepG2 为材料, 探讨 Tax Res 单体及联合用药时对人肝癌细胞 HepG2 的生长抑制作用及其诱导细胞调亡的信号途径为减少紫杉醇的用量, 降低其对机体的毒副作用, 并为开发肝癌综合治疗方案提供相关理论依据 1 材料与方法 1.1 实验材料细胞人肝癌细胞株 HepG2( 购于川北医学院生化与分子免疫研究所 ) 试剂 RPMI1640 培养基 ( 购于 Gibco 公司, 美国 ); 胎牛血清 ( 购于杭州四季青生物制品公司, 中国 ); 双抗 ( 青收稿日期 : 基金项目 : 四川省教育厅重大培育项目 (13CZ0029); 国博士后基金第 54 批面上一等资助项目 (2013M540391) 作者简介 : 薛娅 (1991 ), 女, 四川达州市人, 硕士研究生, 主要从事天然产物抗肿瘤研究通信作者 : 伍春莲 (1976 ), 女, 四川彭州人, 教授, 博士, 主要从事细胞和分子生物学的研究和教学 wcl_xj@163.com

2 386 西华师范大学学报 ( 自然科学版 ) 2016 年霉素, 链霉素, 购于 Gibco 公司, 美国 ); 胰蛋白酶 ( 购于 Amresco 公司, 美国 );Tax(HPLC 99%) 和 RES (HPLC 98%)( 购于瑞芬思公司, 中国 ); 啶橙 (AO)( 购于 Sigma 公司, 美国 ); 碘化丙锭 (PI)( 购于 Sigma 公司, 美国 ); 线粒体膜电位检测试剂盒 (JC1)( 购于 Beyotime 公司, 中国 );Caspase3/8 检测试剂盒 ( 购于 Best Bio 公司, 中国 ) 仪器 CO 2 培养箱 ( 购于 Sanyo 公司, 日本 ); 倒置显微镜 ( 购于 Olympus 公司, 日本 ); 自动酶标仪 ( 购于 Thermo 公司, 美国 ); 荧光显微镜 ( 购于 Olympus 公司, 日本 ) 1.2 实验方法细胞培养将人肝癌细胞 HepG2 接种到 RPMI1640 完全培养液, 于 37 5% CO 2 培养箱中进行培养白藜芦醇紫杉醇的配制称取一定量的 Tax 与 Res 药品溶于 DMSO, 用 RPMI1640 基础培养液配制成 10mmol/L 的高浓度母液备用 (DMSO<0.1%), 实验时再依次稀释到所需的最终浓度 CCK8 法测定白藜芦醇和紫杉醇对肝癌 HepG2 细胞活性的影响取对数生长期的 HepG2 细胞, 制成均匀细胞悬液, 接种于 96 孔板 24h 后加药处理, 使各组药品终浓度为 :Res(200μmol/L) Tax(5μmol/L) Res(200μmol/L)+Tax(5μmol/L), 设置空白对照组, 每组设 5 个平行孔在 37 5% 的 CO 2 培养箱内孵育 12h 24h 及 36h 后, 弃上清, 每孔加入 10μL 的 CCK8 溶液, 将 96 孔板于培养箱内再孵育 4h 后用酶标仪测定在 450nm 处的吸光度细胞生长抑制率 =(1- 实验组 OD 值 / 对照组 OD 值 ) 100% 实验重复 3 次, 结果取平均值 JC1/ 线粒体膜电位检测细胞凋亡取对数生长期细胞接种于铺有灭菌盖玻片的 6 孔板内, 放入 37 5% 的 CO 2 培养箱内培养过夜, 待细胞长至 80% 融合时, 吸去 6 孔板内的培养液, 加药处理, 使各组药品终浓度为 :Res(200μmol/L) Tax(5 μmol/l) Res(200μmol/L)+Tax(5μmol/L), 设定空白对照组孵育 24h 后, 取出 6 孔板根据 JC-1 说明书进行检测 AO/PI 双染色法检测细胞凋亡取对数生长期细胞接种于有灭菌盖玻片的 6 孔板中, 放入 37 5% 的 CO 2 培养箱内培养过夜, 待细胞长至 80% 融合时, 吸去废液, 加药处理, 使各组中药品的终浓度为 :Res(200μmol/L) Tax(5μmol/L) Res (200μmol/L)+Tax(5μmol/L), 设定空白对照组孵育 24h 后, 取出盖玻片, 用 PBS 缓冲液洗细胞 2~3 次, 晾干,95% 的乙醇固定 10min,AO/PI 复合染液染色 1min,PBS 洗净并加入 0.1mol/L 的 CaCl 2 进行分色处理完成后将各盖玻片倒置放于载玻片上,30s 后荧光显微镜观察拍照 Caspase3/8 活性检测取对数生长期的细胞, 以相同的细胞浓度接种于 25mL 培养瓶中, 接种 24h 后, 进行加 $ 药处理, 使各组药品终浓度分别为 :Res(200 μmol/l) Tax(5μmol/L) Res(200μmol/L)+ Tax(5μmol/L), 设定空白对照组, 孵育 12h 24 h, 根据 Caspase3/8 活性检测试剂盒说明书进行活性检测 % &!" #!"!"#!" 2 结果 2.1 药物作用时间对细胞活性的影响用 Res(200μmol/L) Tax(5μmol/L) 和 Res(200μmol/L)+Tax(5μmol/L) 三组药品处 & '%

第 37 卷第 4 期薛娅, 等 : 紫杉醇与白藜芦醇单体及联合用药诱导人肝癌 HepG2 细胞凋亡的比较研究 387 理 HepG2 细胞 12h 24h 36h, 结果发现 : 在加药 12h 后, 这三组药品对 HepG2 细胞的抑制率分别可达 2255% 35.18% 和 49.10%; 在经过 24h 后, 这三组药品抑制率分别增长至 57.85% 65.34% 和 75.

2 药物对细胞线粒体膜电位的影响正常细胞在 JC1 染色后呈现出高绿和高红的荧光着色效果, 如在同一滤光片下观察则为黄绿色 ( 如图 21) 凋亡细胞在双色滤光片下可以观察到高绿和低红的荧光着色效果, 在同一滤光片下为绿色 ( 如图 2 2 图 23 图 24) 经过最终统计: 在经过三组药品处理 24h 后,Res(200μmol/L) Tax(5μmol/L) 和 Res

3 第 37 卷第 4 期薛娅, 等 : 紫杉醇与白藜芦醇单体及联合用药诱导人肝癌 HepG2 细胞凋亡的比较研究 387 理 HepG2 细胞 12h 24h 36h, 结果发现 : 在加药 12h 后, 这三组药品对 HepG2 细胞的抑制率分别可达 2255% 35.18% 和 49.10%; 在经过 24h 后, 这三组药品抑制率分别增长至 57.85% 65.34% 和 75.72% 在加药 36h 后, 三组药品的抑制率分别为 64.01% 68.76% 和 79.53%( 见图 1) 结果显示: 无论是白藜芦醇和紫杉醇单体还是两种药物联合对 HepG2 细胞都有抑制作用, 抑制作用呈时间依赖性, 其中联合用药组效果更优 2.2 药物对细胞线粒体膜电位的影响正常细胞在 JC1 染色后呈现出高绿和高红的荧光着色效果, 如在同一滤光片下观察则为黄绿色 ( 如图 21) 凋亡细胞在双色滤光片下可以观察到高绿和低红的荧光着色效果, 在同一滤光片下为绿色 ( 如图 2 2 图 23 图 24) 经过最终统计: 在经过三组药品处理 24h 后,Res(200μmol/L) Tax(5μmol/L) 和 Res (200μmol/L)+Tax(5μmol/L) 中线粒体去极化细胞所占比例分别为 :10.0% 46.1% 50.2% 和 63.1% 结果显示 : 白藜芦醇和紫杉醇单体或者两种药物联合都破坏线粒体膜电位, 诱导细胞凋亡反应, 联合组效果更明显 2.3 药物对细胞凋亡的影响用 Res(200μmol/L) Tax(5μmol/L) 和 Res (200μmol/L)+Tax(5μmol/L) 三组药品处理 HepG2 细胞 24h,AO/PI 染色结果如图 3 所示在视野中可见三种不同的细胞形态 : 活细胞 (VN) 发绿色荧光 ; 早期凋亡细胞 (VA) 发橘红色荧光 ; 晚期凋亡细胞 (NVA) 发红色荧光结果显示 : 空白对照组 ( 如图 31) 只有 VN;Res 与 Tax 单体用药组 ( 如图 32 图 33) 有 VA;Res+Tax 组 ( 如图 34) 观察到 NVA, 并且有凋亡小体出现结果表明 : 白藜芦醇和紫杉醇单体还是两种药物联合都可以诱导细胞发生凋亡, 其中联合用药组在相同时间内反应更强烈 2.4 Caspase8/3 活性检测结果酶标仪检测 Caspase8 和 Caspase3 活性 ( 见图 4 图 5) 加药 12h 后,Res(200μmol/L) Tax (5μmol/L) 和 Res(200μmol/L)+Tax(5μmol/ L) 三组药品的 Caspase8 活性测定值分别为和 0.183, 与未处理组的以及空白对照组的的相比, 有显著升高 (P< 001), 而未处理组与空白对照组相比则无明显差异 (P >0.05) 加药 24 h 后, 三组药品的 Caspase8 活性测定值分别为和 0161, 与未处理组的以及空白对照组的 0061 相比, 有显著升高 (P<0.01) 加药 12h 后,Res(200μmol/L) Tax(5μmol/L) 和 Res(200 μmol/l)+tax(5μmol/l) 三组药品的 Caspase3 活性测定值分别为和 0.154, 与未处理组的以及空白对照组的的相比, 有显著升高 (P<0.01) 而未处理组与空白对照组相比则无明显差异 (P>0.05) 加药 24h

4 388 西华师范大学学报 ( 自然科学版 ) 2016 年后, 三组药品的 Caspase3 活性测定值分别为和 0.191, 与未处理组的以及空白对照组的相比, 有显著升高 (P<0.01) 而未处理组与空白对照组相比依旧无明显差异(P>0.05) 结果显示 : 三组药品皆可诱导 HepG2 细胞发生凋亡, 且凋亡的发生过程呈 Caspase3 依赖性, 其中联合组药效更强三组药品诱导 HepG2 细胞发生凋亡的过程是通过 Caspase8 激活的, 提示有死亡受体途径参与其中!"#$ %&!"#$!"#$'%&!"$!"$ %&!"$!"$'%&!"$ 3 讨论根据相关报道 [18], 当二者联合作用时, 紫杉醇与白藜芦醇分别在 5~20μmol/L 以及 100~1000μmol/ L 的浓度范围内呈现出相加效果, 本研究选择适宜的浓度 Res(200μmol/L) Tax(5μmol/L) 和 Res(200 μmol/l)+tax(5μmol/l) 三组药品处理 HepG2 细胞 CCK8 法测定白藜芦醇和紫杉醇联合用药对肝癌 HepG2 细胞活性影响时发现无论是两种单体用药还是联合用药, 它们对 HepG2 细胞都有抑制作用, 并表现出明显的时间依赖性分析数据发现联合用药组不但药效较单体药品更强, 其在较短时间内的作用亦更加 [19] 明显, 反应速度明显优于 RES 与 Tax 单独用药组, 潘洪明等在胃癌的研究中也得出了相似结果 JC1/ 线粒体膜电位检测和 AO/PI 双染色法分析细胞凋亡实验中, 发现无论是两种单体药物亦或两种药物联合, 它们皆可诱导 HepG2 细胞调亡, 其中联合用药组效果更优,Res 作用肝癌 HepG2 后电子显微镜观察到线粒体的跨膜电位明显降低 [20], 与本文研究结果一致 Caspase 蛋白酶家族在细胞凋亡发生过程中有重要作用其中 Caspase3 与细胞的 DNA 断裂染色质凝集以及凋亡小体的发生皆有关系, 是 Caspase 中的最关键分子另外, 在死亡受体介导的细胞凋亡途径中, Caspase8 位于整个凋亡信号通路的最上游, 并且可被 TNF 激活, 再被细胞表面受体激活后,Caspase8 可以通过级联放大反应导致下游 Caspase3 的活化 [21] 在本论文中, 各用药组细胞的 Caspase3 活性明显高于未处理组和空白组, 联合用药组的 Caspase3 活性最强说明 Res Tax 和 Res+Tax 皆诱导 HepG2 细胞发生 [22] 凋亡过程是 Caspase3 依赖的,Dhandayuthpani 等指出白藜芦醇诱导凋亡的机制与上调促凋亡基因 Caspase3 有关为进一步了解紫杉醇与白藜芦醇联合用药诱导 HepG2 细胞发生凋亡的途径, 又对各用药组细胞的 Caspase8 活性进行了检测, 结果显示各用药组细胞的 Caspase8 活性明显高于未处理组和空白组, 联合用药组的 Caspase8 活性最强, 综合发现 12h 的 Caspase8 活性比 24h 高, 而且 12h 的 Caspase3 活性低于 24h 提示两种单体药物亦或两种药物联合诱导 HepG2 细胞调亡有通过死亡受体途径参与其中 Gar [23] ciazepeda 等也揭示白藜芦醇通过死亡受体途径介导 Caski Siha 及 C33A 细胞凋亡本研究从细胞活性与形态酶活性等各个方面关于 Res 和 Tax 单独用药以及联合用药时对 HepG2 细胞生长的抑制作用及诱导调亡的途径做比较研究联合用药和综合疗法作为目前生物医学领域的研究热点也开始逐渐应用于临床 [24] ; 并且为我们提供了肿瘤及癌症治疗的新思路, 用以减少 Tax 这种化学抗癌药物的用量, 降低其对机体的毒副作用 Res 和 Tax 所涉及的细胞凋亡过程到底是否还有其他凋亡途径的参与需要进一步的研究

5 第 37 卷第 4 期薛娅, 等 : 紫杉醇与白藜芦醇单体及联合用药诱导人肝癌 HepG2 细胞凋亡的比较研究 389 参考文献 : [1] WANIM C,TAYLORH L,WALLM E,etal.Plantantitumoragents.VI.Theisolationandstructureoftaxol,anovelantileuke micandantitumoragentfrom Taxusbrevifolia[J].JAm Chem Soc,1971,93(9): [2] YARDLEYDA.Taxanesintheelderlypatientwithmetastaticbreastcancer[J].BreastCancer:TargetsandTherapy,2015,7: [3] LUOY,WANGX,WANGH,etal.Highbakexpressionisassociatedwithafavorableprognosisinbreastcancerandsensitizes breastcancercelstopaclitaxel[j].plosone,2015,10(9):e [4] SCHIFFPB,FANTJ,HORWITZSB,etal.Promotionofmicrotubuleassemblyinvitrobytaxol[J].Nature,1979,277(5698): [5] 金涛, 李铁晶, 吴桐, 等. 紫杉醇抗肿瘤机理与毒副作用 [J]. 东北农业大学学报,2005,36(6): [6] YANGH,LIXD,ZHOUY,etal.StemnessandchemotherapeuticdrugresistanceinducedbyEIF5A2overexpressioninesopha gealsquamouscelcarcinoma[j].oncotarget,2015,6(28): [7] SHENYA,LIW H,CHENPH,etal.Intraperitonealdeliveryofanovelliposomeencapsulatedpaclitaxelredirectsmetabolicre programmingandefectivelyinhibitscancerstemcelsintaxolresistantovariancancer[j].americanjournaloftranslationalre search,2015,7(5): [8] ZOUD,WANGD,LIR,etal.MiR197inducestaxolresistanceinhumanovariancancercelsbyregulatingNLK[J].TumorBi ology,2015,36(9): [9] FULDAS,DEBATIN K M.Extrinsicversusintrinsicapoptosispathwaysinanticancerchemotherapy[J].Oncogene,2006,25 (34): [10] DONNELLYLE,NEWTONR,KENNEDYGE,etal.Antiinflammatoryefectsofresveratrolinlungepithelialcels:molecular mechanisms[j].americanjournalofphysiologylungcelularandmolecularphysiology,2004,287(4):l774l783. [11] AFZALM,SAFERAM,MENONM.Greenteapolyphenolsandtheirpotentialroleinhealthanddisease[J].Inflammopharma cology,2015,23(4): [12] LIM,TANY,STENMARKKR,etal.Highpulsatilityflowinducesacuteendothelialinflammationthroughoverpolarizingcels toactivatenfκb[j].cardiovascularengineeringandtechnology,2013,4(1):2638. [13] DESTEF,TOMASINSIG L,SKERLAVAJB,etal.ModulationofcytokinegeneexpressionbycathelicidinBMAP28inLPS stimulatedandunstimulatedmacrophages[j].immunobiology,2012,217(10): [14] HAINR,REIFHJ,KRAUSEE,etal.Diseaseresistanceresultsfrom foreignphytoalexinexpressioninanovelplant[j].na ture,1993,361(6408): [15] 韩雪莲. 白藜芦醇及其衍生物和类似物抗肿瘤研究进展 [J]. 化工进展,2014,33(6): [16] 卢晨欣, 孙警辉, 伍春莲. 白藜芦醇与紫杉醇联合用药对人喉癌 Hep2 细胞凋亡机制的研究 [J]. 中国中药杂志,2016, 03: [17] 崔秀娟. 白藜芦醇与紫杉醇联合应用对肺癌细胞 PC9 的杀伤效应 [J]. 蚌埠医学院学报,2015,08: [18] 耿文峰, 伍春莲, 陈杨琼, 等. 紫杉醇与白藜芦醇联合用药对人肝癌细胞 HepG2 活性的影响 [J]. 西华师范大学学报 ( 自然科学版 ),2012,33(3): [19] 潘洪明, 费洪新, 黄小义. 紫杉醇与白藜芦醇联合应用对人胃癌 MGC803 细胞作用的研究 [J]. 中华中医药杂志,2008, 23(9): [20] 戴维奇, 徐凌, 王锋, 等. 白藜芦醇对肝癌细胞增殖和凋亡影响及其机制 [J]. 现代生物医学进展,2012,12:1626. [21] MOCARSKIES,UPTON JW,KAISER W J.Viralinfectionandtheevolutionofcaspase8regulatedapoptoticandnecrotic deathpathways[j].naturereviewsimmunology,2012,12(2):7988. [22] DHANDAYUTHAPANIS,MARIMUTHUP,HORMANNV,etal.InductionofapoptosisinHeLacelsviacaspaseactivationby resveratrolandgenistein[j].journalofmedicinalfood,2013,16(2): [23] GARCIAZEPEDA SP,GARCIAVILLA E,DIAZCHAVEZJ,etal.Resveratrolinducesceldeathincervicalcancercels throughapoptosisandautophagy[j].europeanjournalofcancerprevention,2013,22(6): [24] 田宇楠, 祝慧凤, 万东. 肝肺肿瘤临床联合用药的研究进展 [J]. 实用临床医学杂志,2014,11: ( 下转第 395 页 )

6 第 37 卷第 4 期冯旭, 等 : 铬胁迫对草雌雄叶片抗氧化酶活性及丙二醛含量的影响 395 EfectofCr(Ⅲ)StresonAntioxidativeEnzymesDiferentInfluenceof MaleandFemaleHumulusscandensLeaves FENGXu a,wangbixia b (a.colegeoflifescience,b.colegeofenvironmentalscienceandengineering,chinawestnormaluniversity, NanchongSichuan637009,China) Abstract:ThispaperstudiedthesexspecificdiferencesofmaleandfemaleHumulusscandensleavesintheiran tioxidativeenzymesunderthestressofchromium(0,50,200,and300mg/kgcr 3+ ).Theresultsshowed:1)Cr 3+ stressignificantlyafectedthemaleandfemaleh.scandensseedlinginsod,pod,cat,prandmdacontent(p= 0.002,P=0.001,P=0.002,P=0.000,P=0.000),withthevariationtendencyof lowpromotion,highinhibi tion ;2)Inthecontroltreatment(CK),companiedwiththemales,thesuperoxidedismutase(SOD)activityofthe femaleswashigher,butthemalondialdehyed(mda)content,catalase(cat),peroxidase(pod)andthesoluble protein(pr)contentofthefemaleswaslower;3)theantioxidantenzymeactivityofmaleandfemaleh.scandens seedlingwaspromotedinlowconcentrationofcr 3+ stres(200~300mg/kg),andinhibitedinmoderatecr 3+ stress (200~300mg/kg),aswelasasignificantimbalanceinhighconcentrationofCr 3+ stres(500mg/kg),andthe changesoftheirantioxidantenzymeswerediferent.withincreaseofcr 3+ stres,theactivitiesofsod,podandpr contentofmaleandfemaleh.scandensseedlingshowedthe firsthighandthenlow variationtendency,cat downwardtrend,butmdaupwardtrend.thefemalesofh.scandensseedlinghasamorepositiveresponsestrategy thanmales,andstrongerresistancemechanism tocr 3+ stres. Keywords:Humulusscandens;chromium stres;dioecious;antioxidativeenzymes ( 上接第 389 页 ) ComparativeStudyofInducedApoptosisontheEfectofPaclitaxeland ResveratrolCombinationTherapyinHepatocelularHepG2cel XUEYa 1,GENGWenfeng 1,WUChunlian 1,2 (1.KeyLaboratoryofSouthwestChinaWildlifeResourcesConservation(ChinaWestNormalUniversity), MinistryofEducation,NanchongSichuan637009,China;2.StateKeyLaboratoryBreedingBaseof EcoEnvironmentsandBioResourcesoftheThreeGorgesReservoirRegion, SouthwestUniversity,BeibeiChongqing400715,China) Abstract:Thispaperfocusesonmakingacomparativestudyofresveratrol,paclitaxelandtheirjointantitumor mechanism.cck8assayisusedtoevaluatetheefectontheactivityofhepg2cel;ao/pistainingfordetecting HepG2cel smorphology;jc1fordetectingthedegreeofmitochondriapolarizationofhepg2cels;microplate readerfordetectingtheactivityofcaspase3/8.theresultsshowedthat:bothresveratrolandpaclitaxelorthecom binationoftheabovetwodrugscouldinhibitactivityofthehepg2cels,inwhichtheefectofthecombinedtreat mentgroupwasbeter.inhibitionrateincreasedwithtime,whichshowedsignificanttimedependence;ao /PIstai ningandjc1showedthatresveratrol,paclitaxelandthecombinationofthetwodrugscouldinduceapoptosisof HepG2celandmorphologicalchanges,amongwhichthecombinedtreatmentgroupwasmoresignificant.Caspase 3/8activityasayfoundthatCaspase3proteaseanddeathreceptorpathwayinvolvedintheapoptosisproces.The aboveresultsshowedthatresveratrol,paclitaxelandtwodrugsincombinationcaninducedhepg2apoptosis,the combinedtreatmentismoreefective,andtheapoptosisiscaspase3dependence. Keywords:HepG2;paclitaxel;resveratrol;Caspase;apoptosis

386 西华师范大学学报 ( 自然科学版 ) 2016 年 霉素, 链霉素, 购于 Gibco 公司, 美国 ); 胰蛋白酶 ( 购于 Amresco 公司, 美国 );Tax(HPLC 99%) 和 RES (HPLC 98%)( 购于瑞芬思公司, 中国 ); 啶橙 (AO)( 购于 Sigma

386 西华师范大学学报 ( 自然科学版 ) 2016 年霉素, 链霉素, 购于 Gibco 公司, 美国 ); 胰蛋白酶 ( 购于 Amresco 公司, 美国 );Tax(HPLC 99%) 和 RES (HPLC 98%)( 购于瑞芬思公司, 中国 ); 啶橙 (AO)( 购于 Sigma