前言医院感染管理是医疗质量的重要保证, 其质量的优劣直接关系到患者安全, 需要我们给予足够的重视医院感染管理包括重点部门管理感染预防与控制相关知识培训研究及各项监测等多方面而监测的主要内容有医院感染病例监测消毒灭菌效果监测及环境卫生学监测等消毒灭菌效果监测是评价其消毒设备运转是否正

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洽振马
7 years ago
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1 江苏省医院消毒灭菌效果监测规范 ( 试行 ) 江苏省医院感染管理质量控制中心二零一一年四月

2 前言医院感染管理是医疗质量的重要保证, 其质量的优劣直接关系到患者安全, 需要我们给予足够的重视医院感染管理包括重点部门管理感染预防与控制相关知识培训研究及各项监测等多方面而监测的主要内容有医院感染病例监测消毒灭菌效果监测及环境卫生学监测等消毒灭菌效果监测是评价其消毒设备运转是否正常消毒剂是否有效消毒效果是否达标的主要手段, 是消毒灭菌工作中质量控制的重要方面为进一步规范我省医院消毒灭菌效果监测, 我中心组织微生物学组全体专家编写了本手册, 就医院消毒灭菌效果监测方法频度结果判断等逐一详细介绍由于卫生部医疗机构消毒技术规范皮肤黏膜消毒剂卫生标准正在修订中, 尚未正式出台, 此手册编写时得到卫生部专家李六亿教授胡国庆教授大力帮助, 在卫生部未颁布新版之前, 解答我省各级医院在进行相关监测时存在的问题, 为大家提供一本操作性强的实用手册由于编写时间仓促, 加之编者水平有限, 难免挂一漏万, 欢迎同行批评指正江苏省医院感染管理质量控制中心二一一年四月

3 目录 1. 手和皮肤黏膜消毒效果的监测 (1) 2. 物体及环境表面消毒效果的监测 (1) 3. 空气消毒效果的监测 (2) 4. 使用中消毒液染菌量的监测 (4) 5. 内镜消毒灭菌效果的监测 (5) 6. 灭菌与消毒物品的监测 (5) 7. 灭菌效果监测方法 (7) 8. 紫外线灯消毒效果的监测 (11) 9. 血液透析液的监测 (12) 10. 餐具消毒效果的监测 (13) 11. 卫生洁具消毒效果监测 (14) 12. 各类环境空气物体表面及医护人员手细菌菌落总数卫生标 (15) 13. 消毒试验用试剂和培养基配方 (16) 14. 常用消毒剂的中和剂 (20)

4 一手和皮肤粘膜消毒效果监测 1 1 手消毒效果监测采样时间采样方法接触病人进行诊疗活动前采样被检者五指并拢, 用浸有含相应中和剂的无菌洗脱液的棉拭子在双手指曲面从指根到指端往返涂擦各两次, 一只手涂擦面积约 30cm 2, 涂擦过程中同时转动采样棉拭子 ; 剪去操作者手接触部分, 将棉拭子投入 10ml 含相应中和剂的无菌洗脱液试管内, 及时送检检测方法将采样管在混匀器上振荡 20 秒或用力敲打 80 次, 用无菌吸管吸取 1 0ml 待检样品接种于灭菌平皿, 每一样本接种 2 个平皿, 平皿内加入已熔化的 45 ~48 营养琼脂 15ml~18ml, 边倾注边摇匀, 待琼脂凝固, 置 36±1 温箱培养 48h, 计数菌落数细菌菌落总数计算方法细菌总数 (cfu/cm 2 平皿上菌落数稀释倍数 )= 采样面积 (cm 2 ) 结果判定 (1) 卫生手消毒, 监测的细菌菌落总数应 10cfu/cm 2 (2) 外科手消毒, 监测的细菌菌落总数应 5cfu/cm 皮肤消毒效果监测采样时间采样方法达到消毒效果后及时采样用 5cm 5cm 的标准灭菌规格板, 放在被检皮肤处, 用浸有含相应中和剂的无菌洗脱液的棉拭子 1 支, 在规格板内横竖往返均匀涂擦各 5 次, 并随之转动棉拭子, 剪去手接触部位后, 将棉拭子投入 10ml 含相应中和剂的无菌洗脱液的试管内, 及时送检不规则的皮肤处可用棉拭子直接涂擦采样检测方法结果判定 1 3 注意事项同皮肤消毒效果的判定标准遵循手消毒效果标准采样皮肤表面不足 5cm 5cm 可用相应面积的规格板采样注开展卫生手消毒效果监测的同时, 应关注洗手依从性的监测建议每季度对手术室 ICU 新生儿室开展此类监测二物品和环境表面消毒效果监测 2 1 采样时间 2 2 采样方法在消毒处理后或怀疑与医院感染暴发有关时进行采样将 5cm 5cm 的灭菌规格板放在被检物体表面, 用浸有含相应 1

5 中和剂的无菌磷酸盐缓冲液 (PBS) 或生理盐水采样液的棉拭子 1 支, 在规格板内横竖往返均匀各涂抹 5 次, 并随之转动棉拭子, 连续采样 4 个规格板面积, 被采表面 < 100cm 2, 取全部表面 ; 被采表面 100cm 2, 取 100cm 2 剪去手接触部分, 将棉拭子放入装有 10ml 无菌检验用洗脱液的试管中送检门把手等小型物体则采用棉拭子直接涂抹物体采样采样物体表面有消毒剂残留时, 采样液应含相应中和剂 2 3 检测方法将采样管在混匀器上振荡 20 秒或用力振打 80 次, 用无菌吸管吸取 1 0ml 待检样品接种于灭菌平皿, 平皿内加入已熔化的 45 ~48 营养琼脂 15ml~18ml, 边倾注边摇匀, 待琼脂凝固, 置 36±1 温箱培养 48h, 计数菌落数 2 4 结果计算规则物体表面物体表面细菌总数 (cfu/cm 2 平板上菌落数稀释倍数 )= 采样面积 (cm 2 ) 小型物体表面的结果计算, 用 cfu/ 件表示 2 5 结果判定 Ⅰ Ⅱ 类区域 : 细菌总数 5cfu/cm Ⅲ Ⅳ 类区域 : 细菌总数 10cfu/cm 2 注平日无需常规进行物体表面消毒效果监测, 怀疑与医院感染暴发有关时, 进行目标微生物的检测三空气消毒效果监测 3 1 采样时间采用洁净技术净化空气的房间在洁净系统自净后与从事医疗活动前采样 ; 未采用洁净技术净化空气的房间在消毒或规定的通风换气后与从事医疗活动前采样 ; 或怀疑与医院感染暴发有关时采样 3 2 监测方法采用洁净技术净化空气的房间可选择平板暴露法和空气采样器法, 参照 GB50333 要求进行监测空气采样器可选择六级撞击式空气采样器或其他经验证的空气采样器监测时将采样器置于室内中央 0 8m-1 5m 高度, 按采样器使用说明书操作, 每次采样时间不应超过 30min 房间面积大于 10m 2 者, 每增加 10m 2 增设一个采样点 2

6 洁净手术室静态 ( 空态 ) 时空气采样方法 ( 沉降法 ) 等级空气洁净度级别手术区周边区布点要求细菌最大平均浓度 ( 个 /Φ90 皿 0 5h) 手术区周边区 Ⅰ 100 级 1000 级 Ⅱ 1000 级级 Ⅲ 级级 2 4 辅 Ⅲ 级未采用洁净技术净化空气的房间采用平板暴露法 : 室内面积 30m 2, 设内中外对角线三点, 内外应距墙壁 1m 处 ; 室内面积 >30m 2, 设四角及中央五点, 四角的布点位置应距墙壁 1m 处室内面积 30m 2 布点图室内面积 >30m 2 布点图将普通营养琼脂平皿 (φ90mm) 放置各采样点, 采样高度为距地面 0 8m-1 5m; 采样时将平皿盖打开, 扣放于平皿旁, 暴露规定时间 (Ⅱ 类环境暴露 15min,Ⅲ Ⅳ 类环境暴露 5min) 后盖上平皿及时送检将送检平皿置 36±1 恒温箱培养 48h, 计数菌落数若怀疑与医院感染 3

7 暴发有关时, 进行目标微生物的检测 3 3 结果计算 : 平板暴露法按平均每皿的菌落数报告 :cfu/ 皿暴露时间空气采样器法计算公式空气中菌落总数 (cfu/m 2 采样器各平皿菌落数之和 (cfu) )= 采样速率 (L/min) 采样时间 (min) 结果判定洁净手术部和其他洁净场所, 空气中的细菌菌落总数符合 GB50333 的要求 Ⅱ 类区域 : 细菌总数 4cfu/15min 平皿 Ⅲ Ⅳ 类区域 : 细菌总数 4cfu/5min 平皿 3 5 注意事项 : 采样前, 关闭门窗, 在无人走动的情况下, 静止 10min 进行采样注医疗环境应强调通风及气流组织, 无需常规进行空气消毒效果监测四消毒液的监测 4 1 常用消毒液有效成分含量测定库存消毒剂的有效成分含量应依照产品企业标准进行检测 ; 使用中消毒液的有效浓度测定可用以下方法, 也可使用经国家卫生行政部门批准的消毒剂浓度试纸 ( 卡 ) 进行监测 4 2 使用中消毒液染菌量测定监测方法涂抹法用无菌吸管吸取消毒液 1 0ml, 加入 9 0ml 含有相应中和剂的采样管内混匀, 用无菌吸管吸取上述溶液 0 2ml, 滴于干燥普通营养琼脂平板, 每份样品同时做 2 个平行样, 一个平板置 20 培养 7d, 观察真菌生长情况, 另一个平板置 36 ±1 恒温箱温箱培养 72h, 记数菌落数怀疑与医院感染暴发有关时, 进行目标微生物的检测消毒液染菌量 (cfu/ml)= 每个平板上的菌落数倾注法用无菌吸管吸取消毒液 1 0ml, 加入到 9 0ml 含相应中和剂的无菌生理盐水采样管中混匀, 分别取 0 5ml 放入 2 只灭菌平皿内, 加入已熔化的的普通营养琼脂 15ml-18ml, 边倾注边摇匀, 待琼脂凝固, 一个平板置 20 恒温箱培养 7d, 观察真菌生长情况 ; 另一个平板置 36±1 培养 72 小时, 计数菌落数怀疑与医院感染暴发有关时, 进行目标微生物的检测消毒液染菌量 (cfu/ml)= 每个平板上的菌落数 20 4

8 4 2 2 结果判断灭菌用消毒液的菌落总数应为 0cfu/ml 皮肤粘膜消毒液的菌落总数 10cfu/ml 消毒用消毒液的菌落总数 100cfu/ml 注意事项采样后 1h 内检测使用中消毒剂应每季度进行监测, 灭菌剂应每月进行监测对未使用的低效消毒剂和皮肤黏膜用消毒剂, 使用前应按照使用中消毒液染菌量的方法进行细菌检测, 未检出细菌为合格五内镜消毒灭菌效果监测 5 1 采样时间 5 2 采样部位 5 3 采样方法在消毒灭菌后使用前进行采样为内镜的内腔面用无菌注射器抽取 10ml 含相应中和剂的缓冲液, 从待检内镜活检口注入, 用 15ml 无菌试管从活检孔出口收集, 及时送检,2h 内检测 5 4 菌落计数将送检液用旋涡器充分振荡, 分别取 0 5ml, 加入 2 只直径 90mm 无菌平皿, 每个平皿分别加入已熔化的 45 ~48 营养琼脂 15ml~18ml, 边倾注边摇匀, 待琼脂凝固后, 于 36±1 恒温箱培养 48 小时后计数菌落数 / 镜 =2 个平皿菌落平均值致病菌检测将送检液用旋涡器充分振荡, 取 0 2ml 分别接种 90mm 血平皿中国兰平皿和 SS 平皿, 均匀涂布,36±1 恒温箱培养 48 小时, 观察有无致病菌生长 5 6 结果判断消毒后内镜合格标准为 : 细菌总数 <20cfu/ 镜, 不能检出致病菌灭菌后内镜 : 无菌生长注消毒后内镜应每季度进行生物学监测并做好监测记录 ; 灭菌后的内镜及附件应每月进行生物学监测并做好监测记录六灭菌与消毒物品监测 6 1 灭菌物品采样时间采样液在消毒或灭菌处理后, 存放有效期内采样压力蒸汽灭菌后物品, 用普通营养肉汤采样管 ; 化学方法灭菌消 5

9 毒的物品 ( 浸泡或熏蒸后物品 ), 用含有相应中和剂的营养肉汤采样管采样方法敷料类 : 纱布棉球无菌包内物品, 于无菌条件下剪取面积约 1cm 3cm 的样品, 全部置于培养试管中, 然后放 36±1 恒温箱培养 48 小时, 观察结果导管类 : 无菌条件下, 用无菌剪刀取被检导管 1cm~3cm, 置肉汤培养试管内送检医用缝线 : 用无菌剪刀剪取中间层缝线, 或将线圈直接置入肉汤管中送检缝合针针头手术刀片等小件, 各取 5 枚, 分别投入肉汤管中送检一般器械 ( 持物钳手术剪镊子等 ): 无菌条件下, 用浸有含中和剂的肉汤棉拭子涂擦持物钳镊子内外侧尖端, 将棉拭子放入肉汤试管内送检引流条 : 无菌操作剪取 1cm~3cm, 放入肉汤试管中送检 6 2 消毒物品消毒后物品主要指体温表氧气湿化瓶及连接管雾化口含管呼吸机连接管及螺纹管吸引器导管面罩头罩开口器舌钳等采样方法 :( 采样液可用含相应中和剂的无菌生理盐水 ) 体温表 : 用无菌生理盐水棉拭子涂擦体温表前端 1/3 口含部 (3 支 / 组 ), 棉拭子放入试管内立即送检氧气湿化瓶 : 用无菌生理盐水棉拭子涂擦湿化瓶内部四壁及底部, 棉拭子放试管内立即送检也可用无菌吸管吸取湿化液 1ml, 送培养各种导管连接管, 用无菌生理盐水棉拭子, 伸入管内壁 5cm~8cm 处涂擦, 棉拭子放入试管内送检螺纹管 : 用无菌注射器吸取无菌生理盐水 10ml~20ml 加入螺纹管内, 振荡螺纹管后收集盐水及时送检面罩头罩 : 用浸有无菌生理盐水棉拭子涂擦内壁, 棉拭子放入盐水试管内送检 6 3 卫生学标准 : 进入人体无菌组织器官或接触破损皮肤粘膜的医疗用品必须无菌接触粘膜的医疗用品, 细菌菌落总数 20cfu/g 或 100cm 2, 致病性微生物不得检出接触皮肤的医疗物品, 细菌菌落总数 200cfu/g 或 100cm 2, 致病性微生物 6

10 不得检出注 : 无菌条件是指操作空间采用空气消毒或净化, 并在酒精灯下操作, 操作时戴帽子口罩手套工作服等无须常规进行无菌物品监测建议每季度对消毒供应室集中清洗消毒的物品进行抽样检查 3-5 件, 有疑问时增加采样频度和件数七灭菌效果的监测 7 1 压力蒸汽灭菌效果监测物理监测法每次灭菌应连续监测并记录灭菌时的温度压力和时间等灭菌参数温度波动范围在 ±3 以内, 时间满足最低灭菌时间的要求, 同时应记录所有临界点的时间温度与压力值, 结果应符合灭菌的要求化学监测法应进行包内包外化学指示物监测具体要求为灭菌包包外应有化学指示物, 高度危险性物品包内应放置包内化学指示物, 置于最难灭菌的部位如果透过包装材料可直接观察包内化学指示物的颜色变化, 则不必放置包外化学指示物通过观察化学指示物颜色的变化, 判定是否达到灭菌合格要求采用快速压力蒸汽灭菌程序灭菌时, 应直接将一片包内化学指示物置于待灭菌物品旁边进行化学监测生物监测法应每周监测一次标准指示菌株 : 耐热的嗜热脂肪杆菌芽孢 (ATCC7953 或 SSIK31 株 ), 菌片含菌量为 cfu/ 片 ~ cfu/ 片, 在 121±0 5 条件下,D 值为 1 3min ~1 9min, 杀灭时间 (KT 值 ) 19min, 存活时间 (ST 值 ) 3 9min 标准测试包的制作 : 由 16 条 41cm 66cm 的全棉手术巾制成制作方法 : 将每条手术巾的长边先折成 3 层, 短边折成 2 层, 然后叠放, 制成 23cm 23cm 15cm 大小的测试包标准生物测试包或生物 PCD 的制作方法 : 将两个标准指示菌片分别装入灭菌小纸袋内, 置于标准试验包的中心部位即完成标准生物测试包或生物 PCD 的制作监测方法 : 将标准生物测试包或生物 PCD, 置于灭菌器排气口的上方或 7

11 生产厂家建议的灭菌器内最难灭菌的部位, 并设阳性对照和阴性对照经一个灭菌周期后, 在无菌条件下取出标准试验包的指示菌片, 投入溴甲酚紫葡萄糖蛋白胨水培养基中, 经 56 ±1 恒温箱培养 7d( 自含式生物指示物按产品说明书执行 ), 观察培养结果结果判定 : 阳性对照组培养阳性, 阴性对照组培养阴性, 试验组培养阴性, 判定为灭菌合格阳性对照组培养阳性, 阴性对照组培养阴性, 试验组培养阳性, 则灭菌不合格 ; 同时应进一步鉴定试验组阳性的细菌是否为指示菌或是污染所致小型压力蒸汽灭菌器因一般无标准生物监测包, 应选择灭菌器常用的有代表性的灭菌包制作生物测试包或生物 PCD, 置于灭菌器最难灭菌的部位, 且灭菌器应处于满载状态生物测试包或生物 PCD 应侧放, 体积大时可平放采用快速压力蒸汽灭菌程序灭菌时, 应直接将一支生物指示物, 置于空载的灭菌器内, 经一个灭菌周期后取出, 规定条件下培养, 观察结果可使用一次性标准生物测试包, 对灭菌器的灭菌质量进行生物监测注意事项 : (1) 监测所用菌片须经卫生部认可, 并在有效期内 (2) 如果一天内进行多次生物监测, 且生物指示剂为同一批号, 则只设一次阳性对照即可 (3) 若采用自含式生物指示物则无需做阴性对照 B-D 试验预真空 ( 包括脉动真空 ) 压力蒸汽灭菌器应每日开始灭菌运行前进行 B -D 测试,B-D 测试合格后, 灭菌器方可使用 B-D 测试失败, 应及时查找原因进行改进, 监测合格后, 灭菌器方可使用 B-D 测试方法 (1)B-D 测试包的制作方法 :B-D 测试包由 100% 脱脂纯棉布或 100% 全棉手术巾折叠成长 30±2cm 宽 25±2cm 高 25cm~28cm 大小的布包 ; 将专用 B-D 测试纸, 放入上述布包的中间 ; 制成的 B-D 测试包的重量要求为 4kg±5% 或采用一次性使用的 B-D 测试包 (2)B-D 测试方法测试前先预热灭菌器, 将 B-D 测试包水平放于灭菌柜内灭菌车的前底层, 靠近柜门与排气口底前方 ; 柜内除测试包外无任何物品 ;134,3 5min~ 4min 后, 取出测试包, 观察 B-D 测试纸颜色变化 8

12 (3) 结果判定 B-D 测试纸均匀一致变色, 说明 B-D 试验通过, 灭菌器可以使用 ; 变色不均, 说明 B-D 试验失败, 可再重复一次 B-D 测试, 如果合格, 灭菌器可以使用 ; 不合格, 需检查 B-D 测试失败原因, 直至 B-D 测试通过后该灭菌器方能使用注意事项紧急情况灭菌植入型器械时, 可在生物 PCD 中加用第 5 类化学指示物第 5 类化学指示物合格可作为提前放行的标志, 生物监测的结果应及时通报使用部门采用新的包装材料和方法进行灭菌时应进行生物监测灭菌器新安装移位和大修后的监测应进行物理监测化学监测和生物监测物理监测化学监测通过后, 生物监测应空载连续监测三次, 合格后灭菌器方可使用, 监测方法应符合 GB18278 的有关要求对于小型压力蒸汽灭菌器, 生物监测应满载连续监测三次, 合格后灭菌器方可使用预真空 ( 包括脉动真空 ) 压力蒸汽灭菌器应进行 B-D 测试并重复三次, 连续监测合格后, 灭菌器方可使用 7 2 干热灭菌效果监测物理监测法每灭菌批次应进行物理监测监测方法为将多点温度检测仪的多个探头分别放于灭菌器各层的内中外各点, 关好柜门, 引出导线, 由记录仪中观察温度上升与持续时间温度在设定时间内均达到预置温度, 则物理监测合格化学监测法每一灭菌包外应使用包外化学指示物, 每一灭菌包内应使用包内化学指示物, 并置于最难灭菌的部位对于未打包的物品, 应使用一个或者多个包内化学指示物, 放在待灭菌物品附近进行监测经过一个灭菌周期后取出, 据其颜色的改变判断是否达到灭菌要求生物监测法应每周监测一次标准指示菌株 : 枯草杆菌黑色变种芽孢 (ATCC9372), 菌片含菌量为 cfu/ 片 ~ cfu/ 片, 在 160±2 条件下,D 值为 1 3min~1 9min, 杀灭时间 (KT 值 ) 19min, 存活时间 (ST 值 ) 3 9min 标准生物测试管的制作方法 : 将标准指示菌片分别装入灭菌中试管内 (1 片 / 管 ), 即制成了标准生物测试管监测方法 : 将枯草杆菌芽孢菌片分别装入无菌试管内 (1 片 / 管 ) 灭菌器与每层门把手对角线内, 外角处放置 2 个含菌片的试管, 试管帽置于试管旁, 关好柜门, 经一个灭菌周期后, 待温度降至 80 时, 加盖试管帽后取出试管在无菌条件下, 9

13 加入普通营养肉汤培养基 (5ml/ 管 ),36±1 恒温箱培养 48h, 观察初步结果, 无菌生长管继续培养至第 7 日并设阳性对照和阴性对照结果判定 : 阳性对照组培养阳性, 阴性对照组培养阴性, 若每个指示菌片接种的肉汤管均澄清, 判为灭菌合格 ; 若阳性对照组培养阳性, 阴性对照组培养阴性, 而指示菌片之一接种的肉汤管混浊, 判为不合格 ; 对难以判定的肉汤管, 取 0 1ml 接种于营养琼脂平板, 用灭菌 L 棒或接种环涂匀, 置 36±1 培养 48h, 观察菌落形态, 并做涂片染色镜检, 判断是否有指示菌生长, 若有指示菌生长, 判为灭菌不合格 ; 若无指示菌生长, 判为灭菌合格注意事项 : 监测所用菌片须经卫生部认可, 并在有效期内使用注意事项新安装移位和大修后, 应进行物理监测法化学监测法和生物监测法监测 ( 重复三次 ), 监测合格后, 灭菌器方可使用 7 3 环氧乙烷灭菌效果监测物理监测法每次灭菌应连续监测并记录灭菌时的温度压力时间等灭菌参数灭菌参数符合灭菌器的使用说明或操作手册的要求化学监测法每个灭菌物品包外应使用包外化学指示物, 作为灭菌过程的标志 ; 每包内最难灭菌位置放置包内化学指示物, 通过观察其颜色变化, 判定其是否达到灭菌合格要求生物监测法每灭菌批次应进行生物监测标准指示菌株 : 枯草杆菌黑色变种芽孢 (ATCC9372), 菌片含菌量 cfu/ 片 ~ cfu/ 片, 在环氧乙烷剂量为 600±30mg/L, 作用温度为 54±2, 相对湿度为 60±10% 条件下, 其杀灭 90% 该微生物的 D 值为 2 6min~5 8min, 存活时间 (ST 值 ) 7 8min, 杀灭时间 (KT 值 ) 58min 常规生物测试包的制作方法 : 取一个 20ml 无菌注射器, 去掉针头, 拔出针栓, 将标准指示菌放入针筒内, 带孔的塑料帽应朝向针头处, 再将注射器的针栓插回针筒 ( 注意不要碰及生物指示物 ), 之后用一条全棉小毛巾两层包裹, 置于纸塑包装袋中, 封装监测方法 : 将常规生物测试包放在灭菌器最难灭菌的部位 ( 整个装载灭菌包的中心部位 ) 灭菌周期完成后应立即取出指示菌片接种于含有复方中和剂的 0 5% 的葡萄糖肉汤培养基管中,36±1 培养 7d( 自含式生物指示物应遵循产品说明 ), 观察培养基颜色变化同时设阳性对照和阴性对照 10

14 结果判定 : 阳性对照组培养阳性, 阴性对照组培养阴性, 试验组培养阴性, 判定为灭菌合格阳性对照组培养阳性, 阴性对照组培养阴性, 试验组培养阳性, 则灭菌不合格 ; 同时应进一步鉴定试验组阳性的细菌是否为指示菌或是污染所致注意事项 : 监测所用菌片须经卫生部认可, 并在有效期内使用 7 4 过氧化氢等离子灭菌的监测物理监测法每次灭菌应连续监测并记录每个灭菌周期的临界参数如舱内压温度过氧化氢的浓度电源输入和灭菌时间等灭菌参数灭菌参数符合灭菌器的使用说明或操作手册的要求化学监测法每个灭菌物品包外应使用包外化学指示物, 作为灭菌过程的标志 ; 每包内最难灭菌位置放置包内化学指示物, 通过观察其颜色变化, 判定其是否达到灭菌合格要求生物监测法应每天至少进行一次灭菌循环的生物监测, 监测方法应符合国家的有关规定 7 5 低温甲醛蒸汽灭菌的监测物理监测法每灭菌批次应进行物理监测详细记录灭菌过程的参数, 包括灭菌温度湿度压力与时间灭菌参数符合灭菌器的使用说明或操作手册的要求化学监测法每个灭菌物品包外应使用包外化学指示物, 作为灭菌过程的标志 ; 每包内最难灭菌位置放置包内化学指示物, 通过观察其颜色变化, 判定其是否达到灭菌合格要求生物监测法应每周监测一次, 监测方法应符合国家的有关规定八紫外线消毒效果的监测 8 1 紫外线灯管辐照度值的测定监测方法紫外线辐照计测定法 : 开启紫外线灯 5min 后, 将测定波长为 253 7nm 的紫外线辐照计探头置于被检紫外线灯下垂直距离 1m 的中央处, 特殊紫外线灯在推荐使用的距离处测定, 待仪表稳定后, 所示数据即为该紫外线灯管的辐照度值紫外线强度照射指示卡监测法 : 开启紫外线灯 5min 后, 将指示卡置于紫外灯下垂直距离 1m 处, 有图案一面朝上, 照射 1min, 紫外线照射后, 图案正中光敏色块由乳白色变成不同程度的淡紫色, 观察指示卡色块的颜色, 将其与标准色块比较, 11

15 读出照射强度结果判定普通 30w 直管型紫外线灯, 新灯辐照强度 90μW/cm 2 为合格 ; 使用中紫外线灯辐照强度 70μW/cm 2 为合格 30W 高强度紫外线新灯的辐照强度 180μW/cm 2 为合格注意事项测定时电压 220±5V, 温度 20 ~25, 相对湿度 <60%, 紫外线辐照计应在计量部门鉴定的有效期内使用 ; 指示卡应获得卫生许可批件, 产品批号明确, 并在有效期内使用 8 2 生物监测法空气消毒效果监测按 3 2 的要求执行物体表面消毒效果监测按 2 2 的要求执行注意事项紫外线灯在投放市场之前应经过国家承认的消毒试验室的生物学效果评价紫外线消毒效果监测时, 采样液 ( 平板 ) 中不加中和剂九血液透析液的监测 9 1 采样方法透析用水 : 水路末端进入血液透析机的位置收集标本透析液 : 透析器出口处或透析液进入透析器的位置 9 2 检测方法采样前准备采样时准备好托盘酒精灯火柴无菌试管无菌注射器等采样方法采样时将进入透析器入口的旁路拔下, 让旁路出水 1 分钟左右, 然后用一次性注射器抽取标本 3ml~5ml 透析液加入事先准备好的无菌试管中进行细菌学培养及计算每毫升透析液标本中的细菌菌落总数采样时尽可能做到无菌操作, 采样完毕后立即将旁路接上, 以免影响病人正常透析细菌总数检测将采样管在混匀器上振荡 20s, 用无菌吸管吸取 0 5ml 待检透析液接种于灭菌平皿, 每一个样本接种 2 个平皿, 加入已熔化的 45 ~48 的营养琼脂 15ml~18ml, 边倾注边摇匀, 待琼脂凝固, 置 36±1 温箱培养 48h, 计算平均菌落数 12

16 细菌总数计算方法 : 细菌总数 (cfu/ml)=2 个平皿平均菌落数致病菌检测增菌分离 : 吸取 1ml 待检透析液, 接种于 5ml 营养肉汤培养基中, 于 36±1 增菌培养 24h 取 1 白金耳上述增菌液, 在血平皿上作划线分离, 36±1 培养 24h 观察血平板上菌落形态特征进行细菌菌种鉴定结果判定透析用水细菌菌落总数 200cfu/ml 透析液细菌菌落总数 200cfu/ml 并不得检出致病微生物内毒素检测 ( 按照产品说明书 ) 注每月对透析用水透析液进行 1 次细菌培养透析液内毒素检测最初应每周检测 1 次, 连续 2 次检测结果符合要求后, 每 3 个月至少检测 1 次, 留取标本方法同细菌培养怀疑有透析液污染或发生严重感染病时, 应增加采样点, 如原水口反渗水出口储水口透析液配比口浓缩透析液等怀疑或确定病人在透析中发生热原反应和菌血症时, 应随时进行监测十餐具消毒效果监测 10 1 采样时间 10 2 采样方法在消毒后使用前进行采样将 2 0cm 2 5cm 灭菌滤纸片于无菌洗脱液中浸湿均匀, 贴在食具表面, 经 5min 取下, 每 10 张滤纸合为一份样本 ( 相当于 50cm 2 采样面积 ), 投入含 50ml 生理盐水的 100ml 三角烧瓶中,4 小时内送检 10 3 检测方法细菌总数检测同大肠菌群检测取 1ml 采样液, 加入相应单倍或双倍乳糖胆盐发酵管内, 置 36±1 培养箱内培养 24h, 若乳糖胆盐发酵管不产酸不产气, 则可报告大肠菌群阴性如果有疑则进行分离培养 10 4 结果判定细菌总数 5cfu/cm 2, 大肠菌群未检出, 致病菌未检出为消毒合格 10 5 注意事项 : 餐具若用化学消毒剂消毒, 采样液中应加入相应中和剂 13

17 注建议夏季对餐具进行监测十一卫生洁具消毒效果监测 11 1 采样时间在消毒后使用前进行采样 11 2 采样方法抹布拖把等物品可用无菌的方法剪取 1cm 3cm, 直接投入 5ml 含相应中和剂的无菌生理盐水中, 立即送检 11 3 检测方法将采样管在混匀器上振荡 20s 或用力振打 80 次, 取采样液检测致病菌 11 4 结果判定未检出致病菌为消毒合格 11 5 致病菌的检测当怀疑被某致病菌污染时, 或怀疑医院感染与某致病菌有关时, 致病菌的检测依据污染情况进行相应指标的检测检测方法参考相关标准注卫生洁具以清洁为主, 消毒效果监测一般在怀疑医院感染暴发或流行与卫生洁具相关时进行 14

18 附录 1 各类环境空气物体表面医护人员手细菌菌落总数卫生标准环境类别范围空气 cfu/ 平皿物体表面 cfu/cm 2 医护人员手 cfu/cm 2 Ⅰ 类采用空气洁净技术的诊疗场所, 分洁净手术部和其他洁净场所符合 GB50333 的要求 5 Ⅱ 类为非洁净手术部室 ; 产房 ; 导管室 ; 血液病病区烧伤病区等保护性隔离病区 ; 重症监护病区 ; 新生儿室等 4cfu/ 15min 平皿 5 卫生手消毒 10 Ⅲ 类消毒供应中心的检查包装灭菌区和无菌物品存放区 ; 血液透析中心 ( 室 ); 其他普通住院病区等 4cfu/ 5min 平皿 10 外科手消毒 5 Ⅳ 类普通门 ( 急 ) 诊及其检查治疗 ( 注射换药等 ) 室 ; 感染性疾病科门诊和病区 4cfu/ 5min 平皿 10 15

19 附录 2 消毒试验用试剂和培养基配方 E 1 磷酸盐缓冲液 (PBS,0 03mol/L,pH7 2) 无水磷酸氢二钠磷酸二氢钾蒸馏水加至 2 83g 1 36g 1000ml 将各成分加入到 1000ml 蒸馏水中, 待完全溶解后, 调 ph 至 , 于 121 压力蒸汽灭菌 20min 备用 E 2 无菌检验用洗脱液吐温 -80 蛋白胨氯化钠蒸馏水 1g 10g 8 5g 1000ml 将各成分加入到 1000ml0 03mol/LPBS 液中, 加热溶解后调 ph 至 , 于 121 压力蒸汽灭菌 20min 备用 E 3 营养琼脂培养基蛋白胨牛肉膏氯化钠琼脂蒸馏水 10g 5g 5g 15g 1000ml 除琼脂外其他成份溶解于蒸馏水中, 调 ph 至 , 加入琼脂, 加热溶解, 分装, 于 121 压力蒸汽灭菌 20min 备用 E 4 营养肉汤培养基蛋白胨牛肉膏氯化钠蒸馏水 16 10g 5g 5g 1000ml

20 将各成份溶解于蒸馏水中, 调 ph 至 , 分装, 于 121 压力蒸汽灭菌 20min 备用 E 5 溴甲酚紫蛋白胨培养液蛋白胨 10g 葡萄糖 5g 可溶性淀粉 1g 溴甲酚紫乙醇溶液 10ml 蒸馏水 1000ml 将蛋白胨葡萄糖溶解于蒸馏水中, 调 ph 至 , 加入 2% 溴甲酚紫酒精溶液, 摇匀后, 分装 ( 每管 5ml), 并放入一个小倒管, 于 115 压力蒸汽灭菌 30min 置 4 冰箱备用 E 6 血琼脂培养基营养琼脂 100ml 脱纤维羊血 ( 或兔血 ) 10ml 将营养琼脂加热熔化待冷至 50 左右, 在无菌条件下将 10ml 脱纤维血加入后摇匀, 倾倒平皿置冰箱备用 E 7 0 5% 葡萄糖肉汤培养基胨 10g 氯化钠 5g 葡萄糖 5g 肉浸液 1000ml 取胨与氯化钠加入肉浸液内, 微温溶解后, 调 ph 至弱碱性, 煮沸加入葡萄糖溶解后, 摇匀, 滤清, 调 ph 至 , 分装, 于 115 压力蒸汽灭菌 30min E 8 稀释液 : 胰蛋白胨生理盐水溶液 (TPS) 胰蛋白胨 1 0g 氯化钠 8 5g 先用 900ml 以上蒸馏水溶解, 并调节 ph 值在 7 0±0 2(20 ), 最终用蒸馏水加 1000ml, 分装后, 经 121 压力蒸汽灭菌后使用 17

21 E 9 胰蛋白胨大豆肉汤培养基 (TSB) 胰蛋白胨 1 5% 大豆蛋白胨 0 5% 氯化钠 0 5% 用蒸馏水配制而成调 ph 至 7 2±0 2, 经 121 压力蒸汽灭菌 20min 备用 E 10 胰蛋白胨大豆琼脂培养基 (TSA) 胰蛋白胨 1 5% 大豆蛋白胨 0 5% 氯化钠 0 5% 琼脂 1 6% 用蒸馏水配制而成, 调 ph 至 7 2±0 2, 经 121 压力蒸汽灭菌 20min 备用 E 10 嗜热脂肪杆菌恢复琼脂培养基蛋白胨牛肉膏可溶性淀粉葡萄糖琼脂蒸馏水 10g 3g 1g 1g 20g 1000ml 后使用以上各成分蒸馏水溶解, 调 ph 至 , 装瓶, 经 115 压力蒸汽灭菌 30min E 11 乳糖胆盐发酵管蛋白胨猪胆盐 ( 或牛羊胆盐 ) 乳糖 20g 3g 10g 0 04% 溴甲酚紫水溶液 25ml 蒸馏水 1000ml 将蛋白胨胆盐及乳糖溶解于蒸馏水中, 调 ph 至 7 4, 加入 0 04% 溴甲酚紫水溶液, 分装 ( 每管 10ml), 并放入一个小倒管, 于 115 压力蒸汽灭菌 15min 后备用 E 12 注意事项 (1) 配制培养基的容器不宜用铜锅或铁锅, 以免影响细菌生长 18

22 好 (2) 培养基用的试管口和三角烧瓶口应用普通棉花制成的棉塞, 再用牛皮纸包 (3) 试剂与培养基配制好后应置清洁处保存, 常温下不超过 1 个月 19

23 附录 3 常用消毒剂的中和剂消毒剂 ( 浓度 ) 中和剂 ( 浓度 ) 含氯 ( 碘 ) 消毒剂 { 有效氯 ( 碘 ) %} 硫代硫酸钠 ( %) 过氧乙酸 ( %) 硫代硫酸钠 ( %) 过氧化氢 ( %) 硫代硫酸钠 ( %) 戊二醛 (2%) 甘氨酸 (1%) 季铵盐类消毒剂 ( %) 吐温 ( %)+ 卵磷脂 ( %) 洗必泰 ( %) 吐温 -80( %)+ 卵磷脂 ( %) 酚类消毒剂 ( %) 吐温 80( %) 碱类消毒剂等当量酸酸类消毒剂等当量碱复方消毒剂吐温 -80+ 卵磷脂 + 硫代硫酸钠 20

环境卫生学监测标本的采集

环境卫生学监测标本的采集医院环境卫生学及消毒效能监测福建医科大学附属协和医院聂渝莉 1 一空气消毒效果监测二手消毒效果监测三物品和环境表面消毒效果监测四使用中消毒液染菌量测定五内镜消毒灭菌效果监测六血液透析液监测七灭菌质量监测 2 一空气消毒效果监测非洁净区域空气消毒效果监测 ( 一 ) 采样时间 : 在消毒处理后, 操作前进行采样 ( 二 ) 采样方法 : 根据其采样原理分 : 平板暴露法和微生物采样器法