1898 南方农业学报 47 卷理活性成分, 具有增强心脏功能明目及抗癌等独特功效 (Bliss,2002;Atalay et al.,2003; 周剑忠等,2014), 能有效预防脑神经衰老及糖尿病等疾病发生 ( 杨红澎和蒋与刚,2010) 蓝莓是美国主栽果树品种 ( 於虹和贺善安,2013)

Size: px

Start display at page:

Download "1898 南方农业学报 47 卷理活性成分, 具有增强心脏功能明目及抗癌等独特功效 (Bliss,2002;Atalay et al.,2003; 周剑忠等,2014), 能有效预防脑神经衰老及糖尿病等疾病发生 ( 杨红澎和蒋与刚,2010) 蓝莓是美国主栽果树品种 ( 於虹和贺善安,2013)"

浴钵金
7 years ago
Views:

1 南方农业学报 Journal of Southern Agriculture 2016,47(11): ISSN 11 期 ; CODEN NNXAAB DOI: /j:issn 蓝莓品种阳光蓝离体繁殖条件的筛选范淑芳 1, 简大为 2,3, 周志翔 3*, 宁国贵 3 ( 1 荆楚理工学院生物工程学院, 湖北荆门 ; 2 荆门市林业局, 湖北荆门 ; 3 华中农业大学园艺林学学院, 武汉 ) 摘要 : 目的筛选适宜蓝莓品种阳光蓝 (Sunshine Blue) 的离体繁殖条件, 建立阳光蓝组培快繁体系方法以阳光蓝无菌苗茎段为外植体进行离体繁殖, 筛选适合其芽增殖及生根的培养基类型茎段起始芽数细胞分裂素生长素 ph 及活性炭 (AC) 添加量结果阳光蓝茎段在 WPM 培养基中增殖芽数最多, 培养 60 d 时平均芽长较长, 可作为阳光蓝茎段增殖较佳的基本培养基 ; 以起始芽数 2 芽茎段接种到 WPM+2.0 mg/l ZT+0.01 mg/l IBA 培养基上, 培养 30 d 时增殖芽数为个, 显著多于其他增殖培养基 (P<0.05), 培养 60 d 时增殖芽数达个, 增殖效果明显优于其他增殖培养基在生根培养中, 当生长素为 0.10 mg/l IBA 添加 mg/l AC 培养 90 d 时生根率达 87.50%, 明显优于其他生根培养基结论阳光蓝组培苗的离体繁殖以带 2 个芽茎段在 WPM+2.0 mg/l ZT+0.01 mg/l IBA 中进行增殖培养在 1/2WPM+0.10 mg/l IBA mg/l AC 中进行生根培养效果较佳关键词 : 蓝莓 ; 阳光蓝 ; 离体繁殖 ; 条件筛选中图分类号 : S 文献标志码 :A 文章编号 : (2016) Screening of in vitro propagation condition for Vaccinium spp. Sunshine Blue FAN Shu-fang 1, JIAN Da-wei 2,3, ZHOU Zhi-xiang 3*, NING Guo-gui 3 ( 1 College of Biological Engineering, Jingchu University of Technology, Jingmen, Hubei , China; 2 Jingmen Forestry Bureau, Jingmen, Hubei , China; 3 College of Horticulture & Forestry Sciences, Huazhong Agricultural University, Wuhan , China) Abstract: Objective The present study was conducted to screen in vitro propagation condition for Vaccinium spp. Sunshine Blue in order to establish a rapid propagation system for blueberry Sunshine Blue. Method In this experiment, using Sunshine Blue s aseptic seedling stems as explants, proper medium, initial shoot number, cytokinins, auxins, ph value and activated carbon(ac) content which were suitable for shoot proliferation and rooting were screened. Result At shoot proliferation stage,the stems cultured in WPM medium had the largest number of proliferation shoots and the average shoot length was long after 60 days of culture. Therefore, WPM medium could be used as a proper medium for stem prolif 鄄 eration. Inoculating the stems with two initial shoots into WPM+2.0 mg/l ZT+0.01 mg/l IBA medium, the number of pro 鄄 liferation shoots was after 30 days of culture, significantly more than those in other media(p<0.05); the number reached after 60 days of culture, which was more than those in other media. At rooting stage,the stems cultured in medium with 0.10 mg/l IBA auxin, mg/l activated carbon realized 87.5% rooting rate after 90 days of culture, which was higher than those cultured in other media. Conclusion In terms of in vitro propagation of Vaccinium spp. Sun 鄄 shine Blue stems with two initial shoots, the optimal medium for shoot proliferation is WPM+2.0 mg/l ZT+0.01 mg/l IBA, the most appropriate rooting medium is 1/2WPM+0.10 mg/l IBA mg/l AC. Key words: Vaccinium spp.; Sunshine Blue; in vitro propagation; condition screening 0 引言研究意义蓝莓 (Vaccinium spp.) 又名越橘蓝浆果, 为杜鹃花科 (Ericaceae) 乌饭树 ( 越橘 ) 属 (Vaccinium) 多年生落叶灌木, 其果实富含花色素苷黄酮等生收稿日期 : 基金项目 : 国家科技支撑计划项目 (GYHY ) 作者简介 :* 为通讯作者, 周志翔 (1963-), 教授, 博士生导师, 主要从事景观生态与森林生态研究工作, whzhouzx@126. com 范淑芳 (1977-), 主要从事植物种子资源开发与利用研究工作, fsf03@163.com

2 1898 南方农业学报 47 卷理活性成分, 具有增强心脏功能明目及抗癌等独特功效 (Bliss,2002;Atalay et al.,2003; 周剑忠等,2014), 能有效预防脑神经衰老及糖尿病等疾病发生 ( 杨红澎和蒋与刚,2010) 蓝莓是美国主栽果树品种 ( 於虹和贺善安,2013), 近年来在我国得到迅速发展, 已成为我国最具发展潜力的果树品种之一, 种苗供不应求 ( 饶宝蓉等,2014) 通过组织培养和脱毒技术育苗可比常规方法育苗获得更多更健壮的种苗, 但蓝莓品种间差异较明显, 组织培养过程中所使用的基本培养基各不相同阳光蓝 (Sunshine Blue) 作为国内新引进的优良蓝莓品种 ( 叶振风等,2015), 其离体繁殖的最佳培养条件尚未清楚因此, 筛选适合阳光蓝离体繁殖的条件, 建立其组培快繁体系, 对实现其工厂化育苗具有重要意义前人研究进展在蓝莓增殖培养过程中生长素的应用必不可少 Line 等 (1990) 使用 IAA Cao 和 Hammerschlag(2000) 使用 NAA 邵振中和吴晓波 (2013) 使用 IBA 均取得了较好的增殖效果董朝莉 (2009) 研究认为, 细胞分裂素的种类和浓度对蓝莓离体增殖培养影响较明显, 加入 1.0~2.0 mg/l ZT 或 10.0~20.0 mg/l 2ip 增殖效果较佳在蓝莓试管苗生根培养方面, 以 1/2WPM 为培养基添加不同浓度 IBA 在不同蓝莓品种上均取得了较好的生根效果 ( 孙书伟,2009; 约旦等,2011; 张彩玲和朱延明,2011; Zhao et al.,2011; 杨艳敏等,2012; 邵振中和吴晓波, 2013); 王平红 (2010) 研究发现, 在培养基中添加 1%~2% 活性炭有利于诱导蓝莓生根, 但当活性炭用量超过 2% 时生根率反而下降 ; 梁晓晶 (2012) 研究认为, ph 对笃斯越橘组培苗的生根率具有显著影响, 最佳生根培养基的 ph 为 4.8~6.0 本研究切入点目前, 针对阳光蓝离体繁殖的研究鲜见报道拟解决的关键问题以阳光蓝茎段为外植体, 探讨不同培养基不同茎段起始芽数不同激素浓度不同 ph 及活性炭用量等对其不定芽增殖分化生根培养的影响, 旨在建立阳光蓝的组培快速繁体系, 为其种苗的工厂化生产提供技术支持 1 材料与方法 1. 1 试验材料剪取阳光蓝当年生新枝为外植体, 在初培培养基 (Anderson+10.0 mg/l 2ip+0.10 mg/l IAA+30.0 g/l 蔗糖 +8.0 g/l 琼脂,pH 5.0) 中培养 30~60 d, 视丛生芽诱导情况, 将丛生苗切成 0.8~1.0 cm 长的茎段后接种到继代培养基 (Anderson+15.0 mg/l 2ip+0.10 mg/l IAA g/l 蔗糖 +8.0 g/l 琼脂,pH 5.0) 中, 每 60 d 继代 1 次, 继代培养 2~3 次获得的组培苗用于增殖培养 1. 2 试验方法增殖培养基类型及培养条件优选采用单因素设计, 分别开展增殖培养基类型茎段起始芽数细胞分裂素生长素优选试验从上述试验结果中选择最佳因子, 进行细胞分裂素和生长素双因素设计, 开展不同激素组合优选试验每组试验均选取生长一致的丛生苗, 在超净工作台上切成长 0.5~1.5 cm 的小茎段 ( 每组小茎段长度保持相对一致 ), 每瓶接种 4 株,10 次重复接种后置于培养室, 分别培养 30 和 60 d 后记录丛生芽数量和计算平均芽长增殖培养基类型优选在前期试验的基础上, 分别在 MS WPM 和 Anderson 培养基中添加 15.0 mg/l 2ip 和 0.10 mg/l IAA, 同时添加 30.0 g/l 蔗糖和 8.0 g/l 琼脂,pH 调至 5.0, 筛选出增殖效果最优的基本培养基增殖茎段起始芽数的优选将无菌苗分别切成带个腋芽的茎段和带顶芽的 8 芽茎段, 分别接种至 Anderson+15.0 mg/l 2ip+0.10 mg/l IAA g/l 蔗糖 +8.0 g/l 琼脂培养基上,pH 调至 5.0, 筛选出最适增殖培养的茎段起始芽数增殖细胞分裂素优选在 Anderson+0.10 mg/l IAA+30.0 g/l 蔗糖 +8.0 g/l 琼脂培养基的基础上, 分别添加和 20.0 mg/l 2ip, 或和 1.5 mg/l ZT, 或和 1.50 mg/l 6-BA,pH 调至 5.0, 共组成 9 个处理, 筛选出增殖效果最优的细胞分裂素增殖生长素优选在 Anderson+15.0 mg/l 2ip+30.0 g/l 蔗糖 +8.0 g/l 琼脂培养基的基础上, 分别添加和 0.20 mg/l 的 IAA NAA 和 IBA,pH 调至 5.0, 共组成 9 个处理, 筛选出增殖效果最优的生长素增殖激素处理组合优选根据以上单因素试验结果, 以 WPM 为基本培养基, 分别添加和 3.0 mg/l ZT 及和 0.25 mg/l IBA, 另外添加 30.0 g/l 蔗糖和 8.0 g/l 琼脂,pH 调至 5.0, 采用完全随机试验法组成 9 个处理, 筛选出增殖效果最佳的激素处理组合生根培养基确定及培养条件优选结合前期试验和增殖培养试验结果, 生根培养的基本培养基确定为 1/2WPM 采取单因素设计, 分别开展生长素 ph 活性炭 (AC) 浓度优选试验每组试验均选取生长一致的丛生苗, 在超净工作台上切成长 2.0~2.5 cm 的小茎段 ( 每组小茎段长度保持相对一致 ), 每瓶接种 4 株, 10 次重复接种后置于培养室,90 d 后记录生根株数每株生根条数并计算平均根长生根 ph 优选以 1/2WPM+0.50 mg/l IBA g/l 蔗糖 +8.0 g/l 琼脂为生根培养基, 将 ph 分别调至和 6.0, 筛选出诱导生根效果最佳的 ph

3 11 期范淑芳等 : 蓝莓品种阳光蓝离体繁殖条件的筛选生根生长素优选在 1/2WPM 培养基中分别添加和 1.00 mg/l 的 IAA NAA 和 IBA, 同时添加 20.0 g/l 蔗糖 8.0 g/l 琼脂,pH 调至 5.0, 共组成 9 个处理, 筛选出诱导生根效果最佳的生长素生根 AC 优选在 1/2WPM mg/l IBA+20.0 g/l 蔗糖 +8.0 g/l 琼脂的培养基中分别添加 0 (CK) 和 mg/l AC, 筛选出诱导生根效果最佳的 AC 浓度 1. 3 其他培养条件设培养室温度为 (25±2) 相对湿度 70% 光照度 2000 lx, 每天光照 14 h 1. 4 统计分析试验数据以 Excel 2003 和 SAS 9.2 进行统计分析 2 结果与分析 2. 1 不同基本培养基及培养条件对阳光蓝茎段的增殖效果不同基本培养基的增殖效果由表 1 可知, 阳光蓝茎段在 MS WPM 和 Anderson 3 种基本培养基中均能进行增殖培养, 但增殖效果差异较明显在增殖培养 30 和 60 d 时, 阳光蓝茎段在 WPM 培养基中的增殖芽数均最多, 分别为 4.75 和个, 显著多于 MS 和 Anderson 培养基 (P<0.05, 下同 ); 培养 30 d 时, 阳光蓝茎段在 MS 培养基中的平均芽长最长, 显著长于 WPM 培养基, 培养 60 d 时仍以 MS 培养基中的平均芽长最长, 但与 WPM 和 Anderson 培养基的差异不显著 (P>0.05, 下同 ) 综合考虑, 确定 WPM 培养基是最有利于阳光蓝茎段增殖培养的基本培养基不同起始芽数茎段的增殖效果由表 2 可知, 表 1 阳光蓝茎段在 3 种基本培养基中的增殖效果比较 Table 1 Proliferation effects comparison of Sunshine Blue stems in three basic media 基本增殖芽数 ( 个 ) 平均芽长 (cm) 培养基 Number of Average length Basic proliferation shoots of shoots medium 30 d 60 d 30 d 60 d MS 1.88±0.11c 4.21±0.27c 0.63±0.04a 1.39±0.18 WPM 4.75±0.29a 12.88±0.47a 0.50±0.01b 1.31±0.07 Anderson 3.42±0.22b 9.75±0.48b 0.56±0.02ab 1.29±0.08 同列数据后不同小写字母表示差异显著 (P<0.05) 下同 Different lowercase alphabets in the same column represented significant difference(p<0.05). The same was applied in subsequent tables 随着阳光蓝茎段起始芽数的增多, 培养 60 d 的增殖芽数及培养 30 和 60 d 的单芽增殖芽数均逐渐减少其中, 在增殖培养 30 d 时, 起始芽数为 2 芽茎段的增殖芽数最少, 起始芽数为 4 芽茎段次之, 二者差异不显著, 但均显著少于起始芽数为 6 和 8 芽 ( 含顶芽 ) 茎段, 培养至 60 d 时, 起始芽数为 2 芽茎段的增殖芽数最多,4 芽茎段次之, 与 6 和 8 芽茎段差异不显著 ; 在增殖培养 30 和 60 d 时, 起始芽数为 2 芽茎段平均单芽的增殖芽数分别为 1.99 和 5.14 个, 均显著多于其他起始芽数茎段由表 2 还可看出, 在增殖培养 30 d 时, 起始芽数为 2 芽茎段的平均芽长除显著短于起始芽数为 4 芽茎段外, 与其他起始芽数茎段差异均不显著, 在增殖培养 60 d 时, 起始芽数为 2 芽茎段的平均芽长除显著短于起始芽数为 8 芽 ( 含顶芽 ) 茎段外, 与其他起始芽数茎段差异也不显著综合考虑, 起始芽数为 2 芽的茎段增殖芽数最多最节约起始材料, 可确定 2 个芽为最适合阳光蓝茎段增殖培养的起始芽数表 2 不同起始芽数阳光蓝茎段的增殖效果比较 Table 2 Comparison of proliferation effects of Sunshine Blue stems with different initial shoot number 起始芽数 ( 个 ) 增殖芽数 ( 个 ) 单芽增殖芽数 ( 个 ) 平均芽长 (cm) Initial shoot Number of proliferation shoots Number of proliferation shoots of each bud Average shoot length number 30 d 60 d 30 d 60 d 30 d 60 d ±0.25b 10.28± ±0.13a 5.14±0.52a 0.54±0.01b 0.99±0.03b ±0.32b 9.69± ±0.08b 2.43±0.16b 0.58±0.02a 1.03±0.03ab ±0.44a 9.58± ±0.07bc 1.60±0.12c 0.54±0.01b 1.04±0.03ab ±0.30a 9.25± ±0.04c 1.16±0.09c 0.56±0.00ab 1.08±0.02a 8( 含顶芽 ) 5.17±0.24a 8.42± ±0.03c 1.05±0.08c 0.55±0.01b 1.06±0.03ab 不同细胞分裂素的增殖效果由表 3 可知, 在增殖培养 30 d 时, 添加 1.5 mg/l ZT 培养基的阳光蓝茎段增殖芽数最多, 为 5.13 个, 显著多于其他 8 个处理 ; 至增殖培养 60 d 时, 仍以添加 1.5 mg/l ZT 培养基的增殖芽数最多, 为个, 除与添加 20.0 mg/l 2ip 培养基的增殖芽数差异不显著外, 均显著多于其他 7 个处理 ; 在添加 2ip ZT 及 6-BA 的各处理中, 增殖芽数均随添加浓度的升高而增多从表 3 还可看出, 在增殖培养 30 和 60 d 时, 添加不同浓度 ZT 培养基的阳光蓝茎段平均芽长均显著长于添加 2ip 培养基的芽长, 且各浓度处理平均芽长多数长于 6-BA 处理或与 6-BA 处理相当综合考虑增殖芽数和芽长表现认为, 添加较高浓度细胞分裂素更有利于阳光蓝茎段的增殖培养, 尤以添加 1.5 mg/l ZT 的增殖效果更佳不同生长素的增殖效果由表 4 可知, 阳光蓝茎段的增殖芽数均随着 IAA IBA 和 NAA 浓度的升高而减少 ; 同种生长素均以低浓度更有利于阳光蓝茎段腋芽增殖其中, 在添加 NAA 的处理中,0.10 和 0.20

4 1900 南方农业学报 47 卷表 3 不同细胞分裂素对阳光蓝茎段苗的增殖效果比较 Table 3 Comparison of proliferation effects of different cytokinins 细胞增殖芽数 ( 个 ) 平均芽长 (cm) 分裂素 Number of Average length Cytokinin proliferation shoots of shoots 30 d 60 d 30 d 60 d 10.0 mg/l 2ip 2.63±0.14d 8.71±0.45bc 0.57±0.04d 0.91±0.03d 15.0 mg/l 2ip 3.46±0.25c 9.50±1.64bc 0.49±0.02d 0.84±0.04d 20.0 mg/l 2ip 3.67±0.30bc 11.08±1.33ab 0.48±0.01d 0.82±0.02d 0.5 mg/l ZT 3.46±0.37c 7.58±1.16c 1.04±0.03a 2.38±0.18ab 1.0 mg/l ZT 4.29±0.34b 10.88±0.31b 0.89±0.04b 2.15±0.12bc 1.5 mg/l ZT 5.13±0.42a 13.50±0.59a 0.70±0.03c 1.82±0.08c 0.50 mg/l 6-BA 1.42±0.17e 1.21±0.10e 0.78±0.06c 2.66±0.42a 1.00 mg/l 6-BA 1.63±0.19e 2.13±0.54de 0.71±0.04c 2.15±0.20bc 1.50 mg/l 6-BA 3.29±0.29cd 4.46±0.42d 0.55±0.02d 1.09±0.06d mg/l NAA 处理容易诱导产生大量愈伤组织, 或刚开始可诱导产生少量芽丛, 但随后愈伤组织生长速度明显快于芽丛, 最终导致芽丛趋于死亡 ( 各组数据记为 0.00) 由表 4 还可看出, 在增殖培养 60 d 时, 添加不同浓度 IBA 处理的芽长总体上略长于添加相应浓度 IAA 处理的芽长, 且个别处理差异达显著水平综合考虑增殖芽数和芽长表现认为,0.05~0.10 mg/l IBA 可作为蓝莓茎段增殖培养较佳的生长素不同激素组合的增殖效果由表 5 可知, 当 ZT 浓度一定时, 随着 IBA 浓度的升高, 阳光蓝茎段的增殖芽数逐渐减少, 而芽长逐渐增长 ; 当 IBA 浓度一定时, 随着 ZT 浓度的升高, 阳光蓝茎段的增殖芽数呈先表 4 不同生长素对阳光蓝茎段苗的增殖效果比较 Table 4 Comparison of proliferation effects of different auxins 生长素增殖芽数 ( 个 ) 平均芽长 (cm) Auxin Number of Average length proliferation shoots of shoots 30 d 60 d 30 d 60 d 0.05 mg/l IAA 3.83±0.40ab 11.17±0.94a 0.56±0.01abc 0.87±0.01d 0.10 mg/l IAA 3.21±0.15bc 9.83±0.95abc 0.57±0.03abc0.92±0.02bcd 0.20 mg/l IAA 2.83±0.20c 8.29±1.08bc 0.60±0.02ab 0.99±0.04abc 0.05 mg/l IBA 4.04±0.33a 11.42±1.08a 0.55±0.02bc 0.97±0.01bc 0.10 mg/l IBA 3.29±0.24abc 11.17±1.16a 0.58±0.04abc 1.01±0.07ab 0.20 mg/l IBA 2.00±0.20d 7.92±0.84c 0.62±0.02a 1.07±0.04a 0.05 mg/l NAA 3.20±0.35bc 10.75±1.05ab 0.53±0.01c 0.90±0.02cd 0.10 mg/l NAA 1.96±0.29d 0.00±0.00d 0.55±0.03bc 0.00±0.00e 0.20 mg/l NAA 0.00±0.00e 0.00±0.00d 0.00±0.00d 0.00±0.00e 上升后下降趋势, 芽长呈逐渐降低趋势在增殖培养 30 d 时,2.0 mg/l ZT+0.01 mg/l IBA 组合阳光蓝茎段的增殖芽数最多, 为个, 显著多于其他激素组合, 但芽长较短, 仅 0.70 cm; 在增殖培养 60 d 时, 各激素组合的增殖芽数均明显增加, 仍以 2.0 mg/l ZT+0.01 mg/l IBA 组合的增殖芽数最多, 显著多于除 2.0 mg/l ZT+0.05 mg/l IBA 和 3.0 mg/l ZT+0.01 mg/l IBA 组合外的其他激素组合, 芽长为 1.57 cm, 与多数激素组合差异不显著综合考虑增殖芽数和芽长表现, 可确定 2.0 mg/l ZT+0.01 mg/l IBA 为阳光蓝茎段增殖培养较佳的激素组合表 5 不同激素组合对阳光蓝茎段苗的增殖效果比较 Table 5 Comparison of proliferation effects of different hormone combinations 激素组合增殖芽数 ( 个 )Number of shoots proliferation 平均芽长 (cm)average length of shoots Hormone combination 30 d 60 d 30 d 60 d 1.0 mg/l ZT+0.01 mg/l IBA 5.89±0.22cde 13.50±1.84b 1.03±0.05ab 1.62±0.13b 1.0 mg/l ZT+0.05 mg/l IBA 5.07±0.40e 12.57±0.95b 1.13±0.03a 1.80±0.12ab 1.0 mg/l ZT+0.25 mg/l IBA 4.71±0.63e 11.61±1.43b 1.16±0.07a 2.16±0.24a 2.0 mg/l ZT+0.01 mg/l IBA 10.25±0.65a 17.43±1.52a 0.70±0.05cd 1.57±0.18b 2.0 mg/l ZT+0.05 mg/l IBA 8.04±0.63b 14.21±1.44ab 0.83±0.10bc 1.70±0.17b 2.0 mg/l ZT+0.25 mg/l IBA 7.39±1.08bc 12.96±0.89b 0.90±0.11bc 1.89±0.16ab 3.0 mg/l ZT+0.01 mg/l IBA 7.75±0.29b 14.29±0.60ab 0.61±0.03d 1.53±0.10b 3.0 mg/l ZT+0.05 mg/l IBA 6.25±0.50bcd 13.21±1.06b 0.73±0.09cd 1.67±0.14b 3.0 mg/l ZT+0.25 mg/l IBA 5.46±0.71de 12.43±1.12b 0.79±0.07cd 1.76±0.10ab 2. 2 不同培养条件对阳光蓝茎段增殖苗的生根效果不同 ph 的生根效果由表 6 可知, 在 1/2WPM 培养基中, 不同 ph 对阳光蓝茎段增殖苗的生根率平均生根数和根长均有明显影响, 当培养基 ph 为 4.5 和 5.0 时生根率较高, 平均生根数较多, 根长较长, 且均显著高于 ph 为 5.5 和 6.0 的培养基因此, 可确定 4.5~5.0 为适宜阳光蓝茎段增殖苗生根培养的 ph 不同生长素的生根效果由表 7 可知, 在 1/2WPM 培养基中,0.10 mg/l IBA IAA 和 NAA 处理阳光蓝茎段增殖苗的生根率平均生根数和根长均较高, 三者间差异不显著, 但明显优于其他浓度生长素处理其表 6 不同 ph 对阳光蓝茎段增殖苗的生根效果比较 Table 6 Comparison of rooting effects of different ph values ph 生根率 (%) 平均生根条数平均根长 (cm) Rooting Average rooting Average root rate number length ±0.11a 3.03±0.77a 0.95±0.21a ±0.06a 3.33±0.30a 1.19±0.11a ±0.10b 0.93±0.46b 0.32±0.15b ±0.05b 0.71±0.23b 0.07±0.07b 中,0.10 mg/l IBA 处理阳光蓝茎段增殖苗的生根率最高, 平均生根数最多, 平均根长最长, 可确定为蓝莓茎段增殖苗生根培养较佳的生长素

5 11 期范淑芳等 : 蓝莓品种阳光蓝离体繁殖条件的筛选 1901 表 7 不同生长素对阳光蓝茎段增殖苗的生根效果比较 Table 7 Comparison of rooting effects of different auxins on Sunshine Blue stems 生长素生根率 (%) 平均生根条数平均根长 (cm) Auxin Rooting Average rooting Average root rate number length 0.10 mg/l IBA 69.4±0.09a 3.69±0.40a 1.29±0.18a 0.50 mg/l IBA 58.3±0.10a 3.08±0.64abc 0.97±0.19ab 1.00 mg/l IBA 44.4±0.08ab 1.75±0.44cd 0.64±0.10bc 0.10 mg/l IAA 61.1±0.15a 3.36±0.85ab 1.04±0.25ab 0.50 mg/l IAA 47.2±0.11ab 2.22±0.54abc 0.77±0.19ab 1.00 mg/l IAA 38.9±0.13ab 1.69±0.59cd 0.67±0.20bc 0.10 mg/l NAA 58.3±0.09a 2.97±0.33abc 0.94±0.16ab 0.50 mg/l NAA 41.7±0.13ab 1.92±0.55bcd 0.63±0.18bc 1.00 mg/l NAA 11.1±0.08b 0.58±0.43d 0.20±0.15c 不同浓度 AC 的生根效果由表 8 可知, 在 1/2WPM 培养基中添加不同浓度 AC 均有利于阳光蓝茎段增殖苗生根, 随着 AC 浓度的增加其生根率平均生根条数和根长均明显增加其中, 添加 mg/l AC 处理的生根率最高, 为 87.50%, 显著高于 0 和 mg/l 处理 ; 根长最长, 为 1.69 cm, 显著长于和 mg/l 处理 ; 平均生根条数最多, 为 3.83 条因此, 可确定添加 mg/l AC 较有利于阳光蓝茎段增殖苗生根表 8 不同浓度 AC 对阳光蓝茎段增殖苗的生根效果比较 Table 8 Comparison of rooting effects of different AC concentration AC 浓度 (mg/l) 生根率 (%) 平均生根条数平均根长 (cm) AC Rooting Average rooting Average root concentration rate number length ±0.11b 2.78± ±0.20b ±0.08b 3.28± ±0.16b ±0.10ab 3.53± ±0.16b ±0.04a 3.83± ±0.16a 3 讨论本研究结果表明,MS Anderson 和 WPM 3 种基本培养基均可应用于蓝莓品种阳光蓝的增殖培养, 以 WPM 培养基的增殖培养效果更佳, 与 Wolfe 等 (1983) 的研究结果相同, 也与当前蓝莓组培生产或研究中多应用 WPM 培养基或改良 WPM 培养基为增殖培养基的情况相符 ( 约旦等,2011; 张彩玲和朱延明,2011; 杨艳敏等,2012; 邵振中和吴晓波,2013) 针对不同起始芽数茎段对增殖效果影响的研究至今未见报道在本研究中, 随着阳光蓝茎段起始芽数的增多, 总的增殖芽数逐渐增加, 但对单芽增殖芽数而言, 起始芽数为 4 6 和 8 芽茎段的增殖芽数比起始芽数为 2 芽茎段的增殖芽数少, 平均芽长总体上相差不明显, 说明起始芽数少的茎段增殖效果更佳, 可能是由于起始芽数多的茎段中激素或营养物质输送受阻, 致使茎段基部的芽较上部的芽更容易萌发增殖, 而茎段上部的芽萌发少或完全不能萌发增殖就实际生产而言, 若用芽数更少的茎段就能达到与芽数较多茎段相同的增殖效果, 既可节约外植体, 又减少操作工时, 提高扩繁效率本研究结果表明, 细胞分裂素 ZT 处理的阳光蓝茎段增殖效果优于 2ip 处理, 与董朝莉 (2009) 研究认为 1.0~2.0 mg/l 的 ZT 或 10~20 mg/l 2ip 对蓝莓增殖效果较好的观点相似在本研究中,0.05 mg/l IBA IAA 和 NAA 配合细胞分裂素均可有效促进阳光蓝茎段增殖, 以 IBA 配合细胞分裂素的增殖效果略优于 IAA, 与 Litwin czuk 和 Wadas(2008) 对蓝莓的增殖培养结果一致 ; 稍高浓度 (0.10 和 0.20 mg/l)naa 处理阳光蓝茎段会产生大量的愈伤组织并萌生丛生芽, 且丛生芽不能正常生长, 与宁志怨等 (2007 对蓝莓的研究结果存在差异, 可能与进行组培增殖所用品种不同有关 ; 在不同激素组合筛选试验中,ZT 的浓度不是越高越好, 以 2.0 mg/l ZT+0.01 mg/l IBA 组合的增殖效果最佳, 与邵振中和吴晓波 (2013) 的研究结果一致在本研究中, 低浓度 (0.10 mg/l)iba 诱导生根效果较佳, 与宋刚等 (2011) 王淑珍等(2011) 的研究结果一致, 但 0.10 mg/l 为本研究设计的最低使用浓度, 更低浓度 IBA 的生根效果是否更佳, 有待进一步探究证实 ; 在 ph 对生根影响方面,pH 为 4.5~5.0 培养基的诱导生根效果较佳, 与梁晓晶 (2012) 对笃斯越橘的研究结果相似 ; 在生根培养基中添加 mg/l AC 最有利于阳光蓝生根, 生根率达 87.50%, 与王平红 (2010) 对蓝莓生根的研究结果一致, 但 mg/l AC 为本研究设计的最高浓度, 更高浓度 AC 的生根效果是否更佳, 也有待进一步证实 4 结论本研究结果表明, 以蓝莓品种阳光蓝带 2 个腋芽的组培苗茎段进行离体繁殖, 其最佳增殖培养基为 WPM+2.0 mg/l ZT+0.01 mg/l IBA, 最佳生根培养基为 1/2WPM+0.1 mg/l IBA mg/l AC 参考文献 : 董朝莉蓝莓芽诱导与再生研究 [J]. 广西农业科学,40 (3): Dong C L Induction and regeneration of blueberry buds [J]. Guangxi Agricultural Sciences,40(3): 梁晓晶笃斯越橘离体培养及植株再生研究 [D]. 哈尔滨 : 东北农业大学. Liang X J Research on in vitro culture and plantlet regeneration of Vaccinium uliginosum[d]. Harbin:Northeast Agricultural University. 宁志怨, 江芹, 陈静娴, 廖华俊, 董玲蓝莓丛生芽的诱导及植株再生 [J]. 分子植物育种,5(6):64-66.

6 1902 南方农业学报 47 卷 Ning Z Y,Jiang Q,Chen J X,Liao H J,Dong L Induction and regeneration of multiple bud of blueberry[j]. Molecular Plant Breeding,5(6): 饶宝蓉, 陈泳和, 江文清, 林明, 刘忠辉蓝莓夏普蓝组培苗繁殖技术研究 [J]. 江西农业学报,26(10): Rao B R,Chen Y H,Jiang W Q,Lin M,Liu Z H Research on propagation of tissue-culture seedlings of blue - berry Xiapulan [J]. Acta Agriculturae Jiangxi,26(10): 邵振中, 吴晓波兔眼蓝莓丛芽诱导及生根研究 [J]. 安徽农业科学,41(1): Shao Z Z,Wu X B Study on adventitious buds induction and rooting of Vaccinium ashei[j]. Journal of Anhui Agricultural Sciences,41(1): 宋刚, 徐银, 宋金耀, 黄小忠, 谢正林蓝莓试管苗不定根的诱导研究 [J]. 江苏农业科学,39(6): Song G,Xu Y,Song J Y,Huang X Z,Xie Z L Study on adventitious root induction of test -tube seedlings of blueberry[j]. Jiangsu Agricultural Sciences,39(6): 孙书伟蓝莓组培苗瓶内生根的探讨 [J]. 湖北农业科学,48(4): Sun S W Study on root taking I of Semen trigonellae tissue culture seedling in the bottles[j]. Hubei Agricultural Sciences,48(4): 王平红活性炭对蓝莓组培苗生根的影响 [J]. 安徽农业科学,38(22): Wang P H Effect of activated carbon on rooting of tissuecultured seedlings of blueberry[j]. Journal of Anhui Agricultural Sciences,38(22): 王淑珍, 来文国, 周历萍, 马华升南高丛蓝莓组培再生技术研究 [J]. 现代农业科技,(21): Wang S Z,Lai W G,Zhou L P,Ma H S Regeneration of southern high-bush blueberry[j]. Modern Agricultural Sciences and Technology,(21): 杨红澎, 蒋与刚蓝莓的活性成分吸收代谢及其神经保护作用研究进展 [J]. 卫生研究,39(4): Yang H P,Jiang Y G Research progress of bioactive constituents,absorption,metabolism,and neuroprotective effects from blueberry[j]. Journal of Hygiene Research,39(4): 杨艳敏, 陶承光, 魏永祥, 王兴东, 刘成, 魏鑫, 杨玉春, 王莉, 张舵蓝莓组织培养工厂化育苗技术 [J]. 北方园艺,(7): Yang Y M,Tao C G,Wei Y X,Wang X D,Liu C,Wei X,Yang Y C,Wang L,Zhang D Tissue culture and commercial micropropagation of blueberry[j]. Northern Horticulture,(7): 叶振风, 樊基胜, 贾兵, 樊胜华, 衡伟, 刘普, 刘莉, 朱立武蓝莓新品种皖引阳光蓝的选育 [J]. 中国果树, (4):8-9. Ye Z F,Fan J S,Jia B,Fan S H,Heng W,Liu P,Liu L,Zhu L W Blueberry varieties breeding Sunshine Blue-lead Anhui[J]. China Fruits,(4):8-9. 约旦茨韦特科夫, 赵燕丽, 王春, 董宣, 杨帆引进国外蓝莓品种的组织培养及快繁技术研究 [J]. 黑龙江农业科学,(6):6-8. Yordan T,Zhao Y L,Wang C,Dong X,Yang F Study on the techniques of tissue culture and rapid propagation of introduced foreign blueberry varieties[j]. Heilongjiang Agricultural Sciences,(6):6-8. 於虹, 贺善安世界的蓝莓产业及研究现况 [J]. 落叶果树,45(3): Yu H,He S A Fundamental study of the blueberry industry and research in the world[j]. Deciduous Fruits,45(3): 张彩玲, 朱延明矮丛蓝莓再生体系的建立 [J]. 农业科技通讯,(9): Zhang C L,Zhu Y M Establishment of regeneration system of lowbush blueberry[j]. Bulletin of Agricultural Science and Technology,(9): 周剑忠, 陆卿卿, 刘小莉, 王英, 张丽霞, 黄自苏辅色处理对蓝莓汁色泽稳定性及抗氧化活性的影响 [J]. 江西农业学报,26(10): Zhou J Z,Lu Q Q,Liu X L,Wang Y,Zhang L X,Huang Z S Influences of copigment treatment on color stability and antioxidant activity of blueberry juice[j]. Acta Agriculturae Jiangxi,26(10): Atalay M,Gordillo G,Roy S,Rovin B,Bagchi D,Bagchi M,Sen C K Anti -angiogenic property of edible berry in a model of hemangioam[j]. FEBS Letters,544(1): Bliss R M Building a better blueberry[j]. Agricultural Research,509(11): Cao X,Hammerschlag F A Improved shoot organogenesis from leaf explants of highbush blueberry[j]. Hortscience, 35(5): Line B,Laurence T,Daniel L Micropropagation of lowbush blueberry from mature field-grown plants[j]. Hortscience,25 (3): Litwin czuk W,Wadas M Auxin-dependent development and habituation of highbush blueberry(vaccinium covilleanum But. et Pl.) Herbert in vitro shoot cultures[j]. Scientia Horticulturae,119(1): Wolfe D E,Eck P,Chin C K Evaluation of seven media for micropropagation of highbush blueberry[j]. Hort - science,18(5): Zhao X,Zhan L,Zou X In vitro high-frequency regeneration of half-highbush Northland blueberry[j]. Newzealand Journal of Crop and Horticultural Science,39(1): ( 责任编辑思利华 )

福建农业学报材料与方法外植体无菌株系的建立启动培养增殖培养继代培养生根培养瘤状苗的细胞学观察

福建农业学报材料与方法外植体无菌株系的建立启动培养增殖培养继代培养生根培养瘤状苗的细胞学观察福建农业学报邓素芳杨旸赖钟雄福建农业学报材料与方法外植体无菌株系的建立启动培养增殖培养继代培养生根培养瘤状苗的细胞学观察邓素芳等朱砂根成年茎段的离体培养研究结果与分析福建农业学报第3期邓素芳等: 朱砂根成年茎段的离体培养研究带空洞, 无法观察图1 朱砂根成年茎段的离体繁殖 Fig 1 I n vitro propagation of A crenata 图 2