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1 全省室间质评统计结果总结 - 临床微生物学和尿常规 河北医大二院 李继红

2 参考结果 热带假丝酵母菌 Candida tropicalis 猪霍乱沙门菌 Salmonellacholeraesuis 卡他布兰汉菌 Moraxella catarrhalis 金黄色葡萄球菌 Staphylococcus aureu 溶血不动杆菌 Acinetobacter haemolyticus

3 临床微生物学数据分析 本次室间质评全省一共 229 家单位参加, 其中 130 家参加临床微生物学检测活动, 有效回报 109 家 通过 89 家, 通过率 81.65%

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5 0801 号标本 阿萨希毛孢子菌 各实验室汇报结果 : 热带念珠菌 克柔假丝酵母菌 马尔尼菲青霉菌 阿沙毛孢子菌 隐球菌

6 原属皮肤毛孢子菌 为酵母样真菌, 目 前认为该菌为条件致病菌, 多造成移植患者 血液病 恶性肿瘤 免疫缺陷 白细胞减少 症等患者的系统播散性感染 同时, 该菌极 易在医院内广泛使用的生物材料如导尿管 尿袋 呼吸机导管等表面黏附并形成生物膜 近些年检出率出现上升的态势

7 年我院阿萨希毛孢子菌检出情况 时间分离株标本 (n) 是否使用介入治疗 2006 年 2 尿 (2) 是 2007 年 5 尿 (2) 是 痰 (3) 是 2008 年 8 尿 (3) 是 痰 (5) 是

8 阿萨希毛孢子菌 37 培养 24h, 血琼脂 平板生长出白色 干燥干燥 边缘不整齐, 触之 易碎的菌落, 继续培养至 72 小时, 表面皱褶 较明显 转种法国科玛嘉显色培养基 37 培 养 24h 后生长呈绿色显色, 与白色假丝酵母 菌的呈色易混淆的呈易, 但菌落较之干燥

9 图 2 血琼脂平板生长 1 天 BA 生长 1 天

10 BA 生长 2 天

11 图 4 血琼脂平板生长 7 天

12 图 3 沙氏培基生长 1 天

13 MAC 生长 3 天

14 CA 板生长显色情况

15 革兰染色后镜检可见大量菌丝 节 孢子和多种形状的小分生孢子, 菌丝分枝 分隔粗细不等, 节孢子数目不等 长短 不一, 每一节孢子多呈矩形, 椭圆型 提 示可疑毛孢子菌属, 进一步鉴定和确认

16 镜下形态 ( 1000)

17 生化反应 API20C AUX

18 0802 号标本 德比沙门氏菌 45 家实验室正确 报告,22 家报告为沙门菌属 该菌的血清型为沙门菌属的 B 群, 此菌抗 原 O4:H(gf) ) 凝集 报告乙型副伤寒沙门 菌同是 B 群,O 抗原相同, 但 H 抗原不同, 为 Hb; 肠 炎沙门菌和伤寒沙门菌同属 D 群,O 抗原是 9,12, 不应该混淆, 诊断血清的准备及是否在效期内 是这次鉴定的重点

19 各实验室汇报结果 甲型副伤寒沙门氏菌猪霍乱沙门氏菌肠炎沙门氏菌伤寒沙门氏菌 A 群 C 群 D 群 D 群

20 0803 号标本 卡他莫拉菌

21 概述 卡他莫拉菌 (moraxella catarrhalis,mc) 为革兰阴性双球菌, 原属奈瑟菌属 (Neisseria ca tarrhalis,nc),catlin 在 1970 年将此菌分类为布兰汉菌属 (Branhamella Cararrhalis,BC), 1984 年在伯杰分类细菌学手册中被列为莫拉菌属的布兰汉亚属 (Subgenus Branhamella)

22 MC 上人类上呼吸道的常居菌种, 为条件致病菌, 该菌可引起人类的多种感染, 引起眼结膜炎 气管炎 肺炎 脑膜炎 脑脓肿 心包炎 心内膜炎及泌尿生殖系统炎症可累及全身, 国外资料显示,MC 在成人下呼吸道感染及儿童肺炎 中耳炎等标本中的分离率, 仅次于流感嗜血杆菌和肺炎链球菌列为第三位, 因此, 快速鉴定卡他莫拉菌具有重要的临床意义

23 分 类 医学上重要的莫拉菌有 : 腔隙莫拉菌 (M. lacunata) 卡他莫拉菌 (M.catarrhalis) 非液化莫拉菌 (M. nonliquefaciens) 奥斯陆莫拉菌 (M. osloensis) 亚特兰大莫拉菌 (M. atlantae) 狗莫拉菌 (M. canis) 林肯莫拉菌 (M. lincolnii)

24 培养特点 生长不需要特殊营养条件, 需氧, 在血平板 巧克力平板及营养琼脂平板均能生长, 在 5-10%CO 2 环境中,35 培养过夜, 可形成 1-3mm 的菌落, 圆形 光滑 凸起 无色 不溶血, 推刮易碎不沾环, 用接种环刮取的菌苔可呈淡奶色 ( 乳白色 ) 菌落易在盐水中乳化, 可作为筛选菌落的特点

25 菌落特点

26 菌落特点

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29 微生物特性 革兰阴性球杆菌 呈双短链状排列, 具有多形性

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32 奈瑟菌 ( 1000)

33 微生物检验 鉴定 : 氧化酶阳性 触酶阳性 不分解任何糖类 硝酸盐还原试验阳性 DNA 酶和乙酰脂酶阳性 Β- 内酰胺酶阳性率高达 90%, 可作为与其他近缘菌的鉴别实验

34 卡他莫拉菌与近缘菌的产酶试验结果 菌名 ( 株 ) 氧化酶 DNA 酶 乙酰脂酶 β- 内酰胺酶 卡他莫拉菌 (278) 脑膜炎奈瑟菌 (3) 淋病奈瑟菌 (15) 浅黄奈瑟菌 (38) 灰质奈瑟菌 (30) 黏液奈瑟菌 (25) 微黄奈瑟菌 (32) 莫拉菌属 (24)

35 乙酰脂酶试验 : 100mg/ml3- 乙酰吲哚丙酮溶液浸泡纸片后吹干备用, 使用时纸片用无菌生理盐水将 3- 乙酰吲哚纸片沾湿, 取待检菌落涂在纸片上,3min 内出现蓝绿色为阳性反应, 以卡他莫拉菌 ATCC25238, 全国临检中心质控菌珠 作为阳性对照 β 内酰胺酶试验 :1.25μg/ 片 Nitrocefin 吹干备用, 使用时用 无菌蒸馏水将 Nitrocefin 纸片沾湿, 取卡他莫拉菌菌落涂在 纸片上,5min 内纸片变红色者判为 β 内酰胺酶阳性

36 DNA 酶试验 : 挑取可疑菌落, 涂抹接种于 DNA 琼脂平板 ( 涂抹菌斑直径 5-10mm), 以金黄色葡萄球菌 ATCC25923 作为阳性对照, 放入 35 孵箱培养 24-48h 后, 于 DNA 琼脂上加 1NHCL 溶液 1-2ml( 铺满琼脂表面 ),10 分钟后观察结果 : 菌斑周围或菌斑下 ( 刮去菌斑 ) 出现无色透明区即为 DNA 酶阳性

37 采用 3- 乙酰吲哚纸片法检测 MC 产生的乙酰脂酶快速鉴定 MC, 此法操作简单, 易于判断, 敏感性为 100%, 和近缘菌 ( 淋病奈瑟菌, 脑膜炎奈瑟菌, 奈瑟菌属, 莫拉菌亚属 ) 比较特异性为 100%, 与 DNA 酶试验及生化鉴定结果的相关性比较均为 100%. 虽然不动杆菌的乙酰酶阳性率高达 82.6%, 但是不动杆菌的氧化酶阴性,DNA 酶试验阴性, 在普通琼脂有中国蓝琼脂上生长良好, 且菌落较 MC 湿润和光滑, 稍加注意不难区别. 用 3- 乙酰吲哚纸片法检测 MC 产生的乙酰脂酰,3 分钟即可出结果, 成本较低, 一片纸片可鉴定多个菌落, 可用于可疑菌落的筛选, 是临床实验室快速鉴定 MC 的方法,

38 0804 号标本 金黄色葡萄球菌 此 菌 D-test 试验阳性, 表现为体外诱导 型克林霉素耐药 即红霉素 克林 霉素均应报告为耐药

39 D-TEST 大环内酯类抗生素作用于细菌核糖体 50S 大亚基, 抑制细菌蛋白质合成, 从而导致细菌死亡 靶位点的改变是葡萄球菌对大环内酯类 林可霉素类 链阳菌素 B (MLSB) 等抗生素获得性耐药的主要机制, 并对 (MLSB) 抗生素表现为交叉耐药 MLSB 耐药固有耐药和诱导耐药

40 若诱导耐药则常规药敏实验表现为红霉素耐药而克林霉素敏感, 用双纸片法进行 D 实验时可见克林霉素抑菌圈靠近红霉素一侧出现弯曲的 D 形状, 尽管在缺乏诱导剂时细菌表现对克林霉素的敏感, 但临床用克林霉素治疗无效 其耐药机制可归结为由 msra 基因编码的泵出机制, 核糖体可诱导变异, 核糖体结构变异

41 在 MH 琼脂平板上, 分别贴红霉素 (15μg/ 片 ) 和克林霉素 (2μg/ 片 ) 纸片 两种纸片距离分别选用 15mm 26mm, 35 培养 16~18h 用常规法取 2 纸片边缘距离, 若靠近红霉素纸片处克林霉素纸片抑菌圈缩小或呈 D 形状, 则显示为诱导型耐药

42 D Test positive reaction Inducible clindamycin resistance (erm-mediated) mm another example Photos courtesy of J. Jorgensen and K. Fiebelkorn.

43 D Test negative reaction NO induction (msra-mediated erythromycin resistance)

44 0805 号标本 鲍曼不动杆菌 该菌在固 体培养基上生长良好, 形态多为球状或 球杆状, 革兰染色常不易脱色, 染成假 阳性, 氧化酶 硝酸盐还原阴性, 通过 常规鉴定方法可进一步鉴定到种 一般 认为该菌为条件致病菌, 近些年在医院 感染监测中检出率越来越高, 该菌可以 同时存在多种耐药机制, 并呈一定的季 节性流行特点

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49 各实验室汇报结果 : 恶臭假单胞菌 臭鼻克雷伯菌 粘质沙雷菌 嗜麦芽窄食单胞菌 醋酸钙不动杆菌 (41 44 不生长, 木糖阴性 ) 洛菲不动杆菌 ( 枸橼酸盐阴性, 葡 木 乳糖阴性 )

50 药物敏感试验及结果解释 鲍曼氏不动杆菌, 对全部氨基青霉素 一代二代头孢菌素和一代喹诺酮类抗生素天然耐药 Kirby-Bauer 法做药敏试验, 药物的选择及结果解释祥见 CLSI2008 M100-S18

51 2007 年度全省临床 尿干化学项目数据分析评价

52 批次 : 本次室间质评全省一共 229 家单 位参加, 其中 188 家参加尿干化学检 测活动, 有效回报 175 家 通过 151 家, 通 过率 86.29%

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54 批次 : 本次室间质评全省一共 229 家单位参加, 其中 188 家参加尿干化学检测活动, 有效回报 175 家 通过 149 家, 通过率 85.14%

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59 结果分析 1 二个批次 9 个检测项目中都反应出除尿胆原及白细胞外回报符合率均良好 2 检测方式以仪器法为主, 仪器以进口为主, 国产试剂占有一定份额

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