5月15期

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纶灰寇
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1 中国农学通报 2014,30(15): Chinese Agricultural Science Bulletin 新疆雪莲 rbcs 基因的克隆及序列分析杨晶 1, 张亚敏 2, 李曹龙 2, 王爱英 2 1, 祝建波 ( 新疆石河子大学生命科学学院, 新疆石河子 ) 摘要 : 为获得新疆雪莲 Rubisco(1,5- 二磷酸核酮糖羧化酶 / 加氧酶 ) 小亚基基因, 并对其序列进行生物信息学分析 ; 从已建立的新疆雪莲 cdna 文库中, 随机挑取单克隆, 采用通用引物 M13 扩增并测序, 测序结果在 NCBI 网址进行 Blast 比对, 结果发现了 2 个与 rbcs 基因同源的序列并命名为 sikrbcs1 和 sikrbcs2; 生物信息学分析表明 :sikrbcs1 基因包含 l 个 540 bp 的完整开放阅读框, 编码 179 个氨基酸,sikrbcs2 基因包含 l 个 420 bp 的完整开放阅读框, 编码 139 个氨基酸 sikrbcs1 基因编码的蛋白质的理论等电点是 8.90, 分子量为 kd, 具有 2 个跨膜区域,sikrbcs2 基因编码的蛋白质理论等电点是 7.58, 分子量为 kd, 不具有跨膜区域氨基酸多序列比对表明,Sikrbcs1 与黄顶菊和向日葵的相似性最高, 达到 83.89%,Sikrbcs2 与向日葵的相似性最高达到 57.54%; 系统进化树显示表明,sikrbcs1 和 sikrbcs2 都与菊花亲缘关系最近关键词 : 新疆雪莲 ; 克隆 ; 序列分析 ;rbcs 中图分类号 :Q78 文献标志码 :A 论文编号 : Cloning and Sequence Analysis of rbcs Gene from Sasussured involucrata Kar. et Kir Yang Jing 1, Zhang Yamin 2, Li Caolong 2, Wang Aiying 2, Zhu Jianbo 1 (College of Life Science, Shihezi University, Shihezi Xinjiang ) Abstract: To obtain rubisco (Ribulose- 1,5- bisphosphate carboxylase/oxygenase) small subunit gene from Sasussured involucrata Kar.et Kir, in this study the gene was cloned and analyzed. The monoclone was selected in established cdna library randomly for PCR directed with universal M13 primer and sequencing, the sequence was compared in NCBI,finally the two rbcs gene homologous sequences were obtained,named Sikrbcs1 and Sikrbcs2. Bioinformatics analysis indicated that the Sikrbcs1 cdna contained an open reading frame of 540 nucleotides encoding 179 amino acids; the Sikrbcs2 cdna contained an open reading frame of 420 nucleotides encoding 139 amino acids. Forecasted the Sikrbcs1 protein relative molecular weight was kd, theoretical PI was 8.9, contained two span membrane structures, the Sikrbcs2 protein relative molecular weight was kd, theoretical PI was 7.58, no span membrane structure. Multiple sequence alignment of rbcs proteins revealed that the amino acid sequence of Sikrbcs1 protein showed high identity of 83.89% to those of rbcs from Flaveriapringlei and Helianthusannuus. Sikrbcs2 showed high identity of 57.54% to that of rbcs from Helianthusannuus. Phylogenetic analysis further showed that the Sikrbcs1 and Sikrbcs2 had nearest relationship with Chrysanthemum xmorifolium. Key words: Sasussured involucrata Kar et Kir; cloning; sequence analysis; rbcs 基金项目 : 国家自然基金资助项目新疆雪莲 Rubisco 小亚基 Sikrbcs2 基因的抗寒机制研究 ( ) 第一作者简介 : 杨晶, 女,1987 年出生, 甘肃武威人, 硕士研究生, 主要从事植物基因工程研究通信地址 : 新疆石河子大学生命科学学院农业生物技术重点实验室 315 室,Tel: , gswwyangjing@163.com 通讯作者 : 祝建波, 男,1969 年出生, 新疆石河子人, 研究员, 博士, 研究方向为植物基因工程通信地址 : 新疆石河子大学生命科学学院农业生物技术重点实验室 315 室,Tel: , zjbshz@126.com 收稿日期 : , 修回日期 :

结果发现了 2 个与 rbcs 基因同源的序列并命名为 sikrbcs1 和 sikrbcs2; 生物信息学分析表明 :sikrbcs1 基因包含 l 个 540 bp 的完整开放阅读框, 编码 179 个氨基酸,sikrbcs2 基因包含 l 个 420 bp 的完整开放阅读框, 编码 139 个

2 262 中国农学通报 0 引言光合作用是作物产量形成的基础, 而温度是影响光合作用的重要因素起源于热带和亚热带的许多重要的粮食和经济作物对低温极为敏感, 当温度低于植物生长的最适温度时, 其生理代谢会发生多方面的变化, 光合作用系统对低温的反应最为敏感, 主要表现有 [1] [2-5] 叶绿素的合成受到阻碍, 叶绿体结构遭到破坏, 光 [6] 合电子传递活性下降, 光合作用过程中酶的活性下 [7-8] 降等低温不仅降低了植物对光能的利用率, 而且 [9] 增加了冷敏感植物低温发生光抑制的可能性新疆雪莲 (Sasussured involucrata Kar.et Kir) 属菊科凤毛菊属, 为多年生一次性开花结实的高山冰缘草本植物, 生长在海拔 2400~4100 m 的高山悬崖峭壁的雪 [10] 线附近雪莲生长环境月平均气温很低, 日温度变化幅度急剧, 冰雹霜冻等自然灾害更是频繁发生通过对雪莲的生理生殖生态的研究发现, 雪莲具有抗辐射抗缺氧和极强的耐寒的能力, 可以在月平均温度仅 [11-12] 3~5 环境下正常完成生理周期新疆雪莲自身形成了独特的光合保护机制因此研究其光合保护机制具有重要的意义 Rubisco(1,5- 二磷酸核酮糖羧化酶 / 加氧酶 ) 是高等植物光合碳代谢中的关键酶, 即能催化 CO 2 的固定又能催化 CO 2 还原, 处于一个方向相反但又相互连锁的交叉点上, 调节着光合作用和光呼吸的代谢比例, 其 [13] 活性大小对净光合速率起着决定性作用高等植物的 Rubisco 是多亚基复合体, 是由 8 个大亚基 (rbcl) 和 8 个小亚基 (rbcs) 组成的 L8S8 多聚体, 其中大亚基由叶绿体基因编码, 小亚基是由细胞核基因编码 rbcs mrnas 表达水平与 Rubisco 含量是高度相关的, 二者之间有很好的协同表达, 小亚基对大亚基的表达具有 [12,14] 调控作用迄今为止, 已经从多种植物中克隆得到了 rbcs 基因, 并对其组成结构和进化等进行了广泛研究研究表明 rbcs 在植物基因组中为多拷贝且串连重复, 表达呈器官特异性, 主要在植物叶片中表达, 在不 [15] 同的生长发育时期表达也有差异本试验从新疆雪莲叶片中克隆得到了 2 个 rbcs 基因, 并对其进行了生物信息学分析, 以此来指导其功能研究并对新疆雪莲的光合生理特征的研究奠定基础 1 材料与方法 1.1 材料植物材料新疆雪莲组培苗由石河子大学生命科学学院重点实验室培养菌株与试剂大肠杆菌 (Escherichia coli) top10 新疆雪莲 cdna 文库保存于石河子大学生命科学学院农业生物技术重点实验室植物总 RNA 提取试剂盒购于艾德莱生物公司,cDNA 合成试剂盒和凝胶回收试剂盒购于北京康为世纪生物科技有限公司 T4 DNA 连接酶限制性内切酶购自 TaKaRa 公司,pGM-T 克隆载体 10 Taq Reaction Buffer Taq DNA Polymerase dntp 购自 TIANGEN 公司 1.2 方法新疆雪莲总 RNA 的提取和 cdna 的合成参照 EASY spin Plus 植物 RNA 快速提取试剂盒说明书提取新疆雪莲幼苗叶片的 RNA cdna 的合成参照北京康为世纪生物科技有限公司的 SuperRT cdna 第一链合成试剂盒中的说明书新疆雪莲 rbcs 基因的克隆从已构建的新疆雪莲幼苗叶片的 cdna 文库中随机挑取单克隆, 采用 M13 引物进行 PCR 扩增并测序, 测序结果在 NCBI 网址进行 Blast 比对, 结果发现了 2 个与 rbcs 基因同源的序列, 但这 2 个序列的同源性很低根据该序列, 利用引物设计软件 (Primer5.0) 设计特异性引物 rbcs1 上 :5 - ATGGCCACACACTCCTCCTCCGC CG-3 ; rbcs1 下 :5 -CCAAGCCAGAAGGGTACTAA-3 ; rbcs2 上 :5 - ATGGCCTCCATCTCCTCCTCCGC G-3 ; rbcs2 下 :5 - ACTGATTCCGCCCAGGTGTTGA -3 ; 将以反转录成的新疆雪莲 cdna 为模板进行 PCR 扩增,PCR 的反应体系参见 Taq DNA Polymerase 说明书 PCR 反应程序为 :94 预变性 10 min;94 变性 30 s,62 复性 30 s,72 延伸 30 s,30 个循环 ;72 延伸 7 min;16 保存 PCR 产物采用浓度为 1.0% 的琼脂糖凝胶电泳分离, 参照琼脂糖凝胶回收试剂盒说明书回收目的条带将回收的目的片段与 pgm-t Easy 克隆载体连接, 连接产物转化大肠杆菌 top10 感受态细胞, 进行蓝白斑筛选进一步进行菌液 PCR 和双酶切鉴定正确后交由华大基因公司进行测序序列分析和进化树的构建利用 DNAMAN 软件确定基因的开放阅读框和氨基酸序列用 ProtParam ( 预测蛋白质的理化性质利用 ExPASY 的网站提供的在线工具 (ProtScale TMPRED CDD) 预测蛋白质的亲水性 / 疏水性跨膜结构, 蛋白质基序通过 Blast 进行同源性搜索并利用 DNAMAN 软件对来自不同物种的同源氨基酸进行多重比对用 Clustalx 和 MEGA4.1 软件构建系统进化树

对低温的反应最为敏感, 主要表现有 [1] [2-5] 叶绿素的合成受到阻碍, 叶绿体结构遭到破坏, 光 [6] 合电子传递活性下降, 光合作用过程中酶的活性下 [7-8] 降等低温不仅降低了植物对光能的利用率, 而且 [9] 增加了冷敏感植物低

3 杨晶等 : 新疆雪莲 rbcs 基因的克隆及序列分析结果与分析 2.1 新疆雪莲 rbcs 基因的克隆采用 M13 引物从新疆雪莲 cdna 文库中扩增得到了特异性的片段回收后与 pgm-t Easy Vecter 载体连接转化大肠杆菌 top10 感受态细胞酶切鉴定正确后测序将测序结果在 NCBI 上比对得到 2 种不同的序列, 都与 Rubisco 小亚基基因有着极高的相似性, 为方便后期实验将其命名为 Sikrbcs1,Sikrbcs2 以新疆雪莲幼苗叶片 cdna 为模板, 利用特异性引物 PCR 扩增, 得到目的条带 ( 图 1 图 2) 将目的片段回收连接 pgm-t Easy 载体, 转化大肠杆菌 top10 感受态细胞, 挑取阳性克隆扩大培养, 经菌液 PCR 和双酶切鉴定正确后送去测序测序结果经 DNAMAN 软件分析, Sikrbcs1 包含 1 个长 540 bp 的完整开放阅读框, 编码 179 个氨基酸,Sikrbcs2 包含 1 个长 420 bp 的完整开放阅读框, 编码 139 个氨基酸 500 bp 500 bp 540 bp 420 bp 图 1 Sikrbcs1 基因 PCR 扩增 2.2 蛋白质理化性质的分析利用 Protparm 软件在线预测基因 Sikrbcs1 和 Sikrbcs2 的理化性质, 得出 Sikrbcs1 基因所编码蛋白的理论等电点为 8.90, 相对分子质量为 kd, 负电荷氨基酸残基 (Asp+Glu) 的数目共有 16 个, 正电荷氨基酸残基 (Arg+Lys) 的数目共有 21 个, 不稳定系数为 32.41, 属于稳定蛋白, 总平均亲水性为 Sikrbcs2 基因所编码蛋白的理论等电点为 7.58, 相对分子质量为 kd, 负电荷氨基酸残基 (Asp+Glu) 的图 2 Sikrbcs2 基因 PCR 扩增数目共有 12 个, 正电荷氨基酸残基 (Arg+Lys) 的数目共有 13 个, 不稳定系数为 36.17, 属于稳定蛋白, 总平均亲水性为用 TMPRED 工具进行跨膜结构分析得出 Sikrbcs1 由膜内向膜外存在 1 个跨膜区域, 由膜外向膜内存在 1 个跨膜区域 Sikrbcs2 不存在跨膜结构用 ProtScale 分析 Sikrbcs1 和 Sikrbcs2 基因所编码蛋白质的亲 / 疏水性, 由图 3 和 4 图分析可得 :Sikrbcs1 和 Sikrbcs2 都是易溶亲水性较强的蛋白图 3 Sikrbcs1 基因编码蛋白的氨基酸序列疏水性 / 亲水性预测

列, 都与 Rubisco 小亚基基因有着极高的相似性, 为方便后期实验将其命名为 Sikrbcs1,Sikrbcs2 以新疆雪莲幼苗叶片 cdna 为模板, 利用特异性引物 PCR 扩增, 得到目的条带 ( 图 1 图 2) 将目的片段回收连接 pgm-t Easy 载体, 转化大

4 264 中国农学通报图 4 Sikrbcs2 基因编码蛋白的氨基酸序列疏水性 / 亲水性预测通过 Motif Scan 工具对 Sikrbcs1 的序列进行分析, 结果表明 Sikrbcs1 包含了 1 个酪蛋白激酶 2 磷酸化位点 ( ),3 个肉豆蔻酰基化位点 ( ),1 个蛋白激酶 C 的磷酸化位点 (37 39),1 个酪氨酸蛋白激酶位点 (67 74) Sikrbcs2 包含了 2 个天冬酰胺糖基化位点 ( ),1 个酪蛋白激酶 2 磷酸化位点 ( ),3 个肉豆蔻酰基化位点 ( ),1 个蛋白激酶 C 的磷酸化位点 (38 40),1 个酪氨酸激酶磷酸化位点 (66 73) 利用 NCBI 的在线分析工具 CDD 进行结构域分析, 结果如图 5 6 所示, 由图可知 Sikrbcs1 和 Sikrbcs2 属于 RuBisco-small-superfamily 蛋白家族 Sikrbcs1 具有典型的 PLNO2289 结构域,Sikrbcs2 不具有此结构域 2.3 同源性及进化树分析新疆雪莲 Sikrbcs1 基因同源性及进化树分析在 GenBank 中检索发现,Sikrbcs1 基因序列编码的氨基酸序列与已经报道的其他高等植物 : 紫茎泽兰 Eupatorium adenophorum Spreng(ACO35888) 向日葵 Helianthusannuus (P08705) 黄顶菊 Flaveria bidentis (Q39746) 菊花 Dendranthema morifolium (AAO25119) 黄菊花 Rudbeckia laciniata (P07089) 莴苣 Lactuca tatarica (AAF19793) 刺龙芽 Aralia elata(afo67218) 人参 Panaxginseng (BAE46384) 苹果 Malus pumila Mil (AAA33866) 野草莓 Fragaria vesca(xp ) 蓝桉树 Eucalyptus globules Labill(BAI53118) 的氨基酸序列具有较高的相似性, 其中新疆雪 Sikrbcs1 与黄顶菊和向日葵的相似性最高, 达到 83.89%( 图 7) 为了分析新疆雪莲 Sikrbcs1 与其他物种 rbcs 基因间的亲缘关系, 利用 MEGA4.1 软件将 Sikrbcs1 与 GenBank 中公布的其他 11 个物种的 rbcs 进行系统进化分析, 结果显示, 新疆雪莲 Sikrbcs1 与菊花亲缘关系最近, 如图 8 所示新疆雪莲 Sikrbcs2 同源性及进化树分析通过 Blast 同源性搜索, 选取菜豆蒺藜苜蓿紫花苜蓿菊花黄顶菊黄菊花紫茎泽兰人参向日葵苹果刺龙芽陆地棉同源性较高的 13 个物种氨基酸进行多序列比对发现同源性在 46.96%~57.54%, 和向日葵中 rbcs 最接近 ( 图 9), 对 13 个物种的氨基酸序列建立系统发图 5 Sikrbcs1 基因的保守结构域的预测图 6 Sikrbcs2 基因的保守结构域的预测

138),1 个蛋白激酶 C 的磷酸化位点 (37 39),1 个酪氨酸蛋白激酶位点 (67 74) Sikrbcs2 包含了 2 个天冬酰胺糖基化位点 (13 16 112 115),1 个酪蛋白激酶 2 磷酸化位点 (113 116),3 个肉豆蔻酰基化位点 (28 33 123 128 133

5 杨晶等 : 新疆雪莲 rbcs 基因的克隆及序列分析 265 图 7 新疆雪莲 Sikrbcs1 蛋白的氨基酸序列与其他相关序列的多重比较图 8 新疆雪莲 Sikrbcs1 蛋白的氨基酸序列与其他物种的进化树育树, 结果表明新疆雪莲 Sikrbcs2 与菊花中 rbcs 聚为一类 ( 图 10) 3 讨论与结论本试验以新疆雪莲幼苗为研究对象, 利用文库随机测序得到了 2 个 rbcs 基因的全长 cdna 序列, 这 2 个 rbcs 基因的同源性只有 55% 生物信息学分析表明, Sikrbcs1 基因包含一个 540 bp 的完整开放阅读框, 编码 179 个氨基酸, 基因所编码蛋白理论等电点 8.90, 蛋白质相对分子质量 kd, 负电荷氨基酸残基 (Asp+ Glu) 的数目共有 16 个, 正电荷氨基酸残基 (Arg+Lys) 的数目共有 21 个, 不稳定系数为 32.41, 属于稳定蛋白, 总平均亲水性为 , 该基因所编码蛋白是易溶亲

rbcs 基因的同源性只有 55% 生物信息学分析表明, Sikrbcs1 基因包含一个 540 bp 的完整开放阅读框, 编码 179 个氨基酸, 基因所编码蛋白理论等电点 8.90, 蛋白质相对分子质量 20.

6 266 中国农学通报图 9 新疆雪莲 Sikrbcs2 蛋白的氨基酸序列与其他相关序列的多重比对图 10 新疆雪莲 Sikrbcs2 蛋白的氨基酸序列与其他物种的进化树水性较强的蛋白, 存在 2 个跨膜区域, 具有 rbcs 典型结构域, 属于 Rubisco 超级蛋白家族 Sikrbcs2 基因包含一个 420 bp 的完整开放阅读框, 编码 139 个氨基酸, 基因所编码蛋白的理论等电点 7.58, 相对分子质量 kd, 负电荷氨基酸残基 (Asp+Glu) 的数目共有 12 个, 正电荷氨基酸残基 (Arg+Lys) 的数目共有 13 个,

物种的进化树水性较强的蛋白, 存在 2 个跨膜区域, 具有 rbcs 典型结构域, 属于 Rubisco 超级蛋白家族 Sikrbcs2 基因包含一个

7 杨晶等 : 新疆雪莲 rbcs 基因的克隆及序列分析 267 不稳定系数为 36.17, 属于稳定蛋白, 总平均亲水性为 , 该基因所编码蛋白是易溶亲水性较强的蛋白, 不存在跨膜区域, 不具有 rbcs 典型结构域, 属于 Rubisco 超级蛋白家族 Sikrbcs1 基因编码的氨基酸序列与黄顶菊和向日葵的相似性最高, 达到 83.89% Sikrbcs2 基因编码的氨基酸序列与向日葵的相似性最高, 达到 57.54% 到目前为止人们已先后从豌豆拟南芥水稻烟草矮牵牛番茄大豆等植物中克隆得到了 rbcs 基因绝大多数 rbcs 基因表达的研究主要集中在光光敏色素和生物钟的调控上 [16] 研究发现 rbcs 基因对水杨酸盐胁迫和干旱胁迫具有明显的应答反应, 但不同浓度的处理对 rbcs 基因的转录有不同程度的诱导 [17] 此外 rbcs 基因的表达还受温度和光照的调控通过转基因研究表明许多植物的 rbcs 5 端序列作为光诱导的 [18] 启动子或增强子控制着其 mrna 编码蛋白水平 rbcs 基因可能在植物抗逆过程起重要作用 [19] 人们在研究 Rubisco 功能时发现其活性中心位于大亚基上而多个小亚基编码基因 rbcs 功能还不是很清楚研究表明小亚基可能具有的以下功能 : 聚集大亚基的活性位点, 促进 CO 2 与 Mg 2+ 对 Rubisco 的活化, 维持和稳定 Rubisco 的活化构象 [20] 通过对的烟草和水稻大小亚基的异源分子杂交发现, 杂合酶的羧化和氧 [21] 化比值与小亚基的来源有很大的关系 Read 和 Tabita 用硅藻和蓝藻的实验结果也揭示小亚基在调控 Rubisco 羧化 / 氧化比值方面的重要作用 [22] 为此人们希望用不同植物的大小亚基组成全酶来提高羧化活性和降低加氧活性本研究克隆的 rbcs 基因的编码蛋白是否具有以上功能还要进一步去构建不同的植物表达载体并转化植物探索其功能参考文献 [1] 曾乃燕, 何军贤, 赵文, 等. 低温胁迫期间水稻光合膜色素与蛋白水平的变化 [J]. 西北植物学报,2000,20(1):8-14. [2] 陈善娜, 邹晓菊, 梁斌. 水稻不同抗冷性品种幼苗叶细胞膜系统的电镜观察 [J]. 植物生理学通讯,1997,33(3): [3] 谢潮添, 杨盛昌, 廖启炓, 等. 低温胁迫下董棕 (Garyota urens L.) 幼苗叶肉细胞内 Ca 2 + 水平及细胞超微结构的变化 [J]. 植物学通报, 2003,20(2): [4] 沈文云, 马德华. 光照处理对黄瓜叶绿体超微结构的影响 [J]. 园艺学报,1995,22(4): [5] 王毅, 方秀娟, 徐欣, 等. 黄瓜幼苗低温锻炼对叶片细胞叶绿体结构的影响 [J]. 园艺学报,1995,22(3): [6] Yordanov I, Velikova V. Photoinhibition of photosystem Ⅰ [J]. Bulgarian Journal of PlantPhysiology, 2000,26: [7] 郭延平, 张良诚, 洪双松, 等. 温州蜜柑叶片气体交换和叶绿素荧光对低温的响应 [J]. 植物生理学报.2000,26(2): [8] Hutchison R S, Groom Q, Ort D R. Differential effects of chilling induced photooxidation on the redox regulation of photosynthesis enzymes[j].biochemistry,2000,39: [9] Hetherington S E, He J, Smillie R M. Photoinhibition at low temperature in chilling- sensitive and- resistant plants[j].plant Physiol,1989,90: [10] 庄丽, 李卫红, 孟丽红. 新疆雪莲资源的利用, 研发与保护 [J]. 干旱区资源与环境,2006,20(2): [11] Suzuki Y, Ohkubo M, Hatakeyama H et al. Increased Rubisco Content in Transgenic Rice Transformed with the Sense rbcs Gene[J]. Plant Cell Physiol,2007, 48(4): [12] 曹玲珍, 刁治民, 雷青娟. 雪莲资源及应用价值 [J]. 青海草业,2006, 15(1): [13] Oquist G, HunerN P A. Photosynthesis of overwintering ever-green plants[ J]. Annu Rev Plant Biol, 2003, 54: [14] Parry M A J, Andralojc P J, Mitchell R A C, et al. Manipulation of Rubisco: the amount activity, function and regulation[j].exp Bot, 2003,54: [15] 夏兰芹,Soll Jürgen, 何中虎.Rubisco 小亚基前体蛋白 pressu 的互作蛋白分析 [J]. 作物学报,2006,(32)5: [16] Matsuba K, Imaizumi N, Kaneko S, et al. Photosynthetic responses to temperature of phosphoenolpyruvate carboxykinase type C4 species differing in cold sensitivity[j]. Plant Cell Environ, 1997,20: [17] Ivanov B, Edwards G. Influence of ascorbate and the Mehler peroxidase reaction on non- photochemical quenching of chlorophyll fluorescence in maize mesophyll chloroplasts[j].planta, 2000,210: [18] Wang Y R, Liu H X, Li P, et al. Effect of lowtemperature on membrane lipid peroxidation of rice seedling photosynthetic apparatus under the light and dark [J]. Acta Phytophyologica Sin., 1986,12: [19] 马德华, 庞金安, 李淑菊, 等. 短期强低温处理对黄瓜幼苗光合作用的影响 [J]. 河北农业大学学报,1998,21(2):39-42 [20] Spreitzer R J. Role of the small subunit of ribulose- 1,5- bisphosphate carboxylase/ voxygenase[j].arch Biochem Biophys, 2003,414: [21] Du Y C, Hong S, Spreitzer R J. RbcS suppressor mutations improve the thermal stability and CO2/O2 specificity of rbcl-mutant ribulose- 1,5- bisphosphate carboxylase/oxygenase[j].proc Natl Acad Sci USA, 2000,97(26): [22] Livingston A K, Kanazawa A, Cruz J A. Regulation of cyclic electron flow in C3plants: differential effects of limiting photosynthesis at ribulose-1,5-bisphosphate carboxylase/oxygenase and glyceraldehyde- 3- phosphate dehydrogenase[j]. Plant Cell Environ, 2010,33(11):

89% Sikrbcs2 基因编码的氨基酸序列与向日葵的相似性最高, 达到 57.

Syngene GBOXHR Retsch MM400 KQ DE Eppendorf Table 1 The sources of Astragali Radix and Hedysarum Radix No. 1 AMM2011_NMGTY Astr

Syngene GBOXHR Retsch MM400 KQ DE Eppendorf Table 1 The sources of Astragali Radix and Hedysarum Radix No. 1 AMM2011_NMGTY Astr PCR 龙平, 崔占虎, 李虔全, 徐建平, 张春红, 周立社 * *, 李旻辉 ( 包头医学院, 内蒙古包头 014060) DNA 30 28 DNA trnl-trnf PCR PCR 136 bp 323 bp 10% PCR PCR Astragalus membranaceus Fisch. Bge. var. mongho- licus Bge. Hsiao A. membranaceus