154 植 物 遗 传 资 源 学 报 15 卷 [1] 化 机 理 研 究 的 热 点 问 题 ꎮ 邵 开 基 等 研 究 发 现 ABA 含 量 与 树 体 矮 化 呈 显 著 负 相 关 ꎬ 树 体 愈 矮 化 ꎬ [2] 叶 片 ABA 含 量 越 高 ꎮ 牛 自 勉 等 通 过 对 M 系
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- 斤烨 殷
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1 植物遗传资源学报 ２０１４ꎬ１５(１) :１５３ １５９ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｌａｎｔ Ｇｅｎｅｔｉｃ Ｒｅｓｏｕｒｃｅｓ ＤＯＩ:１０. １３４３０ / ｊ. ｃｎｋｉ. ｊｐｇｒ. ２０１４. ０１. ０２１ 苹果砧木 ＳＨ４０ ＭｄＮＣＥＤ１ 基因克隆与表达分析 姜志昂ꎬ孙建设ꎬ彭建营ꎬ邵建柱 ( 河北农业大学园艺学院ꎬ保定 ０７１０００) 摘要:９ 顺式 环氧类胡萝卜素双加氧酶基因是脱落酸合成途径的关键基因ꎮ 本试验通过 ＲＴ ＰＣＲ 结合 ＲＡＣＥ 技术从苹果 ＳＨ４０( Ｍａｌｕｓ ｄｏｍｅｓｔｉｃａ Ｍａｌｕｓ Ｈｏｎａｎｅｎｓｉｓ ) 茎 尖 组 织 中 克 隆 了 １ 条 ＮＣＥＤ 基 因ꎬ 命 名 为 ＭｄＮＣＥＤ１ ( ＧｅｎＢａｎｋ 登 录 号 为 ＫＣ８１６７３４) ꎮ 该 ｃｄｎａ 序列全长 ２１７９ ｂｐꎬ包含 １ 个编码 ６０６ 个氨基酸的开放阅读框ꎮ 氨基酸同源性分析表明ꎬＭｄＮＣＥＤ１ 与已 报道的 其 他 植 物 物 种 的 氨 基 酸 序 列 具 有 ６３ ７ ~ ９３ ０ 的 相 似 性ꎮ 构 建 ＭｄＮＣＥＤ１ 基 因 的 原 核 表 达 载 体 ｐｄｅｓｔ１５ ＭｄＮＣＥＤ１ꎬ转入大肠杆菌( ＤＥ３) ꎬ用 ＩＰＴＧ 诱导ꎮ ＳＤＳ ＰＡＧＥ 分析表明ꎬＭｄＮＣＥＤ１ 基因在大肠杆菌中被诱导表达的蛋白质分子 量与预期结果一致ꎮ 荧光定量结果表明ꎬＭｄＮＣＥＤ１ 基因在 ＳＨ２８ Ｍ２６ ＳＨ４０ 及其嫁接品种嘎啦的表达趋势均呈先上升后下 降的趋势ꎬ同时与其矮生程度呈正相关ꎮ 关键词:苹果砧木ꎻＭｄＮＣＥＤ１ꎻ克隆ꎻ表达ꎻ原核表达 Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＭｄＮＣＥＤ１ Ｇｅｎｅ ｆｒｏｍ Ａｐｐｌｅ Ｒｏｏｔｓｔｏｃｋ ＳＨ４０ ＪＩＡＮＧ Ｚｈｉ ａｎｇꎬｓｕｎ Ｊｉａｎ ｓｈｅꎬｐｅｎｇ Ｊｉａｎ ｙｉｎｇꎬｓｈａｏ Ｊｉａｎ ｚｈｕ ( Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｈｏｒｔｉｃｕｌｔｕｒｅ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ ＨｅｂｅｉꎬＢａｏｄｉｎｇ ０７１０００) Ａｂｓｔｒａｃｔ:９ ｃｉｓ ｅｐｏｘｙｃａｒｏｔｅｎｏｉｄ ( ＮＣＥＤ) ｇｅｎｅ ｉｓ ａ ｃｒｉｔｉｃａｌ ｇｅｎｅ ｉｎ ｔｈｅ ｐａｔｈｗａｙ ｏｆ ａｂｓｃｉｓｉｃ ａｃｉｄ ｂｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓ. Ｉｎ ｔｈｉｓ ｒｅｓｅａｒｃｈꎬｎｃｅｄ ｇｅｎｅ ｉｎ ａｐｐｌｅꎬｄｅｓｉｇｎａｔｅｄ ａｓ ＭｄＮＣＥＤ１ ( ＧｅｎＢａｎｋ ａｃｃｅｓｓｉｏｎ ｎｕｍｂｅｒ:ｋｃ８１６７３４) ꎬｗａｓ ｉｓｏ ｌａｔｅｄ ｆｒｏｍ ｔｈｅ ａｐｉｃａｌ ｔｉｓｓｕｅ ｏｆ ａｐｐｌｅ ｒｏｏｔｓｔｏｃｋ ＳＨ４０ ( Ｍ. ｄｏｍｅｓｔｉｃａ Ｍ. Ｈｏｎａｎｅｎｓｉｓ) ｂｙ ＲＴ ＰＣＲ ａｎｄ ＲＡＣＥ ｔｅｃｈ ｎｏｌｏｇｙ. Ｔｈｅ ｆｕｌｌ ｌｅｎｇｔｈ ｃｄｎａ ｗａｓ ２１７９ ｂｐꎬ ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ ａ ｃｏｍｐｌｅｔｅ ｏｐｅｎ ｒｅａｄｉｎｇ ｆｒａｍｅ ｔｈａｔ ｅｎｃｏｄｅｓ ６０６ ａｍｉｎｏ ａｃｉｄｓ. Ａｍｉｎｏ ａｃｉｄ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ａｎａｌｙｓｉｓ ｒｅｖｅａｌｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｈａｄ ６３ ７ ９３ ０ ｓｉｍｉｌａｒｉｔｙ ｗｉｔｈ ｔｈｏｓｅ ｏｆ ｏｔｈｅｒ ｒｅｐｏｒｔｅｄ ｐｌａｎｔｓ. Ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ＭｄＮＣＥＤ１ ｇｅｎｅ ｐｒｏｋａｒｙｏｔｉｃ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｖｅｃｔｏｒ ｐｄｅｓｔ１５ ＭｄＮＣＥＤ１ꎬｔｈｅ ｒｅｃｏｍｂｉｎｅｄ ｐｌａｓｍｉｄ ｗａｓ ｔｒａｎｓｆｏｒｍｅｄ ｉｎ ｔｏ Ｅ. ｃｏｌｉ. ( ＤＥ３) ａｎｄ ｉｎｄｕｃｅｄ ｂｙ ＩＰＴＧ. Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔ ｏｆ ＳＤＳ ＰＡＧＥ ｄｅｍｏｎｓｔｒａｔｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｓｉｚｅ ｏｆ ｅｘｐｅｃｔｅｄ ｐｒｏｔｅｉｎ ｉｎ ｔｈｅ ｐｒｏｋａｒｙｏｔｉｃ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｓｙｓｔｅｍ. Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ ＰＣＲ ａｎａｌｙｓｉｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｔｒｅｎｄ ｏｆ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＳＨ２８ꎬＭ２６ꎬＳＨ４０ꎬａｎｄ ｔｈｅ ｇｒａｆｔｅｄ ｖａｒｉｅｔｉｅｓ Ｇａｌａ ｗｅｒｅ ｉｎｃｒｅａｓｅｄ ａｎｄ ｔｈｅｎ ｄｅｃｒｅａｓｅｄ. Ｔｈｅ ｅｘ ｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｔｈｉｓ ｇｅｎｅ ｗａｓ ｐｏｓｉｔｉｖｅｌｙ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｔｏ ｔｈｅ ｄｗａｒｆｉｎｇ ｄｅｇｒｅｅ. Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ:ａｐｐｌｅ ｒｏｏｔｓｔｏｃｋｓꎻｍｄｎｃｅｄ１ꎻｃｌｏｎｉｎｇꎻｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎꎻｐｒｏｋａｒｙｏｔｉｃ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ 脱落酸( ＡＢＡꎬａｂｓｃｉｓｉｃ ａｃｉｄ) 是一种非常重要的 矮化密植栽培因产量高 早果早产 低耗高效以 及方便生产管理ꎬ已成为现代苹果生产的发展趋势ꎮ 天然植物生长激素ꎬ是最早得到确认的五大类植物 矮化砧木的选育和利用ꎬ是实现矮化密植栽培的重 激素之一ꎮ 脱落酸参与了许多植物生长和发育过 要途径ꎮ 对果树机理进行深入研究ꎬ有助于推动苹 程ꎬ如种子萌发 幼苗生长 叶片气孔开闭和果实成 果矮化栽培的进一步发展ꎮ 熟等ꎮ 其中脱落酸作为生长抑制剂ꎬ是历来果树矮 收稿日期:２０１３ ０４ ２６ 修回日期:２０１３ ０６ ２４ 网络出版日期:２０１３ １２ １９ ＵＲＬ:ｈｔｔｐ: / / ｗｗｗ. ｃｎｋｉ. ｎｅｔ / ｋｃｍｓ / ｄｅｔａｉｌ / １１. ４９９６. Ｓ. ２０１３１２１９. １１１４. ００８. ｈｔｍｌ 基金项目:国家现代苹果产业技术体系( ＣＡＲＳ ２８) 第一作者研究方向为果树结实生理与分子生物学ꎮ Ｅ ｍａｉｌ:ｊｉａｎｇｚｈｉａｎｇ２００７ １６３. ｃｏｍ 通信作者:孙建设ꎬ研究方向为苹果砧木评价与利用ꎮ Ｅ ｍａｉｌ:ｊｉａｎｓｈｅａｐｐｌｅ １６３. ｃｏｍ 彭建营ꎬ研究方向为果树分子生物学ꎮ Ｅ ｍａｉｌ:ｐｊｙ ｈｅｂａｕ. ｅｄｕ. ｃｎ
2 154 植 物 遗 传 资 源 学 报 15 卷 [1] 化 机 理 研 究 的 热 点 问 题 ꎮ 邵 开 基 等 研 究 发 现 ABA 含 量 与 树 体 矮 化 呈 显 著 负 相 关 ꎬ 树 体 愈 矮 化 ꎬ [2] 叶 片 ABA 含 量 越 高 ꎮ 牛 自 勉 等 通 过 对 M 系 S 系 和 SH 系 苹 果 砧 木 的 相 关 分 析 也 表 明 叶 片 ABA 含 量 水 平 与 树 体 高 度 树 干 周 长 及 新 梢 长 度 均 呈 显 著 [3] 负 相 关 ꎮ 赵 大 中 等 对 柑 橘 的 研 究 也 证 明 ꎬ 随 着 株 [4] 高 的 增 加 ꎬABA 水 平 下 降 ꎮ 张 志 华 等 在 试 验 中 发 现 ꎬ 核 桃 实 生 苗 的 ABA 含 量 与 树 体 生 长 势 呈 显 著 负 [5] 相 关 ꎮ 曹 敏 格 等 研 究 表 明 苹 果 砧 木 叶 片 的 ABA 含 量 可 以 有 效 地 反 映 砧 木 的 生 长 势 强 弱 ꎬ 可 用 于 苹 果 砧 木 的 矮 化 预 选 ꎮ 矮 化 密 植 栽 培 是 目 前 研 究 的 关 注 点 ꎬ 但 在 苹 果 砧 木 选 育 过 程 中 存 在 砧 木 嫁 接 品 种 后 ꎬ 矮 化 类 型 与 砧 木 本 身 生 长 势 并 不 一 致 ꎬ 即 矮 生 砧 木 并 不 一 定 在 嫁 接 品 种 后 导 致 其 矮 化 ꎮ 因 此 观 察 砧 木 的 矮 化 效 果 需 要 树 体 生 长 到 一 定 年 份 才 能 得 到 初 步 结 论 ꎬ 并 且 在 传 统 的 研 究 方 法 中 要 定 期 测 量 新 梢 的 生 长 量 ꎬ 测 定 内 源 激 素 含 量 等 ꎬ 这 一 矛 盾 也 导 致 目 前 育 种 工 作 的 繁 琐 ꎮ 并 且 果 树 矮 生 机 理 研 究 主 要 集 中 在 生 理 方 面 ꎬ 以 分 子 生 物 学 为 手 段 的 研 究 基 础 较 为 薄 弱 ꎮ 生 化 与 遗 传 研 究 已 经 证 明 ꎬ9 顺 式 环 氧 类 胡 萝 卜 素 双 加 氧 酶 ( NCED) 是 高 等 植 物 ABA 生 物 合 成 途 径 的 关 键 酶 [6] ꎮ 研 究 同 时 表 明 ꎬ 在 植 物 体 中 NCED 以 基 因 家 族 的 形 式 存 在 ꎬ 并 且 其 表 达 量 的 变 化 与 ABA 含 量 的 变 化 有 直 接 关 系 [7 9] ꎮ 编 码 NCED 的 基 因 首 先 在 玉 米 中 通 过 viviparousl4 ( vpl4 ) 突 变 体 得 到 验 证 [10] ꎮ 在 番 茄 的 一 个 ABA 缺 乏 的 突 变 体 notabilis 中 分 离 到 了 与 vpl4 相 关 的 基 因 LeNCED [11] ꎮ 目 前 许 多 植 物 NCED 基 因 已 经 克 隆 和 鉴 定 ꎬ 包 括 豌 豆 (Phaseolus vulgaris) [12] 豇 豆 (Vigna unguiculata) [13] 鳄 梨 (Persea americana) [14] 柑 橘 (Citrus sinensis) [15] 柿 子 ( Diospyros kaki) [16] 牡 丹 ( Paeonia suffruticosa Andr. ) [17] 和 枸 杞 (Lycium barbarum) [18] 等 ꎮ 本 研 究 以 苹 果 砧 木 为 试 材 ꎬ 克 隆 NCED 基 因 以 及 研 究 该 基 因 在 苹 果 砧 木 及 其 嫁 接 品 种 生 长 发 育 期 的 表 达 情 况 ꎬ 不 仅 是 为 研 究 苹 果 矮 生 机 理 及 为 砧 木 初 选 提 供 一 个 快 速 的 分 子 检 测 方 法 ꎬ 也 是 为 以 后 利 用 基 因 调 控 技 术 改 良 树 型 与 抗 性 提 供 分 子 依 据 ꎮ 1 材 料 与 方 法 1 1 植 物 材 料 基 因 克 隆 试 验 以 2 年 生 苹 果 矮 生 砧 木 SH40 (Malus domestica M. Honanensis) 茎 尖 为 试 验 材 料 ꎻ 荧 光 定 量 试 验 材 料 为 2 年 生 苹 果 矮 生 砧 木 SH40 SH28 (M. domestica M. Honanensis) M26( M. dom estica Mill. M26) 及 其 嫁 接 品 种 嘎 啦 ( M. domestica Mill. Gala) 距 茎 尖 3 ~ 4 片 完 全 展 开 的 叶 片 ꎬ 于 2012 年 6 月 1 日 至 9 月 7 日 每 隔 10 d 取 样 ꎮ 样 品 均 取 自 河 北 农 业 大 学 何 家 营 果 树 试 验 站 ꎮ 1 2 NCED 基 因 cdna 全 长 序 列 克 隆 采 用 Trizol 试 剂 ( Takara 公 司 ) 提 取 苹 果 总 RNAꎮ 3 RACE cdna 第 1 链 合 成 参 照 TaKaRa RNA Kit(AMV3 0) 使 用 说 明 进 行 操 作 ꎻ5 RACE cdna 第 1 链 合 成 参 照 SMART TM RACE cdna Amplification Kit 使 用 说 明 进 行 操 作 ꎮ 根 据 已 报 道 或 登 录 Gen Bank 的 其 他 植 物 NCED 基 因 序 列 设 计 简 并 引 物 ( 表 1)ꎬ 由 上 海 生 工 工 程 技 术 有 限 公 司 合 成 ꎮ 以 提 取 的 总 RNA 反 转 录 获 得 的 cdna 第 1 条 链 为 模 板 ꎬ 用 简 并 引 物 A1 与 A2 进 行 中 间 片 段 的 扩 增 ꎮ PCR 程 序 为 :94 预 变 性 3 minꎻ94 变 性 1 minꎬ55 退 火 1 minꎬ72 延 伸 1 minꎬ40 个 循 环 ꎻ 72 终 延 伸 10 minꎮ 以 3 RACE 反 转 录 获 得 的 cdna 第 1 条 链 为 模 板 ꎬ 在 获 得 中 间 片 段 的 基 础 上 设 计 引 物 B1 和 B2ꎬ 并 与 试 剂 盒 通 用 引 物 C1 和 C2 配 对 进 行 3 cdna 末 端 扩 增 ꎮ PCR 程 序 为 :Outer PCR:94 预 变 性 3 minꎻ 94 变 性 30 sꎬ55 退 火 30 sꎬ72 延 伸 1 minꎬ20 个 循 环 ꎻ72 终 延 伸 10 minꎮ Inner PCR:94 预 变 性 3 minꎻ94 变 性 30 sꎬ55 退 火 30 sꎬ72 延 伸 1 minꎬ30 个 循 环 ꎻ72 终 延 伸 10 minꎮ 根 据 MdGA20ox1 中 间 片 段 设 计 特 异 性 引 物 D1 D2ꎬ 分 别 与 试 剂 盒 通 用 引 物 UPM NUP 配 对 进 行 巢 式 PCRꎮ 以 5 RACE Ready 反 应 液 为 模 板 ꎬ 以 D1 与 UPM 为 引 物 进 行 反 应 :94 变 性 4 minꎻ94 反 应 30 sꎬ72 反 应 1 minꎬ 进 行 5 次 循 环 ꎻ94 反 应 30 sꎬ70 反 应 30 sꎬ72 反 应 1 minꎬ 进 行 5 次 循 环 ꎻ94 反 应 30 sꎬ68 反 应 30 sꎬ72 反 应 1 minꎬ 进 行 25 次 循 环 ꎻ 然 后 72 延 伸 10 minꎮ 2 次 反 应 将 1 次 反 应 产 物 稀 释 50 倍 为 模 板 ꎬD2 与 NUP 为 引 物 ꎬ 进 行 反 应 :94 变 性 4 minꎻ94 反 应 30 sꎬ 68 反 应 30 sꎬ72 反 应 1 minꎬ 进 行 20 次 循 环 ꎻ 然 后 72 延 伸 10 minꎮ 利 用 2 0% 的 琼 脂 糖 凝 胶 电 泳 并 回 收 扩 增 特 异 性 片 段 ꎬ 经 转 化 酶 切 回 收 后 ꎬ 送 样 测 序 ꎮ 1 3 生 物 信 息 学 分 析 利 用 DNAMAN 6 0 软 件 对 MdNCED1 基 因 的 中 间 片 段 3 末 端 5 末 端 序 列 进 行 拼 接 分 析 ꎻ 该 基 因 的 核 苷 酸 和 翻 译 的 氨 基 酸 序 列 分 别 利 用 NCBI 的
3 1 期 姜 志 昂 等 : 苹 果 砧 木 SH40 MdNCED1 基 因 克 隆 与 表 达 分 析 155 BLASTn 和 BLASTp ( http: / / balst. ncbi. nlm. nih. Gov / Blast. cgi) 与 相 应 序 列 进 行 相 似 性 分 析 ꎻ 利 用 Clustal 1 83 与 Mega 4 0 构 建 苹 果 砧 木 SH40 与 平 邑 甜 茶 克 莱 门 柚 蓖 麻 番 茄 烟 草 草 莓 萝 卜 葡 萄 拧 条 锦 鸡 儿 花 生 菊 花 中 粒 咖 啡 马 铃 薯 豌 豆 和 拟 南 芥 NCED 氨 基 酸 序 列 同 源 进 化 树 ꎻ 利 用 Ex PASy 在 线 软 件 分 析 ( http: / / www. expasy. ch / pros ite / )MdNCED1 氨 基 酸 的 功 能 结 构 域 ꎻ 利 用 在 线 软 件 PSORT ( http: / / psort. ims. u tokyou. ac. jp / form. html) 进 行 亚 细 胞 定 位 分 析 ꎻ 利 用 TMHMM Server v 2 0 程 序 ( http: / / www. cbs. dtu. dk / services / TM HMM / ) 进 行 蛋 白 跨 膜 序 列 跨 膜 区 分 析 ꎻ 利 用 PBIL LYON GERLAND 对 GA20ox1 进 行 二 级 结 构 预 测 (http: / / npsa pbil. ibcp. fr / cgi bin / secpred_hnn. pl)ꎻ 蛋 白 质 三 级 结 构 预 测 采 用 SWISS MODEL( http: / / swissmodel. expasy. org / workspce / index. php? func = modelling_simple) ꎮ 1 4 通 过 Gateway 技 术 构 建 原 核 表 达 载 体 设 计 引 物 E1 与 E2( 表 1)ꎬ 在 正 向 引 物 E1 的 5 端 加 上 CACC 4 个 碱 基 ꎮ 扩 增 MdNCED1 基 因 的 开 放 阅 读 框 ꎬ 通 过 TOPO 反 应 将 该 基 因 克 隆 到 TOPO 载 体 上 ꎬ 然 后 与 目 的 载 体 pdest15 进 行 LR 重 组 ꎬ 经 转 化 大 肠 杆 菌 ꎬ 氨 苄 青 霉 素 抗 性 筛 选 后 ꎬ 获 得 pd EST15 MdNCED1 质 粒 的 菌 落 ꎮ 经 菌 液 PCR 测 序 验 证 后 进 行 后 续 试 验 ꎮ 1 5 融 合 蛋 白 的 诱 导 表 达 和 SDS PAGE 电 泳 分 析 将 重 组 质 粒 空 质 粒 均 转 入 大 肠 杆 菌 Rosseta (DE3) 感 受 态 细 胞 中 ꎬ 挑 取 单 菌 落 接 种 于 10 ml 液 体 LB 培 养 基 中 ( 含 100 μg / ml AMP + ) 中 ꎬ 在 灭 菌 的 三 角 瓶 中 r / min 过 夜 培 养 ꎮ 将 菌 液 按 1 50 稀 释 ꎬ 并 加 入 2% 的 葡 萄 糖 ꎬ r / min 继 续 培 养 2 ~ 3 hꎬ 使 之 OD 600 达 到 0 5 ~ 0 7ꎮ 收 集 诱 导 前 1 ml 菌 液 后 ꎬ 加 入 终 浓 度 为 0 5 mmol / L ITPGꎬ28 分 别 振 荡 培 养 1 h 2 h 3 h 4 h 5 h 6 h 诱 导 MdNCED1 表 达 ꎮ 诱 导 完 成 后 ꎬ6000 r / min 离 心 ꎬ 收 集 上 清 液 加 入 2 上 样 缓 冲 液 ꎬ 沸 水 浴 5 minꎬ 冰 上 冷 却 后 ꎬ 取 25 μl 进 行 SDS PAGE 电 泳 分 析 ( 浓 缩 胶 4% ꎬ 分 离 胶 12% )ꎮ 1 6 荧 光 定 量 表 达 分 别 提 取 不 同 时 期 2 年 生 矮 化 砧 木 SH28 M26 SH40 及 其 嫁 接 品 种 嘎 啦 的 总 RNAꎬ 用 DNase Ⅰ 酶 纯 化 后 ꎬ 采 用 Fermentas 试 剂 盒 逆 转 录 cdnaꎬ 作 为 模 板 ꎮ 为 确 保 荧 光 定 量 PCR 的 特 异 性 ꎬ 在 该 基 因 保 守 区 设 计 引 物 F1 与 F2( 表 1)ꎮ 以 苹 果 中 的 β actin 基 因 为 内 参 ꎬ 设 计 内 参 基 因 特 异 性 引 物 G1 与 G2ꎬ 采 用 荧 光 定 量 PCR 对 MdGA20ox1 基 因 进 行 生 长 发 育 期 表 达 分 析 ꎮ 反 应 体 系 上 下 游 引 物 各 0 4 μlꎬ10 4 μl 反 应 Mixtureꎬ3 8 μlddh 2 Oꎬ 总 体 系 15 μlꎮ 反 应 程 序 为 95 预 变 性 30 sꎬ95 变 性 5 sꎬ60 退 火 30 sꎬ40 个 循 环 ꎻ 反 应 结 束 后 ꎬ 确 认 Real Time PCR 的 扩 增 曲 线 和 溶 解 曲 线 ꎬ 试 验 3 次 重 复 ꎬ 记 录 数 值 ꎮ 表 1 引 物 序 列 及 用 途 Table 1 Sequence and application of primers 编 号 序 列 (5 3 ) 用 途 Code Primer sequence Application A1 GCCCACCATGATKCAYGAYT 中 间 片 段 扩 增 A2 CTTCTCGTCGTGMACRAAHG Middle fragment ampli fication B1 CTCGGTTCGCTTACCTCGC 3 RACE B2 ACGGTGGTGAGCCGTTTTTCG 3 RACE C1 CGCGGATCCTCCACTAGT 3 RACE GATTTCACTATAGG C2 TACCGTCGTTCCACTAGTGATTT 3 RACE D1 GCAGAACGTGTCGGGAGAGTC 5 RACE D2 GATCATCTCTCCGAGCTTGAACAC 5 RACE UPM CTAATACGACTCACTAAT ACGACTCACTATAGGGCAAG CAGTGGTATCAACGCAGAGT 5 RACE NUP AAGCAGTGGTATCAACG 5 RACE CAGAGT E1 CACCATGTCAACTCTTC MdNCED1 基 因 ORF 扩 增 CAAAAGCACC E2 TGCCTGATTTACCAAGTCCTTCG Complete ORF amplifica tion of MdNCED1 gene F1 TCGGAGGACGACGGTTATATTC 荧 光 定 量 RT PCR F2 CCATGAAACCCGTAGGGCAC Fluorescent quantitative RT PCR G1 CTGAACCCAAAGGCTAATCG 荧 光 定 量 PCR G2 ACTGGCGTAGAGGGAAAGAA Fluorescent quantitative RT PCR 下 划 线 为 保 护 性 碱 基 Underlines in primer sequence is protective bases 2 结 果 与 分 析 2 1 苹 果 MdNCED1 cdna 全 长 的 获 得 及 序 列 分 析 以 苹 果 砧 木 SH40 新 梢 总 RNA 的 反 转 录 产 物 为 模 板 进 行 RT PCR 扩 增 ꎬ 以 A1 与 A2 为 引 物 ꎬ 扩 增 产 物 经 测 序 后 得 到 643 bpꎬ 以 B1 / C1 B2 / C2 引 物 ꎬ 通 过 3 RACE 获 得 长 度 244 bp 的 片 段 ꎻ 以 D1 / UPM D2 / NUP 为 引 物 ꎬ 通 过 5 RACE 扩 增 获 得 5 端 的 1478 bp 的 片 段 ( 图 1)ꎮ
4 １５６ 植 物 遗 传 资 源 学 报 １５ 卷 基酸序列 与 ＧｅｎＢａｎｋ 数 据 库 中 的 其 他 物 种 ＮＣＥＤ 编码 的 氨 基 酸 序 列 进 行 同 源 性 比 较ꎬ 结 果 表 明: ＮＣＥＤ 蛋白的 Ｎ 端序列保守性较低ꎬＣ 端序列相对 保守ꎮ 苹果砧木 ＳＨ４０ 与泰山海棠 草莓和番茄等 １５ 个物种的 ＮＣＥＤ 蛋白氨基酸序列一致性( ｉｎｄｅｎｔｉ 图 １ ＭｄＮＣＥＤ１ 中间片段(Ａ) ３ ＲＡＣＥ(Ｂ) 及 ５ ＲＡＣＥ(Ｃ)扩增结果 Ｆｉｇ １ ＭｄＮＣＥＤ１ ｇｅｎｅ ｆｒａｇｍｅｎｔ ( Ａ) ꎬ３ ＲＡＣＥ ｐｒｏｄｕｃｔ ( Ｂ) ꎬａｎｄ ５ ＲＡＣＥ ｐｒｏｄｕｃｔ ( Ｃ) 将获得的 ３ 个片段通过 ＤＮＡＭＡＮ ６ ０ 软件进行 ｔｙ) 比较ꎬ其中与同为苹果属的平邑甜茶的同源性最 高为 ９３ ０ ꎬ与蔷薇科的草莓同源性次之为 ７６ ４ ꎬ 与模式植物拟南芥的同源性最低为 ６３ ７ ꎮ 在进一步的进化关系分析中ꎬ使用 ＭＥＧＡ ４ ０ 对包括 ＳＨ４０ 在内的 １６ 个物种构建 ＮＣＥＤ 氨基酸 系统进化树( 图 ３) ꎮ 序列拼接ꎬ获得 ＭｄＮＣＥＤ１ 的 ｃｄｎａ 全长为 ２１７９ ｂｐꎮ ２ ３ ＭｄＮＣＥＤ１ 的生物信息学分析 读框(ＯＲＦ)ꎬ３３８ ｂｐ 的 ５ 非翻译区(５ ＵＴＲ)ꎬ１０ ｂｐ 的 白的相对分子量为 ６６ ９ｋＤꎬ等电点为 ７ ０５( ＰＩ) ꎬ在 因在 ＧｅｎＢａｎｋ 数据库的登录号为 ＫＣ８１６７３４(图 ２)ꎮ Ｌｅｕ Ｖａｌ Ａｌａ 和 Ｇｌｙ 分别占总氨基酸数的 ８ ９１ ＭｄＮＣＥＤ１ 的全长序列包括长度为 １８２１ ｂｐ 的开放阅 ３ 非翻译区(３ ＵＴＲ)以及 １０ ｂｐ 的 Ｐｏｌｙ(Ａ)结构ꎬ该基 ２ ２ ＭｄＮＣＥＤ１ 推导的氨基酸序列的同源性及系 统进化分析 通过 ＤＮＡＭＡＮ ６ ０ 软件对 ＭｄＮＣＥＤ１ 编码的氨 利用 ＤＮＡＭＡＮ ６ ０ 软件分析表明 ＭｄＮＣＥＤ１ 蛋 氨基酸组成中ꎬ部分氨基酸出现频率较高ꎬ如 Ｓｅｒ ７ ７６ ７ ７６ ７ ２６ 和 ７ ２６ ꎻ一些出现频率则 较低ꎬ如 Ｃｙｓ Ｔｒｐ６９ 则仅占 ０ ９９ １ １６ ꎮ 图 ２ ＭｄＮＣＥＤ１ 基因 ｃｄｎａ 全长及其推导的氨基酸序列 Ｆｉｇ ２ Ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｏｆ ｔｈｅ ｏｐｅｎ ｒｅａｄｉｎｇ ｆｒａｍｅ ｏｆ ＭｄＮＣＥＤ１ ａｎｄ ｔｈｅ ｄｅｄｕｃｅｄ ａｍｉｎｏ ａｃｉｄｓ
5 １期 姜志昂等:苹果砧木 ＳＨ４０ ＭｄＮＣＥＤ１ 基因克隆与表达分析 １５７ 过试验验证的 ３Ｄ 模型ꎬ并且该模型与目标序列有 较高的相似性ꎮ 本试验通过 ＳＷＩＳＳ ＭＯＤＥＬ 软件ꎬ以 单体蛋白(ＰＤＢ Ｃｏｄｅ:３ｎｐｅａ) 为模板ꎬ对 ＭｄＮＣＥＤ１ 三 级结构进行同源建模ꎬ结果如图 ５ 所示ꎮ 图 ３ 苹果砧木 ＳＨ４０ 与其他物种 ＮＣＥＤ 氨基酸序列的系统进化树分析 Ｆｉｇ ３ Ｐｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃ ａｎａｌｙｓｉｓ ｂｅｔｗｅｅｎ ＭｄＮＣＥＤ１ ａｎｄ ＮＣＥＤ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｆｒｏｍ ｏｔｈｅｒ ｓｐｅｃｉｅｓ 通过在线软件 Ｗｏｌｆ ＰＳＯＲＴ 进行亚细胞定位表 明 ＭｄＮＣＥＤ１ 定位于叶绿体上ꎮ 通过 ＴＭＨＭＭ Ｓｅｒｖ ｅｒ ２ ０ 进行跨膜分析与 ＳｉｇｎａｌＰ ３ １ 进行信号肽分析 表明 ＭｄＮＣＥＤ１ 无跨膜( 图 ４) 和信号肽结构ꎮ 图 ５ ＳＷＩＳＳ ＭＯＤＥＬ 预测 ＭｄＮＣＥＤ１ ３Ｄ 结构图 Ｆｉｇ ５ Ｔｈｅ ｔｅｒｔｉａｒｙ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ｏｆ ＭｄＮＣＥＤ１ ｐｒｅｄｉｃｔｅｄ ｗｉｔｈ ＳＷＩＳＳ ＭＯＤＥＬ ２ ４ ＳＤＳ ＰＡＧＥ 分析 以大肠 杆 菌 Ｒｏｓｓｅｔａ ( ＤＥ３ ) 作 为 宿 主 菌ꎬ ｐｄ ＥＳＴ１５ 作 为 空 质 粒 对 照ꎬ 利 用 ＳＤＳ ＰＡＧＥ 分 析 ＭｄＮＣＥＤ１ 在大肠杆菌中的表达情况ꎮ ＤＮＡＭＡＮ ６ ０ 软件分析 ＭｄＮＣＥＤ１ 基因表达产物大约 ６６ ９ ｋｄꎬ表 达系统 Ｎ 端有 ＧＳＴ Ｔａｇ 序列表达约 ２６ ７ ｋｄ 大小的 蛋白以及重组后 ｌｉｎｋｅｒ 也会被诱导表达ꎬ因此融合 蛋白预期表达量在 ９５ ｋｄ 左右ꎮ ＳＤＳ ＰＡＧＥ 电泳分 析显示ꎬ分子量在 ９５ ｋｄ 的位置存在 １ 条融合蛋白诱 图 ４ ＭｄＮＣＥＤ１ 跨膜区域预测结果 Ｆｉｇ ４ Ｔｈｅ ｐｒｅｄｉｃｔｅｄ ｒｅｓｕｌｔ ｏｆ ＭｄＮＣＥＤ１ ｔｒａｎｓｍｅｍｂｒａｎｅ ｒｅｇｉｏｎ 利用软件 ＥｘＰＡＳｙ 软件分析 ＭｄＮＣＥＤ１ꎬ结果显 示:２８ ３１ １５１ １５４ ２６９ ２７２ ４３９ ４４２ ４７５ ４７８ ５４８ ５５１ 和 ５９５ ５９８ 为酪蛋白激酶 ＩＩ 磷酸化位点ꎻ３６ ３８ ４１ 导表达的条带ꎮ 并且在诱导 １ ~ ６ ｈ 均出现了目的条 带ꎬ而在空质粒和未诱导的转化重组质粒均未出现目 的蛋白带ꎮ 表明重组质粒 ｐｇｅｓｔ１５ ＭｄＮＣＥＤ１ 在大 肠杆菌中诱导表达了 ＳＨ４０ 苹果砧木 ＭｄＮＣＥＤ１ 蛋白 (图 ６)ꎮ 试验调整诱导时间 １ ~ ６ ｈꎬ目的条带的深度 变化不明显ꎬ蛋白表达量基本一致ꎮ ４３ ４４ ４６ ４７ ４９ ２０３ ２０５ ４６８ ４７０ ４６９ ４７１ 和 ５８１ ５８３ 为蛋白激酶 Ｃ 磷酸化位点ꎻ１０９ １１４ １８２ １８７ ２５０ ２５５ ２５２ ２５７ ３１２ ３１７ 和 ５４２ ５４７ 为 Ｎ 肉豆蔻酰位点 甘氨酸ꎻ５０ ５３ 为 Ｎ 糖 基 化 位 点ꎻ４８ ５１ 为 ｃａｍｐ 和 ｃｇｍｐ 依赖性蛋白激酶磷酸化位点ꎻ４９２ ４９５ 为酰胺 化位点ꎮ 同时该软件还显示ꎬ１０ ５２ 这段氨基酸序列 为一段富含丝氨酸(Ｓｅｒ)的低复杂度区域ꎮ 用 Ｈｏｐｆｉｅｌｄ 神经网络( ＨＮＮ) 预测 ＭｄＮＣＥＤ１ 的 氨基酸序列ꎬ结果表明ꎬＭｄＮＣＥＤ１ 的二级结构是由 α 螺旋 无规则卷曲和延展链构成ꎬ其中 α 螺旋有 １３５ 个占 ２２ ２８ ꎬ无规则卷曲有 ３４３ 个占 ５６ ６ ꎬ 延展链有 １２８ 个占 ２１ ２１ ꎮ 建立一个蛋白质的三级结构图ꎬ必须有一个经 Ｍ:蛋白 ｍａｒｋｅｒꎻａ:ｐｄｅｓｔ１５ 空载体诱导表达产物ꎬ箭头所指为标签 蛋白ꎬ０ ３ 为诱导表达时间ꎻＢ:ｐＤＥＳＴ１５ ＭｄＮＣＥＤ１ 诱导表达产物ꎬ 箭头所指为目标蛋白ꎬ０ ~ ６ 为诱导表达时间 Ｍ:ｐｒｏｔｅｉｎ ｍａｒｋｅｒꎬａ:ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｐｒｏｄｕｃｔｓ ｏｆ ｐｄｅｓｔ１５ꎬ ａｒｒｏｗ ｓｈｏｗｓ ｔａｇｇｅｄ ｐｒｏｔｅｉｎꎬｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ｆｏｒ ０ ａｎｄ ３ ｈꎬ Ｂ:Ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｐｒｏｄｕｃｔｓ ｏｆ ｐｄｅｓｔ１５ ＭｄＮＣＥＤ１ꎬ ａｒｒｏｗ ｓｈｏｗｓ ｔａｒｇｅｔ ｐｒｏｔｅｉｎꎬｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ｆｏｒ ０ ｔｏ ６ ｈ 图 ６ 诱导表达产物的 ＳＤＳ ＰＡＧＥ 分析 Ｆｉｇ ６ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｉｎｄｕｃｅｄ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｐｒｏｄｕｃｔｓ ｂｙ ＳＤＳ ＰＡＧＥ
6 １５８ 植 物 遗 传 资 源 学 报 １５ 卷 ２ ５ ＭｄＮＣＥＤ１ 基因荧光定量表达结果 低的水 平ꎮ ＳＨ２８ 与 ＳＨ４０ 生 长 势 基 本 一 致ꎬ ＳＨ４０ ＳＨ４０ Ｍ２６ ＳＨ２８ 及其嫁接品种嘎啦生长发育阶段 表达量基本与 ３ 种不同砧木类型的生长势呈正相 采用荧光定量 ＰＣＲ 研究了 ＭｄＮＣＥＤ１ 基因在 的表达情况ꎬ试验结果表明ꎬ在 ６ 月 １ １２ 日这一时 稍强于 ＳＨ２８ꎮ 从图 ７ 中可以看到 ＭｄＮＣＥＤ１ 基因 关ꎮ 而嫁接品种嘎啦后ꎬＳＨ２８ 是半矮化类型ꎬＭ２６ 期ꎬ３ 种砧木类型及其嫁接品种嘎啦的 ＭｄＮＣＥＤ１ 基 ＳＨ４０ 均是矮化类型ꎻ矮化类型 Ｍ２６ 稍强于 ＳＨ４０ꎮ 的最低值ꎮ 在以后的时期中ꎬ表达量维持在一个较 种后的 ３ 个砧木类型的矮化程度均呈正相关ꎮ 因表达量均呈上升趋势ꎬ随后迅速下降至 ６ 月 ２３ 日 从图 ８ 中可以发现 ＭｄＮＣＥＤ１ 基因表达量与嫁接品 图 ７ ＳＨ２８ Ｍ２６ ＳＨ４０ 在生长发育期 ＭｄＮＣＥＤ１ 基因荧光定量 ＰＣＲ 检测结果 Ｆｉｇ ７ ｑｐｃｒ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ＭｄＮＣＥＤ１ ｇｅｎｅ ｆｏｒ ｔｈｅ ＳＨ２８ꎬＭ２６ꎬａｎｄ ＳＨ４０ ａｔ ｔｈｅ ｇｒｏｗｉｎｇ ｔｉｍｅ 图 ８ ＳＨ２８ Ｍ２６ ＳＨ４０ 嫁接品种嘎啦后在生长发育期 ＭｄＮＣＥＤ１ 基因荧光定量 ＰＣＲ 检测结果 Ｆｉｇ ８ ｑｐｃｒ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ＭｄＮＣＥＤ１ ｇｅｎｅ ｆｏｒ ｔｈｅ ＳＨ２８ꎬＭ２６ꎬａｎｄ ＳＨ４０ ｇｒａｆｔｅｄ ｖａｒｉｅｔｉｅｓ Ｇａｌａ ａｔ ｔｈｅ ｇｒｏｗｉｎｇ ｔｉｍｅ ＮＣＥＤ 蛋白的体外表达研究很少ꎮ 了解其植物体内 ３ 讨论 本试验以 ＳＨ４０ 苹 果 砧 木 快 速 生 长 茎 尖 为 试 材ꎬ通过 ＲＡＣＥ 技术从中克隆得到 １ 个 ２１７９ ｂｐ 的 完整 ｃｄｎａ 序列ꎬ通过对其氨基酸序列进行保守结 构域分析ꎬ表明该基因属于超家族 ＲＰＥ６５ 系ꎬ该家 族包含了植物的新黄质裂解酶的序列ꎬ并且该氨基 酸序列含有多个磷酸化 酰基化和糖基化位点ꎮ 丝 氨酸 苏氨酸的磷酸化位点通过磷酸化和脱磷酸化 的生化功能ꎬ必须从蛋白水平上进行研究ꎮ 原核表 达系统为研究 ＮＣＥＤ 蛋白的表达和功能提供了一 个有效的途径 [２０] ꎮ 本研究将 ＳＨ４０ 苹果砧木类型 的 ＮＣＥＤ 基 因 与 原 核 表 达 载 体 ｐｄｅｓｔ１５ 通 过 Ｇａｔｅｗａｙ 技 术 重 组 [２１] ꎬ 转 入 大 肠 杆 菌 Ｒｏｓｓｅｔａ ( ＤＥ３) 诱导表达ꎬ通过 ＳＤＳ ＰＡＧＥ 电泳分析表明ꎬ ＳＨ４０ 苹果砧 木 类 型 的 ＮＣＥＤ 基 因 能 够 与 ＧＳＴ 标 签蛋白形成 融 合 蛋 白ꎬ并 在 原 核 表 达 体 系 中 正 确 以及甘氨酸的酰基化位点通过酰基化调节细胞内已 表达ꎮ 速反应更为有效ꎬ糖基化是蛋白质重要的翻译后修 环境胁迫的适应反应ꎮ 目前的研究认为ꎬＡＢＡ 除了 饰ꎬ可以进一步增加蛋白质的稳定性ꎬ均表明其催化 参与逆境生理反应ꎬ也在调控植物矮化中具有重要 存在酶的 活性酶量 ꎬ使细胞对外界刺激做出的迅 功能的复杂性 ꎮ 迄今为 止ꎬ 虽 然 在 鳄 梨 [１４] 柑 橘 [１５] 柿 子 [１６] 牡丹 [１７] 和枸杞 [１８] 等植物中克隆分析了多个 ＮＣＥＤ [１９] 基因ꎬ但研究主要集中在 ＮＣＥＤ 基因在逆境胁迫 花 朵 的 开 放 衰 老 以 及 果 实 成 熟 时 的 表 达 情 况ꎬ 对 ＡＢＡ 广泛参与植物生长发育的调控和对多种 作用ꎮ 本试验以利用实时荧光定量 ＰＣＲ 研究相同 立地条件下ꎬＳＨ４０ ＳＨ２８ 和 Ｍ２６ ３ 种不同苹果砧木 及其嫁接品种嘎啦在生长发育阶段 ＡＢＡ 合成关键 基因 ＭｄＮＣＥＤ１ 基 因 的 表 达 情 况ꎮ 试 验 结 果 表 明 ＭｄＮＣＥＤ１ 基因在 ３ 个砧木类型及其嫁接品种中的
7 1 期 姜 志 昂 等 : 苹 果 砧 木 SH40 MdNCED1 基 因 克 隆 与 表 达 分 析 159 表 达 趋 势 基 本 一 致 ꎬ 均 是 从 6 月 初 的 高 水 平 的 峰 值 迅 速 下 降 ꎮ 同 时 该 基 因 的 表 达 情 况 与 苹 果 幼 树 的 生 长 动 态 基 本 一 致 ꎬ6 月 初 是 苹 果 幼 树 的 生 长 停 止 期 ꎬ 此 时 MdNCED1 基 因 的 表 达 量 最 高 ꎮ 随 着 苹 果 秋 稍 的 加 速 生 长 ꎬ 该 基 因 的 表 达 量 降 低 ꎬ 维 持 在 较 低 的 水 [22] [23] 平 ꎮ 付 蕾 等 和 毕 桂 红 等 的 研 究 均 发 现 苹 果 幼 树 内 源 激 素 ABA 含 量 的 周 年 发 生 动 态 与 新 梢 的 生 长 趋 势 相 反 ꎬ 在 新 梢 旺 盛 生 长 期 ABA 含 量 降 低 ꎬ 在 新 梢 停 长 期 ABA 含 量 升 高 ꎮ 本 试 验 还 发 现 MdNCED1 基 因 的 表 达 量 与 3 个 砧 木 类 型 的 生 长 势 及 其 嫁 接 品 种 嘎 啦 的 矮 化 程 度 呈 显 著 正 相 关 ꎬ 生 长 势 最 弱 的 M26 其 MdNCED1 基 因 在 生 长 发 育 阶 段 表 达 水 平 较 高 ꎻ 而 生 长 势 较 强 的 SH40ꎬ 其 MdNCED1 基 因 表 达 量 基 本 维 持 在 一 个 较 低 的 水 平 ꎻ 在 7 月 4 日 SH40 MdNCED1 基 因 表 达 量 显 著 高 于 SH28ꎬ 可 能 是 不 同 砧 木 类 型 在 生 长 节 奏 上 有 差 异 造 成 的 ꎬ 在 整 个 发 育 阶 段 SH40 MdNCED1 基 因 表 达 量 均 低 于 SH28ꎮ 嫁 接 品 种 后 半 矮 化 类 型 SH28 MdNCED1 基 因 的 表 达 量 显 著 低 于 矮 化 类 型 SH40 与 M26ꎮ 均 表 明 ABA 是 调 控 树 体 矮 化 程 度 的 重 要 因 素 之 一 ꎮ 植 物 的 生 长 发 育 是 由 基 因 调 控 的 ꎬ 因 此 转 基 因 育 种 也 是 目 前 和 未 来 的 重 要 研 究 方 向 之 一 ꎮ 本 研 究 为 从 分 子 水 平 上 进 行 砧 木 早 期 筛 选 以 及 通 过 基 因 干 涉 和 超 表 达 转 基 因 工 程 验 证 其 基 因 功 能 奠 定 了 一 定 的 基 础 ꎮ 参 考 文 献 [1] 邵 开 基 ꎬ 牛 自 勉 ꎬ 张 忠 仁 ꎬ 等. 苹 果 砧 木 矮 化 程 度 与 ABA 含 量 的 关 系 [J]. 园 艺 学 报 ꎬ1987ꎬ14(1):7 11 [2] 牛 自 勉 ꎬ 梁 德 声 ꎬ 房 耀 仁. 苹 果 砧 木 脱 落 酸 与 树 体 生 长 规 律 的 研 究 [J]. 北 京 林 业 大 学 学 报 ꎬ1991ꎬ13(3):50 55 [3] 赵 大 中 ꎬ 陈 民 ꎬ 罗 先 实. 不 同 种 类 柑 橘 幼 苗 生 长 势 与 叶 片 过 氧 化 物 酶 活 性 GA 3 和 ABA 含 量 的 关 系 [ J]. 果 树 科 学 ꎬ1998ꎬ15 (3): [4] 张 志 华 ꎬ 刘 新 彩 ꎬ 刘 彦 红 ꎬ 等. 核 桃 幼 树 内 源 激 素 与 生 长 势 的 关 系 [J]. 林 业 科 学 ꎬ2006ꎬ42(9): [5] 曹 敏 格 ꎬ 杨 海 玲 ꎬ 张 文 ꎬ 等. 苹 果 砧 木 矮 化 性 评 价 指 标 的 研 究 [J]. 中 国 农 业 大 学 学 报 ꎬ2008ꎬ13(5):11 18 [6] Ren H BꎬGeo Z HꎬChen L. Dynamic analysis of ABA accumula tion in relation to the rate of ABA catabolism in maize tissue un der water deficit[ J]. J Exp Botꎬ2007ꎬ58(2): [7] Yang J FꎬGuo Z F. Cloning of a 9 cis epoxycarotenoid dioxygen ase gene ( SgNCED1) from Stylosanthes guianensis and its ex pression in response to abiotic stresses [ J]. Plant Cell Repꎬ 2007ꎬ26: [8] Zhang MꎬLeng PꎬZhang G Lꎬet al. Cloning and function analysis of 9 cis epoxycarotenoid dioxygenase ( NCED) genes encoding a key enzyme during abscisic acid biosynthesis from peach and grape fruits [ J]. J Plant Physiolꎬ2009ꎬ166(12): [9] Hu BꎬLiu XꎬHong Lꎬet al. Expression and localization of arachis hypogaea 9 cis epoxycarotenoid dioxygenase 1 ( AhNCED1 ) of peanut under water stress [ J]. Agric Environ Biotechꎬ2010ꎬ24 (1): [10] Tan B CꎬSchwartz S HꎬZeevaart J A Dꎬet al. Genetic control of abscisic acid biosynthesis in acid biosynthesis in maize[ J]. Proc Natl Acad Sci USAꎬ1997ꎬ94: [11] Burbidge AꎬGrieve T MꎬJackson Aꎬet al. Characterization of the ABA deficient tomato mutant notabilis and its relationship with maize Vp14[ J]. Plant Jꎬ1999ꎬ17: [12] Qin XꎬZeevaart J A. The 9 cis epoxycarotenoid cleavage reaction is the key regulation step of abscisic acid biosynthesis in water stressed bean [ J ] Proc Natl Acad Sci USAꎬ 1999ꎬ 96: [13] Iuchi SꎬKobayashi MꎬYamaguchi Shinozaki Kꎬet al. A stress in ducible gene for 9 cis epoxycarotenoid dioxygenase involved in abscisic acid biosynthesis under water stress in drought tolerant cow pea [ J]. Plant Physiolꎬ2000ꎬ123: [14] Chernys J TꎬZeevaart J A. Characterization of the 9 cis epoxycar otenoid dioxygenase gene family and the regulation of abscisic acid biosynthesis in avocado [ J ]. Plant Physiolꎬ 2000ꎬ 124: [15] Rodrigo M JꎬAlquezar BꎬZacaras L. Cloning and characterization of two 9 cis epoxycarotenoid dioxygenase genesꎬdifferentially reg ulated during fruit maturation and under stress conditionsꎬ from orange(citrus sinensis L. Osbeck) [J]. J Exp Botꎬ2006ꎬ57(3): [16] Leng PꎬZhang G LꎬLi X Xꎬet al. Cloning of 9 cis epoxycarote noid dioxygenase ( NCED) gene encoding a key enzyme during abscisic acid ( ABA) biosynthesis and ABA regulated ethylene production in detached young persimmon calyx[ J]. Chinese Sci Bullꎬ2009ꎬ54: [17] 王 晓 庆 ꎬ 张 超 ꎬ 董 丽 ꎬ 等. 牡 丹 NCED 基 因 的 克 隆 和 表 达 分 析 [J]. 园 艺 学 报 ꎬ2012ꎬ39(10): [18] 陆 平 ꎬ 田 悦 胜 ꎬ 王 名 雪 ꎬ 等. 枸 杞 脱 落 酸 生 物 合 成 关 键 酶 基 因 NCED 的 克 隆 及 表 达 分 析 [ J]. 植 物 遗 传 资 源 学 报 ꎬ2013ꎬ14 (2): [19] 吴 娟 娟 ꎬ 吴 倩 ꎬ 喻 德 跃. 大 豆 丙 二 烯 氧 化 物 合 酶 基 因 ( GmAOS) 及 其 启 动 子 的 克 隆 与 分 析 [ J]. 作 物 学 报 ꎬ2011ꎬ 37 ( 2 ): [20] 宋 杨 ꎬ 张 艳 敏 ꎬ 陈 学 森 ꎬ 等. 短 枝 型 苹 果 MdRGL 基 因 的 克 隆 及 原 核 表 达 分 析 [J]. 中 国 农 业 科 学 ꎬ2012ꎬ45(7): [21] 毕 慧 慧 ꎬ 王 根 平 ꎬ 王 成 社 ꎬ 等. 单 子 叶 植 物 RNA 干 扰 和 过 表 达 Gateway 载 体 的 构 建 [ J]. 植 物 资 源 遗 传 学 报 ꎬ2013ꎬ14 (1): [22] 付 蕾 ꎬ 王 明 林 ꎬ 高 吉 刚 ꎬ 等. 苹 果 幼 树 4 种 內 源 激 素 周 年 发 生 动 态 研 究 [J]. 山 东 农 业 大 学 学 报 : 自 然 科 学 版 ꎬ2000ꎬ31(2): [23] 毕 桂 红 ꎬ 吴 耕 西 ꎬ 张 国 珍. 苹 果 幼 树 内 源 生 长 素 脱 落 酸 的 周 年 变 化 [J]. 山 东 农 业 大 学 学 报 ꎬ1995ꎬ26(1):98 102
S02.FIT)
第 16 卷 第 5 期 生 命 科 学 研 究 灾 燥 造 援 员 6 晕 燥 援 5 圆 园 12 年 1 月 蕴 蚤 枣 藻 杂 糟 蚤 藻 灶 糟 藻 砸 藻 泽 藻 葬 则 糟 澡 Oct. 圆 园 12 非 生 物 胁 迫 对 花 生 叶 片 AhNCED1 蛋 白 表 达 的 影 响 胡 博, 刘 帅, 李 玲 * ( 华 南 师 范 大 学 生 命 科 学 学 院, 广 东 省 植
标题
吉林农业大学学报 ２０１６ ３８ １ ８７ ９１ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｊｉｌｉｎ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｈｔｔｐ ｘｕｅｂａｏ ｊｌａｕ ｅｄｕ ｃｎ Ｅ ｍａｉｌ ｊｌｎｄｘｂ ｖｉｐ ｓｉｎａ ｃｏｍ 神 经 生 长 因 子 ｍｒｎａ 在 鹅 等 级 前 卵 泡 中 的 表达 刘璐璐 隋玉健 朱海洋 武惠岩 杨 辉 孙永峰 吉林农业大学动物科学技术学院 长春 １３０１１８
2004级研究生现代免疫学实验技术结业报告
PCR PCR PCR RT-PCR PCR (Polymerase Chain Reaction,PCR) 80 DNA, DNA PCR PCR PCR DNA PCR -- -- DNA DNA 93 DNA PCR DNA DNA ( ) DNA 55 DNA DNA -- TaqDNA dntp DNA -- -- PCR PCR DNA DNA Y (1 X) n Y DNA X (Y)
Syngene GBOXHR Retsch MM400 KQ DE Eppendorf Table 1 The sources of Astragali Radix and Hedysarum Radix No. 1 AMM2011_NMGTY Astr
PCR 龙平, 崔占虎, 李虔全, 徐建平, 张春红, 周立社 * *, 李旻辉 ( 包头医学院, 内蒙古包头 014060) DNA 30 28 DNA trnl-trnf PCR PCR 136 bp 323 bp 10% PCR PCR Astragalus membranaceus Fisch. Bge. var. mongho- licus Bge. Hsiao A. membranaceus
1 G PaAGAP 117 ArfGAP Jensen AtZAC ZAC marker GSII marker GSI ARF C2 Ca 2 + PI-3-P ArfGAP 6 OsAGAP ArfGAP 7 OsAGAP 8 ArfGAP ArfGAP 9 1 Mn g kg
28 1 2011 1 Vol 28 Journal of the Graduate School of the Chinese Academy of Sciences January 1002-1175 2011 01-0116-09 No 1 2011 G PaAGAP * 1 1 1 2 1 1 100049 2 100083 2010 4 9 2010 4 23 Liu F Wu L Q Wang
荧光定量PCR
荧 光 定 量 PCR 荧 光 定 量 PCR 原 理 荧 光 定 量 PCR 最 早 称 TaqMan PCR, 后 来 也 叫 Real-Time PCR, 是 美 国 PE(Perkin Elmer) 公 司 1995 年 研 制 出 来 的 一 种 新 的 核 酸 定 量 技 术 该 技 术 是 在 常 规 PCR 基 础 上 加 入 荧 光 标 记 探 针 或 相 应 的 荧 光 染 料
露 和 溜 的 声 母 是 l, 不 要 读 成 n 丛 的 声 母 是 c, 不 要 读 成 ch 塞 的 声 母 是 s, 不 要 读 成 sh 币 的 韵 母 是 i, 不 要 读 成 ei 甩 的 声 母 是 sh, 不 要 读 成 s 注 意 本 课 的 多 音 字 : { f 佼 佛 家
8. 印 度 奇 观 一 教 学 要 求 1. 会 读 会 写 本 课 的 18 个 生 字 2. 会 认 读 下 列 字, 但 不 要 求 会 写 : 菩 佛 圣 蝙 蝠 赭 堡 玫 瑰 雀 铛 寺 蕉 3. 掌 握 本 课 的 词 语, 能 理 解, 会 运 用 4. 重 点 学 习 的 句 子 : (1) 养 象 的 人 叫 它 象 小 姐, 怪 不 得 把 它 打 扮 得 这 么 漂 亮 呢
Microsoft Word - 201601a
06 年 月第 3 卷第 期 中国中医药信息杂志 47 实验研究 香砂六君子汤对脾胃虚弱型萎缩性胃炎大鼠胃排空功能 及胃蛋白酶活性和缺氧诱导因子-α表达的影响 段云燕 成映霞 3 王强 李兰珍 王庆胜 郑世铎 鲁鹏程 雷作汉 刘雪松 刘臻华.甘肃中医药大学 甘肃 兰州 73000.甘肃省中医方药挖掘与创新转化重点实验室 甘肃 兰州 73000 3.甘肃省中医院 甘肃 兰州 73000 摘要 目的 观察香砂六君子汤对脾胃虚弱型萎缩性胃炎
谢禄山 等 油桐种子 FAD2 基因全长 cdna 序列分析 2 油 桐 Vernicia fordii 是 我 国 特 有 经 济 林 木 又 名 三 年 桐 光 桐 桐 籽 树 与 油 茶 Camellia oleifera 核桃 Juglans regia 乌桕 Triadica sebife
第 30 卷 第 2 期 2012 年 6 月 经 济 林 研 究 Nonwood Forest Research Vol. 30 No.2 Jun. 2012 油桐种子 FAD2 基因全长 cdna 序列分析 谢禄山 a,b 谭晓风 a,c 张 琳 a,c 龙洪旭 a 中南林业科技大学 a. 经济林育种与栽培国家林业局重点实验室 b. 风景园林学院 c. 林学院 湖南 长沙 410004 摘 要
PCR专题改.doc
Primer3 http://frodowimitedu/cgi-bin/primer3/primer3_wwwcgi Primer5 Oligo665 Primer5 http://wwwbioonnet/dispbbsasp?boardid=25&id=38536 Oligo667 http://wwwbioonnet/dispbbsasp?boardid=25&id=40898 1 PCR 1
8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 α β 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74
2011 GUANGDONG WEILIANG YUANSU KEXUE 18 12 1. 1. 2 500 730 2 5 1 1 1. 1. 3 739 127 116 712 265 3 143 50 2 2 1 13 2 14 3 15 4 16 5 17 6 18 7 19 8 20 9
2011 GUANGDONG WEILIANG YUANSU KEXUE 18 12 1006-446X 2011 12-0001-28 1 2 2 1. 201800 2. 510070 R 244. 9 A 1 1. 1 3 2000 1. 1. 1 1973 3 52 299 31 136 100 32 1 13 2011-10 -20 1 2011 GUANGDONG WEILIANG YUANSU
AFLP % 1. 1 DNA 5 RAPD DNA 0. 1g % ~ ph 6 10 DNA 9 40μl TE SSR STS 20ng /L
2012 13 2 201-206 Journal of Plant Genetic Resources / 071001 41 SSR 21 SSR 41 52 2 ~ 4 2. 5 Shannon 0. 21 ~ 1. 40 0. 73 5. 54 3 7 9 13. 16% ~ 186. 49% 5. 48 6 11 SSR Genetic Diversity of Peanut Arachis
FX1.s92
知 识 目 标 : 了 解 药 物 鉴 别 的 意 义 学 习 目 标 理 解 药 物 鉴 别 试 验 的 项 目 掌 握 药 物 鉴 别 试 验 的 常 用 方 法 能 力 目 标 : 能 熟 练 应 用 药 物 鉴 别 的 常 用 方 法 对 药 物 进 行 鉴 别 第 一 节 概 述 药 物 的 鉴 别 试 验 是 根 据 药 物 的 组 成 分 子 结 构 和 理 化 性 质, 采 用 化
Navarro ~ ~ 60 min Rangan 14 1 ~ Albrecht
. 2000 2 3 94-96 20. 1997 27 3 214. 29. 2002 6 4 40-44 21.. 2008 25 2 209-214. 2004 30. 12 1 114-116. 2008 24 4 341 22. - 344. 2001 1 27-28 23... 2003 5 3 80-84 24 Turechek W W Peres N A Werner N A. Pre
目 錄 壹 系 統 簡 介... 7 一 系 統 目 的... 7 二 系 統 功 能 結 構... 7 三 事 件 管 理... 8 四 報 表 管 理... 8 貳 服 務 系 統 操 作 說 明 ( 查 詢 / 編 輯 部 份 )... 9 一 登 入 首 頁... 9 二 其 他 相 關 查
行 政 院 衛 生 署 疾 病 管 制 局 第 三 期 防 疫 物 資 資 訊 系 統 維 護 及 改 版 採 購 案 使 用 者 手 冊 案 號 CH100057 環 通 資 訊 股 份 有 限 公 司 中 華 民 國 101 年 九 月 目 錄 壹 系 統 簡 介... 7 一 系 統 目 的... 7 二 系 統 功 能 結 構... 7 三 事 件 管 理... 8 四 報 表 管 理...
H 2 SO ml ml 1. 0 ml C 4. 0 ml - 30 min 490 nm 0 ~ 100 μg /ml Zhao = VρN 100% 1 m V ml ρ g
16 6 2018 11 Chinese Journal of Bioprocess Engineering Vol. 16 No. 6 Nov. 2018 doi 10. 3969 /j. issn. 1672-3678. 2018. 06. 004 1 2 1 1 1. 330200 2. 330006 4 Box-Behnken 1 25 g /ml 121 92 min 2 6. 284%
5月15期
中 国 农 学 通 报 2014,30(15):261-267 Chinese Agricultural Science Bulletin 新 疆 雪 莲 rbcs 基 因 的 克 隆 及 序 列 分 析 杨 晶 1, 张 亚 敏 2, 李 曹 龙 2, 王 爱 英 2 1, 祝 建 波 ( 新 疆 石 河 子 大 学 生 命 科 学 学 院, 新 疆 石 河 子 832000) 摘 要 : 为 获
スライド 1
O-03 AFM IR -OH C=O C=C C-OH O-H C-O m Wavenumber (cm ) nisina-y@cc.okayama-u.ac.jp Height/ nm 1 0-1 (b) 0.8 nm 0.8 nm XPS (C 1s) 0 1 2 3 4 5 Position/ m AFM 50 nm XPS C-O C=O C-C Height/ nm 1 0-1 (b)
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β- 环 糊 精 及 其 衍 生 物 在 难 溶 性 中 药 成 分 增 溶 1 上 的 应 用 欧 水 平 1, 欧 阳 彩 霞 2, 王 森 1, 吴 品 江 1, 钟 英 1 1,2, 杨 明 1 成 都 中 医 药 大 学 研 究 生 院, 成 都 (611137) 2 江 西 中 医 学 院 现 代 中 药 制 剂 教 育 部 重 点 实 验 室, 南 昌 (330004) E-mail:oushuiping1208@126.com
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行 政 法 第 八 講 : 公 務 員 綱 要 一 公 務 員 之 概 念 ( 一 ) 學 理 上 之 概 念 ( 二 ) 法 律 上 之 概 念 二 公 務 員 關 係 之 特 質 : 特 別 權 力 關 係 ( 一 ) 起 源 ( 二 ) 定 義 ( 三 ) 現 代 定 義 ( 四 ) 加 入 之 原 因 ( 五 ) 種 類 ( 六 ) 特 色 ( 七 ) 理 論 演 變 ( 八 ) 存 廢 問
标题
吉林农业大学学报 ２０１６ ３８ １ ６９ ７３ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｊｉｌｉｎ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ 脱落酸抗肥胖作用研究 ｈｔｔｐ ｘｕｅｂａｏ ｊｌａｕ ｅｄｕ ｃｎ Ｅ ｍａｉｌ ｊｌｎｄｘｂ ｖｉｐ ｓｉｎａ ｃｏｍ 罗云清１ 陈 凯２ 侯力群１ 钟双玲１ 丁传波２ 郑毅男２ 刘文丛１ ２ １ 吉林农业大学资源与环境学院 长春 １３０１１８ ２ 吉林农业大学中药材学院
附件3
广 东 省 高 水 平 大 学 重 点 学 科 建 设 项 目 申 报 书 项 目 名 称 : 基 于 南 海 现 代 渔 业 可 持 续 发 展 的 水 产 学 科 建 设 申 报 单 位 : 广 东 海 洋 大 学 ( 盖 章 ) 主 要 依 托 学 科 : 所 属 领 域 : 水 产 畜 牧 学 机 械 工 程 信 息 与 通 信 工 程 农 学 项 目 负 责 人 : 谭 北 平 联 系 电
TGF-β AngⅡ B SD ~ 220g SPF. SCXK No SYXK ~ 25 40% ~ 70% OR37G-C
2017 7 43 4 Journal of Southwest Minzu University Natural Science Edition Jul. 2017 Vol. 43 No. 4 doi10. 11920 /xnmdzk. 2017. 04. 008 1 1 1 2 1 1 3 1. 610212 2. 6100413. 610031 AngⅡ TGF-β. SD 60 180 ~
附件2：
中国实验动物学会团体标准 实验动物肿瘤坏死因子 α 转基因关节炎小鼠模型饲养繁育规范 编制说明 联系人 : 李舸 联系电话 :15011983691 编制单位 : 广东省实验动物监测所 时 间 : 2016 年 10 月 25 日 中国实验动物学会团体标准 人肿瘤坏死因子 α 转基因关节 炎小鼠模型饲养繁育规范 编制说明 GB/T1.1 2009 1 2011A081401005 2013B040400007
标题
648 江 苏 农 业 学 报 (Jiangsu J. of Agr. Sci. ),2013,29(3):648 ~ 653 h ttp: / / w w w. jsn y x b.c o m 王 摇 丹, 孙 摇 蕾, 孙 家 正, 等. 桑 葚 冻 结 过 程 中 的 温 度 变 化 特 性 [J]. 江 苏 农 业 学 报,2013,29(3):648 鄄 653. doi:10. 3969
.. (,, ),(): ( (,,, (, (,,, (), ( ): (, ), ( ): (,,, (,,, (,,, ),( ): (,,, (, (,,, (,, (, ),(): ~ (, ~ (,, ~ (, ~ (,,, ), ( ), ( ): ( (,, ~ (,, ), ~ (
.. 中 国 热 带 医 学 杂 志 年 卷 主 题 索 引 (,,, ),( ): (, (,,, ( (,,, ~ (, ), (,,, (,, (,,, (, ),( ): (, (,, (,, (, (,,, ),( ): ~ (,,, (,, (,,, (,,, ),( ): ( ), ( ): - (, (, (, (,,, ),(): (,,, ), α- (,,, ), (, (,,,
学 校 紧 密 围 绕 首 都 新 农 村 建 设 和 都 市 型 现 代 农 业 发 展 需 求, 积 极 开 展 农 业 科 技 创 新 和 科 学 研 究, 努 力 打 造 和 完 善 都 市 型 现 代 农 业 科 技 创 新 体 系 近 几 年, 学 校 承 担 了 973 计 划 863
2015 年 北 京 农 学 院 全 日 制 硕 士 研 究 生 招 生 简 章 & 招 生 目 录 学 校 概 况 北 京 农 学 院 是 北 京 市 属 唯 一 一 所 以 农 科 为 特 色, 兼 有 理 工 经 管 法 文 等 学 科 的 高 等 农 林 院 校 学 校 占 地 面 积 12159 亩 ( 校 本 部 1136 亩, 科 技 园 区 1023 亩, 林 场 10000 亩 ),
22 8529 專 用 或 主 要 用 於 第 8525 至 8528 節 所 屬 器 具 之 零 件 23 8308 用 於 衣 服 靴 鞋 帳 蓬 手 提 包 旅 行 用 品 或 其 他 已 製 作 品 之 卑 金 屬 搭 鈕 帶 搭 鈕 之 框 架 帶 扣 帶 扣 搭 鈕 眼 環 眼 及 其
附 表 一 項 次 4 位 碼 稅 號 我 國 對 哥 倫 比 亞 出 口 符 合 哥 國 零 關 稅 項 目 清 單 ( 以 2014 年 海 關 稅 則 前 4 碼 排 名 前 300 項 產 品 為 比 對 基 礎 ) 中 文 名 稱 2013/01-2013/12 2014/01-2014/12 單 位 : 金 額 ( 美 元 ) 名 次 增 減 比 (%) 全 部 貨 品 出 口 總 額
中国药师 年第 卷第 期 Ｃ Ｐ ｍ Ｖ Ｎ 左金丸源自元代 丹溪心法 的火方 由黄连和 型在线脱气机 Ｓ Ｌ Ａ型自动进样器 ＣＴＯ Ａ型 吴茱萸两味药按照 的比例组成 近年来的现 柱温箱 日本 Ｓ ｍ 公司 ＢＰＤ型电子天平 代药理学研究表明 左金丸具有调节中枢 抑杀幽门 德国赛多利斯集团 ＢＲ
研究论文 ｗｗｗ 基于细胞色素 Ｐ 的左金丸体外药物相互作用研究 龚睿林 吕春明 石美智 郭澄 韩永龙 上海交通大学附属第六人民医院药剂科 上海 摘 要 目的 探讨左金丸对人肝细胞色素 Ｐ 的 ＣＹＰＡ Ｃ Ｃ Ｃ Ｄ Ａ亚型的体外抑制作用 方法 左金丸 黄连和吴茱萸的水提物分别与 ＣＹＰＡ Ｃ Ｃ Ｃ Ｄ Ａ Ａ亚型的 种混合探针底物在人肝微粒体中共同孵育后 串联质谱法 ＬＣ ＭＳ ＭＳ同时测定这
28 6 : OAP PISTILLATA(PI), AGAMOUS(AG) [2] APETALA2(AP2), MADS-box, [2-3] MADS-box MADS-box, Petunia hybrida, Antirrhina majus, Oryza stative Ze
![28 6 : OAP PISTILLATA(PI), AGAMOUS(AG) [2] APETALA2(AP2), MADS-box, [2-3] MADS-box MADS-box, Petunia hybrida, Antirrhina majus, Oryza stative Ze](/thumbs/91/105595375.jpg "28 6 : OAP PISTILLATA(PI), AGAMOUS(AG) [2] APETALA2(AP2), MADS-box, [2-3] MADS-box MADS-box, Petunia hybrida, Antirrhina majus, Oryza stative Ze")
, 2011, 28(6): 900-906 Journal of Zhejiang A & F University OAP3 1,2, 1, 1 2, (1. 311400; 2., 530003) : MADS-box, Oncidium Milliongolds, RT-PCR (reverse transcription polymerase chain reaction) 1 MADS-box,
标题
中 国 农 业 科 技 导 报 ꎬ 2015ꎬ 17(1):32-41 Journal of Agricultural Science and Technology 摘 玉 米 YABBY 转 录 因 子 家 族 的 特 征 及 表 达 分 析 曹 宇 ꎬ 郎 志 宏 ꎬ 王 磊 ( 中 国 农 业 科 学 院 生 物 技 术 研 究 所 ꎬ 北 京 100081) 要 :YABBY 基 因 家 族
填 东 海 精 卫 填 海 比 喻 不 畏 艰 难, 努 力 奋 斗 用 这 则 成 语 教 育 学 生 要 有 志 向, 做 事 情 要 学 习 精 卫 填 海 的 精 神, 不 怕 困 难, 锲 而 不 舍 三 教 学 建 议 1. 字 音 教 学 盾 的 韵 母 是 uen, 写 作 un,
6. 成 语 故 事 一 教 学 要 求 1 援 学 会 本 课 的 16 个 生 字 2 援 会 认 读 下 列 字, 但 不 要 求 会 写 : 锋 炎 掀 枝 3 援 本 课 学 习 部 首 : 矛 斗, 要 求 会 认 会 用 4 援 掌 握 本 课 的 词 语, 能 理 解, 会 运 用 5 援 重 点 学 习 的 句 子 : (1) 卖 兵 器 的 人 听 了 十 分 得 意, 于 是
Ｐｈ ｍ Ｖ Ｎ 中国药师 年第 卷第 期 Ｃｈ 学基础首先是开放性药物可直接经口 鼻给予 其次是应 连整个产品设计紧凑携带使用方便此外减速网也被认为 答性它富含的感受器和药物受体能对体内外刺激作出应答 是可用于降低药物微粒速度从而减少其惯性嵌顿的一种结 反射从而对调节气道的张力有重要作用 第三是吸
ｗｗｗ 综 述 ｈ Ｃ ｄ Ｈ ｂｐｇ Ｖ Ｂｕ Ｍ ｄ Ｈ Ｄ ｈ ｍｂ ｗ ｈ ｍ ｕ ｈ ｄ ｍ ｄ Ａ Ｄ ｍ ＡＳＦＴ ＳＨＴ ｈｈｃ Ａ ｈ ｄ ｍ ｄ ｄ ｂ ｗ ｈ ｄ ｄ ｈ ｕ ｍ ＡｍＪＣ Ｏ ＭＷＤ ＫＭ Ａ ｈ Ｍ ｍ ｋ ＤＳＳ ｈ ｄ ｍ ｄ ｗ ｈ ｕ ｍ ｄ Ｇ ｗ ｈ ｂ ｍ ｋ Ｏ Ｇ ｕ ｕｄ Ｇ Ｏ Ｌ Ｍ ｕ Ｆ Ｔｈ ｄ ｍ ｄ ｄｕ ｄ Ｆ Ｃ Ａ ｕ
期 李 海 青 等 : 生 物 安 全 性 白 藜 芦 醇 合 成 酶 表 达 载 体 的 构 建 及 水 稻 遗 传 转 化 子 植 物 中 作 为 植 物 处 于 恶 劣 环 境 下 或 遭 到 病 原 体 侵 害 时, 植 物 自 身 分 泌 的 一 种 可 抵 御 病 菌 感 染 的 抗 菌
华 北 农 学 报 ( ): - 生 物 安 全 性 白 藜 芦 醇 合 成 酶 表 达 载 体 的 构 建 及 水 稻 遗 传 转 化, 李 海 青, 柳 絮, 王 庆 国,, 姚 方 印, 刘 炜 (. 山 东 省 农 业 科 学 院 高 新 技 术 研 究 中 心, 山 东 省 作 物 遗 传 改 良 与 生 物 技 术 重 点 实 验 室, 山 东 济 南 ;. 农 业 部 黄 淮 海 作
Microsoft Word - 2016 重庆会议通知8-15
第 二 届 全 国 肿 瘤 代 谢 年 会 首 届 中 美 肿 瘤 代 谢 高 峰 论 坛 第 一 届 肿 瘤 代 谢 与 代 谢 组 学 技 术 基 础 理 论 学 习 班 会 议 通 知 尊 敬 的 专 家 您 好 : 为 推 动 肿 瘤 代 谢 研 究, 总 结 并 普 及 肿 瘤 代 谢 研 究 经 验 及 新 技 术 新 方 法, 落 实 首 届 全 国 肿 瘤 代 谢 学 术 成 果,
<4D6963726F736F667420576F7264202D20B2CCA3BA4542B2A1B6BE52746120496747BFB9CCE5D3EBB1C7D1CAB0A9B7D6C6DAB5C4B9D8CFB52E646F63>
EB 病 毒 Rta/IgG 抗 体 与 鼻 咽 癌 分 期 的 关 系 蔡 永 林, 郑 裕 明, 成 积 儒, 李 军, 莫 永 坤, 钟 青 燕 ( 广 西 梧 州 市 红 十 字 会 医 院, 梧 州 市 肿 瘤 防 治 研 究 所, 广 西 梧 州 543002) 摘 要 : 目 的 探 讨 EB 病 毒 Rta/IgG 抗 体 与 鼻 咽 癌 临 床 分 期 的 关 系 方 法 用 酶
<4D6963726F736F667420506F776572506F696E74202D20332DC1D9B4B2504352BCECD1E9B1EAB1BEB5C4B4A6C0EDA1A2B1A3B4E6BCB0BACBCBE1CCE1C8A1B7BDB7A82DD5D4C9C6C4C8205BBCE6C8DDC4A3CABD5D>
检 验 过 程 临 床 PCR 检 验 标 本 的 处 理 保 存 及 核 酸 提 取 方 法 医 师 申 请 检 验 项 目 申 请 患 者 准 备 患 者 识 别 样 本 采 集 样 本 运 送 Ⅰ Ⅱ Ⅲ 分 析 测 定 样 本 处 理 分 析 前 分 析 中 分 析 后 报 告 临 床 应 用 烟 台 市 烟 台 山 医 院 赵 善 娜 结 合 临 床 资 料 分 析 结 果 并 确 认 出
Dan Buettner / /
39 1 2015 1 Vol. 39 No. 1 January 2015 74 Population Research 80 + /60 + 90 + 90 + 0 80 100028 Measuring and Comparing Population Longevity Level across the Regions of the World Lin Bao Abstract Appropriate
220 20, Vol. 32, No. 6 食 品 科 学 分 析 检 测 荡 体 系 被 用 来 检 测 和 鉴 别 组 成 极 其 复 杂 的 中 药 2007 年 [7-20] 张 泰 铭 等 提 出 了 中 药 非 线 性 化 学 指 纹 图 谱 的 概 念, 并 对 其 形 成 的 原
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29 赵 哲, 张 泰 铭, *, 方 宣 启 2, 向 凤 琴, 乔 君 喜, 朱 蓉 (. 中 南 大 学 化 学 化 工 学 院, 湖 南 长 沙 40083;2. 湖 南 省 食 品 质 量 监 督 检 验 所, 湖 南 长 沙 40002) 通 过 向 稳 态 体 系 溴 酸 钠 - 硫 酸 锰 - 硫 酸 - 丙 酮 中 加 入 不 同 的 茶 饮 料, 获 得 来 自 不 同 产 家
Invitrogen 1.4 pet-gr, ICE-LGR, PCR TA, pmd18-t/gr pet-21a(+) (Nde I Xho I), E. coli DH-5,,,, pet-gr GR ORF cdna, GR, : PU: 5 -GGAATTCCAT
42 6 Vol.42, No.6 2011 11 OCEANOLOGIA ET LIMNOLOGIA SINICA Nov., 2011 南极衣藻 (Chlamydomonas sp. ICE-L) 谷胱 * 甘肽还原酶基因的原核表达及其条件优化 1 1 燏 1 1 2 (1. 524025; 2. 266061) RT-PCR GR ORF cdna, ; IPTG,, pet-gr BL21,
史 教 学 评 价 与 测 试 社 会 主 义 经 济 理 论 西 方 经 济 学 管 理 方 法 社 会 经 济 统 计 会 工 商 管 理 计 学 原 理 财 务 会 计 管 理 学 原 理 市 场 营 销 生 产 运 营 管 理 财 务 管 理 成 本 管 理 人 力 资 源 管 理 金 融
华 东 师 范 大 学 网 络 教 育 学 院 2012 年 春 季 招 生 简 章 高 升 升 本 第 二 本 科 华 东 师 范 大 学 是 国 家 教 育 部 直 属 全 国 重 点 大 学, 是 国 家 211 工 程 985 工 程 重 点 建 设 高 校 依 托 华 东 师 范 大 学 雄 厚 的 师 资 力 量 和 丰 富 的 教 学 资 源, 华 东 师 范 大 学 网 络 教 育
114 () ml,60 2 g 20 ml, 120 r/ min,12. 3,, 3, ( Fluroscein diacetate, FDA). 2 mg FDA 1 ml, 50,0. 04 g/ L. FDA 1 1, 10 min,,., = / 100
48 1 () Vol. 48 No. 1 2009 1 Journal of Xiamen University (Nat ural Science) Jan. 2009 1, 1 3, 2 (1.,, 361005 ; 2., 730000) :, (DMSO). :DMSO,. 75 mmol/ L DMSO 48 h,, 1. 6 1. 8 ;10mol/ L 48 h,,;,. : ; ;
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淡 江 大 學 國 際 事 務 與 戰 略 研 究 所 碩 士 班 碩 士 論 文 國 民 政 府 陸 軍 變 革 與 德 國 顧 問 (1928~1938) 研 究 生 : 張 友 銘 中 華 民 國 98 年 12 月 18 日 德 國 軍 事 顧 問 團 的 來 華 國 民 政 府 的 選 擇 1. 外 交 上 有 利 : 與 我 地 位 平 等, 不 會 構 成 威 脅 2. 軍 事 上 有
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中 国 环 境 科 学 2012,32(5):933~941 China Environmental Science 系 统 动 力 学 在 空 港 区 域 规 划 环 境 影 响 评 价 中 的 应 用 刘 慧 1,2, 郭 怀 成 1*, 盛 虎 1, 都 小 尚 1,3, 李 娜 1 1, 杨 永 辉 (1. 北 京 大 学 环 境 科 学 与 工 程 学 院, 北 京 100871; 2.
貓兒見了魚鮮飯—嚐不出甜味
蘇 東 坡 的 秘 方 淺 談 鮮 味 受 器 味 道 就 好 比 人 生, 酸 甜 苦 鹹, 哇! 有 夠 新 鮮! 宋 朝 元 豐 三 年, 蘇 東 坡 因 烏 臺 詩 案 而 被 貶 到 黃 州, 他 在 那 兒 平 日 就 是 吟 詩 作 對, 恬 淡 度 生 以 忘 卻 官 場 的 不 順 遂 某 日 家 中 將 有 客 人 來 訪, 東 坡 兄 草 草 將 豬 肉 洗 滌 乾 淨 後,
目录
1 2 目 录 第 一 篇 植 物 学 实 验 实 验 1 植 物 细 胞 的 基 本 形 态 与 结 构 实 验 2 植 物 组 织 实 验 3 种 子 和 幼 苗 实 验 4 植 物 的 营 养 器 官 根 的 形 态 结 构 及 其 发 育 实 验 5 植 物 的 营 养 器 官 茎 的 形 态 结 构 及 其 发 育 实 验 6 植 物 的 营 养 器 官 叶 的 形 态 结 构 及 其 发
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第 30 卷 第 2 期 2015 年 4 月 天 津 科 技 大 学 学 报 Journal of Tianjin University of Science & Technology Vol. 30 No. 2 Apr. 2015 DOI:10.13364/j.issn.1672-6510.20140064 IrrE 重 组 大 肠 杆 菌 的 构 建 和 性 能 分 析 骆 健 美, 郑 媛
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2011 33 6 1117-1121 http / /xuebao. jxau. edu. cn Acta Agriculturae Universitatis Jiangxiensis E - mail ndxb7775@ sina. com * 311400 Alcalase 2. 4 L TS225. 1 + 6 A 1000-2286 2011 06-1117 - 05 A Study on
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教 育 部 補 助 技 專 校 院 建 立 特 色 典 範 計 畫 一 一 年 度 具 體 計 畫 書 海 洋 綠 金 - 澎 湖 海 洋 經 濟 性 藻 類 及 週 邊 產 業 特 色 典 範 計 畫 Education and Technique Developments for Taiwan Green Gold-Marine Economic Seaweeds and Associated
Supplemental information Exome sequencing identifies truncating mutations in the PRRT2 gene that cause paroxysmal kinesigenic dyskinesia Wan-Jin Chen
Supplemental information Exome sequencing identifies truncating mutations in the PRR gene that cause paroxysmal kinesigenic dyskinesia Wan-Jin hen,, Yu Lin, Zhi-Qi Xiong 3, Wei Wei, Wang Ni,, uo-he an
信 息 披 露 义 务 人 声 明 1 信 息 披 露 义 务 人 依 据 中 华 人 民 共 和 国 公 司 法 中 华 人 民 共 和 国 证 券 法 上 市 公 司 收 购 管 理 办 法 公 开 发 行 证 券 公 司 信 息 披 露 内 容 与 格 式 准 则 第 15 号 权 益 变 动
证 券 代 码 :600565 证 券 简 称 : 迪 马 股 份 重 庆 市 迪 马 实 业 股 份 有 限 公 司 简 式 权 益 变 动 报 告 书 上 市 公 司 名 称 : 重 庆 市 迪 马 实 业 股 份 有 限 公 司 股 票 上 市 地 点 : 上 海 证 券 交 易 所 股 票 简 称 : 迪 马 股 份 股 票 代 码 : 600565 信 息 披 露 义 务 人 : 财 通
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摘 2016-07-14 葡 萄 糖 氧 化 酶 抑 制 刺 梨 果 汁 褐 变 作 用 * 许 培 振, 罗 昱, 林 梓, 孟 满, 丁 筑 红 ( 贵 州 大 学 酿 酒 与 食 品 工 程 学 院 贵 州 省 农 畜 产 品 贮 藏 与 加 工 重 点 实 验 室, 贵 州 贵 阳 550025) 要 : 以 刺 梨 果 汁 为 原 料, 研 究 葡 萄 糖 氧 化 酶 对 刺 梨 果 汁
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中 草 药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 44 卷 第 18 期 213 年 9 月 2587 龙 骨 马 尾 杉 PcFPS1 基 因 克 隆 及 序 列 分 析 药 材 与 资 源 张 鑫 1, 罗 红 梅 1, 殷 秀 梅 2, 宋 经 元 1* 1. 中 国 医 学 科 学 院 北 京 协 和 医 学 院 药 用 植 物 研 究 所 濒 危 药
福 利 部 疾 病 管 制 署,2013;Lin, Wang, Tung, & Chen, 2009) 腸 病 毒 的 型 別 繁 多, 廣 泛 的 分 布 於 全 球, 在 室 溫 中 存 活 穩 定, 適 合 在 濕 熱 的 環 境 下 生 存, 常 發 生 在 夏 季 及 早 秋, 而 在 熱
預 防 並 不 難 - 談 腸 病 毒 的 照 護 與 預 防 台 北 醫 學 大 學 公 共 衛 生 系 趙 映 婷 基 隆 長 庚 醫 院 護 理 部 陳 淑 賢 基 隆 長 庚 醫 院 小 兒 科 蔡 明 翰 前 言 腸 病 毒 這 個 病 名 我 們 並 不 陌 生, 但 是 我 們 到 底 對 腸 病 毒 的 了 解 有 多 少? 很 多 人 常 常 把 腸 病 毒 感 冒 流 感 病 毒
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制 署,2013;Lin, Wang, Tung, & Chen, 2009) 腸 病 毒 的 型 別 繁 多, 廣 泛 的 分 布 於 全 球, 在 室 溫 中 存 活 穩 定, 適 合 在 濕 熱 的 環 境 下 生 存, 常 發 生 在 夏 季 及 早 秋, 而 在 熱 帶 國 家 則 好 發
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第 三 章 各 种 食 物 的 营 养 价 值 及 加 工 因 素 的 影 响 知 识 目 标 瞯 通 过 本 章 的 学 习, 掌 握 谷 类 豆 类 油 料 水 果 蔬 菜 鱼 肉 蛋 类 奶 类 以 及 坚 果 等 我 国 人 民 喜 爱 的 常 用 的 天 然 食 品 以 及 它 们 的 加 工 制 品 的 营 养 价 值 瞯 熟 悉 谷 粒 的 结 构, 加 工 烹 调 和 贮 藏 方 法
23 2009 2 ;, : (2 ) a.? = ( ) b.? = ( ) c.? = ( ),, : (3 ) a.? ( ) b. ( ) c. ( )???, (1992: 14), / / 579,, : Y VP ( ) Y VP / ( ) Y VP,,,, (4) ;,,, (5)
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1950 5 1954 1906 3000 3 1911 30 3 2000 6 10 3 33 1944 34 38 4 1950 32 1943 500 1955 8 1740 1000 1961 1 10 1956 204 28 1939 1 14 25 3 8 8 29 2 6 200 6 10 4 22 1933 60 800 10 26 27 29 38 4 9 1950 1951 1968
600 现 代 药 物 与 临 床 Drugs & Clinic 第 31 卷 第 5 期 2016 年 5 月 were significantly decreased, but the levels of IL-12 in two groups were significantly increa
现 代 药 物 与 临 床 Drugs & Clinic 第 31 卷 第 5 期 2016 年 5 月 599 喘 可 治 注 射 液 联 合 细 辛 脑 注 射 液 治 疗 小 儿 毛 细 支 气 管 炎 的 临 床 研 究 唐 辉 英, 佘 定 平, 马 颐 娇 深 圳 市 儿 童 医 院 呼 吸 科, 广 东 深 圳 518026 摘 要 : 目 的 探 讨 喘 可 治 注 射 液 联 合
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中 国 科 学 : 地 球 科 学 2012 年 第 42 卷 第 4 期 : 520 ~ 525 www.scichina.com earth.scichina.com SCIENCE CHINA PRESS 论 文 地 球 磁 层 - 电 离 层 系 统 对 超 强 太 阳 风 暴 响 应 的 数 值 模 拟 研 究 王 赤 1* 12 1 12 1, 李 晖, 郭 孝 城, 丁 凯, 黄 朝
誰 的 債 券 利 率 下 行 最 多? 一 方 面, 不 同 行 業 債 券 融 資 結 構 存 差 異 ; 另 一 方 面, 不 同 行 業 受 益 於 不 同 債 券 品 種 收 益 率 的 下 行 綜 合 而 言, 紡 織 服 裝 食 品 飲 料 行 業 受 益 較 大, 其 中 紡 織 服
2015 年 12 月 16 日 宏 觀 經 濟 尋 找 高 負 債 風 險 下 的 幸 運 兒 融 資 成 本 節 約 的 分 行 業 測 算 負 債 有 多 大? 非 金 融 上 市 企 業 總 負 債 約 23 萬 億, 有 息 負 債 達 10.5 萬 億 有 息 負 債 增 長 腳 步 雖 已 放 緩, 但 有 息 負 債 率 居 高 不 下,12 年 至 今 維 持 在 近 30% 的
标题
第 ３６ 卷第 １ 期 ２０１６ 年 １ 月 环 境 科 学 学 报 Ａｃｔａ Ｓｃｉｅｎｔｉａｅ Ｃｉｒｃｕｍｓｔａｎｔｉａｅ Ｖｏｌ ３６ Ｎｏ １ Ｊａｎ ２０１６ ＤＯＩ １０ １３６７１ ｊ ｈｊｋｘｘｂ ２０１５ ０４２９ 尚姣博 宋艳群 张媛媛 等 ２０１６ Ｆｅ Ｓｉ Ａｌ 分子印迹材料的制备及其对酸性橙 ＩＩ ＡＯＩＩ 的选择吸附性能 Ｊ 环境科学学报 ３６ １ １８５ １９２ Ｓｈａｎｇ
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创 业 板 风 险 提 示 本 次 股 票 发 行 后 拟 在 创 业 板 市 场 上 市, 该 市 场 具 有 较 高 的 投 资 风 险 创 业 板 公 司 具 有 业 绩 不 稳 定 经 营 风 险 高 退 市 风 险 大 等 特 点, 投 资 者 面 临 较 大 的 市 场 风 险 投 资 者 应 充 分 了 解 创 业 板 市 场 的 投 资 风 险 及 本 公 司 所 披 露 的 风 险
一量动…
语 言 教 学 与 研 究,1998(3):102-113. 一 量 VP 的 语 法 语 义 特 点 李 宇 明 根 据 量 词 的 不 同, 一 量 VP 可 以 分 为 三 类 : (1) 畜 力 车, 哪 怕 是 牛 车, 竟 一 辆 没 有 ( 陈 冲 不 自 然 的 黑 色, 十 月 1989 年 6 期 34 (2) 一 刻 都 不 敢 离 开 你 呢 ( 小 牛 上 路 谣, 当 代
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音 乐 治 疗 2 导 语 : 天 音 遗 远 籁, 混 沌 中 有 真 主 宰, 音 乐 是 亲 近 我 们 身 体 的 一 种 声 音, 它 激 发 了 人 类 的 精 神, 潜 移 默 化 地 影 响 着 人 类 的 情 绪 当 希 腊 人 创 造 出 既 精 通 音 乐 又 会 治 病 的 阿 波 罗 神 的 时 候, 也 就 宣 布 了 音 乐 与 医 学 是 合 伙 者 如 今, 科 学
水土保持通报 第 ３１ 卷 １９２ 发现状出发分析了水电开发对生态环境产生的主要 型水电站被列入 十一五 重点项 目 ３１ 云 南 省 水 电 问题和影响 ６ 王学琴 ７ 以岷江 嘉陵江上已 建 正建 资源的可开发程度低可开发的潜能 巨 大 云南省地 和规划设计的一些 低 水 头 河 床 式 或 引
第 ３１ 卷第 １ 期 ２０１１ 年 ２ 月 Ｖ ３１Ｎ １ Ｆｂ ２０１１ 水土保持通报 Ｂｕ ｎ Ｓ ｎ Ｗ Ｃｎ ｎ 水电开发对云南省生态环境的影响及对策研究 余 波１黄成敏１黄正文２文星跃１邓茂林３ 四川大学 建筑与环境学院环境系四川 成都 ６１００６５ 成都大学 城乡建设学院 四川 成都 ６１０１０６ 成都理工大学 地质灾害防治与地质环境保护国家重点实验室四川 成都 ６１００５９ 摘 要
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1 0 0 0 0 美容 丙級 工作項目0 1 ： 職業道德
1 0 0 0 0 美 容 丙 級 工 作 項 目 0 1 : 職 業 道 德 1. ( 4 ) 美 容 從 業 人 員 應 該 努 力 的 目 標, 不 包 括 :(1) 學 習 優 雅 的 專 業 談 吐 (2) 進 修 專 業 的 知 識 和 技 術 (3) 關 心 社 會 及 流 行 的 趨 勢 (4) 詢 問 顧 客 的 隱 私 2. ( 4 ) 顧 客 皮 膚 保 養 時, 其 隨 身
100-1「經典研讀：梁啟超《新民說》」學習歷程檔案
101-1 中 國 歷 史 上 的 婦 女 與 社 會 學 習 歷 程 檔 案 系 級 : 資 四 α 學 號 :11007023 姓 名 : 尤 心 怡 第 一 週 (9/6) 智 慧 財 產 權 宣 導 課 程 簡 介 課 程 分 組 了 解 到 這 門 課 的 開 課 動 機 與 課 程, 也 知 道 這 門 課 是 教 育 部 公 民 核 心 能 力 計 畫 課 程, 需 要 學 生 進 行
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农 业 产 值 和 价 格 综 合 统 计 报 表 制 度 1 目 一 农 林 牧 渔 产 值 统 计 制 度 ( 一 ) 说 明 2 ( 二 ) 报 表 目 录 2 ( 三 ) 调 查 表 式 1. 综 合 年 报 表 式 (1) 农 林 牧 渔 业 总 产 值 (M301 表 ) 3 (2) 农 村 非 农 行 业 产 值 (M303 表 ) 5 2. 综 合 定 期 报 表 表 式 农 林 牧
标题
第 22 卷 第 1 期 2 0 1 6 年 3 月 ANALYSIS AND TESTING TECHNOLOGY AND INSTRUMENTS Volume 22 Number 1 Mar. 2016 大 型 仪 器 在 食 药 品 安 全 中 的 应 用 成 果 (001 ~ 008) 水 产 品 中 多 种 雌 激 素 残 留 的 质 谱 分 析 方 法 研 究 卢 巧 梅 ( 福 州 大
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第 33 卷 第 2 期 2010 年 4 月 - 149 - 脱 蛋 白 较 好 的 方 法 是 Sevag 法, 它 是 根 据 蛋 白 质 在 氯 仿 等 有 机 溶 剂 中 变 性 的 特 点, 使 蛋 白 质 变 性 成 胶 状, 此 法 条 件 温 和, 可 避 免 多 糖 的 降 解
- 148 - Drug Evaluation Research Vol.33 No.2 April 2010 植 物 多 糖 的 研 究 进 展 陶 遵 威 1, 郑 夺 1, 邸 明 磊 2, 单 晓 菊 1 天 津 市 医 药 科 学 研 究 所, 天 津 300020; 2 天 津 中 医 药 大 学, 天 津 300073 2 摘 要 多 糖 是 由 单 糖 连 接 而 成 的 多 聚 物,
* 20 80 90 21 1 2 DV domestic violence * 2 1 J. 2001 133 96 20 90 20 90 20 70 1975 1979 1985 97 2010 6 80 90 1993 48 1995 20 90 21 1996 2000 1999 5 98 2001 4 2009 11 50 2001 10 2002 4 2003 6 2007 3 2008
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Chinese Bulletin of Entomology 2010 47 3 460 ~ 466 檻檻 檻檻檻檻檻檻檻檻檻檻檻檻 * 450002 Parasitic effects on host Plutella xylostella testes by two endoparasitoids. HE Fan BAI Su-Fen LI Xin CHAO Yun-Fei College of
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第 24 卷 第 5 期 2015 年 5 月 碘 131 doi:10.3978/j.issn.1005-6947.2015.05.005 http://dx.doi.org/10.3978/j.issn.1005-6947.2015.05.005 Chinese Journal of General Surgery, 2015, 24(5):643 647. Chinese Journal of
PowerPoint 簡報
國 家 賠 償 法 概 述 主 講 人 : 宋 恭 良 104.10.12 2015.10.30 1 Q. 老 師 是 否 是 公 務 員? 是 否 適 用 國 賠? 法 務 部 95 年 9 月 14 日 法 律 字 第 0170449 號 函 : 國 家 賠 償 法 第 2 條 第 1 項 規 定 本 法 所 稱 公 務 員 者, 謂 依 法 令 從 事 於 公 務 之 員, 係 採 最 廣 義
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( 閱 讀 前 ) 練 習 一 動 動 腦, 猜 一 猜 小 朋 友, 現 在 我 們 要 一 起 來 閱 讀 一 本 很 有 趣 的 書, 書 名 是 是 蝸 牛 開 始 的!, 請 動 動 你 的 腦 袋, 想 像 自 己 是 作 者, 猜 猜 這 本 書 在 說 什 麼 樣 的 故 事 呢? 我 覺 得 這 個 故 事 可 能 的 角 色 有 我 覺 得 這 個 故 事 可 能 發 生 的 地
Phire Hot StartII DNA 聚合酶
重 要 提 示 Phusion 人 源 样 本 直 接 PCR 试 剂 盒 产 品 货 号 :F-150,200rxns x 20μl 变 性 温 度 为 98 C 退 火 温 度 与 众 多 常 规 DNA 聚 合 酶 ( 如 Taq DNA 聚 合 酶 ) 不 同, 具 体 请 参 照 6.3 延 伸 时, 若 扩 增 子 片 段 1kb, 则 延 伸 时 间 设 定 为 15s 即 可 ; 若
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2011 10 10 157 JOURNAL OF RAILWAY ENGINEERING SOCIETY Oct 2011 NO. 10 Ser. 157 1006-2106 2011 10-0007 - 0124-05 710043 6 TBM TBM U455. 43 A Structural Calculation and Analysis of Transfer Node of Three
g kg - 1 decoction respectively 10 ml kg - 1 once a day for 10 weeks during making model. After 10 weeks according to the method of
19 7 LDL-C LDL-R 谢慧臣 1, 刘芬 1*, 田春漫 1, 向靖 2 2, 杨强 ( 1. 湖北民族学院医学院中西医结合教研室, 湖北恩施 445000; 2. 湖北民族学院医学院附属医院中西医结合科, 湖北恩施 445000) LDL LDL-R Wistar 60 7. 2 10-4 g kg - 1 0. 25 0. 5 1. 0 g kg - 1 10 1 10 10 LDL
Technical Acoustics Vol.27, No.4 Aug., 2008,,, (, ) :,,,,,, : ; ; : TB535;U : A : (2008) Noise and vibr
8 8 Technical Acoustics Vol., No. Aug., 8,,, (, 8) :,,,,,, : ; ; : TB;U.+ 9 : A : -(8)--- Noise and vibration tests for fuel cell vehicel and noise sources identification SHEN Xiu-min, ZUO Shu-guang, CAI
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5 期 周 舒 扬 等 : 黑 龙 江 省 玉 米 弯 孢 菌 叶 斑 病 病 原 鉴 定 及 其 产 细 胞 壁 降 解 酶 和 漆 酶 活 性 分 析 127 菌 分 离 形 态 学 鉴 定 工 作 当 前 黑 龙 江 省 玉 米 主 栽 品 种 缺 乏 抗 病 品 种, 玉 米 弯 孢 菌 叶
玉 米 科 学 2010,18(5):126~130 Journal%of%Maize%Sciences 文 章 编 号 : 1005-0906(2010)05-0126-05 黑 龙 江 省 玉 米 弯 孢 菌 叶 斑 病 病 原 鉴 定 及 其 产 细 胞 壁 降 解 酶 和 漆 酶 活 性 分 析 周 舒 扬 1, 杨 洪 一 1, 赵 敏 1, 梅 丽 艳 2 (1. 东 北 林 业 大 学
中国私人养老保险发展前景展望
Number 12/05 中 国 私 人 养 老 保 险 发 展 前 景 展 望 Economic Analysis 12/05 Working Paper 中 国 私 人 养 老 保 险 发 展 前 景 展 望 Authors: Javier Alonso, Miguel Angel Caballero, Hui Li, María Claudia Llanes, David Tuesta, Yuwei
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中 国 农 学 通 报 2012,28(32):312-316 Chinese Agricultural Science Bulletin 鄱 阳 湖 生 态 经 济 区 城 乡 旅 游 互 动 模 式 研 究 张 香 凤, 杨 光 灶, 金 姝 兰 ( 上 饶 师 范 学 院 历 史 地 理 与 旅 游 学 院, 江 西 上 饶 334001) 摘 要 : 城 乡 旅 游 互 动 发 展 对 促
國立中山大學學位論文典藏.PDF
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中山大学附属第五医院引进高层次人才实施办法
中 山 大 学 附 属 第 五 医 院 文 件 附 五 2016 94 号 关 于 制 定 中 山 大 学 附 属 第 五 医 院 引 进 高 层 次 人 才 实 施 办 法 ( 试 行 ) 的 通 知 各 科 室 : 为 进 一 步 贯 彻 实 施 人 才 战 略, 加 快 人 才 强 院 步 伐, 加 大 引 进 高 层 次 人 才 特 别 是 海 外 优 秀 人 才 的 力 度, 培 养 和
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周口科~1
周 口 科 技 职 业 学 院 高 等 职 业 教 育 年 度 质 量 报 告 (2016) 一 学 院 概 况 周 口 科 技 职 业 学 院 是 2008 年 经 河 南 省 人 民 政 府 批 准 成 立 的 高 等 职 业 学 院 占 地 面 积 978 亩, 教 职 工 411 人, 专 任 教 师 331 人, 全 日 制 大 专 在 校 生 5029 人, 年 短 期 培 训 10000