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蚀墩崩路
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1 四川大学华西医院输血科黄春妍 Tel:

2 核对 : 患者的基本信息 : 姓名性别年龄住院号等抗凝和不抗凝标本均可以用于血型检测, 但不抗凝标本中细小凝块会影响结果判断, 特别是凝胶卡法, 最好采用 EDTA 抗凝血用于交叉配血的标本应是输血前三天的标本防止溶血标本保存 : 合血标本应保存到输血后 7 天, 血型检测标本视实验室规定, 一般 7 天

3 目的 : 为患者寻找合适的血液主要项目包括但不限于 : ABO 血型检测 Rh 血型检测抗体筛查抗体鉴定交叉配血

4 原理红细胞上有无 A 和 ( 或 )B 抗原, 血清中存在针对缺失抗原的天然抗体利用抗原抗体特异性结合的凝集反应正定型 : 用抗 A 抗 B 血型定型试剂检测红细胞表面是否存在 A 抗原和 ( 或 )B 抗原反定型 : 用标准 A1 细胞和 B 细胞检测血清中是否存在抗 A/ 抗 B 凝集素只有正反相符, 血型结果才可靠

5 特异性效价亲和力冷凝集素效价在 4 以下无菌灭活补体

6 ABO 血型鉴定方法 ABO 血型系统的抗体多为 IgM 凝集反应玻片法试管法微柱凝胶法法

7 试管法 ( 正定型 ) 1. 加 1 滴抗 A 到一支洁净试管并标记 2. 加 1 滴抗 B 到一支洁净试管并标记 3. 如果需要, 可选择加 1 滴抗 A,B 在第三支试管, 并标记 4. 向每一试管滴加 1 滴 2%-5% 的待检红细胞悬液 5. 轻轻混匀,1000g 离心 15 秒 6. 轻轻重悬细胞扣, 观察有无凝集 7. 记录检查结果, 与血清 ( 血浆 ) 实验结果对照

8 ABO 血型鉴定 ( 反定型 ) 1. 取 2 支洁净试管, 分别标记 A1 和 B, 分别向其中滴加 2-3 滴血清或血浆 2. 加 1 滴 A1 型试剂红细胞到标记为 A1 的试管 3. 加 1 滴 B 型试剂红细胞到标记为 B 的试管 4. 如果需要, 加一滴 O 型试剂红细胞到已加入 2-3 滴血清或血浆的试管, 并做好标记 5. 轻轻混匀,1000g 离心 15 秒 6. 检查是否有溶血现象, 然后轻轻重悬细胞扣, 检查凝集情况 7. 观察, 解释并记录实验结果, 并与红细胞实验结果比较

9 玻片法进行 ABO 血型正定型时, 待检红细胞浓度是 10%-15% 玻片法一般只能做正定型 1. 加 1 滴抗 A 到一洁净滴玻片或白瓷板凹孔中, 并做好标记 2. 加 1 滴抗 B 到一洁净滴玻片或白瓷板凹孔中, 并做好标记 3. 向以上玻片或白瓷板凹孔中的每一种试剂中分别加一滴充分混匀的待检红细胞悬液 4. 充分混合抗体试剂和细胞, 用搅拌棒将混合物均匀分散 5, 不断地从一边到另一边轻轻倾斜转动玻片或白瓷板, 持续大约 2 分钟在此期间, 不要将玻片或白瓷板放在热的表面上 6. 读取, 解释并记录结果

10 凝胶卡法按厂商说明操作

11 经典方法为试管法, 当用其他方法有疑问时应使用试管法复查, 不同方法要求的细胞浓度不同试管法通常使用 5% 红细胞悬液玻片法通常使用 10% 红细胞悬液凝胶卡正定型多用 5% 红细胞悬液, 反定型试剂红细胞为 1% 注意离心的速度和时间

12 阳性结果红细胞出现凝集反应或溶血阴性结果红细胞呈游离的混悬状态

13 凝集反应评分标准评分肉眼观察结果 4+ 一个大的凝集块, 背景清晰 3+ 数个大凝集块, 背景清晰 2+ 中等大小凝块, 背景清晰 1+ 非常细小的凝块, 背景混浊 + - mf 几乎看不见的凝集, 背景混浊无凝集凝集和不凝集细胞同时存在, 混合视野

14 观察结果后立即做好实验记录按试剂说明书操作温度溶血为阳性

15 反定型血型抗 A 抗 B A 细胞 B 细胞 O 细胞 A 型 B 型 O 型 AB

16 ? No 临床上常常会碰到正反定型不一致

17 不一致 (discrepancy) 正反定型不一致与历史记录不一致虽正反定型一致, 但凝集强度不能达到要求

18 重复试验, 排除人为差错继续下列操作 : 重新采集血液标本, 避免标本采集差错或污染询问患者诊断既往病史输血史骨髓移植史用药史新开试剂重复试验生理盐水洗涤细胞等

19 红细胞上 A 或 B 抗原呈弱抗原性, 正反定型不符合 ABO 血型系统特点 A 亚型 :A2 A3 Ax Am Aend Ay Ael 等 B 亚型 :B3 Bx Bm Bel 等 AB 亚型 :A2B A3B AxB AB3 cisab 等

20 试剂 : 抗 A 抗 B 抗 A1 抗 H 抗 A,B A1 A2 B 细胞和 O 细胞大多 H 抗原的抗原性增强,H 抗原强弱顺序 O > A2 > B > A2 > B > A1 > A1B 综合考虑唾液血型物质及家系调查, 基因检测

24 Rh 血型系统是最为复杂的血型系统, 最重要的抗原为 D C c E e 临床输血中, 常规只需要检测 D 抗原 D 抗原阳性称为 Rh 阳性,D 抗原阴性称为 Rh 阴性凝集反应

25 1. 常用鉴定方法玻片法 :40-50% 红细胞悬液试管法 :5% 红细胞悬液凝胶卡法微孔板法 2.Rh 确证试验 IgM 抗体检测为阴性的个体可以用 IgG 抗 -D 试剂进行间接抗球蛋白试验

26 RhD 血型鉴定的临床意义及应用与临床输血的关系与妊娠和新生儿溶血病的关系弱 D 人群供血和受血的原则 : 作为供血者按 Rh 阳性对待, 作为受血者按 Rh 阴性对待

27 抗体检测和鉴定有临床意义的抗体 : 能引起新生儿溶血病, 引起溶血性输血反应, 或者使输入的红细胞存活期减少的在 37 0 C 反应的同种异型抗体不规则抗体 : 抗 A, 抗 B 以外的抗体

28 对受血者血清中抗体检测的要求 1. 选择足够的敏感技术检测出受血者血清中非常低水平的临床有意义的抗体 2. 即使受血者血清中的抗体对输入的不相容红细胞抗原呈弱反应, 也能够发生快速的强的回忆反应, 增加抗体产生, 破坏红细胞

29 对试剂红细胞的要求不能将多人份红细胞混合, 一定要用 2-3 人份的试剂红细胞, 以避免红细胞混合后, 对弱抗原红细胞的稀释美国 FDA 对注册和批准作为商品供应的用作不规则抗体筛检的试剂红细胞的要求为必须表达 :D C E c e M N S s,pl Le a Le b K k Fy a Fy b,jk a JK b

30 临床重要的人血清红细胞抗体抗体自然发生免疫盐水 Coombs/LISS HDN HTR 相容表型抗 -A yes yes most most yes yes B O 抗 -B yes yes most most yes yes A O 抗 -AB yes yes most most yes yes O 抗 -H yes yes most most yes yes Oh

31 抗体自然发生免疫盐水 Coombs/LISS HDN HTR 相容表型抗 D yes 罕见 most yes yes D 阴性血抗 C yes 罕见 most yes yes C 阴性血抗 E yes some most yes yes C 阴性血抗 c yes 罕见 most yes yes c 阴性血抗 e yes 罕见 most yes yes e 阴性血

34 方法 1. 盐水介质凝集试验盐水介质的红细胞悬液与相应抗体分子上的抗原结合部位结合, 交叉联结形成肉眼可见的凝集用于 IgM 抗体的检出鉴定和盐水配血试验血型鉴定, 如 ABO MN P 方法 : 玻片法试管法

35 结果的判读和解释溶血和血凝意义一样, 都是抗原抗体反应阳性结果先观察溶血, 后观察血凝记录结果, 并与以前结果对照抗体筛选试验不一定能检出所有有临床意义的抗体一些低频抗原的抗体或有剂量效应的抗体, 可能被漏检

37 抗体鉴定抗体一经检出, 应作抗体鉴定试验, 以确定其特异性, 1. 自身细胞检查 2. 谱红细胞检查

38 谱红细胞 : 一般是由 8-16 人份的已知血型表现型 O 型红细胞组成, 具有各种不同的抗原成分, 根据谱红细胞的反应格局一般可以鉴定常见的抗体方法 : 灵活应用盐水实验法白蛋白介质法酶技术及抗球蛋白实验

39 自身对照待检血清 + 自身红细胞有助于确定是只有同种异体抗体或只有同种抗体, 或两者都有血清只与试剂红细胞反应同种抗体血清与试剂红细胞和自身红细胞都反应, 提示有自身抗体或自身抗体 + 同种抗体如患者体内同种抗体是针对近期输用红细胞的抗原, 则该病人血循环中可以有包被有同种抗体的供者红细胞, 自身对照阳性, 易误认为是自身抗体

40 结果解释阴性和阳性结果均重要血清中只存在一种同种抗体时常表现为清楚明确的血型血清学试验反应格局阴性排除, 阳性确认

42 自身红细胞表型一旦已确定血清中有同种异体抗体, 自身红细胞对该同种抗体应该是阴性如果患者 3 个月内输过血, 自身红细胞表型可能很难确定 1. 分离自身红细胞确定表型 2. 选择抗原阴性的红细胞输血, 一段时间后在确定表型

43 交叉配血主侧 : 受血者血清 + 供者红细胞检测对供者红细胞起反应的抗体次侧 : 受血者红细胞 + 供者血清检测对受者红细胞起反应的抗体自身对照 : 受血者红细胞 + 受血者血清显示自身抗体直接抗球蛋白实验阳性及红细胞缗钱状凝集

44 注意用于交叉配血的标本应该是新鲜的, 供者血标本应刚从血袋上剪下不能单独使用盐水介质交叉配血必要时用生理盐水洗涤细胞红细胞浓度一般是 2-5%

45 抗体筛选和交叉配血结果分析抗体筛选阴性, 交叉配血相合见于临床上绝大多数标本抗体筛选阴性并不保证没有临床有意义的抗体只有用非盐水介质交叉配血, 才能保证待输的血和受者相合

46 抗体筛选阴性, 盐水直接离心交叉配血 ABO 血型不合不合抗 A1 存在于 A2 或 A2B, 在直接盐水交叉配血实验中, 抗 A1 能引起大部分 A 型红细胞不相合存在室温反应的同种抗体

47 抗体筛选阴性, 抗球蛋白交叉配血不合 1. 献血者红细胞 DAT 阳性如一袋血与所有受血者血清不合, 应将其送回血液中心 2. 仅与抗原表达强的细胞反应的抗体 3. 对低频抗原有活性的抗体,eg. 抗 -Wr a

48 抗体筛选阳性, 交叉配血不合同种抗体自身抗体试剂问题缗钱状凝集必须进行包括抗球蛋白在内的交叉配血紧急情况下无法找到血清学配合的血液输血科医生应告之主管医生在这种情况下输血的可能危险

49 同种抗体交叉配合与否取决于涉及抗原的频率 1. 若可能, 鉴定抗体的特异性 2. 可先用抗血清筛选, 再与受者血清作交叉配血用受血者血清还是试剂抗血清做筛选应根据病人的血清反应强度, 能得到的受者血清量以及抗血清的来源和费用等 3. 估计库存血中找到配合血的可能性, 必要时求助血液中心

50 冷自身抗体强反应性的冷反应自身抗体能够引起 ABO 和 Rh 血型鉴定, 抗体筛选和鉴定以及交叉配血试验结果出现问题最常见的特异性是抗 -I 注意确定有无同种抗体

51 温反应自身抗体很少引起 ABO 定型困难, 但引起 Rh 定型困难必须分析有无同种抗体存在

读书报告

读书报告新生儿溶血病的产前实验室诊断四川大学华西第二医院检验科凤婧 HDN 的发病机理胎儿 / 新生儿胎儿 RBC 父源性 Ag 怀孕 / 分娩 IgG 透过胎盘屏障攻击胎儿 / 新生儿 RBC 母亲产前检查的意义 1. 预测母婴血型不合胎儿 / 新生儿发生 HDN 的可能性 2. 为临床及早治疗或干预提供依据, 预防 HDN 的发生, 或减轻其危害优生优育提高人口素质产前检查的内容根据发病机理,

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