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1 生物安全学报 2016ꎬ 25(4): JOURNAL OF BIOSAFETY http: DOI: / j.issn 有害甲藻孢囊的分类鉴定研究进展 高养春 1 ꎬ 董燕红 2 ꎬ 李海涛 2 1 ꎬ 战爱斌 1 中国科学院生态环境研究中心 ꎬ 北京 ꎻ 2 国家海洋局南海环境监测中心 ꎬ 广东广州 摘要 : 有害甲藻孢囊主要是指能产生毒素和 ( 或 ) 能引起有害藻华发生并对水生态系统产生各种危害效应的甲藻孢囊 ꎮ 我 国沿海共记录了 10 属 18 种 ꎬ 占全球有害甲藻孢囊的 3 / 4ꎮ 这些有害甲藻孢囊广泛分布于我国沿海 ꎬ 会对水产养殖业造成 严重的经济损失 ꎬ 甚至会威胁人类的身体健康 ꎮ 因此 ꎬ 有害甲藻孢囊的多样性及分布越来越受到人们的关注 ꎮ 对有害甲藻 孢囊的准确判断不仅对研究其多样性及分布至关重要 ꎬ 而且有助于水产品的安全检验和有害藻华的早期预警 ꎮ 对有害甲 藻孢囊的分类主要存在鉴定困难 鉴定不准确等问题 ꎮ 本文综述了有害甲藻孢囊的危害 中国沿海有害甲藻孢囊的种类和 分布 ꎬ 以及有害甲藻孢囊的鉴定等 3 个方面的研究进展 ꎬ 并提出利用孢囊及营养细胞的形态学特征 分子生物学 毒理学等 多学科研究手段准确鉴定有害甲藻孢囊的建议 ꎮ 关键词 : 有害甲藻孢囊 ꎻ 形态学特征 ꎻ 分子鉴定 Research progress on identification of harmful dinoflagellate cysts: A review Yang chun GAO 1 ꎬ Yan hong DONG 2 ꎬ Hai tao LI 2 ꎬ Ai bin ZHAN 1 1 Research Center for Eco Environmental Sciencesꎬ Chinese Academy of Sciencesꎬ Beijing ꎬ Chinaꎻ 2 South China Sea Environmental Monitoring Centerꎬ State Oceanic Administrationꎬ Guangzhouꎬ Guangdong ꎬ China Abstract: Harmful dinoflagellate cysts refer to cysts derived from dinoflagellates that can produce toxins and ( or) cause harmful di noflagellate blooms. So farꎬ 18 species in 10 genera have been recorded along coasts of China seasꎬ accounting for three quarters of the total number of harmful dinoflagellate cysts globally. These harmful dinoflagellate cysts are widely distributed along Chinese coasts. Harmful dinoflagellate cysts largely threaten marine ecosystemsꎬ aquaculture industries and even human health. Consequent lyꎬ the study of diversity and distributions of harmful dinoflagellate cysts has become a hotspot in marine biology and ecology. The i dentification of harmful dinoflagellate cysts is crucial for sea food safety inspection and prediction of harmful dinoflagellate blooms. Howeverꎬ accurate identification represents a big challengeꎬ mainly owing to limited available morphological features of harmful di noflagellate cysts. Here we review research progress on harmful dinoflagellate cysts on Chinese coastsꎬ including their negative im pactsꎬ diversity and geographical distributionsꎬ and species identification of harmful dinofagellate cysts. In additionꎬ we suggest that it is nececarry to ultilize multiple methods including those based on morphology and molecular biologyꎬ as well as methods based on toxicology and reproductive biologyꎬ to accurately identify harmful dinoflagellate cysts. Key words: harmful dinoflagellate cystꎻ morphological characteristicsꎻ molecular identification 甲藻孢囊是指甲藻为度过不良环境而产生的一种无鞭毛且无游动能力的细胞 ꎬ 是甲藻生活史的一个重要阶段 ( 王朝晖 ꎬ2007)ꎮ 其中 ꎬ 能产生毒素和 ( 或 ) 引起有害藻华 (harmful algal bloom) 的甲藻孢囊被称为有害甲藻孢囊 ꎮ 有害甲藻孢囊可分为含毒素和不含毒素 2 类 ꎮ 含毒素种类不仅在低浓度时就会引起水产品染毒甚至死亡 ꎬ 而且会导致有 害藻华的暴发 ( Burkholder et al.ꎬ1992)ꎻ 不含毒素的种类虽然不会引起水产品的毒化 ꎬ 但大量萌发后能引起有害藻华的发生 ꎮ 有害藻华的发生会对人类健康 生态系统及水产养殖业构成巨大威胁 (An derson et al.ꎬ2012b)ꎮ 随着沿海海域污染 外来种引入 全球变暖等影响的加剧 ꎬ 有害藻华发生的频率不断增大 ( Anderson et al.ꎬ 2012aꎻ Nakanishi et 收稿日期 (Received): 接受日期 (Accepted): 基金项目 : 中国科学院 百人计划 项目 ꎻ 南海区海洋环境质量综合评估方法 [DOMEP(MEA) 01 03] 作者简介 : 高养春 ꎬ 男 ꎬ 博士研究生 ꎮ 研究方向 : 分子生态学与入侵生物学 ꎮ E mail: gaoyc0412@ 163.com 通讯作者 (Author for correspondence)ꎬ E mail: azhan@ rcees.ac.cnꎬ zhanaibin@ hotmail.com

2 第 4 期 高养春等 : 有害甲藻孢囊的分类鉴定研究进展 239 al.ꎬ1996)ꎮ 因分布于海底沉积物中的有害甲藻孢囊很有可能成为有害藻华发生的种源 ꎬ 有害甲藻孢囊的地理分布及多样性和生态特性也越来越受到关注 (Kohli et al.ꎬ2014ꎻ Zonneveld & Daleꎬ1994)ꎮ 甲藻孢囊形体普遍微小 (20 ~ 120 μm)ꎬ 部分种间差异较小及同种存在形态可塑性等特点 ( Fuent es Grünewald et al.ꎬ ꎻ Geider & Rocheꎬ 2002ꎻ Taylor & Gainesꎬ1989)ꎬ 导致对其鉴定困难及鉴定不准确等问题 ꎮ 虽然顾海峰等 (2011) 黄海燕和陆斗定 (2009) 已对甲藻孢囊的研究进行了综述 ꎬ 但均缺乏针对有害甲藻孢囊种类及分子鉴定方面的论述 ꎮ 本文拟综述有害甲藻孢囊的危害 中国沿海有害甲藻孢囊的种类及分布 有害甲藻孢囊的形态学和分子生物学鉴定等 3 个方面的研究进展 ꎬ 以期为有害甲藻孢囊的监测和控制提供参考 ꎮ 1 有害甲藻孢囊的危害笔者统计了全球范围内有害甲藻孢囊的种类 ꎬ 主要有 22 种 ( 表 1)ꎮ 其中 ꎬ19 种含有甲藻毒素 ꎬ3 种不含毒素但能引起有害藻华的发生 ꎬ 而既含有毒素又能引起有害藻华发生的有 13 种 ꎮ 这些甲藻毒素是底栖生物体内毒素积累的重要来源之一 (Schwinghamer et al.ꎬ1994)ꎮ 其被滤食性的鱼 虾 贝类滤食后 ꎬ 在这些海产品体内积累并导致海产品染毒 ꎬ 染毒的海产品通过食物链的传递最终导致人的中毒 ( 丁德文等 ꎬ 2005ꎻ Yasumoto & Murataꎬ 1993)ꎮ 根据食用者中毒的症状 ꎬ 这些甲藻 ( 产孢囊 ) 毒素被分为 3 类 : 腹泻性贝类毒素 ( diarrhetic shellfish poisoningꎬdsp) 麻痹性贝类毒素(paralytic shellfish poisoningꎬpsp ) 神经性贝类毒素 ( neuro toxic shellfish poisoningꎬnsp)ꎮ 除此之外 ꎬ 还有一些对人类危害尚不清楚的毒素 ꎬ 如扇贝毒素 (yessotox inꎬytx) ( Aune et al.ꎬ 2002)ꎮ 这些毒素 ( DSP PSP NSP YTX) 主要由甲藻门中的膝沟藻类产生 ꎬ 少数由裸甲藻类 多沟藻类产生 ( 表 1)ꎮ 有些甲藻 ( 产孢囊 ) 毒素 ( 如属于 PSP 的石房蛤毒素 ) 的毒性是眼镜蛇毒性的 80 倍 ꎬ 产毒甲藻的营养细胞具有毒素 ꎬ 其孢囊也具有毒素 ( Anderson et al.ꎬ1990ꎻ Bravoꎬ1998)ꎬ 并且其毒性比营养细胞更高 ( Daleꎬ 1983ꎻ Oshima et al.ꎬ1992)ꎮ 仅在 1969 年至 1994 年 ꎬ 我国因食用染毒的鱼 贝类而中毒的人数就有 1800 多人 ꎬ 其中至少 30 人死亡 ( 周名江等 ꎬ2001ꎻ Zhou et al.ꎬ1999)ꎮ 这些毒素还能引起鱼 贝类大 面积死亡 ꎬ 给水产养殖业造成重大经济损失 ( 龙华等 ꎬ2008ꎻ Limꎬ2012)ꎮ 此外 ꎬ 有害甲藻孢囊能帮助甲藻度过不良环境 ꎬ 通过洋流或船舶等媒介扩散到其他海域 ꎬ 极易使其成为入侵物种而对当地水域的其他生物及生态环境产生重大的危害 ꎬ 如自从亚历山大藻孢囊入侵美国缅因州西部海域引起赤潮后 ꎬ 此海域几乎每年都会暴发产 PSP 毒素的赤潮 ( An derson & Wallꎬ1978) ꎮ 2 中国沿海有害甲藻孢囊的种类及分布目前 ꎬ 我国发现的有害甲藻孢囊共记录了 10 属 18 种 ꎬ 占全球总有害甲藻孢囊种类的 3 / 4 ( 表 1)ꎬ 其在我国沿海的分布见图 1ꎮ 其中 ꎬ 原甲藻属 Prorocentrum 1 种 ꎬ 亚历山大藻属 Alexandrium 共 6 种 ꎬ 膝沟藻属 Gonyaulax 共 2 种 ꎬ 梨甲藻属 Pyrodini um 1 种 ꎬ 舌甲藻属 Lingulodinium 1 种 ꎬ 原角管藻属 Protoceratium 1 种 ꎬ 斯氏藻属 Scrippsiella 1 种 ꎬ 裸甲藻属 Gymnodinium 1 种 ꎬ 多沟藻属 Polykrikos 共 2 种 ꎬ 褐多沟藻属 Pheopolykrikos 1 种 ꎬ 旋沟藻属 Co chlodinium 1 种 ꎮ 广泛分布于我国沿海的有塔玛亚历山大藻 Alexandrium tamarense 链状亚历山大藻 A. pacificum 具刺膝沟藻 Gonyaulax spinifera 以及锥状斯氏藻 Scrippsiella trochoideaꎮ 3 有害甲藻孢囊的分类鉴定 3.1 形态学鉴定由于大多数甲藻孢囊微小 ꎬ 需要借助于光学或电子显微镜才能对其进行分类鉴定 ꎮ 传统的形态学鉴定方法主要根据孢囊的形态 大小 颜色 孢囊内含物及孢囊壁的结构和表面修饰物等特征对孢囊进行鉴定 ( 王朝晖 ꎬ2007ꎻ 王朝晖等 ꎬ2011ꎻ 魏洪祥等 ꎬ2011ꎻ Liu et al.ꎬ2014ꎻ Matsuoka & Fukuyoꎬ 2000ꎻ Mertens et al.ꎬ2015)ꎮ 表 1 列出的有害甲藻孢囊中 ꎬ 有些具有易于分辨的形态学特征 ꎬ 如多边舌甲藻 Lingulodinium polyedrum 具有舌状凸起 ( 图 2A)ꎬ 网状原角管藻 Protoceratium reticulatum 具有 T 形凸起 ( 图 2B) ( Joyce et al.ꎬ2005)ꎬ 科夫多沟藻 Polykrikos kofoidii 具有网纹状凸起 ( 图 2C)ꎬ 无纹多沟藻 Polykrikos schwartzii 的外部形态与科夫多沟藻类似 ꎬ 但凸起的顶端相互独立而未连接在一起 ( 图 2D) 等 ꎬ 可根据此特有的形态学特征对这些孢囊进行相对准确的鉴定 ꎮ

3 240 生物安全学报 Journal of Biosafety 第 25 卷 Table 1 表 1 主要有害甲藻孢囊种类及其危害 Major spceices of harmful dinocysts and potential damages 生物学名 Biological name 中文名 Chinese name 危害 Damage 参考文献 Reference Prorocentrum lima 利马原甲藻 引起鱼 贝类中毒 (DSP) Fish and shellfish poisoning Alexandrium tamarense 塔玛亚历山大藻 引起鱼 贝类中毒 (PSP) 及赤潮 Alexandrium pacificum 链状亚历山大藻 引起鱼 贝类中毒 (PSP) 及赤潮 Alexandrium minutum 微小亚历山大藻 引起鱼 贝类中毒 (PSP) 及赤潮 Alexandrium affine 相似亚历山大藻 引起鱼 贝类中毒 (PSP) 及赤潮 Alexandrium cohorticula 股状亚历山大藻 引起鱼 贝类中毒 (PSP) Fish and shellfish poisoning Alexandrium fundyense 无 引起鱼 贝类中毒 (PSP) 及赤潮 Alexandrium lusitanicum 无 引起鱼 贝类中毒 (PSP) Fish and shellfish poisoning Alexandrium monilatum 无 引起鱼 贝类中毒 (PSP) 及赤潮 Alexandrium ostenfeldii 无 引起鱼 贝类中毒 (PSP) 及赤潮 Pfiesteria piscicida 无 引起鱼 贝类中毒 (NSP) 及赤潮 Pyrodinium bahamense 巴哈马梨甲藻 引起鱼 贝类中毒 (PSP) 及赤潮 Gonyaulax spinifera 具刺膝沟藻 引起鱼 贝类中毒 (YTX) 及赤潮 曾玲等 ꎬ2013ꎻ Bauder et al.ꎬ2001ꎻ Bravo et al.ꎬ2001ꎻ Marr et al.ꎬ1992ꎻ Pan et al.ꎬ1999 Anderson et al.ꎬ 1996ꎻ Gu et al.ꎬ 2013aꎻ MacIntyre et al.ꎬ1997 Gu et al.ꎬ2013aꎻ John et al.ꎬ2014aꎻ Krock et al.ꎬ2007ꎻ Lilly et al.ꎬ2002ꎻ Sako et al.ꎬ1992 Chang et al.ꎬ1997ꎻ Hansen et al.ꎬ2003ꎻ Lan et al.ꎬ2003ꎻ Vila et al.ꎬ2005 唐祥海等 ꎬ2008ꎻ Lan et al.ꎬ2003ꎻ Nakanishi et al.ꎬ1996ꎻ Nguyen Ngocꎬ2004 Ogata et al.ꎬ1990ꎻ Wisessang et al.ꎬ1991 Anderson & Wallꎬ 1978ꎻ Gao et al.ꎬ 2015ꎻ Stock et al.ꎬ2005 Martins et al.ꎬ2004 Harding et al.ꎬ2009ꎻ Juhlꎬ2005 Guꎬ2011ꎻ Gu et al.ꎬ2013aꎻ Kremp et al.ꎬ ꎻ Lim et al.ꎬ2005ꎻ Mackenzie et al.ꎬ1996 Anderson et al.ꎬ 2003ꎻ Bowers et al.ꎬ 2000ꎻ Burkholder et al.ꎬ1992ꎻ Coyne et al.ꎬ2006 邵魁双等 ꎬ2011ꎻ 王朝晖和康伟 ꎬ2014ꎻ Aza nzaꎬ1997ꎻ Gacutan et al.ꎬ1985ꎻ Guꎬ2011 Aune et al.ꎬ 2002ꎻ Gárate Lizárraga et al.ꎬ 2014ꎻ Lan et al.ꎬ2003ꎻ Rhodes et al.ꎬ2006 Gonyaulax polygramma 多纹膝沟藻 引起赤潮 HABs 林永水和周近明 ꎬ1993ꎻ Morton & Villarealꎬ 1998ꎻ Pan et al.ꎬ2007 Lingulodinium polyedrum 多边舌甲藻 引起鱼 贝类中毒 (YTX) 及赤潮 Protoceratium reticulatum 网状原角管藻 引起鱼 贝类中毒 (YTX) 及赤潮 Gymnodinium catenatum 链状裸甲藻 引起鱼 贝类中毒 (PSP) Fish and shellfish poisoning Cochlodinium polykrikoides 多环旋沟藻 引起鱼 贝类中毒 (NSP) 及赤潮 Lan et al.ꎬ 2003ꎻ Morales Ramírez et al.ꎬ 2001ꎻ Paz et al.ꎬ2004 Álvarez et al.ꎬ2011ꎻ Lan et al.ꎬ2003ꎻ Paz et al.ꎬ2004ꎻ Satake et al.ꎬ1998 Gu et al.ꎬ 2013cꎻ Hallegraeff et al.ꎬ 1995ꎻ Lage & Costaꎬ2013ꎻ Oshima et al.ꎬ1993 王红霞等 ꎬ2014ꎻ Gárate Lizárraga et al.ꎬ2004ꎻ Kim et al.ꎬ2002ꎻ Tomas & Smaydaꎬ2008 Polykrikos kofoidii 科夫多沟藻引起赤潮 HABs 王朝晖 ꎬ2007ꎻ 王朝晖和齐雨藻 ꎬ2003 Polykrikos schwartzii 无纹多沟藻引起赤潮 HABs 王朝晖 ꎬ2007ꎻ 王朝晖和齐雨藻 ꎬ2003 Scrippsiella trochoidea 锥状斯氏藻引起赤潮 HABs 常虹等 ꎬ2014ꎻ 肖咏之等 ꎬ2001 Pheopolykrikos hartmannii 哈曼褐多沟藻 引起鱼 贝类中毒 ( 未知 ) 及赤潮 黄长江和董巧香 ꎬ2000ꎻ Tang et al.ꎬ2013 为中国沿海发现的有害甲藻孢囊种 ꎮ indicate dinoflagellate cyst found in China. 但对于有些有害甲藻孢囊 ꎬ 如亚历山大藻属中的塔玛亚历山大藻复合体 ( 图 2E) 微小亚历山大藻 A. minutum 与相似亚历山大藻 A. affine( 图 2F) 等各个种的形态差异较小 ( 黄海燕等 ꎬ2009ꎻ 王朝晖等 ꎬ2004ꎻ 魏洪祥等 ꎬ2011ꎻ Bravo et al.ꎬ2006)ꎬ 仅仅根据光学显微镜下孢囊的形态学特征难以将这些孢囊鉴定到种的水平 ꎬ 一般在光镜或电镜下观察 孢囊萌发时营养细胞的形态特征可间接鉴定孢囊 ( 顾海峰等 ꎬ2003ꎻ Guꎬ2011ꎻ Gu et al.ꎬ2013a)ꎮ 对于营养细胞形态差异较小的种类 ꎬ 此方法也不能将其准确鉴定 ꎬ 如根据塔玛亚历山大藻复合体的形态学特征仅能将其鉴定为由塔玛亚历山大藻 链状亚历山大藻及 A. fundyense 3 种藻类组成 ( Balechꎬ 1995)ꎻ 但后来的研究发现其存在许多中间形态的

4 第 4 期 高养春等 : 有害甲藻孢囊的分类鉴定研究进展 241 个体以及不同种之间存在形态特征重叠的现象 ꎬ 使得学者们对塔玛亚历山大藻复合体分为 3 个种的观点产生了较大的质疑 (Gayoso & Fulcoꎬ2006ꎻ Kim et al.ꎬ2002ꎻ Orlova et al.ꎬ2007)ꎮ 基于形态学特征对 A. ostenfeldii 与 A. peruvianum( Guꎬ2011ꎻ Kremp et al.ꎬ2014) Pyrodinium bahamense var. compressum 与 Pyrodinium bahamense var. bahamense ( Balechꎬ 1985ꎻ Mertens et al.ꎬ2015ꎻ Steidinger et al.ꎬ1980) 的研究也发现了类似的现象 ꎻ 再如 ꎬ 塔玛亚历山大藻复合体 group Ⅰ( 含有毒素 ) 中的个体均存在侧腹孔 ꎬ 而 group Ⅳ( 未能检测到毒素 ) 的个体中有些存在侧腹孔而有些不存在 ꎬ 因此 ꎬ 仅根据侧腹孔的有无并不能将塔玛亚历山大藻复合体中的 group Ⅰ 和 group Ⅳ 区分开 (Gu et al.ꎬ2013a)ꎮ 此外 ꎬ 该方法不能鉴定不具有萌发能力以及现有试验条件下尚不能萌发的孢囊 ꎮ 虽然孢囊萌发培养技术在不断改善 ꎬ 但孢囊的萌发率仍不能达到 100%(Anderson et al.ꎬ2005ꎻ Gu et al.ꎬ2013b)ꎬ 因此 ꎬ 仍有部分尚未萌发的孢囊不能通过孢囊萌发试验得到鉴定 ꎮ 虽然孢囊的萌发孔及副壳板结构也可用于不同种孢囊的鉴定 ( Yamaguchi et al.ꎬ 1995)ꎬ 尤其用于原多甲藻中 Brigantedinium 的鉴定 ꎬ 但只能鉴定已经萌发的孢囊 ꎬ 而对于未萌发的 Brigantedinium 仅根据孢囊形态学特征仍不能将其鉴定到种的水平 ꎮ 有些孢囊如具刺膝沟藻孢囊具有较强的形态可塑性 ( 图 2G H)ꎬ 据报道 ꎬ 产毒的具刺膝沟藻至少有 19 种不同类型的孢囊 (Taylor & Gainesꎬ1989)ꎬ 仅仅根据孢囊形态学特征难以将具

5 ２４２ 生物安全学报 第 ２５ 卷 Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｓａｆｅｔｙ 有不同形态学特征的同种孢囊划分到同一 个 种ꎮ 属以上的水平( 王朝晖ꎬ２００７ꎻ 王朝晖等ꎬ２０１１ꎻ 魏 因此ꎬ许多基于孢囊形态学的研究只能鉴定到属或 洪祥等ꎬ２０１１) ꎮ Ｆｉｇ.２ 图２ 部分有害甲藻孢囊 Ｐａｒｔ ｏｆ ｈａｒｍｆｕｌ ｄｉｎｏｆｌａｇｅｌｌａｔｅ ｃｙｓｔｓ Ａ Ｂ Ｃ Ｄ 因具有易于鉴定的形态学特征而能鉴定到种的水平ꎬＥ Ｆ Ｇ Ｈ 因具有形态可塑性而只能鉴定到属的水平ꎮ Ｓｏｍｅ ｄｉｎｏｆｌａｇｅｌｌａｔｅ ｃｙｓｔｓ ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ Ａꎬ Ｂꎬ Ｃ ａｎｄ Ｄ ｃａｎ ｂｅ ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ ｔｏ ｓｐｅｃｉｅ ｌｅｖｅｌ ｂａｓｅｄ ｏｎ ｏｂｖｉｏｕｓ ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓꎻ ｏｔｈｅｒ ｄｉｎｏｆｌａｇｅｌｌａｔｅ ｃｙｓｔｓ ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ Ｅꎬ Ｆꎬ Ｇ ａｎｄ Ｈ ｃａｎ ｂｅ ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ ｔｏ ｏｌｎｙ ｇｅｎｕｓ ｌｅｖｅｌ ｆｏｒ ｐｌａｓｔｉｃ ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ ｃｈａｒａｔｅｒｉｓｔｉｃｓ. Ａ:多边舌甲藻 Ｌｉｎｇｕｌｏｄｉｎｉｕｍ ｐｏｌｙｅｄｒｕｍꎻ Ｂ:网状原管角藻 Ｐｒｏｔｏｃｅｒａｔｉｕｍ ｒｅｔｉｃｕｌａｔｕｍ( Ｊｏｙｃｅ ｅｔ ａｌ.ꎬ２００５) ꎻ Ｃ:科夫多沟藻 Ｐｏｌｙｋｒｉｋｏｓ ｋｏｆｏｉｄｉｉꎻ Ｄ:无纹多沟藻 Ｐｏｌｙｋｒｉｋｏｓ ｓｃｈｗａｒｔｚｉｉꎻ Ｅ:塔玛 / 链状亚历山大藻 Ａｌｅｘａｎｄｒｉｕｍ ｔａｍａｒｅｎｓｅ / ｃａｔｅｎｅｌｌａ( 王朝晖ꎬ２００７) ꎻ Ｆ:微小 / 相似 亚历山大藻 Ａｌｅｘａｎｄｒｉｕｍ ｍｉｎｕｔｕｍ / ａｆｆｉｎｅ( 王朝晖ꎬ２００７) ꎻ Ｇ Ｈ:具刺膝沟藻 Ｇｏｎｙａｕｌａｘ ｓｐｉｎｉｆｅｒａ ｃｏｍｐｌｅｘꎮ 除以上孢囊所固有的生物特性外ꎬ环境因素也 可能间接影响孢囊鉴定的准确率ꎮ 一些孢囊在不 同的环境中以及不同的生长阶段具有不同的外部 形态特征ꎬ如多边舌甲藻( Ｍｅｒｔｅｎｓꎬ２０１３ꎻ Ｍｅｒｔｅｎｓ ｅｔ ａｌ.ꎬ２００９) 网状原角管藻( Ｍｅｒｔｅｎｓ ｅｔ ａｌ.ꎬ２０１１) 巴 序且代价较高而限制了其实际应用ꎮ ＤＮＡ 条形码 (ＤＮＡ ｂａｒｃｏｄｅ)是生物体内能够代表该物种且与其 他物种区分的 ＤＮＡ 片段ꎬ其一般较短且易测序ꎬ根 据 ＤＮＡ 条形码的序列特征即可鉴定物种ꎮ 此技术 已广 泛 应 用 于 动 物 ( Ｓｈｏｋｒａｌｌａꎬ ２０１１ꎻ Ｚｈａｎ ｅｔ ａｌ.ꎬ 哈马梨甲藻 Ｐｙｒｏｄｉｎｉｕｍ ｂａｈａｍｅｎｓｅ ( Ｍｅｒｔｅｎｓ ｅｔ ａｌ.ꎬ ２０１３ꎻ Ｚｈａｎ ＭａｃＩｓａａｃꎬ２０１５) 植 物 ( Ｃｏｗａｎ Ｍｉ 度与温度相关ꎻ多边舌甲藻 巴哈马梨甲藻等孢囊 定ꎬ在形态鉴定存在困难的物种上的应用更加广泛ꎮ ２０１５) 等孢囊刺的长度及大小与孢囊所处海域的盐 的大 小 还 与 水 体 的 营 养 成 分 及 水 流 等 相 关 ( Ｍｅｒｔｅｎｓꎬ２０１３ꎻ Ｍｅｒｔｅｎｓ ｅｔ ａｌ.ꎬ２０１５) ꎮ 这些环境因 素对孢囊形态所产生的影响会降低孢囊鉴定的准 确率( Ｆｕｅｎｔｅｓ Ｇｒüｎｅｗａｌｄ ｅｔ ａｌ.ꎬ２００９ ２０１２) ꎮ 常规形态学鉴定具有费时费力的缺点ꎬ对鉴定 人员的要求也较高( Ｇｏｄｈｅ ｅｔ ａｌ.ꎬ２００１) ꎬ且分辨率 较低ꎮ 因此ꎬ需要寻找一种省时省力又准确的孢囊 鉴定方法ꎮ 分子生物学方法在解决这个问题方面 ｃｈａｅｌꎬ２０１２) 微生物( Ａｄｅｄｕｎｔａｎꎬ２００９) 等物种的鉴 如 Ｌｉｌｌｙ ｅｔ ａｌ.(２００７) 根据当时的分子生物学数据将 塔玛亚历山大藻复合体划分为 ５ 个类群(Ⅰ Ⅱ Ⅲ Ⅳ Ⅴ)ꎬ但未划分到具体的种ꎮ 近年ꎬ相关学者才根据核 酸序列并辅以毒理学 繁殖生物学等特征将这 ５ 个 形态相似的类群划分为 ５ 个不同的种( 类群Ⅰ被命名 为 Ａ. ｆｕｎｄｙｅｎｓｅꎬ类群Ⅱ被命名为 Ａ. ｍｅｄｉｔｅｒｒａｎｅｕｍꎬ类 群Ⅲ被命名为 Ａ. ｔａｍａｒｅｎｓｅꎬ类群Ⅳ被命名为 Ａ. ｐａｃｉｆｉ ｃｕｍꎬ类 群Ⅴ被 命 名 为 Ａ. ａｕｓｔｒａｌｉｅｎｓｅ) ( Ｊｏｈｎ ｅｔ ａｌ.ꎬ 展现出了巨大的优势:( １) 试验所需的时间较短ꎻ ２０１４ａ ２０１４ｂꎻ Ｗａｎｇ Ｌ ｅｔ ａｌ.ꎬ２０１４)ꎻ同样ꎬ根据 ｒｄｎａ (３) 在种或属水平上的鉴定具有特异性ꎮ 个种(Ａ. ｏｓｔｅｎｆｅｌｄｉｉ)ꎬ 取消 Ａ. ｐｅｒｕｖｉａｎｕｍ 的命名(Ｇｕꎬ (２) 没有形态学鉴定基础的实验者也可进行操作ꎻ ３.２ 分子生物学鉴定 一般情况下ꎬ不同物种之间的差异主要取决于 相应遗传物质基因组中碱基序列的差异ꎮ 因此ꎬ理 论上认为直接对基因组碱基序列测序是最准确且可 靠的物种鉴定方法ꎮ 但由于基因组较大ꎬ不易于测 的特征ꎬＡ. ｏｓｔｅｎｆｅｌｄｉｉ 和 Ａ. ｐｅｒｕｖｉａｎｕｍ 被建议归为一 ２０１１ꎻ Ｋｒｅｍｐ ｅｔ ａｌ.ꎬ２０１４)ꎮ 但此方法在孢囊鉴定时 仍面临一些困难与挑战ꎬ如分子标记的选择 孢囊核 酸的提取等ꎮ ３.２.１ 分子标记的选择 理想的 ＤＮＡ 条形码片段 既要易于扩增及测序ꎬ也要具有种间区别力( 种间

6 第 4 期 高养春等 : 有害甲藻孢囊的分类鉴定研究进展 243 具有较高的变异而种内具有较低的变异 )ꎮ 因此 ꎬ 相对应的引物既要有一定的通用性 ( 包含尽可能多的目的种 )ꎬ 也要具有一定的特异性 ( 非目的种尽可能少 )(Zhan & MacIsaacꎬ2015)ꎮ 常见的 DNA 条形码有核糖体 RNA 基因 ( rdna) 序列 ꎬ 包括小亚基 rrna 基因 (SSU 或 18S rdna) 大亚基 rrna 基因 (LSU 或 28S rdna) 内转录间隔区(ITS1 ITS2) 及外转录间隔区 ( NTS)ꎬ 叶绿体上的 rbcl psb 基因以及线粒体上的 Cob Cox 等基因 ( 陈月琴等 ꎬ ꎻ Scholin et al.ꎬ ꎻ Wilcoxꎬ1998) ꎮ 数据库 ( 如 NCBI) 中可参考物种条形码序列的有无及种内 种间的遗传距离对有害甲藻孢囊的分子鉴定起着决定性作用 ꎮ 在藻类的分子鉴定上应用最多的是核基因序列 ꎬ 在有害甲藻条形码序列数据库 ( 如 NCBI) 中 ꎬ 与其他分子标记相比较 ꎬ18S 的物种序列最完备 ( 表 2)ꎬ 且有害甲藻孢囊 ( 除膝沟藻属 ) 种内的变异相对较小 ꎬ 易于设计其通用引物 ꎬ 这些优点使得 18S 成为甲藻物种鉴定中应用广泛的分子标记 ( Granéli & Turnerꎬ2006)ꎻ 但其种间的变异较小且种内及种间的遗传距离有重叠 ( 表 2)ꎬ 因此 ꎬ18S 并非最理想的分子标记 ꎮ 与 18S 相比 ꎬ 28S 数据库中可参考的有害甲藻的物种序列也较为完备 ( 表 2)ꎬ 且种间遗传距离较大并具有较高的种间分辨率 ꎬ 有害甲藻孢囊的通用引物也易于设计 ꎬ 但种内遗传距离较大且种内及种间的遗传距离有重叠 ꎬ 所以 28S 作为有害甲藻的分子标记也具有一定的缺陷 ꎮ 核基因上 ITS 序列由于不编码基因 不存在进化上的选择压力而具有较快的进化速率 ꎬ 对物种的分辨率最高 ꎬ 但其同种序列因存在插入缺失等现象而具有较大的变异 ꎬ 即具有较大的种内变异 ( 表 2)ꎬ 这很可能误将同种生物的不同个体划分为 2 个种 ꎻ 同时 ꎬ 不同种间的遗传距离差别较大 ꎬ 这使得为有害甲藻孢囊的分子鉴定划定一个种间界定标准变得困难 ꎬ 而只能针对不同的属或更高分类单元划定特定的种间界定标准 ꎮ 如陈月琴和屈良鹄 (1999) 通过分析 GenBank 上亚历山大藻的 ITS 序列得出 ꎬ 此属的种间 ITS 序列差异值大于 0.20ꎬ 而种内 ITS 序列非常相似 ( 仅 0.01 差异 )ꎬ 这为亚历山大藻属的分子鉴定提供了一个种间界定的标准 ꎮ 理论上 ꎬ 其他属也可以利用此方法找到一个种间界 定的标准 ꎬ 但数据库中存在一些错误的序列而又难以辨别并删除 ꎬ 所以难以获得有害甲藻种间及种内遗传距离的真实值 ꎬ 只能从大量的序列比对中得出一个接近于真实值的值 ꎮ 甲藻的营养类型较多 ꎬ 包括自养型甲藻 异养型甲藻以及混合营养型甲藻等 (Gómezꎬ2012)ꎮ 自养型甲藻细胞内存在可用作条形码的叶绿体基因 ꎬ 如 rbcl pbs 等 ꎬ 而异养型甲藻不存在此基因 ꎬ 这限制了叶绿体基因在甲藻分子鉴定中的广泛应用 ꎮ 虽然线粒体上的基因如 Cob 和 Cox 等的种内及种间遗传距离具有较高的物种分辨率 ( 表 2)ꎬ 但因相关数据库不完善 ( 表 2) 而限制了其应用 ꎮ 目前 ꎬ 尚无单个 DNA 条形码能将所有的甲藻鉴定到种的水平 ꎬ 笔者认为应根据不同的种 属选择不同的分子标记 ꎬ 进而实现孢囊的鉴定或甲藻类群的特殊检测 ꎮ 孢囊核酸的提取孢囊核酸的提取对孢囊的分析鉴定至关重要 ꎮ 孢囊外壁主要由孢粉质类似物或钙质组成 ꎬ 如亚历山大藻属的孢囊外壁是由孢粉质类似物组成 ꎬ 具有抗高温 抗酸碱腐蚀的能力 ꎬ 且比较坚硬 (Bibby & Dodgeꎬ1972)ꎻ 斯氏藻属的孢囊外壁主要是由硬度较高的钙质组成 ꎬ 这些难以破碎的孢囊外壁虽能协助甲藻度过不良环境并扩散到邻近海域外 ꎬ 但增加了孢囊核酸提取的难度 ꎮ 因此 ꎬ 破碎孢囊外壁成为孢囊基因组提取的关键步骤 ꎮ 破碎孢囊壁的常用方法有物理破碎法和化学破碎法 : 物理方法主要包括磁珠破碎法 ( Erdner et al.ꎬ2010ꎻ Penna et al.ꎬ2010) 和液氮研磨破碎法 (Godhe et al.ꎬ 2002)ꎻ 化学方法主要为 CTAB 法 (Coyne & Caryꎬ2005ꎻ Kamikawa et al.ꎬ2007)ꎮ 此外 ꎬ 通过培养甲藻孢囊让其萌发 ꎬ 然后采用常规植物基因组提取的方法也可达到间接提取孢囊基因组的目的 (Bravo et al.ꎬ2006)ꎮ 以上孢囊基因组提取方法在孢囊种的鉴定 有害藻类的定性及定量检测等方面得到了广泛应用 ꎻ 但这些方法只适用于提取数量较多的孢囊种类 ꎮ 在自然条件下 ꎬ 某些种类的孢囊数量较少 ꎬ 有些种类在当前实验室条件下难以萌发 ꎬ 给这些稀有孢囊基因组的提取造成了困难 ꎬ 从而无法从分子水平准确鉴定这些孢囊的种类 ꎮ

7 244 生物安全学报 Journal of Biosafety 第 25 卷

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9 246 生物安全学报 Journal of Biosafety 第 25 卷

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11 ２４８ 生物安全学报 Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｓａｆｅｔｙ 第 ２５ 卷 在过去的数十年间ꎬ单细胞 ＰＣＲ 方法得到了 他生物的污染引起的非特异性扩增) ꎮ 而巢式 ＰＣＲ 取ꎬ可直接将单细胞破碎液用作 ＰＣＲ 模板ꎬ进而在 核通用引物( 外引物) 增加目的基因或 ＤＮＡ 片段的 子鉴定( 尤其是样品中低丰度孢囊或未能萌发孢囊 产物为模板再利用甲藻特异性引物( 内引物) 进行 较快的发展ꎬ 此方法的优点是不需要基因组的提 短时间内实现分子鉴定ꎮ 此方法虽然在孢囊的分 的鉴定) 上得到了一定的应用ꎬ但仍存在一些问题ꎬ 如单个孢囊破碎方法的选取 单个孢囊中较低的 ＤＮＡ 含量不易于 ＰＣＲ 扩增以及缺乏高分辨率且通 能解决孢囊模板量低的问题ꎬ常规的做法:利用真 拷贝数进行第 １ 次 ＰＣＲ 扩增ꎬ然后以第 １ 次 ＰＣＲ 第 ２ 次 ＰＣＲ 扩增( Ｐｅｎｎａ ｅｔ ａｌ.ꎬ２０１０) ꎮ 但由于真核 通用引物在 ＰＣＲ 扩增时对某些类群或模板含量高 的类群具有一定的偏嗜性ꎬ而难以扩增出模板含量 用的甲藻引物( 图 ３) ꎮ 常用的单孢囊破碎方法包 低的 类 群ꎬ 如 甲 藻 ( Ｋｏｈｌｉ ｅｔ ａｌ.ꎬ ２０１４ꎻ Ｐｏｔｖｉｎ ２００６) 微 细 玻 璃 针 破 碎 法 ( Ｔａｋａｎｏ Ｈｏｒｉｇｕｃｈｉꎬ 扩增时选用甲藻特异性引物ꎬ第 ２ 轮扩增时采取种 括反 复 冻 融 法 ( Ｂｏｌｃｈꎬ ２００１ꎻ Ｇｒｉｂｂｌｅ Ａｎｄｅｒｓｏｎꎬ Ｌｏｖｅｊｏｙꎬ２００９) 等ꎮ 因此ꎬ如果在巢式 ＰＣＲ 第 １ 轮 ２００４ꎻ Ｙａｍａｇｕｃｈｉ Ｈｏｒｉｇｕｃｈｉꎬ２００５) 以及盖玻片按 或属以上分类单元的通用引物扩增ꎬ理论上会得到 复杂且具有较高的韧性ꎬ使得反复冻融法在孢囊破 扩增成败的关键ꎮ 甲藻特异性引物已有较多报道 压破碎法( Ｌｉｕ ｅｔ ａｌ.ꎬ２０１４) 等ꎮ 孢囊壁的组成成分 较为理想的扩增效果ꎮ ＰＣＲ 引物是决定孢囊 ＰＣＲ 碎时往往不能取得理想的效果ꎻ由于孢囊比较小且 ( Ｌｉｎ ｅｔ ａｌ.ꎬ２００６ ２００９) ꎬ其中的一对甲藻特异性引 具有较坚硬的外壁ꎬ利用微细玻璃针破碎时易造成 孢囊的丢失ꎻ盖玻片按压破碎法能克服以上 ２ 种方 物( ｄｉｎｏｃｏｂ４ｆ ｄｉｎｏｃｏｂ６ｒ) 已成功用于高通量测序ꎬ 结果显示ꎬ９８.４６ 的序列属于甲藻ꎬ但由于 ｃｏｂ 的 法的缺点而成为一种比较理想的孢囊破碎 方 法ꎮ 可参考数据库不健全ꎬ大部分序列仍不能鉴定到种 较少的 ＤＮＡ 含量使得 ＰＣＲ 体系中模板量较低ꎬ易 的水平 ( Ｋｏｈｌｉ ｅｔ ａｌ.ꎬ２０１４) ꎮ 因此ꎬ有害甲藻孢囊 使 ＰＣＲ 扩增失败( 无扩增片段或由于孢囊表面其 图３ Ｆｉｇ.３ ４ ｃｏｂ 条形码数据库有待进一步完善ꎮ 单孢囊分子鉴定过程中存在的问题或争议及可能的解决方法与思路 Ｐｒｏｂｌｅｍｓ ｏｒ ｄｅｂａｔｅｓ ａｎｄ ｐｏｓｓｉｂｌｅ ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ ｉｎ ｔｈｅ ｐｒｏｇｒｅｓｓ ｏｆ ｔｈｅ ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｓｉｎｇｌｅ ｃｙｓｔ 结语 有害甲藻孢囊不仅会对生态环境造成一定的 危害ꎬ而且会对水产养殖业造成重大的经济损失ꎬ 甚至威胁人类的生命ꎮ 全球 ３ / ４ 有害甲藻孢囊种 类分布在我国沿海地区ꎬ因此ꎬ我国是受甲藻孢囊 威胁最为严重的国家之一ꎮ 有害甲藻孢囊的分类 鉴定对于其多样性及分布的研究至关重要ꎬ现有的

12 第 4 期 高养春等 : 有害甲藻孢囊的分类鉴定研究进展 249 分类方法 ( 形态学鉴定 分子鉴定等 ) 各有优缺点 ꎮ 有些有害甲藻孢囊种具有易于区分的形态学或分子生物学特征 ꎬ 如网状原角管藻 多边舌甲藻等 ꎬ 只要利用其中一种方法就可以将其准确鉴定 ꎻ 而一些有害甲藻孢囊的形态学或分子生物学特征不易被区分 ꎬ 如亚历山大藻属等 ꎬ 我们应将孢囊及萌发后营养细胞形态学 分子生物学 毒理学及繁殖生物学等鉴定方法结合起来 ꎮ 今后应加强甲藻孢囊的相关研究 ꎬ 尤其是有害甲藻孢囊条形码数据库的构建 ꎬ 以提高有害甲藻孢囊分子鉴定的准确率 ꎮ 参考文献常虹 ꎬ 王博 ꎬ 姚蜜蜜 ꎬ 蔡中华 ꎬ 深圳大鹏湾海域锥状斯氏藻赤潮期间细菌群落结构变化研究. 现代生物医学进展 ꎬ 14(10): 陈月琴 ꎬ 屈良鹄 ꎬ 海洋亚历山大藻属种间界定的分子标准. 中山大学学报 ( 自然科学版 )ꎬ 38(1): 陈月琴 ꎬ 屈良鹄 ꎬ 邱小忠 ꎬ 曾陇梅 ꎬ 齐雨藻 ꎬ 甲藻单个细胞 DNA 的制备及在赤潮藻类分子鉴定中的应用. 中山大学学报 ( 自然科学版 )ꎬ 36(4): 陈月琴 ꎬ 屈良鹄 ꎬ 曾陇梅 ꎬ 齐雨藻 ꎬ 郑磊 ꎬ 南海赤潮有毒甲藻链状 - 塔马亚历山大藻的分子鉴定. 海洋学报 ( 中文版 )ꎬ 21(3): 丁德文 ꎬ 刘胜浩 ꎬ 刘晨临 ꎬ 林学政 ꎬ 边际 ꎬ 黄晓航 ꎬ 孢囊及其与赤潮爆发关系的研究进展. 海洋科学进展 ꎬ 23 (1): 顾海峰 ꎬ 蓝东兆 ꎬ 方琦 ꎬ 王宗灵 ꎬ 蔡锋 ꎬ 我国东南沿海亚历山大藻休眠孢囊的分布和萌发研究. 应用生态学报 ꎬ 14(7): 顾海峰 ꎬ 刘婷婷 ꎬ 蓝东兆 ꎬ 中国沿海甲藻包囊研究进展. 生物多样性 ꎬ 19(6): 黄长江 ꎬ 董巧香 ꎬ 年春季珠江口海域大规模赤潮原因生物的形态分类和生物学特征 I. 海洋与湖沼 ꎬ 31 (2): 黄海燕 ꎬ 陆斗定 ꎬ 甲藻孢囊研究进展. 海洋学研究 ꎬ 27(3): 黄海燕 ꎬ 陆斗定 ꎬ 夏平 ꎬ 王红霞 ꎬ 年冬季长江口海域表层沉积物中甲藻孢囊的分类学研究. 生态学报 ꎬ 29(11): 林永水 ꎬ 周近明 ꎬ 盐田水域多纹膝沟藻赤潮发生过程的生态学研究. 热带海洋学报 ꎬ 12(1): 龙华 ꎬ 周燕 ꎬ 余骏 ꎬ 胡益峰 ꎬ 傅国君 ꎬ ~ 2007 年浙江海域赤潮分析. 海洋环境科学 ꎬ 27(S1): 1-4. 邵魁双 ꎬ 巩宁 ꎬ 杨青 ꎬ 李柯 ꎬ 甲藻孢囊在长山群岛海 域表层沉积物中的分布. 生态学报 ꎬ 31(10): 唐祥海 ꎬ 于仁成 ꎬ 陈洋 ꎬ 张清春 ꎬ 王云峰 ꎬ 颜天 ꎬ 周名江 ꎬ 可用于相关亚历山大藻 ( Alexandrium affine) 检测的一个寡核苷酸探针. 海洋与湖沼 ꎬ 39(6): 王红霞 ꎬ 陆斗定 ꎬ 何飘霞 ꎬ 戴鑫烽 ꎬ 夏平 ꎬ 李冬融 ꎬ 东海多环旋沟藻的形态特征和系统进化分析. 海洋与湖沼 ꎬ 45(4): 王朝晖 ꎬ 中国沿海甲藻孢囊与赤潮研究. 北京 : 海洋出版社. 王朝晖 ꎬ 曹宇 ꎬ 张玉娟 ꎬ 年大亚湾大鹏澳养殖区甲藻孢囊通量的沉积捕捉器研究. 热带海洋学报 ꎬ 30(1): 王朝晖 ꎬ 齐雨藻 ꎬ 甲藻孢囊在长江口海域表层沉积物中的分布. 应用生态学报 ꎬ 14(7): 王朝晖 ꎬ 齐雨藻 ꎬ 江天久 ꎬ 许忠能 ꎬ 大亚湾近代沉积物中甲藻孢囊的垂直分布. 水生生物学报 ꎬ 28(5): 王朝晖 ꎬ 康伟 ꎬ 柘林湾表层沉积物中甲藻孢囊的分布与浮游植物休眠体萌发研究. 环境科学学报 ꎬ 34 ( 8): 魏洪祥 ꎬ 赵文 ꎬ 梁玉波 ꎬ 大窑湾养殖区赤潮甲藻孢囊种类组成及分布的研究. 水生生物学报 ꎬ 35(3): 肖咏之 ꎬ 齐雨藻 ꎬ 王朝晖 ꎬ 吕颂辉 ꎬ 大亚湾海域锥状斯氏藻赤潮及其与孢囊的关系. 海洋科学 ꎬ 25(9): 曾玲 ꎬ 龙超 ꎬ 林红军 ꎬ 利玛原甲藻形态特征及生活史的研究. 湖北农业科学 ꎬ 52(11): 周名江 ꎬ 朱明远 ꎬ 张经 ꎬ 中国赤潮的发生趋势和研究进展. 生命科学 ꎬ 13(2): Adeduntan S Aꎬ Diversity and abundance of soil meso fauna and microbial population in South Western Nigeria. Af rican Journal of Plant Scienceꎬ 3(9): Anderson D M and Wall Dꎬ Potential importance of ben thic cysts of Gonyaulax tamarensis and G. excavata in initia ting toxic dinoflagellate blooms. Journal of Phycologyꎬ 14 (2): Anderson D Mꎬ Kulis D Mꎬ Sullivan J J and Hall Sꎬ Toxin composition variations in one isolate of the dinoflagel late Alexandrium fundyense. Toxiconꎬ 28(8): Anderson D Mꎬ Kulis D Mꎬ Qi Y Zꎬ Zheng Lꎬ Lu S H and Lin Y Tꎬ Paralytic shellfish poisoning in Southern China. Toxiconꎬ 34(5): Anderson D Mꎬ Stock C Aꎬ Keafer B Aꎬ Bronzino N Aꎬ Thompson Bꎬ Mcgillicuddy D Jꎬ Keller Mꎬ Matrai P A and Martin Jꎬ Alexandrium fundyense cyst dynamics in the Gulf of Maine. Deep Sea Research Part II: Topical Studies in Oceanographyꎬ 52: Anderson D Mꎬ Cembella A D and Hallegraeff G Mꎬ 2012a. Pro

13 250 生物安全学报 Journal of Biosafety 第 25 卷 gress in understanding harmful algal blooms: paradigm shifts and new technologies for researchꎬ monitoringꎬ and manage ment. Annual Review of Marine Scienceꎬ 4(1): Anderson D Mꎬ Alpermann T Jꎬ Cembella A Dꎬ Collos Yꎬ Masseret E and Montresor Mꎬ 2012b. The globally distributed genus Alexandrium: multifaceted roles in marine ecosystems and impacts on human health. Harmful Algaeꎬ 14: Anderson J Tꎬ Stoecher D K and Hood R Rꎬ Formation of two types of cysts by a mixotrophic dinoflagellateꎬ Pfiesteria piscicida. Marine Ecology Progress Seriesꎬ 246: Aune Tꎬ Sørby Rꎬ Yasumoto Tꎬ Ramstad H and Landsverk Tꎬ Comparison of oral and intraperitoneal toxicity of yes sotoxin towards mice. Toxiconꎬ 40(1): Azanza Rꎬ Contributions to the understanding of the bloom dynamics of Pyrodinium bahamense var. compressum: a toxic red tide causative organism. Science Dilimanꎬ 9(1/ 2): 1-6. Álvarez Gꎬ Uribe Eꎬ Díaz Rꎬ Braun Mꎬ Mariño C and Blanco Jꎬ Bloom of the yessotoxin producing dinoflagellate Protoceratium reticulatum ( Dinophyceae) in Northern Chile. Journal of Sea Researchꎬ 65(4): Balech Eꎬ A revision of Pyrodinium bahamense plate ( Dinoflagellata). Review of Palaeobotany and Palynologyꎬ 45(1 / 2): Balech Eꎬ The Genus Alexandrium Halim ( Dinoflagel late). Sherkin Islandꎬ Co. Corkꎬ Ireland: Sherkin Island Marine Station Publicaiton. Bauder A Gꎬ Cembella A Dꎬ Bricelj V M and Quilliam M Aꎬ Uptake and fate of diarrhetic shellfish poisoning toxins from the dinoflagellate Prorocentrum lima in the bay scallop Arg opecten irradians. Marine Ecology Progressꎬ 213: Bibby B T and Dodge J Dꎬ The encystment of a freshwa ter dinoflagellate: a light and electron microscopical study. British Phycological Journalꎬ 7(1): Bolch C J Sꎬ PCR protocols for genetic identification of dinoflagellates directly from single cysts and plankton cells. Phycologiaꎬ 40(2): Bowers H Aꎬ Tengs Tꎬ Glasgow H Bꎬ Burkholder J Mꎬ Rublee P A and Oldach D Wꎬ Development of Real Time PCR assays for rapid detection of Pfiesteria piscicida and related dinoflagellates. Applied & Environmental Microbiologyꎬ 66 (11): Bravo Iꎬ Ramilo M Lꎬ Fern ndez I and Martínez Aꎬ Tox in composition of the toxic dinoflagellate Prorocentrum lima i solated from different locations along the Galician coast ( NW Spain). Toxiconꎬ 39(10): Bravo Iꎬ Garcés Eꎬ Diogène Jꎬ Fraga Sꎬ Sampedro N and Figueroa R Iꎬ Resting cysts of the toxigenic dinoflagel late genus Alexandrium in recent sediments from the Western Mediterranean coastꎬ including the first description of cysts of A. kutnerae and A. peruvianum. European Journal of Phycolo gyꎬ 41(3): Bravo Lꎬ Polyphenols: chemistryꎬ dietary sourcesꎬ me tabolismꎬ and nutritional significance. Nutrition Reviewsꎬ 56 (11): Burkholder J Mꎬ Noga E Jꎬ Hobbs C H and Glasgow H Bꎬ Jrꎬ New phantom dinoflagellate is the causative agent of major estuarine fish kills. Natureꎬ 358: Chang F Hꎬ Anderson D Mꎬ Kulis D M and Till D Gꎬ Toxin production of Alexandrium minutum ( Dinophyceae) from the Bay of Plentyꎬ New Zealand. Toxiconꎬ 35(3): Cowan R S and Michael F Fꎬ Challenges in the DNA bar coding of plant material Sucher N Jꎬ Hennell J R and Carles M C. Plant DNA Fingerprinting and Barcoding. New York: Humana Press: Coyne K J and Cary S Cꎬ Molecular approaches to the in vestigation of viable dinoflagellate cysts in natural sediments from estuarine environments. The Journal of Eukaryotic Mi crobiologyꎬ 52(2): Coyne K Jꎬ Hare C Eꎬ Popels L Cꎬ Hutchins D A and Cary S Cꎬ Distribution of Pfiesteria piscicida cyst populations in sediments of the Delaware Inland Baysꎬ USA. Harmful Al gaeꎬ 5(4): Dale Bꎬ Dinoflagellate resting cysts: " benthic plankton" Fryxell G A. Survival Strategies of the Algae. Cambridge: Cambridge University Press: Erdner D Lꎬ Percy Lꎬ Keafer Bꎬ Lewis J and Anderson D Mꎬ A quantitative real time PCR assay for the identifica tion and enumeration of Alexandrium cysts in marine sedi ments. Deep Sea Research Part II: Topical Studies in Ocea nographyꎬ 57(3 / 4): Fuentes Grünewald Cꎬ Garcés Eꎬ Alacid Eꎬ Sampedro Nꎬ Ros si S and Camp Jꎬ Improvement of lipid production in the marine strains Alexandrium minutum and Heterosigma akashiwo by utilizing abiotic parameters. Journal of Industrial Microbiology & Biotechnologyꎬ 39(1): Fuentes Grünewald Cꎬ Garcés Eꎬ Rossi S and Camp Jꎬ Use of the dinoflagellate Karlodinium veneficum as a sustain able source of biodiesel production. Journal of Industrial Mi crobiology & Biotechnologyꎬ 36(9): Gárate Lizárraga Iꎬ López Cortes D Jꎬ Bustillos Guzmán J J and Hernández Sandoval Fꎬ Blooms of Cochlodinium polykrikoides ( Gymnodiniaceae) in the Gulf of Californiaꎬ

14 第 4 期 高养春等 : 有害甲藻孢囊的分类鉴定研究进展 251 Mexico. Revista de Biologica Tropicalꎬ 52( S1): Gárate Lizárraga Iꎬ Muñetón Gómez M Sꎬ Pérez Cruz B and Díaz Ortíz J Aꎬ Bloom of Gonyaulax spinifera ( Dino phyceae Gonyaulacales) in ensenada de la pazlagoonꎬ gulf of California. CICIMAR Oceánidesꎬ 29(1): Gacutan R Qꎬ Tabbu M Yꎬ Aujero E J and Icatlo Fꎬ Jrꎬ Paralytic shellfish poisoning due to Pyrodinium bahamense var. compressa in Matiꎬ Davao Orientalꎬ Philippines. Marine Biologyꎬ 87(3): Gao Yꎬ Yu R Cꎬ Chen J Hꎬ Zhang Q Cꎬ Kong F Z and Zhou M Jꎬ Distribution of Alexandrium fundyense and A. pacifi cum (Dinophyceae) in the Yellow Sea and Bohai Sea. Ma rine Pollution Bulletinꎬ 96(1 / 2): Gayoso A M and Fulco V Kꎬ Occurrence patterns of Alex andrium tamarense ( Lebour) Balech populations in the Golfo Nuevo ( Patagoniaꎬ Argentina) ꎬ with observations on ventral pore occurrence in natural and cultured cells. Harmful Al gaeꎬ 5(3): Geider R and Roche J Lꎬ Redfield revisited: variability of C N P in marine microalgae and its biochemical basis. European Journal of Phycologyꎬ 37(1): Godhe Aꎬ Otta S Kꎬ Rehnstam Holm A Sꎬ Karunasagar I and Karunasagar Iꎬ Polymerase chain reaction in detection of Gymnodinium mikimotoi and Alexandrium minutum in field samples from southwest India. Marine Biotechnologyꎬ 3( 2): Godhe Aꎬ Rehnstam Holm A Fꎬ Karunasagar I and Karunasa gar Iꎬ PCR detection of dinoflagellate cysts in field sediment samples from tropic and temperate environments. Harmful Algaeꎬ 1(4): Gómez Fꎬ A quantitative review of the lifestyleꎬ habitat and trophic diversity of dinoflagellates ( Dinoflagellataꎬ Alve olata). Systematics & Biodiversityꎬ 10(3): Granéli E and Turner J Tꎬ Ecology of Harmful Algae: Ecolgogical Studies. Berlin: Springer. Gribble K E and Anderson D Mꎬ Molecular phylogeny of the heterotrophic dinoflagellatesꎬ Protoperidiniumꎬ Diplopsalis and Preperidinium ( Dinophyceae) ꎬ inferred from large sub unit rdna. Journal of Phycologyꎬ 42(5): Gu H Fꎬ Morphologyꎬ phylogenetic positionꎬ and eco physiology of Alexandrium ostenfeldii ( Dinophyceae) from the Bohai Seaꎬ China. Journal of Systematics and Evolutionꎬ 49(6): Gu H Fꎬ Zeng Nꎬ Liu T Tꎬ Yang W Dꎬ Müller A and Krock Bꎬ 2013a. Morphologyꎬ toxicityꎬ and phylogeny of Alexandrium ( Dinophyceae) species along the coast of China. Harmful Algaeꎬ 27: Gu H Fꎬ Zeng Nꎬ Xie Z Xꎬ Wang D Zꎬ Wang W G and Yang W Dꎬ 2013b. Morphologyꎬ phylogenyꎬ and toxicity of Ata ma complex ( Dinophyceae) from the Chukchi Sea. Polar Biologyꎬ 36(3): Gu H Fꎬ Liu T Tꎬ Vale P and Luo Z Hꎬ 2013c. Morphologyꎬ phylogeny and toxin profiles of Gymnodinium inusitatum sp. nov.ꎬ Gymnodinium catenatum and Gymnodinium microretic ulatum ( Dinophyceae) from the Yellow Seaꎬ China. Harm ful Algaeꎬ 28: Hallegraeff G Mꎬ Mccausland M A and Brown R Kꎬ Ear ly warning of toxic dinoflagellate blooms of Gymnodinium cat enatum in southern Tasmanian waters. Journal of Plankton Researchꎬ 17(6): Hansen Gꎬ Daugbjerg N and Franco J Mꎬ Morphologyꎬ toxin composition and LSU rdna phylogeny of Alexandrium minutum ( Dinophyceae) from Denmarkꎬ with some morpho logical observations on other European strains. Harmful Al gaeꎬ 2(4): Harding J Mꎬ Mann Rꎬ Moeller P and Hsia M Sꎬ Mortal ity of the veined rapa whelkꎬ Rapana venosaꎬ in relation to a bloom of Alexandrium monilatum in the York Riverꎬ United States. Journal of Shellfish Researchꎬ 28(2): John Uꎬ Litaker R Wꎬ Montresor Mꎬ Murray Sꎬ Brosnahan M L and Anderson D Mꎬ 2014a. Formal revision of the Alexandri um tamarense species complex ( Dinophyceae) taxonomy: the introduction of five species with emphasis on molecular based ( rdna) classification. Protistꎬ 165(6): John Uꎬ Litaker R Wꎬ Montresor Mꎬ Murray Sꎬ Brosnahan M L and Anderson D Mꎬ 2014b. Proposal to reject the name Gon yaulax catenella ( Alexandrium catenella ) ( Dinophyceae ). Taxonꎬ 63(4): Joyce L Bꎬ Pitcher G Cꎬ du Randt A and Monteiro P M Sꎬ Dinoflagellate cysts from surface sediments of Saldanha Bayꎬ South Africa: an indication of the potential risk of harm ful algal blooms. Harmful Algaeꎬ 4(2): Juhl A Rꎬ Growth rates and elemental composition of Al exandrium monilatumꎬ a red tide dinoflagellate. Harmful Al gaeꎬ 4(2): Kamikawa Rꎬ Nagai Sꎬ Hosoi Tanabe Sꎬ Itakura Sꎬ Yamaguchi Mꎬ Uchida Yꎬ Baba T and Sako Yꎬ Application of re al time PCR assay for detection and quantification of Alexan drium tamarense and Alexandrium catenella cysts from marine sediments. Harmful Algaeꎬ 6(3): Kim Dꎬ Oda Tꎬ Muramatsu Tꎬ Kim Dꎬ Matsuyama Y and Hon jo Tꎬ Possible factors responsible for the toxicity of Co

15 252 生物安全学报 Journal of Biosafety 第 25 卷 chlodinium polykrikoidesꎬ a red tide phytoplankton. Compara tive Biochemistry and Physiology Part C: Toxicology & Phar macologyꎬ 132(4): Kohli G Sꎬ Neilan B Aꎬ Brown M Vꎬ Hoppenrath M and Mur ray S Aꎬ Cob gene pyrosequencing enables character ization of benthic dinoflagellate diversity and biogeography. Environmental Microbiologyꎬ 16(2): Kremp Aꎬ Lindholm Tꎬ Dreβler Nꎬ Erler Kꎬ Gerdts Gꎬ Eirtovaara S and Leskinen Eꎬ Bloom forming Alexandrium Ostenfeldii (dinophyceae) in shallow waters of the Åland Archipelagoꎬ Northern Baltic Sea. Harmful Algaeꎬ 8(2): Kremp Aꎬ Tahvanainen Pꎬ Litaker Wꎬ Krock Bꎬ Suikkanen Sꎬ Leaw C P and Tomas Cꎬ Phylogenetic relationshipsꎬ morphological variationꎬ and toxin patterns in the Alexandri um ostenfeldii ( Dinophyceae) complex: implications for spe cies boundaries and identities. Journal of Phycologyꎬ 50(1): Krock Bꎬ Seguel C G and Cembella A Dꎬ Toxin profile of Alexandrium catenella from the Chilean coast as determined by liquid chromatography with fluorescence detection and liq uid chromatography coupled with tandem mass spectrometry. Harmful Algaeꎬ 6(5): Lage S and Costa P Rꎬ Paralytic shellfish toxins in the At lantic horse mackerel ( Trachurus trachurus) over a bloom of Gymnodinium catenatum: the prevalence of decarbamoylsaxi toxin in the marine food web. Scientia Marinaꎬ 77(1): Lan D Zꎬ Li Cꎬ Fang Q and Gu H Fꎬ Preliminary study on taxonomy of dinoflagellate cysts from major estuary and bays of Fujian Provinceꎬ China. Acta Oceanologica Sinicaꎬ 22(3): Lilly E Lꎬ Kulis D Mꎬ Gentien P and Anderson D Mꎬ Paralytic shellfish poisoning toxins in France linked to a hu man introduced strain of Alexandrium catenella from the west ern Pacific: evidence from DNA and toxin analysis. Journal of Plankton Researchꎬ 24(5): Lilly E Lꎬ Halanych K M and Anderson D Mꎬ Species boundaries and global biogeography of the Alexandrium tama rense complex ( Dinophyceae ). Journal of Phycologyꎬ 43 (6): Lim P Tꎬ Usup G and Leaw C Pꎬ Harmful algal blooms in Malaysian waters. Sains Malaysianaꎬ 41(12): Lim P Tꎬ Usup Gꎬ Leaw C P and Ogata Tꎬ First report of Alexandrium taylori and Alexandrium peruvianum ( Dinophyce ae) in Malaysia waters. Harmful Algaeꎬ 4(2): Lin S Jꎬ Zhang Hꎬ Hou Y Bꎬ Miranda L and Bhattacharya Dꎬ Development of a dinoflagellate oriented PCR primer set leads to detection of picoplanktonic dinoflagellates from Long Island Sound. Applied & Environmental Microbiologyꎬ 72 (8): Lin S Jꎬ Zhang Hꎬ Hou Yꎬ Zhuang Y B and Miranda Lꎬ High level diversity of dinoflagellates in the natural environ mentꎬ revealed by assessment of mitochondrial cox1 and cob genes for dinoflagellate DNA barcoding. Applied & Environ mental Microbiologyꎬ 75(5): Liu T Tꎬ Gu H Fꎬ Mertens K N and Lan D Zꎬ New dino flagellate species Protoperidinium haizhouense sp. nov. ( Peri dinialesꎬ Dinophyceae) ꎬ its cyst theca relationship and phy logenetic position within the Monovela group. Phycological Researchꎬ 62(2): MacIntyre J Gꎬ Cullen J J and Cembella A Dꎬ Vertical mi grationꎬ nutrition and toxicity in the dinoflagellate Alexandrium tamarense. Marine Ecology Progress Seriesꎬ 148: Mackenzie Lꎬ White Dꎬ Oshima Y and Kapa Jꎬ The rest ing cyst and toxicity of Alexandrium ostenfeldii ( Dinophyce ae) in New Zealand. Phycologiaꎬ 35(2): Marr J Cꎬ Jackson A E and McLachlan J Lꎬ Occurrence of Prorocentrum limaꎬ a DSP toxin producing species from the Atlantic coast of Canada. Journal of Applied Phycologyꎬ 4 (1): Martins C Aꎬ Kulis Dꎬ Franca S and Anderson D Mꎬ The loss of PSP toxin production in a formerly toxic Alexandrium lusitanicum clone. Toxiconꎬ 43(2): Matsuoka K and Fukuyo Yꎬ Technical Guide for Modern Dinoflagellate Cyst Study. Tokioꎬ Japan: WESTPAC HAB Japanese Society for the Promotion of Science. Mertens Kꎬ Morphological variation in dinoflagellate cysts: current status and future challenges AASP CAP NAMS CI MP DINO 10 Joint Meeting. San Francisco: Universiteit Gent: 137. Mertens K Nꎬ Ribeiro Sꎬ Bouimetarhan Iꎬ Caner Hꎬ Nebout N Cꎬ Dale Bꎬ de Vernal Aꎬ Ellegaard Mꎬ Filipova Mꎬ Godhe Aꎬ Goubert Eꎬ Grøsfjeld Kꎬ Holzwarth Uꎬ Kotthoff Uꎬ Leroy S A Gꎬ Londeix Lꎬ Marret Fꎬ Matsuoka Kꎬ Mudie P Jꎬ Naudts Lꎬ Peña Manjarrez J Lꎬ Persson Aꎬ Popescu S Mꎬ Pospelova Vꎬ Sangiorgi F and van der Meer M T Jꎬ Process length variation in cysts of a dinoflagellateꎬ Lingulo dinium machaerophorumꎬ in surface sediments: investigating its potential as salinity proxy. Marine Micropaleontologyꎬ 70 (1 / 2): Mertens K Nꎬ Dale Bꎬ Ellegaard Mꎬ Jansson Iꎬ Godhe Aꎬ Kremp A and Louwye Sꎬ Process length variation in cysts of the dinoflagellate Protoceratium reticulatumꎬ from

16 第 4 期 高养春等 : 有害甲藻孢囊的分类鉴定研究进展 253 surface sediments of the Baltic Kattegat Skagerrak estuarine system: a regional salinity proxy. Boreasꎬ 40(2): Mertens K Nꎬ Wolny Jꎬ Carbonell Moore Cꎬ Bogus Kꎬ Elle gaard Mꎬ Limoges Aꎬ de Vernal Aꎬ Gurdebeke Pꎬ Omura Kꎬ Al Muftah A and Matsuoka Kꎬ Taxonomic re ex amination of the toxic armored dinoflagellate Pyrodinium ba hamense plate 1906: can morphology or LSU sequencing separate P. bahamense var. compressum from var. bahamense. Harmful Algaeꎬ 41: Morales Ramírez Aꎬ Víquez Rꎬ Rodríguez K and Vargas Mꎬ Red tide bloom produced by Lingulodinium polyedrum (Peridi nialesꎬ Dinophyceae) in Bahía Culebraꎬ Papagayo Gulfꎬ Costa Rica. Revista De Biologia Tropicalꎬ 49(S2): Morquecho Lꎬ Alonso Rodríguez R and Martínez Tecuapacho G Aꎬ Cyst morphologyꎬ germination characteristicsꎬ and potential toxicity of Pyrodinium bahamense in the Gulf of California. Botanica Marinaꎬ 57(4): Morton S L and Villareal T Aꎬ Bloom of Gonyaulax poly gramma Stein ( Dinophyceae) in a coral reef Mangrove La goonꎬ Douglas Cayꎬ Belize. Bulletin of Marine Scienceꎬ 63 (3): Nakanishi Kꎬ Masao Aꎬ Sako Yꎬ Ishida Yꎬ Muguruma H and Karube Iꎬ Detection of the red tide causing plankton Alexandrium affine by a piezoelectric immunosensor using a novel method of immobilizing antibodies. Analytical Lettersꎬ 29(8): Nguyen Ngoc Lꎬ An autecological study of the potentially toxic dinoflagellate Alexandrium affine isolated from Vietnam ese waters. Harmful Algaeꎬ 3(2): Ogata Tꎬ Pholpunthin Pꎬ Fukuyo Y and Kodama Mꎬ Oc currence of Alexandrium cohorticula in Japanese coastal wa ter. Journal of Applied Phycologyꎬ 2(4): Orlova T Yꎬ Selina M Sꎬ Lilly E Lꎬ Kulis D M and Anderson D Mꎬ Morphogenetic and toxin composition variability of Alexandrium tamarense ( dinophyceae) from the east coast of russia. Phycologiaꎬ 46(5): Oshima Yꎬ Blackburn S I and Hallegraeff G Mꎬ Compar ative study on paralytic shellfish toxin profiles of the dinoflag ellate Gymnodinium catenatum from three different countries. Marine Biologyꎬ 116(3): Oshima Yꎬ Bolch C J and Hallegraeff G Mꎬ Toxin com position of resting cysts of Alexandrium tamarense ( Dino phyceae). Toxiconꎬ 30(12): Pan X Fꎬ Zhang Y and Liu J Tꎬ Dynamic and correlative analysis of the Gonyaulax polygramma red tide in Haizhou Gulf. Marine Environmental Scienceꎬ 26(6): Pan Yꎬ Cembella A D and Quilliam M Aꎬ Cell cycle and toxin production in the benthic dinoflagellate Prorocentrum li ma. Marine Biologyꎬ 134(3): Paz Bꎬ Riobó Pꎬ Fern ndez M Lꎬ Fraga S and Franco J Mꎬ Production and release of yessotoxins by the dinoflagel lates Protoceratium reticulatum and Lingulodinium polyedrum in culture. Toxiconꎬ 44(3): Penna Aꎬ Battocchi Cꎬ Garcés Eꎬ Anglès Sꎬ Cucchiari Eꎬ Totti Cꎬ Kremp Aꎬ Satta Cꎬ Giacobbe M Gꎬ Bravo I and Bastiani ni Mꎬ Detection of microalgal resting cysts in European coastal sediments using a PCR based assay. Deep Sea Re search Part II: Topical Studies in Oceanographyꎬ 57(3 / 4): Potvin M and Lovejoy Cꎬ PCR based diversity estimates of artificial and environmental 18S rrna gene libraries. The Journal of Eukaryotic Microbiologyꎬ 56(2): Rhodes Lꎬ Mcnabb Pꎬ de Salas Mꎬ Briggs Lꎬ Beuzenberg V and Gladstone Mꎬ Yessotoxin production by Gonyaulax spinifera. Harmful Algaeꎬ 5(2): Sako Yꎬ Kim C H and Ishida Yꎬ Mendelian inheritance of paralytic shellfish poisoning toxin in the marine dinoflagel late Alexandrium catenella. Bioscienceꎬ Biotechnologyꎬ & Bio chemistryꎬ 56(4): Satake Mꎬ Mackenzie L and Yasumoto Tꎬ Identification of Protoceratium reticulatum as the biogenetic origin of yesso toxin. Natural Toxinsꎬ 5(4): Scholin C Aꎬ Buck K Rꎬ Britschgi Tꎬ Cangelosi G and Chavez F Pꎬ Identification of Pseudo nitzschia australis (Bacillari ophyceae) using rrna targeted probes in whole cell and sand wich hybridization formats. Phycologiaꎬ 35(3): Scholin C Aꎬ Herzog Mꎬ Sogin M and Anderson D Mꎬ I dentification of group and strain specific genetic markers for globally distributed Alexandrium ( Dinophyceae ). II. Se quence analysis of a fragment of the LSU rrna gene. Journal of Phycologyꎬ 30(6): Schwinghamer Pꎬ Hawryluk Mꎬ Powell C and MacKenzie C Hꎬ Resuspended hypnozygotes of Alexandrium fundyense associated with winter occurrence of PSP in inshore New foundland waters. Aquacultureꎬ 122(2): Shokralla Sꎬ Zhou Xꎬ Janzen D Hꎬ Hallwachs Wꎬ Landry J Fꎬ Jacobus L M and Hajibabaei Mꎬ Pyrosequencing for mini barcoding of fresh and old museum specimens. PLoS ONEꎬ 6(7): e Steidinger K Aꎬ Tester L S and Taylor F J Rꎬ A redescrip tion of Pyrodinium bahamense var. compressa ( Böhm) stat. nov. from Pacific red tides. Phycologiaꎬ 19(4):

17 254 生物安全学报 Journal of Biosafety 第 25 卷 Stock C Aꎬ McGillicuddy D Jꎬ Jrꎬ Solow A R and Anderson D Mꎬ Evaluating hypotheses for the initiation and devel opment of Alexandrium fundyense blooms in the western gulf of maine using a coupled physical biological model. Deep Sea Research Part II: Topical Studies in Oceanographyꎬ 52: Takano Y and Horiguchi Tꎬ Surface ultrastructure and mo lecular phylogenetics of four unarmored heterotrophic dinoflag ellatesꎬ including the type species of the genus Gyrodinium (Dinophyceae). Phycological Researchꎬ 52(2): Tang Y Zꎬ Harke M J and Gobler C Jꎬ Morphologyꎬ phy logenyꎬ dynamicsꎬ and ichthyotoxicity of Pheopolykrikos hart mannii ( Dinophyceae) isolates and blooms from New Yorkꎬ USA. Journal of Phycologyꎬ 49(6): Taylor F J R and Gaines Gꎬ Dinoflagellate cyst morpholo gy: an analysis based on laboratory observations of encyst ment Okaichi Tꎬ Anderson D M and Nemto T. Red Tides: Biologyꎬ Environmental Scienceꎬ and Toxicology. Amster dam: Elservier: Tomas C R and Smayda T Jꎬ Red tide blooms of Cochlo dinium polykrikoides in a coastal cove. Harmful Algaeꎬ 7 (3): Vila Mꎬ Giacobbe M Gꎬ Masó Mꎬ Gangemi Eꎬ Penna Aꎬ Sampedro Nꎬ Azzaro Fꎬ Camp J and Galluzzi Lꎬ A comparative study on recurrent blooms of Alexandrium minu tum in two Mediterranean coastal areas. Harmful Algaeꎬ 4 (4): Wang Lꎬ Zhuang Y Yꎬ Zhang Hꎬ Lin X and Lin S Jꎬ DNA barcoding species in Alexandrium tamarense complex using ITS and proposing designation of five species. Harmful Algaeꎬ 31: Wang Z Fꎬ Yu Z Mꎬ Song X Xꎬ Cao X H and Zhang Yꎬ Effects of ammonium and nitrate on encystment and growth of Scrippsiella trochoidea. Chinese Science Bulletinꎬ 59(33): Wilcox D Cꎬ Turbulence Modeling for CFD. 2nd ed. CAꎬ Canada: DCW Industries. Wisessang Sꎬ Ogata Tꎬ Kodama Mꎬ Fukuyo Yꎬ Ishimaru Tꎬ Saitanu Kꎬ Yongvanich T and Piyakarnchana Tꎬ Ac cumulation of paralytic shellfish toxins by green mussel Perna viridis by feeding on cultured cells of Alexandrium cohorticula isolated from the Gulf of Thailand. Nippon Suisan Gakkaishiꎬ 57(1): Yamaguchi A and Horiguchi Tꎬ Molecular phylogenetic study of the heterotrophic dinoflagellate genus Protoperidini um ( Dinophyceae) inferred from small subunit rrna gene sequences. Phycological Researchꎬ 53(1): Yamaguchi Mꎬ Itakura Sꎬ Imai I and Ishida Yꎬ A rapid and precise technique for enumeration of resting cysts of Al exandrium spp.( Dinophyceae) in natural sediments. Phyco logiaꎬ 34(3): Yasumoto T and Murata Mꎬ Marine toxins. Chemical Re viewsꎬ 93(5): Zhan A Bꎬ Hulak Mꎬ Sylvester Fꎬ Huang X Tꎬ Adebayo A Aꎬ Abbott C Lꎬ Adamowicz S Jꎬ Heath D Dꎬ Cristescu M E and MacIsaac H Jꎬ High sensitivity of 454 pyrosequencing for detection of rare species in aquatic communities. Methods in Ecology and Evolutionꎬ 4(6): Zhan A B and MacIsaac H Jꎬ Rare biosphere exploration using high throughput sequencing: research progress and per spectives. Conservation Geneticsꎬ 16(3): Zhou M Jꎬ Li Jꎬ Luckas Bꎬ Yu R Cꎬ Yan Tꎬ Hummert C and Kastrup Sꎬ A recent shellfish toxin investigation in China. Marine Pollution Bulletinꎬ 39: Zonneveld K A F and Dale Bꎬ The cyst motile stage rela tionships of Protoperidinium monospinum ( Paulsen) zonn eveld et dale comb. nov. and Gonyaulax verior ( Dinophytaꎬ Dinophyceae) from the Oslo Fjord ( Norway). Phycologiaꎬ 33(5): ( 责任编辑 : 杨郁霞 )