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1 實驗室生物安全中央研究院 100 年度環境保護與實驗安全衛生教育研習系列 ~ 生物化學研究所實驗安全衛生教育訓練 李立文中央研究院總務組環安衛小組 TEL: leeliwen@gate.sinica.edu.tw

2 課程內容 實驗室安全危害 生物安全定義與生物性危害特性 實驗室操作感染例證 病原微生物病毒危險等級分類 & 本院及生化所使用之病原 細胞株 操作其他具潛在生物危害的材料 : 細胞及組織 Prion 腫瘤細胞株 Lentiviral vector 帶 NDM-1 基因之材料 合成生物學的生物安全 風險評估要領 生物實驗意外感染主要途徑及類型 生物性氣溶膠 (Aerosol) 生物安全櫃 (BSC) 個人防護 清消 不當實驗室環境例舉 緊急應變 45 生物安全 VS. 生物保全 本院生物實驗安全防護管理 本院生物安全防護守則 國內生物安全相關法規 / 行政命令 / 守則 生物安全相關參考資訊 2

3 實驗安全 Lab Safety Doing things safely is not merely the right way to work it is the only way. Being aware of the dangers around you and having the right attitude about your personal safety leads you to take the necessary actions to protect yourself. 實驗場所意外緊急應變參考網頁 : 一般化學性實驗室操作安全輔助教材影片 (Howard Hughes Medical Institute 製播 ) : Practicing Safe Science, Emergency Response Chemical Hazards, Chemical Storage Hazards, Assessing Risks of Toxic Chemicals 3

4 實驗危害 Hazards Globally Harmonized System Laser hazard High voltage Radiation Biohazard Flammable Explosives Corrosives Gases Acute Toxicity Other Heath Environmental Systemic Substances Effects Effects Health Effects 易燃物質爆炸物腐蝕刺激物質加壓氣體急毒性物質其他健康危害環境危害系統健康危害 4

5 何謂生物安全? 生物安全為一項概念, 乃指從事生命科學的研究者為促進實驗安全的操作 步驟及操作者適當的使用防護裝備及設施, 以避免因操作過程不當而引起後天的感染 過敏 中毒, 或將有感染性的物質釋出到環境中 動物實驗安全, 合成生物學操作及基因改造植物的操作安全等各項議題近年來隨著生物科技的躍進亦逐漸受到重視 目前國際普遍將生物安全 (Biosafety) 與生物保全 (Biosecurity) 併列 生物風險 (Biorisk ) 同時管理 5

6 生物性危害 生物性危害可以為 : 植物 動物 微生物 病毒或是其產物 ( 因生物而產生的毒性物質如生物毒素 ) 具可影響人類健康或是造成不舒適之潛在風險 生物性危害包括 : 過敏 感染 中毒 6

7 生物危害的特性 7

8 生物安全與防護的關聯 實驗設施設計 標準及特殊的微生物學實驗操作 操作者的安全裝備 初級防護 : 保護人員和緊鄰實驗室的周邊環境次級防護 : 保護緊鄰實驗室周邊之外的環境 8

9 實驗室操作造成感染之例證 ( 資料來源 NIH) 實驗室相關感染 (LAI) 報導數目遠低於發生次數原因 根據病原體發病率類型分類 LAI: 病毒 > 細菌 > 立克次體 > 寄生蟲 > 真菌 沒有正式的報告機制 隱瞞不願公佈錯誤 實驗室事件與疾病關聯不明顯 ( 尤其是潛伏期長的感染 ) 可能未識別出亞急性感染, 但血清轉化可能發現亞急性感染 ( 如果基線明顯確定 ) 調查時事件已過, 憑回憶進行的報告可能不精確或不完整 9

10 最常被報導造成實驗室感染之病原 -- 改編自 Harding & Brandt Byers, Brucella spp. Coxiella burnetii Hepatitis B virus Salmonella typhi Francisella tularensis Mycobacterium tuberculosis Blastomyces dermatitidis VEE Chlamydia psittaci (avian) Coccidioides immitis M. tuberculosis 肺結核分枝桿菌 Arboviruses 蟲媒病毒 Coxiella burnetii Q 熱, 立克次體 ( rickettsia) 中之伯納特氏柯克斯氏體引起之人畜共通 (zoonosis) 傳染之急性熱病 Hantavirus 漢他病毒 Brucella spp(ex: Brucellosis) 布氏桿菌病 Hepatitis B virus B 型肝炎 Shigella spp. 志賀氏桿菌 -- 桿菌性痢疾 Salmonella spp. 沙門氏菌 Hepatitis C C 型肝炎 Neisseria meningitidis 腦膜炎雙球菌 10

11 其他常造成實驗室感染之病原 Genetically modified infectious agent 基因改造之感染性病原 Vaccinia virus 牛痘病毒 Human Immunodeficiency Virus (HIV) 人類後天免疫不全症病毒 Simian Immunodeficiency Virus (SIV) 猿猴免疫缺乏病毒 Severe Acute Respiratory Syndrome (SARS) Coronavirus 嚴重急性呼吸道症候群冠狀病毒 Rabies virus 狂犬病病毒 West Nile Virus 西尼羅病毒 Tick-borne encephalitis virus (TBEV) 蜱媒腦炎病毒 Lymphocytic choriomeningitis virus 淋巴球性腦膜脈胳膜炎病毒 MRSA Staphylococcus aureus 對甲氧苯青黴素 (methicillin) 具有抗藥性的金黃色葡萄球菌 Escherichia coli O157:H7 大腸桿菌 O157 Clostridium difficile CD 菌 -- 腸道感染 Burkholderia mallei 鼻疽伯克霍得菌 Parasites 寄生蟲造成之感染症 Percutaneous injury w/needle used to inoculate research animals (PI, 46 yr. old male) Recombinant Vaccinia virus (VVHA) expressing Influenza Hemagglutinin gene Photo provided by Dr. Marie Landry YNHH Clinical Virology Document provided by Benjamin Fontes &Tina Agentis 11

12 病原微生物病毒等危險等級分類 類別描述 RG1)( 健康成年人 ) 不太可能致病 RG2) 可能導致人類疾病, 不太可能在人群中傳播, 通常有有效預防或治療措施 RG3) 可能導致嚴重人類疾病, 可能在人群中傳播, 通常有有效預防或治療措施 RG4) 導致嚴重人類疾病, 對工作人員造成嚴重危害, 很可能在人群中傳播, 通常沒有有效預防或治療措施 例 不產生內孢子之 Bacillus licheniformis; Saccharomyces cerevisiae 釀酒酵母, Escherichia coli-k12, adeno-associated virus 第一型至第四型 S. Aureus 金黃葡萄球菌,Legionella spp 軍團桿菌屬,Human herpes virus 人類疱疹病毒 ;Polio virus 脊髓灰質炎病毒 ;HBV B 型肝炎病毒 Brucella abortus 布魯氏桿菌,M. tuberculosis 結核分枝桿菌 ;HIV 人類後天免疫不全症病毒 ; Plasmodium spp 瘧原蟲屬 Lassa fever virus 拉薩熱病毒 ;Marburg virus 馬堡病毒 ;Ebola virus 伊波拉病毒 12

13 致癌病原分類 Classification Scheme for Oncogenic Agents Low Risk Oncogenic Viruses 低致癌病毒 Moderate Risk Oncogenic Viruses 中致癌病毒 Rous sarcoma SV 40 CELO Ad7 SV40 Polyoma Bovine papilloma Rat mammary tumor Avian leukosis Murine leukemia Murine sarcoma Mouse mammary tumor Rat leukemia Hamster leukemia Bovine leukemia Dog sarcoma* Mason Pfizer monkey virus Marek's Guinea pig herpes Lucke (Frog) Adenovirus Shope fibroma Shope papilloma Ad2 SV40 FeLV HV Saimiri EBV SSV GaLV HV ateles Yaba FeSV High Risk Oncogenic Viruses 高致癌病毒 At the present time, there are no known oncogenic viruses classified as high risk. *Although listed by NCI, it is questionable whether a dog sarcoma virus has been isolated. 資料來源 : NCI((National Cancer Institute) & University of Wisconsin Milwaukee 13

14 本院使用之病原微生物 病毒等 RG1 RG 2 Escherichia coli 大腸桿菌 Bacillus Adenovirus 腺病毒 Bacillus cereus 仙人掌桿菌 Bacteroides 類桿菌 Coronavirus 冠狀病毒 Cryptococcus neoformans. 隱球菌 Dengue Virus 登革病毒 Epstein-Barr virus 鼻咽癌過濾性病毒 Escherichia coli 腸致病性 腸致毒性 腸侵襲性及攜帶 K1 抗原的大腸桿菌菌株, Enterovirus 腸病毒 HAV, HBV, HCV A 型,B 型,C 型肝炎病毒 H1N1, H3N2, Influenza virus 流感病毒 Japanese Encephalitis Virus 日本腦炎病毒 14

15 本院使用之病原微生物 病毒等 RG2 續 Klebsiella spp. 克雷伯氏菌 Leishmania 利什曼原蟲 帶有 NDM-1 基因之細菌 (E.coli) 之實驗 Pseudomonas/Burkholderia 假單胞菌屬 Salmonella 沙門氏桿菌屬 Staphylococcus 鏈球菌 Trichomonas vaginalis 陰道鞭毛滴蟲 Vaccinia Virus 牛痘病毒 RG 3 Avian Influenza virus 禽流感病毒 HIV 愛滋病毒 Prions 變性蛋白 (BSE, CJD, vcjd, GSS, Kuru, FFI) 備註 :CDC 未來將修法將引起羊鹿貂鼠等動物之傳染性海綿狀腦病變之變性蛋白列為 RG2 Foot and Mouth Disease Virus 口蹄疫病毒 15

16 生化所使用之微生物 真菌 病毒及細胞株 微生物, 病毒, 真菌 Baculovirus Bascillus subtilis (Marburg strain) E.coli [BL21(DE3), DH5a, JM109, MC1000, Rosetta2, Rosettagami2, ThermusBL21(DE3),] Klebsiella pneumoniae bacteriophages for K. p Malbranchea sulfurea, Meiothermus, Myceliophthora thermophila Murine leukemia virus Pseudomonas aeruginosa Retroviral vector Lentiviral vector Streptomyces coelicolor A3(2) Yeast (S. cerevisiae, Pichia) white rot fungi 細胞株 3T3 3T3-L1 A431 (Cervical) A549(human lung carcinoma) BAEC BeWo BHK BMECs CHO COS-1 COS7 DLD-1 Du-145 ES cells GG2EE macrophage cell glioma C6 (rat glial cells) H9C2 HCT116 HeLa Hi-5 cells (insect Trichoplusia ni egg cells) primary hippocampal neuron cell lines HEK T 293FT HeNC2 Hep3B(human hepatocellular carcinoma) HepG2(Human hepatoblastoma) HT22, HT29 Huvec JAR JEG3 J774A.1 K562 Kc cells LNCaP MCF-7 (human breast adenocarcinoma) MEF cells (murine embryonic fibroblasts) MiaPaCa 2 (pancreatic) Mouse Trophoblast stem cells (TS) mouse E3.5 blastocysts MS-1 N2A NCI-H838 NCI-H661 NCI-H1876 NIH3T3(mouse embryonic fibroblast) PC-3 PC- 12 Phoenix packaging cells PLC-PRF Rat red blood cells RAW264.7 RL95-2( 人類子宮內膜細胞株 ) RWPE-1 S2(Drosophila) SF9 SF21 SH- SY5Y SL2 SW480 SW900 T47D THP-1 TM4 U20S U937 16

17 細胞及組織的操作 使用人類細胞及組織潛在危險包括血液傳染病原如 :HBV, HIV, HCV, HTLV, EBV, HPV[ 人類乳突病毒 (HPV, Human Papilloma Virus)] 及 CMV, 又如 Mycobacterium tuberculosis( 可能於人類肺部組織 ) 實驗室使用細胞或組織等實驗材料操作應進行風險評估 人類和其他靈長類細胞實驗操作應於 BSL2 防護及操作要求下執行 所有實驗步驟應於生物安全櫃 (BSC) 中進行, 實驗廢棄物丟棄前需經過高溫高壓滅菌或去活化處理 應嚴格遵循配備之各人防護裝備包括 : 實驗衣 手套 護目鏡 操作人類組織及細胞的實驗人員應列冊, 並保存其血清檢體, 各單位應提供 B 行肝炎疫苗的施打及相關諮詢, 並定期辦理其人員健康檢查及建立健康狀況異常監控機制 操作 NHP(Normal human prostatic ) 細胞株 血液 體液及其他人類檢體組織者亦同等視之資料來源 : BMBL5 2007: Appendix H - Working with Human, NHP and Other Mammalian Cells and Tissues 17

18 Prion 普昂蛋白 Prion Diseases: BMBL5 Section VIII- H 人類 靈長類 牛之傳染性海綿狀腦病變之變性蛋白類病原體 : 牛海綿狀腦病變 (BSE) 庫賈氏病 (CJD) 變異型庫賈氏症 (vcjd) GSS 氏病 庫魯病 (Kuru) 致死性家族性失眠症 (FFI)--- RG3 羊 鹿 貂 鼠等傳染性海綿狀腦病變之變性蛋白 --- 國內修法後將列為 RG2 使用 BSL2 TSE agents 之人員防護 : 著實驗衣, 外罩可拋式防護衣 戴手套 ( 動物實驗雙層為佳 ) 護目鏡 口罩 實驗廢棄物以 1M NaOH 浸泡處理再進行高溫高壓滅菌 or 使用直接焚化 18

19 腫瘤細胞株 (Oncogenic/ Cancer Cell Line) 操作 風險 oncogenic cell lines 如本身具有傳染性病毒, 在使用上有較高的風險 一般而言對實驗室直接操作或動物模式研究使用之 oncogenic cell lines, 常以細胞中含血液傳染性病毒及相關病毒做為風險評估的依據, 但並未把癌細胞本身視為 具癌症傳染性 的生物材料 [ 備註 : 血液傳染病原如 :HBV, HIV, HCV, HTLV, EBV, HPV 及 CMV, 又如 Mycobacterium tuberculosis( 可能於人類肺部組織 )] 最近的醫學文獻指出器官移植使捐贈者的癌症傳播給受贈者 尚有文獻指出暴露於 oncogenic cell lines 導致腫瘤生長 ( 動物實驗 ) 在一般社會行為的接觸下, 並無證據顯示腫瘤細胞會水平相互傳遞 腫瘤細胞具傳染力一般而言需要特殊的條件如 : 免疫功能被抑制 同基因同源移植 (Sygeneic) 資料提供 : Maureen O Leary, PhD, MBA, CBSP, Uni. Massachusetts-Amherst 19

20 近年新興使用的載體 : Lentiviral vector 由 lentivirus 改造而來 :Packaging plasmid+ Envelopment plasmid+ HIV transfer plasmid+ Self-inactivating (SIN) vectors 可感染不分裂 (non dividing) 或分化末期 (terminally differentiated) 的細胞 現在證明源自 HIV 的 Lentiviral vector 可有效地進入未刺激的人類 CD34+ 細胞及樹枝狀細胞, 而傳統的反轉錄病毒載體則不易進入此兩類細胞 需於第二級生物安全防護 (BSL2/P2) 等級下操作 若為 oncogene 相關研究, 需於 P2+/BSL2+ 下操作 需定期檢測 RCL(Replication Competent Lentivirus ) 20

21 NDM-1 腸道菌感染症 致病原 : 帶有 NDM-1 (New Delhi metallo-β-lactamase 1) 基因之腸道菌感染 (Enterobacteriaceae) 抗藥性高, 採檢謹慎操作 菌株驗出 NDM-1 基因陽性約須 5-7 天 傳染方式 : 途徑和症狀隨細菌種類不同而異 這類抗藥性細菌可能會經由手術 侵入性醫療處置或傷口處理, 造成醫院病人的伺機性感染, 常見的感染部位包括血液 泌尿道 肺炎及外科手術 預防方法 : 醫護 / 實驗室人員平時應落實手部衛生及標準防護措施穿戴手套及隔離衣 醫院和醫療照護人員必須審慎注意正確並合理的使用抗生素 監測抗生素使用情形與抗藥性細菌 參考網頁 : 傳染病防治工作手冊 : NDM-1 腸道菌感染症 參考網頁 2: 傳染病病例定義暨防疫檢體採檢送驗事項 21

22 合成生物學生物安全考量 Generally, synthetic biology is a field of biotechnology in which existing organisms are modified by artificial genes, proteins, metabolic or developmental pathways, or complete biologic systems that are synthesized and designed by humans. Nucleic acids can now be synthesized using chemical or other methods that do not required traditional recombinant deoxyribonucleic acid (rdna) techniques. Synthetic biology encompasses experiments in which synthetic nucleic acids are placed in cells and organisms 無法 ( 未 ) 控制的釋出 生物恐怖主義攻擊 基因改造 (GM) 來源宿主生物可為參考 已知風險 : 細菌真菌或病毒 合成生物學 (SB) 無任何 natural 參考資料 不易確立 DNA 片段能被如何運用 考量 新疑問的產生及風險分析的不確定性 難以對潛在風險生物體及研究的濫用與誤用進行監測 資料來源 : Synthetic Biology Biotechnology Takes a Big Step Forward Beveridge & Diamond, P.C., August 11,

23 合成生物學研究未控制釋出可能產生之風險 實驗室同仁受感染 合成的病毒或微生物造成疫病爆發 對環境造成危害 新疾病的散播 生態平衡的瓦解浩劫 可以清除但造成生態不平衡 對自然界的生物基因庫造成污染 ~Image by Patricia Piccinini Scientists at Linden Labs in San Francisco,California have successfully created a human-bear-pig chimera. 23

24 實驗室生物危險性分級 第一等級危險性 : 個人和人群危險性無或低 第二等級危險性 : 個人危險性中度 人群危險性低 第三等級危險性 : 個人危險性高 人群危險性低 第四等級危險性 : 個人危險性高 人群危險性高 根據危險性評估分類 四因素. 危險性. 致病性. 沒有微生物的全球列表. 傳播方式. 國家 / 地區性. 預防措施. 有效治療方法 24

25 實驗操作者自我風險評估要領 我的實驗操作使用哪些材料? 預測潛在之安全考量 明瞭 ( 危害物質 ) 進入身體的途徑 生物醫學相關研究領域實驗操作者對生物性 化學及物理性危害需具備的知識 使用這些材料的潛在危險為何? 危害辨識 風險評估 我如何避免自己 同事及環境, 因實驗操作而暴露於潛在危機中? 實驗使用物品的相關參考資料 行政面的控管 我如何維護自身 同事及環境安全? 實驗設備的工程控管 個人防護裝備 25

26 生物實驗意外感染主要途徑及類型 生物實驗意外感染主要途徑 吸入氣溶膠 ( 氣霧 )( 意外導致或由於工作操作吸入 ) 通過皮膚接觸 黏膜接觸污染物 吸收攝入 典型生物實驗意外類型 針頭 / 注射器刺傷 感染性物質溢出 / 噴霧接觸或吸入 碎玻璃 / 其他銳器扎傷 從移液管吸入 動物咬傷 / 抓傷或外寄生蟲造成人畜共通之疾病感染 26

27 注射針頭回套易造成意外, 建議使用完直接丟棄於專用容器, 或使用安全針頭 27

28 生物性氣溶膠 (Aerosol) 風險考量 許多實驗室操作步驟會產生氣溶膠 ( 氣霧 ) 氣溶膠 ( 氣霧 ) 需被考量的特性 攪拌器 超音波震盪 使用移液管 ( 特別是最後一滴被吹出時 ) 擰開瓶蓋 從隔離蓋中抽出針頭 組織研磨 清潔動物籠舍 微生物在氣溶膠中的生存力 微生物的濃度 氣溶膠顆粒的大小 ( 對氣溶膠顆粒進入呼吸道的深度和滯留時間有影響 ) 煙霧的持續性 (<10μm 的煙霧顆粒持續飄浮在空氣中,20-30μm 大小的顆粒容易經由通風系統轉移 ) 28

29 氣溶膠 [ 氣霧 ](Aerosol) 的形成 謹慎操作避免氣溶膠 [ 氣霧 ] 的飛濺 使用移液 Pipet 時擠出最後殘存的液滴產生 注射針頭自藥瓶抽出產生 均質機使用產生 29

30 生物安全櫃 (BSC) Type II B2 Class I BSC Class II BSC Class III BSC 30

31 層流潔淨操作台與生物安全櫃 層流潔淨操作台 (Laminar Flow Hood) 保護操作物品不被污染, 所以僅適用於不具生物危害性的操作內容 生物安全櫃 (BSC) 能提供對操作者及環境的保護, 所以能操作感染性物質 避免在生物安全櫃內操作具揮發性的毒化物 31

32 層流潔淨操作台 Laminar Flow Hoods Class II 生物安全櫃 BSC 32

33 生物安全櫃內實驗用品擺放 不阻擋欄柵 使用前消毒工作面 窗戶開到正確高度 確定排水閥關閉 確定所須物品到位 清潔與骯髒物品分開擺放 Bacticinerator Instead of open flame 33

34 實驗操作個人防護裝備 操作者需依其所需穿著適當的防護裝備 足部防護 : 不宜穿著短褲 露趾鞋 眼部 / 面部防護 : 有可能發生噴濺意外者需配戴護目鏡 面罩 手部 / 手臂防護 : 手套使用 頭部防護 呼吸防護具 實驗衣著防護 34

35 35

36 保護操作者及環境清消 消毒 ( 破壞病原生物之感染能力 ) Alcohol 酒精 Halogens (NaOCl) 次氯酸鈉漂白水 使操作者產生免疫力如疫苗注射 Quaternary Ammonium Compounds 四級胺化合物 Phenolics 酚類水溶液 Aldehydes 戊乙醛 避免氣霧小心操作 清消的方式 : 消毒, 滅菌, 除污 36

37 實驗室常用的不活化方法 病原體確定不活化後方可以降低生物安全等級 常用的不活化方法 組織或細胞固定, 如 70% 酒精 冰醋酸及甲醇混合 或使蛋白質交錯連結的 dimethylsuberimidate 破壞病原體完整性, 如抽取 DNA, RNA or protein 極端的非生理狀態, 如 ph 鹽類 放射線 乾燥 NOTE: 不活化效率不同, 故降低生物安全等級後仍須謹慎操作 37

38 你不希望看到的實驗室環境 38

39 39

40 40

41 實驗室生物危害緊急應變程序 飛濺 針扎 割傷溢出離心管破裂 BSC 電力中斷 通報 PI 醫學評估 ( 是否隔離 ) 自行處理 通報 PI 通報實驗室生物危害緊急應變小組 檢驗陰性 除污小組處理 抽血檢查 醫學治療 預防治療 是否有症狀 持續追蹤 是 否 41

42 BSL1(P1) 實驗室生物污染處理 穿戴拋棄式手套 自污染外圍向內側加上消毒劑 紙巾浸泡消毒水舖於污染區, 反應 分鐘 以浸泡過消毒水之乾淨紙巾清理污染區 ( 污染必須完全擦乾淨 ),, 以新的消毒劑消毒污染區 使用過之紙巾置於塑膠袋內拋棄

43 BSL2(P2) 實驗室生物污染處理 使用適當之個人防護裝備 以吸收材料覆蓋污染物 自污染外圍向內側加上消毒劑 反應 分鐘 清除污染 ( 血液必須完全擦乾淨 ) 以新的消毒劑消毒污染區 將污染廢棄物以生物感染性廢棄物處理

44 RG1 RG2( 含血液感染性病原 ) 人員污染之緊急處置 步驟一 : 污染之皮膚及傷口需以優碘擦洗十五分鐘, 而後以大量的水沖洗 污染之眼睛或黏膜需以生理鹽水或利用安全洗眼器沖洗十五分鐘 步驟二 : 通報 立刻通知實驗室管理人, 負責人, 所方環安衛負責人員 意外通報 : 如需支援, 上班時間 , ; 非上班時間 ( 本院值班室 ) 通報內容 : 意外發生人 意外發生時間 地點 病原名稱 受傷狀況概述 步驟三 : 醫療 至醫務室或醫院追蹤處理 : 本院醫務室電話 必須在感染一小時內處理 若需緊急運送到醫院, 請打 119

45 實驗室生物安全及生物保全 實驗室生物安全系指經由防護原則 技術及操作以預防病原體 毒素暴露或溢出之意外 實驗室生物保全系指持有感染性病原體 檢疫管制之疫病原 具侵襲性之外來種 基因改造生物的機構或個人防範以上持有物遺失 失竊 不當使用 誤用 或意圖散播 實驗室保全內容包含 : 實驗材料物理性保全 工作人員保全 實驗物品控管責任 運送保全 資訊保全 相關管理計畫 45

46 本院生物實驗安全防護管理 人員 : 生物實驗安全防護教育講習 實驗室新進研究人員拜訪 實驗計畫 : 生物實驗安全審核 感染性生物材料異動申請 實驗室 : 生物實驗安全防護等級分級並標示 生物實驗室安全資料調查 相關諮詢人員 : 計畫主持人 實驗室負責人 各所 ( 處 研究中心 ) 安全人員 李立文 許玉芳 稽查 : 生物實驗室安全查核, 生物安全櫃 (BSC) 年度確效 46

47 生物危害警示標誌 張貼於操作使用血液 /OPIM RG2 以上微生物之實驗區域 張貼於儲存血液 /OPIM RG2 以上微生物之冰箱 標示於運送血液 /OPIM RG2 以上微生物之容器 標示於放置血液 /OPIM RG2 以上微生物廢棄物之容器 可向本院總務組環安衛小組索取 ) 47

48 生物實驗室分級標誌 可向本院總務組環安衛小組索取 ) 48

49 國內生物醫療廢棄物貯存規定 廢尖銳器具 廢尖銳器具及感染性廢棄物應分類貯存 以不易穿透之堅固容器密封盛裝 貯存以一年為限 熱處理法以紅色可燃容器密封盛裝 滅菌法以黃色防漏 / 不易破容器密封貯存 貯存容器除應於外層明顯處標示廢棄物名稱 產生廢棄物之事業名稱 貯存日期 重量 清除處理機構名稱及區別有害事業廢棄物特性之標誌外, 感染性廢棄物另應標示貯存溫度 49

50 其他感染性廢棄物 : 以紅色塑膠袋密閉貯存, 袋子上並標示貯存時間 ( 即日期 ) 溫度 ( 即冷藏庫或冷凍庫溫度 ), 並於明顯處註明所 中心單位名稱及實驗室負責人姓名 貯存時間 : 依環保署公告 事業廢棄物貯存清除處理方法及設施標準 之規定, 感染性事業廢棄物 : 於常溫下貯存者一日為限 於 5 以下冷藏者, 七日為限 0 以下冷凍者, 三十日為限 本院感染性廢棄物於清運前須經 高溫高壓滅菌後方可送清運 ( 仍依 感染性廢棄物清運方式執行 ) 50

51 生物醫療廢棄物清運及實驗容器清洗個 人防護裝備 操作者需依其所需穿著適當的防護裝備 足部防護 : 不宜穿著短褲 露趾鞋 眼部 / 面部防護 : 有可能發生噴濺意外者需配戴護目鏡或面罩 手部 / 手臂防護 : 手套 臂套使用 呼吸防護具 : 口罩 衣著防護 51

52 研究計畫生物實驗安全審核 52

53 感染性生物材料異動申請 53

54 生物實驗室安全防護等級查核 自我檢查 由實驗室進行, 至少每半年一次 ( 填寫中央研究院生物實驗室安全檢查表留存備查 ) 每年進行生物實驗室安全防護等級查核及不定期抽查 由本院生物實驗安全委員會 總務組環安衛小組安全人員執行 查核項目 : 防護設備 定期檢查及維修保養紀錄 實驗之安全操作程序 人員訓練 感染性生物材料清單 ( 位置 ) 實驗室緊急應變資料等 54

55 55

56 本院生物安全防護守則 中央研究院實驗室守則 中央研究院人類檢體實驗材料使用規範 中央研究院 Lentiviral vector 實驗防護標準 中央研究院流感病毒研究生物實驗安全注意事項 中央研究院感染性生物材料管理要點 中央研究院實驗室感染性生物材料保全管理要點 56

57 國內生物安全相關法規 / 行政命令 / 守則 感染性物質運輸規範指引 ( 疾管局編譯 ) 人體細胞組織優良操作規範 人體器官組織細胞輸入輸出管理辦法 ( 衛生署 ) 生物安全第三等級實驗室管理規範 2.0 版 ( 疾管局 ) 生物風險管理 - 實驗室生物保全指引 ( 疾管局編譯 ) 使用無脊椎動物做為病原體宿主或病媒相關研究應注意事項 ( 疾管局 ) 基因治療人體試驗申請與操作規範 ( 衛生署 ) 基因重組實驗守則 ( 國科會 ) 基因轉殖水產動植物田間試驗管理規則 ( 漁業署 ) 基因轉殖植物田間試驗管理辦法 基因轉殖植物田間試驗機構追蹤查驗作業要點 ( 農糧署 ) 勞工安全衛生法 勞工安全衛生設施規則 ( 勞委會 ) 植物有害生物實驗規範 植物防疫檢疫法 ( 防檢局 ) )[99/08 目前修訂中 ] 感染性生物材料管理及傳染病病人檢體採檢辦法 ( 疾管局 ) 操作帶有 NDM-1 基因之細菌之實驗室生物安全規定 ( 疾管局 ) 實驗室生物安全手冊第三版 (2004 中文版譯自世界衛生組織 ) 實驗室生物保全管理規範 ( 第一版 )( 疾管局 ) 體細胞治療人體試驗申請與操作規範 ( 衛生署 ) 57

58 生物安全相關參考資訊 基因重組實驗守則國科會 93 年 6 月 實驗動物管理與使用指南中華實驗動物學會 94 年 1 月 Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories (BMBL) 5th Edition 2007 Primary Containment for Biohazards: Selection, Installation and Use of Biological Safety Cabinets 2007 Biological Safety: Principles and Practices, 4th Edition 2006 ASM Press Laboratory Biosafety Guidelines 3rd Edition 2004 CSCHAH, Canada WHO Laboratory Biosafety Manual - Third Edition Geneva

59 生物安全相關參考資訊 Material Safety Data Sheets (MSDS) for Infectious Substances-- Public Health Agency of Canada 感染性生物材料之物質安全資料表 --- 加拿大衛生部 ( ) 2011 NIH GUIDELINES FOR RESEARCH INVOLVING RECOMBINANT DNA MOLECULES 美國 NIH 基因重組實驗規範 2011 年版 ( ) 59

60 生物安全相關參考資訊 DOHS, NIH 開發, Elizabeth R. Griffin. 基金會贊助實驗室安全 3D 立體互動式教學軟體 STAR LITE YOU ARE ON A SAFETY MISSION ~April 2009 Work with your colleagues (some humanoid, some not) to complete quests in a lab. The STAR-LITE laboratory can be chaotic and safety violations will occur. You will make critical safety decisions to ensure that you and your colleagues work safely in a lab. STAR-LITE (Safe Techniques Advance Research Laboratory Interactive Training Environment) is an innovative and groundbreaking method to learn about laboratory safety techniques. STAR-LITE was inspired by and is dedicated to the memory of Elizabeth R. Griffin. 60

61 The End 祝您健康 & 研究成果豐碩 61

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