2018-5中国药理学通报封面

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1 中国药理学通报 ChinesePharmacologicalBuletin 2018May;34(5):695~ 网络出版时间 : :13 网络出版地址 :htp://kns.cnki.net/kcms/detail/ r html 人参多糖通过 camp/pka/creb 信号通路抗糖尿病肾病肾纤维化作用机制研究 黄倩 1, 张素萍 2 3, 施子禄 (1. 泉州医学高等专科学校基础医学部生理学教研室, 福建泉州 ;2. 浙江大学基础医学院生理系, 浙江杭州 ;3. 福建医科大学附属泉州第一医院肾内科, 福建泉州 ) doi: /j.isn 文献标志码 :A 文章编号 : (2018) 中国图书分类号 :R 332;R284 1;R322 61;R342 4;R692 39; R977 3;R977 6 摘要 : 目的探讨人参多糖对链脲佐菌素 (STZ) 诱导的糖尿病肾病 (DN) 模型小鼠肾纤维化的治疗作用, 并揭示其可能的作用机制 方法 STZ(120mg kg -1 ) 尾静脉注射构建糖尿病小鼠模型, 并随机分为模型组 人参多糖 ( mg kg -1 ) 组 空白组, 连续灌胃给药 12 周 12 周末, 比较各组小鼠空腹血糖 (FBG) 24h 尿微量白蛋白 (malb) 血清肌酐 (Scr) 和尿素氮 (BUN) 含量变化 ; 肾脏 Mason 染色观察肾脏病理学变化 ; 免疫组织化学法检测肾皮质中 α 平滑肌肌动蛋白 (α SMA) 表达 ; 放射免疫分析法检测肾皮质中环磷酸腺苷 (camp) 含量 ;Westernblot 检测肾皮质中细胞外基质及信号通路 PKA/CREB 相关蛋白的表达 结果人参多糖能够明显降低 DN 小鼠 FBG malb Scr BUN 含量, 并通过抑制 camp/pka /CREB 信号通路的激活, 降低肾小管上皮细胞表型转化蛋白 α SMA 及细胞外基质相关蛋白 LN FN 的表达, 延缓肾纤维化的进程 结论人参多糖对 DN 小鼠肾纤维化具有明显的抑制作用, 其机制可能与其抑制 camp/ PKA/CREB 信号通路的激活有关 关键词 : 糖尿病肾病 ; 人参多糖 ; 环磷酸腺苷 ;α 平滑肌肌动蛋白 ; 蛋白激酶 A; 环磷腺苷效应元件结合蛋白糖尿病肾病 (diabeticnephropathy,dn) 是糖尿病患者最常见的微血管并发症之一, 一旦出现肾纤维化, 治疗相当棘手 DN 的主要病理表现为肾小球系膜和肾小管间质出现渐进性的细胞外基质集聚, 最终导致肾脏出现不可逆转的纤维化 其中, 转化生长因子 β(transforminggrowthfactor β,tgf β) 过度表达与肾纤维化密切相关 近年的研究从多角收稿日期 : , 修回日期 : 作者简介 : 黄倩 (1984-), 女, 博士, 讲师, 研究方向 : 肾脏生理学, E mail: @qq.com; 施子禄 (1973-), 男, 硕士, 副主任医师, 研究方向 : 临床肾脏疾病, 通讯作者,E mail:cthk2010@zju.edu.cn 度 多层次证实了经典 TGF β/smad 信号通路参与肾纤维化的发生 发展 [1-2] 然而,TGF β 也能激活 [3] 丝裂原活化蛋白激酶和蛋白激酶 A(proteinki nasea,pka) 等其他信号分子, 而激活环磷酸腺苷 (cyclicadenosinemonophosphate,camp)/pka 信号通路, 可明显诱导细胞中 TGF β1 的表达 [4] PKA 也称 camp 依赖的蛋白激酶, 由 2 个调节亚基和 2 个催化亚基构成 camp 与 PKA 调节亚基结合可促进催化亚基的活化, 有活性的催化亚基直接转位入核, 调节某些转录因子的活性, 如环磷腺苷效应元件结合蛋白 (camp responseelementbindingprotein, CREB) 家族,PKA 通过催化 CREB 磷酸化而启动下游基因的表达, 最终调节细胞功能 研究显示 [5], PKA 信号通路与 TGF β 诱导的肾小球硬化密切相关, 抑制 PKA/CREB 信号通路能直接阻断 TGF β1 诱导的肾小球硬化 因此, 延缓或阻断肾脏细胞外基质过度纤维化是防治肾损害的关键所在, 也是肾脏病治疗学的一个重要课题 本研究从阻断 camp/pka/creb 信号通路的角度出发, 积极开发抑制肾纤维化的 DN 防治药物可能是一种新思路 研究发现, 中药多糖类化合物如地黄多糖 黄芪多糖对 DN 具有良好的保护作用, 而其发挥药理作用的机制之一正是通过调节机体内多种关键蛋白和基因如 TGF β PKA 等来实现 [6-7] 人参 Panax ginsengc.a.mey. 作为最古老 最著名的珍贵药材之一, 在我国已被广泛应用了数千年, 其含有丰富的多糖 皂苷 多肽等化学成分 研究显示 [8], 人参多糖 (ginsengpolysaccharides,wgp) 具有良好的抗肿瘤 抗氧化 降血糖 调节免疫等多种生物活性 [8] 那么, 同样含有多糖类成分的 WGP 是否对 DN 也具有同样的药理作用, 目前国外内尚未见报道 因此, 本研究通过构建 DN 小鼠模型, 观察 WGP 对 DN 小鼠血糖 肾功能 肾脏病理变化的影响, 并对与肾纤维化相关的 camp/pka/creb 信号通路中的关键蛋白进行测定, 阐明 WGP 对肾纤维化的防治作用及可能机制, 为进一步研发有效的 DN 防治药物提

2 696 中国药理学通报 ChinesePharmacologicalBuletin 2018May;34(5) 供可靠的实验依据 1 材料与方法 1.1 实验动物健康成年 C57BL/6 小鼠,8~12 周龄,SPF 级, 体质量 23~26g, 购自上海斯莱克实验动物有限公司, 实验动物合格证号 :SCXK 沪 标准条件饲养, 自由获取食物和水, 室温控制在 22 左右, 相对湿度为 30% ~70% 1.2 药物取 1kg 人参粉末, 按一定比例 (1 20) 加入双蒸水, 充分混匀后, 置于 100 恒温水浴箱中水浴 2h, 过滤, 重复上述步骤 3 次, 得到滤液, 并用微波真空干燥器浓缩, 所得浓缩液中加入 5 倍量的无水乙醇,4 冰箱过夜, 用布式漏斗进行抽滤, 醇沉 3 次, 所得沉淀物即为人参粗多糖 [9] 将多糖粗品配制成 10g L -1 的溶液, 按 3 1 比例加入 Sevage 试剂 ( 氯仿 正丁醇 =4 1), 经多次萃取后除去蛋白质, 用布氏漏斗抽滤得到多糖沉淀, 真空干燥得到 WGP, 经红外光谱分析法鉴定多糖, 紫外光谱测定样品中的 WGP 纯度达 86 1% 1.3 试剂与仪器链脲佐菌素 (streptozotocin,stz, 美国 Sigma 公司, 批号 S0130);cAMP 放射免疫分析药盒 ( 上海中医药大学同位素室, 批号 ); α 平滑肌肌动蛋白 (α smoothmuscleactin,α SMA) 层黏连蛋白 (laminin,ln) 纤维连接蛋白 (fibronec tin,fn) PKA CREB p CREB 蛋白抗体 (Abcam 公司, 批号分别为 ab5694 ab11575 ab2413 ab65013 ab7540 ab32096);hrp 标记的山羊抗兔 IgG 抗体 ( 上海碧云天生物技术有限公司, 批号 A0208) UVmini 1240 紫外可见分光光度计 ( 日本岛津国际贸易上海有限公司 );5810R 高速冷冻式离心机 ( 德国 Eppendorf 公司 );XR210 全自动生化分析仪 ( 广东中山新锐医疗设备科技有限公司 );MDF U3386S 80 超低温冰箱 ( 日本三洋公司 ); 垂直电泳仪 ( 美国 Bio Rad 公司 );Tanon3500 全自动数码凝胶成像分析系统 ( 上海天能科技有限公司 ) 1.4 方法 糖尿病模型的建立及动物分组动物实验在我校实验动物中心动物实验室进行, 造模前 12h 小鼠禁食不禁水, 单次尾静脉注射 STZ(120mg kg -1 ) 构建糖尿病小鼠模型 72h 后禁食 6h, 剪尾取血测空腹血糖 (fastingblood glucose,fbg),fbg 16 7mmol L -1 为糖尿病模型成功 [10] 随机分为模型组 WGP( mg kg -1 ) [11] 组, 每组 10 只, 另设空白对照组小鼠 10 只, 每天灌胃给药, 连续 12 周 空白对照组和模型组给予等量等体积生理盐水 实验过程中, 小鼠自由进食 饮水, 不使 用胰岛素,12 周末无小鼠死亡 空腹血糖 24h 尿微量白蛋白 血清肌酐和尿素氮含量的测定各组小鼠末次给药后, 每只小鼠置于独立代谢笼中, 禁食 6h 后剪尾取血, 采用血糖仪检测 FBG; 收集 24h 尿液, 采用全自动生化分析仪测定 24h 尿微量白蛋白 (microalbuminuria, malb) 含量 ; 麻醉小鼠, 下腔静脉取血, 分离血清, 采用全自动生化分析仪检测血清肌酐 (serum creati nine,scr) 和尿素氮 (bloodureanitrogen,bun) 含量 肾脏 Mason 染色和免疫组织化学染色取小鼠肾脏进行剥离, 部分肾皮质固定, 脱水, 石蜡包埋, 脱蜡,Mason 染色进行病理学观察 ; 按免疫组化试剂盒说明书进行肾皮质 α SMA(1 200) 染色, 经抗原修复 封闭 抗体孵育 DAB 显色, 光镜下观察肾皮质中 α SMA 的分布并进行量化 放射免疫法检测肾皮质 camp 的含量另切取部分肾皮质, 匀浆后, 按 camp 放射免疫分析药盒说明书, 检测肾皮质 camp 的含量 Westernblot 法检测肾皮质中 LN FN PKA CREB p CREB 的蛋白表达取各组小鼠部分肾皮质, 按照相应的比例 (20mg 组织 200μL 裂解液 ) 加入预冷的裂解液裂解肾皮质, 充分裂解后, 取上清, 采用 BCA 法进行蛋白定量 十二烷基硫酸钠 - 聚丙烯酰胺凝胶 (SDS PAGE) 电泳, 电转移至硝酸纤维膜,5% 脱脂奶粉室温封闭 1h, 洗涤后加入 LN 抗体 (1 1000) FN 抗体 (1 2000) PKA 抗体 (1 1000) CREB 抗体 (1 1000) p CREB 抗体 (1 5000),4 摇床过夜, 二抗为 HRP 标记的山羊抗兔抗体 (1 500), 室温摇床孵育 1h, 采用化学发光 ECL 显影, 以目的蛋白与 β actin 的比值作为其相对表达量 1.5 统计学方法采用 SPSS17 0 统计软件进行数据分析, 结果以 x±s 珋表示, 先将各组数据进行方差齐性检验, 方差齐者采用单因素方差分析 (One wayanova), 组间比较采用 LSD 检验 2 结果 2.1 WGP 对 DN 小鼠生化指标的影响由 Tab1 可知, 模型组小鼠的 FBG 明显高于空白对照组 (P< 0 01), 给予 WGP 低 中 高剂量 12 周后, 与模型组相比,3 个剂量 WGP 的 FBG 均明显降低 (P<0 01); malb Scr 和 BUN 是反映肾功能的重要指标, 与空白对照组相比, 模型组小鼠在饲养 12 周后,mAlb Scr 和 BUN 含量均有所升高 (P<0 05), 与模型组相比,3 个剂量 WGP 均可以降低 DN 小鼠 malb Scr 和 BUN 含量 (P<0 05), 进而改善肾功能

3 中国药理学通报 ChinesePharmacologicalBuletin 2018May;34(5) 697 Tab1 EfectsofWGPonbiochemicalcharacteristicsinDNmice( x±s,n=10) 珋 Group Dose/mg kg -1 FBG/mmol L -1 malb/mg 24h -1 Scr/10mg L -1 BUN/10mg L -1 Control ± ± ± ±1.53 Model ± ± ± ±1.76 WGP ±2.65 ## 7.69±1.82 # 0.50±0.09 # 26.48±1.54 # ±3.70 ## 6.21±0.73 # 0.45±0.08 # 25.65±2.48 # ±4.33 ## 4.16±0.65 # 0.39±0.07 # 23.57±2.02 # P<0 05, P<0 01vscontrolgroup; # P<0 05, ## P<0 01vsmodelgroup Fig1 MasonstainingandstatisticalanalysisofkidneytisuesinDNmice( 200) A:Controlgroup;B:Modelgroup;C:25mg kg -1 WGPgroup;D:50mg kg -1 WGPgroup;E:100mg kg -1 WGPgroup;F:EfectofWGPon renalfibrosisinmicewithdn. P<0 01vscontrolgroup; # P<0 05vsmodelgroup. 2.2 小鼠肾脏组织的病理学变化为了观察 WGP 对 DN 小鼠肾纤维化的作用, 对肾脏切片进行 Mas son 染色, 评估小鼠的肾纤维化程度 如 Fig1 所示, 与空白对照组相比, 模型组小鼠肾小球肥大 硬化, 肾小管上皮细胞萎缩, 肾小球和肾小管间质蓝色区域面积明显增多 (P<0 01), 表明 DN 小鼠肾组织中胶原纤维沉积明显增多, 给予 WGP 处理后可以减少肾组织中胶原纤维的沉积 (P<0 05) 2.3 WGP 对 DN 小鼠肾皮质 α SMA 蛋白表达的影响肾小管上皮细胞表型转化为间质细胞在肾纤维化中起着重要作用, 其中 α SMA 是这种表型转化的标志蛋白 为了观察 WGP 对 DN 小鼠肾纤维化的作用, 我们对肾脏切片进行 α SMA 免疫组化染色, 评估小鼠的肾纤维化程度 如 Fig2 所示, 与空白对照组比较, 模型组小鼠肾皮质中 α SMA 表达增多 (P<0 01),WGP 给药组小鼠肾皮质 α SMA 表达逐渐减少 (P<0 05 或 P<0 01) 2.4 WGP 对 DN 小鼠肾皮质 camp 含量的影响 camp 信号通路与肾纤维化的发生 发展及肾小管上皮细胞增殖活化密切相关, 为了进一步验证 WGP 对肾纤维化的作用, 我们检测了肾皮质中 camp 含量 如 Fig3 所示, 与空白对照组比较, 模型组小鼠肾皮质中 camp 含量升高 (P<0 05),3 个剂量 WGP 可有效逆转此变化 (P<0 05) 以上结果表明,WGP 可以改善 DN 状态下肾小管上皮细胞的增殖活化, 从而延缓肾纤维化的进程 2.5 WGP 对 DN 小鼠肾皮质 LN 和 FN 蛋白表达的影响 LN 和 FN 是细胞外基质的重要组成成分, 我们采用 Westernblot 法来评估 DN 小鼠肾皮质中细胞外基质的水平 与空白对照组比较, 模型组小鼠肾皮质中 LN 和 FN 表达增多 (P<0 05), 给予 WGP 低 中 高剂量 12 周后, 与模型组比较,3 个剂量 WGP 的小鼠肾皮质 LN 表达减少 (P<0 05), 中 高剂量 WGP 可以降低 DN 小鼠肾皮质 FN 表达 (P <0 05), 见 Fig4 以上结果表明,WGP 可以改善 DN 所致的小鼠肾纤维化

4 698 中国药理学通报 ChinesePharmacologicalBuletin 2018May;34(5) Fig2 α SMAproteindistributionandstatisticalanalysisofrenalcortexinDNmice( 200) A:Controlgroup;B:Modelgroup;C:25mg kg -1 WGPgroup;D:50mg kg -1 WGPgroup;E:100mg kg -1 WGPgroup;F:EfectofWGP onα SMAexpresioninrenalcortex. P<0 01vscontrolgroup; # P<0 05, ## P<0 01vsmodelgroup. Fig3 EfectsofWGPoncAMPcontentinrenal cortexofdnmice( x±s,n=10) 珋 P<0 05vscontrolgroup; # P<0 05vsmodelgroup 2.6 WGP 对 DN 小鼠肾皮质 PKA CREB p CREB 蛋白表达的影响为了探讨 WGP 改善肾纤维化的分子机制, 我们观察了肾纤维化信号转导通路中的关键蛋白 PKA CREB 和 p CREB 的变化, 以及 WGP 对 PKA CREB 和 p CREB 水平的影响 如 Fig5 所示, 与空白对照组比较, 模型组小鼠肾皮质中 PKA 和 p CREB 的蛋白表达增加 (P<0 05), 而对 CREB 无明显影响, 表明 DN 状态下小鼠肾皮质中 PKA/CREB 信号通路被激活 给予 WGP 干预后,3 个剂量均可以降低 DN 小鼠肾皮质中 PKA 和 p CREB 蛋白的表达 (P<0 05 或 P<0 01), 而对 Fig4 EfectsofWGPonLNandFNexpresions inrenalcortexofdnmice( x±s,n=5) 珋 P<0 05vscontrolgroup; # P<0 05vsmodelgroup CREB 无明显影响 以上结果表明,WGP 可以抑制 DN 状态下小鼠肾皮质中 PKA/CREB 的激活

5 中国药理学通报 ChinesePharmacologicalBuletin 2018May;34(5) 699 Fig5 EfectsofWGPonPKA,CREBandp CREBexpresions inrenalcortexofdnmice( x±s,n=5) 珋 P<0 05vscontrolgroup; # P<0 05, ## P<0 01vsmodelgroup 3 讨论人参属于五加科多年生草本植物, 其有效成分包含多糖 皂苷及挥发性成分等, 其中 WGP 为主要化学成分 我国学者已经从人参中分离出 5 种多糖成分, 包括水溶性 WGP 碱性 WGP 人参淀粉 人参果胶及少量糖蛋白, 具有抗肿瘤 抗氧化 降血糖 提高机体免疫系统功能等广泛的药理作用 [8], 由于其所具有的抗氧化 降血糖等药理作用与糖尿病发病进程相关, 我们推测其与 DN 发病环节也可能存在一定的关系, 因此, 我们对其进行了初步的研究 在本实验中,DN 模型小鼠经每天灌胃低 中 高剂量 WGP 连续 12 周后,3 组均可有效降低 DN 小鼠 FBG malb Scr 及 BUN 水平, 提示其对 DN 小鼠肾功能具有一定的保护作用 胶原蛋白是细胞外基质的重要组成成分, 胶原蛋白过度沉积在肾纤维化形成中起着非常重要的作用 为了观察 DN 小鼠肾纤维化的严重程度, 我们采用 Mason 染色的方法检测了 DN 小鼠肾皮质中胶原的生成情况 DN 小鼠饲养 12 周后, 肾小球及 肾小管间质区域蓝色胶原纤维的沉积增多 WGP 的治疗不仅降低 DN 小鼠 FBG 改善肾功能, 而且还可以减少肾小球硬化 肾小球及肾小管间质胶原纤维的沉积, 减缓肾纤维化的进程 肾纤维化的发生机制非常复杂, 研究证实肾小管上皮细胞表型发生转化在其中起着重要作用, 其中 α SMA 是这种表型转化的标志蛋白 [12] 我们推测, 在 DN 小鼠中,WGP 可能通过抑制这种表型转化过程而改善肾功能, 并最终延缓肾纤维化的发生与进展 因此, 我们采用免疫组织化学方法对 DN 小鼠肾皮质中的 α SMA 蛋白分布和表达进行了检测 结果显示,DN 小鼠肾皮质中 α SMA 蛋白表达增多, 给予 WGP 治疗后, 可以逐渐逆转 DN 小鼠肾皮质中 α SMA 蛋白的表达 因此我们认为,3 个剂量 WGP 均可以有效地保护或延缓 DN 状态下肾小管上皮细胞向间质细胞转化过程 间质蛋白种类繁多, 主要包括结构蛋白, 如胶原和弹性蛋白, 此外, 还存在一些黏着蛋白如 LN 和 FN, 它们共同促使细胞同基质结合, 参与 DN 肾纤维化的发生与发展 [13] 为了观察 DN 小鼠肾纤维化的严重程度, 我们采用 Westernblot 方法检测了 DN 小鼠肾皮质中 2 种黏着蛋白的表达情况 结果显示,DN 小鼠肾皮质中 LN 和 FN 表达增多,WGP 治疗后可降低黏着蛋白的表达, 减轻肾纤维化程度 [14] 最近 Deb 等研究证实,cAMP/PKA 信号通路的激活是诱导肾小管上皮细胞向间质细胞转化的重要机制之一, 进而促进肾纤维化的进展 国内学者 [15] 翁琳等研究同样发现, 小鼠 MDCK 细胞孵育 camp 抑制剂 Forskolin 后可引起间质纤维化相关蛋白高表达, 且该作用可被 PKA 抑制剂 H89 所抑制, 说明在 MDCK 细胞中,cAMP PKA 信号通路可以直接促进间质纤维化进程, 在常染色体显性遗传性多囊肾病理进程中发挥重要作用 CREB 是 PKA 通路下游的含碱性亮氨酸拉链结构 (bzips) 的转录因子家族成员, 可控制细胞增殖 参与细胞外基质重构, 广泛参与 DN 发生 发展的不同环节 本实验中,DN 小鼠肾皮质中 camp 含量升高,PKA 和 p CREB 的蛋白表达增加, 表明 camp/pka/creb 信号通路参与了 DN 状态下肾纤维化的发生 给予 WGP 干预后,cAMP 含量下降,PKA 和 p CREB 的蛋白表达均下降, 表明 WGP 可能是通过抑制 camp/ PKA/CREB 信号通路改善 DN 小鼠肾纤维化 综上所述,WGP 能够降低血糖, 改善 DN 小鼠肾功能, 减少肾组织中胶原蛋白和黏着蛋白过度沉积 WGP 可能是通过抑制 camp/pka/creb 信号

6 700 中国药理学通报 ChinesePharmacologicalBuletin 2018May;34(5) 通路激活, 进而阻断肾小管上皮细胞向间质细胞转化进程, 最终减轻肾纤维化程度 如能充分应用 WGP 的药理作用, 将为临床开发防治 DN 系列创新药物提供一定的实验依据和理论基础 ( 致谢 : 本文所有实验均在泉州医学高等专科学校微血管生理调控实验中心完成, 特别感谢对课题给予指导及帮助的老师 ) 参考文献 : [1] YaoZ,YangS,HeW,etal.P311promotesrenalfibrosisvia TGFβ1/Smadsignaling[J].SciRep,2015,5: [2] ZhangX,LiangD,LianX,etal.Efectofzincdeficiencyon mouserenalinterstitialfibrosisindiabeticnephropathy[j].mol MedRep,2016,14(6): [3] HongF,WuN,GeY,etal.Nanosizedtitaniumdioxideresultedin theactivationoftgf β/smads/p38mapk pathwayinrenalin flammationandfibrationofmice[j].jbiomedmaterresa, 2016,104(6): [4] WengL,WangW,SuX,etal.TheefectofcAMP PKAactivation ontgf β1 inducedprofibroticsignaling[j].celphysiolbio chem,2015,36(5): [5] ZhangL,DuanCJ,BinkleyC,etal.Atransforminggrowthfactor beta inducedsmad3/smad4complexdirectlyactivatesproteinki nasea[j].molcelbiol,2004,24(5): [6] 康伟, 王肃. 地黄多糖对糖尿病肾病大鼠模型的治疗作用及对 PPAR γ 信号通路的影响 [J]. 中国生化药物杂志,2015, 35(9):30-3,37. [6] KangW,WangS.Therapeuticefectofrehmanniapolysaccharide ondiabeticnephropathyratmodelanditsefectsonpparγsignal pathway[j].chinjbiochempharm,2015,35(9):30-3,37. [7] 蒋赛, 彭晓珊, 黄志华, 等. 黄芪多糖配伍三七总皂苷对糖尿病模型大鼠肾脏保护作用研究 [J]. 浙江中西医结合杂志, 2015,25(11): [7] JiangS,PengXS,HuangZH,etal.EfectofAstragaluspolysac charidescombinedwithpanaxnotoginsengsaponinsonkidneyof ratswithdiabeticnephropathy[j].zhejiangjintegrtraditchin WestMed,2015,25(11): [8] 宋治, 韩凤波, 毕博, 等. 红皮病对人参多糖含量的影响 [J]. 人参研究,2015,(2):20-1. [8] SongZ,HanFB,BiB,etal.RustyrootofGinsengefectoncon tentsofpolysaccharide[j].ginsengres,2015,(2):20-1. [9] ZhangX,YuL,BiH,etal.Totalfractionationandcharacteriza tionofthewater solublepolysaccharidesisolatedfrompanaxgin sengc.a.meyer[j].carbohydrpolym,2009,77(3): [10] 郭福团, 许雄伟, 潘建峰, 等. 桑枝多糖对糖尿病肾病小鼠肾皮质氧化应激作用的影响 [J]. 中国药理学通报,2016,32(8): [10]GuoFT,XuXW,PanJF,etal.Theanti oxidativeefectofram ulusmoripolysaccharidesondiabeticnephropathymice[j].chin PharmacolBul,2016,32(8): [11]SunC,ChenY,LiX,etal.Anti hyperglycemicandanti oxidative activitiesofginsengpolysaccharidesinstz induceddiabeticmice [J].FoodFunct,2014,5(5): [12] 麻志恒, 钟利平, 余柯娜, 等. 抗纤灵对 5/6 肾切除诱导的慢性肾纤维化小鼠模型不同时期 ColⅠ α SMA FN 的影响 [J]. 中成药,2017,39(1): [12] MaZH,ZhongLP,YuKN,etal.EfectsofKangxianlinonCol Ⅰ,α SMAandFNduringdiferentperiodsinmicewithchronic renalfailureinducedby5/6nephrectomized[j].chintraditpat Med,2017,39(1): [13] 李凤婷, 李梦, 岳顺卿, 等. 固本通络汤对糖尿病肾病模型大鼠 FN LN C Ⅳ 表达的影响 [J]. 山东中医药大学学报,2012, 36(2): [13]LiFT,LiM,YueSQ,etal.EfectsofGubentongluodecoctionon FN,LNandC Ⅳ expresionindiabeticnephropathyrats[j].j ShandongUnivTraditChinMed,2012,36(2): [14]DebDK,BaoR,LiYC.CriticalroleofthecAMP PKApathway inhyperglycemia inducedepigeneticactivationoffibrogenicpro graminthekidney[j].fasebj,2017,31(5): [15] 翁琳, 周虹, 杨宝学.cAMP PKA 信号通路在多囊肾病间质病变中作用的研究 [J]. 中国药理学通报,2015,31(Sup pl): [15]WengL,ZhouH,YangBX.RoleofthecAMP PKA signaling pathwayininterstitiallesionsofpolycystickidneydisease[j]. ChinPharmacolBul,2015,31(Suppl): RoleofginsengpolysaccharidesinrenalfibrosisviacAMP/PKA/CREB signalingpathwayindiabeticnephropathy HUANGQian 1,ZHANGSu ping 2,SHIZi lu 3 (1.DeptofPhysiology,QuanzhouMedicalColege,QuanzhouFujian ,China;2.DeptofPhysiology, SchoolofBasicMedicine,ZhejiangUniversity,Hangzhou ,China;3.DeptofNephrology, thefirsthospitalofquanzhouafiliatedtofujianmedicaluniversity,quanzhoufujian ,China) Abstract:Aim Toinvestigatetheefectofginseng polysaccharides(wgp)onrenalfibrosisinmicewith diabeticnephropathy(dn) anditsposiblemecha nism.methods Diabeticmicewereinducedbyintra venousinjection with120 mg kg -1 streptozotocin (STZ)andwererandomlydividedintothefolowing fourgroupswith10 micepergroup:modelgroup, low,medium,high dose(25,50,100mg kg -1 )of

7 WGPgroups.Other10normalmiceweretreatedas normalcontrolgroup.themicewereadministeredo ralyfor12 weeks.afterthat,thelevelsoffasting blood glucose(fbg),microalbuminuria(malb),serum creatinine(scr)andbloodureanitrogen(bun)were detected.theexpresionofcolagenfibersandtheex presionofα SMAproteininrenalcortexweredetec tedusingmason stainingand immunohistochemical staining.thecampcontentinrenalcortexwasdetec tedbyradioimmunoasay.theproteinexpresionsre latedtoextracelularmatrixcomposition and PKA/ CREBinrenalcortexweredetectedbyWesternblot. Results WGPcouldobviouslyreducethecontentsof FBG,mAlb,ScrandBUNinDNmice,meanwhilede creasingtheexpresionsofα SMA,LNandFNprotein byinhibitingtheactivationofcamp/pka/crebsig nalpathway,whichledtothealeviationofdegreeof glomerularsclerosisandinterstitialfibrosisinkidney. Conclusion WGPhasinhibitoryefectonrenalfibro sisindnmicemodel,whichmightberelatedwiththe suppresionofcamp/pka/crebsignalingpathway. Keywords:diabeticnephropathy;ginsengpolysaccha ride;camp;α smoothmuscleactin;pka;creb

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