临床研究显示, 糖尿病肾病伴有不同程度的足细胞损伤 [1-2] 实验研究进一步证实, 肾小球足细胞伴有裂孔隔膜分子 Nephrin 和 Podocin 表达降低, 而间充质细胞标志分子 Desmin 等表达增高 [3] 足细胞损伤是蛋白尿发生的细胞学基础, 保护足细胞是糖尿病肾病防治的重点之一白藜

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1 白藜芦醇及 SRT1720 对 2 型糖尿病大鼠肾小球足细胞裂孔隔膜分子表达的影响杨汝春, 朱晓玲, 张华琴, 郑洁, 汤绚丽, 李卫冬 ( 杭州市中医院肾病实验室, 杭州 ) 摘要 : 目的研究白藜芦醇和 SIRT1 激活剂 SRT1720 对糖尿病大鼠肾功能以及足细胞损伤的干预作用, 探讨 SIRT1 活化改善肾损害的作用和机制方法采用高脂饮食联合单侧肾切除和链脲佐菌素诱导方法建立 2 型糖尿病大鼠模型, 用白藜芦醇和 SRT1720 等进行干预治疗留取血清和肾脏, 分析肾质量及肾质量 / 体质量, 检测空腹血糖血肌酐尿素氮等, 采用免疫组化逆转录 - 实时荧光定量 PCR 技术检测肾皮质中足细胞裂孔隔膜分子 Nephrin 和 Podocin 等蛋白原位表达和基因表达水平结果与正常组相比, 模型组大鼠单侧肾质量及肾质量 / 体质量比显著增高 (P<0.05), 空腹血糖血肌酐和尿素氮均显著增高 (P<0.05), 肾皮质中 Nephrin 和 Podocin 蛋白表达和基因表达丰度显著降低 (P<0.05) 白藜芦醇和 SRT1720 治疗组各项检测指标均较模型组有所改善, 白藜芦醇组肾质量 / 体质量指数空腹血糖 Nephrin 和 Podocin 蛋白表达和 Nephrin 基因表达与模型组有统计学差异 (P<0.05),SRT1720 组空腹血糖血肌酐尿素氮 Nephrin 和 Podocin 表达等与模型组均有统计学差异 (P<0.05) 结论白藜芦醇 SRT1720 等 SIRT1 激活剂可显著改善糖尿病大鼠肾功能和足细胞损伤, 在糖尿病肾病的防治方面具有重要价值和应用前途关键词 : 糖尿病肾病 ; 白藜芦醇 ;SRT1720;Nephrin;Podocin 中图分类号 :R285.5 文献标志码 :A 文章编号 : (2018) DOI: /j.cnki.issn 引用本文 : 杨汝春, 朱晓玲, 张华琴, 等. 白藜芦醇及 SRT1720 对 2 型糖尿病大鼠肾小球足细胞裂孔隔膜分子表达的影响 [J]. 中国现代应用药学, 2018, 35(2): Effects of Resveratrol and SRT1720 on Expression of Podocyte Slit Diaphragm Elements in Diabetic Nephropathy Rats YANG Ruchun, ZHU Xiaoling, ZHANG Huaqin, ZHENG Jie, TANG Xuanli, LI Weidong(Laboratory of Nephropathy, Hangzhou Hospital of Traditional Chinese Medicine, Hangzhou , China) ABSTRACT: OBJECTIVE To observe the effects of resveratrol and SIRT1 activator SRT1720 on renal function and podocyte injury in diabetic rats, and to explore the possible mechanism of silent information regulator 2 related enzyme 1(SIRT1) activation to improve renal damage. METHODS Type 2 diabetic rat model was established by giving fat-enriched diets combined with unilateral nephrectomy and streptozotocin (STZ) intraperitoneal injection. Diabetic rats of the intervention group were treated with SRT1720 and resveratrol. Rats were sacrificed, kidneys and serum were collected to test renal function. Renal weight and renal weight/body weight were measured, fasting blood-glucose, serum creatinine, and urea nitrogen were detected by biochemical technique. The expression levels of podocyte slit diaphragm elements such as Nephrin and Podocin were detected by immunohistochemistry and reverse transcription real-time fluorescent quantitative PCR. RESULTS Compared with normal group, the unilateral kidney weight, ratio of kidney weight to body weight, fasting blood glucose, serum creatinine and urea nitrogen in the model rats increased significantly(p<0.05), while the protein and genetic expression of Nephrin and Podocin in renal cortex were decreased(p<0.05). Each detection index in resveratrol group or SRT1720 group was improved compared with model group. In specific, the ratio of kidney weight/body, fasting blood glucose, protein expression of Nephrin and Podocin, and gene expression of Nephrin were showed statistically significant difference between resveratrol group and model group(p<0.05). Besides, the fasting blood glucose, serum creatinine, and urea nitrogen and molecule expression of Nephrin and Podocin in the SRT1720 group were significantly different from those in the model group(p<0.05). CONCLUSION The SIRT1 activators including resveratrol and SRT1720, can significantly improve renal function damage and podocyte injury in diabetic nephropathy rats, which have important value and application prospect in the prevention and treatment of diabetic nepropathy. KEY WORDS: diabetic nephropathy; resveratrol; SRT1720; Nephrin; Podocin 基金项目 : 浙江省自然科学基金 (LY15H050006); 浙江省医药卫生科研基金 (2015KY13322); 杭州市重点专科专项科技项目 ( B62) 作者简介 : 杨汝春, 女, 博士, 研究员 Tel: (0571) yangruchunhz@163.com 164 Chin J Mod Appl Pharm, 2018 February, Vol.35 No.2 中国现代应用药学 2018 年 2 月第 35 卷第 2 期

2 临床研究显示, 糖尿病肾病伴有不同程度的足细胞损伤 [1-2] 实验研究进一步证实, 肾小球足细胞伴有裂孔隔膜分子 Nephrin 和 Podocin 表达降低, 而间充质细胞标志分子 Desmin 等表达增高 [3] 足细胞损伤是蛋白尿发生的细胞学基础, 保护足细胞是糖尿病肾病防治的重点之一白藜芦醇是一种植物多酚醇类物质, 具有独特的生物活性, 具有抗炎抗氧化抗肿瘤等多种作用 [4-8], 是沉默信息调节子 2 相关酶 1(silent information regulator 2 related enzyme 1,SIRT1) 的天然激活剂笔者团队的前期研究发现, 白藜芦醇可显著抑制转化生长因子 -beta(tansforming growth factor β1,tgf-β1) 诱导的肾小球足细胞去分化, 能增强足细胞裂孔隔膜分子 NEPH1 P-cadherin 的表达, 而抑制间充质细胞标志分子 α- 平滑肌肌动蛋白 (α-smooth muscle actin,α-sma) 和纤维连接蛋白 (fibronectin,fn) 等的表达 [9-10] 本研究在整体动物试验层面探讨 SIRT1 激活剂白藜芦醇和 SRT1720 对糖尿病大鼠肾功能和肾小球足细胞的保护作用 1 材料 1.1 动物清洁级 SD 大鼠 30 只,, 体质量 100~120 g, 购自浙江省医学科学院实验动物中心, 合格证号 : SCXR( 浙 ) , 在浙江中医药研究院实验动物中心饲养, 饲养条件 : 恒温 (20±1), 湿度 50%~60%, 光照每 12 h 明暗交替, 每小时通风 8~15 次高糖高脂饲料为常规饲料加 20% 蔗糖 10% 猪油和 2.5% 胆固醇组成, 由浙江省医学科学院实验动物中心加工并消毒 1.2 仪器低温低速离心机 ( 德国 Heraeus,LEGENTRT); UVP 1000 凝胶成像分析系统 ( 美国 Bio-Rad); AF100 制冰机 ( 意大利 Scotsman); 低温高速离心机 ( 德国 Heraeus, Biofuge Stratos); 日立 7180 型全自动生化分析仪 ( 日本株式会社日本高新技术 ); RM2235 石蜡切片机 ( 德国 Leica) 1.3 药品与试剂白藜芦醇 ( 瑞士 ALEXIX Biochemicals, 批号 : L20708/a, 纯度 :98%);SRT1720(Selleck, 批号 : ); 兔抗 podocin 多克隆抗体 (Abcam, 批号 : ab183099); 兔抗 Nephrin 多克隆抗体 (Abcam, 批号 :ab93650); 鼠抗 GAPDH( 达文生物, 批号 : DW88054) ; 链脲佐菌素 STZ(Sigma, 批号 : S-0130) 辣根过氧化物酶标记抗兔 IgG(H+L) ABC( 链霉素 - 卵白素 ) 免疫组化检测试剂盒均购自北京中杉生物技术公司 ( 试剂盒批号分别为 K166820J,104206D-5) TRIzol reagent (Invitrogen, USA),5 逆转录 Buffer Oligo(dT) 18 RNase Inhibtor dntp ALV 逆转录酶琼脂糖 DNA- Mark 等均购自 Promega 公司 SYBR Premix Ex Taq TM ROX Reference Dye(50 ) 引物设计及合成等均自 TaKaRa 公司 2 方法 2.1 大鼠造模与分组糖尿病模型造模将大鼠随机分为对照组和糖尿病组,1% 戊巴比妥钠麻醉, 糖尿病组大鼠 24 只, 行右侧肾单侧切除, 对照组大鼠 6 只仅切开皮肤手术当天糖尿病组大鼠进行高糖高脂饮食,4 周后,40 mg kg 1 腹腔注射 STZ,1 周后测餐后血糖, 血糖 16.7 mmol L 1 的大鼠入实验组, 未达标者淘汰对照组大鼠普通饲料饲养, 用枸橼酸缓冲液腹腔注射糖尿病组大鼠造模过程中死亡 2 只, 不成模的 4 只分组及干预治疗对照组大鼠作为正常对照组, 糖尿病组大鼠分为模型组 SRT1720 组白藜芦醇组, 每组 6 只 SRT1720 组大鼠每周腹腔注射 SRT 次, 每次 5 mg kg 1 ; 白藜芦醇组每日 200 mg kg 1 灌胃各组大鼠于治疗后第 6 周末结束实验大鼠称重后麻醉, 腹主动脉取血, 摘取肾脏并称重分离血清, 采用生化法检测空腹血糖血肌酐和尿素氮部分肾组织甲醛固定, 免疫组织化学检测肾组织 Podocin Nephrin 蛋白表达 ; 部分肾组织提取总 RNA, 逆转录, 采用实时定量荧光 PCR 检测 Podocin 和 Nephrin 基因表达 2.2 免疫组织化学检测肾组织 Podocin Nephrin 蛋白表达免疫组化所用石蜡切片 4 μm, 采用 SABC 法常规脱蜡至水,EDTA 抗原修复,3% H 2 O 2 处理,5% 羊血清封闭, 弃血清滴加一抗,4 冰箱过夜, 阴性对照用 2% 牛血清白蛋白代替一抗 PBS 洗后滴加辣根过氧化物酶标记二抗,37 孵育 1 h,pbs 洗 3 次, 滴加 DAB 显色液, 显微镜下动态观察, 有阳性显色出现后, 清水阻断, 洗 3~4 次后苏木素复染, 脱水晾干封片采用 Image Pro plus 6.0 图像采集及分析系统, 光镜下每张切片 ( 400) 光镜下随机采集 5 个不重中国现代应用药学 2018 年 2 月第 35 卷第 2 期 Chin J Mod Appl Pharm, 2018 February, Vol.35 No.2 165

3 叠视野, 棕黄色为阳性染色区测量棕黄色阳性染色平均分光密度 (OD), 取平均值 2.3 RT-PCR 检测肾组织 Podocin 和 Nephrin 基因表达 TRIZOL 提取细胞总 RNA 取约 2 μg 总 RNA 逆转录成 cdna, 并进行 Real-time 荧光定量 PCR 扩增,GAPDH 作为内参照 Podocin 上游引物序列为 5 - CTGAAGAGCATCCGACAC-3, 下游引物序列 5 - GACTCCATCCCAATGAAAG-3,,PCR 扩增片段 412 bp ; Nephrin 上游引物序列为 5 -AGTGGACCCAAATTACTACTC-3, 下游引物序列为 5 -GCCACCTGGTCGTAGATTC-3,PCR 扩增片段 255 bp ; GAPDH 上游引物序列为 5 -ACCACAGTCCATGCCATCAC-3, 下游引物序列为 5 -TCCACCACCCTGTTGCTGTA-3, PCR 扩增片段 352 bp PCR 反应体系为,SYBR P remix Ex Taq(2 )10 μl,forword Primer(10 μm) 0.4 μl,pcr Reverse Primer(10 μm)0.4 μl,rox Reference Dye(50 ) 0.4 μl,dna 模板 2.0 μl,dh 2 O 6.8 μl, 于 ABI PRISM 荧光定量 PCR 扩增仪上进行反应, 先 95 预变性 10 s, 然后按下述条件循环 40 次 : 变性 95 5 s, 退火 s 结果用 2 ct 计算目的 mrna 表达水平 2.4 统计学方法用 SPSS 17.0 软件对数据进行分析处理, 计量资料用 x s 表示, 多组间比较采用 one-way ANOVA, 方差齐者, 组间两两比较用 LSD, 方差不齐者使用 Tamhane s T2(M) 3 结果 3.1 白藜芦醇 SRT1720 对肾质量 / 体质量的影响模型组大鼠单侧肾质量和肾质量 / 体质量均显著高于正常组 (P<0.05),SRT1720 组和白藜芦醇组大鼠肾质量和肾质量 / 体质量均较模型组降低, 白藜芦醇组肾质量 / 体质量与模型组有统计学差异 (P<0.05) 结果见表白藜芦醇 SRT1720 对空腹血糖血肌酐尿素氮的影响糖尿病模型组大鼠空腹血糖显著高于正常组,SRT1720 组和白藜芦醇组空腹血糖较模型组显著降低模型组血肌酐和尿素氮均显著高于正常组,SRT1720 组和白藜芦醇组血肌酐和尿素氮均较模型组降低,SRT1720 组血肌酐和尿素氮与模型组有统计学差异结果见表 2 表 1 白藜芦醇 SRT1720 对肾质量 / 体质量的影响 (n=6) Tab. 1 The influence of resveratrol or SRT1720 on kidney weight/body weight (n=6) 组别肾质量 /g 肾质量 / 体质量 ( 10 3 ) 正常组 1.07± ±0.17 模型组 1.75±0.17 1) 5.53±0.26 1) 白藜芦醇组 1.64± ±0.26 2) SRT1720 组 1.71± ±0.43 表 2 SRT1720 白藜芦醇对血糖血肌酐尿素氮的影响 (n=6) Tab. 2 The effect of resveratrol or SRT1720 on serum glucose, serum creatinine, and serumurea nitrogen (n=6) 组别空腹血糖 / mmol L 1 血肌酐 / μmol L 1 尿素氮 / mmol L 1 正常组 6.17± ± ±0.48 模型组 9.02±0.73 1) 27.5±2.17 1) 6.53±0.42 1) 白藜芦醇组 7.55±0.83 2) 25.8± ±0.45 SRT1720 组 7.11±0.58 2) 24.8±1.94 2) 5.52±0.85 2) 3.3 白藜芦醇和 SIR1720 对 Nephrin 和 Podocin 蛋白表达的影响免疫组化实验显示, 正常组大鼠肾小球中 Nephrin 和 Podocin 强阳性表达, 模型组肾小球中 Nephrin 和 Podocin 表达较正常组明显减弱, 经分光密度半定量分析, 模型组与正常组有统计学差异 ;SRT1720 组和白藜芦醇组肾小球 Nephrin 和 Podocin 蛋白表达则较模型组显著增强结果见表 3 图 1~2 表 3 白藜芦醇 SRT1720 对 Nephrin 和 Podocind 蛋白表达的影响 (n=6) Tab. 3 The effect of Resveratrol or SRT1720 on Nephrin and Podocind protein expression (n=6) 组别 Nephrin OD Podocin OD 正常组 0.52± ±0.003 模型组 0.40±0.05 1) 0.60±0.04 1) 白藜芦醇组 0.47±0.03 2) 0.64±0.02 2) SRT1720 组 0.48±0.09 2) 0.67±0.04 2) 166 Chin J Mod Appl Pharm, 2018 February, Vol.35 No.2 中国现代应用药学 2018 年 2 月第 35 卷第 2 期

表4 白藜芦醇和 SRT1720 对 Nephrin 和 Podocin 基因表达的影响(n=6) Tab. 4 The effect of resveratrol or SRT1720 on Nephrin and Podocind gene expression (n=6) 组别正常组模型组白藜芦醇组 SRT1720 组 Nephrin(2 ct) Podocin(2 ct) 1.

05; compared with model group, 2)P<0.05. 4 讨论糖尿病是常见病和多发病可引起各种急图1 免疫组化检测肾皮质 Nephrin 蛋白原位表达(400 ) A 正常组 B 模型组 C 白藜芦醇组 D SRT1720 组 Fig.

慢性并发症糖尿病肾病是其常见并发症之一也是糖尿病的主要死亡原因之一糖尿病肾病发病率逐年增高但防治方法却很缺乏除降低血糖和控制血压外几乎无其他手段因此探索研究糖尿病肾病的防治方法是人类健康的迫切需求越来越多的实验和临床研究证实肾小球足细胞(podocyte)损伤是决定多种肾脏疾病包括糖尿病肾病蛋白尿肾硬化的关键因素[11-12] 对于足细胞

表型中发挥重要作用另有研究显示白藜芦醇图2 免疫组化检测肾皮质 Podocin 蛋白原位表达(400 ) A 正常组 B 模型组 C 白藜芦醇组 D SRT1720 组 Fig.

4 表4 白藜芦醇和 SRT1720 对 Nephrin 和 Podocin 基因表达的影响(n=6) Tab. 4 The effect of resveratrol or SRT1720 on Nephrin and Podocind gene expression (n=6) 组别正常组模型组白藜芦醇组 SRT1720 组 Nephrin(2 ct) Podocin(2 ct) 1.60± ± ±0.23 1) 0.56±0.101) 1.12±0.25 2) 0.83± ±0.82 2) 1.33±0.682) 注与正常组比较 1)P<0.05 与模型组比较 2)P<0.05 Note: Compared with normal group, 1)P<0.05; compared with model group, 2)P< 讨论糖尿病是常见病和多发病可引起各种急图1 免疫组化检测肾皮质 Nephrin 蛋白原位表达(400 ) A 正常组 B 模型组 C 白藜芦醇组 D SRT1720 组 Fig. 1 Renal cortical Nephrin protein expression in situ by immunohistochemical(400 ) A control group; B model group; C Resveratrol group; D SRT1720 group. 慢性并发症糖尿病肾病是其常见并发症之一也是糖尿病的主要死亡原因之一糖尿病肾病发病率逐年增高但防治方法却很缺乏除降低血糖和控制血压外几乎无其他手段因此探索研究糖尿病肾病的防治方法是人类健康的迫切需求越来越多的实验和临床研究证实肾小球足细胞(podocyte)损伤是决定多种肾脏疾病包括糖尿病肾病蛋白尿肾硬化的关键因素[11-12] 对于足细胞损伤机制以及有效干预的研究成为目前肾病防治的研究焦点笔者团队的前期研究发现 SIRT1 活化剂白藜芦醇可显著抑制 TGF-β1 诱导的肾小球足细胞去分化能增强足细胞裂孔隔膜分子 NEPH1 P-cadherin 的表达而抑制间充质细胞标志分子 α-sma 和 FN 等的表达[9-10] 研究提示 SIRT1 活化可抑制足细胞表型转化在维持足细胞的正常表型中发挥重要作用另有研究显示白藜芦醇图2 免疫组化检测肾皮质 Podocin 蛋白原位表达(400 ) A 正常组 B 模型组 C 白藜芦醇组 D SRT1720 组 Fig. 2 Renal cortical Podocin protein expression in situ by Immunohistochemical(400 ) 可降低糖尿病大鼠血糖血脂改善糖尿病肾病肾组织氧化损伤和病理损伤 [13-14] 对其他慢性肾病模型也有降低蛋白尿和改善肾功能作用 [15-16] A control group; B model group; C Resveratrol group; D SRT1720 group. SIRT1 是一种去乙酰化酶可调节细胞内多种转录 3.4 研究显示 SIRT1 可通过调节 Smad2/3 的乙酰化抑白藜芦醇和 SRT1720 对 Nephrin 和 Podocin 基因表达的影响糖尿病模型组肾皮质 Nephrin 和 Podocin 基因因子如 p53 NF-κB FOXO 等活性[17] 近年来有制 TGF-β1-Smads 通路活性[18-19] TGF-β1 在糖尿病肾病及多种肾病发展过程中起着重要作用表达较正常对照组显著降低差异有统计学意义 SIRT1 对 Smad2/3 的去乙酰化作用可能也是白藜 SRT1720 组 Nephrin 和 Podocin 基因表达则较模型芦醇等 SIRT1 活化剂体外改善足细胞损害的重要机组明显增强差异有统计学意义白藜芦醇组制之一 Nephrin 基因表达亦较模型组明显增高差异有统计学意义结果见表 4 中国现代应用药学 2018 年 2 月第 35 卷第 2 期本项研究采用高脂饮食+单侧肾切除+链脲佐菌素诱导三联法建立 2 型糖尿病大鼠模型[20] 观 Chin J Mod Appl Pharm, 2018 February, Vol.35 No.2 167

5 察白藜芦醇和 SRT1720 两种 SIRT1 激活剂对糖尿病肾损害和肾小球足细胞的影响人类糖尿病中 2 型占多数,2 型糖尿病的糖尿病肾病发病率更高, 防治更加困难研究显示, 白藜芦醇和 SRT1720 干预 6 周均可显著降低肾质量 / 体质量比值, 减轻肾质量, 改善肾水肿 ; 降低血肌酐和尿素氮, 改善肾功能 ; 降低空腹血糖, 改善血糖代谢白藜芦醇和 SRT1720 干预组的糖尿病肾病大鼠肾小球足细胞裂孔隔膜分子 Nephrin 和 Podocin 蛋白表达水平较模型组大鼠显著增高, 对维持肾小球超滤屏障的完整性具有重要作用 SRT1720 是一种新的化学药物, 与白藜芦醇一样是 SIRT1 的激活剂, 而且与 SIRT1 的结合能力较白藜芦醇更强, 在体内的代谢时间也较白藜芦醇更长, 作用更具有特异性 [21] 但白藜芦醇是天然植物提取物, 除能激活 SIRT1 外, 可能还具有其他生物活性, 具有抗炎症抗氧化抗肿瘤等多种作用, 对多种疾病具有防治作用 [22] 本项研究中,SRT1720 和白藜芦醇对糖尿病肾病的血糖肾功能足细胞损伤等均具有改善和保护作用表明 SIRT1 激活是糖尿病肾病防治的重要干预靶点之一, 对激活 SIRT1 及其通路的深入研究将对阐明糖尿病肾病发生发展以及预防治疗具有重要参考价值 REFERENCES [1] LIU Z H, LI S J, CHEN C H, et al. Glomerular podocyte lesion in patients with diabetic nephropathy [J]. Chin J Nephrol,Dial Transpl( 肾脏病与透析肾移植杂志 ), 2003, 12(2): [2] SHI G, MAO Z M, WAN Y G, et al. Pathomechanisms of podocyte injury in diabetic nephropathy and interventional effects of Chinese herbal medicine [J]. China J Chin Mater Med( 中国中药杂志 ), 2016, 41(13): [3] YAMAGUCHI Y, IWANO M, SUZUKI D, et al. Epithelial-mesenchymal transition as a potential explanation for podocyte depletion in diabetic nephropathy [J]. Am J Kidney Dis, 2009, 54(4): [4] LU Y, HUANG Z J, YUAN H. Advance of studies on effect of resveratrol on activity of cytochrome P450 [J]. China J Chin Mater Med( 中国中药杂志 ), 2013, 38(5): [5] LIU X M, ZHU Z W, WANG G, et al. Resveratrol promotes cisplatin-induced cell death by inhibiting the glucose metabolism in bladder cancer [J]. Chin J Mod Appl Pharm( 中国现代应用药学 ), 2016, 33(10): [6] HE Y F, LI L, CAI Z L, et al. Protective effects of resveratrol on hypoxia myocardial cells and the mechanism research [J]. Chin J New Drugs( 中国新药杂志 ), 2017, 26(10): [7] HUANG H w, ZHOU C z, XU Z c. Preparation of resveratrol solid dispersion and determination of its dissolution [J]. Pharmacy Today( 今日药学 ), 2016, 26(8): [8] CHEN L, YAN W, WANG F, et al. Effects of resveratrol against anxiety and oxidative stress in mice [J]. Chin J Hosp Pharm( 中国医院药学杂志 ), 2016, 36(17): [9] YANG R C, ZHU X L, ZHANG H Q, et al. Different effects of resveratrol, triptolide and HGF on podocytes damage induced by TGF-β1 [J]. Chin Arch Tradit Chin Med( 中华中医药学刊 ), 2014, 32(7): [10] YANG R C, ZHU X L, ZHANG H Q, et al. Study of resveratrol suppressing TGF-β1 induced transdifferentiation of podocytes [J]. Chin J Integr Trad West Med( 中国中西医结合杂志 ), 2013, 33(12): [11] LIU Y. New insights into epithelial-mesenchymal transition in kidney fibrosis [J]. J Am Soc Nephrol, 2010, 21(2): [12] 赵娟, 戴助. 糖尿病肾病的药物治疗进展 [J]. 医药导报, 2017, 36(1): [13] 傅松波, 汤旭磊, 杨晓梅, 等. 白藜芦醇对糖尿病大鼠肾损害超微结构的影响 [J]. 中国老年学杂志, 2012, 32(18): [14] PALSAMY P, SUBRAMANIAN S. Resveratrol protects diabetic kidney by attenuating hyperglycemia-mediated oxidative stress and renal inflammatory cytokines via Nrf2-keap1 signaling [J]. Biochim Biophys Acta, 2011, 1812(7): [15] JESUS SOARES T, VOLPINI R A, FRANCESCATO H D, et al. Effects of resveratrol on glycerol-induced renal injury [J]. Life Sci, 2007, 81(8): [16] DO AMARAL C L, FRANCESCATO H D, COIMBRA T M, et al. Resveratrol attenuates cisplatin-induced nephrotoxicity in rats [J]. Arch Toxicol, 2008, 82(6): [17] KUME S, HANEDA M, KANASAKI K, et al. Silent information regulator (SIRT1) attenuates oxidative stressinduced mesangial cell apoptosis via p53 deacetylation [J]. Free Radic Biol Med, 2006, 40: [18] INOUE Y, ITOH Y, ABE K, et al. Smad3 is acetylated by p300/cbp to regulate itstransactivation activity [J]. Oncogene, 2007, 26(4): [19] LI J L, QU X L, RICARDO S D, et al. Resveratrol inhibits renal fibrosis in the obstructed kidney: potential role in deacetylation of smad3 [J]. Am J Pathol, 2010, 177(3): [20] SONG Y N, WANG J, YUAN D, et al. Study advances in the mechanism of Sirt1 in cardiovascular aging [J]. Chin J Hosp Pharm( 中国医院药学杂志 ), 2017, 37(17): [21] LIU B, LEI M, HU T, et al. Inhibitory effect of SRT1720 on the apoptosis of rabbit chondrocytes by activating SIRT1 via p53/bax and NF-κB/PGC-1α pathways [J]. J Huazhong Univ Sci Technol [Med Sci], 2016, 36(3): [22] AN M, ZHOU J, CHEN X Y. Pharmacological activities of resveratrol and protection research progress on the body [J]. Anti-tumor Pharm( 肿瘤药学 ), 2014, 4(4): 收稿日期 : ( 本文责编 : 李艳芳 ) 168 Chin J Mod Appl Pharm, 2018 February, Vol.35 No.2 中国现代应用药学 2018 年 2 月第 35 卷第 2 期

20 2 CJITWN November. 2 No. 959 not markedly changed in two treatment groups in this experiment. 3. It is possible that addition an subtraction of Fan

20 2 CJITWN November. 2 No. 959 not markedly changed in two treatment groups in this experiment. 3. It is possible that addition an subtraction of Fan 958 20 2 CJITWN November 20 Vol. 2 No. * MCP - - MCP - AIN SD 4 + A - + B ADR 6. 5 mg /kg 2 24 h > 00 mg A B + - + 2 8 24 h 4 8 MCP - 2 24 h P < 0. 05 6. 5 mg /kg MCNS 2 RT - PCR MCP - MCP - MCP - A B