111 西安交通大学学报 医学版 第 卷 肾素 + 血管紧张素系统 $#!%!+!6%(#!%!+ #/)' 过度激活是肾脏疾病发生发展的重要机制之一 抑制 )' 系统是治疗肾脏病的有效途径 但是由于 )' 系统的负反馈调节机制 应用血管紧张素转换酶抑制剂!6%(#!%!+(!;#$%!6#!/#

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1 第 卷第 期 年 月 西安交通大学学报 医学版!"#$## %&'& $& 临床研究 肾素抑制剂阿利吉仑对阿霉素肾病小鼠肾损伤及足细胞 表达的影响 伍巧源 廖蕴华 杨桢华 郭 谊 周颖川 陈一强 广西医科大学 第一附属医院肾内科 研究生院 第一附属医院检验科 第一附属医院病理科 第一附属医院呼吸科 广西南宁 摘要 目的 观察肾素抑制剂阿利吉仑对阿霉素肾病小鼠肾损伤的保护作用及对足细胞!#$%! 表达的影响 方法 通过尾静脉注射阿霉素建立小鼠阿霉素肾病模型后给予阿利吉仑 另设正常对照组及阿霉素肾病对照组 比较不同组别尿蛋白及肾功能的差异 肾组织石蜡切片行 &' 和 (! 染色 观察各组肾小球硬化程度和肾小管损害程度 )*+&,) 及 -##$!.( 检测各组!#$%! 的表达 结果 阿霉素肾病小鼠表现为蛋白尿 低蛋白血症并伴有进行性肾功能下降 病理表现为肾小球硬化及小管间质损害 阿利吉仑可使蛋白尿状况显著改善 血清白蛋白上升 肾功能恶化得以延缓 肾小球硬化和小管间质损害程度明显改善 阿霉素肾病小鼠!#$%! /)0' 及蛋白表达水平均显著低于正常对照组 给予阿利吉仑干预后!#$%! /)0' 及蛋白表达水平有显著上升 结论 阿利吉仑对小鼠阿霉素肾病有良好的保护作用 该作用至少部分与其上调肾小球足细胞!#$%! 的表达有关 关键词 肾素抑制剂 阿利吉仑 阿霉素肾病 足细胞!#$%! 中图分类号 )1 文献标志码 ' 文章编号 !"#$$" %"$# - %(+"! '2 3"!+" 3'045#!+" 42 3% 52 3%!6+,"!,0 3%+7%!6 8#$/#!(90#$(.(6#:%$'9%.%#(%.(94"!6%#%.!%;#$% 4$"#((.4"!6%#%.!%;#$%8#$/#!(9,.%!%.($($ #:%$'9%.%#(%.(94"!6%#%.!%;#$%8#$/#!(9&(.(6 #:%$'9%.%#(%.(94"!6%#%.!%;#$%!%"#(9)#%$($8%## #:%$'9%.%#(%.(94"!6%#%.!%;#$%0!!%!6,%! &'&" #" # " ("# #&!)*+)# #,-#"-# " #"" # &#,",.,##" &!#,##",1&.""" #"," /*$!" 01&( '* ", ""./ " & *" # #, ##" #" # # " &*#""## "# # &&!#, " #,"#"# '* "(&*#""#"( '* " "#" " # && # # " # #,# "("#& ( " # "# 收稿日期 ++1 修回日期 ++ 基金项目 广西自然科学基金资助项目 0(40:' "($#4"!6%0"$.%#!#:("!%(! 0(40:' 通讯作者 廖蕴华 教授 +/%."!".%(.%"!(/ 作者简介 伍巧源 + 女 壮族 副主任医师 博士学位 硕士生导师 研究方向 肾小球疾病 +/%.177(/ 网络出版时间 ++1 网络出版地址!%!# /#%.1)/.!"#"!

2 111 西安交通大学学报 医学版 第 卷 肾素 + 血管紧张素系统 $#!%!+!6%(#!%!+ #/)' 过度激活是肾脏疾病发生发展的重要机制之一 抑制 )' 系统是治疗肾脏病的有效途径 但是由于 )' 系统的负反馈调节机制 应用血管紧张素转换酶抑制剂!6%(#!%!+(!;#$%!6#!/# %!%%($', 或血管紧张素受体阻断剂!6%(+ #!%!$##($.(#$') 会使体内肾素和血管紧张素!6%(#!%!'!6 代偿性增加 这种对 )' 的不完全阻断作用限制了 ', 或 ') 的肾脏保护作用 阿利吉仑是新型肾素抑制剂 可阻断 )' 的初始步骤 使 '!6'!6 水平明显减低 能更彻底地阻断 )' 系统 很多研究已经表明该药在保护肾脏方面有其独特的优势 但目前研究主要 集中于阿利吉仑对糖尿病肾病的保护作用 本文通过建立小鼠阿霉素肾病模型 观察阿利吉仑对该模型尿蛋白及肾脏病理改变的影响 及对足细胞!#+ $%! 表达的影响 ) 材料与方法 )*) 小鼠阿霉素肾病模型的建立 分组与取材 只 周龄 雄性 ' 小鼠分为 组 分别为正常对照组 阿霉素组及阿霉素 阿利吉仑治疗组 后 组均一次性尾静脉注射阿霉素 /66 建立小鼠阿霉素肾病模型 之后阿霉素 阿利吉仑治疗组给予阿利吉仑 /66 瑞士诺华制药有限公司 灌胃 正常对照组一次性尾静脉注射等量生理盐水 阿霉素注射后第 1 周所有小鼠行 尿蛋白定量测定 心脏穿刺取血标本 测血清血肌酐 总蛋白 白蛋白和胆固醇 随后处死小鼠 部分肾组织以 / 甲醛固定 石蜡包埋 其余肾组织液氮冷冻 <= 保存备用 )*+ 肾脏组织学常规检查 肾组织石蜡切片行 &' 和 (! 染色 观察肾组织肾小球硬化程度和肾小管损害程度 肾小球硬化定义为在一毛细血管襻节段内出现 &' 染色阳性物质引起的系膜区扩张 球囊粘连和毛细血管襻塌陷 肾小球硬化程度按 分的半定量计分方法评价 无硬化改变为 分 硬化占整个肾小球面积的 > 以下为 分 占整个肾小球面积的 1> > 为 分 占整个肾小球面积的 > > 为 分 占整个肾小球面积的 1>> 为 分 每只小鼠肾小球硬化的最终评分为所评价的小鼠所有肾小球计分的平均值 每只小鼠至少评价 个肾小球 结果表示为均数? 标准 误 评分采用盲法 肾小管间质的损伤定义为近端小管刷状缘消失 肾小管扩张 萎缩以及间质纤维化形成 按程度以 分的半定量计分方法评价 正常为 分 小管间质损害 > 分 小管间质损害 > > 为 分 小管间质损害 >> 分 小管间质损害 > 为 分 每只小鼠至少评价 最终评分由所有高倍镜下视野计分的平均值得出 结果表示为均数? 标准误 评分采用盲法 )*,-. 检测肾组织 #/& 的表达 *$%(. 法提取肾皮质总 )0' 取 6)0' 进行逆转录合成 80'!#$%! 正义引物 反义引物序列分别为 A+4444',,,,*,*'*4'*4''+AA+ 4*4''4,4*,*,',',,'4'+A 产物为 4'&8 正义引物 反义引物序列分别为 A+,*',+,,,,''*4*4*,,4*,+AA+'4,,,''4'*4+,,,*),'4*+A 产物为 经 6 琼脂糖凝胶电泳后用凝胶成像系统 '.!!(#' 分析检测电泳图像吸光度值 以!#$%! 和内参照 4'&8 的吸光度之比作为检测指标的相对表达量 )*0 免疫印迹测定足细胞 的表达 用含 6 蛋白酶抑制剂的 &, 细胞裂解液提取肾组织总蛋白 $9($ 法进行蛋白定量后 6 上样于 68 分离胶电泳 转膜后用含 6 脱脂奶粉的 ** 室温封闭 加相应一抗 '/ 公司 稀释 于 = 培育过夜后 辣根过氧化物酶耦联的二抗室温培育 与, 显色剂反应 /%! 曝光显影 结果应用凝胶成像系统 '.!!(# ' 分析 以 4'&8 为内参照 所检测蛋白与之的比值作为该蛋白表达的相对值 )*1 统计学分析 计量资料以均数 标准差表示 组间均数比较采用 & 统计学软件行方差 '02B' 分析 检验水准为 C + 结 果 +*) 各组小鼠尿与血生化指标的检测结果 相比于正常对照组 单纯给予阿霉素后小鼠出现明显的蛋白尿 低蛋白血症 高胆固醇血症并伴有进行性肾功能下降 但阿霉素注射后再给予阿利吉仑则小鼠上述情况总体得到明显改善 尿蛋白减少 血清白蛋白上升 血清肌酐则明显下降 但对胆固醇的影响则不明显 表!"#"!

3 期 伍巧源 廖蕴华 杨桢华 等 肾素抑制剂阿利吉仑对阿霉素肾病小鼠肾损伤及足细胞!#$%! 表达的影响 11 表 ) 各组小鼠蛋白尿与血生化指标的比较 *,(/$%(!(9$(#%!"$%!.((%(#/%$/(!6.6$(" 组别 尿蛋白 /6 白蛋白 6 胆固醇 //(. 肌酐 /(. 正常对照组???? 阿霉素组? 1?? 1? 阿霉素 阿利吉仑组????1 与正常对照组比较 与阿霉素组比较 +*+ 各组小鼠肾脏组织学的病理改变 与正常对照组比较 单纯注射阿霉素 1 周后小鼠肾脏组织学改变包括进展性局灶节段肾小球硬化 肾间质广泛纤维化和肾小管萎缩 而阿利吉仑可显著改善阿霉素导致的上述病理改变 表 图 +*, 各组肾组织足细胞 #/& 及蛋白表达 单纯阿霉素肾病小鼠!#$%! /)0' 的水平较正常对照组明显下降 但给予阿利吉仑干预后!#$%!/)0' 表达显著回升 肾组织!#$%! 蛋白表达亦具有类似的变化趋势 图 图 表 + 阿利吉仑对阿霉素肾病小鼠肾组织病理损害的影响 *9#(9.%%$#!(!$#!.%(.(6(9/%# % $%/%!!#$( 组别 肾小球硬化半定量评分 肾小管间质损伤半定量评分 正常对照组?? 阿霉素组? 1? 阿霉素 阿利吉仑组? 1? 与正常对照组比较 与阿霉素组比较 图 ) 阿利吉仑对阿霉素肾病小鼠肾脏病理损害的影响 :%69#(9.%%$#!(!$#!.%(.(6(9/%#%$%/%!!#$((!%!%!6@ ' 正常对照组 阿霉素组, 阿霉素 阿利吉仑治疗组 图 + 各组 #/& 的表达 :%6$#%(!(9!#$%!/)0'%!#6$(" 正常对照组 1 阿霉素组 阿霉素 阿利吉仑组 与正常对照组比较 与阿霉素组比较 图, 各组肾组织 蛋白的表达 :%6$#%(!(9!#$%!$(#%!%!#6$(" 正常对照组 1 阿霉素组 阿霉素 阿利吉仑组 与正常对照组比较 与阿霉素组比较!"#"!

4 11 西安交通大学学报 医学版 第 卷, 讨 论大量研究已经证实 )' 系统阻断剂可延缓慢性肾脏病的进展 如,22&)'* 及 )0'' 等研究已证实 ', 或 ') 类药物能延缓慢性肾脏病的进展 但目前常用的 )' 抑制剂有其不足之处 长期应用 ', 可导致 血管紧张素 逃逸 现象 ') 类药物则可导致血管紧张素 型受体 '* 的激活 '* 的过度激活能导致心脏肥大和血管纤维化等不良后果 且 ', 和 ') 均可升高血浆肾素活性 血浆肾素活性升高是导致高血压患者心梗的危险因素 还与肾功能不全密切相关 直接肾素抑制剂阿利吉仑可阻断 )' 系统首步反应的限速酶 可更彻底的抑制 )' 系统 避免血管紧张素 逃逸现象 不会激活任何亚型的血管紧张素受体 基于阿利吉仑的上述特点 自该药面世以来 其对肾脏的保护作用即被密切关注 但该药与肾脏病的关系研究目前主要集中于糖尿病继发肾损害 研究发现其可减少糖尿病肾病的蛋白尿 延缓肾小球硬化进展 且有报道其抑制间质纤维化的作用要强于 ', +1 本研究利用小鼠阿霉素肾病模型观察阿利吉仑的肾脏保护作用 结果显示小鼠阿霉素肾病模型类似于人类的局灶节段性肾小球硬化 病理学特征 性表现为进展性肾小球硬化及小管间质损害等 是研究人类肾小球疾病的重要模型之一 本实验给予阿霉素注射 1 周后小鼠表现出以蛋白尿 低蛋白血症 高脂血症和肾功能损害为特征的阿霉素肾病 病理显示阿霉素导致小鼠出现进展性肾小球硬化和肾小管间质损害 相比于单纯给予阿霉素 给予阿霉素后再给予阿利吉仑干预 尿蛋白则显著改善 血清白蛋白上升 明显延缓了肾功能恶化 并可较为明显地减轻肾小球硬化和肾小管间质损害 提示阿利吉仑对阿霉素肾损害有良好的保护作用 )' 系统阻断剂延缓慢性肾脏病的进展一方面是通过改善肾小球血流动力学 另一方面 除已经证实的通过抑制促细胞外基质合成因子及抑制抗细胞外基质降解因子而抑制间质纤维化 还包括介导和参与足细胞的保护作用 足细胞具有 '!6 的 型受体 '*) 并在应激时表达上调 由 '* 受体传递的强化信号可导致足细胞损伤 蛋白漏出 激活相关化学因子和细胞因子 最终引起间质纤维化和肾功能的丧失 因此 作者进一步对阿利吉仑降低蛋白尿 改善肾组织损害等肾脏保护作用是否与足细胞相关进行研究!#$%! 是足细胞分泌产生的对维持足突结构及裂孔膜的完整性具有重要作用的蛋白!#$%! 表达减少 将影响肾小球滤过膜的完整性 导致蛋白尿的产生 本研究发现注射阿霉素后小鼠肾组织!#$%! /)0' 及蛋白表达均显著减少 而给予阿利吉仑干预后 阿霉素导致的小鼠!#$%!/)+ 0' 及蛋白表达下调的现象得到明显改善 提示阿利吉仑可以上调!#$%! /)0' 及蛋白表达 起到修复足细胞损伤的作用 从而维持足细胞正常功能 新近亦已有少量研究提示阿利吉仑对足细胞有保护作用 如 && 发现阿利吉仑可下调高糖环境下小鼠足细胞的凋亡 )'D 应用电镜观察阿霉素肾病大鼠肾小球超微结构发现 阿霉素可导致足细胞足突基部宽度增加以及足细胞裂孔直径减小 而阿利吉仑可明显改善阿霉素导致的足突基部增宽及裂孔直径减小 还有报道发现阿利吉仑可改善转肾素基因大鼠蛋白尿的同时 亦可上调其足细胞 ((%! 的表达 这些均提示阿利吉仑对阿霉素导致的小鼠肾损害具有保护作用 可能部分与其对足细胞的保护作用相关 参考文献 韩蕊 叶志斌 & 直接肾素抑制剂 2 阿利吉仑在慢性肾脏病 3 中的应用进展 & 复旦学报 医学版. & '*3*4 '4$02!* *!42* 0&..22##"..#.."#" 44/1*1""#"&+# 1.& )1''1)!44/1!11511 &1# "#"##,"" &'1!" 1.1& *'6!416&*. #""#""# &. & /*%2'6 00/1$$4' 7+12$)&* #","" & '1!".1& 1/1$$4'74$$2'6/12'0*0&# #""#,,""&.& *'6 *'6 /* &/". # #8##". ##&3" 2.& $0*!*!$0*!* 611'1*$&#. 22## &*//1.1& 下转第 页!"#"!

5 期 韦素华 张 梅 王梦昌 等 生发中心与非生发中心型弥漫大 细胞淋巴瘤的发病特点及预后因素分析 4, C!(!+4, 型更常见 二者发病年龄无显著差异 男女比例无显著差异 说明本研究中 4, 型与!(!+4, 型有很好的可比性 在 4, 型中原发于淋巴结外占 1> 而!(!+4, 型原发于淋巴结外占 > 二者差异无统计学意义 4, 型中原发于胃肠道占 >!(!+4, 型原发于胃肠道占 >4, 型中原发于胃肠道明显高于!(!+4, 型 差异有统计学意义 一般胃肠道的淋巴瘤预后较其他部位好 本研究结果显示 4, 型中原发于胃 1 肠道明显高于!(!+4, 型 这可能是 4, 型预后好于!(!+4, 型的原因之一 有报道显示 D%1 高表达水平是影响 8, 患者的独立预后因素 8 水平 '!!'$($ 分期 & 评分为独立预后因素 本研究结果显示 4, 型 D%1 水平 >& 评分 + 均低于!(!+4, 型 间接提示 4, 型预后 + 可能会好于!(!+4, 型 与已有研究结果一致 有研究指出 年龄大于 1 岁患者长期生存率低 而本研究显示年龄段在 1 岁以上 包括 1 岁!(!+ 4, 型和 4, 型发病人数无显著性差异 进一步继续随访这些病例的治疗效果 总生存期 将能更准确地评估 4, 型和!(!+4, 型预后的差别 参考文献 '.0"+ #/-#&*## 2+ $" 6. #'.0"+ &)".& *+25*10 **12$1'!)*%2$1&# ").# "" ( &'11.& 4$1'*+ *260 60*' & #"## ").# &' 1!"1.& 0*'$/12$1')61 612'1 &. ###").# # # &)".& 青晓燕 姚文秀 徐义全 等 & 原发于节外弥漫大 ) 细胞淋巴瘤的免疫分型及其预后的关系 & 中华临床医师杂志 1.& 1 陈燕 崔自强 王华 等 & 弥漫大 ) 细胞淋巴瘤 例预后相关因素分析 & 临床与实验病理学杂志.& 周颖 赵瑜 薄剑 等 &3.1 在弥漫大 ) 细胞淋巴瘤中的表达及临床意义 & 中国实验血液学杂志 1.11& 编辑 国 荣 上接第 11 页 "(#."#"(# (". %*$+* %/11!*'' *024!* 3 ""#- &**". &*##"# $.& ##&3" 21.& 0*+1.4''1++*20*)2)2'2$*+* &. /02++2/$+!*'6 *2& "#,#.#"#" (# ( #"""" - " #" "#& #&/1.1. '1('.& & *$0230 */2++*233*0!*$&*. 编辑 国 荣 上接第 1 页 $*141 /&4""&/ 3*+2'$32/621!*$5*'*3*!* &0!"1$.$& '3#""### !412$*'4'12*&*. ""##&!2.& ## " " 2'6021/7&##". #&.& #""-"& )12+2')$0*%2 0*&1# ** 11.& ""!* !$+2313&4" ##(# "&** "#"&*# 1.& "1.& 编辑 卓选鹏!"#"!

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