第 46 卷第 6 期 罗凯明等 : 透明质酸单克隆抗体的制备及免疫分析方法的建立 741 且得率低, 导致生产成本过高, 不能满足医药和化妆品生产的需求 目前主要利用兽疫链球菌 枯草芽孢杆菌 [8-10] [11-12] 大肠杆菌以及乳酸链球 [13-14] 菌的 HA 高产菌株发酵生产 HA 发
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1 740 学报 JournalofChinaPharmaceuticalUniversity 2015,46(6): 透明质酸单克隆抗体的制备及免疫分析方法的建立 罗凯明, 赵 虎, 高向东 ( 中国药科大学生命科学与技术学院, 南京 ) 摘要将 1 氰基 4 二甲胺吡啶四氟硼酸盐 (CDAP) 活化后的透明质酸 (HA) 与牛血清白蛋白 (BSA) 共价偶联制备完全抗原 BSA HA, 纯化后免疫 BALB/c 小鼠, 采用杂交瘤技术制备 HA 特异性单克隆抗体, 考察单抗的生物学特性, 并建立 HA 定量免疫分析方法 间接竞争 ELISA 法 研究表明, 完全抗原 BSA HA 免疫 BALB/c 小鼠后, 能诱导 HA 特异性抗体的分泌 ; 经细胞融合 选择性培养 筛选和亚克隆, 获得一株稳定分泌 HA 特异性抗体的杂交瘤细胞 8B6, 其腹水抗体效价达 以上, 亲和常数为 mol -1, 独特型为 IgG1; 以 10 0ng/mLHA 包被酶标板,1 0% BSA 为封闭剂, 建立 HA 间接竞争 ELISA 法, 其线性范围介于 0 01~10 0μg/mL, 特异性好 灵敏度高 关键词 透明质酸 ; 单克隆抗体 ; 间接竞争 ELISA; 免疫分析 中图分类号 TQ323 文献标志码 A 文章编号 (2015) doi: /j.isn Preparationofamonoclonalantibodyagainsthyaluronicacidanditsapplica tioninimmunoassay LUOKaiming 牞 ZHAOHu 牞 GAOXiangdong SchoolofLifeScience&Technology 牞 ChinaPharmaceuticalUniversity 牞 Nanjing 牞 China Abstract Thisstudywastodevelopaquantitativeimmunoasayforhyaluronicacid 牗 HA 牘.Wefirstlyprepareda monoclonalantibody 牗 MAb 牘 againstit HA 牞 activatedby1 cyano 4 dimethyl aminopyridinium tetrafluoroborate 牗 CDAP 牘牞 wascoupledtobovineserum albumin 牗 BSA 牘 BALB/cmicewereimmunizedwithpurifiedcomplete antigenbsa HAandthemonoclonalantibodywaspreparedbyhybridomatechnique Tocharacterizethespecificity oftheantibody 牞 inhibitionenzyme linkedimmunosorbentasay 牗 ELISA 牘 wasconductedandthecrosreactivity alongwithafinityconstantwasdetermined TheresultsshowedthatthesubstitutiondegreeofBSA HA 牗 m BSA / w HA 牘 wasabout9 Also 牞 ahybridomacellinenamed8b6wasobtainedbyhybridomatechnology.theindirect ELISAtiteroftheasceticfluidwas 牷 theisotypeofmab8b6wasigg1andtheafinityconstantwas K a = mol -1 ToestablishtheindirectcompetitiveELISAmethod 牞 polystyrenemicrowelplateswere coatedwith10 0ng/mLHAandblockedwith1 0% BSA ThelinearrangeofindirectcompetitiveELISAwas between10 0ng/mLto10 0μg/mLwhichconfirmedthatthemethodwasspecificandsensitive Keywords hyaluronicacid 牷 monoclonalantibody 牷 indirectcompetitiveelisa 牷 immunoasay ThisstudywassupportedbyChinaNationalKeyHigh TechInnovationProjectfortheR&DofNovelDrugs 牗 No 2012ZX 牘 andtheinnovativescientificresearchteamfundofjiangsuprovince 透明质酸 (hyaluronicacid,ha) 是由 D 葡萄糖醛酸和 N 乙酰氨基葡萄糖的双糖重复单元所组成的线性酸性黏多糖, 相对分子质量介于 ~ D [1] HA 具有良好的亲水性 黏弹性 应变 性 渗透性以及生物相容性 [2], 并且具有免疫调节 抗氧化 抗炎等多种生物活性, 目前已被广泛应用于医药 化妆品和食品领域 [3-7] HA 可从鸡冠 动物眼球等组织中提取获得, 但其制备过程复杂而 收稿日期 通信作者 Tel: E mail:xdgao@cpu edu cn 基金项目 国家 重大新药创制 科技重大专项资助项目 (No 2012ZX ); 江苏高校优秀科技创新团队资助项目
2 第 46 卷第 6 期 罗凯明等 : 透明质酸单克隆抗体的制备及免疫分析方法的建立 741 且得率低, 导致生产成本过高, 不能满足医药和化妆品生产的需求 目前主要利用兽疫链球菌 枯草芽孢杆菌 [8-10] [11-12] 大肠杆菌以及乳酸链球 [13-14] 菌的 HA 高产菌株发酵生产 HA 发酵液中 HA 含量测定的方法主要有咔唑法 Biter Muir 法 地衣酚法 阿利新蓝法 CTAB 浊度法 紫外光谱法和共振瑞利散射 (RRS) 光谱 [15-17] 法等, 上述方法均缺乏特异性, 灵敏度低, 且发酵液中多种成分影响 HA 测定结果 因此, 本研究采用化学法将 HA 和载体蛋白 牛血清白蛋白 (BSA) 共价偶联, 采用杂交瘤技术制备 HA 特异性单克隆抗体, 建立 HA 免疫分析方法, 为发酵生产 HA 的定量分析提供特异 灵敏的检测手段 材料 1 1 试剂与材料 透明质酸 ( 泰州市苏化医药科技有限公司 ); BSA 1 氰基 4 二甲基氨基 吡啶四氟化硼 (CDAP) 聚乙二醇 (PEG)1500 选择性培养基 HAT HT 和小鼠单克隆抗体独特型试剂盒 (ISO2) ( 美国 Sigma Aldrich 公司 ); 胎牛血清和 DMEM 培养基 ( 美国 ThermoFisher 公司 ); 羊抗小鼠 IgG HRP( 武汉博士德生物工程有限公司 ); 透析袋 ( 上海源叶生物科技有限公司 ); 高结合力 ELISA 板 ( 广州洁特生物过滤制品有限公司 ) 1 2 动物与细胞株 BALB/c 小鼠, 雌性,7 周龄, 购自扬州大学比较医学中心, 许可证号 :SCXK( 苏 ) ;Sp2/ 0 Ag14 细胞株, 由本实验室保存并提供 1 3 仪 器 全波长酶联免疫检测仪 ( 美国 Thermo 公司 ); Mylab 酶标板摇床 ( 韩国 Seoulin 公司 ) 方法 2 1 完全抗原 BSA HA 的制备 HA 经 CDAP 活化后, 与 BSA 共价偶联, 偶联反应液经透析除去反应体系中的小分子和游离 BSA 分别采用 BCA 法和硫酸咔唑法测定偶联物的蛋白质和糖的含量, 求得 HA 的 BSA 取代度, 并分别采用紫外光谱扫描法和 SDS PAGE 鉴定偶联物 偶联物微孔滤膜过滤后, 少量分装, 于 -20 保存备用 2 2 免疫 BALB/c 小鼠用 ph7 2,0 01mol/LPBS 调节 BSA HA 质量浓度至 500μg/mL, 将 BSA HA 与弗氏完全佐剂等体积混合, 充分乳化后腹腔接种雌性 BALB/c 小鼠, 每只 0 2mL; 间隔 7d, 采用等量的 BSA HA 与弗氏不完全佐剂等体积混合, 充分乳化后加强免疫, 重复 2 次 于最后一次加强免疫后第 10 天, 经眼眶下静脉丛采集血样, 分离血清, 采用双向免疫扩散测定 HA 特异性抗体效价 2 3 双向免疫扩散测定 HA 特异性抗体用 PBS 配制质量分数为 0 8% 的琼脂糖凝胶, 制备凝胶平板 ; 按设计的方案打孔, 并在相应的孔内分别加入 HA 和梯度稀释免疫 BLAB/c 小鼠的血清, 将凝胶平板放入湿盒内, 置 37 温箱 48h 后观察结果 2 4 细胞融合与 HA 特异性杂交瘤细胞筛选 BALB/c 小鼠于冲击免疫 3d 后, 摘眼球放血处死, 无菌分离脾淋巴细胞, 以 PEG1500 为融合剂, 按标准程序进行细胞融合 [18], 采用间接 ELISA 法筛选阳性杂交瘤细胞, 经 2 次亚克隆, 选择上清液抗体效价高 生长状态良好的杂交瘤细胞单克隆扩大培养并液氮冻存 2 5 间接 ELISA 法筛检 HA 特异性抗体用 10 0μg/mLHA 包被酶标板,1 0% 明胶封闭, 然后按常规 ELISA 操作程序检测杂交瘤细胞上清液中 HA 特异性抗体分泌情况 2 6 HA 腹水单抗制备 纯化与鉴定将 HA 阳性杂交瘤细胞用 PBS 重悬, 按每只 个细胞的量经腹腔接种预先注射过降植烷的 BALB/c 小鼠,7~10d 后小鼠腹部明显膨胀, 用注射器采集腹水, 间接 ELISA 法测定腹水 HA 特异性抗体效价 ; 采用辛酸 硫酸铵沉淀法纯化腹水单抗, 非还原性 SDS PAGE 分析纯化效果,BCA 法测定其蛋白质浓度 2 7 HA 单克隆抗体生物学特性的考察利用小鼠单克隆抗体独特型试剂盒 ISO2 鉴定 HA 单抗的独特型, 采用间接竞争 ELISA 法测定其亲和常数, 并考察 HA 单抗与蔗糖 右旋糖酐 可溶性淀粉 肝素及硫酸软骨素 (CS) 等的交叉反应率 2 8 HA 间接竞争 ELISA 法的建立通过优化 HA 包被浓度, 选择封闭液, 确定 HA 特异性单抗工作浓度, 以羊抗小鼠 IgG HRP 为检
3 ７２ 学 报 Ｊ Ｃｈ Ｐｈ ｍ Ｕ ５ ６ ６ ７ ７ ２ 测抗体 建立 ＨＡ定量免疫分析法 间接竞 争 ＳＡ法 按照间接竞争 ＳＡ的操作程序 制作 ＨＡ间接竞争 Ｓ Ａ标准曲线 # 结 果 ３ 完全抗原 ＢＳＡ ＨＡ的制备与鉴定 第 ６卷 ３ ２ ＨＡ特异性抗体效价的测定 ＢＡＬＢ 小鼠经 ＢＳ Ａ ＨＡ加强免疫后 诱导产 生 ＨＡ特异性抗体 琼脂糖凝胶双向免疫扩散结 果 图 ３ 显示 免疫小鼠血清中 ＨＡ特异性抗体效 价达 ３２ 表明 ＢＳＡ ＨＡ免疫原性较强 免疫效果 较好 ＨＡ与 ＢＳ Ａ按物质的量比 ２投料 制备完全 抗原 ＢＳ Ａ ＨＡ 偶联反应液用截留相对分子质量为 ３ ｋ Ｄ的透析袋对 ＰＢＳ透析 以除去反应液中的小 分子及游离 ＢＳ Ａ 透析后的偶联物经 ２ ｍ 波长扫描 结果 图 显示 偶联物紫外光谱明显不 同于 ＨＡ 与 ＨＡ２ ７ ｍ处吸收峰相比 其２ ５ ｍ处 ８ ｍ处出现蛋白特征 特征吸峰发生明显红移 且２ 吸收峰 提示 ＢＳ Ａ成功偶联到 ＨＡ上 Ｆ ｇ ３ Ａｇ ｂ ｍｍ ｍ ｇ ＨＡ Ｔｈ ｗ ２ μｌ ｍｇ ｍｌｈａ Ａ ｍ ｗ ２ ２ ８ ３ ６ ３ ２ ５ ６ ６ ２８ ７ ２５ ６ ８ ２ μｌ ｗ ３ ３ 杂交瘤细胞筛选与单克隆抗体的制备 细胞融合后经 ＨＡＴ选择性培养 间接 ＳＡ 筛选和亚克隆 获得一株稳定分泌 ＨＡ特异性抗 体的杂交瘤细胞 命名为 ８Ｂ６ 其腹水单抗的间接 ＳＡ效价达 ２５６以上 ８Ｂ６腹水单抗经 Ｆ ｇ Ｕ ｐ ＢＳＡ ＨＡ ＨＡ ＢＳ Ａ ＰＢＳ ＨＡ Ｈ ＢＳＡ Ｂ ｍ ｂ ｍ 偶联物经 ＳＤＳ ＰＡＧＥ 凝胶用阿利新蓝 ８ＧＸ染 色和考马斯亮蓝 Ｒ２ ５ 复染 结果 图 ２ 显示 偶联 物电泳条带呈多糖特异性染色和蛋白质双重染色 辛酸 硫酸铵沉淀法纯化 ＳＤＳ ＰＡＧＥ结果 图 显示 纯化抗体于 ５ｋＤ附近呈单一条带 表明 辛酸 硫酸铵沉淀法纯化腹水型单抗的效果较好 纯化抗体经 ＢＣＡ法测定 其抗体质量浓度为 ５ ９ ｍｇ ｍｌ 提示 ＢＳＡ与 ＨＡ呈共价偶联 同时偶联物没有出 Ａ特征染色条带 表明大孔径透析袋去除未 现 ＢＳ 偶联的 ＢＳ Ａ效果好 分别采用硫酸咔唑法和 ＢＣＡ 法测定偶联物中糖和蛋白质的含量 得到 ＨＡ的 ＢＳ Ａ取代度 ｍｂｓａ ｍｈａ Ｓ Ｄ 约为 ９ Ｆ ｇ Ｓ ＤＳ ＰＡＧＥ ＨＡＭＡｂ８Ｂ６ｂ Ｌ Ｌ ２ ｐ ３ 单克隆抗体的生物学特性 经鉴定 单 抗 ８Ｂ６独 特 型 为 Ｉ ｇ Ｇ 间 接 竞 争 Ｆ ｇ ２ Ｓ ＤＳ ＰＡＧＥ ＨＡ Ｌ ＢＳＡ Ｌ ２ ＢＳＡ ＨＡ Ｌ ３ Ｔｈ ｇ ｗ ｗ ｈ ｂ ８ＧＸ Ａ ｗ ｈ ｍ ｂ Ｒ２ ５ Ｂ ＳＡ 测 得 单 抗 ８Ｂ６亲 和 常 数 为 ６ ７ ９ ｍ 属于高亲和力抗体 间接竞争 ＳＡ结果显 示 单抗 ８Ｂ６对 ＨＡ的 Ｉ Ｃ５为 ６３μｇ ｍｌ 对肝素
4 第 46 卷第 6 期 罗凯明等 : 透明质酸单克隆抗体的制备及免疫分析方法的建立 743 硫酸软骨素 (CS) 蔗糖 右旋糖酐及可溶性淀粉的 IC 50 均大于 200μg/mL, 交叉反应率均小于 0 3%, 说明单抗 8B6 跟 HA 结合反应特异性强 Table1 Concentrationsofinhibitorsneededtoobtain50% inhibition ofbindingofthemonoclonalantibody8b6toha(100 0ng/mL)as thecoatingantigen Inhibitors IC 50 /(μg/ml) Crosreactivity/% Heparin >200 <0 3 CS >200 <0 3 Sucrose >200 <0 3 Dextran >200 <0 3 Amidulin >200 <0 3 HA CS:Chondroitinsulfate 3 5 间接竞争 ELISA 方法的建立通过优化间接竞争 ELISA 实验条件, 确定以 10 0ng/mLHA 包被酶标板, 每孔 100μL,37 孵育 2h; 以 1 0% BSA 作为封闭液, 每孔 150μL, 37 封闭 1h; 工作浓度为 的单抗 8B6 50μL, 与 50μL 梯度稀释的竞争性抗原 HA 混合于酶标板孔中,37 孵育 2h; 加工作浓度的羊抗小鼠酶标抗体 IgG HRP, 每孔 100μL,37 孵育 1h; 加底物 OPD 溶液, 每孔 100μL,37 显色 20min; 加 2mol/LH 2 SO 4, 每孔 50μL, 终止反应, 以 630nm 作为参比波长, 测定 A 492 以竞争抗原 HA 质量浓度 (ng/ml) 的对数值对 A 492 进行线性回归, 得到 HA 间接竞争 ELISA 检测标准曲线 ( 图 6), 结果显示 HA 质量浓度介于 0 01~10 0μg/mL, 其浓度的对数值与相应的 A 492 呈良好的线性关系 和力抗体 [19] HA 作为大分子多糖, 其本身免疫原性弱, 需要通过化学方法将其与大分子蛋白质载体进行共价偶联, 以增强其免疫原性 最常用的多糖活化剂是 CNBr, 但其本身具有毒性, 且活化反应需要在较高的 ph 下进行, 易导致多糖水解, 限制了其在多糖活化方面的应用 [20] CDAP 是一种新型羟基活化剂, 可在碱性条件 (ph9~10) 下迅速 高效地将多糖的羟基活化形成氰酯键, 并在弱碱性条件 (ph7~9) 下直接与蛋白质上游离氨基形成共价偶联 [21] 本试验中 HA 经 CDAP 活化后与载体蛋白 BSA 偶联, 其偶联物 BSA HA 免疫 BALB/c 小鼠, 诱导产生高效价 HA 特异性抗体 ; 通过杂交瘤技术筛选获得一株分泌 HA 特异性抗体的杂交瘤细胞株 8B6, 其免疫球蛋白独特型为 IgG1, 亲和常数为 mol -1, 考虑到 HA 的弱抗原性, 亲和力十分理想 在优化 HA 菌株发酵条件以及后期 HA 提取纯化过程中, 始终需要对 HA 进行特异 灵敏 快速地定量测定 Biter Muir 法是目前发酵液中 HA 含量检测最常用的方法, 该法对已纯化制备的 HA 含量测定具有较高的准确度和精确度 但研究显示发酵液中多种成分, 特别是葡萄糖和酵母膏即使是在浓度极低的情况下也能严重干扰 Biter Muir 法对 HA 测定结果, 所以 Biter Muir 法测定 HA 时发酵液须经复杂的前处理, 致使检测步骤繁琐耗时, 难以满足生产实践的需要 [15] 与上述方法相比, 免疫分析法具有特异性强 灵敏度高的特点, 且对样品前处理要求低, 特别适用于复杂样品中特定组分的精确分析 本实验所建立的 HA 间接竞争 ELISA 法具有特异性强 灵敏度高 线性范围宽等特点, 为优化 HA 生产菌株的发酵条件 生产过程及其质量控制提供了简便 快速 微量定量分析手段 参考文献 [1] LapcíkLJr,LapcíkL,DeSmedtS,etal.Hyaluronan:prepara Figure5 StandardcurveforHAinPBSwasdeterminedbytheindi rectcompetitiveelisa 讨论 多糖属于 T 细胞非依赖性抗原, 无免疫记忆效应, 直接免疫机体无法产生高效价特异性和高亲 tion,structure,properties,andapplications[j].chemrev,1998, 98(8): [2] ChoiKY,ChungH,MinKH,etal.Self asembledhyaluronic acidnanoparticlesforactivetumortargeting[j].biomaterials, 2010,31(1): [3] MironovV,KasyanovV,ShuXZ,etal.Fabricationoftubulartis sueconstructsbycentrifugalcastingofcelssuspendedinanin
5 744 学报 JournalofChinaPharmaceuticalUniversity2015,46(6): 第 46 卷 situcroslinkablehyaluronan gelatinhydrogel[j].biomaterials, 2005,26(36): [4] LeeH,LeeK,ParkTG.Hyaluronic acid paclitaxelconjugate miceles:synthesis,characterization,andantitumoractivity[j]. BioconjugChem,2008,19(6): [5] PengC,GeH,HeS,etal.Molecularcloningexpresionand identificationofrecombinanthyaluronansynthasefrompasteurela multocida[j].jchinapharm Univ( 中国药科大学学报 ), 2009,40(6): [6] VasiAM,PopaMI,ButnaruM,etal.Chemicalfunctionalization ofhyaluronicacidfordrugdeliveryapplications[j].matersci EngCMaterBiolAppl,2014,38: [7] KamatM,El BoubbouK,ZhuDC,etal.Hyaluronicacidimmobi lizedmagneticnanoparticlesforactivetargetingandimagingof macrophages[j].bioconjugchem,2010,21(11): [8] WidnerB,BehrR,VonDolenS,etal.Hyaluronicacidproduc tioninbacilussubtilis[j].applenvironmicrobiol,2005,71 (7): [9] ChienLJ,LeeCK.EnhancedhyaluronicacidproductioninBacil lussubtilisbycoexpresingbacterialhemoglobin[j].biotechnol Prog,2007,23(5): [10] JiaY,ZhuJ,ChenX,etal.MetabolicengineeringofBacilussub tilisfortheeficientbiosynthesisofuniformhyaluronicacidwith controledmolecularweights[j].bioresourtechnol,2013,132: [11] YuH,StephanopoulosG.MetabolicengineeringofEscherichiacoli forbiosynthesisofhyaluronicacid[j].metabeng,2008,10(1): [12] MaoZ,ShinHD,ChenR.ArecombinantE.colibioprocesfor hyaluronansynthesis[j].applmicrobiolbiotechnol,2009,84 (1):63-69 [13] PrasadSB,JayaramanG,RamachandranKB.Hyaluronicacid productionisenhancedbytheadditionalco expresionofudp glucosepyrophosphorylaseinlactococuslactis[j].applmicrobiol Biotechnol,2010,86(1): [14] PrasadSB,RamachandranKB,JayaramanG.Transcriptionanalysis ofhyaluronanbiosynthesisgenesinstreptococuszooepidemicus andmetabolicalyengineeredlactococuslactis[j].applmicrobiol Biotechnol,2012,94(6): [15] OueslatiN,LeblancP,Harscoat SchiavoC,etal.CTABturbidi metricmethodforasayinghyaluronicacidincomplexenviron mentsandundercros linkedform[j].carbohydrpolym,2014, 112(21): [16]JeongE,ShimWY,KimJH.MetabolicengineeringofPichiapas torisforproductionofhyaluronicacidwithhighmolecularweight [J].JBiotechnol,2014,185:28-36 [17] LuoHQ,LiNB,LiuSP.ResonanceRayleighscateringstudyof interactionofhyaluronicacidwithethylvioletdyeanditsanalyti calapplication[j].biosensbioelectron,2006,21(7): [18] LeiX,ZhaoJ,WangX,etal.Developmentofahybridomacel linesecretingmonoclonalantibodyagainstsproteinofachinese variantofpedv[j].monoclonantibimmunodiagnimmunother, 2015,34(1):12-16 [19] NamkoongH,FunatsuY,OishiK,etal.Comparisonoftheimmu nogenicityandsafetyofpolysaccharideandprotein conjugated pneumococcalvaccinesamongtheelderlyaged80yearsorolder injapan:anopen labeledrandomizedstudy[j].vacine,2015, 33(2): [20] ChuC,SchneersonR,RobbinsJB,etal.Furtherstudiesonthe immunogenicityofhaemophilusinfluenzaetypebandpneumo coccaltype6a polysaccharide protein conjugates[j].infect Immun,1983,40(1): [21] LeesA,NelsonBL,Mond J.Activationofsolublepolysaccha rideswith1 cyano 4 dimethylaminopyridinium tetrafluoroborate foruseinprotein polysaccharideconjugatevaccinesandimmuno logicalreagents[j].vacine,1996,14(3):
第 期 甘金华等 强力霉素人工抗原的合成与抗体制备 材料与方法 试剂及溶液
第 卷第 期 年 月 食品与生物技术学报 强力霉素人工抗原的合成与抗体制备 甘金华 邓薇 李进平 艾晓辉 中国水产科学研究院长江水产研究所 湖北荆州 武汉纺织大学环境与城建学院 湖北武汉 采用改进的碳二亚胺两步法将强力霉素半抗原与载体蛋白 连接制备强力霉素 牛血清白蛋白 人工免疫抗原 并用同样方法将强力霉素与载体蛋白 连接制备人强力霉素 卵清白蛋白 人工包被抗原 经紫外扫描分析和动物免疫试验证实 强力霉素人工抗原合成成功
材料 方法
生物技术通报 姜燕 采用鼠抗人血红蛋白 单克隆抗体 和胶体金标记鼠抗人血红蛋白 单克隆抗体 及对照抗体羊抗鼠 利用双抗体免疫夹心反应原理特异性地结合人血红蛋白抗原 在 内可得到胶体金显色结果的原理研制便潜血单克 隆一步法胶体金检测试卡 用于诊断因各种原因引起的消化道出血疾病 应用杂交瘤技术制备两株鼠抗人血红蛋白 抗 体 方法检测 效价 免疫胶体金技术制备胶体金检测试卡 法检测 效价的结果显示 鼠抗人
食 品 与 生 物 技 术 学 报 第 卷
第 卷第 期 年 月 食品与生物技术学报 山药多糖研究进展 王洪新 王远辉 江南大学食品学院 江苏无锡 山药是药食兼用植物 山药多糖被认为是山药中重要的活性物质 综述山药多糖的提取分离工艺 纯化方法 化学结构分析和生理活性研究的现状 为未来研究山药多糖的新提取工艺 探讨构效关系 作用机制提供参考 山药多糖 研究进展 提取与分离 食 品 与 生 物 技 术 学 报 第 卷 第 期 王洪新等 山药多糖研究进展
7 北京大学学报 医学版 # +94* 4 ' % 论著!! "# $ #% %"&!%'!! $ "( )& * $ +,-.)/ ) 01 " * ). " 2")3 )01 ( /" 433% /1 " 0 "51 " -.)/$ 6',)") 4.))%) 0
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材料! 方法! # 基因的扩增及其序列分析
生物技术通报 黄艳燕 黄靖华 卢福芝 孙靓 彭立新 周兴 黄日波 利用 的方法从鼠李糖乳杆菌基因组 中扩增到 乳酸脱氢酶基因 并连接到载体 上 构建表达质粒 将重组质粒 转化大肠杆菌 重组菌株经 诱导表达 电泳分 析表明 在大肠杆菌中实现了表达 表达产物的分子量约为 同时采用紫外分光光度法测定 乳酸脱氢酶的酶活 测得重组菌株的 乳酸脱氢酶活力为 最适反应温度为 最适 乳酸脱氢酶 克隆 表达 鼠李糖乳杆菌
g ml 10% ph 色谱条件 kinetex C μm 100 A 4. 6 mm 150 mm 25 5 μl A B 10 mmol /L ml /min
25 4 2013 8 监测技术 5 1 2 1 ( 1. 江苏省疾病预防控制中心, 江苏南京 210009; 2. 南京医科大学第二附属医院, 江苏南京 210029) 5 Phenomenex kinetex C 18 2. 6 μm 4. 6 mm 150 mm 10 mmol /L ph 2. 5 + 60 40 DAD 280 nm 5 20. 0 mg /L ~ 100 mg /L 0.
材料导报 研究篇 年 月 下 第 卷第 期 种球的制备 单步溶胀法制备分子印迹聚合物微球 洗脱处理 种子溶胀聚合机理 种球用量的影响
水相中 组氨酸单分散分子印迹聚合物微球的合成 表征及其识别性能研究 李思平等 李思平 徐伟箭 较佳工艺条件下 在水性体系中选用无皂乳液聚合法制得的单分散微米级聚苯乙烯微球为种球 分别以组氨酸 甲基丙烯酸 或丙烯酸胺 乙二醇二甲基丙烯酸酯 为模板分子 功能单体和交联剂 合成了 组氨酸分子印迹聚合物微球 研究了形貌 粒径及其分布以及模板分子与功能单体之间的相互作用 分别以 激光粒度分析仪紫外分光光度法和红外光谱表征功能单体与交联剂之间的共聚情况
第 期 黄雪莲等 响应面优化绿色木霉菌培养基 材料与方法 菌种 仪器与试剂 菌种的活化 单因素试验 响应面优化试验 优化工艺的验证 数据处理 结果与分析
第 卷第 期 年 月 食品与生物技术学报 响应面优化绿色木霉菌培养基 黄雪莲 于新 仲恺农业工程学院轻工食品学院 广东广州 利用响应面分析法对绿色木霉菌的培养基进行优化 通过测量不同营养条件下绿色木霉 菌落生长直径研究其生物学特性 在单因素实验的基础上 选定葡萄糖添加量 丙氨酸添加量和磷酸二氢钾添加量 个因素进行中心组合实验 建立二次回归方程 并应用响应面分析法进行优化 结果表明 绿色木霉菌最佳培养基为葡萄糖
第一章 图 １ １ 传染病的特征 ９ Ｔ ｈ１ Ｔ ｈ２ 细胞调节机制简图 正调节 负调节 细胞因子与细菌的相互作用机制目前尚未完全明了 有实验表明 细胞因子与细菌之间 存在有互利和互抑双重效应 例如 Ｔ Ｎ Ｆα 和 ＩＦＮγ 可抑制放线菌的生长而 ＩＬ ６ 的作用则 反之 ＩＬ １ ２ 和 ＧＭ ＣＳＦ 可促进某些致病性大肠杆菌生长而 ＩＬ １ｒａ 可抑制之 研究表 明 某些致病性大肠杆菌有与
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 40 94 88 82 77 72 67 62 57 53 48 44 40 37 33 29 26 23 20 17 14 11 8 39 94 88 82 77 71 66 61 57 52 48 44 40 36 32 28 25 22 18 15 12 9 7 38 94 88
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福建农业学报 材料与方法 试验菌株 引物 主要仪器 主要试剂 细菌培养 模板的制备 反应条件 扩增产物的检测 特异性试验 敏感性试验 分离菌株检测 产物的克隆及序列测定 结果与分析
第 期 赵金莲等 荧光光谱法分析花茶对羟自由基 诱导的 氧化损伤的保护作用!!!!!!!! 花茶冲泡方法 荧光扫描方法 # 稳定性试验方法 重复性试验方法
年 月 华南师范大学学报 自然科学版 年第 期 赵金莲 曾佑炜 李 宽 彭永宏 采用荧光光谱扫描法定性定量研究了 种花茶对羟自由基 诱导的 氧化损伤的保护作用 结果表明 桂花茶 复合花茶 绿茶和芍药花茶的保护作用要优于红玫瑰花茶和金莲花茶 且各花茶的保护作用在 范围内均随质量浓度的增加而增强 该方法的稳定性和重复性都较好 花茶 氧化损伤 荧光光谱扫描 第 期 赵金莲等 荧光光谱法分析花茶对羟自由基
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, 90, 6000 t, 1333 ha,, 500 600 t,, 131.3 ha,,,,,,,,,, ,, 9 10, 11 12, 3 4,,,,, 0.067ha 500 1000kg,, 0.067ha 2000 3000kg, 4000 5000kg,,,,,,,,,,,,,,,, ,, ( ),,,,, : 1.,,,,,,,,,,,,, 2., 11, 23 31 , 7, 37,,,
兽医临床诊断学实验指导
兽 医 临 床 诊 断 学 实 验 指 导 河 北 科 技 师 范 学 院 动 物 科 学 系 临 床 兽 医 学 实 验 室 2009 年 2 月 目 录 学 生 实 验 守 则... 3 实 习 一 动 物 的 接 近 保 定 和 基 本 检 查 法...4 实 习 二 临 床 基 本 检 查 法 及 一 般 检 查...10 实 习 三 循 环 系 统 的 临 床 检 查...15 实 习 四
食 品 与 生 物 技 术 学 报 第 卷 列入我国 的植物多酚黄酮抗氧剂 防治高血脂和心血管疾病
第 卷第 期 年 月 食品与生物技术学报 植物多酚黄酮抗氧化剂与人体健康 尤新 中国食品添加剂和配料生产应用工业协会 北京 主要综述了对植物多酚黄酮类物质的生物活性和安全性 其内容包括 茶多酚 甘草黄酮 竹叶黄酮 大豆异黄酮以及从各种鲜果提取物的功能成分 如葡萄提取物 杨梅提取物 橄榄提取 物 乌饭树果提取物等 介绍了植物多酚黄酮的国际市场信息及相关的研究机构和生产单位 多酚 黄酮 健康 食 品 与
中 草 药
中 草 药 致 谢 李 沛 赵 继 敏 郑 智 敏 江 亚 楠 等 病 理 生 理 学 教 研 室 老 师 在 实 验 中 给 予 的 指 导 和 帮 助 狄 建 彬 顾 振 纶 赵 笑 东 钱 培 刚 蒋 小 岗 郭 次 仪 中 草 药 中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 41 卷第 8 期 10 年 8 月 1324 LDL C 非常明显升高 (
GBZ －2004.doc
C 52 GBZ GBZ/T 160.30 2004 Methods for determination of inorganic phosphorus compounds in the air of workplace 2004 5 21 2004 12 1 GBZ/T 160.30-2004 GBZ 1 GBZ 2 [ Phosphorus pentoxide Phosphorus pentasulfide
+
~ 1 ~ ~ 2 ~ 1-1 UHPLC-SEC 法对治疗性抗体的分析 TSKgel UP-SW3 UHPLC HPLC A TSKgel UP-SW3 2 μm (4.6 mm ID. 15 cm B UHPLC-SEC 1.7 μm (4.6 mm ID. 15 cm mmol/l (ph 6.7 + 2SO4 mmol/l Na +.5 % NaN3.35 ml/ 25 UV 28 nm 5
Microsoft Word 赵凯-二校 出4154
6 10 Vol. 6 No. 10 2015 10 Journal of Food Safety and Quality Oct., 2015 赵 1, 凯 2, 贾彦博 3*, 王啸 2, 丁枫芸 2, 肖海龙 3, 黄建萍 3 (1., 310058; 2., 310019; 3., 310022) 摘要 : 目的 ELISA 方法, Balb/c 4, ELISA,,, ELISA 结果,
武洪庆 田 黎 张久明 温占波 用 方法对黄杆菌属产红色素菌株 的培养基进行了优化 首先用部分重复因子实验对培养基组分蛋白胨 酵母粉 葡萄糖及 浓度对菌株产红色素的影 响进行评价 找出主要影响因子为葡萄糖和 浓度 两者均为正影响 其他组分对色素含量的 影响不显著 第二步用最陡爬坡路径逼近最大响应区域 最后用中心组合设计及响应面分析确定主 要影响因子的最佳浓度 菌株在优化培养基中培养较初始培养基色素含量提高
Really Good Antibodies Bethyl 二抗产品册 超过 670 种抗小鼠 兔子 山羊和大鼠的二抗 bethyl.com
Really Good Antibodies Bethyl 二抗产品册 超过 670 种抗小鼠 兔子 山羊和大鼠的二抗 bethyl.com Bethyl 公司 Bethyl Laboratories, Inc. ) 成立于1972年 一直秉承改善生活的理念致力于科学研究的理念 提供高质量的抗体产品 和抗体定制服务 Bethyl所销售的每一个抗体都是在德克萨斯州的蒙哥马利的唯一工厂生产 并且都经过Bethyl
中国科学技术大学 材料工程 05 校外调剂 0870 化学工程 吉林大学 应用化学 05 校外调剂 0870 化学工程 四川大学 制药
045700000787 东北大学 07030 分析化学 05 校外调剂 07030 无机化学 68 66 94 04 34 063700000004 沈阳药科大学 07030 分析化学 04 校内跨专业调剂 070303 有机化学 73 56 9 00 30 0007008903 北京大学 0780Z 药学类 05 校外调剂 070303 有机化学 75 67 09 8 4 085750830 苏州大学
:TGF-β bfgf 23 KEY WORDS:transforminggrowthfactor-β ;basicfibroblastgrowthfactor; bonemarrow mesenchymalstemcels;eukaryoticexpressionvector; liposomet
2 ( )208 58 JournalofNanchangUniversity(MedicalSciences)208,Vol.58No. TGF-β bfgf,, 2 (., 330006; 2., 5040) : -β (TGF-β ) (bfgf) (BMSCs), SD BMSCs Percol PCR TGF-β bfgf, pcdna3.(+), 3 BMSCs RT-PCR Westernblot
教师招聘中学化学1-11.FIT)
教 师 招 聘 考 试 中 学 化 学 历 年 真 题 汇 编 试 卷 渊 一 冤 渊 时 间 院 员 圆 园 分 钟 满 分 院 员 缘 园 分 冤 一 尧 单 项 选 择 题 渊 每 小 题 圆 分 袁 共 缘 园 分 冤 员 援 石 墨 烯 是 由 碳 原 子 构 成 的 单 层 片 状 结 构 的 新 材 料 渊 结 构 示 意 图 如 图 所 示 冤 袁 可 由 石 墨 剥 离 而 成 袁
第十一章 颈部疾病病人的护理
第 十 一 章 颈 部 疾 病 病 人 的 护 理 学 习 目 标 1. 了 解 颈 部 常 见 肿 块 病 人 的 身 体 状 况 及 处 理 原 则 ; 能 提 出 甲 状 腺 肿 瘤 甲 状 腺 功 能 亢 进 病 人 的 护 理 诊 断 并 制 定 出 护 理 措 施 2. 熟 悉 甲 状 腺 肿 瘤 甲 状 腺 功 能 亢 进 病 人 的 身 体 状 况 手 术 适 应 证 3. 掌 握
11JR3.mps
模 块 三 饲 料 及 其 加 工 利 用 模 块 目 标 了 解 饲 料 的 有 关 概 念 及 国 际 饲 料 分 类 中 八 大 类 饲 料 的 分 类 标 准 ; 掌 握 青 饲 料 粗 饲 料 青 贮 饲 料 能 量 饲 料 蛋 白 质 饲 料 矿 物 质 饲 料 饲 料 添 加 剂 的 营 养 特 性 和 利 用 特 点 ; 掌 握 各 类 饲 料 中 常 用 饲 料 原 料 的 种 类
一 概 述 ( 一 ) 兽 药 和 兽 药 残 留 的 概 念 掌 握 典 型 的 兽 药 : 是 指 用 于 预 防 和 治 疗 畜 禽 疾 病 的 药 物 但 是, 随 着 集 约 化 养 殖 生 产 的 开 展, 一 些 化 学 的 生 物 的 药 用 成 分 被 开 发 成 具 有 某 些
食 品 中 兽 药 残 留 检 验 一 概 述 二 兽 药 残 留 的 检 验 一 概 述 ( 一 ) 兽 药 和 兽 药 残 留 的 概 念 掌 握 典 型 的 兽 药 : 是 指 用 于 预 防 和 治 疗 畜 禽 疾 病 的 药 物 但 是, 随 着 集 约 化 养 殖 生 产 的 开 展, 一 些 化 学 的 生 物 的 药 用 成 分 被 开 发 成 具 有 某 些 功 效 的 动 物 保
投影片 1
56 100% 100% 64 60% 76 34% 2300 2/3 1800 / 1,070,400 ha 587,242 ha 458,158 ha 746,470 ha 326,589 ha 29mm 29mm 10cm 18~40 50 25 1. 1. 40 40 2. 2. 1. 1. 2. 2. 1. 1. 30 30 2. 2. 3. 3. 3 4. 4. 200 200
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1997 11 :,,,,,,, (),,,,,,, 90,, 1969,70, 80,90,,,,1993 38 1992,1993 1994, 1997 4, ( ), 1993 6 8913 14,,,,,, 16 ,,,,,,,, 1994 1997, 3 20 () 20 %,,,,,,,,,,? 1997 5 :,,,,,,,,,, ( ),, 1.,,,,,, ( ),,,, 25,,
第一章 化学反应中的质量关系和能量关系
第 章酸碱反应和沉淀反应习题参考答案 解 :(1)pHlg (H )1.00 ()0.050mol HOA 溶液中, HOA H OA 平 /(mol ) 0.050 (H ) (OA ) a 1.8 (HOA ) 0.050 (H ) 9.5 mol ph lg (H ).0. 解 :(1)pH 1.00 (H ) 0.mol ph.00 (H ) 0.0mol 等体积混合后 :(H ) (0.mol
价样 品 川 振 荡汉 取 叮 盛极 曲 的 示差 溶 出脉 具 体 方 法 见 有 机质 含 量 用 丘 林 法 测 定 沉积 物 的 矿 物 组 成 由 本 所 地质 室 测 数 据 由厦 门 大 学 海 洋 系 洪 家 珍 同志 提 供 三 各站 位 于表 谱 分析仪 进行 微 米膜 滤 后 分 斯 其 酿 可溶 部 分 的 含 鼠 零 用 冲测定 卷 报 分析 三 定 学 洋 海 表示 结
GB 15973—1995麻风病诊断标准及处理原则
炭 疽 诊 断 标 准 及 处 理 原 则 前 言 GB 17015 1997 炭 疽 (Anthrax) 是 由 炭 疽 芽 孢 杆 菌 (Bacillus anthracis) 引 起 的 一 种 人 与 动 物 共 患 传 染 病, 主 要 存 在 于 食 草 动 物 和 牲 畜 群 落 之 中, 并 能 造 成 环 境 的 广 泛 污 染 由 于 炭 疽 芽 孢 具 有 对 外 界 环 境
赵世嘏 高乃云 楚文海 微曝气工艺是在常规 基础上发展起来的 试验表明在紫外光强 投加量为 三氯乙酸 初始浓度约为 的情况下 后该工艺对 的去除达到 以上 工艺效果受 光强 投加量 初 始浓度和 的影响 其他条件一定时 随着 光强和 投加量的增大 去除率增加 然而 投加量超过 后 去除效果增加缓慢 对不同初始浓度 时去除率最 高 而后浓度增加 去除率下降 中性或弱酸性 条件下更有利于降解 消毒副产物
Microsoft Word 李桂敏-新-可能动版.docx
5 3 Vol. 5 o. 3 2014 3 Journal of Food Safety and Quality Mar., 2014 李桂敏, 宁保安, 白家磊, 赵 * 丽, 赵翠娇, 高志贤 (,, 300050) 摘要 : 目的 (diazepam, DZP), 方法 1- -(3- ) [1-ethyl-3-(3-dimethyllaminopropyl) carbodi imide hydrochloride,
标题
0 年月 分析化学 (FENXI HUAXUE) 研究 Chinese Journal of Analytical Chemistry 第期 ~ DOI:0.374/SP.J.096.0.00 伏马菌素 B 单克隆抗体制备及化学发光免疫检测方法的建立 许杨 邹龙 刘师文 刘京 陈波 ( 南昌大学食品科学与技术国家重点实验室, 中德联合研究院, 南昌 330047) ( 江西省疾病预防控制中心, 南昌
%&%& 畜牧兽医学报 )3 卷 ;>M "#7 -" 06%% 5#' I;A# P -=#- #-# ;74MA %^.' &l%&) > #- A 3' /(l %&%&S/7# _% TH1& A )'.1-=/7S_% ' I; # #- # A ;Q? 7# -U0-"U A # " -
畜牧兽医学报 伏马菌素 ' 单克隆抗体的制备及免疫学检测方法初步应用 姚静静 胡骁飞 韩俊岭 李青梅 王方雨 邓瑞广 张改平 河南省农业科学院动物免疫学重点实验室农业部动物免疫学重点实验室 郑州 新乡医学院第一附属医院 新乡 河南农业大学 郑州 摘 要 拟制备灵敏高 特异性强的抗伏马菌素 7 单克隆抗体 并初步应用于 的检测 以期为 的免疫学快速检测提供技术支持 采用碳二亚胺法 40 制备人工抗原
目录 u 基本概念 u 杂交瘤技术的诞生及发展 u 杂交瘤技术的原理 u 杂交瘤技术的基本程序 u 单克隆抗体的生产
动物检疫检验技术 专业教学资源库 单克隆抗体技术 目录 u 基本概念 u 杂交瘤技术的诞生及发展 u 杂交瘤技术的原理 u 杂交瘤技术的基本程序 u 单克隆抗体的生产 一 基本概念 多克隆抗体 (polyclonal antibody) 简称多抗, 是针对多个不同抗原决定簇的抗体的混合物 本页图片源自百度搜索 单克隆抗体 (monoclonal antibody) 简称单抗, 是由一个 B 细胞克隆针对单一抗原决定簇产生
第 期 王 兴 涛 等 猪 流 行 性 乙 型 脑 炎 病 毒 种 猪 精 液 分 离 株 的 鉴 定 及 进 化 分 析 病 料 毒 株 及 细 胞 试 剂 引 物 设 计 提 取 及 基 因 克 隆 及 测 序
河 南 农 业 科 学 王 兴 涛 罗 俊 滕 蔓 樊 剑 鸣 鄂 巍 禹 斌 刘 力 张 改 平 利 用 技 术 对 河 南 省 某 规 模 化 猪 场 乙 脑 疑 似 病 例 的 种 猪 精 液 进 行 分 析 从 部 分 样 本 中 扩 增 出 与 流 行 性 乙 型 脑 炎 病 毒 基 因 和 基 因 具 有 高 度 同 源 性 的 预 期 产 物 在 日 龄 乳 鼠 脑 内 接 种 种 猪
福 建 农 业 学 报 材 料 与 方 法 药 敏 纸 片 及 药 品 培 养 基 菌 种 来 源 仪 器 检 测 抗 菌 活 性 的 测 定 数 据 处 理 结 果 与 分 析 种 抗 菌 药 物 对 临 床 分 离 鸡 大 肠 杆 菌 的 结 果
福 建 农 业 学 报 律 海 峡 刘 建 华 潘 玉 善 胡 功 政 苑 丽 许 瑞 福 建 农 业 学 报 材 料 与 方 法 药 敏 纸 片 及 药 品 培 养 基 菌 种 来 源 仪 器 检 测 抗 菌 活 性 的 测 定 数 据 处 理 结 果 与 分 析 种 抗 菌 药 物 对 临 床 分 离 鸡 大 肠 杆 菌 的 结 果 律 海 峡 等 外 排 泵 抑 制 剂 对 鸡 源 大 肠 杆
Microsoft Word 王伟华校正.doc
5 6 Vol. 5 No. 6 2014 6 Journal of Food Safety and Quality Jun., 2014 icelisa 王伟华 1, * 田木星 1, 韩占江 2 (1. /, 843300; 2. /, 843300) 摘要 : 目的, icelisa( ) 方法, CPF-H1 CPF-H2,,, icelisa, 结果 ;, ; ; icelisa, : PBST,
9.1.乳房炎
1. 1 3 4 5 -- -- 1 3 2 3,, 3 4 2. : 1 2 3 4 6~12h 2 1~2d (1) 15~18 7~15b 70% 2%~5% 2 3 2. 1 2 3. 3-7d 3-4 ( ) 1 2 3% 2 3 2% 1% 2 3 3 5 10mg 10% 4. (1) (2) (3) (4) (5) (1) (2) 3
2 中国生物工程杂志 5 8 方 法 重组质粒的构建及蛋白的表达 纯化和检测 () 基因序列来源于 81 数据库 在其 8 端添加 个 +, 的标签和 05 蛋白酶切位点 由生工生物工程有限公司 上海 全基因合成 总长度 0 " < 质粒为表达载体 构建 0 " "+," () 表达载体. 合成不含
中国生物工程杂志! 蛋白单克隆抗体的制备及其表征 李 孜 包欣晨 高向东 陆小冬 徐 晨 中国药科大学生命科学与技术学院 南京 北京三元基因工程有限公司 北京 摘要 目的 用 () 蛋白免疫小鼠 获得 () 特异性单克隆抗体 为 () 的含量测定提供基础 方法 通过全基因合成的方法获得目的基因序列 转化大肠杆菌 * 细胞诱导 +," () 及 () 蛋白表达 纯化后用作抗原免疫小鼠 取脾融合 筛选稳定分泌抗体的阳性细胞株
人 工 抗 原 的 鉴 定
生 物 技 术 通 报 张 海 棠 王 自 良 刘 耀 东 传 统 的 理 化 分 析 方 法 在 食 品 污 染 检 测 方 面 发 挥 了 重 要 的 作 用 但 均 存 在 一 定 的 缺 陷 急 需 建 立 快 速 高 效 的 检 测 方 法 食 品 污 染 免 疫 检 测 是 一 种 新 型 的 分 析 方 法 与 理 化 分 析 方 法 相 比 具 有 省 时 省 力 费 用 低 廉 便
附件四：作品送展表（夾於作品說明書第一頁，請勿裝訂）
嘉 義 市 第 31 屆 中 小 學 科 學 展 覽 會 作 品 說 明 書 科 別 : 生 活 與 應 用 科 學 科 組 別 : 國 小 組 作 品 名 稱 : 果 真 有 酵 - 水 果 酵 素 的 應 用 關 鍵 詞 : 水 果 酵 素 環 保 編 號 : 1 摘 要 本 研 究 主 要 的 目 的 是 蒐 集 常 見 的 水 果, 利 用 多 餘 的 果 皮 和 剩 餘 的 果 肉 製 造
上海交通大学学报 农业科学版 第 卷 24,'1,1%-%09.2.?-,&-210%;.)' %2-24' ',% ,%2%0&%2-&-2.%:.2.00%,..;" 伏马毒素,%2..2 是由串珠镰刀菌产生的真菌毒素 目前已知有 ) 种衍生物 分为 9$= 四类 其
第 卷第 期 年 月 上海交通大学学报 农业科学版!" # $ $"$"!%&'%' ' 文章编号 '('''''( 伏马毒素 9 单克隆抗体的制备及间接竞争 " 方法的建立 王雨晨 王 君 王元凯 严亚贤 上海交通大学农业与生物学院 上海市兽医生物技术重点实验室 上海 摘 要 采用戊二醛法将半抗原伏马毒素 9 分别与载体蛋白钥孔血蓝蛋白 和蛋白卵清白蛋白! 偶联成为完全抗原 9 和!9!9 作为包被抗原建立
! " # # +,"&&! %-"&&&./0(& ##&& 818 # $ %!! 9+:."&)(*!! * &&& 1;<%#.=>%?18. #& / "& ") - # < ###+*"("&&.&) ##& ++("&&+&( "&&+!! #" "
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2009,29(1) 张海棠等 : 高亲和力莱克多巴胺单克隆抗体的研制及 cielisa 检测方法的建立 51 工抗原 BSA?RAC, 用 UV 和 SDS?PAGE 鉴定 1.3 细胞融合备用小鼠的选择 BSA?RAC 免疫 6 周龄雌性 Balb/C 小鼠 5 只, 剂量为只 50μg 蛋白质
中国生物工程杂志 ChinaBiotechnology,2009,29(1):50~55 高亲和力莱克多巴胺单克隆抗体的研制 及 cielisa 检测方法的建立 1 张海棠 1 王自良 2 邓瑞广 2 张改平 1 范国英 1 姜金庆 (1 河南科技学院动物科学学院新乡 4530032 河南省动物免疫学重点实验室郑州 450002) 摘要用混合酸酐法 (MA) 将莱克多巴胺 (RAC) 偶联于牛血清白蛋白
Method
PfNPC 5% O 10% AB 4, RPMI 5% CO 2 37 5 100% 30 sec 10% Giemsa 15 mins 100x oil-immersion lens parasitemia parasitemia 10 15% Parasitemia multiple invasion 4 Panel A B C parasitemia parasitemia 2% *Parasitemia
- 国际流行病学传染病学杂志 年 月第 卷第 期!" #$% & 流感病毒为 & 病毒 目前已有 余种亚 ( 型 且持续变异 对流感的防控带来巨大挑战 根据核蛋白 ) 和基质蛋白 * 抗原性的不同 流感病毒可分为甲乙丙三型 其中甲型流感病毒引起的 ( 病症最严重 ) 在不同亚型的甲型流感病毒中高度保
国际流行病学传染病学杂志 年 月第 卷第 期!" #$% & 论著 甲型流感病毒核蛋白单克隆抗体制备及其初步应用 张儒轩沃恩康丁建祖方迪陈帅帅杨新燕郭潮潭 (--( 杭州 浙江省医学科学院生物工程研究所通信作者 郭潮潭 ) 1"9))(" #
中 国 畜 牧 兽 医 卷,-&!-/"/"#%$'."/719*"#!"/"#& 头孢氨苄 '."/71 又称头孢菌素 先锋霉素 等 属于人兽共用的第一代人工半合成头孢菌素类抗生素 因其具有抗菌谱广 疗效确切 价格低廉等优点 在医学和兽医临床上都有着广泛 应用 但 1 的不合理使用 不仅会造成环境
中国畜牧兽医! " # 抗头孢氨苄单克隆抗体的制备与初步应用 张 伟 王 兴 刘金萍 徐声乐 秦海艳 刘若璇 蔡云虹 汝晓飞 侯 珂 王捍东 扬州大学兽医学院 扬州 张浦镇动物防疫站 昆山 摘 要 为制备抗头孢氨苄 '."/71 的单克隆抗体并建立鲜奶中 1 残留检测的 19* 方法 本试验采用戊二醛两步法分别将 1 与牛血清白蛋白 卵清白蛋白 (2 偶联 用合成的 1 作为免疫原免疫 9 雌鼠 次免疫后
生命科学研究 房 蓓 武泰存 王景安 以玉米沈单 号为材料 用溶液培养的方法研究了缺锌 低锌和正常供锌对玉米生长发育的影响 进一步明确了一定量低锌比缺锌对玉米的伤害更大 并对其 同工酶谱及蛋白质表达进行了分析 结果表明 一定浓度的低锌培养使玉米生长受抑及受害最重 且地上部分比地下部分更敏感 低锌和缺锌处理时 种同工酶的酶谱和蛋白表达与正常供锌时均有明显的差异 尤其在一定量低锌浓度时 有些同工酶的表达增强或被特异性诱导
(CIP) : /. :, 2004 ISBN T S CIP (2004) (1 : ) : * : : :
(CIP) : /. :, 2004 ISBN 7 5045 4510 4.... T S974. 2 CIP (2004) 044759 (1 : 100029 ) : * 787 1092 16 8. 25 176 2004 6 1 2004 6 1 : : 15. 00 : 010 64929211 : 010 64911190 : http: / / www. class. com. cn
说 明
畜 禽 产 品 员 国 家 职 业 标 准 1. 职 业 概 况 1.1 职 业 名 称 畜 禽 产 品 员 1.2 职 业 定 义 从 事 畜 禽 及 畜 禽 产 品 测 试 的 人 员 1.3 职 业 等 级 本 职 业 共 设 五 个 等 级, 分 别 为 : 初 级 ( 国 家 职 业 资 格 五 级 ) 中 级 ( 国 家 职 业 资 格 四 级 ) 高 级 ( 国 家 职 业 资 格 三
19 0 1 2 3 4 5 6 7 28 29 0 1 2 3 4
19 0 1 2 3 4 5 6 7 28 29 0 1 2 3 4 5 6 7 38 ( ) VS 3 100 ( ) MM MM ! 1 2003 VS . MM MM MM MM MM MM MM CS MM CS MM MM ! ? % Y O [ ] Y O [ ] [ ] [ ] MM MM
(CIP) /. :,2005 ( /, ) ISBN R247.1 TS CIP (2005) ( ht tp : / / www. tcmonline. com. cn ) ( ) 787 mm
(CIP) /. :,2005 ( /, ) ISBN 7 81010 907 3.......... R247.1 TS972.161 CIP (2005) 105141 ( ht tp : / / www. tcmonline. com. cn ) ( 1200 201203 ) 787 mm 1092 mm 1/ 32 10 217 1 4 100 2005 11 1 2005 11 1 ISBN
大 学 化 学 第 卷 第 期 年 月 微 囊化技 术 在 生 物 医 学 中的 应 用 俞 耀 庭 陈 长 治 南 开 大学分 子 生物研 究 所 本 文 概 述 了微囊 固 定化技术基 本 应 用 原 理 摘要 的生 物 血液 相溶性 及 通透 性能 胞 在治 疗 肾 衰 肝 衰 及 清除 人体 内 中毒药物 般 性介 绍 微 囊 人 工 细 胞 的 一 般制 备方 法 各种 膜 材 料 对 人
生 水 简 称 比 比 重 物 生 一 率值 制 作血 涂 片 用 曰 用 值 分 作 染液和 染 液 染 色 在 放大 短 径 值 全 部 数据 经 生 物 统 计 学 处 理 一 记录 了 测 定 日 以 上 午 体长 幅 值 为 材 料 鱼在 采 血 前 均 进 测 定 取 鳞片 作 了 年
!! 生 水 简 称 比 比 重 物 生 一 率值 制 作血 涂 片 用 曰 用 值 分 作 染液和 染 液 染 色 在 放大 短 径 值 全 部 数据 经 生 物 统 计 学 处 理 一 记录 了 测 定 日 以 上 午 体长 幅 值 为 材 料 鱼在 采 血 前 均 进 测 定 取 鳞片 作 了 年 龄 鉴定 同 时 一 为 测 定 时 间 室 外 气 温 池 水水 温 一 值 和测 定 简称
Microsoft Word 李 楠 二校
7 4 Vol. 7 No. 4 2016 4 Journal of Food Safety and Quality Apr., 2016 4 李 楠 1 1,, 王晓洁 2*, 侯兰梅 1, 吴猛 1, 常彦红 1, 张斌 1 (1., 264025; 2., 264670) 摘要 : 目的 4 (sulfamethoxazole, SMZ) (neomycin, NEO) (enrofloxacin,
材料與方法
10-12 250-350 Sprague-Dawley rat ( SD ) 12 ( AM 8 00-PM 8 00 ) (Control group) (HS) (Heat shock group) 15 0 4 6 16 24 (PAE) ( Pulmonary air embolism group) 20 40 (25 l/min) 40 17 20 (HS&PAE) 15 4 16 20
Qubit-DNA RNA 总浓度测定 dsdna BR Assay Kits 各试剂加样量 : Buffer 标准 1 标准 2 样品 试剂 ( 荧光染色 ) 总量 ( 溶液体积 ) 50 或 250ml 1 或 5ml 1 或 5ml 待测 250µl 或 1.25ml 原始浓度 未知 0 ng
Qubit-DNA RNA 总浓度测定 dsdna BR Assay Kits 各试剂加样量 : 总量 ( 溶液体积 ) 50 或 250ml 1 或 5ml 1 或 5ml 待测 250µl 或 1.25ml 原始浓度 未知 0 ng/μl 100 ng/μl 待测 200 测定时要求浓度 未知 0 ng/μl 5000ng/ml 0~5000 ng/ml 1 备注 -Buffer:Qubit dsdna
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知 识 目 标 : 了 解 药 物 鉴 别 的 意 义 学 习 目 标 理 解 药 物 鉴 别 试 验 的 项 目 掌 握 药 物 鉴 别 试 验 的 常 用 方 法 能 力 目 标 : 能 熟 练 应 用 药 物 鉴 别 的 常 用 方 法 对 药 物 进 行 鉴 别 第 一 节 概 述 药 物 的 鉴 别 试 验 是 根 据 药 物 的 组 成 分 子 结 构 和 理 化 性 质, 采 用 化
为 了 改 进 SEC 色 谱 柱 的 分 离 表 现 - 色 谱 填 料 - 1. 更 小 的 粒 径 更 高 的 理 论 塔 板 数 更 高 的 反 压, 更 小 的 孔 隙 容 量. 更 大 的 孔 隙 容 量 ( 校 准 曲 线 的 斜 率 更 为 平 缓 ) 分 离 系 数 ; 需 要 被
新 款 适 用 于 UHPLC/HPLC 的 SEC 色 谱 柱 的 介 绍 东 曹 ( 上 海 ) 生 物 科 技 有 限 公 司 Jan, 015 为 了 改 进 SEC 色 谱 柱 的 分 离 表 现 - 色 谱 填 料 - 1. 更 小 的 粒 径 更 高 的 理 论 塔 板 数 更 高 的 反 压, 更 小 的 孔 隙 容 量. 更 大 的 孔 隙 容 量 ( 校 准 曲 线 的 斜 率
目 錄 第 一 章 緒 論 第 一 節 研 究 背 景 與 動 機... 2 第 二 節 研 究 目 的... 2 第 三 節 研 究 方 法... 2 第 二 章 溫 泉 的 歷 史... 3 第 三 章 溫 泉 法 律 與 分 布 第 一 節 溫 泉 的 法 律 / 定 義... 5 第 二 節
修 平 科 技 大 學 應 用 日 語 系 題 目 : 日 本 の 温 泉 と 台 湾 の 温 泉 指 導 教 師 : 古 瀨 和 彥 老 師 姓 名 : 袁 緣 姓 名 : 楊 錡 學 號 :BX99063 學 號 :BX99512 中 華 民 國 103 年 01 月 10 日 目 錄 第 一 章 緒 論 第 一 節 研 究 背 景 與 動 機... 2 第 二 節 研 究 目 的... 2 第
刘陈立 邵宗泽 以柴油为惟一碳源 从胜利油田黄河码头和厦门储油码头两个海水样品中富集得到两组柴 油降解菌 共 株细菌 株真菌 它们对柴油都有降解能力 鉴定结果表明这 株细菌 中有 株摩加夫芽孢杆菌 株施氏假单胞菌 株腊样芽孢杆菌 株反硝化产碱杆菌 株阿氏葡萄球菌 株食烷菌和 株类似很小海旋菌的未知新菌 其中 对柴油的降解能力最强 已 报道的食烷菌属中其他种的同源性最高 为 表明它是该属中的一个新种
54 中国生物工程杂志 ChinaBiotechnology Vol.37No 道 [14 16] 1~35 位氨基酸多肽 (EBOVNP1~35) 为上海吉尔生化公司合成 弗氏完全佐剂 弗氏不完全佐剂 50%PEG1450 溶液 HAT 和 HT 选择性培养基均为 Sigma 产品
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中国生物工程杂志 ChinaBiotechnology,2017,37(10):53 59 檪檪 技术与方法 檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪 DOI: 10.13523/j.cb.20171007 抗埃博拉病毒核蛋白抗体的制备与双抗 夹心 ELISA 检测方法的建立 1 刘俊伟 1 常瑞恒 回 鹏 董士尚 王金凤 孙 1 波 (1 天津国际生物医药联合研究院天津 300457
第 卷 第 期 年 月 水 生 生 物 学 报 肠 丫 搔蒸霎 原 位杂 交 和 原 位 技 术在 鱼 类基 因 定位 中 的 应 用 黄 袁仕 取 梅 朱作言 中 国科 学 院 水 生 生 物 研 究 所 淡 水 生 态 与 生 物 技 术 国 家 重 点 实验 室 武 汉 陕 西 师 范 大学 生 命 科 学 院 西 安 # 万 尸 了夭 如 趾 郑 人 扭寿 卿 关 键词 艺 只 妙 毛山知
标题
962 中国人兽共患病学报 ChineseJournalofZoonoses 2017,33 (11) DOI:10.3969/j.issn.1002-2694.2017.11.003 论著 1 株猪鼻支原体特异性单克隆抗体的制备及鉴定 田瑞雨 1,4, 熊祺琰 1, 倪博 1, 王佳 1,2, 韦艳娜 1, 冯志新 1, 邵国青 1,3 摘要 : 目的制备与鉴定猪鼻支原体单克隆抗体, 用于猪鼻支原体诊断及致病机理的研究.
校园之星
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基 础 研 究 食 品 科 学 2011, Vol. 32, No. 07 17 白 球 蛋 白 醇 溶 蛋 白 和 碱 溶 蛋 白 等, 发 现 白 果 中 的 蛋 白 质 主 要 以 清 蛋 白 和 球 蛋 白 为 主, 其 中 白 果 清 蛋 白 具 有 抗 氧 化 和 延 缓 衰 老 等 作
16 李 莹 莹 1, 吴 彩 娥 1, *, 杨 剑 婷 2, 范 龚 健 1 (1. 南 京 林 业 大 学 森 林 资 源 与 环 境 学 院, 江 苏 南 京 210037;2. 安 徽 科 技 学 院 食 品 药 品 学 院, 安 徽 凤 阳 233100) 对 白 果 的 主 要 过 敏 蛋 白 进 行 鉴 定, 并 对 其 过 敏 原 性 进 行 分 析 以 SDS-PAGE 和 Western-Blotting
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( ) 039 (CIP) /. :, 2005. 3 ISBN 7-5025-6678-3... -. TS211. 4 CIP ( 2005) 012222 : : : : * ( 3 100029 ) : ( 010 ) 64982530 http:/ / www. cip. com. cn * 850mm 1168mm 1/ 32 7 196 2005 4 1 2005 4 1 ISBN 7-5025-6678-3/
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实验室常用培养基的配制方法 Ampicillin( 氨卡青霉素 )(100 mg/ml) 100 mg/ml Ampicillin 50 ml 配制方法 1. 称量 Ampicillin 置于 50 ml 离心管中 ; 2. 加入 40 ml 灭菌水, 充分混合溶解后, 定容至 50 ml; 3. 用 0.22 µm 过滤膜过滤除菌 ; 4. 小份分装 (1 ml/ 份 ) 后,-20 保存 IPTG(
气溶胶光学厚度 的测量原理 Ê
肖钟湧 江洪 余树全 周国模 陈然 宋晓东 焦荔 洪盛茂 常杰 江波 南京大学国际地球系统科学研究所 南京 浙江林学院国际空间生态与生态系统生态研究中心 杭州 杭州市环境监测总站 杭州 浙江大学生命科学学院 杭州 浙江省林业科学研究院 杭州 气溶胶光学厚度 的测量原理 Ê 仪器和观测 实验场地 数据处理 气溶胶光学厚度的高光谱反演 浑浊度系数 波长指数 Ê Ê 精度检验 气溶胶光学厚度 浑浊度系数
國立臺東高級中學102學年度第一學期第二次期中考高一國文科試題
國 立 臺 東 高 級 中 學 102 學 年 度 第 一 學 期 第 二 次 期 中 考 高 一 國 文 科 試 題 卷 畫 答 案 卡 : 是 否 ( 班 級 座 號 科 目 代 號 畫 錯 扣 5 分 ) 適 用 班 級 :1-1 1-9 1-11 考 試 範 圍 : 梧 桐 樹 醉 翁 亭 記 古 橋 之 戀 樂 府 詩 選 論 語 選 一 默 寫 : 依 原 文 將 正 確 文 句 填 入
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權 能 的 來 源 安 童 牧 師 事 工 简 介 : -- 摘 自 安 童 牧 師 2013 年 9 月 8 日 主 日 信 息 神 呼 召 他, 最 初 在 街 上 接 納 養 育 得 痲 瘋 的 孩 子, 神 藉 着 一 个 单 纯 顺 服 的 仆 人 做 了 极 大 的 事 工, 現 在,8000 印 度 兒 童 參 與 他 的 服 事 目 前, 二 萬 三 千 多 兒 童 參 與 他 的
秘密大乘佛法(下)
印 度 佛 教 史 (25) 101 / 12 / 24 釋 清 德 秘 密 大 乘 佛 法 ( 下 ) 印 度 佛 教 思 想 史 第 十 章 第 三 節 金 剛 乘 與 天 行 一 秘 密 大 乘 稱 金 剛 乘 採 取 表 徵 主 義 1 三 四 五 方 佛 大 乘 佛 法 興 起, 傳 出 十 方 現 在 的 無 數 佛 名 現 在 有 佛 在 世, 可 以 滿 足 佛 涅 槃 後, 佛 弟
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任 志 强 回 忆 录 哪 怕 一 个 再 渺 小 的 个 人, 也 可 以 为 一 段 历 史, 甚 至 一 段 很 重 要 的 历 史 背 书! 一 个 变 革 的 时 代, 一 群 过 河 的 人, 一 种 野 心 优 雅 的 实 现! 一 部 民 营 企 业 和 创 业 人 生 的 心 灵 史 生 死 书! 平 时 就 很 敢 说 的 任 志 强, 这 次 说 的 更 赤 裸! 历 时 两
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自然科学版 预处理 视盘粗定位 视盘垂直坐标的粗定位 视盘水平坐标的粗定位
自然科学版 文章编号 视网膜图像中视盘的快速自动定位方法 赵晓芳 林土胜 李碧 摘 要 基于眼底视网膜血管的分布结构及视盘本身的特点 提出一种快速自动定位视盘的方法 首先根据视网膜血管的网络分布结构大致定位视盘的垂直坐标 然后根据视盘 的亮度信息及视盘与血管的关系来定位视盘的水平坐标 最后把视盘限定在以粗定位的视盘为中心的一个小窗口内 用 变换精确定位视盘中心 该方法不需要事先分割视网膜血管 也不需要对算法进行训练
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Microsoft Word 熊波-二校
6 3 Vol. 6 o. 3 2015 3 Journal of Food Safety and Quality Mar., 2015 * 熊波, 吴胜泽, 苏焕斌, 张燕, 刘辉 (, 528300) 摘要 : 目的 (sildenafil, SD) 方法 (SDH) (SDH-BSA),, SD, 结果 SD, 3.8 10 5, 0.02~3.8 ng/ml,, 结论 SD, SD 关键词
福建农业学报 发酵最佳转速的确定 确定 发酵周期 培养基配方试验 最优培养条件下碳源筛选 最优培养条件下氮源筛选 结果与分析 均匀设计 最佳
福建农业学报 赵 健 高晓丹 邱荣洲 翁启勇 材料与方法 种子罐的制备 发酵条件单因素试验 发酵最佳 值的确定 发酵最佳温度的确定 福建农业学报 发酵最佳转速的确定 确定 发酵周期 培养基配方试验 最优培养条件下碳源筛选 最优培养条件下氮源筛选 结果与分析 均匀设计 最佳 赵 健等 应用均匀设计优化生防细菌 发酵培养基组分及条件研究 最佳温度 碳源 最佳转速 氮源 福建农业学报 均匀设计 讨 论 赵
124 河南农业科学第 42 卷, (HPS) ;PRRSV PCV2, [4] PRRSV CSFV ;20, PRRSV,CSFV [5-9],, 1.2 主要试剂和仪器 Real-timePCR PRRSV CSFV PCV2, 3 RotorGene, RG-3000; ND-1000 Na
![124 河南农业科学第 42 卷, (HPS) ;PRRSV PCV2, [4] PRRSV CSFV ;20, PRRSV,CSFV [5-9],, 1.2 主要试剂和仪器 Real-timePCR PRRSV CSFV PCV2, 3 RotorGene, RG-3000; ND-1000 Na](/thumbs/91/105785327.jpg "124 河南农业科学第 42 卷, (HPS) ;PRRSV PCV2, [4] PRRSV CSFV ;20, PRRSV,CSFV [5-9],, 1.2 主要试剂和仪器 Real-timePCR PRRSV CSFV PCV2, 3 RotorGene, RG-3000; ND-1000 Na")
河南农业科学,2013,42(2):123-127 JournalofHenanAgriculturalSciences PCR PRRSV CSFV PCV2,, (, 450011) : 根据 TaqMan 复合荧光探针设计原则, 应用 Primer5.0 和 Oligo6.0 软件设计检测猪繁殖 与呼吸综合征病毒 (PRRSV) 猪瘟病毒 (CSFV) 和猪圆环病毒 2 型 (PCV2) 的特异性引物和探针,
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一 H-E 技 术 操 作 规 范 1. 及 时 固 定 组 织 : 免 疫 组 化 的 病 理 制 片 技 术 的 规 范 应 采 用 10%~20% 甲 醛 液 (10% 甲 醛 液 即 用 浓 甲 醛 液 1 份 加 蒸 馏 水 9 份 稀 释 ) 固 定 组 织, 因 甲 醛 易 氧 化 成 甲 酸, 因 此 多 会 偏 酸 性, 最 理 想 的 是 配 成 中 性 甲 醛 液 巨 大 组
材料與方法
µ µ µ κ 17 18 19 20 µ µ µ 21 H 2 DCF-DA H 2 O 2 H 2 DCF-DA 酶 esterase H 2 DCF-DA deacetylation H 2 DCF H 2 DCF H 2 DCF DCF H 2 DCF DCF Bae et al., 1997; Vanden et al., 1997; Atlante et al., 1997; Wang
煤 炭 学 报 仪器与药品 黏土矿物的提纯 黏土样品的制备 红外光谱 分析 射线衍射 分析 射线光电子能谱 分析
张明青 刘炯天 单爱琴 刘汉湖 为了深刻认识煤泥水中 同黏土矿物颗粒之间的相互作用 笔者用 溶液在不同 值条件下分别同高岭土和蒙脱土作用 测定黏土作用前后的 射线衍射 红外光谱和 射线光电子能谱 实验证实了在 溶液中 在黏土表面以静电形式吸附 在 溶液中 以 沉淀和静电形式吸附 此外 在 以上的溶液中还可能存在一 羟基络合吸附形式 提出了 沉淀吸附和一羟基络合吸附的吸附过程模式 黏土颗粒表面的 沉淀使颗粒间形成的非选择性
12-1b T Q235B ML15 Ca OH Table 1 Chemical composition of specimens % C Si Mn S P Cr Ni Fe
* - - 100084 Q235B ML15 Ca OH 2 DOI 10. 13204 /j. gyjz201508023 STUDY OF GALVANIC CORROSION SENSITIVITY BETWEEN ANY COUPLE OF STUD WELDMENT OR BEAM Lu Xinying Li Yang Li Yuanjin Department of Civil Engineering
实验指导编写模板
顾 勇 编 著 2008 年 3 月 目 录 前 言 2 动 物 生 物 学 实 验 守 则 3 实 验 一 : 动 物 的 细 胞 和 组 织 及 多 细 胞 动 物 的 胚 胎 发 育 5 实 验 二 : 原 生 动 物 系 列 实 验 9 实 验 三 : 蛔 虫 和 环 毛 蚓 的 比 较 解 剖 13 实 验 四 :( 或 日 本 沼 虾 ) 和 棉 蝗 的 比 较 解 剖 与 观 察 18