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唤状广
5 years ago
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1 第卷第期年月西安交通大学学报医学版!"#$## %&'& & 临床研究冠心病患者外周血人枯草溶菌素转化酶基因位点的多态性及其临床意义张明明刘欣高伟张翠改赵培于悦卿吴惠珍李亚丽 $ 河北省人民医院检验科超声科体检中心药学部 $ 生殖遗传科河北石家庄 $$ 摘要目的探讨外周血人枯草溶菌素转化酶 %&'% 基因多态性与不同类型冠心病之间的关系及临床意义方法选取年月年月年在我院就诊的不同类型冠心病患者 $ 例作为病例组按照解剖及病理生理变化分为心绞痛心肌梗死无症状心肌缺血缺血性心肌病猝死 $ 组同期健康体检者例为对照组应用聚合酶链反应 &'( 结合 )*+ 直接测序技术对所有入选者 &'% 基因,- 多态位点进行分型多因素回归分析 &'% 基因多态位点与不同类型冠心病的相关性同时检测研究对象的血脂及 &'. % 水平结果病例组血清 &'%,',-/)/' 阳性家族史的比例高于对照组 0)/' 低于对照组均 $ 病例组中猝死组各指标变化最明显无症状心肌缺血组变化最小病例组中,,-, 基因型和, 等位基因频率分别为 11 和 1 明显高于对照组 111 均病例组中猝死组,,-, 的基因型频率, 等位基因频率最高无症状心肌缺血组最低 $ 回归分析发现 &'% 基因,- 多态位点,, 基因型与冠心病的严重程度有关值为 %$1 为 $$$ 结论 &'% 基因,- 位点基因突变与冠心病严重程度有关关键词人枯草溶菌素转化酶 % 基因基因多态性冠心病血脂中图分类号 (($ 文献标志码 + $!"#$! %&'%"%! #%(!!%(!#%#!%"#%# 0+*-!.! /2 3! -+4 5# 0+*-'".6 0+4&# 72 7"#.8! 52 0".9#! /76.: $ )#6;#!#6:/6;6;)#6;#!2:;6"!&6:6!6! '#!#;)#6;#!&6;6$)#6;#!(#;"! -#!# 0##&;!6:&#:#06:69"6!$$'!6 )*'+,)&+#"##%# ()$*% +# "&,#"$+# "+ # #& +"""$- #"# #"# ###" " """ ##"#"#&.# "#&()/ #-" +"#0# " +" %# ()$*%&1#+"-+ %# ()$*%"# "&##()$*% ""++ "&()$*%)"1.1)" #+# # +.1) ++#&$&""""-# +"##+ # #"#-+"+ 收稿日期 %$ 修回日期基金资助河北省科技支撑项目 '&. $"- $##"# (2#-(#'&. 通信作者张明明 &3%&# 优先出版 &#&#"&%%&/&&%&&

2 $$ 西安交通大学学报医学版第卷 #&0# " # +&4&4 "&4 # +#+# # &4&4 "&4 &&0# "+""""- "+ 0# "+" # #"#- &$&/1# +"%#()$*%+" # "<&%$4 &$$&$&& % #()$*%-" # "& -. /,' #- % # " -"" 遗传因素不良生活习惯肥胖高血压等均与冠心病有关. 我们前期研究发现人枯草溶菌素转化酶 % ;;#!!#;6#":!=#!#%&'% $ 突变可影响胆固醇代谢促进动脉粥样硬化研究显示 &'% 第外显子 - 突变与冠心病的发生与. 治疗有关但目前有关 &'% 基因与冠心病病情的关系尚未见报道本研究选取了不同类型的冠心病患者及健康体检者检测 &'% 基因突变在入组者中的分布差异以及 &'% 血清浓度的变化探讨了该基因突变与冠心病的关系资料与方法一般资料选取在我院门诊及住院的冠心病患者 $ 例为病例组所有患者均有发作性胸痛等症状心电图显示, 段改变及, 波异常不典型患者结合动态心电图冠状动脉 ', 或冠状动脉造影等检查由我院心内科医生确定冠心病类型病例组男人女人男性年龄岁平均年龄 %>% 岁女性年龄 % 岁平均年龄 $>%% 岁按解剖及病理生理变 % 化将病例组患者分为心绞痛心肌梗死无症状心肌缺血缺血性心肌病猝死 $ 组各组的性别年龄分布见表同时选取例同期健康体检者为对照组病例组与对照组性别年龄比较差异无统计学意义 $ 排除肝炎肝硬化肾炎肾病综合征肾功能不全先心病等疾病所有入选者均签署知情同意书由河北省人民医院伦理委员会批准标本采集取入选者空腹静脉血 / 其中 / 放入 ),+. 抗凝管混匀后? 保存用于提取基因组 )*+$ / 放入促凝管中静置!;!@ 离心 $! 分离血清检测血脂水平 &'% 浓度血清血脂水平的测定以 A#=6! +2$ 全自动生化分析仪测定血清中总胆固醇,' 甘油三酯,- 高密度脂蛋白 0)/' 低密度脂蛋白 /)/' 的水平表不同类型冠心病患者的性别和年龄情况,6 -#!#;6!6#!#;#!6#! ;!6; #6;#6# 男性别女年龄 > 岁心绞痛组 % $>% 心肌梗死组 $> 无症状心肌缺血组 $>% 缺血性心肌病组 $ $$>% 猝死组 $>% $ %$ % 01 血清 &' 水平的检测选用 &'%0"6! /+ 试剂盒 %,++!6 公司美国严格按照说明书的要求操作血清标本 B 预稀释备用板内变异系数 %1 板间变异系数 1 加标回收率 %1 检测范围!/ 最低检出线 $!/ 用稀释液稀释标准品绘制标准曲线全自动酶标仪 $! 处读数 0&' 基因位点多态性分析 00 提取基因组 )*+),+. 抗凝血 / 按照,+*6-#! )*+ = 血液细胞组织基因组 )*+ 提取试剂盒离心柱型 )& 说明书提取基因组 )*+ &'( 扩增目的基因片段应用生物学软件 &;#; 设计引物 &'% 基因引物上游 $C '+--,','''.C 引物下游 $C.-'. ''-''',''',''-''',''-.C &'( 缓冲液 $/': $ :// :/*,&2,&B,,&<B%$/ :/ 上下游引物 $/$2 4):"&")*+ 聚合酶日本,474A4 公司 /2 不耐热的尿嘧啶 )*+ 糖基化酶 2*- 罗氏 / 目标 )*+$ / 加无菌水至 $/ 应用 6#;:#; ;6#! &'( 分析仪德国 #!; 公司扩增扩增条件? 孵育! 裂解 ".)*+ 然后在 %$?! 初始变性随后进行 $ 个循环 %$?$%?

3 期张明明刘欣高伟等冠心病患者外周血人枯草溶菌素转化酶 % 基因位点的多态性及其临床意义 $$?? 孵育! 扩增产物通过 $/ 例组 &'%,',-/)/' 的水平阳性家族史的琼脂糖凝胶电泳进行验证比例均高于对照组而 0)/' 的水平低于对照组差核苷酸序列分析应用美国 +A3/ 全异有统计学意义 $ 病例组中猝死组 &'. 自动 )*+ 测序仪测定目标基因的序列正反两方向 %,',-/)/' 的水平及阳性家族史的比例高测序测定结果用 )*++* 软件 %% 与于其他种类型冠心病组而 0)/' 的水平低于其他 -#!A6!=A/))AD 数据库中保存的 &'% 基种类型冠心病组差异有统计学意义 $ 心因序列进行比对根据测序结果与基因库中公布的肌梗死组和缺血性心肌病组的 &'%,',- 基因序列的差异确定突变位点 /)/' 水平及阳性家族史的比例高于心绞痛及无症统计学处理采用 & 软件进行统计学状心肌缺血组 0)/' 水平低于心绞痛及无症状心分析计量资料以 > 表示组间比较采用方差分肌缺血组差异有统计学意义 $ 但心肌梗析两两比较采用 *. 检验计数资料以频数和百分死组和缺血性心肌病组之间各指标差异无统计学意比表示组间比较采用检验采用多因素回义 $ 心绞痛组 &'%,',-/)/' 的归分析 &'% 基因突变和不同类型冠心病之间水平及阳性家族史的比例高于无症状心肌缺血组的关系以 $ 为差异有统计学意义 0)/' 的水平低于无症状心肌缺血组差异有统计结果学意义 $ 饮酒史及吸烟史各组间差异无统计学意义 $ 表 0 两组血清血脂水平和 &' 浓度的比较病表不同类型冠心病组和对照组血脂水平及 &' 浓度的比较,6/##:#;":6!&'%!#;#! ;!6;#6;#6#6!!;:;" 例数 &'% >!/,',- 0)/' /)/' >:/ >:/ >:/ >:/ 冠心病家族史 1 吸烟 1 饮酒 1 病例组 $ >% > $> > >% % 心绞痛组 %> > $%> >$ %> % $% 心肌梗死组 $ >% $> >$ > > %$ % 无症状心肌缺血组 >$ $> $> %> > $% %% %%% 缺血性心肌病组 >$ $> > $> >% % $% 猝死组 $>$ $> %> >% %> $ 对照组 > %>$ > > > $$ %% $$ % % $ %$ 与对照组比较 $ 与猝死组比较 $ 与心肌梗死组和缺血性心肌病组比较 $ 与无症状心肌缺血组比较 $ 表中 &'%,',-/)/' 的统计值为值冠心病家族史吸烟及饮酒率的统计值为值 0&' 基因第外显子位点多态性直共有种基因型,, 突变纯合子 -, 突变杂合接测序结果 &'( 产物纯化后双向测序结果显示子 -- 野生型图 &'% 基因位点存在两种等位基因 - 和, 图 &' 基因位点多态性基因的表达情况 ;#!:":;&'%#!#

4 $$ 西安交通大学学报医学版第卷 0&' 基因位点多态性基因型和等位基因频率的分布病例组中,,-, 的基因型频率高于对照组病例组中, 等位基因的频率高于对照组病例组中猝死组,, -, 的基因型和, 等位基因的频率高于其他种类型冠心病组 $ 心肌梗死组和缺血性心肌病组的,,-, 的基因型和, 等位基因的频率高于心绞痛及无症状心肌缺血组 $ 但心肌梗死组和缺血性心肌病组之间差异无统计学意义 $ 心绞痛组,,-, 的基因型和, 等位基因的频率高于无症状心肌缺血组 $ 表表不同类型冠心病组和对照组 &' 基因位点多态性基因型和等位基因频率分布比较,6-#!#6!6:#:#:":;&'%#!#!#;#! ;!6;#6;#6#6!!;:;" 例数基因型 ,,, 等位基因 1 -, 病例组 $ %% $% 心绞痛 %%$ $ $% % 心肌梗死 $ $ %% $ $$% 无症状心肌缺血 $ $ % % 缺血性心肌病 $% % $ $ 猝死 $ % $ % 对照组 % 病例组对照组 % $% 与对照组比较 $ 与猝死组比较 $ 与心肌梗死组和缺血性心肌病组比较 $ 与无症状心肌缺血组比较 $ 01 多因素回归分析结果以冠心病无 < 有 < 为因变量以性别男 < 女 < 年龄 <$<$<< <,',-/)/'0)/'&'%&'% 基因基因型 --<-,<,,< 为自变量进行回归分析结果显示基因型尤其是,, 基因型与冠心病严重程度关系密切是冠心病严重程度的独立危险因素值为 %$1 为 $$$ 表表 1 冠心病危险因素多因素回归分析结果,6(#":;#;#!6!6:;=6; ; ;!6;#6;#6# 变量! "#$% %& %$1 性别 $ $ % $% 年龄 % % %%,',- % % % $%$ /)/' % 0)/' % $ $ % $ %$% &'% $ % $ -* -* %$ % -* % $ $$$ 讨论本研究发现病例组阳性家族史的比例明显高于对照组证实遗传因素是引发冠心病的重要原因同时病例组中,',-/)/' 的水平明显高于对照组 0)/' 明显低于对照组说明血脂水平的异常对冠心病的发生发展有促进作用将病例组按不同类型分组后发现猝死组的阳性家族史比例以及,',-/)/' 的水平明显高于其余组 0)/' 明显低于其余组急性心梗组和缺血性心肌病组的阳性家族史比例和,',-/)/' 的水平明显升高 0)/' 明显降低上述血脂指标按病情轻重程度呈现有规律性的变化说明遗传因素是冠心病发生发展的重要因素已有研究证实冠心病患者血浆 &'% 的水平. 升高本研究冠心病组 &'% 的水平高于对照组与报道相符将病例组按不同类型分组后发现 &'% 水平在猝死组心肌梗死组缺血性心肌病组心绞痛组无症状心肌缺血组依次降低认为 &'% 的水平可以作为评估冠心病类型的一项新指标 &'% 基因位于全长个碱基编码个外显子位点位于 &'% 基因的第外显子位于 &'% 蛋白催化域的编码区该位点发生突变对 &'% 的催化功能有直接影响我们前期研究发现高胆固醇血症患者 &'% 基因的突变证实该突变是引起高胆固醇血 $ 症的原因之一由于高胆固醇血症是冠心病的重要危险因素而该位点与冠心病发病之间是否有关尚未见报道本研究结果显示病例组中,,-, 的基因型频率均明显高于对照组, 等位基因的频率也高

5 期张明明刘欣高伟等冠心病患者外周血人枯草溶菌素转化酶 % 基因位点的多态性及其临床意义 $$ 于对照组将病例组按不同类型分组后发现猝死组,,-, 的基因型频率和, 等位基因频率最高其次为心肌梗死组和缺血性心肌病组心绞痛组结果表明 &'% 基因突变可能与冠心病的病情有关为判断 &'% 基因突变在冠心病中的意义进一步行多因素 / 回归分析结果显示,, 基因型与冠心病的发生发展关系密切是冠心病的独立危险因素从以上研究结果我们认为血清 &'% 水平与冠心病的不同分型有关检测冠心病患者的 &'% 水平可能有益于冠心病类型的诊断同时我们发现不同类型冠心病患者血脂水平有与 &'% 类似的变化趋势推测这些指标间可能存在相互调控作用但尚需深入的研究予以证实对 &'% 基因位点突变检测的结果证实该位点突变与冠心病有关我们认为对冠心病患者进行本位点的突变检测可以协助诊断及病情评价推测 &'% 基因位点突变可能是导致冠心病的因素之一对体检者进行该突变检测可能发现冠心病的高危人群从而可以采取措施进行预防总之本研究提示 &'% 基因突变与冠心病的发生发展密切相关是引发冠心病的重要危险因素之一检测该基因突变可能对预测冠心病风险及病情分析有益但具体机制还有待大规模多中心研究予以证实参考文献 56'56711%(&6#-+ -#-" # "))& )3($$$& 586'!68&" )8(6 "# "" )&$$$& )61,56' )&7- "- "+# "# ")&)" $$%& 57')57' &)-"# ""# "6 -"##"!)& /$ & $ 宋光耀张明明孙海娟等 & 高胆固醇血症患者枯草溶菌素转化酶 % 基因突变研究 & 中国动脉硬化杂志 $& 3!)3'1,6'$&3 ()$*%+# " "# )&6(#!"%& &/-+# 3()$*%"# "6 &)3!"$ $$& $1!6'66//6 8/6931$&3#3 ()$*%" # ""###&! '#$$$& % 葛均波徐永健 & 内科学!& 第版北京人民卫生出版社 &,6'$)3' '&) ()$*%).+ # &3 /!" (#$# $%& '75367/$6/6!&) # #-% +# "&6 )" $%& 编辑邱芬西安交通大学学报医学版医苑雅兴栏目征稿启事为了更好地服务于医苑的朋友们增进彼此的交流展示广大医学科技工作者的精神风貌人文修养和艺术才华同时丰富活泼学报的版面减少转页带来的阅读不便本刊拟增设医苑雅兴栏目特向各位约稿栏目内容及体裁书法绘画诗歌辞赋等投稿信箱 "#66:"#"! 投稿地址西安市雁塔西路号西安交通大学学报医学版编辑部邮编特别事项书法绘画作品需同时提供原稿和电子版并注明医苑雅兴栏目注明作者的相关信息如单位学科职务职称等垂询电话 %$$ %$$

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