现代泌尿外科杂志 %# 年 2 月第 % 卷第 2 期调节 8 细胞增殖与活化 降低机体抗肿瘤免疫反应 2 从而增加肿瘤的易感性 研究发现 /84( 2 单核苷酸多态性 * ** 9* 可从不同表达环节影响 /84( 2 基因的表达 与肝癌 胃癌 乳腺癌等肿瘤的遗传易感性存在密切 联系 同时也有极少

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1 % ) - %2( %# 临床研究 / 基因多态性与膀胱癌的易感性研究刘贵喜 # 李家兵 #% # 西南医科大学临床医学院 四川泸州 2 % 绵阳市第三人民医院 四川绵阳 %# / #- - ;. # # 4'- # 4' % # /) /,! *) - 1 * 4 2 % ) )%#/ %&' ( %! % #! 0 % 2 -( 2-(. # #.% #!!!!' %2#!! %!! /#!! #!!! #', 2!! # 0!!% %!% '( % -( 2-(. # #.!!!!!!%%! -'(! -(. # #.!#!!%% %!%! ' (! 1# -(. # #.% %! ' ' %! %! -(... #!!&!! #'% E'#5'(!!!! % %!% %%!! ' '* # #..-A-- #!!&!! #' E'#2'(.#%!!&!!!E'5'( % %%!!' ' -( 2# #.% #!! %/#!! #!...!!% % '!!! -( 2-(.#!!' '(& -( 2 % #!!!#! % # 摘要 目的 探讨细胞毒性 8 淋巴细胞相关抗原 2/84( 2/8 ( # #( 位点单核苷酸多态性 9* 与膀胱癌遗传易感性及临床特征关系 方法 收集四川东北部地区汉族人群病例组 %2# 例 对照组 % 例 采集研究对象外周静脉血 2 4 行全血 + ( 提取 目的基因片段扩增 通过聚合酶链反应 限制性片段长度多态性 9/349 技术对 /84( 2/8 ( # #( 多态位点进行基因型分析 明确两组中 /8 ( # #( 多态位点基因型及等位基因分布情况 并采用统计学方法探讨 /8 ( # #( 多态位点与膀胱癌易感性及临床分期 分级 转移之间关系 结果 /8 ( # #( 位点基因型频率分布差异有统计学意义 ' & & 回归分析显示 对于 /8 ( 使膀胱癌患病风险增加 # % 倍 E #5 不同基因模型与膀胱癌临床分级 分期 转移之间无相关性 对于 # #( ( A 使膀胱癌患病风险增加 # 倍 E #2 等位基因较 ( 等位基因显著增加膀胱癌发病风险 E 5 显性模型分别与膀胱癌分期和转移有统计学意义 结论 /84( 2 # #( 多态位点与四川东北部地区汉族人群膀胱癌遗传易感性相关 ( 基因型可能与膀胱癌的分期 转移相关 尚未发现 /84( 2/8 ( 多态位点与膀胱癌遗传易感性相关 关键词 细胞毒性 8 淋巴细胞相关抗原 2/84( 2 单核苷酸多态性 膀胱癌 肿瘤 遗传易感性 中图分类号 5 5 文献标志码 ( ( )# ** #% # %# 2 膀胱癌./ 是常见的泌尿系统恶性肿瘤之一 具有高复发率 死亡率 近年来世界范围内确诊病例数提高了 # 倍 死亡率上升了 # 倍 # 在我国膀胱癌发病率逐年增加 % 环境因素和 收稿日期 %#5 ## % 修回日期 %# # 通信作者 李家兵 主任医师 6# %# 2 作者简介 刘贵喜 # 男 汉族 硕士 医师 研究方向 膀胱肿瘤侵袭 转移机制 6 %%#5 25 遗传因素等多种因素参与了膀胱癌的发生和发展 研究发现 8 细胞的功能与机体抗肿瘤免疫联系密切 而细胞毒性 8 淋巴细胞相关抗原 28 **2/84( 2 主要在人 类活化的 8 细胞表面发挥生物学作用 /84( 2 基因位于染色体 % 上 表达产物为白细胞表面抗原 /+# % 其与 /+% 竞争结合配体.5 #.5 % 负向!

2 现代泌尿外科杂志 %# 年 2 月第 % 卷第 2 期调节 8 细胞增殖与活化 降低机体抗肿瘤免疫反应 2 从而增加肿瘤的易感性 研究发现 /84( 2 单核苷酸多态性 * ** 9* 可从不同表达环节影响 /84( 2 基因的表达 与肝癌 胃癌 乳腺癌等肿瘤的遗传易感性存在密切 联系 同时也有极少数国外研究显示与膀胱癌存在 相关性 关于 /84( 2 基因多态性与四川东北部地区汉族人群膀胱癌的相关研究尚未见报道 本研究旨在分析 /84( 2 /8 ( # #( 基因多态位点在膀胱癌的分布 探讨 /84( 2 基因多态性与膀胱癌之间的关联强度 * 对象与方法 * * 研究对象 采集 %# 年 月至 %#5 年 月绵阳市第三人民医院 四川省人民医院 川北医学院附属医院等医院收治入院且病理确诊的初发膀胱癌患者 %2# 例 排除有血液性或其它自身免疫性疾病和肿瘤疾病病史患者 随机选取 % 例同期各医院健康体检者为对照组 均无肉眼血尿 镜下血尿 排除恶性肿瘤 血液或其他自身免疫性疾病史患者 两组研究对象均属于长期居住在四川东北部地区的汉族人群 在民族 性别 年龄 居住地相匹配 本研究获西南医科大学伦理委员会批准 临床资料及标本采集均获所有研究对象均知情同意 两组基线资料比较 两组间性别 年龄分布无统计学差异 吸烟 饮酒分布有统计学差异 # 表 # 表 % 表 * 病例组和对照组的一般情况比较 例 B 或变量病例组对照组 % 年龄 岁 ## %# 2 #22 性别 5 男 # 52 % 5% 女 #%# # #%5 # 吸烟情况 5 2 # 有 #2 %2 2 无 2% %2 5 2 饮酒情况 2 5 % 有 ## 无 #2 #5 %% % * 性别 吸烟情况 饮酒情况采用卡方检验 * + 研究方法 * + * 外周血 + ( 提取 采集每位研究对象约 2 4 空腹静脉血到放入含有乙二胺四乙酸 % 6+8( 的抗凝管中 采集血液后立即上下轻轻颠倒抗凝管 次以摇匀 用全血基因组小量抽提试剂盒 北京百泰克生物技术有限公司 提取全血 + ( 操作步骤按照试剂盒说明书进行 分类标记置于 = 冰箱冻存备用 表 + 病例组膀胱癌分期分级及转移情况 例 B 变量病例组肿瘤分期 )'./ %5 )'./ #2 5 肿瘤分级 低级别 # 5# 高级别 2 2 转移情况 有 %% % 无 # 55 # 注 低级别组 由尿路上皮乳头状癌低级别和低度恶性潜能尿路上皮乳头状瘤组成 )'./ 非肌层浸润性膀肌癌 8 8)'./ 肌层浸润性膀肌癌 8% 82 * + + 检测提取 + ( 的浓度与纯度 采用微量紫外分光光度计进行 + ( 的浓度和纯度的鉴定 读取并记录 + ( 在 % 和 % 波长处的吸光与 ( 提取的 + ( 在 % 和 % 波长处吸光的比于 # 5% # 之间 纯度合格 * +, 聚合酶链反应 根据美国国立生物技术信息中心 /,. ', /.' 的 9 数据库 /84( 2/8 ( # #( 位点的序列 分别为 * 5%2 *2 并采用 9 结合相关文献设计引物 9/ 引物序列由上海生工生物有限公司合成 引物序列为 /8 ( 正向为 H 8 8/ 888 8// ( 88 8/ H 反向为 H88 //((/(88 8 8H # #( 正向为 H /8( ( ( /( 8// /8 8 / (// 8 H 反向为 H ( 8 /(/( (( //888 8 H 扩增反应总体系为 # 4 反应条件为 2 预变性 然后进行 个循环 2 变性 * 以 退火 *5% 延伸 # 最后 5% 延伸 扩增的 + ( 片段长度分别为 2 和 2 产物通过 #% % B 琼脂糖凝胶下进行电泳 以 + ( 分子量标准 + ( ) 为参照观察 判断扩增产物分子量 有无特异性扩增 * + 限制性片段长度多态性聚合酶链反应 * *,!

3 [( ), N:(, ', 65O ZA(/E' ( )% S6 %( ' B%!WJ JQRW法 检 测 VR@ P VK6;@% #! 5KK5@;位点的 基 因 型! 扩 增 产 物 分 别 采 用 限 制 性 B, D! 统计学方法! 采用 UWUU, 6 统计学软件进行 数据分析%用! 检验进 行 H= '/+?. 1]. '* 遗 传平 衡 内 切 酶 H#+HP 9[ VK6;@ &*内 切 酶 AB. ) 5KK5@;&进行酶切%水浴!%取 酶 切 产 物 M+R 上 检验%各组之间的基因型差 异 以! 检 验 进 行 比 较%以 样%并以 C:@ A= '4. ' 作 为 标 准 参 照%于 f 琼 脂 糖 56[ 恒压% P6% 1 电 泳 分 离%紫 外 光 凝 胶 成 像 系 统 观察 C:@ 条带' B, C, N!WJ JQRW 产物测序验证! 从标本库中分别随 机选取 VR@ PVK 6;@* 5 K K 5@; 两个位点 N 种不 同的 WJ JQRW 分型结果的标本各 6 例%将 WJ 产物 标注好相应信息后送上海生工公司进行 C:@ 测序确 非条件6 :;8, # 8 =回归分析统计不同遗传模型与膀胱 癌易感性及临床特征的关系%结果以比比 (//B' = % & 和 可信区间 % & 表 ( *& LMf 0(1 D / ' I= )'( 示%均以 )%6, 6M 为差异有统计学意义' C! 结! 果 CI B! 基 因 检 测 结 果 及 X:! 9ZJX 酶 切 电 泳 图 片! 图 5 图 P' 认% 其测序结果与 WJ JQRW 分型结果一致' 图 B!:!J6 M:!POU+6 多态位点 X:! 9ZJX 酶切电泳图 5* * P* K! ;; 型 PP]#e5M6]#&# 型 NLP]# 型 NLP]#&' epp]#e5m6]#&# 图 C!:!J6 M BPPB6+U 多态位点 X:! 9ZJX 酶切电泳图 5* * N* P* S* L!@@ 型 NPS]#e5NL]#&# M* K!@; 型 POK]#eNPS]#e5NL]#&# O! ;; 型 POK]#&' 图 D!:!J6 M:!POU+6 的 D VK6;@ ;; 基因型# F! 基因型#! 基因型' 图 M!:!J6 M BPPB6+U 的 D 基因型# F! 5KK5@; ;; 基因型#! 基因型' C, C! 遗 传 平 衡 检 验! 对 照 组 采 用 拟 合 度! 检 验 行 H= '/+?. 1]. '* 遗传平衡检验% )6, 6M%对 照 组 人 因频率在两组的分布差异有统计学意义 NK6%! is, )i6, 66S%表 N&' 群符合 H= '/+?. 1]. '* 遗 传 平 衡%具 有 人 群 代 表 性' CI M!:!POU+6% BPPB6+U 基 因 模 型 下! # % & '回归 分析!VK6;@ 基 因 位 点!在对 照组与 病例 组 中 进 CI D!:!J6 M :!POU+6% BPPB6+U 基 因 型 分 布! VK6;@ 位点基 因 型 频 率 在 两 组 的 分 布 差 异 有 统 行不同 基 因 模 型 下 的6 :; 8, # 8 = 回 归 分 析 结 果 显 示 表 计学意义 SP% )i6, 65N&%等 位 基 因 频 率 在 两! io, 组的分布差异无统计学意义 gson%) i! i 6 g6lm&' 5KK5@; 位 点 基 因 型 频 率 在 两 组 的 分 布 差异有统计学 意 义 KOL% ) i6, 65&%等 位 基! is, P&!通过合并杂合子与突变型纯合子%组成显性基因模 型% VK6;@ ;; 可使 膀胱癌 的患病风 险增加 5 gnl 倍% *& LMf'(&为 NL 6NL% PSO&% )i6, 65S%校 正混杂因素 如 性 别*年 龄*饮 酒 以 及 吸 烟 等&后 *& LMf'(&为 OL 6KM% MML&% )i6 g66l'! ' ( ) (*+, &,./&, 01#2 0&*, (# #! %& *%134,

4 现代泌尿外科杂志 %# 年 2 月第 % 卷第 2 期 %5# # #( 基因位点 在对照组与病例组中进行不同基因模型下的 & & 回归分析结果显示 表 # #( ( A 可使膀胱癌的患病风险增加 # 2 倍 B# 2 # % # E 与膀胱癌临床分级 分期 转移之间无相关性 均无统计学意义 表 表, 病例组与对照组等位基因频率及基因型分布的比较 例 B C#2 校正混杂因素 如性别 年龄 饮酒以及吸烟等 基因型 病例组 对照组 % 因素 后 B 为 # # # %% 252E /8 ( 52 # 等位基因模型中 等位基因与 ( 等位基因 # 5% # 2 # 相比可显著增加膀胱癌的发病风险 B 为 ( #%# #% # # # ## % %5E 5 (( # #% +1 2 /*22* 基因多态性与膀胱癌临 等位基因 % 5 床特征的关系 按照膀胱癌的分级 分期 转移情况 # 55 # 进行分组 采用非条件 ' & & 回归分析 通过校正 ( 5# #22%% 吸烟 饮酒 性别 年龄等因素 在 /8 ( 基因位 # #( 5 %# 点病例组中 各个基因模型与膀胱癌临床分级 分期 (( #2 2 %% 转移之间无相关性 均无统计学意义 在 # # ( % ( 基因位点病例组中显性模型 ( 基因型分 #%2 5% #2 别与膀胱癌分期 转移相关 B 分别为 等位基因 5 5 #2 % 2 E % 2# C%#% ( 5%55 # 2 #% E # 具有统计学意义 其余各基因模型 ##%% % #5# 2# 表 2 病例组与对照组不同基因模型下的 回归分析 基因模型 基因型 病例组!B 对照组!B B 校正 B 共显性模型 # 5% # 2 # # # (( #%# #% # # 25 # 2 5 # ( # #% # % % 5 # 5 # 52 2 #5 # 显性模型 ( A(( 52 5# # %2 2 # # # 5% # 2 # # % # # 25 #5 # % # # 隐性模型 (( # #% # # A( %% 2 # #2 % 5 # 2 % 2 2 # # 5 等位基因模型 # 55 # # # ( 5# #22%% # % 5 # 5 % 为校正混杂因素 性别 年龄 吸烟 饮酒 后的基因模型下的 ' & & 回归分析 表 /*22* 病例组与对照组不同基因模型下的 回归分析 基因模型 基因型 病例组!B 对照组!B B 校正 B 共显性模型 #%2 5% # # # (( #2 2 %% % #2% 2# % ## # ( % % # 2 %# # # # 25 %# 显性模型 (( #2 2 %% # # ( A 2 # 2 # 2 # % # #2 # # # %% 252 隐性模型 ((A( %% 2 # 5 # # #%2 5% # # 2 %% 2 % 5% # %# 5 %5 # 等位基因模型 ( 5%55 # 2 # # ##%% % #5# 2# # # ## % %5 5 为校正混杂因素 性别 年龄 吸烟 饮酒 后的基因模型下的 ' & & 回归分析!

5 % 5% ) - %2( %# 表 2 分层分析 /*22* 基因多态性与膀胱癌的相关性 基因模型 基因型 低级别组 高级别组 B )'./)'./ B 无转移 转移 B 共显性模型 # # # (( %2%% 2 5# #% 52%##5 ## # % ## ( 2# # % %% 2 # 2 2# 22 # # 5 % 显性模型 (( # # # ( A 2 2 # 2 #2 % 2 % 2# %#% #% # 隐性模型 ((A( # # # # # 2 % # # %52# % % # 2 # 22% 2 )'./ 非肌层浸润性膀肌癌 8 8)'./ 肌层浸润性膀肌癌 8% 82 低级别组由尿路上皮乳头状癌低级别和低度恶性潜能尿路上皮乳头状瘤组成, 讨 论 膀胱癌发生发展与环境因素和遗传因素密切相关 其中 肿瘤微环境中的免疫系统针对宿主对肿瘤细胞的免疫效应产生抑制 肿瘤细胞控制的抑制机制和宿主控制的免疫机制平衡被打破 从而导致癌症的发生或发展 肿瘤细胞通过调节多种肿瘤相关因子 5 而实现抗肿瘤免疫效应 如调节 8 细胞活性 研究表明通过 8 细胞表面 /84( 2 异常聚集将导致 8 细胞抗肿瘤功能减低 其主要通过阻碍 )0/ 与 8 细胞受体结合过程发挥作用 /84( 2 分泌白细胞介素 # #'4 # 转化生长因子 *,!, 8 3 两种细胞因子 可分别通过降低 /+ A 细胞毒性 8 细胞和 /+2 A 8 细胞生物学功能 直接抑制抗肿瘤免疫反 应 /84( 2 通过介导不依赖 3 * 途径的 8 细胞.5 /84(2 的作用 抑制 8 细胞活化 完成诱导了 #% 8 细胞无能过程 研究发现 /8 ( 位点 等位基因与可溶性 /84( 2*/84( 2 联系密切 通过决定剪接作用效率和 */84( 2 ( 产量 调控 */84( 2 相对于全长 /84( 2 的量 基因型个体较 (( 基因型个体 */84( 2 产量明显减少 本研究通过对 /8 ( 不同基因模型下的 ' & & 回归分析显示 可使膀胱癌的患病风险增加 # % 倍 B 为 # % # #C25 在等位基因模型中 E 无统计学意 义 这与 (' (4 等的实验结果存在差异 这可能与实验对象的种族 数量 环境等有关 未来需进一步多中心 大样本的研究进行验证 /84( 2 基因 # #( 病例组携带 等位基因较 ( 等位基因显著增加膀胱癌的发病风险 B 为 #C #C## % %5 显性模型中 ( A 可使膀胱癌 凋亡 抑制 8 细胞分化 降低白细胞介素 % %'4 % 转录等方式抑制 8 细胞增殖 细胞因子 # 的产生及相关免疫反应 同时 /84( 2 可调节 8 细胞活化周期停滞于 # 或 期 不向 期进展 对 8 细胞活化周期的抑制直接导致 8 细胞活化功能显 ## 著降低 导致机体最终发生肿瘤或免疫性疾病 /84( 2 负性调节 8 细胞功能与肿瘤关系密切 目前诸多研究显示 /84( 2 基因存在多个基因多态性位点 包括 /84( 2A2 ( # #( /8 (# 8/ 等多态性位点 其中 /84( 2 /8 ( # #( 与多种肿瘤易感性相关 /8 4( 2/8 ( 位于 /84( 2 基因 H-8 其基因多态性导致 /84( 2 蛋白表达过程中 ( 表达水平的差异 通常认为 */84( 2 发挥抑制作用需通过与膜表面蛋白结合的形式与.5 /84(2 竞争性结合配体实现 */84( 2 的水平降低 相对加强了 的患病风险增加 # 倍 B 为 #C #C# %%C252/84( 2 # #( 位于 /84( 2 基因启动子区 其等位基因的变异可能改变功能性 + ( 结合位点的碱基序列 从而影响相关转录因子的亲和力 这对转录和选择性剪接的调节非常重 # #2 要 '( 等认为 # #( 位点通过改变有关 /84( 2 转录结合位点上具有转录功能的结构区域 导致 /84( 2 的表达异常 从而导致肿瘤的产生 我们的结果提示 # # ( 位点与四川东北部地区汉族人群的膀胱癌易感性相关 /84( 2 /8 ( 位点中 显性模型下 基因型增加罹患膀胱癌的风险 在 # # ( 位点的显性模型下 ( 基因型与膀胱癌的临床分期 转移相关 均 表明单核苷酸基因多态性不仅与肿瘤的遗传易感性相关 同时也可能与肿瘤的临床特征 分!

6 现代泌尿外科杂志 %# 年 2 月第 % 卷第 2 期 %5 期 分级 转移 相关 这一特点未来可能成为肿瘤的发生 发展甚至预后的关键标志指标 同时 也进一步证明了膀胱癌的发生 发展与基因遗传因素密切相关 本研究仍存在一定的局限性 所采集的研究对象均来自长期居住在四川东北部地区的汉族人群 缺乏单核苷酸基因多态性与膀胱癌关系的具体作用机制 且国内外研究中关于 /84( 2 单核苷酸基因多态性与膀胱癌关系的具体作用机制不明确 故在遗传因素与疾病的关系中 是否存在相互改变或先因后果的联系 仍有待进一步验证 未来需要更大样本量 多种族 多中心的临床研究来进行验证 同时改进实验方法 更深入的探索遗传因素与膀胱癌的具体作用机制 人类在诸多疾病与遗传因素的研究中仍然任重而道远 参考文献 # + : 6 43: :-?( 3( )0, *# %# 6-%#55# % 韩苏军 田张思维 陈万青 等 中国膀胱癌发病现状及流行趋势分析 癌症进展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编辑 王 玮 现代泌尿外科杂志 投稿方式 经常有作者反映 可以在百度 好搜等搜索引擎看到某些机构 网站及个人 自称代理稿件在 现代泌尿外科杂志 发表事宜 我们在此重申 现代泌尿外科杂志 编辑部从未也不会委托任何个人或机构接受投稿 在本网站注册帐户后投稿是 现代泌尿外科杂志 唯一收稿途径 免收审稿费 并提醒您警惕上当受骗 现代泌尿外科杂志投稿唯一途径 现代泌尿外科杂志 官网 域名为 关于投稿事宜 欢迎您致电编辑部垂询 %% 5 2 现代泌尿外科杂志 编辑部!

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