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1 复旦学报 医学版 03 基因 05%$ 多态性与长江以南汉族人群系统红斑狼疮 +) 的关联性 陈水连 刘佳婧 江 峰 孟 炜 复旦大学公共卫生学院流行病学教研室 & 教育部公共卫生安全重点实验室 上海 摘要 目的 探讨 1&#4& 基因 ( 多态性与中国长江以南汉族人群系统性红斑狼疮 #'! #$'# 1% 易感性之间的关系 方法 采用病例对照研究设计 收集病例对照各 例 应用聚合酶链反应 & 限制性片段长度多态性 3&13 技术对 1& 基因 位点进行基因分型 在不同的遗传模式下分析 位点基因多态性与 1% 的相关性 用 检验分析 ( 多态性与 1% 临床表型间的相关性 结果 1& 基因 位点 ( 等位基因在两组人群中的分布差异有统计学意义 -7 5 在相加和隐性模型下也发现 ( 多态性与 1% 有关 相加 -7 5 隐性 -7 5 且调整年龄 性别等因素后 在两种模型下的相关性仍然存在 相加 -7 5 隐性 -7 5 此外 本研究显示补体 降低患者 ( 等位基因的频率上升 -7 5 但经 校正后差异不具有统计学意义 结论 在中国长江以南汉族人群中 1& 基因 ( 多态性可能与 1% 易感性有关 且 ( 等位基因对 1% 可能有危险性效应 关键词 系统性红斑狼疮 1%1& 单核苷酸多态性 3 中图分类号 文献标志码 () & %#!( %$ # #!!!+)$!#!,%$&15&)5(% 6!#$%&'$% %#( % &' #' #$ # #2 #4& 1&!'!$'#$4 #'! #$'# 1%'$,!!# #$#$*#1%!## $#$ 2 ##!#$!'!$'(#$'#$##'##$!'!$' 13$#$!1&(!'!$' 2#$1%2 ##'#$$&##2 #0!#$ ##21& (!'!$' #!## $( 2 #$$1%!## -7(1# ' #$ 2 # # #2 1%!## 1&(!#$%&'2' $'

2 陈水连 等 1& 基因 ( 多态性与长江以南汉族人群系统红斑狼疮 1% 的关联性!'!$' #'-7 5 '- 7 5#)##4#$ # # 0##'-7 5 '-7 5 5##$ ###$#!## 2#$2'!'#$ $$( -7 5# 2 # ### ### $#! $1& (!'!$' #2#$1%!##$,!!##$#$ *#('4#1% #'! #$'# 1% #4& #!'!$' 3 系统性红斑狼疮 #'! #$'# 1% 是一种以 细胞高度增生活化 产生大量抗核抗体为特征 并累及多脏器的自身免疫性疾病 1% 多累及育龄期妇女 其患病率在全世界不同地 区各不相同 在亚洲地区的患病率较高 我国的患病率约为 万人 1% 的致病机制至今尚未清楚 目前的研究认为 遗传和环境因素共同参与了 1% 的发生发展过程 且家系研究表明遗传因素是 1% 的一个重要病因 白细胞介素 & #4&51& 是一种 重要的前炎症细胞因子 属白介素 & 家族 51& 与 51& 功能相似 协同作用于 $ 细胞 诱导其产生大量细胞因子 例如 5&51& 等 刺激 细胞增殖 在 51& 缺乏的情况下 也可刺激 $ 型细胞 免疫反应 在小鼠 1&! 模型中 51& 大量表达于肾小管上皮细胞及单核细胞 且活动性 51& 表达上调与狼疮性肾炎的严重性有关 在 1% 患者的血清中也发现其 51& 的水平高于健康 人群 51& 在炎症和免疫反应中的多种功能 提示其在 1% 中起重要作用 1& 基因单核苷酸多态性 #!'!$'3 已被报道与哮喘 风湿性关节 & 炎 过敏性鼻炎等炎症性疾病有关 1& 启动 子区域 & 及 & 位点发现与 1% 有关 启动子区域的多态性可能是通过影响转录水平从而导 致疾病的发生 1 等和 6$ 等分别在中国台湾和波兰报道了 1& 位点多态性与 1% 的关系 但研究的结果并不一致 1 等发现在中国台湾人群中 1% 患者 1& 位点 ( 等位基因的频率高于正常对照 并且与神经系统损 害有关 而 6$ 等在波兰人群中未发现 1& 位点 ( 等位基因的分布在两种人群中不同 但显示 (( 基因型与肾脏损害有关 目前国内外尚未报道中国大陆人群 位点多态性与 1% 的关系 故本研究将对中国长江以南汉族人群进行 1& 基因 位点多态性与 1% 相关性的研究 探索其在汉族人群 1% 中的作用 对象和方法 研究对象 为 年 月至 年 月期间在复旦大学附属中山医院 杭州市第三人民医院和苏州大学第一附属医院就诊的门诊或住院 1% 患者 由皮肤科医生核实诊断 诊断标准为美国风湿 病协会 (( 年修订标准 所有病例均是来自于上海 浙江 江苏等长江以南地区的居民 对照是在年龄 性别 种族及籍贯上均与病例呈频数匹配 同时排除类风湿关节炎 银屑病 皮肌炎 糖尿病 硬皮病 白塞氏症 干燥综合征等免疫相关疾病 且与病例无血缘关系的非 1% 人群 本次研究对 象与任江萍等的研究对象来自同一人群 对研究对象进行问卷调查 内容包括一般情况 年龄 性别等 环境暴露情况 冻疮史 居住环境潮湿史 紫外线接触史 激素使用史 结核病史 高血压病史 荨麻疹史 中耳炎史 输血史以及吸烟史等 以及临床资料等 本研究经复旦大学伦理委员会审核批准 全部研究对象知情同意后采集标本 62% 提取及基因分型 采集研究对象的外周静脉血标本 '1 采用 %( 抗凝剂 保存 采用酚氯仿法提取 ( 利用 3&13 对 1& 基因 位点进行基因分型 位点上游引物为 &(((((((&

3 复旦学报 医学版 年 月 (& 下游引物为 &(((((& (&1& 基因 位点的 3 扩增条件 预变性 ' 变性 退火 延伸 ' 循环 次 末次循环后 延伸 '3 产物用 65 进行酶切分型 水浴过夜 酶切产物在 7 琼脂糖凝胶上电泳 通过凝胶成像系统判断结果 (( 基因型仅有! 条条带 ( 基因型有!!! 条条带 基因型有! 及! 条条带 图! 片段在琼脂糖凝胶电泳后条带跑出胶外 故图 中无法观察到 照组 说明所选择的样本具 有较好的代表性 冻疮史 居住环境潮湿史及紫外 线接触史在两组间的分布差异有统计学意义 值 分别为 及 其他环境暴露 因素暂未发现有意义的结果 表 表 0 环境因素在病例和对照间的分布 06!# # %'## # $ *,''# * ##$# *,'#$! * 图 003 基因 05%$ 多态性 -$,- 基因分型结果,0-$,- 0305%$ #!((( *,!# 统计分析 基因型和等位基因频率采用基因直接计数法计算 用 ## 进行,&6 平衡检验 运用 3 软件进行单因素及多因素 1# 回归分析 在不同遗传模式下 包含显 * # * 性 隐性和相加 种模式 分析 1& 基因 位点 -## ' 多态性与 1% 的关系 根据赤池信息准则 (44 '##(5 值最小原则 筛选最优模 (5 极大似然函数 4 其中 4 是指模型中独立参数的个数 * # * '4 结 果 * 一般资料 本研究共纳入病例 例 其中男性 例 女性 例 年龄为 岁 对照 例 其中男性 例 女性 例 年龄为 岁 两组年龄分布差异无统计学意义 分别对病例组和对照组进行,&6 平衡检验 两组的基因型分布均符合,& 6 平衡 病例组 对 基因型和等位基因频率分析 1& 基因 位点等位基因及基因型分布 位点 ((( 和 基因型在 1% 病例组的频率分别为 和 在对照组的频率分别为 和 等位基因 ( 和 在 1% 病例组的频率分别 和 在对照组中的频率分别为 和 位点等位基因在病例组和对照组的差异

4 陈水连 等 1& 基因 ( 多态性与长江以南汉族人群系统红斑狼疮 1% 的关联性 有统计学意义 且 ( 等位基因在病例组中的频率高于对照组 -7 5 不同遗传模式下 位点基因型与 1% 的关系见表 在相加及隐性模型下 ( 多态性与 1% 有关 相加 -7 5 隐性 -7 5 但显性模型下未发现有统计学意义的结果 在调整年龄 性别 冻疮史 潮湿史及紫外线暴露史后 在相加模型及隐性模型下仍有统计学意义 相加 -7 5 隐性 根据 (5 值最小原则 位点的最优模式均为显性模型 表 不同遗传模式下 回归模型参数估计 #!# #! # (5 (# (( ( '# ((( (( ( ()#0$$''###$# 表 03 基因 05%$ 多态性与器官损害的相关性 '## %0305%$ # ( 4' '' ( # #! (( ( # #','# #' $0### 03 基因 05%$ 多态性与 +) 临床表型的相关性 因病例组 基因型只有 例 故将 基因型与 ( 基因型合并进行分析 等位基因及基因型与 1% 器官损害的关系的分析结果见表 未发现 ( 多态性与 1% 器官损害间存在相关性 表 /03 基因 05%$ 多态性与免疫学指标的相关性 (( 50 /%0305%$ #! ( ( (#&( (#& (#&( (#& (#&3 #! (( ( $ 0### -7 5& # ( 多态性与 1% 免疫学指标的相关性分析结果显示 表 以 等位基因为参照 补体 降低患者 ( 等位基因的频率上升 -

5 复旦学报 医学版 年 月 7 5& 但经 校正后显著性消失 而基因型分析未发现 1& 基因 ( 多态性与免疫学指标间存在相关性 讨 论 $$ 型细胞因子失衡在 1% 的诱导和发 展中起重要作用 而 51& 参与了 $$ 介 导的疾病的发病过程 多项证据表明 51& 是 1% 的一个重要病因 近年来 关于 51& 基因多态性与 1% 的关系的研究的位点主要是启动子区域位点 和 位点 及 位点 和 位点能够引起转录结合位点和启动子活性 的改变 位点位于外显子区域 但该位点多态性并不引起氨基酸的改变 但有多项研究显示 位点 ( 等位基因与 位点 等位基因存在 基因连锁现象 位点 & 的变化可使,& 核因子结合位点发生改变 使转录活性降低 而 等位基因可使转录活性升高 引起 1& 表达增加 但是 目前国内外只有一篇文献报道 1&& 多态性与 1% 患者的关节炎症状 有关 其他研究暂未发现 & 位点与 1% 有关 故 位点与 位点连锁还不能全部解释其效应 其机制还需进一步探究 1& 基因 ( 多态性与多种自身免疫性疾病相关 例如类风湿性关节炎 过敏性哮喘 等 本研究发现 1& 基因 ( 多态性与 1% 有关 位点 ( 等位基因在病例组的频率高于对照组 -7 5 并且在相加模型和隐性模型也发现 ( 多态性与 1% 相关 在调整年龄 冻疮史 环境潮湿史 紫外线暴露史等的影响后相关性仍然存在 本研究还发现在补体 降低的 1% 患者中 位点 ( 等位基因频率上升 -7 5 但经 校正后不再具有显著性 目前国内外报道 1& 基因 位点多态性与 1% 关系的文献不多 主要有 1 等 和 6$ 等 的研究 1 等 的研究发现 1& 基因 位点等位基因 ( 在 1% 患者中的频率高于正常人 -7 5& 并且与神经系统损害有关 -7 5 本研究虽未发现 ( 多态性与 1% 患者的神经系统损害有关 但同样发现 位点 ( 等位基因可能是 1% 的一个危险因素 6$ 等 的研究未发现 ( 多态性与 1% 有关 但是发现 (( 基因型与肾脏损害有关 本研究与 6$ 等的研究结果不同可能是由种群异质性与环境因素造成的 6$ 等的研究人群是波兰的欧裔人群 在该人群中 ( 等位基因的频率为 7 而本研究人群中 ( 等位基因的频率为 7 比欧裔人群高 差异 有统计学意义 且本研究样本量大于 6$ 等 的样本量 统计效能更高 故对差异的敏感性更高 总之 本研究初步探讨了 1& 基因 ( 多态性与 1% 的关系 并在不同遗传模式下进行分析 发现在长江以南汉族人群中 1& 基因 ( 多态性与 1% 的易感性有关 其中 ( 等位基因可能是 1% 的遗传易感基因 这也为机制研究提供了新的依据 但还需更多大样本的研究来进一步证实 参 考 文 献 $4# ((#$ %!' #'! #$'# '!22 # #4(1$ 1 ' #! #''# '#!0! (51&(,&!''# #4 2 '' #$ 51& ' (1 *$'# #,' 51& #$$ # 2$ '# 2#$ 51& #'# 51&$#'!$ #4 ' # #!#$ & #4&!& # 2#$## 1&!' 2#$#''!!$# #& # 6,*1%%#!# #4& # 2#$!## 2#$ #'! #$'# ( $, 1 $3'!$' #$ 51 # 2#$! ### '' $#( 1

6 陈水连 等 1& 基因 ( 多态性与长江以南汉族人群系统红斑狼疮 1% 的关联性 324(2 4 5#4&!'#!'!$'!## 2#$ $'# #$### $,' 1,34 1 ( # #4 51!'!$' 2#$!5% # '# ' #$'#!##,42#$! 6! ( #51&!'!$' &2#$ #$# '## 1%'#2#$5 ''!'!$' ( ( / ' 3 5#4&!'#!'!$' $!## 2#$ #'! #$'# # 2#$ #!#!#&%!% 1*61$(!'!$'#$ #4& ' 2 #'! #$'#!### 6$16451&(!'!$' ## # '##!## 2#$1%1 %$ ( $ # #$ # #'! #$'# # 任江萍 彭春林 陈水连 等 甲基! 结合蛋白 3 基因多态性与长江以南汉族人群系统性红斑狼疮 1% 的相关性 复旦学报 医学版 (4$$4$',4 *$$!!$ $! #'! #$'# # 6, * 1 % %#!''##4 51&51&51& $ #451&##!## 2#$ #'! #$'# # 6, *1%%#!# #4& # 2#$!## 2#$ #'! #$'# ( $, 1 $%3'& -#&# 5##2!###51 ##$$ # # #'! #$'#!5 6$1-4 5#4&!'#!'!$'!## 2#$ #'! #$'# ($, ('#,, 51&!'!$' # 51&!#!# '# ) )##( #,, 6/ '## #$$'51&!'#!!'!$' 0! # 收稿日期 编辑 张秀峰 上接第 3 页 1/,$!# #! '(# ' $''!!## 2#$$!#' (#(2 6/,16 *,3(3 $''! # '##!! $'$!#'2 6 +( #! #! '###!!,3(3 2#$#' '##! $!# '(# *3461(( ##2 #$2#$#!'!$' $!# '!## * / ( *3( (!'!$'!# #'!## ## 2#$ %&5 # ' # 2#$ % # (!'!$'$ (!44$ #!##'## #$0! 4'!#! ' 5 收稿日期 编辑 段佳

任江萍 等 甲基 结合蛋白 * 基因多态性与长江以南汉族人群系统性红斑狼疮 2$ 的相关性 "#!# ' &# "%""+!& "'!"# ' & #& *,%,2*& "# 1# ' & "+"# ' & #& 2$' 5 + "!" & # #"# "&& & / "# '"' +)+ &"")

任江萍 等 甲基 结合蛋白 * 基因多态性与长江以南汉族人群系统性红斑狼疮 2$ 的相关性 #!# ' &# %+!& '!# ' & #& *,%,2*& # 1# ' & +# ' & #& 2$' 5 + ! & # ## && & / # '' +)+ &) 复旦学报 医学版 甲基 结合蛋白 0 基因多态性与长江以南汉族人群系统性红斑狼疮. 的相关性 任江萍 彭春林 陈水连 付朝伟 江 峰 李玉华 孟炜 复旦大学公共卫生学院流行病学教研室 % 教育部公共卫生安全重点实验室 上海 摘要 目的 探讨甲基 结合蛋白 & "# '% %/! "* 基因单核苷酸多态性与中国长江以南汉族人群系统性红斑狼疮 " & ' "# &" 2$ 的易感性 方法 采用病例对照研究设计

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