王立杰 张文雯 钱燕飞 等 新疆哈萨克族原发性高血压与 +,-* 基因多态性的关系. 原发性高血压 "(("%$"&"( /0 是由遗传和环境因素共同影响形成的 它不仅是一种病 而且还是心血管疾病最常见的危险因素 /0 的基本病理生理机制是阻力动脉的血管张力持续增加 然而控制血管紧张性的一个主要因素

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1 第 卷第 期 年 月 西安交通大学学报 医学版!"#$## %&'& & 临床研究 新疆哈萨克族原发性高血压与 基因多态性的关系 王立杰 张文雯 钱燕飞 张 亮 赵 磊 马克涛 李 丽 司军强 石河子大学医学院生理学教研室 新疆地方与民族高发病教育部重点实验室 新疆石河子 # 摘要 目的 探讨新疆哈萨克族原发性高血压与大电导钙激活钾通道 $%&'"!%"% %%"%((!) % "$*+%+,-* 基因多态性位点 &(. 的相关性 方法 分别提取原发性高血压组 "(("%$"& "( '&!/01 和正常组 &)"("'&!,1 血液中的基因组, 运用限制性片段长度多态性聚合酶链式反应 $)"&%("% &"%&"(& &%')"$"'$)&()2234 技术检测 +,-*&(. 多态性位点的基因型 应用非条件 4'( 回归分析新疆哈萨克族高血压相关危险因素 结果 非条件 4'( 回归分析结果显示 +,-*&(. 位点基因型 高密度脂蛋白 '"($& " 04 低密度脂蛋白 $"($&" 44 和总胆固醇等与高血压无关联 体质量指数 )%(( "*-5 和甘油三酯是影响高血压的危险因素 新疆哈萨克族人群中普遍存在 +,-*&(. 位点的基因多态性 6 在 /0 组该位点 基因型频率及 等位基因频率分别为 7#7 7#6.7#7 与, 组相比较 两组间无统计学差异 6 结论 +,-* 基因 &(. 多态性位点可能与新疆哈萨克族原发性高血压无关联 关键词 高血压 大电导钙激活钾通道 +,-* 哈萨克族中图分类号 2# 文献标志码 66!"!!#$%&'#&!!$ %#!'!(##)$ 8,94":0,9 8"" ;5, %":0,94%' :04"- +"%4545!%' "%&)"($'$-"""< "&(+"4%&%& =%'/ ")%/("%("-(&/!% "#% *+,+ # #" (( ) #"##* )#"( # +,*)." -,./ &0(#1' #"(" 1"( ' 1# & (##)#( (( *)2""#. ((,*'!+& #"# " / ##" -,./ &#"#",*'!+). )" 12)" 212" # #" " (" +!3" #" / # &,*'!+). ((" -,./ &6&4#** *"*" &5&#5&5#6&.5&#5 # &' " "" # " &6&. ((,*'!+( " -,./& -. /,* )#"##* )#"(#,*'!+,./ 收稿日期 66 修回日期 6# 基金项目 国家重点基础研究发展计划项目. 计划项目,* 兵团博士基金项目, 兵团医药专项,*!&"",%%$+"*%(2"("%&&'&%).&'&%),*&(&3!%,% &("%$-""%,* 通讯作者 司军强 /)%$(! %'(!"! 优先出版 >">)("%$..&6)$6

2 王立杰 张文雯 钱燕飞 等 新疆哈萨克族原发性高血压与 +,-* 基因多态性的关系. 原发性高血压 "(("%$"&"( /0 是由遗传和环境因素共同影响形成的 它不仅是一种病 而且还是心血管疾病最常见的危险因素 /0 的基本病理生理机制是阻力动脉的血管张力持续增加 然而控制血管紧张性的一个主要因素就是大电导钙激活的钾通道 $%&'"!%"% %%" %((!)% "$*+%*+% 是由离子介导的 亚基和不同的 亚基构成 亚基主要表达于平滑肌细胞并影响其特性 有研究表明 编码 亚基的 +,-* 基因突变与心率变异和压力反射功能相关 联 +/44/ 等研究进一步发现 +,-* 基因多态性位点 &(./6+ 变异降低动脉血管阻抗 因此 +,-* 基因多态性在高血压的发生发展中可能发挥着重要的作用 近来流行病学调查 显示 新疆哈萨克族人群是高血压病的高发人群 故本研究选取遗传异质性较小的新疆哈萨克族人群为对象 从基因水平探讨 *+% 遗传变异是否与新疆哈萨克族人群 /0 相关 对象与方法 研究对象 以新疆沙湾博尔通古乡的哈萨克族人群为研究对象 高血压诊断参照 中国高血压防治指南 以病例对照研究的方法按照相关纳入标准分别选取 例高血压患者 /0 组 年龄.?# 岁 例血压正常者, 组 年龄 66?# 岁 各研究对象之间无血缘关系 且所有对象均签署知情同意书 0 方法 0 提取基因组, 采用, 提取试剂盒提取血液基因组, 产物经 '4 的琼脂糖凝胶电泳 并通过紫外分光光度计鉴定产物纯度 00 引物设计 应用 &)"&&")"&6 软件设计引物 由于 +,-*&(. 多态性位点没 有适宜的限制性内切酶 故本研究在上游引物第 个碱基处设置了错配碱基 以便于引入限制性内切酶识别位点 引物序列为 上游引物 6@ @ 下游引物 6@ @ 由上海生物工程股份有限公司合成 012 扩增和限制性酶切 所有 2 反应体系均为 64 具体包含上游引物 64 下游引物 64, 模板 4 ' 4,%("2,%(" &"" 去离子水 #642 -%("& 反应条件满足.6 A 预变性 6).6 A 变性 (6#A 退火 (A 延伸 6( 共 个循环 最终 A 充分延伸 ) 4 的酶切体系包含限制性内切酶 54B!"&42 产物 4,%("2,%("&"" 去离子水 4 混匀后 A 孵育 2 产物及酶切产物分别经 '4 6'4 的琼脂糖凝胶电泳 电泳结果经凝胶成像仪 成像加以鉴定 1 统计学处理 所有实验数据应用 统计学软件进行分析 计量资料以均数? 标准差表示 运用 检验进行组间频率的比较 计算各组等位基因频率及基因型频率 进一步确认是否符合 0%& 8""&' 平衡 用非条件 4'( 回归分析计算 值及.67 并分析高血压相关危险因素 6 代表差异有统计学意义 0 结 果 0 两组基本特性的比较 /0 组和, 组的年龄 总胆固醇 低密度脂蛋白 44 高密度脂蛋白 04 无统计学差异 6 收缩压 舒张压 身高 体质量 体质量指数 *-5 甘油三酯在两组间有统计学差异 6 而且除了 04 指标外 /0 组其余相关指标平均水平明显高于, 组 表 表 两组基本特征的比较 %)%&( %(%&%"&((""" "'&!(? 项目 /0 组 1, 组 1 值 值 年龄 岁 6?# 6#?... 收缩压 ))0'.6?#? 66 舒张压 ))0'.6? 6? 身高 )?#? 6 6 体质量 >'.6?..? # 6 *-5>')? 6.?. 6 甘油三酯 ))$4?.?.# # 总胆固醇 ))$4?6 6?.6. 44))$4?# 6? #6.6 04))$4 6?6 6? C# 体质量指数 )%(("*-5 低密度脂蛋白 $"($&" 44 高密度脂蛋白 '"($&" 04/0 组与, 组相比较 6

3 # 西安交通大学学报 医学版 第 卷 00 高血压相关危险因素的分析 以是否患有高血压作为因变量 年龄 * 和基因型等因素作为自变量进行非条件 4'( 回归分析 结果表明 +,-*&(. 位点基因型 年龄 性别 体质量 4404 和总胆固醇与高血压无相关性 * # 和甘油三酯 是影响高血压的危险因素 表 表 0 新疆哈萨克族 - 多因素 回归分析 %")!$%&%"$'(&"'&"(( %%$((/0 =%'+%%> 因素 值 值.67 * # 甘油三酯 ##. 6 6 图 0'1213, 产物 酶切图 3'2&!(&(.$)&() +,-*%('"(" -5")" --%&>"&6 型 型 型 01, 及酶切产物的电泳分析 2 产物经 '4 的琼脂糖凝胶电泳 扩增片段分子量为 6 图 2 产物经限制性内切酶 酶切后获得 种基因型 型 6 型 ## 及 型 6## 由于 # 分子量相对较小 结果未能显示 图 2 产物经反向测序验证与酶切分型结果一致 图 图 1 扩增产物反向测序结果 3'2""&("("!""&)%'&%)(2&!( 04 基因型分布 +,-* 基因多态性位点 图 '1213, 产物的电泳图 3' 2 &!("$"&&"((&(. $ )&()+,-* --%&>"& 样本 &(. 基因型频率分布符合 0%&8""&' 遗传平衡定律 具有群体代表性 6/0 组 和 基因型频率分别为 7#7 7 与, 组相比较 无统计学差异 6 /0 组等位基因 频率分别是 #6.7#7 两组间无统计学差异 6 表 表 1 基因多态位点 '1213 的基因型分布 %9""((&! &(.$)&()+,-* 基因 /0 组 1, 组 1 值 值 值.67 基因型 67 7 #7.7 # # #66 等位基因 #6.7 ##7 ##7 #.7. ##.

4 王立杰 张文雯 钱燕飞 等 新疆哈萨克族原发性高血压与 +,-* 基因多态性的关系 # 1 讨 论 血管张力的调节主要依赖于血管平滑肌细胞离子通道的活动 目前已证实 广泛分布于平滑肌组织中的大电导钙激活钾通道 *+% 在维持膜电位及调 6 节肌紧张等生理过程中发挥着重要的作用 血管平滑肌上的 *+% 主要由成孔的 亚基和调节性 亚基组成 其中 亚基发挥重要的辅助调节效 应 正常生理状态下 亚单位与细胞内局部钙离子浓度升高偶联来增加通道的活性 而引起细胞舒 # 张 人类编码 *+ 通道 亚基的基因 +,-* 定位于 6 全长约 6> 目前已经证实 在 +,-* 第 外显子处碱基 替换为碱基 9 等同于蛋白 /6+ 的突变 *+% 通道的功能改变对高血压及心率不齐等多种心血管疾病发挥着调控作. 用 大量研究表明 由于 亚基的下调或缺失 引起 *+% 通道开放概率以及产生的瞬时外向钾电流均降低 使得 *+% 通道负反馈抑制作用降低 从而引发细胞膜去极化 血管平滑肌收缩 致使血压升 高 3/2,,/: 等关于基因 +,-* /6+ 变异与高血压之间的相关分析 显示 /6+ 突变导致 *+ 通道对钙离子的敏感性增加 使得血管更易于舒张从而得出 /6+ 通道对血管平滑肌收缩性起负反馈作用 而且此作用与 + 等位基因对低 舒张压的保护作用一致 /, 等表明 66 岁以上的女性 + 等位基因携带者患中度以上舒张压增高 的危险性相对较低 此外,5/4/, 等研究不仅证实 + 等位基因对舒张压有保护效应 而且还验证了 + 等位基因携带者的收缩压明显低于未携带者 6 同时 :0 等研究进一步表明 + 等位基因携带者作为保护因素降低中国人群高血压的患病率 这些结果提示 +,-* 基因多态性与高血压的发生发展有密切的关系 本研究以遗传异质性小的新疆哈萨克族人群为研究对象 探讨 +,-* 基因多态性与新疆哈萨克族人群 /0 的关联 本文对新疆哈萨克族高血压相关危险因素分析 显示 +,-*&(. 位点基因型与高血压无相关性 而 *-5 和甘油三酯作为危险因素影响高血压 该位点基因型分布结果表明 /0 组与, 组基因型 及等位基因 频率分布无统计学差异 6 该现象 与 ++<* 等关于 +,-* 基因变异与日本人群高血压的相关研究结果一致 但与上述 + 等位 基因对舒张期高血压的保护作用不相符 存在相互矛盾的原因可能是 /0 是多基因 多因素的复杂性疾病 +,-* 基因 &(. 多态性位点可能只作为微效位点发挥效应 样本量相对较小 种族地区差异 因此 需要更多 更大的样本来验证这一基因与原发性高血压的相关性 综上所述 +,-* 基因多态性位点 &(. 与新疆哈萨克族原发性高血压可能无关联 参考文献 0622$*!',2*&+,#),*'!+#"() ""& 6.).&,227)10 3!6'$*6!* &,*'!+6, #" "#" # #(()" (( 6*&.66)& 马晓佳 张眉 郭淑霞 & 新疆农村地区维吾尔族 哈萨克族与汉族人群高血压患病率 & 中华高血压杂志 ) #& 张文雯 石文艳 刘卫东 等 & 新疆哈萨克族人群缝隙连接蛋白 基因多态性与原发性高血压的关系 & 实用医学杂志 #)#6& 626* $!'$$3223!,&!, ') (()#"##* )#", #" ("" ) &+*(#..6)& *$3226,*6'$06 &!# (#(")"##()#) "( +,#&#'#"$# $ 66#.)#& 0$26%$!'6%38'0+&#") (## 4"("+, #"&0. 6)& #$8+*6 1&!#+,* * "+,*#&0..)6&.$,!66,67$!,3,& )#"##* )#", +,#"# #(#- #"#( # #(#) ",*#&(#$###6).& 6!$!%9:9''19)''19! &0#,*'!(#) /# " ( #"#& #) 6& 7623!!6 *%*63& () ##)")"", #&+*(##6)#.& 下转第 页

5 王亚婷 何彩霞 卢振辉 等 44 在肝癌中的表达及其对预后的影响 步研究 2 结果表明 44 )2, 在 0 中呈高表达 44 作为干细胞群的可靠指标 它的水平在数量上提示了肝癌组织中含有干细胞的比例 大量研究表明 包括肝癌在内的一些实体恶性肿瘤存在 干细胞特异性标记物呈过表达的肿瘤细胞通常具有较高的侵袭性和致瘤能力 新近研究发现 44 的高表达与结直肠癌细胞的迁移和进展密切相关 44 可作为结直肠癌独 6 立的生存预测因子 5+8 等发现 44 在成年鼠成肝细胞 "%$%( 的表达随着长大后逐渐沉默 表明在胎鼠肝脏细胞早期分化方面起到了重要的作用 进一步敲除 44 基因可抑制移植肝肿瘤生长 提高了免疫缺陷瘤小鼠的平均存活时间 本实验 +%$%-""& 生存分析显示 44 高表达组肝癌患者平均生存时间? 月 较低表达组 6? 月 明显缩短 表明肝癌组织中 44 蛋白表达越强 患者的生存期越短 预后越差 44 的表达可影响肝癌的恶性生物学行为 可能作为肝癌患者病情程度判断及预后不良的预测指标 但本研究入组病例较少 需进一步加大样本量进行深入研究 参考文献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编辑 韩维栋 上接第 # 页 & #)& ''19)''19!6!$!%9:9 696:8'027'0 8&3#() &0))# (,*'!+ ( #(## #(() ##" #"# ## # * &*3).& &(#0(###6.) $'!''19)''19!6!$!& & ##,*'!+6,# ((,6, '06 '&# "# ("# " *7+*2*',+",*'!+ #"#/&*#6.)6& # (($) '32$' +016,$0'&,*) $" &*#6.#)& '!+062 ((#"#"# 编辑 卓选鹏 ""#"3.." 6.1

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