中南大学学报医学版 D; -, + )- ) % % ) 8% % >- + ) ) &% >- % 54 )-) ) ) - ) + ) ) ;4 3 ; 5 ) - D; % &,, ) ) ) -) ) ) - % 54 ) - - ; / & + +, )) + >- + %

Size: px

Start display at page:

Download "中南大学学报医学版 D; -, + )- ) % % ) 8% % >- + ) ) &% >- % 54 )-) ) ) - ) + ) ) ;4 3 ; 5 ) - D; % &,, ) ) ) -) ) ) - % 54 ) - - ; / & + +, )) + >- + %"

夫唐
7 years ago
Views:

1 中南大学学报医学版 ) 基因多态性与胰岛自身抗体阴性酮症倾向糖尿病的关系周敏张英张冬梅林建王建平周海峰周智广中南大学湘雅二医院代谢内分泌研究所糖尿病中心长沙湘雅医院内分泌科长沙 5 摘要目的探讨配对盒 ) 基因多态性与胰岛自身抗体阴性酮症倾向糖尿病 D; 的关系方法应用变性高效液相色谱法 /; 4 筛查例谷氨酸脱羧酶自身抗体 % % 和蛋白酪氨酸磷酸酶自身抗体 8% % 阴性的 D; 患者 D; 组和例非糖尿病对照者 &4 组的 ) 基因外显子和对异常峰型者经测序证实其碱基改变应用聚合酶链反应限制性长度多态性分析 ;4 3 ; 法对例 D; 患者和 5 例对照者的 ) 基因 % 54 多态位点进行等位基因和基因型频率分析结果在本组人群中未发现 ) 基因外显子有变异外显子中的单核苷酸多态性 &; 位点 % 54 引起错义突变 ; / % 54 位点的 4 等位基因和 44 基因型频率在 D; 组与 &4 组间差异无统计学意义按性别分层后 D; 组 4 等位基因和 44 基因型频率差异均有统计学意义 5 以年龄分层后岁组与岁组比较 4 等位基因和 44 基因型频率分布差异均有统计学意义在 44 基因型的 D; 患者中空腹 4 肽 34; 水平高于 %% 基因型者差异有统计学意义结论本组中国南方汉族人群 ) 基因 % 54 ; / 多态性与胰岛自身抗体阴性 D; 未见关联但分层研究提示 ) 基因 % 54 多态性对男性和岁的 D; 患者的发病可能有影响关键词酮症倾向糖尿病 ) 基因单核苷酸多态性变性高效液相色谱法 8 ) )./E0./%&6./%& 8&7 %&7./E/ +./E. - - & - &, & &, & & & 5 ) +),, ) ) ) -, 4 / -), + ) - + ) >- /; 4 ) - &4 - 收稿日期 5 作者简介周敏博士副主任医师主要从事糖尿病及相关研究通信作者周智广 1 ) - ) 基金项目国家项目 49 湖南省科技厅项目 73 湖南省卫生厅重点研究项目 % - & ) ; 49 ; + ) 4 +/- ;, 73 D ; + ;- ) / ) /- ;, % ; 4

峰型者经测序证实其碱基改变应用聚合酶链反应限制性长度多态性分析 ;4 3 ; 法对例 D; 患者和 5 例对照者的 ) 基因 % 54 多态位点进行等位基因和基因型频率分析结果在本组人群中未发现 ) 基因外显子有变异外显子中的单核苷

2 中南大学学报医学版 D; -, + )- ) % % ) 8% % >- + ) ) &% >- % 54 )-) ) ) - ) + ) ) ;4 3 ; 5 ) - D; % &,, ) ) ) -) ) ) - % 54 ) - - ; / & + +, )) + >- + % 54 ) D; ) )) + >- D; % +, 44 4 )) + >- ) ) D; - ),) +34; ) +34; %% - % 54 ) ) ) ) ) - ) + ) -, D; 4 / -) /, % 54, - ) ) ) -, D; -. ) - + ) >- 酮症倾向糖尿病 D; 是一组具有较大异质性的糖尿病其临床表型既可类似型糖尿病也可能类似型糖尿病对于胰岛自身抗体阴性的 D; 患者有学者称其为酮症倾向型糖尿病或特发性型糖尿病由于它以酮症为首发症状故推测其胰岛功能在起病时已遭受较大损害可能存在遗传性胰岛细胞分泌缺陷而不能耐受高糖下的糖脂毒性导致细胞分泌功能急剧下降而发生酮症酸中毒 D% 因此调控胰岛细胞功能的相关基因异常可能是其病因之一转录因子配对盒 ;%A 是配对同源结构域转录因子 ;%A 家族中的一员 ;%A 对产生胰岛素的细胞和产生生长抑素的细胞的分化增殖至关重要研究发现敲除 ) 基因将导致细胞的严重缺乏进而发生糖尿病 / ) 等通过对斯堪的那维亚半岛的 5 个家系的微卫星分析发现包含 ) 基因的号染色体区域 > 与型糖尿病呈连锁关系但未能证实是该基因编码区的何种变异在不同国家的人群中 ) 基因的不同变异与不同糖尿病亚型相关本研究拟探讨 ) 基因外显子和外显子的多态性及其与中国南方汉族人胰岛自身抗体阴性 D; 的关系 / 0 对象与方法研究对象中南大学湘雅二医院和湘雅医院内分泌科年月至年月收治的以自发酮症 D 或 D% 起病的糖尿病患者例男性例女性例年岁入组条件为新发糖尿病患者症状不超过个月个月内首次发生 D 血酮体半定量或羟丁酸 ) 或尿酮 F F 以上或 D% D 或 D% 无明显诱因如感染手术外伤等排除妊娠糖尿病和继发性糖尿病排除合并严重肝肾功能损害及恶性肿瘤患者谷氨酸脱羧酶自身抗体 % 和蛋白酪氨酸磷酸酶自身抗体 8% % 抗体阴性非糖尿病对照组 5 例来自本院体检者和社区流行病调查人群其中男性例女性例年龄 5? 岁空腹血糖

) - + ) >- 酮症倾向糖尿病 D; 是一组具有较大异质性的糖尿病其临床表型既可类似型糖尿病也可能类似型糖尿病对于胰岛自身抗体阴性的 D; 患者有学者称其为酮症倾向型糖尿病或特发性型糖尿病由于它以酮症为首发症状故推

3 ) 基因多态性与胰岛自身抗体阴性酮症倾向糖尿病的关系周敏等 ) 体质量指数 908 入组条件为无亲缘关系的汉族人既往无糖尿病史和糖尿病家族史本研究得到中南大学湘雅二医院伦理委员会批准方法 &% 制备抽取受检者外周血 1 % 抗凝采用常规苯酚氯仿抽提 &% ;4 扩增 ) 基因外显子和的引物为 3 H 44 % 4 %4%44% 4 4 H H % 4 % %444 H 3 H 4444%4%44%4 44 H H 4%% % %% % H 产物片断分别为和在反应体系中含 B9- + B )- 04) & ; / > 酶 E 引物 &% 模板 5 扩增条件 I 预变性 I 变性 5 I 退火 I 延长每一循环退火温度下降 I 共个循环之后 I 变性 I 退火 I 延长共个循环 I 延长变性高效液相色谱法 /; 4 分析例患者和例对照的 ;4 产物不需纯化经变性复性处理 I 每降 I 降至 I 取直接进人 % 1 &% 片段分析系统美国公司 ) 第和外显子检测温度分别是 I I 紫外检测波长为测序分析对 /; 4 检测出的每一种异常峰型的样品重新进行 ;4 扩增后测序以明确碱基变异类型并与突变和多态数据库进行比对证实碱基变异是否为单核苷酸多态性 &; 限制性片段长度多态 3 ; 分析对例患者和 5 例对照应用 ;4 3 ; 对多态位点 % 54 进行基因型分析并验证 / ; 4 结果限制性内切酶 & 8 &19 公司 E I 水浴酶切酶切产物于聚丙烯酰胺凝胶电泳硝酸银染色后普通灯光下观察结果统计学处理所有样本进行 / 平衡检验所有数据均采用 ; 统计软件进行分析计量资料以均标准差 +@& 表示组间比较采用 % 检验 &; 位点等位基因和基因型频率组间差异采用检验以为差异有统计学意义关联分析采用 ; 8&D 软件进行 -, -?- ) ) 0 结 00 果 /; 4 结合测序法筛查 ) 基因外显子和的结果在所有检测样本中 ) 基因外显子均未发现异常峰型 /; 4 峰型见图外显子出现种异常峰型见图对异常峰型的样本进行测序发现 5 % 4 变异此为已知多态测序图见图酶切图见图图 /0 基因外显子的峰型图 /0 4

引物 &% 模板 5 扩增条件 I 预变性 I 变性 5 I 退火 I 延长每一循环退火温度下降 I 共个循环之后 I 变性 I 退火 I 延长共个循环 I 延长变性高效液相色谱法 /; 4 分析例患者和例对照的 ;4 产物不需纯化经变性复性处理 I 每降 I 降至

4 S 中南大学学报医学版 %&% ) +,+.+ / 0.1 %& ).-/ )./ )+,- %& 图 KH%&O 基因外显子 3 的异常峰型图& 4 -JKH>R0. %5 %- 5 %&%&O - + L%+3J 图 MH%&O 基因外显子 3 测序图& 7正常序列箭头处为 MS7 7&W变异序列箭头处为 MSR R/ 4 -JMH8.1 V & -3 1%&%&O - + L%+3J7 8? 0 A/ be 1@.7? ; > )? 1 / MS7 7& W [ 1/ be 1@. 7? ; > )? 1 / MSR R. ) & % + ) & % 图 OH%&O 基因外显子 3 的 )\&9酶切凝胶电泳图& H _870 O & 泳道 S 为 RR基因型&泳道 %M53& 为 77基因型&余泳道为 7R基因型/ 4 -JOH8.-?? %).% 1 1) 3 %& 1 %+ +W /5 )OP9-1 %+) %3 1%&%&O - + L%+3JH _870 OJ &A 1 /S 1> RRB 1? ) &A 1 /%M53 1> & 77B 1? ) &? A 1 / 7RB 1? ).. BAO 基因多态位点7 MSR与 hy_的关系各组基因型频率分布符合遗传平衡规律显析发现年龄和性别对 hy_ 的发病影响明显 / 故在整体样本的基因多态位点与 hy_ 的关联分析示样本具有群体代表性 / 在 hy_组与 8R组间等中把年龄和性别作为协变量进行了校正结果位基因频率和基因型频率分布差异无统计学意显示 7 MSR等位基因和基因型与 hy_ 患病无义 Bo.\ M.& % 表 / 因 Z? B 归分关联/

$) & % + ) & % 图 OH%&O 基因外显子 3 的 )\&9酶切凝胶电泳图& H _870 O & 泳道 S 为 RR基因型&泳道 %M53& 为 77基因型&余泳道为 7R基因型/ 4 -JOH8.-?? %).% 1 1) 3 %& 1 %+ +W /5 )OP9-1 %+) %3 1%&%&O - + L%+3JH _870 OJ &A 1 /S 1> RRB 1?$

5 ) 基因多态性与胰岛自身抗体阴性酮症倾向糖尿病的关系周敏等表 /0-4 组和 1 组基因 / /; 位点等位基因和基因型频率比较 &) /0 8 / /; -4 1 组别等位基因频率例 % 4 基因型频率例 &4 组 5 D; 组 ) 基因多态位点 % 54 与性别的关系因性别对 D; 的发病有影响将性别分层后发现在 D; 组男性的 44 基因型高于女性, 5 5 男性 4 等位基因频率高于女性, 5 &4 组内男性与女性比较及 D; 组与 &4 组之间男女性比较等位基因和基因型频率均无统计学差异表表 0 按性别分层后组 / /; 基因型和等位基因比较 &) 0 / /; 8 组别等位基因频率例 % 4 基因型频率例 &4 组男女 D; 组男 5 女 5 D; 组男性与女性比较 ) 基因多态位点 % 54 与年龄的关系因年龄对 D; 的发病有影响应用 ; 检验按不同年龄分层发现岁组 44F%4 基因型频率明显高于岁组 5 组之间 4 等位基因频率也有统计学差异 / 5? 表表 0-4 组按年龄分层后两组基因型和等位基因比较 &) 0 8 年龄岁等位基因频率例 % 4 基因型频率例 &4 组 5 D; 组 D; 组组与组比较 / 5? 5

别分层后组 / /; 基因型和等位基因比较 &) 0 / /; 8 组别等位基因频率例 % 4 基因型频率例 &4 组男 5 5 5 女 D; 组男 5 女 5 D; 组男性与女性比较 5 5 5 ) 基因多态位点 % 54 与年龄的关系因年龄对 D; 的发病有影响应用 ; 检验按

6 中南大学学报医学版 % 54 多态性在不同基因型中的年龄 908 和 34; 水平的比较 D; 患者不同基因型组年龄和 908 水平比较差异无统计学意义空腹 4 肽 34; 浓度经自然对数 ) 转换后符合正态分布组间均数比较发现 44 基因型组 34; 水平高于 %% 和 %4 基因型组 % 表表 0-4 组不同基因型的年龄和 4 水平的比较 &) 项目基因型例数例年 @ % 34; 44 基因型与 %%%4 基因型比较 0 讨 00 论本研究应用 /; 4 测序方法筛查了例中国南方汉族人 ) 基因外显子和结果未见外显子突变或多态文献报道在日本人群中发现 ) 基因外显子的突变与型糖尿病有关而在西非裔 D; 患者中发现 ) 基因外显子有 % 突变这说明 ) 基因外显子突变存在种族差异本研究发现 ) 基因外显子的变异 % 54 引起错义突变 ; / 目前 ; / 多态性在不同人群的结果不 5 一致 9 - 等在瑞士和德国人群的研究发现 ) 基因外显子的 ; / 多态性与儿童型糖尿病易感性有关 44 基因型频率在两种人群的自身抗体阳性型糖尿病中分别为和对照组则以 %4 基因型为主两种人群的频率分别为和但在芬兰和匈牙利等其他欧洲人群中未发现 ; / 多态性与型糖尿病相关有关 % 54 多态性的功能研究表明降低了细胞对葡萄糖刺激的增殖反应而这是调节细胞生长的主要生理效应因此 % 54 多态性可能影响细胞的再生和增殖 5 本研究检测了 ) % 54 多态性在中国汉族人群的分布 D; 组和 &4 组的等位基因和基因型频率分布均无明显差异进行关联分析之前笔者先研究了协变量年龄性别和 908 对 D; 发病的影响回归分析发现年龄性别对 D; 的发病影响明显所以在整体样本的基因多态位点与糖尿病的关联分析中把年龄和性别作为协变量以校正样本的因变量在 ; 8&D 软件中通过回归法检测多态位点与 D; 的关联发现本组 ) 基因 % 54 多态性与中国南方汉族人群 D; 患病无关联张云等也发现 % 54 多态性与中国汉族人群胰岛自身抗体阳性的型糖尿病不相关对 D; 患者进行性别和年龄特异性子样本分析发现男性 4 等位基因和 44 基因型频率高于女性以岁为截点分层岁组 4 等位基因和 44 基因型频率高于岁组这提示 % 54 多态性存在性别和年龄的差异性别和年龄对 D; 发病可能有影响本研究进一步比较了不同基因型的年龄 908 和 34; 浓度观察到年龄和 908 在不同基因型组间无明显差异但 44 基因型组 34; 浓度高于 %4 和 %% 基因型组同时 908 也较高提示该组部分患者可能存在胰岛素 5 抵抗本研究结果与 9 - 等在抗体阳性型糖尿病患者的研究结果不同提示在抗体阴性 D; 患者中可能存在胰岛素抵抗这可能也是该类患者易于发生酮症的原因之一总之本组中国南方汉族人群中未发现 ) 基因外显子有变异外显子的 % 54 ; / 多态性与胰岛自身抗体阴性 D; 发病无关联但 % 54 多态性对不同性别和年龄胰岛自身抗体阴性的 D; 患者可能有影响其机制尚待进一步研究参考文献 D %1 D ) 7 74) 1 ) , 7, 3 1 ; ) D +- %+ ) ) ) - ) + ) +- -) 7 0 -, 7, ) )

例中国南方汉族人 ) 基因外显子和结果未见外显子突变或多态文献报道在日本人群中发现 ) 基因外显子的突变与型糖尿病有关而在西非裔 D; 患者中发现 ) 基因外显子有 % 突变这说明 ) 基因外显子突变存在种族差异本研究发现 )

7 ) 基因多态性与胰岛自身抗体阴性酮症倾向糖尿病的关系周敏等, 7 /- 0 )-) ; 9 + ) -) + ),) 7 0 )4 ) 5 5 / ) ; ) 9 - / ) 8 ) + - ) ) - > > > ), + ) / ) % - +; D 8 - ) %, ; ) ) ) % ) % + ) ) -, + ;%A ) ) ), 7 ) 5 / 0 7 D ) + +;%A 3 /- -) 张云肖新华王等 ) 基因 % 54 多态性与中国汉族人型糖尿病的相关性 7 中国医学科学院学报./%& 6- A8% A - %& / ) % % 54 ) ) / 4 7 % % 0 本文编辑郭征

5 9 - % 9 9 0-0 ) % + ) ) -, + ;%A ) ) ), 7 ) 5 / 0 7 D ) + +;%A 3 /- -) 7 5 5 张云肖新华王等 ) 基因 % 54 多

龚亚夫在重新思考基础教育英语教学的理念一文中援引的观点认为当跳出本族语主义的思维定式后需要重新思考许多相连带的问题比如许多发音的细微区别并不影响理解和

龚亚夫在重新思考基础教育英语教学的理念一文中援引的观点认为当跳出本族语主义的思维定式后需要重新思考许多相连带的问题比如许多发音的细微区别并不影响理解和语音语篇语感语域林大津毛浩然改革开放以来的英语热引发了大中小学英语教育整体规划问题在充分考虑地区学校和个体差异以及各家观点的基础上遵循实事求是逐级定位逐层分流因材施教的原则本研究所倡导的语音语篇语感语域

中 南 大 学 学 报 医 学 版 D; -, + )- ) % % ) 8% % >- + ) ) &% >- % 54 )-) ) ) - ) + ) ) ;4 3 ; 5 ) - D; % &,, ) ) ) -) ) ) - % 54 ) - - ; / & + +, )) + >- + %

中南大学学报医学版 D; -, + )- ) % % ) 8% % >- + ) ) &% >- % 54 )-) ) ) - ) + ) ) ;4 3 ; 5 ) - D; % &,, ) ) ) -) ) ) - % 54 ) - - ; / & + +, )) + >- + %