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待陈松
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1 568 Tianjin Med J, May 216, Vol. 44 No. 5 去氧鬼臼毒素抑制肺癌 NCI-H358 细胞增殖和体外迁移的研究陈振华, 丘新才, 林淑芳, 甘振勇摘要 : 目的探讨去氧鬼臼毒素对人肺癌 NCI-H358 细胞增殖和体外迁移的影响, 并初步探讨其作用机制方法应用 CCK-8 法流式细胞术细胞划痕实验和 DCFH-D 法分别检测去氧鬼臼毒素对 NCI-H358 细胞增殖周期分布凋亡体外迁移能力和细胞内活性氧 (ROS) 的影响, 并通过 Western blot 检测去氧鬼臼毒素对细胞周期蛋白 (Cyclin)B1 细胞分裂周期蛋白 25 同源蛋白 (Cdc25c) 细胞周期蛋白依赖性激酶 (CDK)1 半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶 (Caspase)-3 p53 肿瘤蛋白 B 淋巴细胞瘤 (Bcl)-2 和基质金属蛋白酶 (MMP)9 的表达水平, 以及细胞外信号调节激酶 (ERK)1/2 p38 分裂原激活蛋白激酶 (MAPK) 和 c-jun 氨基末端激酶 (JNK) 的磷酸化水平的影响结果去氧鬼臼毒素能明显抑制肺癌 NCI-H358 细胞的生长, 流式细胞结果显示其能诱导细胞停滞在 G2/M 和 S 期, 诱导细胞凋亡和细胞 ROS 产生, 同时细胞体外迁移能力也明显下调 Western blot 结果显示, 去氧鬼臼毒素能使 Cyclin B1 Cdc25c CDK1 Bcl-2 和 MMP9 的蛋白表达明显下调, 而 Caspase-3 和 p53 的表达明显上调, 且 ERK1/2 p38mapk 和 JNK 的磷酸化水平明显受到抑制结论去氧鬼臼毒素可抑制肺癌 NCI-H358 细胞的增殖和体外迁移, 是一种潜在的抗肿瘤药物关键词 : 鬼臼毒素 ; 肺肿瘤 ; 细胞增殖 ; 细胞运动 ; 去氧鬼臼毒素中图分类号 :R734.2,R349.5 文献标志码 :A DOI: /21658 Research on mechanisms of deoxypodophyllotoxin-induced inhibition of cell proliferation and migration in human lung cancer NCI-H358 cells CHEN Zhenhua, QIU Xincai, LIN Shufang, GAN Zhenyong Department of Respirology, The Nanhai Hospital Affiliated to Southern Medical University, Foshan 5282, China Abstract:Objective Corresponding Author xincq6512@126.com To investigate the effects and mechanism of deoxypodophyllotoxin on cell proliferation and mi gration of human lung cancer NCI-H358 cells in vitro. Methods CCK-8 assay, flow cytometry assay, wound healing assay and DCFH-DA assay were used to detect the effects of deoxypodophyllotoxin on the proliferation, cells cycle, apoptosis, mi gration and reactive oxygen species (ROS). The protein expressions of Cyclin B1, Cdc25c, CDK1, Caspase- 3, p53, Bcl- 2, MMP9, ERK1/2, p38mapk and JNK were measured by Western blot assay, respectively. Results Deoxypodophyllotoxin inhibited cell proliferation and reduced migration in human lung cancer NCI- H358 cells. Flow cytometry analysis showed that treatment with deoxypodophyllotoxin resulted in cell cycle G2/M and S phase arrest, cell apoptosis and ROS production. The result of Western blot assay showed that protein expressions of Cyclin B1, Cdc25c, CDK1, Bcl-2 and MMP9 were downregulated while Caspase-3 and p53 were up-regulated. Moreover, Deoxypodophyllotoxin treatment decreased the phosphory lated levels of ERK1/2, p38mapk and JNK obviously. Conclusion Deoxypodophyllotoxin could suppress the proliferation and migration of human lung cancer NCI-H358 cells in vitro, which is a potential anti-tumor drug. Key words:podophyllotoxin;lung neoplasms;cell proliferation;cell movement;deoxypodophyllotoxin 肺癌是最常见的恶性肿瘤之一, 其发病率有逐年增加的趋势目前, 肺癌总的 5 年生存率仅为 1%~13% [1] 如何改善肺癌的治疗效果提高肺癌患者的总生存率是亟待解决的向题由于化疗药的不良反应, 许多患者往往无法耐受而放弃化疗, 这严重影响其生活质量因此寻求低毒高效的天然植物成分成为近几年来抗肿瘤研究的重要热点去氧鬼臼毒素 (deoxypodophyllotoxin,dppt) 是从中药桃儿七 Sinopodophyllum emodi(wall) 八角莲和欧洲刺柏 Juniperus communis 等植物中分离得到作者单位 : 广东省佛山市南海区人民医院呼吸科 ( 邮编 5282) 作者简介 : 陈振华 (1971), 男, 本科学历, 副主任医师, 主要从事慢性阻塞性肺疾病研究通讯作者 xincq6512@126.com

2 天津医药 216 年 5 月第 44 卷第 5 期 569 [2] 的活性成分研究表明,DPPT 具有较强的抗白血 [3] [4] [5] 病抗肿瘤抗病毒活性, 是一种潜在的抗癌新药, 但其作用机制尚不清楚本研究通过观察 DPPT 对人肺癌 NCI-H358 细胞增殖周期分布凋亡以及迁移的影响, 探讨其对肺癌的作用机制, 为临床研究提供实验基础 1 材料与方法 1.1 药品与试剂 DPPT 购自上海源叶生物科技有限公司 ; NCI-H358 细胞购自中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所 ;RPMI 164 培养基胎牛血清 Trizol 和.25% 胰酶均购自美国 Life Technologies 公司 ;cdna 反转录试剂盒购自 Fermentas 公司 ; 荧光定量 SYBR Premix Ex Taq 试剂盒购自大连宝生物有限公司 ; 活性氧 (ROS) 检测试剂盒青霉素和链霉素均购自江苏海门碧云天生物技术研究所 CCK-8 检测试剂盒 Western blot 的细胞周期蛋白 (Cy clin)b1 细胞分裂周期蛋白 25 同源蛋白 (Cdc25c) 细胞周期蛋白依赖性激酶 (CDK)1 半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶 (Cas pase)-3 p53 肿瘤蛋白 B 淋巴细胞瘤 (Bcl)-2 和基质金属蛋白酶 (MMP)9 细胞外信号调节激酶 (ERK)1/2 p38 分裂原激活蛋白激酶 (MAPK) 和 c-jun 氨基末端激酶 (JNK) 等一抗和辣根过氧化酶标记的山羊抗兔二抗均购自美国 Santa Cruz 公司 1.2 主要仪器培养箱购自美国 Thermro 公司 ;96 孔板购自美国 Corning 公司 ;ELX8UV 酶标仪购自美国 Bio-Tek 公司 ;FACScanTM 流式细胞仪购自美国 BD Biosciences 公司 ;75 PCR 仪购自美国 ABI 公司 ; 凝胶成像系统购自美国 Bio-Rad 公司 ; 酶标仪购自美国 Molecular Devices 公司 1.3 细胞培养及实验分组 NCI-H358 细胞用含 1% 胎牛血清 1 U/mL 青霉素和 1 mg/l 链霉素的 RPMI 164 培养液, 于 37 5% CO 2 饱和湿度下常规传代培养实验分为 ( μmol/l DPPT) 3 μmol/l 和 6 μmol/l 1.4 CCK-8 检测细胞增殖取对数生长期 NCI-H358 细胞, 以个 /ml 接种到 96 孔微孔板中, 每孔 1 μl, 培养过夜使细胞贴壁使用不同浓度的 DPPT( μmol/l) 分别处理细胞 24 h 和 48 h, 每组设置 4 个复孔按照试剂盒说明书每孔加入 1 μl CCK-8 试剂, 继续培养 2 h 最后用酶标仪测定 45 nm 波长下的光密度 (OD) 值以处理组 OD 值 / OD 值 1% 作为生存率 1.5 流式细胞术检测细胞周期和凋亡率取对数生长期 NCI-H358 细胞, 以个 /ml 接种于 6 孔板中, 3 6 μmol/l DPPT 处理 48 h 后, 用.25% 胰酶消化,2 r/min 离心 5 min, 收集细胞,PBS 洗 2 次,1 r/min 离心 1 min 后弃上清液,5 μl 7% 乙醇 4 固定过夜加入 RNA 酶消化, 使用碘化丙啶 (PI) 避光染色 3 min,facscantm 流式细胞仪进行细胞周期分析, 重复实验 3 次细胞凋亡采用 PI/ Annexin V-FITC 双染法, 将细胞重悬于 2 μl Binding Buf fer 中, 加入 1 μl Annexin V-FITC, 室温避光孵育 15 min, 使用 FACScanTM 流式细胞仪检测细胞凋亡率 1.6 DCFH-DA 法检测细胞 ROS 含量 NCI-H358 细胞培养在 6 孔板中, 经 3 μmol/l 和 6 μmol/l DPPT 作用 48 h 后, PBS 洗涤 2 次, 每孔加入经无血清 RPMI 164 培养基稀释的终浓度为 1 μmol/l 的 DCFH-DA,37 避光孵育 2 min, 用无血清 RPMI 164 培养液洗涤细胞 3 次, 流式细胞仪在激发波长 488 nm 发射波长 525 nm 下检测细胞平均荧光强度, 分析细胞内 ROS 含量 1.7 细胞划痕实验检测细胞迁移情况 NCI-H358 细胞接种于 6 孔板中直至形成单层融合, 待细胞融合达 95% 以上, 用 2 μl 吸头在细胞层中划痕,PBS 洗 2 次, 加入 3 和 6 μmol/l DPPT 放置于培养箱中继续培养 24 h, 取 h 和 24 h 两时间点在倒置显微镜下观察并拍照, 统计划痕的间隙距离迁移率 (%)=1-[ 间隙距离 (24 h)/ 间隙距离 ( h)] 1% 1.8 Western blot 检测肿瘤相关蛋白的表达 NCI-H358 细胞以个 /ml 密度接种于 6 孔板, 3 和 6 μmol/l DPPT 作用 48 h 后收集各组细胞, 用 RIPA 裂解液进行裂解, 加入 4 μg 蛋白样品, 经 1%SDS-PAGE 电泳后转移至 PVDF 膜 (15 ma,1 h),5% 脱脂牛奶封闭 1 h 后, 各目标分子特异性一抗 4 过夜洗去一抗, 以 HRP 连接的二抗温育 1 h, 洗涤, 以 ECL 试剂盒显示免疫反应条带作内参, 检测各组细胞中 Cyclin B1 Cdc25c CDK1 Caspase-3 p53 Bcl-2 MMP9 的表达水平, 以及 ERK1/2 p38 MAPK 和 JNK 的磷酸化水平 1.9 统计学方法所得数据用 SPSS 13. 统计软件分析, 计量资料以均数 ± 标准差 ( xˉ ±s) 表示, 多组间比较采用 ANOVA 分析, 组间多重比较用 LSD-t 法以 P <.5 表示差异有统计学意义 2 结果 2.1 DPPT 抑制 NCI- H358 细胞的增殖 NCI- H358 细胞经 DPPT 处理, 细胞活性呈浓度依赖性抑制, 同一浓度下 DPPT 处理 48 h 的细胞生存率低于 24 h, 见图 1 DPPT 处理 24 h 和 48 h 的半数抑制浓度 (IC 5) 分别为 (7.62±.57)μmol/L 和 (3.77±.23) μmol/l(t=14.11,p <.1) 后续实验均以 DPPT 处理 48 h 为准 Fig. 1 图 1 细胞生存率 (%) h 48 h DPPT(μmol/L) The effects of different concentrations of DPPT on the cell proliferation of NCI-H358 cells DPPT 不同浓度和处理时间对 NCI-H358 细胞增殖的影响

57 2.2 DPPT 对 NCI-H358 细胞周期分布的影响与相比,DPPT 处理后 G2/M 和 S 期 NCI-H358 细胞的比例显著升高, 而 G/G1 期的细胞比例明显减少, 见表 1 图 2 组别 3 μmol/l 6 μmol/l F Tab.

3 DPPT 对 NCI-H358 细胞周期分布的影响与相比,DPPT 处理后 G2/M 和 S 期 NCI-H358 细胞的比例显著升高, 而 G/G1 期的细胞比例明显减少, 见表 1 图 2 组别 3 μmol/l 6 μmol/l F Tab. 1 表 1 The effects of DPPT on the cell cycle of NCI-H358 cells DPPT 对 NCI-H358 细胞周期分布的影响 (n=3,%,xˉ ±s) G/G1 期 52.31± ±3.12 a 18.72±1.51 ab ** S 期 12.33± ±1.81 a 28.56±2.27 ab ** G2/M 期 35.36± ±2.52 a 52.76±2.86 a * * P <.5, ** P <.1, a 与比较, b 与 3 μ mol/l 比较,P < Channels() 3 μmol/l Channels() 6 μmol/l Fig Tianjin Med J, May 216, Vol. 44 No μmol/l μmol/l The effects of DPPT on the apoptosis of NCI-H358 cells 图 3 DPPT 对 NCI-H358 细胞凋亡的影响 2.4 DPPT 促进 NCI-H358 细胞内 ROS 形成经 3 6 μmol/l DPPT 处理 NCI-H358 细胞 48 h 后, 胞内的 ROS 浓度明显增加 [(39.22±1.81)% (62.53± 2.7)%], 均高于 [(9.31 ±.72)%,n=3,F= ,P <.1] 2.5 DPPT 抑制 NCI-H358 细胞的体外迁移 3 6 μmol/l DPPT 处理 48 h 后,NCI-H358 细胞的体外迁移明显受到抑制, 其细胞迁移率均低于 [(37.55±.31)% (23.49±.21)% vs.(56.32±.52)%, n=3,f= ,p <.1], 见图 4 9 Fig Channels() The effects of DPPT on the cell cycle of NCI-H358 cells 图 2 DPPT 对 NCI-H358 细胞周期的影响 2.3 DPPT 诱导 NCI-H358 细胞凋亡 3 6 μmol/l DPPT 作用 48 h 后,NCI-H358 细胞凋亡率 [(43.32± 2.77)% (56.26 ± 3.18)%] 均高于 [(1.15 ±.96)%,n=3,F= ,P <.1], 见图 3, 提示 DPPT 可诱导 NCI-H358 细胞凋亡 h 48 h 3 μ mol/l 6 μ mol/l Fig. 4 The effects of DPPT on the migration of NCI-H358 cells 图 4 DPPT 对 NCI-H358 细胞体外迁移能力的影响

天津医药 216 年 5 月第 44 卷第 5 期 571 2.6 DPPT 抑制 Cyclin B1 Cdc25c 和 CDK1 蛋白的表达 3 6 μmol/l DPPT 处理后,NCI-H358 细胞中 Cyclin B1 Cdc25c 和 CDK1 的蛋白表达水平均较明显下调, 见图 5 Cyclin B1 Cdc25c CDK1 3 μmol/l 6 μmol/l Fig.

7 DPPT 对 Caspase-3 p53 Bcl-2 和 MMP9 蛋白表达的影响经 3 6 μmol/l DPPT 作用 48 h 后, NCI-H358 细胞中 Caspase-3 和 p53 蛋白表达较显著上升, 而 Bcl-2 和 MMP9 蛋白的表达显著下调, 见图 6 Bcl-2 Caspase-3 p53 MMP9 3 μmol/l 6 μmol/l Fig.

8 DPPT 抑制 ERK1/2/MAPK 信号通路 3 6 μmol/l DPPT 能明显降低 ERK1/2 p38mapk 和 JNK 的磷酸化水平, 而对 ERK1/2 p38mapk 和 JNK 的作用不明显, 见图 7, 提示 DPPT 可抑制 ERK1/2/ MAPK 信号通路的活化 3 讨论 3.

4 天津医药 216 年 5 月第 44 卷第 5 期 DPPT 抑制 Cyclin B1 Cdc25c 和 CDK1 蛋白的表达 3 6 μmol/l DPPT 处理后,NCI-H358 细胞中 Cyclin B1 Cdc25c 和 CDK1 的蛋白表达水平均较明显下调, 见图 5 Cyclin B1 Cdc25c CDK1 3 μmol/l 6 μmol/l Fig. 5 The effects of DPPT on the expressions of Cyclin B1, 图 5 Cdc25c and CDK1 of NCI-H358 cells DPPT 对 Cyclin B1 Cdc25c 和 CDK1 蛋白表达的影响 2.7 DPPT 对 Caspase-3 p53 Bcl-2 和 MMP9 蛋白表达的影响经 3 6 μmol/l DPPT 作用 48 h 后, NCI-H358 细胞中 Caspase-3 和 p53 蛋白表达较显著上升, 而 Bcl-2 和 MMP9 蛋白的表达显著下调, 见图 6 Bcl-2 Caspase-3 p53 MMP9 3 μmol/l 6 μmol/l Fig. 6 The effects of DPPT on the expressions of Caspase-3, p53, 图 6 Bcl-2 and MMP9 of NCI-H358 cells DPPT 对 Caspase-3 p53 Bcl-2 和 MMP9 蛋白表达的影响 2.8 DPPT 抑制 ERK1/2/MAPK 信号通路 3 6 μmol/l DPPT 能明显降低 ERK1/2 p38mapk 和 JNK 的磷酸化水平, 而对 ERK1/2 p38mapk 和 JNK 的作用不明显, 见图 7, 提示 DPPT 可抑制 ERK1/2/ MAPK 信号通路的活化 3 讨论 3.1 DPPT 可以抑制肺癌 NCI- H358 细胞体外增殖 DPPT 是从天然植物中提取的活性小分子化合物, 由于其具有消炎抗病毒抗血小板聚集和抗过敏等功效而受到人们的关注近年文献报道,DPPT Fig. 7 p- 指磷酸化水平 The effect of DPPT on the ERK1/2/MAPK signal pathway of 图 7 ERK1/2 p-erk1/2 p38mark p-p38mark JNK p-jnk 3 μmol/l NCI-H358 cells 6 μmol/l DPPT 对 ERK1/2/MAPK 信号通路的影响具有诱导肿瘤细胞凋亡抗氧化作用等活性 [6] 本研究显示,DPPT 能明显抑制肺癌 NCI-H358 细胞增殖, 且其抑制作用呈浓度依赖性增加研究还发现, DPPT 具有阻滞细胞周期和诱导细胞凋亡的作用, 并抑制 NCI-H358 细胞的体外迁移 3.2 DPPT 可阻滞肺癌 NCI-H358 细胞周期 Cyclin B1 是第一个被发现的细胞周期蛋白, 其异常表达与肿瘤发生发展以及预后相关 Cyclin B1 的转录调控在细胞周期, 特别是有丝分裂中起重要作用, 其参与细胞周期检测点调控, 维持基因组的稳定 [7] CDK1 是蛋白激酶家族的重要一员, 通过与 Cyclin 形成复合物磷酸化一系列的目标底物, 从而导致细胞周期循环的产生 [8] Cdc25c 是重要的细胞周期调控蛋白, 作为 M 期的诱导物, 在控制细胞周期进入 M 期和 G2 期检验点具有重要作用 [9] 本研究显示, NCI-H358 细胞经 DPPT 处理后, 细胞内 Cyclin B1 Cdc25c 和 CDK1 的表达明显受抑制, 因此 DPPT 抑制肺癌细胞的增殖可能与抑制 Cyclin B1 Cdc25c 和 CDK1 的表达相关 3.3 DPPT 可诱导肺癌 NCI-H358 细胞凋亡 Bcl- 2 蛋白质家族是控制线粒体致凋亡因子释放的主要调节因子,Bcl-2 基因是 Bcl-2 家族的重要成员, 也是迄今研究得最深入最广泛的凋亡调控基因之一 [1] 研究表明,p53 是重要的抑癌基因 [11], 在细胞周期捕获 DNA 修复细胞衰老分化凋亡等过程中均起着重要的作用, 其能修复损伤细胞或除去严重损伤的细胞, 从而避免这些细胞对机体的危害 Caspase 是近年来发现的一组存在于胞质溶胶中的结构上相关的半胱氨酸蛋白酶, 其中 Caspase-3 是细胞凋亡过程中最主要的终末剪切酶, 也是细胞毒性 T 淋巴

5 572 Tianjin Med J, May 216, Vol. 44 No. 5 细胞杀伤机制的重要组成部分, 主要通过干扰 DNA [12] 修复过程参与细胞凋亡本研究中 Western blot 结果显示,DPPT 作用 NCI-H358 细胞后,Caspase-3 和 p53 的表达明显上调, 而 Bcl-2 表达明显下调研究表明,ROS 参与肿瘤的发生发展过程, 少量的 ROS 可以诱发肿瘤的产生, 而过量的 ROS 反而会对 [13] 细胞内的脂类蛋白质和 DNA 造成氧化损伤 ROS 可作为第二信使通过上调促凋亡蛋白 Caspase 等的表达而参与凋亡调控本研究显示,DPPT 可上调细胞内 ROS 水平 MMP9 是 MMPs 中的重要成员之一, 在高浸润性肺癌细胞中大量表达, 与肺癌的 [14] 生长浸润及转移关系最密切本研究还发现, MMP9 的表达水平在 DPPT 处理后明显下调因此,DPPT 诱导细胞凋亡和抑制 NCI-H358 细胞体外迁移与 Caspase-3 p53 Bcl-2 和 MMP9 的表达调控有关 3.4 DPPT 可抑制肺癌 NCI- H358 细胞 ERK1/2/ MAPK 信号通路 ERK1/2 信号通路是最早发现的 Ras/Raf/MAPK 经典的 MAPK 信号转导途径, 参与细胞增殖分化凋亡以及细胞迁移调控过程 p38mapk 可通过增强 c-myc 表达激活 c-jun 和 c-fos 诱导 bax 转位等途径, 参与细胞凋亡的调控而活化的 JNK 能通过激活内源性通路, 使 Bcl-2 参与促凋亡分子的释放 ( 如细胞色素 C), 从而导致 [15] Caspase 的激活和细胞凋亡本研究发现,DPPT 可下调 NCI- H358 细胞中 ERK1/2 p38mapk 和 JNK 的磷酸化水平因此,DPPT 抑制细胞增殖和体外迁移与抑制其上游 ERK1/2/MAPK 信号通路有关在今后的研究中, 本课题组将进一步验证 DPPT 对其他肺癌细胞系的抑制作用, 并考察其对正常上皮细胞的毒性, 探讨其对肿瘤细胞和正常细胞毒性的差别, 为临床应用提供理论依据和实验基础参考文献 [1]Islami F,Torre LA,Jemal A. Global trends of lung cancer mortality and smoking prevalence[j]. Transl Lung Cancer Res,215,4(4): doi:1.3978/j.issn [2]Khaled M,Jiang ZZ,Zhang LY. Deoxypodophyllotoxin:a promising therapeutic agent from herbal medicine[j]. J Ethnopharmacol, 213,149(1): doi:1.116/j.jep [3]Guerram M,Jiang ZZ,Sun L,et al. Antineoplastic effects of deoxy podophyllotoxin,a potent cytotoxic agent of plant origin,on glioblas toma U-87 MG and SF126 cells[j]. Pharmacol Rep,215,67(2): doi:1.116/j.pharep [4]Kim KY,Cho HJ,Yu SN,et al. Interplay of reactive oxygen species, intracellular Ca2 + and mitochondrial homeostasis in the apoptosis of prostate cancer cells by deoxypodophyllotoxin[j]. J Cell Bio chem,213,114(5): doi:1.12/jcb [5]Shin SY,Yong Y,Kim CG,et al. Deoxypodophyllotoxin induces G2/ M cell cycle arrest and apoptosis in HeLa cells[j]. Cancer Lett, 21,287(2): doi:1.116/j.canlet [6]Guan XW,Xu XH,Feng SL,et al. Synthesis of hybrid 4-deoxypodo phyllotoxin- 5- fluorouracil compounds that inhibit cellular migra tion and induce cell cycle arrest[j]. Bioorg Med Chem Lett,216, 26(6): doi:1.116/j.bmcl [7]Ma D,Lu B,Feng C,et al. Deoxypodophyllotoxin triggers parthana tos in glioma cells via induction of excessive ROS[J]. Cancer Lett, 216,371(2): doi:1.116/j.canlet [8]Carpagnano GE,Palladino GP,Martinelli D,et al. Exhaled matrix metalloproteinase-9 in lung cancer[j]. Rejuvenation Res,212,15 (4): doi:1.189/rej [9]Nissim Ben Efraim AH,Eliashar R,Levi-Schaffer F. Hypoxia mod ulates human eosinophil function[j]. Clin Mol Allergy,21,19 (8):1. doi:1.1186/ [1]Zhao J,Han SX,Ma JL,et al. The role of CDK1 in apoptin- in duced apoptosis in hepatocellular carcinoma cells[j]. Oncol Rep, 213,3(1): doi:1.3892/or [11]Wu M,Jiang Z,Duan H,et al. Deoxypodophyllotoxin triggers necroptosis in human non-small cell lung cancer NCI-H46 cells[j]. Biomed Pharmacother,213,67(8): doi:1.116/j.bio pha [12]Wen S,Yang XY,Zhang M,et al. The effect of mirna-7 on che moresistance in esophageal cancer cell TE- 1[J]. Tianjin Med J, 216,44(2): [ 温爽, 杨晓煜, 张敏, 等. mirna-7 对食管癌细胞 TE-1 化疗耐药的影响 [J]. 天津医药,216,44(2): ]. doi: / [13]Fu W,Sui D,Yu X,et al. Protective effects of ginsenoside Rg2 against H2O2-induced injury and apoptosis in H9c2 cells[j]. Int J Clin Exp Med,215,8(11): [14]Moirangthem A,Bondhopadhyay B,Mukherjee M,et al. Simultane ous knockdown of upa and MMP9 can reduce breast cancer pro gression by increasing cell- cell adhesion and modulating EMT genes[j]. Sci Rep,216,6:2193. doi:1.138/srep2193. [15]Guo YX,Ma YJ,Han L,et al. Role of sphingosine 1-phosphate in human pancreatic cancer cells proliferation and migration[j]. Int J Clin Exp Med,215,8(11): ( 收稿修回 ) ( 本文编辑李鹏 )

12 (autophagy),imagej,,, 3 [1-4] (self-eating) Transwelinvasion, 20μmol L -1 LY A549 [5] PI3K/AKT 24h,PBS, [6-8],, ml -1 ( ) 600μL

12 (autophagy),imagej,,, 3 [1-4] (self-eating) Transwelinvasion, 20μmol L -1 LY A549 [5] PI3K/AKT 24h,PBS, [6-8],, ml -1 ( ) 600μL ( )2017 57 5JournalofNanchangUniversity(MedicalSciences)2017,Vol.57No.5 11 LY294002, (, 330006) : LY294002 PI3K/AKT 0 10 15 20 25 30μmol L -1 LY294002(LY294002 ) A549,PBS CCK8 LY294002 A549 ; Westernblot