期李利利杨浩杰张文静等尿脱落足细胞与 %&' 肾病的相关性研究, %&' 肾病 %&' "7 %&' 已成为世界范围内最常见的原发性肾小球疾病占原发性肾小球疾病的. %&' 肾病的临床表现和病理表现多种多样大多数患者病情呈进展性约. 的成人患者在年后会进入终末期肾病需替代治疗维持

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爷施
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1 第卷第期年月西安交通大学学报医学版!" #$# # %&'&!& 临床研究尿脱落足细胞与肾病的相关性研究李利利杨浩杰张文静尹爱平孙吉平西安交通大学医院西安交通大学医学院第一附属医院肾病中心肾内科陕西西安 #$ 摘要目的探讨尿脱落足细胞与 %&' 肾病患者临床病理变化及其严重程度的相关性以期指导治疗及评估预后方法收集 %&' 肾病患者尿液通过间接免疫荧光法检测尿中足细胞蛋白表达判断尿脱落足细胞数量并通过多因素逐步线性回归分析尿脱落足细胞与 %&' 肾病活动性或疾病进展的相关性结果尿脱落足细胞数量 %&' 肾病患者显著高于对照组不同程度蛋白尿组中尿中脱落足细胞数量有统计学差异相关性分析结果显示尿脱落足细胞与 %&' 肾病活动性指标如破坏肾小球毛细血管袢活动性指数 '% 肾小球慢性病变指数 (% 肾间质炎症细胞浸润指数 )% 肾小管萎缩和肾间质纤维化指数 *(% 小动脉慢性病变指数 +(% 总评分肾间质损害程度及肾间质评分之间均呈显著的正相关分别为 $, 和 $ 分别为 ## 逐步线性回归分析显示尿蛋白定量收缩压舒张压以及 '% 指数 *(% 指数进入尿脱落足细胞回归方程结论尿足细胞脱落在一定程度上可以提示 %&' 肾病的活动性病变并与肾小管间质损害相关有可能作为反映疾病进展的重要指标关键词尿脱落足细胞 %&' 肾病肾病活动性指标中图分类号 -$, 文献标志码 ' 文章编号 $#./,./. #$! " #$%&# '% &&$ # $$#$ ' 0%0. 1'." ' ".& 1% '. & 2. & 3)4 5 2 & 6"73 8" 79" ) "7 & ": 73 ')" 3 ;" )4 5 2 & 6"734 5 #$( # "# " ## ( ) (' ""#" &! # " ## " ) (' & ) # # #* "#+" " " # "# " "## "" ### &, "# ##"##"-" *# &.+# "#) (' # &&/ " # " # " "# "" &&, " "# +# # " "0()0,) ),)%,)#"" "# &&&&&$&,&"&$ # &&&# &&#&&" & # & " " "0() ",) " 1 "# +#& "##) (' " " "&) " ) ('& ( ) "# ) ( ) (' 收稿日期..$ 修回日期.#. 基金项目国家自然科学基金资助项目 //! 7""!7"":! )( // 通讯作者孙吉平.9 3! & &" 9 作者简介李利利,/. 女汉族医学硕士研究方向 %&' 肾病的临床相关性研究.9 $$9 网络出版时间.,.$ # 网络出版地址 " 93 " $,, -,$ #9

2 期李利利杨浩杰张文静等尿脱落足细胞与 %&' 肾病的相关性研究, %&' 肾病 %&' "7 %&' 已成为世界范围内最常见的原发性肾小球疾病占原发性肾小球疾病的. %&' 肾病的临床表现和病理表现多种多样大多数患者病情呈进展性约. 的成人患者在年后会进入终末期肾病需替代治疗维持生命给患者及社会带来了巨大的精神和经济负担因此正确认识和评价 %&' 肾病的疾病状态寻找与疾病活动性进展或预后相关指标对临床工作有重要意义肾脏病理是 %&' 肾病诊断的金指标但肾脏穿刺活检是一项有创检查临床上难以通过反复肾脏穿刺来监测疾病的发展近年来血清尿液中的一些无创伤性检查在 %&' 肾病诊断及病理损伤评估的研究已成为热点对临床工作有重要的指导意义足细胞 " 与基底膜和毛细血管内皮细胞一起构成肾小球血液滤过屏障是维持肾小球滤过膜结构和功能正常的主要细胞之一当足细胞受到损伤时细胞会发生一系列的形态改变直至从基 $ 底膜上分离剥脱到肾小囊中随尿液排除 (4 由肾小球内皮细胞和足细胞合成在足细胞成熟过程中固定于肾小球足细胞顶膜对肾 # 小球滤过屏障起负调节作用蛋白是主要的足细胞标志蛋白通常仅以抗用 / 于鉴别足细胞因此我们试图通过检测尿中足细胞的标志性蛋白表达来判断尿脱落足细胞数量并与 %&' 肾病的临床病理进行相关性分析以期为临床上治疗预测疾病进展及预后提供一个新的无创伤的指标 * 材料与方法 * * 研究对象年月至年月在西安交通大学医学院第一附属医院肾脏内科行肾脏穿刺活检明确诊断为原发性 %&' 肾病的患者入选标准行肾脏穿刺活检病理明确诊断为原发性 %&' 肾病其中包括光镜免疫荧光及部分电镜诊断每例标本光镜下肾小球数目个肾小球免疫荧光可见 %&' 或以 %&' 为主的免疫复合物在肾小球系膜区伴有或不伴有毛细血管区沉积强度可分为性别不限年龄岁排除标准排除过敏性紫癜慢性酒精性肝病乙肝病毒相关性肾病强直性脊柱炎银屑病狼疮肾炎等继发性肾脏损害排除伴有其他原发性肾小球肾炎及糖尿病伴发 %&' 肾病排除各种药物有机溶剂以及肿瘤等原因引起的肾脏损害本研究经本院伦理委员会批准参试者均签署知情同意书共收集到原发性 %&' 肾病的患者 / 例有例因光镜下肾小球数目个而剔除最终入组共,$ 例男性 / 例女 / 例男女对照组例系来自我院泌尿外科单纯肾肿瘤切除并排除肾脏其他疾病的患者 * + 资料收集基本资料包括一般情况如年龄性别病程发病时是否伴有高血压浮肿腰痛实验室检查指标包括尿液检查如尿中红细胞尿中上皮细胞尿中管型细胞尿蛋白定量尿微球蛋白血液学检测包括白蛋白血红蛋白胆固醇血微球蛋白尿素氮血肌酐尿酸胱抑素及免疫学指标 %&'%& %& %&;( ( 肾脏穿刺病理指标肾小球肾小管间质评分包括肾小球系膜增生程度肾小球硬化程度肾小管间质评分 -*% 等活动性指标如内皮细胞增生指数 ". % 破坏肾小球毛细血管袢活动性指数 '% 系膜细胞增生指数 ;3 % 系膜基质增多指数 ;3. ;% 肾小球慢性病变指数 (% 肾间质炎症细胞浸润指数 )% 慢性化指标包括肾小管萎缩和肾间质纤维化指数 *(% 及小动脉慢性病变指数 +(% 等 *, 患者分组不同程度蛋白尿分组组尿蛋白定量为 & 组尿蛋白定量为 & 组尿蛋白定量 & 对照组尿蛋白量 & 不同程度肾功能分级分组根据中国人改良后的公式 " :- #< 7= < &"= #,<#, ))"9" 计算患者 " :- 慢性肾脏病 (>8 分期按照 >8?@% 慢性肾脏病临床实践指南分组 (>8 期 :-, 909 #9 (>8 期 :-$/,909 #9 (>8 期 :-,909 #9 (>8 期 :- 介于,909 #9 (>8 期 :- 909 #9 或透析病理分型按照 0"" 病理分级将 %&' 肾病分为级标准如下级表现为肾小球绝大多数正常偶尔轻度系膜增宽节段伴或不伴细胞增生间质基本正常级表现为肾小球示局灶系膜增殖和硬化罕见小的新月体间质基本正常级表现为弥漫性系膜增殖和增宽偶尔局灶节段偶见小新月体和粘连局灶间质水肿偶尔细胞浸润罕见小管萎缩级表现为重度弥漫性系膜增生和硬化部分或全部肾小球硬化可见新月体小管萎缩间质浸润可见间质泡沫细胞级表现为病变性质类似型但更严重肾小球新月体形成间质类似病变但更严重按照肾小管间质损害 * 0 程度分为级标准如下级肾小管间质基本正常轻度肾小管变性

3 $ 西安交通大学学报医学版第卷扩张级小管萎缩间质纤维化范围散在炎细胞浸润级小管萎缩间质纤维化范围散在和或弥漫炎细胞浸润级小管萎缩间质纤维化范围散在和或弥漫炎细胞浸润 * - 方法 * - * 主要试剂小鼠抗人单克隆抗体美国 %6 7 &" 公司 :%*( 标记的山羊抗小鼠 %& 牛血清白蛋白 A '* $ 试剂盒均购自北京中杉金桥生物技术有限公司碘化吡啶 % 美国 &9 公司甘油北京中杉金桥生物技术有限公司 * - + 免疫荧光法检测尿中足细胞表达留取肾脏穿刺活检当日清洁晨尿 90 离心 79 9 弃上清液沉渣混匀取 0 涂片于相差显微镜观察并计数各类细胞及管型初步了解尿沉渣中有无单个核细胞取 $ 0 沉渣置于自动涂片离心机 (7 #$ 中离心 79 9 取出玻片室温干燥 B 丙酮固定 9 自然干燥将干燥后的载玻片以 A 漂洗 9 次置入 *7 4. 浸泡 9 A 漂洗 9 次牛血清白蛋白 A ' 封闭室温孵育 9 滴加第一抗体小鼠抗人单克隆抗体稀释 B 过夜 B 冰箱拿出后在室温下暖孵 9 滴加第二抗体山羊抗小鼠抗体 :%*( # 稀释 #B 孵育 9 孵育结束时不用 A 漂洗复染细胞表 * 不同程度蛋白尿水平肾病尿脱落足细胞数量的比较核滴加碘化吡啶 % 染核室温避光孵育 9 A 漂洗 9 次甘油封片采用双盲法在荧光显微镜下观察绿色荧光波长 / 9 蓝色荧光波长 9 每份标本低倍镜观察全片高倍确认足细胞后摄像计算机储存选择全片左上左下右上右下中间等位置个高倍镜视野记录完整的足细胞个数 *. 统计学方法所有统计处理用统计软件分析计量资料以表示计量资料的多组间比较采用单因素方差分析采用多因素逐步线性回归分析进行危险因素评估以为差异有统计学意义 + 结果 + * 尿脱落足细胞数量按照蛋白尿程度分组病例组尿脱落足细胞数量显著高于对照组每个高倍镜下分别为 / 和 $#, 不同程度蛋白尿组之间也存在统计学差异表按照肾功能不同分组病例组尿脱落足细胞数量显著高于对照组随着肾功能进展尿脱落足细胞数量也逐渐增多表按照不同病理分型分组病例组尿脱落足细胞数量显著高于对照组随着病理改变加重尿脱落足细胞数量也逐渐增多表按照肾小管间质损害分组病例组尿脱落足细胞数量显著高于对照组肾小管间质损害越重尿脱落足细胞数量也越多表 *( )"!9"7 )!77 "3 %&' "7 )"7" "&7"" )7 "!7 检测指标对照组组组组尿脱落足细胞 $#, #, / /,# 表 + 不同肾功能肾病尿脱落足细胞数量的比较 **"!9"7 )!77 "3 %&' "7 )"7"7")!3 检测指标对照组组, 组组 / 组组尿脱落足细胞 $#, # # #/, #, $ /# 表, 不同病理分级肾病尿脱落足细胞数量的比较 **"!9"7 )!77 "3 %&' "7 )"7"& &7 & 检测指标对照组组 # 组 # 组组, 组 / 尿脱落足细胞 $#,,$ $ /$,$# #$, $, 表 - 不同肾小管间质损害分级肾病尿脱落足细胞数量的比较 **"!9"7 )!77 "3 %&' "7 )"7" "&7"" ) "739 &" 检测指标对照组组, 组组组尿脱落足细胞 $# $ $/ # $ $,

4 期李利利杨浩杰张文静等尿脱落足细胞与 %&' 肾病的相关性研究 $ + + 脱落足细胞与肾脏病理的相关性分析尿脱落足细胞数量与 "%;3 %;3;% 之间无相关性分别为 /,,/ 与 '% (% )% *(%+(% 总评分之间均呈显著的正相关相关系数分别为 #$ #, +, 逐步线性回归分析尿脱落足细胞线性回归分析尿蛋白定量收缩压舒张压以及 '%*(% 进入回归方程回归方程尿脱落足细胞 # 尿蛋白 = $ 收缩压 # 舒张压 $'%$,*(% 尿脱落足细胞与上述指标有显著的关系可以显著影响尿脱落足细胞数量表表. 尿脱落足细胞线性回归分析 *-"&7" )!77 "3 项目回归系数 ( 3 尿蛋白定量 # $ 收缩压 $ = 舒张压 # '% $ *(% $, $#, 讨论 %&' 肾病 %&' "7 %&' 是以肾小球系膜细胞和或基质增生伴有系膜区 %&' 或者 %&' 为主的免疫复合物的颗粒状沉积电镜下系膜区可见大量电子致密物沉积为特征的一类肾小球疾病既往研究多集中于系膜细胞在 %&' 肾病的肾小球硬化中的作用但近来研究表明足细胞的损伤与 %&' 肾病之间有密切的联系足细胞除通过足突构成分子屏障外电荷屏障也是阻止白蛋白从肾小球滤过的重要机制足细胞蛋白正常表达可以保证肾小球滤过膜电荷屏障的完整性其抗粘附作用可, 使足突裂隙隔膜得以维持目前公认的 %&' 肾病预后不良的因素有大量蛋白尿肾功能不全发病时高血压等特别蛋白尿是影响 %&' 肾病的独立危险因素而足细胞的损伤常常与蛋白尿密切相关本研究结果提示尿中表达与蛋白尿程度呈正相关这与 '. >'; -' 研究慢性肾小球肾炎伴高胆固醇血症患者尿蛋白定量与尿足细胞数量呈正相关相一致肾小球足细胞受损而导致足细胞数目的减少不仅可引起蛋白尿的发生而且是肾小球硬化的始动环. 节而 1 等研究表明尿中足细胞可能在反映肾小球损伤方面较尿蛋白更为敏感因此尿足细胞数量有助于判断肾小球损伤程度及预后当足细胞受到损伤后细胞发生一系列的表型改变早期表现为足突回缩整个足突的消失随后出现足细胞胞体的缩小假囊形成阴离子电荷减少最终从基底膜上分离剥脱到肾小囊中这样肾小球的滤过膜发生损伤引起肾小球滤过率的改变即滤过率下降 ;'((? % 等对大鼠的研究发现足细胞数目的减少是足细胞功能缺陷和肾小球滤过功能障碍的决定因素本研究发现肾功能受损越严重尿脱落足细胞数量越多提示肾功能受损越严重肾小球足细胞脱落越多肾小球足细胞数量越少研究表明足细胞缺失与肾小球硬化的发生密切相关当足 $ 细胞数减少时肾小球硬化即开始本研究发现足细胞数量与系膜细胞评分之间无相关可能与肾小球系膜细胞损害无直接关联但是尿中脱落足细胞数量与肾小球硬化评分肾间质评分及活动性指标 '% )% 间呈正相关推测尿中表达可能提示存在活动性病变与慢性病变指标 (%*(%+(% 均呈正相关性证实了足细胞脱落只有在肾小球硬化达到时才能脱落入尿中推测尿中表达存在肾小球硬化的基础可能是 %&' 肾病的进展因素之一既往有学 # 者发现 %&' 肾病尿中足细胞数量与肾脏病理活动性病变相关连续监测结果得出累计足细胞脱落量与病理慢性病变的加重相关提示尿中足细胞作为一项无创指标不仅能反映病理活动性也是疾病进展因素之一对 %&' 肾病患者长期随访研究发现尿足细胞持续阳性者疾病持续进展有研究表明足细胞与蛋白尿肾小球硬化及慢性肾损伤进展密切相关足细胞的减少及丢失已成为反映肾小球损伤严重程度和疾病进展的重要观测指标肾小球硬化肾间质纤维化高血压大量蛋白尿和肾功能损害是学术界意见比较一致的影响 %&' 肾病进展的危险因素由于肾小球硬化和肾间质纤维化是不可逆的损害因此是预后不良强有力的危险因素本研究发现尿蛋白定量血压 '%*(% 对尿脱落足细胞有显著影响根据病理指标推测尿脱落足细胞不仅提示 %&' 肾病的活动性病变且与慢性基础病变有一定关系推测可能是 %&' 肾病进展因素之一本研究样本量有限仅能发现尿脱落足细胞与临

5 $ 西安交通大学学报医学版第卷床病理变化存在相关性此外本研究为横断面研究未随访患者病情进展情况加入随访资料可能能更有力地说明尿脱落足细胞可能是 %&' 肾病进展因素之一参考文献 ) $ ) &."#" ",("&, &" ) $$,*,& 刘刚马序竹邹万忠等 & 肾活检患者肾脏病构成十年对比分析 & 临床内科杂志 /*//& ($$!&) ( " # *$, & " #*,& 2 (!),3 0&' " #) ( "#" # "# &$' #,*,$& $!) (,4.. (5&' * ) ( ) ( & $ $) ##*,,& $ 王永钧 & 肾脏病足细胞损伤及其防治研究进展 & 医学研究杂志 #$*& #(.2( & "# ### " "#+ ' +# # "- &,.+ '# $*$,& /..6!('' (4 3.0.& "# " "#("# " # &',# #$$*$$&,.6$ (7 2/3!($.7 (66(! /&!#* # +"# #- "#+ * "# " #"&/,,,#,,,*,$& $ ('('2$& "# 8 6 "# &" ) $$, *#& '( (! 6($ )5(!(, )63 (6( &.# # " "# ## &'2 # #,/*/& 5(.('2.6!9 900)'$.&( "## &,3 ',,*& $!.. $/. 3..'(2)!(' / & # # * #*& ##&( $#',/*,,& !('' ('.6 & "* ### " * &( $# '$ $ #*#&!(,,3')2/3'3!.)!/.')0')( & * ##"#" "# " 8 &($ $/*& $)! /3'0 &2 +#* 1 "#" &( " 2,$*,#& # (6(!5('(0) (6( ) (6()&,+#* "# # " ) (* "$#* #&, ( $#'#*/& 编辑卓选鹏

西安交通大学学报医学版第卷 $%& 肾病 $%& "6* 是世界范围内最常见的原发性肾小球疾病发病率每年高达例万人其中患者在疾病进展的年内会发展到终末期肾脏疾病,$11&$ 等称的 $%& 肾病患者从无症状到终末期肾病只需要几月至几年时间既往认为 $%& 肾病男性预后较差但对

西安交通大学学报医学版第卷 $%& 肾病 $%& 6* 是世界范围内最常见的原发性肾小球疾病发病率每年高达例万人其中患者在疾病进展的年内会发展到终末期肾脏疾病,$11&$ 等称的 $%& 肾病患者从无症状到终末期肾病只需要几月至几年时间既往认为 $%& 肾病男性预后较差但对第卷第期年月西安交通大学学报医学版!"#$## %&'&!& 临床研究不同原发性肾病患者临床病理特征的对比分析李利利王阿妮庄稼孙吉平尹爱萍西安交通大学医院陕西西安 # 西安交通大学第一附属医院肾病中心陕西西安 # 摘要目的探讨不同原发性 $%& 肾病患者的临床病理特点方法对经肾脏活检确诊的 ' 例 $%& 肾病患者不同的临床表现实验室检查及肾脏病理进行对比分析