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1 红细胞免疫球在肾小球肾炎诊断中的应用韦晓明, 丁振若, 郑善銮, 苏明权, 樊爱玲, 郝晓柯 ( 第四军医大学西京医院全军临床检验医学中心, 陕西西安,710032) 摘要目的本试验的主要目的是检测尿液沉渣涂片中的一种特异细胞团, 我们将其命名为红细胞免疫球, 并对其在不同疾病中的阳性率进行了调查研究, 探讨其在临床诊断中的意义方法观察 3221 例数种疾病患者尿液沉渣, 计算其红细胞免疫球检出率, 并对红细胞免疫球的检出与红细胞变形率间的相关性进行了分析结果形态学方法观察发现红细胞免疫球由小红细胞紧密聚集而成 IgA 肾病紫癜性肾小球肾炎系膜增生性肾小球肾炎患者尿中的红细胞免疫球检出率分别为 66.7% 67.7% 和 68.3%, 与高血压肾病糖尿病肾病肾盂肾炎膀胱炎尿道炎泌尿系肿瘤结石等疾病中的红细胞免疫球检出率具有显著统计学意义 (P<0.01) 结论红细胞免疫球是肾性红细胞的一种特殊聚集方式, 对肾性红细胞的鉴别, 特别是免疫复合物沉淀引起的肾小球肾炎的诊断有重要的临床意义关键词红细胞免疫球;IgA 肾病 ; 紫癜性肾小球肾炎 ; 系膜增生性肾小球肾炎 Application of Erythrocyte-Immunocomplex Clusters determination in glomerulonephritis ( Center of Clinical laboratory medicine of People s Liberation Army, Xijing Hospital, Fourth Military Medical University, xi an ) Wei Xiaoming, Ding Zhenruo, Zheng Shanluan, Su Mingquan, Fan Ailing, Hao Xiaoke Abstract Objective To explore the clinical values of Erythrocyte-Immunocomplex Clusters, a special cell clusters in urine, detected by microscope in the diagnosis of glomerular nephritis. Method An observation of urinary sediment smear staining was performed on 3221 patients to calculate the percentage of Erythrocyte-Immunocomplex Clusters. And an analysis of the occurrence of Erythrocyte-Immunocomplex Clusters and percentage of red blood cell deformation were performed to identify the correlation between them. Results Several microcyte aggregated tightly results in the formation of the Erythrocyte-Immunocomplex Clusters in morphology. The percentages of Erythrocyte-Immunocomplex Clusters in IgA nephropathy, 作者单位 :710032, 陕西西安第四军医大学西京医院全军临床检验医学中心通讯作者 : 郝晓柯, 电子信箱 :haoxkg@fmmu.edu.cn

2 purpuric glomerulonephritis and mesangial proliferative glomerulonephritis were 66.7% 67.7%and 68.3%, respectively. There showed significant difference in comparison with the percentage of Erythrocyte-Immunocomplex Clusters in non-renal hematuria, such as diabetic nephropathy, pyelonephritis, cystitis and urethritis et al (P<0.01). Conclusion The occurrence of Erythrocyte-Immunocomplex Clusters has great values in diagnosis of glomerular nephritis, especially induced by the deposition of immunocomplex. Keywords Erythrocyte-Immunocomplex Clusters ; IgA nephropathy ; purpuric glomerulonephritis;mesangial proliferative glomerulonephritis 血尿是泌尿系统疾病常见的临床表现之一血尿根据其来源可分为肾小球性血尿和非肾小球性血尿, 目前, 通过显微镜对尿液红细胞进行形态学观察成为辨别肾性和非肾性血尿最方便快捷的手段 [1,2], 但是, 由于尿液的渗透压 PH 值运动等多种原因均可引起尿液红细胞形态的变化, 这为肾性来源或非肾性来源红细胞的鉴别诊断带来困难我院检验科采用光学显微镜对 2000 年 1 月 ~2009 年 6 月期间泌尿外科及肾内科的住院患者尿液中红细胞形态进行观察, 发现在肾小球肾炎的患者尿液中, 有的红细胞聚集成特殊的细胞团块并将之命名为红细胞免疫球, 本研究旨在探讨红细胞免疫球的检出对肾小球肾炎的诊断鉴别诊断的特异性和临床意义材料和方法一研究对象 1. 实验组 : 本研究共观察我院泌尿外科肾内科期间的住院患者尿液沉渣涂片 3221 例, 男性患者 2386 例, 女性患者 835 例, 年龄在 3~69 之间, 平均年龄 22.8 岁, 其中经肾脏穿刺活检确诊为 IgA 肾病患者 1039 例 ; 确诊为紫癜性肾小球肾炎患者 127 例 ; 系膜增生性肾小球肾炎 862 例 ; 确诊为高血压肾病患者 173 例 ; 确诊为糖尿病肾病患者 293 例经过 X 线肾盂造影确诊为肾盂肾炎患者 262 例 ; 经膀胱镜尿道镜 CT 扫描 MRI 检查及 X 线肾盂造影确诊为泌尿系统肿瘤患者 25 例, 其中膀胱肿瘤患者 18 例, 输尿管肿瘤患者 3 例, 肾盂肿瘤患者 4 例 ; 膀胱炎患者 112 例 ; 尿道炎患者 96 例 ; 肾盂结石患者 156 例 ; 输尿管结石患者 76 例 2. 对照组 : 正常对照组 582 例均来自我院体检健康者, 尿常规检测未发现血尿, 肾功能检查以及肾脏 B 超显示各项指标均正常其中男 367 例, 女 215 例, 年龄在 8~62 岁之间, 平均年龄 23.6 岁

3 二方法 1. 尿液沉渣涂片观察 [1,3] : 取患者新鲜中段晨尿 10ml 于标准离心机经 1500r/min 离心 5min, 弃上清液, 留取 0.5ml 尿液混匀, 取 0.1ml 沉渣涂片, 每例标本涂一张沉渣片, 用高倍镜全片检查寻找可疑的红细胞免疫球, 若全片仅 1 个红细胞免疫球亦按阳性计算 2. 尿液红细胞变形率观察 [3] : 取患者新鲜中段晨尿 10ml 经 1500r/min 离心 5min, 弃去上清液, 留取 0.5ml 尿液混匀, 取 0.1ml 沉渣涂片, 每例标本涂一张沉渣片, 用高倍镜计数 100 个红细胞, 计算出红细胞变形率, 变形率超过 80% 为肾性红细胞 3. 尿液红细胞荧光染色 : [4] 取患者新鲜中段晨尿 10ml 经 1500r/min 离心 10min, 弃上清,10ml 生理盐水洗涤一次, 离心取沉渣涂片, 自然风干后, 丙酮固定 10min, 将固定好的标本 PH6.0 磷酸盐缓冲液洗涤一次, 用滴管将荧光抗体 ( 荧光标记的 IgA IgG IgM 等 ) 滴加在涂片上, 湿盒中 37 孵育 40min, 然后用 PH6.0 的磷酸盐缓冲冲洗三次, 滴加甘油缓冲液荧光显微镜下检查 $ 3. 统计学分析 : 采用 SPSS12.0 统计软件进行数据处理, 对实验数据进行 X 2 检验, 以 P<0.05 为检验水准结果一形态学观察 : 1. 红细胞免疫球在高倍光学显微镜下显示为紧密聚集黏附成团的红细胞团块 ( 图 1, 2), 红细胞免疫球一般由小红细胞组成, 可见细胞团呈圆形或椭圆形, 形状较为规则, 细胞间结合紧密, 部分融合而普通的红细胞聚集细胞间结合较疏散, 多通过粘液丝粘连在一起, 形状不规则, 中心细胞一般没有融合现象红细胞免疫球经过兔抗人 Ig 荧光染色后, 呈绿色强阳性荧光 ( 图 3,4), 这说明在红细胞免疫球的表面应该包裹有免疫球蛋白或者免疫复合物, 这也证明了红细胞免疫球是由肾性红细胞组成, 它的出现预示肾脏疾病的发生图 1 湿片中红细胞免疫球的形态 ( 40) 图 2 湿片中红细胞免疫球的形态 ( 40)

4 图 3 干燥片中红细胞免疫球形态 ( 40) 图 4 抗人 Ig 荧光染色的红细胞免疫球 ( 40) 二临床病例观察本研究共观察患者尿液沉渣涂片 3221 例, 如表 1 所示, 与传统的红细胞变形率诊断方式相比, 通过检测红细胞免疫球阳性尿液的方法诊断肾小球肾炎的确诊率虽较红细胞变形率为低, 但此法具有良好的特异性表现为红细胞免疫球只出现在由于免疫复合物沉淀引起的各种肾小球肾炎中, 如 :IgA 肾病紫癜性肾小球肾炎系膜增生性肾小球肾炎等, 具有较高的检出率, 阳性率均 >60%; 而在其它肾脏损伤如高血压肾病糖尿病肾病和一些其它泌尿系统疾病, 如结石肾盂肾炎尿道炎肿瘤等疾病中则几乎见不到红细胞免疫球诸如高血压肾病及糖尿病肾病等患者的尿液中红细胞变形率也较高, 所以仅靠红细胞变形率来诊断肾脏疾患还有很多不足, 红细胞免疫球的检出可以对肾性红细胞进行进一步的分类, 使我们的诊断更加精确表 1 数种泌尿系统疾病红细胞免疫球检出率及红细胞变形率统计疾病种类例数红细胞免疫球变形率 80% 例数 % 例数 % IgA 肾病紫癜性肾炎系膜增生性肾炎高血压肾病 / 糖尿病肾病 / 肾盂肾炎肿瘤 25 0 / 膀胱炎 / 6 5.4

5 尿道炎 96 0 / 肾盂结石 / 输尿管结石 76 0 / 讨论目前尿液红细胞形态在泌尿系统疾病的诊断中占有举足轻重的位置, 它不但方便快捷, 而且无痛苦, 但是仅仅通过红细胞的形态比率, 很容易造成一定的漏诊和误诊, 在本研究中, 非肾性红细胞中, 由于尿液渗透压 PH 值等原因, 约 13.3% 患者尿液红细胞形态 >80%, 而容易被误认为是肾性红细胞 ; 同时, 大约 19.8% 肾小球疾病的患者, 因为治疗用药运动等原因, 尿液红细胞形态 <80%, 而被漏诊所以仅靠尿液红细胞形态来判定是否为肾性红细胞, 还不能完全满足临床需要本研究中, 用红细胞变形率配合红细胞免疫球的检出, 虽然在灵敏度上没有很好的提高, 但是在特异性上有了很大的改进, 将假阳性率从 13.3% 降低到 0.3%, 有明显的统计学差异 (P<0.01) 红细胞免疫球是我们在数十年临床实践中发现的一种对于免疫复合物沉淀引起的肾小球肾炎诊断具有很好的特异性一种尿沉渣成分 IgA 肾小球肾炎紫癜性肾小球肾炎和系膜增生性肾小球肾炎的发病机理非常相似 [5], 除紫癜性肾小球肾炎有明显的诱因外,IgA 肾病和系膜增生性肾小球肾炎病因目前并不明确但是它们均是因为 IgA 或者 IgG IgM 的免疫复合物沉淀于肾小球系膜, 引起肾小球系膜增生, 从而进一步引起肾小球节段性损伤硬化, 造成肾脏功能受损在肾脏组织穿刺活检病理片中, 均可看到肾小球系膜上有致密免疫复合物沉淀我们所发现的红细胞免疫球也特异地出现在这三种疾病患者的尿沉渣中,IgA 肾病中检出率是 64.2%, 紫癜性肾小球肾炎中检出率是 63.8%, 系膜增生性肾小球肾炎中检出率是 68.3%, 而在其它疾病中, 检出率几乎为零, 有明显的统计学差异 (P<0.01) 所以红细胞免疫球的检出, 使尿液沉渣检测检测不仅仅局限在判断肾性和非肾性红细胞, 还对肾小球肾炎的进一步分型有一定帮助免疫复合物是引起肾炎的常见病因, 但尿中红细胞上包裹 Ig 分子的机制目前尚不清楚据报道, 肾性血尿中红细胞上包裹 Tamm-Hors-fall 蛋白, 已被证实它主要形成于 Henle s 袢升支, 我们认为在这里包裹 Ig 的可能性较大, 可能因为此处血流速度较慢, 红细胞和 Ig 有足够的接触时间, 从而使 Ig 分子能包裹到红细胞上在用荧光抗体对尿中红细胞 Ig 染色时, 我们应用抗 IgG IgA IgE 及 IgM 荧光抗体, 进行对肾源性红细胞定位染色检查, 为阐明

6 尿液中红细胞的来源提供诊断依据直接免疫荧光染色对尿液中红细胞荧光定位的方法能得出很明确的结论, 而且不受尿内容物的影响尿中红细胞直接免疫荧光染色的方法, 在特异性及临床适用性上比形态学检查有明显的优越性 [4] 本实验中, 我们应用免疫荧光染色的方法对红细胞免疫球进行染色, 发现所有红细胞免疫球均显示强阳性, 这也进一步证明, 组成红细胞免疫球的小红细胞主要来源于肾脏, 并且和红细胞的 Ig 包裹有关本研究可以看出红细胞免疫球的形成并不单纯是细胞形态学上的改变, 还可能还与免疫反应相关, 但其形成的机制目前尚不清楚, 仍需继续研究证实, 然而红细胞免疫球的发现和检测将对免疫复合物沉淀相关的肾小球肾炎的诊断和其与其他泌尿系统疾病的鉴别诊断有着重要的临床意义参考文献 [1] 苏明权, 丁振若, 郑善銮等, 尿液红细胞分型在肾性及非肾性红细胞鉴别诊断中的意义 [J]. 现代检验医学杂志,2005;20(4): [2] Huussen J, Koene RA, Hilbrands LB. The (fixed) urinary sediment, a simple and useful diagnostic tool in patients with haematuria. Neth J Med Jan;62(1):4-9. [3] 郑善銮, 苏明权, 丁振若等, 两种尿液红细胞检查方法在肾病鉴别诊断中的意义 [J]. 第四军医大学学报,2003;24(23): [4] 丁振若苏明权徐焰等, 尿液红细胞荧光检查方法及其在肾病诊断中的应用 [J]. 诊断学理论与实践,2004;3(5): [5] Eric G. Neilson,WilliamG.Couser. 免疫肾脏病学. 2 版辽宁科学技术出版社, 2006;

益生菌的科学定义：　　是指改善宿主微生态平衡而发挥有益作用,达到提高宿主健康水平和健康状态的活菌制剂及其代谢产物，益生菌存在于地球上的各各角落里面，动物体内有益的细菌或真菌主要有：乳酸菌、双歧杆菌、放线菌、酵母菌等。目前世界上研究的功能最强大的产品主要是以上各类微生物组成的

益生菌的科学定义：　　是指改善宿主微生态平衡而发挥有益作用,达到提高宿主健康水平和健康状态的活菌制剂及其代谢产物，益生菌存在于地球上的各各角落里面，动物体内有益的细菌或真菌主要有：乳酸菌、双歧杆菌、放线菌、酵母菌等。目前世界上研究的功能最强大的产品主要是以上各类微生物组成的微生物与人类健康 - 益生菌益生菌是指改善宿主微生态平衡而发挥有益作用, 达到提高宿主健康水平和健康状态的活菌制剂及其代谢产物益生菌存在于地球上的各各角落里面, 动物体内有益的细菌或真菌主要有 : 乳酸菌双歧杆菌放线