66 董 蕊, 郑 毅 男 * ( 吉 林 农 业 大 学 中 药 材 学 院, 吉 林 长 春 130118) 以 14 种 中 国 单 花 蜜 为 原 料, 比 较 所 含 有 的 17 种 游 离 氨 基 酸 含 量 差 异, 确 定 样 品 中 主 要 以 脯 氨 酸 为 主, 占 游 离 氨 基 酸 总 量 65.27%, 平 均 含 游 离 氨 基 酸 349.829mg/kg 评 估 14 种 单 花 蜜 体 外 抗 氧 化 活 性, 得 到 单 花 蜜 对 亚 硝 酸 盐 抑 制 能 力 的 EC50 值 从 (0.55 ± 0.021)g/mL 到 (0.25 ± 0.034)g/mL 之 间 变 化, 广 西 的 抑 制 能 力 最 强 ;14 种 单 花 蜜 中 脯 氨 酸 游 离 氨 基 酸 含 量 差 异 分 别 与 对 亚 硝 酸 盐 抑 制 能 力 的 相 关 系 数 R = 0.7513 和 R = 0.8051 说 明 蜂 蜜 中 氨 基 酸 类 物 质 影 响 抗 氧 化 活 性, 其 含 量 与 对 亚 硝 酸 盐 的 抑 制 能 力 呈 现 正 相 关 关 系, 蜂 蜜 作 为 潜 在 的 功 能 性 食 品 更 应 值 得 关 注 蜂 蜜 ; 氨 基 酸 ; 抗 氧 化 ; 功 能 性 食 品 Effects of Amino Acid Content on Antioxidant Activity of Honey from Different Sources and Geographic Origins DONG Rui,ZHENG Yi-nan* (College of Traditional Chinese Medicine, Jilin Agricultural University, Changchun 130118, China) Abstract :Significant differences were found in 17 free amino acids among 14 honey samples from different regions of China and different flowers. The result showed that proline was the major free amino acid and constituted over 65.27% of total free amino acids, averaging at about 349.829 mg/kg in the honey samples. The antioxidant ability of honeys was evaluated by - radical NO2 scavenging assay. The results obtained showed that all the honey samples had antioxidant activity, with an EC50 ranging from (0.55±0.021) to (0.25±0.034) g/ml. Among these samples, longan honey from Guangxi had the highest antioxidant ability. Correlation analysis revealed that the antioxidant ability of honeys was correlated with proline content and the contents of 17 total free amino acid, with R = 0.7513 and R = 0.8051 respectively. Conclusion: Free amino acids in honeys are positively correlated with - NO2 radical scavenging activity. As a known functional food, honey may have more health benefits than previously reported and more attention should be paid to it for its full utilization. Key words:honey;free amino acids;antioxidant ability;functional foods 中 图 分 类 号 :TS207.3 文 献 标 识 码 :A 文 章 编 号 :1002-6630(2011)21-0066-05 人 类 每 天 都 遭 到 自 由 基 成 千 上 万 次 的 攻 击, 要 降 低 自 由 基 对 人 体 的 危 害, 科 学 家 自 50 年 代 以 来 一 直 致 力 于 [1] 在 人 体 内 构 筑 一 道 抗 自 由 基 氧 化 抗 衰 老 的 防 线 除 了 依 靠 体 内 自 由 基 清 除 系 统 外, 还 要 寻 找 和 发 掘 外 源 性 [2] 自 由 基 清 除 剂, 即 抗 氧 化 剂 有 关 抗 氧 化 剂 如 何 在 人 体 内 消 除 自 由 基 及 其 抗 氧 化 作 用 的 研 究 已 在 新 世 纪 医 学 保 健 领 域 中 占 有 重 要 地 位, 具 有 清 除 自 由 基 功 效 的 抗 氧 [3] 化 作 用 的 功 能 性 食 品 越 来 越 受 到 人 们 重 视 蜂 蜜 被 作 为 天 然 糖 的 使 用 已 有 8000 多 年 历 史, 在 [4] 传 统 医 学 中, 蜂 蜜 还 具 有 保 健 和 治 疗 作 用 以 往, 人 们 将 蜂 蜜 的 药 用 和 保 健 功 能 归 因 于 蜂 蜜 的 抑 菌 性 质, 然 而 当 人 们 越 来 越 关 注 抗 氧 化 性 功 能 食 品 时 候, 又 证 实 蜂 蜜 在 与 不 稳 定 的 氧 分 子 ( 即 自 由 基 ) 的 破 坏 斗 争 中 扮 演 着 保 护 人 类 健 康 的 重 要 角 色, 蜂 蜜 具 有 抗 氧 化 的 作 用, 可 有 效 减 少 心 脏 疾 病 癌 症 白 内 障 免 疫 系 统 能 力 降 [5-6] 低 和 不 同 的 炎 症 等 疾 病 风 险, 这 主 要 是 由 于 蜂 蜜 成 分 中 含 有 抗 坏 血 酸 VE 类 胡 萝 卜 素 以 及 多 酚 类 化 合 物, 这 些 物 质 不 仅 具 有 多 种 生 物 活 性, 而 且 有 很 强 的 [7-8] 抗 氧 化 活 性, 尤 其 是 蜂 蜜 中 的 多 酚 类 ( 黄 酮 类 和 酚 酸 [9-10] 类 ) 化 合 物 已 成 为 近 年 来 的 研 究 热 点 除 此 之 外, 蜂 蜜 中 还 含 有 氨 基 酸 类 物 质, 对 清 除 自 由 基 是 否 有 影 响, [11-12] 国 外 学 者 已 有 一 些 研 究 报 道 本 实 验 以 中 国 产 的 7 种 单 花 蜜 为 样 本, 深 入 研 究 不 同 品 种 地 域 的 单 花 蜜 中 氨 基 酸 含 量 差 异 和 对 亚 硝 酸 盐 抑 制 能 力 影 响 的 相 关 收 稿 日 期 :2011-06-30 作 者 简 介 : 董 蕊 (1975 ), 女, 讲 师, 博 士, 研 究 方 向 为 天 然 产 物 化 学 与 新 药 开 发 E-mail:drjlau@126.com * 通 信 作 者 : 郑 毅 男 (1945 ), 男, 教 授, 博 士, 研 究 方 向 为 天 然 产 物 化 学 与 新 药 开 发 E-mail:zhenyinan@tom.com
基 础 研 究 食 品 科 学 2011, Vol. 32, No. 21 67 性, 旨 在 为 进 一 步 寻 找 蜂 蜜 抗 氧 化 活 性 的 成 分 基 础, 扩 大 中 国 单 花 蜜 作 为 功 能 性 食 品 的 市 场 应 用 潜 力 1 材 料 与 方 法 1.1 材 料 与 试 剂 ( 豆 科 广 布 野 豌 豆 (Vicia cracca L.) 和 长 绒 毛 野 豌 豆 (Vicia villosa roth L.))(H1: 云 南 ;H2: 云 贵 高 原 ); ( 马 鞭 草 科 荆 条 (Vitex negundo var. heterophylla (Franch) Rehd.))(H3: 北 京 郊 区 ;H 4: 晋 中 灵 石 县 ); ( 无 患 子 科 荔 枝 (Litchi chinensis Sonn.))(H5: 广 东 ;H 6: 福 建 ); ( 无 患 子 科 龙 眼 ( Dimocarpus longan Lour.))(H7: 广 东 ;H 8: 广 西 ); 益 母 草 ( 唇 形 科 益 母 草 (Leonurus heterophyllus Sweet.))(H9: 新 疆 ; H 10: 湖 南 ) ; 蒲 公 英 ( 菊 科 蒲 公 英 ( Taraxacum mongolicum Hand.))(H11: 吉 林 白 山 ;H12: 吉 林 临 江 ); 五 味 子 ( 木 兰 科 五 味 子 (Schisandra chinensis (Turcz.) Baill.)) (H13: 陕 西 汉 中 市 ;H 14: 长 白 山 ), 以 上 蜂 蜜 均 为 浅 琥 珀 色, 由 养 蜂 人 2009 2010 年 收 集, 汪 氏 蜜 蜂 园 提 供 的 未 经 任 何 加 工 处 理 的 原 蜜, 在 0~4, 避 光 条 件 贮 存 混 合 氨 基 酸 标 准 溶 液 :17 种 氨 基 酸 ( 除 胱 氨 酸 浓 度 为 1.25μmol/mL 外, 其 余 16 种 氨 基 酸 浓 度 均 为 2.5μmol/mL); 内 标 物 正 亮 氨 酸 (Nle) 异 硫 氰 酸 苯 酯 (PITC) 三 乙 胺 (TEA) 美 国 艾 杰 尔 公 司 提 供 α- 生 育 酚 抗 坏 血 酸 美 国 Sigma 公 司 ; 乙 腈 ( 色 谱 纯 ) 美 国 Fisher 公 司 ;DOWEX 50WX8-200 离 子 交 换 树 脂 美 国 陶 氏 公 司 ; 水 为 去 离 子 超 纯 水 ; 其 余 试 剂 为 分 析 纯 1.2 仪 器 与 设 备 岛 津 高 效 液 相 色 谱 仪 (LC-10ATvp 泵 两 台 SPD- 10Avp 检 测 器 CTO-10Avp 柱 温 箱 SCL-10Avp 系 统 控 制 器 ) SHIMADZU-2450 系 列 紫 外 - 可 见 光 谱 仪 日 本 岛 津 公 司 1.3 方 法 1.3.1 蜂 蜜 中 游 离 氨 基 酸 的 测 定 1.3.1.1 样 品 的 制 备 与 衍 生 精 密 称 取 10g 蜂 蜜 样 本, 加 入 1mL 3,5- 二 溴 酪 氨 酸 (4 10-4 mol/l) 作 内 标 物, 用 10mL 磷 酸 盐 缓 冲 液 (ph2.12) 溶 解, 上 离 子 交 换 树 脂 DOWEX 50WX8-200 柱, 先 用 [13] 50mL 去 离 子 水 冲 洗, 去 掉 蜂 蜜 中 的 糖, 再 用 15mL NH4OH (3.2mol/L) 冲 洗, 最 后 用 10mL 去 离 子 水 冲 洗, 保 存 离 子 水 部 分, 旋 转 蒸 发 浓 缩 (50 ), 浓 缩 物 再 用 [14] 10mL 硼 盐 酸 缓 冲 液 (ph10) 溶 解, 备 用 准 确 量 取 1mL 备 用 样 品, 至 2mL 离 心 管 中, 加 入 正 亮 氨 酸 (Nle) 内 标 溶 液 20μL, 再 加 入 三 乙 胺 乙 腈 溶 液 100μL, 异 硫 氰 酸 苯 酯 - 乙 腈 溶 液 150μL, 混 匀, 室 温 放 置 1h, 加 入 正 己 烷 400μL, 振 摇 放 置 10min, 取 下 层 溶 液,0.45μm 滤 膜 过 滤, 取 20μL 进 样 分 析 1.3.1.2 色 谱 条 件 Venusil-AA 氨 基 酸 分 析 专 用 柱 (4.6mm 250mm, 5μm), 柱 温 :40 ; 检 测 波 长 :254nm; 流 速 : 1.0mL/min, 进 行 线 性 梯 度 洗 脱 ( 表 1) 表 1 线 性 梯 度 洗 脱 程 序 Table 1 Linear gradient elution procedure 时 间 /min 0 4 16 17 32 34 38 流 动 相 A/% 0 3 11 21 34 100 0 流 动 相 B/% 100 97 89 79 66 0 100 1.3.1.3 线 性 关 系 考 察 取 氨 基 酸 标 准 溶 液, 分 别 用 200 100 50 25 10 5μL 作 为 对 照 品 溶 液, 加 入 正 亮 氨 酸 内 标 溶 液 20μL, 按 照 1.3.1.1 节 方 法 衍 生, 以 各 种 氨 基 酸 峰 面 积 与 正 亮 氨 酸 峰 面 积 之 比 Y 为 纵 坐 标, 氨 基 酸 实 际 浓 度 X (μmol/ml) 为 横 坐 标, 线 性 回 归, 结 果 表 明 :17 种 氨 基 酸 在 0.5~0.0125μmol 与 峰 面 积 比 具 有 良 好 的 线 性 关 系 (R 2 = 0.9945~0.9996) 1.3.2 蜂 蜜 总 酚 酸 含 量 测 定 [15] 采 用 Folin-Ciocalteau 法 测 定 : 移 取 3mL 不 同 浓 度 蜂 蜜 样 品, 加 入 1mL Folin-Ciocalteau 显 色 剂,5mL 1mol/L 碳 酸 钠, 水 定 容 至 10mL, 避 光 1h,760nm 波 长 处 测 吸 光 度 将 标 准 品 原 儿 茶 酸 配 成 0.1mg/mL 标 准 溶 液, 移 取 0.0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2mL 按 照 上 述 方 法 测 定 吸 光 度, 制 定 标 准 曲 线, 得 回 归 方 程 :Y =141.23X + 0.0677(R 2 = 0.9965), 样 品 总 酚 酸 含 量 (mg/100g) 在 标 准 曲 线 中 得 相 应 值 [16] 1.3.3 蜂 蜜 总 还 原 力 测 定 在 10mL 试 管 中 分 别 加 入 不 同 质 量 浓 度 (0 0.025 0.05 0.075 0.10g/mL) 蜂 蜜 样 品 1mL, 磷 酸 盐 缓 冲 液 (0.2mol/L,pH6.6)2.5mL 和 2.5g/L 铁 氰 化 钾,50 水 浴 反 应 20min, 加 入 5.5g/L 三 氯 乙 酸 溶 液, 摇 匀 吸 取 上 清 液 2.5mL, 依 次 加 入 蒸 馏 水 2.5mL, 三 氯 化 铁 溶 液 0.5g/mL, 混 匀, 在 700nm 波 长 处 测 定 吸 光 度 1.3.4 蜂 蜜 对 亚 硝 酸 盐 的 抑 制 能 力 测 定 取 10g 各 种 蜂 蜜, 蒸 馏 水 定 容 至 25mL 容 量 瓶 中, 分 别 吸 取 0.50 1.00 2.00 4.00 8.00mL 于 10mL 容 量 瓶 中, 水 定 容 至 刻 度, 备 用 [17] 对 亚 硝 酸 盐 的 抑 制 : 取 蒸 馏 水 0.3mL, 加 入 0.9mL 柠 檬 酸 - 磷 酸 缓 冲 溶 液 (ph3.0),0.3ml NaNO2 溶 液, 混 匀,37 保 温 30min, 加 入 0.3mL 对 氨 基 苯 磺 酸, 静 置 5min,0.3mL 盐 酸 萘 乙 二 胺, 静 置 15min, 为 对 照 管 1 ; 蒸 馏 水 为 对 照 空 白 管 2 ; 分 别 取 不 同 质 量 浓 度 样 品 溶 液 0.3g/mL, 加 入 0.9mL 柠 檬 酸 - 磷 酸 缓 冲 液 (ph3.0),
68 0.3mL NaNO2 溶 液, 混 匀 后 于 37 恒 温 水 浴 中 保 温 30min, 加 入 0.3mL 对 氨 基 苯 磺 酸, 混 匀, 静 置 5min, 加 入 0.3mL 盐 酸 萘 乙 二 胺, 静 置 15min, 为 样 品 管 3; 取 不 同 浓 度 样 品 溶 液 0.3mL, 加 入 0.9mL 柠 檬 酸 - 磷 酸 缓 冲 液, 蒸 馏 水 0.3mL, 混 匀,37 恒 温 水 浴 中 保 温 30min, 加 入 0.3mL 对 氨 基 苯 磺 酸, 混 匀, 静 置 5min, 加 0.3mL 盐 酸 萘 乙 二 胺, 静 置 15min, 为 样 品 空 白 管 4,550nm 波 长 处 测 各 管 吸 光 度 抗 坏 血 酸 α- 生 育 酚 为 阳 性 对 照, 重 复 3 次, 按 照 公 式 计 算 各 样 品 对 - NO2 清 除 率 (A1 - A2)-(A3 - A4) 清 除 率 /% = 100 A1-A2 式 中 :A 1 A 2 A 3 A 4 分 别 为 对 照 管 空 白 对 照 实 验 样 本 样 本 空 白 的 吸 光 度 1.3.5 统 计 学 分 析 所 有 数 据 均 用 平 均 值 ± 标 准 差 (x - ± s) 表 示, 采 用 SPSS 17.0 软 件 邓 肯 氏 多 重 范 围 检 测 单 花 蜜 样 本 组 间 及 组 内 差 异 显 著 性 (P < 0.05) 2 结 果 与 分 析 2.1 游 离 氨 基 酸 测 定 方 法 的 评 价 2.1.1 精 密 度 实 验 取 对 照 品 溶 液 200μL 按 照 1.3.1.1 节 方 法 衍 生, 连 续 进 样 5 次, 以 色 谱 峰 峰 面 积 计 算 RSD 值,17 种 氨 基 酸 峰 面 积 的 RSD 值 均 在 0.88%~1.34% 之 间 2.1.2 稳 定 性 实 验 准 确 吸 取 对 照 品 溶 液 200μL 按 照 1.3.1.1 节 方 法 衍 生, 分 别 在 0 4 6 8 24h 进 样, 连 续 进 样 5 次, 以 色 谱 峰 峰 面 积 分 别 计 算 RSD 值, 考 察 方 法 的 重 复 性, 17 种 氨 基 酸 峰 面 积 的 RSD 值 在 1.09%~2.12% 2.2 游 离 氨 基 酸 含 量 测 定 结 果 表 2 14 个 蜂 蜜 样 本 游 离 氨 基 酸 含 量 (x - ± s,n = 3) Table 2 Contents of free amino acid in 14 honey samples (x - ± s,n = 3) 蜂 蜜 种 类 样 品 号 脯 氨 酸 含 量 /(mg/kg) 17 种 游 离 氨 基 酸 含 量 /(mg/kg) H1 147.1 ± 9.35 a 260.4 ± 7.90 a H2 151.7 ± 10.9 a 268.4 ± 8.26 a H3 172.5 ± 10.2 a 276.3 ± 13.9 a H4 168.4 ± 9.18 ab 280.0 ± 9.60 a H5 287.2 ± 15.4 d 406.7 ± 11.1 d H6 291.2 ± 8.62 d 416.4 ± 6.98 d H7 319.2 ± 8.09 c 463.1 ± 10.4 d H8 342.8 ± 9.11 c 452.3 ± 9.5 d H9 208.6 ± 11.9 b 356.2 ± 11.7 d H10 211.8 ± 10.5 b 348.4 ± 9.4 d H11 169.4 ± 12.49 a 296.4 ± 7.73 b H12 177.2 ± 10.18 ab 302.5 ± 5.16 b H13 262.1 ± 7.02 c 381.6 ± 9.53 c H14 287.4 ± 9.21 c 388.9 ± 12.52 c 注 : 同 一 列 肩 标 不 同 字 母 表 示 样 本 间 差 异 显 著 (P < 0.05) 下 同 从 表 2 可 以 看 出,14 种 单 花 蜜 中 的 游 离 氨 基 酸 主 要 以 脯 氨 酸 为 主, 平 均 占 游 离 氨 基 酸 总 量 65.27%,14 种 蜂 蜜 中 平 均 含 游 离 氨 基 酸 349.829mg/kg 左 右 7 种 单 花 蜜 平 均 游 离 氨 基 酸 含 量 : > > > > > >,17 种 氨 基 酸 的 对 照 品 混 合 溶 液 色 谱 分 离 结 果 见 图 1, (H1) 样 品 色 谱 分 离 结 果 见 图 2 mv 600 10 500 11 18 12 400 14 15 17 300 4 200 3 5 67 89 13 16 100 1 2 0 0.0 5.0 10.0 15.0 20.0 25.0 30.0 35.0 时 间 /min 1. 天 冬 氨 酸 (Asp);2. 谷 氨 酸 (Glu);3. 丝 氨 酸 (Ser);4. 甘 氨 酸 (Gly); 5. 组 氨 酸 (His);6. 精 氨 酸 (Arg);7. 苏 氨 酸 (Thr);8. 丙 氨 酸 (Ala); 9. 脯 氨 酸 (Pro);10. 酪 氨 酸 (Tyr);11. 缬 氨 酸 (Val);12. 蛋 氨 酸 (Met);13. 胱 氨 酸 (Cys-Cys);14. 异 亮 氨 酸 (Ile);15. 亮 氨 酸 (Leu); 16. 内 标 正 亮 氨 酸 (Nle);17. 苯 丙 氨 酸 (Phe);18. 赖 氨 酸 (Lys) 图 2 同 图 1 17 种 氨 基 酸 对 照 品 混 合 溶 液 的 色 谱 图 Fig.1 Chromatogram of mixed amino acid standards mv 250 200 150 100 50 0 1 2 34 5 67 8 5.0 10.0 15.0 20.0 25.0 30.0 35.0 时 间 /min 图 2 中 17 种 氨 基 酸 的 色 谱 图 Fig.2 Chromatogram of 17 amino acids from vetch honey 9 16 10 11 17 14 15 1213 2.3 总 酚 酸 含 量 测 定 结 果 根 据 蜜 源 植 物 不 同, 蜂 蜜 所 含 多 酚 类 物 质 的 种 类 和 含 量 有 很 大 差 异, 有 些 多 酚 类 化 合 物 则 是 某 种 蜂 蜜 所 特 有 的, 因 此 蜂 蜜 中 多 酚 类 化 合 物 常 被 用 来 鉴 别 蜂 蜜 的 蜜 源 植 物, 同 时 还 可 作 为 蜂 蜜 抗 氧 化 活 个 性 的 评 价 指 标 之 [9] 一 从 表 3 可 以 看 出, 来 源 于 不 同 花 源, 均 为 浅 琥 珀 色 的 14 个 样 本 总 酚 酸 含 量 由 (18.51 ± 0.24)mg/100g 到 (41.24 ± 0.11)mg/100g 之 间 变 化, 新 疆 的 (H9) 含 量 最 低, 广 东 的 (H7) 含 量 最 高, 含 量 相 差 两 倍 7 种 单 花 蜜 中 脯 氨 酸 (342.8 ± 9.11)mg/kg 和 17 种 游 离 氨 基 酸 (452.3 ± 9.5)mg/kg 含 量 最 高 的 ( 广 西 ), 其 总 酚 酸 含 量 也 相 对 较 高 (40.18 ± 0.28)mg/100g 受 蜂 蜜 自 身 品 种 差 异, 总 酚 酸 含 量 差 异 很 大,7 种 单 花 蜜 平 均 总 酚 酸 18
基 础 研 究 食 品 科 学 2011, Vol. 32, No. 21 69 含 量 : > > > > > > 表 3 14 种 蜂 蜜 总 酚 酸 含 量 (x - ± s,n = 3) Table 3 Total phenol contents in 14 honey samples (x - ± s,n = 3) 蜂 蜜 种 类 样 品 号 总 酚 酸 含 量 /(mg/100g) H1 H2 H3 H4 H5 H6 H7 H8 H9 H10 H11 H12 H13 H14 18.32 ± 0.42 a 17.02 ± 0.01 a 31.05 ± 0.09 c 33.12 ± 0.23 c 28.21 ± 0.24 b 30.01 ± 0.21 bc 41.24 ± 0.11 d 40.18 ± 0.28 d 18.51 ± 0.24 a 20.32 ± 0.32 a 29.69 ± 0.54 bc 30.87 ± 0.48 bc 22.26 ± 0.13 b 20.57 ± 0.33 a 前 体 物 质 亚 硝 酸 盐 却 大 量 存 在 于 食 物 中, 亚 硝 酸 盐 与 仲 胺 无 论 在 实 验 室 自 然 条 件 下 还 是 在 人 体 和 动 物 体 内 均 能 合 成 亚 硝 胺, 特 别 是 在 人 和 动 物 的 胃 中 更 适 宜 合 成 亚 硝 [18] 胺, 因 此, 清 除 体 内 亚 硝 酸 盐 是 防 癌 的 有 效 途 径 由 图 4 可 知, 抗 坏 血 酸 α- 生 育 酚 对 亚 硝 酸 盐 的 抑 制 EC50 值 分 别 为 :(0.031 ± 0.017) 10-3 g/ml 和 (0.025 ± 0.0013) 10-3 g/ml, 作 为 阳 性 对 照,7 种 单 花 蜜 对 亚 硝 基 均 有 不 同 程 度 抑 制 作 用,14 个 样 本 对 亚 硝 酸 盐 的 抑 制 作 用 的 EC50 值 范 围 为 (0.55 ± 0.021)~(0.25 ± 0.034)g/mL, 云 南 (H1) 对 亚 硝 酸 盐 的 抑 制 能 力 最 差, 广 西 (H8) 抑 制 能 力 最 强 脯 氨 酸 和 游 离 氨 基 酸 含 量 高 的 荔 枝 蜜 和, 对 亚 硝 基 抑 制 能 力 也 相 应 较 强,EC50 值 分 别 为 (0.31 ± 0.012)g/mL 和 (0.25 ± 0.034)g/mL 得 到 14 个 单 花 蜜 样 本 的 总 酚 酸 含 量 与 对 亚 硝 酸 盐 抑 制 作 用 的 相 关 系 数 为 R = 0.71029; 脯 氨 酸 17 种 游 离 氨 基 酸 含 量 和 蜂 蜜 对 亚 硝 酸 盐 抑 制 作 用 的 相 关 系 数 分 别 为 R = 0.7513 和 R = 0.8051 7 种 蜂 蜜 对 亚 硝 酸 盐 抑 制 能 力 : > > > > > > 2.4 总 还 原 能 力 测 定 结 果 A700nm 0.8 0.6 0.4 0.2 0.0 0.000 0.025 0.050 0.075 0.100 蜂 蜜 质 量 浓 度 /(g/ml) 图 3 7 种 不 同 质 量 浓 度 蜂 蜜 的 还 原 力 Fig.3 Reducing power of 7 honey samples at different concentrations 总 还 原 能 力 的 测 定 是 检 验 样 品 是 否 具 有 抗 氧 化 能 力 的 一 个 重 要 指 标, 由 图 3 可 知, 数 据 呈 现 量 效 关 系, 即 随 着 反 应 体 系 中 蜂 蜜 量 的 增 加, 总 还 原 能 力 也 相 应 增 加, 说 明 蜂 蜜 样 品 具 有 抗 氧 化 活 性, 随 着 蜂 蜜 质 量 浓 度 增 加, 抗 氧 化 能 力 增 强 ; 蜂 蜜 因 品 种 和 地 域 的 不 同, 总 还 原 能 力 存 在 一 定 差 异, 当 蜂 蜜 质 量 浓 度 为 0.1g/mL 时, 总 还 原 能 力 强 弱 与 氨 基 酸 含 量 关 系 相 近 : > > > > > > 苕 子 蜜 2.5 对 亚 硝 酸 盐 的 抑 制 作 用 亚 硝 胺 是 当 前 令 人 关 注 的 一 类 化 学 致 癌 物, 它 能 引 起 人 和 动 物 肝 脏 等 多 种 器 官 的 恶 性 肿 瘤, 正 常 情 况 下, 人 们 直 接 从 食 物 中 摄 入 的 亚 硝 胺 极 少, 但 形 成 亚 硝 胺 的 EC50/(g/mL) 0.6 0.5 0.4 0.3 0.2 0.1 0.0 c c 同 种 蜜 不 同 产 地 间 标 注 字 母 不 相 同 表 示 差 异 显 著 (P < 0.05) 图 4 7 种 单 花 蜜 对 亚 硝 基 的 抑 制 作 用 Fig.4 - NO2 scavenging ability of 7 honey samples 3 讨 论 与 结 论 b b a b a a abab H1H2 H3H4 H5H6 H7H8 H9H10 H11H12 H13H14 采 用 异 硫 氰 酸 苯 酯 作 为 衍 生 试 剂 的 柱 前 衍 生 反 相 高 [19] 效 液 相 色 谱 分 析 氨 基 酸 的 方 法 已 经 得 到 广 泛 应 用 氨 基 酸 与 PITC 反 应 生 成 苯 氨 基 硫 甲 酰 衍 生 物 (PTC), 衍 生 物 单 一 稳 定, 衍 生 反 应 速 度 快 实 验 采 用 PITC 柱 前 衍 生 反 相 高 效 液 相 色 谱 法 测 定 了 7 种 单 花 蜜 14 个 样 品 的 17 种 游 离 氨 基 酸 的 含 量 差 异 以 均 为 浅 琥 珀 色 的 14 种 单 花 蜜 为 样 本, 对 其 体 外 抗 氧 化 能 力 ( 对 亚 硝 酸 盐 的 抑 制 能 力 ) 进 行 评 估 研 究 表 明 :14 种 单 花 蜜 样 本 对 亚 硝 酸 盐 均 具 有 抑 制 能 力, 以 抗 坏 血 酸 α- 生 育 酚 为 阳 性 对 照, 测 得 14 个 单 花 蜜 样 本 对 亚 硝 酸 盐 抑 制 的 EC50 值 在 (0.55 ± 0.021)g/mL 与 (0.25 ± 0.034)g/mL 之 间 变 化, 云 南 (H1) 对 亚 硝 酸 盐 的 抑 制 能 力 最 差, 广 西 (H8) 抑 制 能 力 最 强 同 时 得 到 14 个 样 本 总 酚 酸 含 量 差 异 与 对 亚 硝 酸 盐 抑 制 作 b bc c b
70 用 相 关 系 数 :R = 0.71029; 脯 氨 酸 17 种 游 离 氨 基 酸 含 量 差 异 和 蜂 蜜 对 亚 硝 酸 盐 抑 制 作 用 相 关 系 数 分 别 为 R = 0.7513 和 R = 0.8051 蜂 蜜 的 抗 氧 化 能 力 不 仅 受 多 酚 类 化 合 物 的 影 响, 同 时 也 受 蜂 蜜 中 氨 基 酸 成 分 的 影 响, 而 且 相 关 系 数 强 于 多 酚 类 化 合 物, 由 此 推 测 : 蜂 蜜 的 抗 氧 化 能 力 强 弱 受 到 蜂 蜜 中 氨 基 酸 含 量 差 异 影 响 ; 因 蜂 蜜 的 品 种 地 域 不 同, 其 脯 氨 酸 含 量 17 种 游 离 氨 基 酸 含 量 均 有 差 异, 对 抗 氧 化 能 力 有 很 大 影 响, 以 此 为 基 础 探 讨 由 于 蜂 蜜 花 源 不 同, 抗 氧 化 能 力 有 差 异, 进 一 步 证 明 蜂 蜜 的 抗 氧 化 能 力 受 蜂 蜜 中 多 种 成 分 共 同 影 响, 蜂 蜜 是 一 种 潜 在 的 生 物 抗 氧 化 性 功 能 性 食 品 参 考 文 献 : [1] HENSLEY K, FLOYD R A. Reactive oxygen species and protein oxidation in aging: a look back, a look ahead[j]. Arch Biochem Biophys, 2002, 397(2): 377-383. [2] ALJADI A M, KAMARUDDIN M Y. Evaluation of the phenolic contents and antioxidant capacities of two Malaysian floral honeys[j]. Food Chem, 2004, 85(4): 513-518. [3] NAGAI T, INOUE R, KANAMORI N, et al. Characterization of honey from different floral sources. Its functional properties and effects of honey species on storage of meat[j]. Food Chem, 2006, 97(2): 256-262. [4] The National Honey Board. Honey-health and therapeutic qualities[r]. Lashley Street: Longmont, 2003. [5] FERREIRA I, AIRES E, BARREIRA J, et al. Antioxidant activity of Portuguese honey samples: different contributions of the entire honey and phenolic extract[j]. Food Chem, 2009, 114(4): 1438-1443. [6] GHELDOF N, WANG Xiaohong, ENGESETH N J. Identification and quantification of antioxidant components of honeys from various floral sources[j]. Journal of Agricultural and Food Chemistry, 2002, 50(21): 5870-5877. [7] 曹 炜, 卢 珂, 陈 卫 军. 不 同 种 类 蜂 蜜 抗 氧 化 活 性 的 研 究 [J]. 食 品 科 学, 2005, 26(8): 352-356. [8] 曹 炜, 陈 卫 军, 宋 纪 蓉. 不 同 种 类 蜂 蜜 总 酚 酸 含 量 测 定 和 抗 氧 化 作 用 的 研 究 [J]. 食 品 科 学, 2005, 26(1): 48-51. [9] Al-MAMARY M, Al-MEERI M, Al-HABORI M. Antioxidant activities and total phenolics of different types of honey[j]. Nutrition Research, 2002, 22(9): 1041-1047. [10] BERETTA G, GRANATA P, FERRERO M, et al. Standardization of antioxidant properties of honey by a combination of spectrophotometric/ fluorimetric assays and chemometrics[j]. Analytica Chimica Acta, 2005, 533(2): 185-191. [11] 宾 冬 梅. 蜂 蜜 的 生 理 功 能 及 开 发 利 用 [J]. 特 产 研 究, 2004(1): 57-61. [12] PAWLOWSKA M, ARMSTRONG W. Evaluation of enantiomeric purity of selected amino acids in honey[j]. Chirality, 1994, 6(4): 270-276. [13] BOSI G, BATTAGLINI M. Gas chromatographic analysis of free and protein amino acids in some unifloral honeys[j]. Journal of Apicultural Research, 1978, 17(3): 152-166. [14] MEDA A, LAMIEN C E, ROMITO M. Determination of the total phenolic, flavonoid and proline contents in Burkina Fasan honey, as well as their radical scavenging activity[j]. Food Chem, 2005, 91(3): 571-577. [15] SINGLETON V L, ORTHOFER R, LAMUELA-RAVENTOS R. Analysis of total phenols and other oxidation substrates and antioxidants by means of Folin-Ciocalteau reagent[j]. Methods in Enzymology, 1999, 299(2): 152-178. [16] OYAIZU M. Studies on products of browning reactions: antioxidative activities of products of browning reaction prepared from glucosamine[j]. Japanese Journal of Nutrition, 1986, 44: 307-315. [17] BERTONCELJ J, DOBERSEK U, JAMNIK M, et al. Evaluation of the phenolic content, antioxidant activity and colour of Slovenian honey[j]. Food Chem, 2007, 105(2): 822-828. [18] 宋 茹, 韦 荣 编, 胡 金 申, 等. 荔 枝 皮 色 素 体 外 清 除 亚 硝 酸 盐 作 用 研 究 [J]. 食 品 科 学, 2010, 31(5): 104-107. [19] 刘 丽 敏, 王 海 敏, 虞 海 霞, 等. 柱 前 衍 生 反 相 高 效 液 相 色 谱 法 测 定 西 洋 参 中 游 离 氨 基 酸 [J]. 中 成 药, 2009, 31(2): 275-278. 更 正 汤 晓 艳 等 作 者 发 表 于 食 品 科 学 2011 年 32 卷 19 期 288~293 页 的 文 章 牛 肉 分 级 标 准 及 分 级 技 术 发 展 概 况 综 述, 排 版 中 作 者 单 位 信 息 刊 出 有 误, 正 确 的 单 位 信 息 应 为 汤 晓 艳 1, 王 敏 1, 钱 永 忠 1, 毛 雪 飞 1, 孙 宝 忠 2 3, 周 光 宏 (1. 中 国 农 业 科 学 院 农 业 质 量 标 准 与 检 测 技 术 研 究 所, 北 京 100081;2. 中 国 农 业 科 学 院 北 京 畜 牧 兽 医 研 究 所, 北 京 100193;3. 南 京 农 业 大 学 农 业 部 农 畜 产 品 加 工 与 质 量 控 制 重 点 开 放 实 验 室, 南 京 210095) 特 此 补 充 更 正, 并 对 作 者 致 以 歉 意 食 品 科 学 编 辑 部