马 丽 媛, 等. 油 茶 皂 苷 体 外 诱 导 人 白 血 病 Jurkat 细 胞 凋 亡 及 其 可 能 机 制 1073 力 争 将 茶 油 作 为 食 用 油 的 主 流 品 种 [5] 茶 麸 系 油 茶 果 实 榨 除 茶 油 后 的 废 弃 残 渣, 药 用 名 为 茶 子 饼,

1072 基 础 研 究 Basic Research www.tumorsci.org 肿 瘤 2011 年 12 月 第 31 卷 第 12 期 TUMOR Vol. 31, December, 2011 DOI: 10.3781/j.issn.1000-7431.2011.12. 004 Copyright 2011 by TUMOR 油 茶 皂 苷 体 外 诱 导 人 白 血 病 Jurkat 细 胞 凋 亡 及 其 可 能 机 制 1, 马 丽 媛 2 1,, 李 林 2, 江 玉 3 1,, 史 丽 颖 2 1,, 冯 宝 民 2 1,, 王 永 奇 2 1, 2, 唐 玲 1. 大 连 大 学 生 命 科 学 与 技 术 学 院 生 物 技 术 教 研 室, 大 连 116622;2. 大 连 大 学 药 物 研 究 所 中 药 室, 大 连 116622;3. 美 国 堪 萨 斯 州 立 大 学 人 类 营 养 系, 堪 萨 斯 州 66502 [ 摘 要 ] 目 的 : 探 讨 油 茶 皂 苷 在 体 外 诱 导 人 白 血 病 Jurkat 细 胞 的 凋 亡 及 其 可 能 机 制 方 法 : 将 不 同 浓 度 的 油 茶 皂 苷 作 用 于 人 白 血 病 Jurkat 细 胞, 应 用 细 胞 计 数 法 检 测 其 对 细 胞 增 殖 的 影 响,FCM 检 测 细 胞 周 期 分 布 和 细 胞 凋 亡 率, 蛋 白 质 印 迹 法 检 测 细 胞 caspase-3 多 聚 ADP- 核 糖 聚 合 酶 [poly(adp-ribose)polymerase,parp] p-bcl-2 Bcl-2 Bax 和 caspase-9 蛋 白 的 表 达 结 果 :1 ~ 16 g/ml 油 茶 皂 苷 可 抑 制 Jurkat 细 胞 的 增 殖, 呈 剂 量 依 赖 性 1 ~ 4 g/ml 油 茶 皂 苷 作 用 Jurkat 细 胞 24 h 后,G 0 /G 1 期 和 G 2 /M 期 细 胞 比 率 下 降,S 期 细 胞 比 率 上 升, 细 胞 凋 亡 率 随 着 油 茶 皂 苷 浓 度 的 增 加 而 上 升 ;Jurkat 细 胞 中,p-Bcl-2 和 Bcl-2 蛋 白 的 表 达 水 平 下 调,caspase-3 PARP 和 caspase-9 蛋 白 的 表 达 水 平 上 调,Bax 蛋 白 的 表 达 水 平 无 明 显 变 化 结 论 : 油 茶 皂 苷 能 抑 制 人 白 血 病 Jurkat 细 胞 增 殖 和 诱 导 其 凋 亡, 其 作 用 机 制 可 能 与 细 胞 凋 亡 的 线 粒 体 途 径 有 关 [ 关 键 词 ] 白 血 病, 实 验 性 ; 细 胞 凋 亡 ; 油 茶 皂 苷 ; 细 胞,Jurkat [ 中 图 分 类 号 ] R733.7 [ 文 献 标 志 码 ] A [ 文 章 编 号 ] 1000-7431 (2011) 12-1072-05 Youchasaponin induces apoptosis of human leukemia Jurkat cells in vitro and its possible mechanism MA Li-yuan 1, 2, LI Lin 1, 2, JIANG Yu 3, SHI Li-ying 1, 2, FENG Bao-min 1, 2, WANG Yong-qi 1, 2, TANG Ling 1, 2 1. Department of Biotechnology, College of Life Science and Technology, Dalian University, Dalian 116622, China; 2. Department of Traditional Chinese Medicine, Institute of Materia Medica, Dalian University, Dalian 116622, China; 3. Department of Human Nutrition, Kansas State University, Kansas 66502, USA [ABSTRACT] Objective: To investigate the apoptosis of human leukemia Jurkat cells induced by Youchasaponin in vitro and to explore its possible mechanism. Methods: The effects of Youchasaponin with different concentrations on the proliferation of Jurkat cells were detected by cell count assay. The cell cycle distribution and the apoptosis rate of Jurkat cells were determined by flow cytometry (FCM). The expression levels of caspase-3, poly (ADP-ribose) polymerase (PARP), p-bcl-2, Bcl-2, Bax and caspase-9 proteins were analyzed by Western blotting. Results: The proliferation of Jurkat cells was significantly inhibited after treatment with Youchasaponin (1-16 g/ml) in a dose-dependent manner. The percentage of Jurkat cells at G 0 /G 1 phase and G 2 /M phase was decreased after treatment with Youchasaponin (1-4 g/ml) for 24 h, while the percentage of Jurkat cells at S phase was increased. The apoptosis rate of Jurkat cells induced by Youchasaponin was increased in a dose-dependent manner. The expression levels of p-bcl-2 and Bcl-2 proteins were down-regulated, and the expression levels of caspase-3, PARP and caspase-9 proteins were up-regulated, whereas the expression level of Bax protein had no change. Conclusion: Youchasaponin can inhibit the cell proliferation and induce the apoptosis of human leukemia cells. This effect may be related to the mitochondrial pathway of apoptosis. [KEY WORDS] Leukemia, experimental; Apoptosis; Youchasaponin; Cell, Jurkat [TUMOR, 2011, 31 (12): 1072-1076] 油 茶 系 山 茶 科 山 茶 属 油 茶 组 植 物 [1] 据 记 载, [2, 中 国 栽 培 油 茶 已 有 2 300 多 年 的 历 史 3] 在 所 有 [ 基 金 项 目 ] 国 家 自 然 科 学 基 金 资 助 项 目 ( 编 号 :30801509) Correspondence to: TANG Ling( 唐 玲 ) E-mail: tangyuling6688@163.com Received 2011-07-21 Accepted 2011-09-27 油 料 植 物 中, 油 茶 是 受 大 自 然 孕 育 时 间 较 长 的 植 物, 从 开 花 到 结 籽 采 收, 历 经 秋 冬 春 夏 秋 五 季 油 茶 树 结 出 的 果 实 被 称 为 油 茶 籽 或 茶 子 心, 可 用 来 提 炼 茶 籽 油 即 茶 油 茶 油 是 一 种 具 有 很 高 营 养 价 值 的 绿 色 生 态 食 用 油, 堪 称 东 方 橄 榄 油 [4] 中 国 政 府 高 度 重 视 油 茶 产 业 的 发 展,

马 丽 媛, 等. 油 茶 皂 苷 体 外 诱 导 人 白 血 病 Jurkat 细 胞 凋 亡 及 其 可 能 机 制 1073 力 争 将 茶 油 作 为 食 用 油 的 主 流 品 种 [5] 茶 麸 系 油 茶 果 实 榨 除 茶 油 后 的 废 弃 残 渣, 药 用 名 为 茶 子 饼, 中 药 大 辞 典 和 岭 南 草 药 志 均 对 其 有 所 记 载 [6] 油 茶 皂 苷 是 茶 麸 中 皂 苷 类 成 分 的 总 称, 在 工 业 农 业 和 水 产 养 殖 业 中 均 有 所 应 用 [7-10] 本 研 究 探 讨 油 茶 皂 苷 诱 导 人 白 血 病 Jurkat 细 胞 凋 亡 的 作 用 及 其 可 能 的 信 号 转 导 通 路, 为 油 茶 皂 苷 的 肿 瘤 治 疗 研 究 提 供 实 验 依 据 1 材 料 与 方 法 1.1 材 料 油 茶 皂 苷 由 大 连 大 学 生 命 科 学 与 技 术 学 院 生 物 技 术 教 研 室 制 备, 其 总 皂 苷 含 量 > 95% 实 验 所 用 油 茶 皂 苷 先 用 无 菌 PBS 配 置 后, 再 用 RPMI 1640 培 养 液 稀 释 至 所 需 浓 度 ; 阳 性 对 照 选 用 紫 杉 醇 (paclitaxel,txl), 购 自 山 东 齐 鲁 制 药 有 限 公 司, 用 无 菌 DMSO 溶 解 后 再 用 RPMI 1640 培 养 液 稀 释 至 20 g/ml 备 用 (DMSO 终 浓 度 为 0.1%); 人 白 血 病 Jurkat 细 胞 购 自 中 国 典 型 培 养 物 保 藏 中 心 ;RPMI 1640 培 养 液 和 胎 牛 血 清 购 自 美 国 Hyclone 公 司 ;0.4% 锥 虫 蓝 溶 液 和 碘 化 丙 啶 (propidium iodide,pi) 购 自 美 国 Sigma 公 司 ;BCA 蛋 白 定 量 试 剂 盒 和 电 化 学 发 光 试 剂 盒 购 自 美 国 Thermo Scientific 公 司 ; 兔 抗 人 caspase-3 单 克 隆 抗 体 兔 抗 人 caspase-9 单 克 隆 抗 体 兔 抗 人 多 聚 ADP- 核 糖 聚 合 酶 [poly(adp-ribose) polymerase,parp] 单 克 隆 抗 体 兔 抗 人 p-bcl-2 单 克 隆 抗 体 兔 抗 人 Bcl-2 单 克 隆 抗 体 兔 抗 人 Bax 单 克 隆 抗 体 小 鼠 抗 人 β-actin 单 克 隆 抗 体 以 及 辣 根 过 氧 化 物 酶 标 记 的 羊 抗 兔 IgG 羊 抗 小 鼠 IgG( 二 抗 ) 均 购 自 美 国 Cell Signaling Technology 公 司 ; 流 式 细 胞 仪 EPICS ALTRA Flow Cytometer 购 自 美 国 Beckman-Coulter 有 限 公 司 ; 细 胞 破 碎 仪 购 自 美 国 Fisher Scientific 公 司 1.2 方 法 1.2.1 细 胞 培 养 Jurkat 细 胞 用 含 有 10% 胎 牛 血 清 100 U/mL 青 霉 素 和 0.1 mg/ml 链 霉 素 的 RPMI 1640 培 养 液, 置 于 37 CO 2 体 积 分 数 为 5% 的 饱 和 湿 度 培 养 箱 中 培 养, 每 2 ~ 3 d 换 液 1 次 1.2.2 油 茶 皂 苷 对 Jurkat 细 胞 增 殖 活 性 的 影 响 取 对 数 生 长 期 细 胞, 调 整 细 胞 密 度 为 2 10 5 个 /ml, 接 种 于 24 孔 板 中,2 ml/ 孔 ; 细 胞 培 养 24 h 后, 实 验 组 分 别 加 入 终 质 量 浓 度 为 0 1 2 4 8 和 16 g/ml 的 油 茶 皂 苷, 阳 性 对 照 组 加 入 终 质 量 浓 度 为 20 g/ml 的 TXL, 同 时 设 定 空 白 对 照 组 和 加 0.1%DMSO 的 溶 剂 对 照 组 ; 细 胞 继 续 培 养 24 48 和 72 h 后, 取 90 L/ 孔 细 胞 悬 液 与 10 L 0.4% 的 锥 虫 蓝 溶 液 混 匀, 进 行 细 胞 计 数 按 以 下 公 式 计 算 细 胞 存 活 率 : 细 胞 存 活 率 = 实 验 组 存 活 细 胞 的 平 均 值 / 空 白 对 照 组 存 活 细 胞 的 平 均 值 100%, 用 82798-IC50 计 算 软 件 计 算 半 数 抑 制 浓 度 (half inhibition concentration,ic 50 ) 值 各 浓 度 各 个 时 间 点 均 重 复 4 个 孔, 实 验 重 复 3 次 1.2.3 FCM 检 测 油 茶 皂 苷 对 Jurkat 细 胞 凋 亡 和 细 胞 周 期 的 影 响 取 对 数 生 长 期 细 胞, 调 整 细 胞 密 度 为 2 10 5 个 /ml, 接 种 于 24 孔 板 中,2 ml/ 孔 ; 细 胞 培 养 24 h 后, 实 验 组 分 别 加 入 终 质 量 浓 度 为 0 1 2 和 4 g/ml 的 油 茶 皂 苷, 同 时 设 定 空 白 对 照 组 ; 细 胞 继 续 培 养 24 h, 各 组 细 胞 分 别 取 1 10 6 个, 加 入 用 冰 预 冷 的 终 浓 度 为 70% 的 乙 醇 溶 液, 混 匀 后 放 于 -20 冰 箱 中 固 定 备 用 检 测 时, 取 出 备 用 的 细 胞,4 800 g 离 心 5 min, 弃 上 清 液, 用 PBS 冲 洗 2 ~ 3 次, 加 500 L PI 避 光 染 色 30 min, 上 流 式 细 胞 仪 检 测 细 胞 凋 亡 和 细 胞 周 期 ( 检 测 激 发 波 长 488 nm), 以 CellQuest 软 件 (FCS Express V3) 和 Modfit 软 件 (ModFit LT PC 版 ) 记 录 并 分 析 实 验 结 果 实 验 重 复 3 次 1.2.4 蛋 白 质 印 迹 法 检 测 油 茶 皂 苷 对 Jurkat 细 胞 caspase-3 PARP p-bcl-2 Bcl-2 Bax 和 caspase-9 蛋 白 表 达 的 影 响 分 别 收 集 空 白 对 照 组 和 终 质 量 浓 度 为 0 1 2 4 g/ml 油 茶 皂 苷 处 理 24 h 的 Jurkat 细 胞 5 10 6 个,PBS 洗 涤 2 次, 加 入 细 胞 裂 解 液 (20 mmol/l Tris-HCl ph = 7.5 ~ 8.0 0.5mmol/L EDTA 0.5 mmol/l EGTA 和 0.5% Triton X-100)980 L 蛋 白 酶 抑 制 剂 10 L 和 磷 酸 酶 抑 制 剂 10 L, 用 细 胞 破 碎 仪 破 碎 细 胞 3 次,10 s/ 次, 中 间 间 隔 30 s, 所 有 操 作 均 在 冰 上 完 成 细 胞 破 碎 后 放 置 20 min,4 12 000 g 离 心 30 min; 吸 取 上 清 液, 采 用 BCA 蛋 白 定 量 试 剂 盒 测 定 各 样 品 的 蛋 白 浓 度 ; 取 40 g/ 孔 蛋 白 进 行 10% SDS-PAGE, 将 蛋 白 质 电 转 移 至 聚 偏 二 氟 乙 烯 膜 上 ; 用 含 5% 脱 脂 奶 粉 的 封 闭 液 室 温 封 闭 1 h, 分 别 加 1 :1 000 稀 释 的 一 抗 (caspase-3 PARP p-bcl-2 Bcl-2 Bax caspase-9 和 β-actin) 于 4 反 应 过 夜 ; 封 闭 液 洗 涤 3 次,5 min/ 次 ; 分 别 加 入 1:1 000 稀 释 的 对 应 二 抗, 室 温 反 应 2 h; 封 闭 液 洗 涤 3 次,5 min/ 次 ; 加 电 化 学 发 光 剂 显 色, 应 用 Bio-Rad 凝 胶 成 像 系 统 采 集 图 片, 应 用 Photoshop 和 UN-SCAN IT gel 6.1 进 行 蛋 白 条 带 灰 度 分 析, 以 目 的 蛋 白 条 带 的 灰 度 值 与 β-actin 条 带 灰 度 值 的 比 值 表 示 目 的 蛋 白 的 相 对 表 达 量 实 验 重 复 3 次 1.3 统 计 学 方 法 应 用 SPSS 15.0 软 件 对 实 验 结

1074 马 丽 媛, 等. 油 茶 皂 苷 体 外 诱 导 人 白 血 病 Jurkat 细 胞 凋 亡 及 其 可 能 机 制 果 进 行 统 计 分 析, 计 量 资 料 以 ±s 表 示 采 用 One-way ANOVA 单 因 素 方 差 分 析, 组 间 两 两 比 较 采 用 LSD 检 验 P < 0.05 为 差 异 有 统 计 学 意 义 2 结 果 2.1 油 茶 皂 苷 抑 制 Jurkat 细 胞 的 增 殖 活 性 锥 虫 蓝 染 色 后 活 细 胞 计 数 结 果 显 示, 终 质 量 浓 度 为 1 ~ 16 g/ml 的 油 茶 皂 苷 可 抑 制 Jurkat 细 胞 的 增 殖 活 性, 随 着 浓 度 的 增 加 和 时 间 的 延 长, 抑 制 作 用 逐 渐 增 强 ( 表 1) 油 茶 皂 苷 作 用 Jurkat 细 胞 24 48 和 72 h 的 IC 50 值 分 别 为 6.21 4.58 和 2.88 g/ml 为 了 进 一 步 分 析 油 茶 皂 苷 抑 制 Jurkat 细 胞 的 增 殖 活 性 是 由 细 胞 凋 亡 引 起 的, 本 研 究 选 择 质 量 浓 度 为 1 ~ 4 g/ml 的 油 茶 皂 苷 作 用 于 Jurkat 细 胞 24 h 进 行 后 续 实 验 2.2 油 茶 皂 苷 影 响 Jurkat 细 胞 周 期 并 促 进 细 胞 凋 亡 FCM 检 测 结 果 显 示, 油 茶 皂 苷 作 用 Jurkat 细 胞 24 h 后, 随 着 油 茶 皂 苷 浓 度 的 增 加,G 0 /G 1 期 和 G 2 /M 期 细 胞 比 率 逐 渐 下 降,S 期 细 胞 比 率 逐 渐 上 升, 且 细 胞 凋 亡 率 明 显 上 升, 与 空 白 对 照 组 比 较, 差 异 有 统 计 学 意 义 (P < 0.05, 表 2) 2.3 油 茶 皂 苷 对 Jurkat 细 胞 caspase-3 PARP p-bcl-2 Bcl-2 Bax 和 caspase-9 蛋 白 表 达 的 影 响 蛋 白 质 印 迹 法 检 测 结 果 显 示 ( 图 1),2 g/ml 油 茶 皂 苷 即 可 裂 解 procaspase-3, 从 而 激 活 caspase-3;2 g/ml 油 茶 皂 苷 可 激 活 活 化 的 PARP 片 段, 且 随 着 剂 量 的 增 加 PARP 的 表 达 水 平 上 调, 与 空 白 对 照 相 比 较, 差 异 有 统 计 学 意 义 (P < 0.01) 油 茶 皂 苷 作 用 Jurkat 细 胞 后,p-Bcl-2 和 Bcl-2 蛋 白 的 表 达 水 平 下 降, 呈 一 定 的 剂 量 依 赖 性 ; 无 活 性 的 procaspase-9 蛋 白 表 达 水 平 随 着 油 茶 皂 苷 浓 度 的 增 加 逐 渐 下 调, 而 相 应 活 化 的 caspase-9 蛋 白 表 达 水 平 逐 渐 上 调, 与 空 白 对 照 组 比 较, 差 异 有 统 计 学 意 义 (P < 0.01);Bax 蛋 白 的 表 达 水 平 在 各 组 间 没 有 明 显 差 异 表 1 油 茶 皂 苷 对 人 白 血 病 Jurkat 细 胞 增 殖 活 性 的 抑 制 作 用 Table 1 Inhibitory effect of Youchasaponin on proliferation of human leukemia Jurkat cells ( ±s/%,n=3) Group Cell proliferative activity 24 h 48 h 72 h Control 100.00±2.58 101.15±4.12 103.92±6.74 0.1% DMSO 99.24±5.13 98.23±3.67 100.81±7.32 TXL (20 g/ml) 69.47±8.32 60.25±6.37 48.27±6.03 Youchasaponin/(g ml -1 ) 16 27.86±4.11 20.84±8.35 14.38±5.83 8 31.73±7.21 22.48±5.96 20.14±5.67 4 50.78±6.31 36.94±7.22 25.47±7.33 2 78.59±7.82 * 68.04±6.13 50.24±4.09 1 98.90±4.93 97.02±5.29 101.26±6.38 * P < 0.05, P < 0.01, vs control group. TXL: Paclitaxel. 表 2 油 茶 皂 苷 对 人 白 血 病 Jurkat 细 胞 凋 亡 和 细 胞 周 期 的 影 响 Table 2 Effect of Youchasaponin on apoptosis and cycle cycle distribution of human leukemia Jurkat cells detected by flow cytometry ( ±s/%,n=3) Group Cell cycle Apoptosis rate G 0 /G 1 S G 2 /M Control 37.37±0.54 54.93±0.45 7.70±0.35 0.08±0.16 Youchasaponin/(g ml -1 ) 1 37.85±1.83 54.76±2.31 7.37±0.65 1.53±1.06 2 27.23±0.60 62.06±0.67 6.71±0.49 * 6.64±0.11 4 22.04±1.65 66.93±2.12 4.13±0.70 7.95±0.77 * P < 0.05, P < 0.01, vs control group.

马 丽 媛, 等. 油 茶 皂 苷 体 外 诱 导 人 白 血 病 Jurkat 细 胞 凋 亡 及 其 可 能 机 制 1075 Fig.1 Effects of Youchasaponin on the expression levels of caspase-3, poly (ADP-ribose) polymerase (PARP), p-bcl-2, Bcl-2, Bax, and caspase-9 proteins detected by Western blotting (1-4: Treated with 0, 1, 2 and 4 g/ml Youchasaponin, respectively). P < 0.01, vs 0 g/ml Youchasaponin group (n=3). 图 1 蛋 白 质 印 迹 法 检 测 油 茶 皂 苷 对 Jurkat 细 胞 caspase-3 PARP p-bcl-2 Bcl-2 Bax 和 caspase-9 蛋 白 表 达 的 影 响 (n =3) 3 讨 论 近 年 来 的 研 究 发 现, 细 胞 凋 亡 的 信 号 转 导 是 多 途 径 的,caspases 是 一 个 在 细 胞 凋 亡 过 程 中 起 重 要 作 用 的 蛋 白 酶 家 族, 该 酶 系 的 激 活 是 公 认 的 细 胞 凋 亡 后 期 参 与 细 胞 程 序 性 解 体 的 共 同 途 径 Caspases 在 细 胞 质 中 通 过 蛋 白 裂 解 得 以 活 化 Caspase-8 caspase-9 和 caspase-3 是 位 于 凋 亡 通 路 上 的 3 个 关 键 酶,procaspase-3 被 激 活 后 转 化 为 刽 子 手 酶 caspase-3, 从 而 引 发 程 序 性 细 胞 死 亡 [11] 因 此,procaspase-3 的 降 低 标 志 着 caspase-3 的 激 活 Caspase-9 启 动 细 胞 色 素 C 从 线 粒 体 中 释 放, 启 动 细 胞 解 体 Caspase-3 能 放 大 caspase-9 的 信 号, 并 使 细 胞 内 许 多 与 凋 亡 相 关 的 重 要 蛋 白 质 水 解 活 化 体 外 研 究 发 现, 药 物 诱 导 肿 瘤 细 胞 的 凋 亡 可 能 与 procaspase-3 和 caspase-9 的 表 达 水 平 有 关 [12] 线 粒 体 是 细 胞 内 的 重 要 细 胞 器, 其 功 能 与 线 粒 体 膜 的 通 透 性 和 跨 膜 电 位 差 有 关, 线 粒 体 膜 通 透 性 改 变 是 细 胞 凋 亡 的 早 期 特 征 Bcl-2 家 族 处 于 线 粒 体 途 径 的 上 游, 包 括 促 凋 亡 分 子 及 抗 凋 亡 分 子, 抑 制 细 胞 凋 亡, 以 Bcl-2 和 Bcl-xL 为 代 表 ; 促 进 细 胞 凋 亡, 以 Bad Bak Bid 和 Bax 为 代 表 二 者 的 平 衡 对 于 调 节 线 粒 体 功 能 有 重 要 价 [13, 值 14] 本 研 究 发 现,1 ~ 16 g/ml 油 茶 皂 苷 在 体 外 可 抑 制 人 白 血 病 Jurkat 细 胞 的 增 殖, 呈 剂 量 依 赖 性, 其 作 用 24 h 的 IC 50 值 为 6.21 g/ml FCM 检 测 结 果 显 示, 油 茶 皂 苷 作 用 Jurkat 细 胞 24 h 后, 随 着 油 茶 皂 苷 浓 度 的 增 加,G 0 /G 1 期 和 G 2 /M 期 细 胞 比 率 逐 渐 下 降,S 期 细 胞 比 率 逐 渐 上 升, 细 胞 凋 亡 率 明 显 上 升 进 一 步 研 究 发 现, 油 茶 皂 苷 诱 导 Jurkat 细 胞 发 生 凋 亡 是 通 过 激 活 caspase 信 号 通 路, 引 起 procaspase-3 蛋 白 水 解 为 caspase-3, 从 而 发 生 PARP 底 物 的 断 裂 对 细 胞 凋 亡 的 线 粒 体 途 径 研 究 发 现, 油 茶 皂 苷 可 以 下 调 抗 凋 亡 蛋 白 p-bcl-2 和 Bcl-2 的 表 达, 呈 剂 量 依 赖 性 ; 而 对 促 凋 亡 蛋 白 Bax 的 表 达 影 响 不 大 这 些 结 果 提 示, 油 茶 皂 苷 可 能 使 Bcl-2 家 族 成 员 Bid Bad 和 Bim 等 接 受 细 胞 内 转 导 的 死 亡 信 号 后 被 激 活, 与 另 外 的 Bcl-2 家 族 成 员 (Bax 和 Bak 等 ) 相 互 作 用, 导 致 后 者 寡 聚 并 插 入 线 粒 体 膜, 进 而 引 起 膜 通 透 性 改 变, 释 放 细 胞 色 素 C, 细 胞 色 素 C 再 通 过 募 集 细 胞 质 中 的 caspase-9 前 体 并 使 其 活 化, 启 动 caspase 级 联 反 应, 激 活 下 游 的 caspase-3, 完 成 相 [15, 应 底 物 的 剪 切, 引 起 细 胞 凋 亡 16] 影 响 细 胞 凋 亡 的 线 粒 体 途 径 的 因 素 是 多 方 面 的, 往 往 处 在 各 个 蛋 白 的 相 互 调 节 和 相 互 平 衡 之 中, 油 茶 皂 苷 虽 然 参 与 了 细 胞 凋 亡 的 线 粒 体 途 径, 但 是 否 影 响 线 粒 体 途 径 的 其 他 蛋 白 或 同 时 参 与 其 他 的 细 胞 凋 亡 途 径 还 需 进 行 深 入 研 究 [ 参 考 文 献 ] [1] 高 继 银, 帕 克 斯, 杜 跃 强. 山 茶 属 植 物 主 要 原 种 彩 色 图 集 [M]. 浙 江 : 浙 江 科 学 技 术 出 版 社, 2005: 15-16. [2] 何 新 钟. 对 油 茶 的 开 发 利 用 及 发 展 的 研 究 [J]. 现 代 经 济 信 息, 2010, 10: 158-159. [3] 梁 雨 祥. 试 谈 我 国 油 茶 和 优 质 山 茶 油 的 产 业 化 开 发 [J]. 宏 观 经 济 研 究, 2006, 1: 25-27. [4] 种 伟, 王 新 凯. 我 国 油 茶 产 业 发 展 问 题 的 初 步 分 析 [J]. 中 国 林 副 特 产, 2010, 107(4): 87-90. [5] 邹 锡 兰, 吴 尚 清. 国 务 院 批 准 颁 布 全 国 油 茶 产 业 发 展 规 划 (2009-2020 年 ) 千 亿 油 茶 产 业 待 破 局 [J]. 中

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