Gel Extraction Kit Cat.No.DE-02011/02012/02013 For DNA fragment(30bp-10kb) extraction from agarose gel For research use only Store at room temperature Copyright Foregene 2017/10. All rights reserved. 1/13
目 录 产品介绍........ 3 产品特点........... 3 试剂盒应用............. 3 回收 DNA 片段的应用.................. 3 产品质量控制............ 3 试剂盒内容............. 4 产品信息........ 4 储存条件........ 4 试剂盒组分信息.......... 5 DNA-Only Column 特性....... 5 DNA 回收率.............. 5 注意事项......... 6 操作前准备事项............. 7 实验材料和设备............. 7 安全性................. 7 操作指南.............. 8 材料取用说明.......... 8 胶回收操作步骤.......... 8 DNA 浓度及纯度测定............... 9 操作示意图............. 10 问题分析指南........... 11 Copyright Foregene 2017/10. All rights reserved. 2/13
产品介绍 该试剂盒采用本公司研制的离心柱和配方, 可以从琼脂糖凝胶中高效率的回收高纯度 DNA 片段 试剂盒回收 DNA 片段范围广, 一般条件下可以回收 30bp-10kb 的 DNA 片段 最小可以使用 30μl 洗脱液, 提高回收 DNA 浓度 试剂盒操作便捷, 步骤少, 只需数次离心即可同时处理多个样品,15 分钟即可获得高纯回收 DNA 片段 产品特点 DNA 回收范围广 : 可以回收短至 30bp, 大到 10kb 的 DNA 片段 回收效率高 : 最高回收效率可达 80% 以上 小体系洗脱 : 最少可以使用 30μl 洗脱液洗脱, 可以有效的提高回收 DNA 片段浓度 速度快 : 操作简便, 可在 15 分钟内完成 DNA 片段回收 安全 : 无需有机试剂抽提 质量高 : 回收得到的 DNA 片段纯度高, 能够满足后续各种实验 试剂盒应用 该试剂盒适用于回收琼脂糖凝胶中的 DNA 片段 (30bp-10kb) 回收 DNA 片段的应用 胶回收试剂盒回收获得的 DNA 纯度高, 可用于常规分子生物学操作, 如 : 酶切 连接 PCR 测序等实验 产品质量控制 按照福际生物试剂盒质量检测体系标准 ( s Total Quality Management System), 每一批次的胶回收试剂盒都严格进行多次测试, 确保每一批次试剂盒质量的可靠性和稳定性 Copyright Foregene 2017/10. All rights reserved. 3/13
试剂盒内容 试剂盒组成 Gel Extraction Kit 胶回收试剂盒 DE-05811 DE-05812 DE-05813 50 次 100 次 250 次 Buffer GE* 50ml 100ml 250ml Buffer WB1 15ml 30ml 75ml Buffer EB 10ml 20ml 50ml DNA-Only Column 50 套 100 套 250 套 说明书 1 份 1 份 1 份 *:Buffer GE 中含有具刺激性的离液盐, 操作时请注意带上手套和进行相关防护措施 产品信息 型号 离心柱型 纯化组件 Foregene 离心柱 试剂 通量 1-24 个样品 制备时间 ~15 离心机 台式离心机 离心柱液体盛装量 800μl 纯化柱 DNA 承载量 30μg 凝胶柱处理量 (1 个纯化柱 ) 400mg 洗脱体积 30-50μl 回收效率 * 70-80% *:DNA 片段的回收效率与片段大小 凝胶种类 (TAE TBE) 切胶块大小 洗脱体系等因素相关 因此, 实际操作中, 回收效率会在比 70-80% 略低 储存条件 本试剂盒在常温 (15 25 ) 干燥条件下, 可保存 12 个月 ; 如需保存更长时间可置于 2 8 注意 : 若低温保存, 溶液容易产生沉淀 在使用前务必将试剂盒内的溶液在室温中放置一段时间, 必要时可在 37 水浴中预热 10 分钟, 以溶解沉淀, 混匀后再使用 Copyright Foregene 2017/10. All rights reserved. 4/13
试剂盒组分信息 Buffer GE: 在 60 条件下溶解凝胶块, 使 DNA 片段从凝胶中释放出来 Buffer WB1: 去除 DNA 中的残留的盐离子 Buffer EB: 洗脱纯化柱膜上的 DNA DNA-Only Column: 特异吸附凝胶中的 DNA 片段 DNA-Only Column 特性 DNA 最大结合能力 (Maximum binding capacity) 上清最大载量体积 (Maximum loading volume) 最小洗脱体积 (Minimum elution volume) * 最佳样本选取 (Selection of samples) 样本最大初始量 (Maximum amount of starting material) * 30μg 800μl 30μl TAE 凝胶块 400mg *:30μl 的最小洗脱体系是在兼顾 DNA 回收率及浓度给出的比较合理的建议体积 如果为了提高 DNA 的产量, 可以适当增加洗脱液体积 ; 如果为了提高纯化得到的 DNA 浓度, 在牺牲一部分 DNA 得率的前提下, 适当的减少洗脱液体积, 比如采用 15μl 的洗脱体系, 以期得到更高浓度的 DNA DNA 回收率 鉴于纯化柱的特性, 对于不同片段的 DNA 其吸附能力以及洗脱效率也不一样, 因此胶 回收的效率会有所不同 一般的胶回收效率见下表 : 凝胶种类 DNA 片段回收效率 * OD260/280 30-60bp 60bp-7kb 7-10kb >10kb TAE ~50% 70-80% 60-70% <50% 1.7-7.9 TBE ~40% 60-70% 50-60% <40% 1.7-1.9 * 经测试, 该试剂盒对于 23kb 的 DNA 片段回收效率在 20% 左右 Copyright Foregene 2017/10. All rights reserved. 5/13
注意事项 :( 请务必在使用试剂盒前仔细阅读注意事项 ) 琼脂糖凝胶电泳分离 DNA 时, 使用新鲜的 TAE/TBE Buffer 和新配制的凝胶 琼脂糖浓度过高会影响胶回收的效率和质量, 应尽可能使用 2% 及其以下的琼脂糖凝胶进行电泳 切胶时, 紫外照射时间应尽量短, 以免对 DNA 造成损伤 应尽量切除多余的胶块, 单个离心柱能最多能从 400mg 凝胶中回收到 70-80% 的目的片段, 若切下的胶块 >400mg, 请使用多个离心柱进行回收 回收率与初始 DNA 量和洗脱体积有关, 初始量越少 洗脱体积越少, 回收率越低 建议,DNA 片段的初始量 400ng 试剂盒使用前, 请务必检查 Buffer WB1 是否按说明添加了无水乙醇 Buffer WB1 在使用前分别添加 60ml 无水乙醇 (DE-02011) 120ml 无水乙醇 (DE-02012) 300ml 无水乙醇 (DE-02013) 使用前, 仔细检查 Buffer GE 中是否有沉淀析出, 若有沉淀析出, 请将其置于 37 溶解, 混匀后再使用 洗脱体积 :Buffer EB 不应少于 30μl, 否则会影响 DNA 回收效率 所有离心步骤均为使用台式离心机常温 (15-25 ) 离心 所有实验步骤均在常温 (15-25 ) 进行 Copyright Foregene 2017/10. All rights reserved. 6/13
操作前准备事项 使用本试剂盒前, 请务必仔细阅读说明书 胶回收试剂盒操作简单 方便 快速, 说 明书提供了整个试剂盒的完整信息和正确使用方法 请在使用前准备好必要的实验材 料和设备 实验材料和设备 切好的含目标 DNA 片段的凝胶块 1.5ml 或 2ml 无菌离心管 台式离心机 ( 13,400 g) 65 水浴或金属浴 移液器 涡旋仪等 自备试剂 无水乙醇 安全性 本产品仅供科研使用, 请勿用于医药 临床医疗 食品及化妆品等用途 使用化学品时, 穿戴合适的实验服, 手套, 防护眼镜等 Buffer GE 含有离液盐 : 变性剂, 刺激性 Buffer PW 含有胍盐 : 变性剂, 刺激性 Buffer WB1 含有无水乙醇 : 易燃 Copyright Foregene 2017/10. All rights reserved. 7/13
操作指南 请严格按照说明书进行胶回收相关操作 材料取用说明 请戴上紫外线护目镜, 以免紫外线对眼睛造成伤害 紫外线下, 切下含有目标 DNA 片段的凝胶块 : 凝胶块包含所有的目标 DNA 片段 ; 尽量将多余的凝胶切除 操作步骤 ( 请严格按照本操作说明进行相关实验操作 ) 使用前请先在 Buffer WB1 中加入无水乙醇, 加入体积请参照瓶上的标签 1. 用干净的手术刀将单一的目标 DNA 条带从琼脂糖凝胶中切下 ( 尽量切除多余的凝胶 ), 放入干净的离心管中 2. 称取胶块重量, 按以下情况加入相应体积的 Buffer GE( 如凝胶重为 100mg, 其体积可视为 100μl, 以此类推 ) a 若胶浓度 2% 时, 向胶块中加入 3 倍体积 Buffer GE b 若胶浓度 >2% 时, 建议使用 6 倍体积 Buffer GE 3. 将已加入 Buffer GE 的离心管置于 60 水浴或者金属浴中 10min, 或直至胶块完全溶解 期间, 每隔 2-3min 对离心管进行上下翻转混匀一次, 以帮助胶块溶解 注意 : 若胶块体积过大, 可事先将胶块切成碎块 4. * 可选步骤 : 待胶块完全溶解后, 向含有 DNA 片段的溶胶混合液中加入 60% 溶胶混合液体积的异丙醇 ( 如 0.1g 凝胶加入 300μl Buffer GE 溶胶后, 其体积可视为 400μl, 需补加 240μl 异丙醇, 以此类推 ), 剧烈震荡混匀 注意 : 该步骤用于回收 200bp 及其以下的目的片段, 若回收的目的片段大于 200bp, 请跳过该步骤 5. 将离心柱 (DNA-Only Column) 放入收集管中, 将含有 DNA 片段的溶胶混合液加入离心柱中,12,000rpm(~13,400 g) 离心 1min 弃掉收集管中的废液 Copyright Foregene 2017/10. All rights reserved. 8/13
注意 : 离心柱容积为 700μl, 若样品体积大于 700μl 可分批加入 6. 将离心柱放回收集管中, 向离心柱中加入 700μl Buffer WB1( 使用前请检查是否已加入无水乙醇 ),12,000rpm(~13,400 g) 离心 1min, 弃掉收集管中的废液 注意 : 若回收的 DNA 将用于盐敏试验 ( 如测序 平末端链接 ), 可以在加入 Buffer WB1 后放置 2-5min, 再进行离心 7. 将离心柱放回收集管中, 重复步骤 6 一次 8. 将离心柱放回收集管中,12,000rpm (~13,400 g ) 空管离心 2min, 去掉离心柱中残余的 Buffer WB1 注意 :Buffer WB1 中乙醇的残留会影响后续的酶反应 ( 酶切 PCR 等 ) 实验 9. 将离心柱转移至新的 1.5ml 离心管中, 向膜中央悬空滴加 30-50μl 已于 65 预热的 Buffer EB( 切勿将洗脱液添加到压圈上, 否则会损失较大体积的洗脱液 ), 室温放置 2min,12,000rpm(~13,400 g) 离心 1min 注意 :Buffer EB 的体积不应少于 15μl, 在推荐洗脱体积范围内, 适当增加 Buffer EB 体积, 可提高 DNA 得率 如果希望提高 DNA 的浓度, 可将第 1 次离心得到的溶液重新加回离心柱中,12,000rpm (~13,400 g) 离心 1min DNA 浓度及纯度检测 得到的 DNA 的质量与操作过程中的多种因素有关 DNA 可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度 DNA 的 OD260 值为 1 相当于大约 50μg/ml 双链 DNA DNA 的 OD260/280 1.7-1.9 如果洗脱时不使用洗脱缓冲液 Buffer EB, 而使用去离子水, 比值会偏低, 因为 ph 值和离子存在会影响光吸收值, 但并不表示纯度低 Copyright Foregene 2017/10. All rights reserved. 9/13
快速操作示意图 Copyright Foregene 2017/10. All rights reserved. 10/13
问题分析指南 以下针对凝胶 DNA 片段回收中可能遇到的问题进行分析, 希望能对您的实验有所帮助 另外, 对于在操作说明和问题分析以外的其他实验或技术上的问题, 我们设有专门的技术支持帮助您 如有任何需要可联系我们 :028-83360257 或 E-mali: Tech@foregene.com 回收不到 DNA 片段或回收效率低 通常会有多种因素影响胶回收效率, 比如 : 凝胶种类 (TAE/TBE) DNA 片段初始量 凝胶块的溶解程度 洗脱体积等 可能存在的原因如下 : 1. 电泳缓冲液不新鲜 建议 : 电泳前, 更换新的电泳缓冲液 2. 切胶的时候没有将目标 DNA 条带切下 建议 : 确认切下的凝胶中含有目标 DNA 片段, 尽量将所有的目标 DNA 都包含在切下的凝胶中以便获得更高的回收率 3. 溶胶液 (Buffer GE) 加入比例不合适 建议 : 正确称量切下的凝胶块的重要, 严格按照说明书的提示, 加入正确体积的溶胶液 4. 凝胶块溶解不充分 建议 : 在 60 溶胶时, 每间隔 2-3min 震荡混匀, 确保凝胶块完全溶解 DNA 片段会残留在任何没有溶解的凝胶块中 5. 切下胶块过大 (>400mg) 建议 : 单个离心柱能最多能从 400mg 凝胶中回收到 70-80% 的目的片段 若切下胶块超过 400mg, 需使用多个离心柱进行回收 6. Buffer WB1 中忘记添加无水乙醇 建议 : 参照说明书或试剂瓶上标签在 Buffer WB1 中添加正确体积的无水一处并混匀 7. 洗脱液添加不正确 建议 : 确认 Buffer EB 或 ddh 2 O 滴加到了纯化柱膜中间位置 ; 尤其是进行小体积洗脱的时候, 一定要确定洗脱液滴加的位置正确, 否则会导致无法回收到 DNA 8. 洗脱液使用不正确 建议 : 有些特殊需求的实验需要使用纯水洗脱, 请确定洗脱液的 ph 在 7.0-8.5 之 Copyright Foregene 2017/10. All rights reserved. 11/13
间, 否则将很大程度上影响洗脱效率 回收的 DNA 影响下游实验 1. 洗脱下来的 DNA 片段中盐离子浓度过高 建议 : 结合 DNA 片段的纯化柱在加入 700μl Buffer WB1 后, 在室温放置 5min 再离心, 以便能彻底的去除盐离子 2. 洗脱下来的 DNA 片段中含有乙醇残留 建议 :Buffer WB1 洗涤纯化柱后,12,000rpm (~13,400 g ) 空管离心 2min 一定不能省略 ; 如果还有乙醇残留可以将纯化柱在室温放置 2-5min 再进行洗脱或者以 13,400rpm (~17,000 g ) 离心 2min 3. 洗脱液中含有琼脂糖污染 建议 : 凝胶块没有完全溶解 如果凝胶块比较大, 可以预先将胶块切小, 并适当延长溶胶时间以确保凝胶块完全溶解 Copyright Foregene 2017/10. All rights reserved. 12/13
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