Genomic DNA Micro Kit Cat.No.DM-01011/01012/01013 For genomic DNA purification from small volumes of blood,dried blood spots, laser-microdissected tissues,tissues,and so on For research use only Store at room temperature Copyright Foregene 2014/03. All rights reserved. 1/21
目 录 产品介绍........ 3 产品特点........... 3 试剂盒应用............. 4 基因组 DNA 的应用................. 4 产品质量控制............ 4 试剂盒内容............. 5 产品信息........ 5 储存条件........ 5 试剂盒组分信息.......... 6 DNA-Only Column 特性..... 6 基因组 DNA 提取得率和纯度.......... 7 基因组 DNA 片段大小.......... 7 注意事项........ 8 操作前准备事项............. 9 实验材料和设备.............. 9 自备试剂................ 9 安全性.............. 9 操作指南.............. 10 从微量抗凝血液中提取基因组 DNA 操作步骤...... 11 从干血点中提取基因组 DNA 操作步骤................. 12 从微量动物组织中提取基因组 DNA 操作步骤..... 13 从漱口水中提取基因组 DNA 操作步骤........... 14 从毛囊中提取基因组 DNA 操作步骤......... 15 DNA 浓度及纯度测定.............. 16 快速操作示意图................. 17 问题分析指南........... 18 Copyright Foregene 2014/03. All rights reserved. 2/21
产品介绍 本试剂盒采用可以特异性结合 DNA 的 DNA-Only Column 全新的 Foregene Protease 以及独特的缓冲液体系, 可以在 20-80 分钟内高效从各种微量生物样本中, 例如 : 微量血液 细胞 动物组织 干燥血迹 临床棉签 毛囊等, 纯化得到到较高浓度 高质量的基因组 DNA 离心柱中采用的 DNA-Only 硅胶膜为本公司特有新型材料, 高效 专一吸附 DNA, 可最大限度的去除 RNA 杂质蛋白 离子及细胞中其他有机化合物 专门设计的微小纯化柱结合基因组 DNA, 可用微量 (15μl) 洗脱液洗脱 DNA, 提高获得的基因组 DNA 的浓度, 便于下游检测或实验 产品特点 无 RNA 酶污染 : 试剂盒提供的 DNA-Only Column 使得实验过程中无需额外添加 RNA 酶即可去除基因组 DNA 中的 RNA, 避免实验室遭受外源 RNA 酶污染 速度快 :Foregene Protease 具有比同类蛋白酶更高的活性, 消化组织样本速度快 ; 操作简单, 基因组 DNA 提取操作在 20-80 分钟内即可完成 方便 : 离心操作均在常温, 无需 4 低温离心或乙醇沉淀 DNA 安全 : 无需有机试剂抽提 质量高 : 提取获得的基因组 DNA 片段大 无 RNA 无 RNA 酶 离子含量极低, 能满足各种实验的要求 微量洗脱体系 : 可以提高基因组 DNA 浓度, 便于下游检测或实验 Copyright Foregene 2014/03. All rights reserved. 3/21
试剂盒应用 适用于纯化以下样本基因组 DNA: 新鲜或冻存的动物组织 新鲜或抗凝冻存的微量全 血 干血斑 培养的细胞 微量切片组织 毛囊 漱口水等 基因组 DNA 的应用 Genomic DNA Micro Kit 纯化获得的基因组 DNA 纯度高, 可用于常规分子生物学操作, 如 : 酶切 PCR Southern 杂交 文库构建等实验 产品质量控制 按照福际生物试剂盒质量检测体系标准 (FOREGENE s Total Quality Management System), 每一批次的微量基因组 DNA 提取试剂盒都严格进行多次测试, 确保每一批次试剂盒质量的可靠性和稳定性 Copyright Foregene 2014/03. All rights reserved. 4/21
试剂盒内容 Genomic DNA Micro Kit 微量基因组 DNA 提取试剂盒 试剂盒组成 DM-01011 DM-01012 DM-01013 50 次 100 次 250 次 Buffer ST1 18ml 36ml 90ml Buffer ST2* 18ml 36ml 90ml Buffer PW* 30ml 60ml 150ml Buffer WB 25ml 50ml 125ml Buffer EB 6ml 12ml 30ml Foregene Protease 1.2ml 2.4ml 6ml DNA-Only Column 50 套 100 套 250 套 说明书 1 份 1 份 1 份 *:Buffer ST2 Buffer PW 中含有具刺激性的离液盐, 操作时请注意带上手套和进行相关防护措施 产品信息 型号 离心柱型 纯化组件 Foregene 离心柱 试剂 通量 1-24 个样品 制备时间 20-80min(24 个样品 ) 离心机 台式离心机 组织酶解物分离 离心分离 纯化柱 DNA 承载量 40μg 离心柱液体盛装量 800μl 洗脱体积 15-100μl 组织样本处理量 5mg 组织或微量样本 储存条件 本试剂盒在常温 (15 25 ) 干燥条件下, 可保存 12 个月 ; 如需保存更长时间可置于 2 8 注意 : 若低温保存, 溶液容易产生沉淀 在使用前务必将试剂盒内的溶液在室温中放置一段时间, 必要时可在 37 水浴中预热 10 分钟, 以溶解沉淀, 混匀后再使用 Foregene Protease 溶液具有独特配方, 常温保存长期 (3 个月 ) 具有活性 ; 在 4 保存, 其活性和稳定性会更好, 因此建议将其置于 4 保存, 切记不能置于 -20 保存 Copyright Foregene 2014/03. All rights reserved. 5/21
试剂盒组分信息 Buffer ST1: 提供样本酶解环境 Foregene Protease: 在 Buffer ST1 的环境下酶解组织样本 Buffer ST2: 失活 Foregene Protease, 并提供 DNA 上柱环境 Buffer PW: 去除 DNA 中的蛋白质 RNA 等杂质 Buffer WB: 去除 DNA 中的残留的盐离子 Buffer EB: 洗脱纯化柱膜上的 DNA DNA-only Column: 特异吸附裂解产物中的基因组 DNA DNA-Only Column 特性 DNA 最大结合能力 (Maximum binding capacity) 上清最大载量体积 (Maximum loading volume) 最大 DNA 片段 (Longset DNA fragment) 最小洗脱体积 (Minimum elution volume) * 最佳样本选取 (Selection of samples) 样本最大初始量 (Maximum amount of starting material) * 40μg 800μl 23kb 15μl 新鲜培养细胞 动物组织 5mg 组织或微量样本 *:15μl 的最小洗脱体系是在兼顾 DNA 回收率及浓度给出的比较合理的建议体积 如果为了提高 DNA 的产量, 可以适当增加洗脱液体积 ; 如果为了提高纯化得到的 DNA 浓度, 在牺牲一部分 DNA 得率的前提下, 适当的减少洗脱液体积, 以期得到更高浓度的 DNA Copyright Foregene 2014/03. All rights reserved. 6/21
基因组 DNA 提取得率和纯度 动物组织基因组 DNA 提取得率与组织的来源 保存条件 保存时间 用量等因素相关, 所得基因组 DNA 纯度均满足常规分子生物学实验操作, 其 OD260/280 在 1.7-1.9 之间 基因组 DNA 片段大小 Genomic DNA Micro Kit 是采用硅胶膜柱分离纯化多种样本来源的基因组 DNA, 纯化 获得的基因组 DNA 片段大小均在 23kb 附近 Copyright Foregene 2014/03. All rights reserved. 7/21
注意事项 :( 请务必在使用试剂盒前仔细阅读注意事项 ) 样品应避免反复冻融, 否则会导致提取的 DNA 片段较小且产量也会降低 使用前, 仔细检查 Buffer ST1 Buffer ST2 和 Buffer PW 中是否有沉淀析出, 若有沉淀析出, 请将其置于 37 溶解, 混匀后再使用 试剂盒使用前, 请务必检查 Buffer WB 是否按说明添加了无水乙醇 Buffer WB 在使用前分别添加 60ml 无水乙醇 (DM-01011) 120ml 无水乙醇 (DM-01012) 300ml 无水乙醇 (DM-01013) 在样品裂解过程中, 应始终保持样品浸于裂解缓冲液中, 若样品黏附在管盖及内壁, 可通过短暂离心进行处理 洗脱体积 : 采用微量洗脱体系会提高 DNA 浓度, 但 Buffer EB 不应少于 15μl, 否则会影响 DNA 产量 切记不要在任何 Buffer 中添加 RNA 酶 所有离心步骤均为使用台式离心机常温 (15-25 ) 离心 所有实验步骤均在常温 (15-25 ) 进行 Copyright Foregene 2014/03. All rights reserved. 8/21
操作前准备事项 使用本试剂盒前, 请务必仔细阅读说明书 微量基因组 DNA 提取试剂盒操作简单 方 便 快速, 说明书提供了整个试剂盒的完整信息和正确使用方法 请在使用前准备好 必要的实验材料和设备 实验材料和设备 多种来源的样本, 如 : 微量血液 细胞 动物组织 干燥血迹 临床棉签 毛囊等 1.5ml 或 2ml 无菌离心管 台式离心机 ( 13,400 g) 65 水浴或金属浴 移液器 涡旋仪等 自备试剂 1M DTT( 用于提取毛发毛囊基因组 ) 无水乙醇 安全性 本产品仅供科研使用, 请勿用于医药 临床医疗 食品及化妆品等用途 使用化学品时, 穿戴合适的实验服, 手套, 防护眼镜等 Buffer ST2 Buffer PW 含有胍盐 : 变性剂, 刺激性 Buffer WB 含有无水乙醇 : 易燃 Foregene Protease: 增敏剂, 刺激性 Copyright Foregene 2014/03. All rights reserved. 9/21
操作指南 本说明书根据实验材料差异, 分别提供不同组织样本的操作说明, 请根据自己的样本 材料选择相应的操作步骤进行基因组 DNA 提取操作 材料取用说明 血液或抗凝血液 :1-100μl 凝血块 :1-10mg 血斑 :1-3 片直径约为 3mm 的干血斑 动物组织 :1-10mg 漱口水 :10-20ml 毛囊 :1-5 根 预防样本间交叉污染 为了避免样本间交叉污染, 每次取样后都需要将取样器材的刃口或与样本直接接触的部位浸入 2% 次氯酸钠溶液中, 反复洗刷数次进行清洗, 然后用干净的纸巾擦干残余液体后再进行使用 为了试验方便, 也可准备多个取样器材, 在使用完后进行统一清洗, 确保每一单独样本均使用的是无污染的取样器材 Copyright Foregene 2014/03. All rights reserved. 10/21
一 从微量抗凝血液中提取基因组 DNA( 请严格按照本操作说明进行相 关实验操作 ) 使用前请先在 Buffer WB 中加入无水乙醇, 加入体积请参照瓶上的标签 1. 取 1-100μl 抗凝血液到 1.5ml 离心管中 2. 不足 100μl 的血液样本加 Buffer ST1 补足到 100μl 3. 加入 10μl Foregene Protease, 涡旋混匀, 置于 65, 孵育 10min 4. 加入 100μl Buffer ST2, 轻轻颠倒混匀, 瞬时离心以去除管盖及内壁的液滴 5. 将离心管放置于 65 金属浴或水浴中 10min, 每间隔 3min 轻摇混匀一次 6. 将混合液全部转移至离心柱 (DNA-Only Column) 中,12,000rpm(~13,400 g) 离心 1min, 弃掉收集管中的废液 7. 将离心柱放回收集管中, 向离心柱中加入 500μl Buffer PW,12,000rpm(~13,400 g) 8. 将离心柱放回收集管中, 向离心柱中加入 700μl Buffer WB,12,000rpm(~13,400 g) 9. 重复步骤 8 一次 10. 将离心柱放回收集管中,12,000rpm(~13,400 g) 空管离心 2min 11. 将离心柱转移至新的 1.5ml 离心管中, 向膜中央悬空滴加 15-100μl 已于 65 预热的 Buffer EB( 切勿将洗脱液添加到压圈上, 否则会损失较大体积的洗脱液 ), 室温放置 5min,12,000rpm(~13,400 g) 离心 1min 注意 :Buffer EB 的体积不应少于 15μl, 在推荐洗脱体积范围内, 适当增加 Buffer EB 体积, 可提高 DNA 得率 如果希望提高 DNA 的浓度, 可将第 1 次离心得到的溶液重新加回离心柱中,12,000rpm (~13,400 g) 离心 1min Copyright Foregene 2014/03. All rights reserved. 11/21
二 从干血点中提取基因组 DNA( 请严格按照本操作说明进行相关实验操 作 ) 使用前请先在 Buffer WB 中加入无水乙醇, 加入体积请参照瓶上的标签 1. 取 1-3 片直径约为 3mm 的血斑 ( 或血卡 ) 样品到 1.5ml 离心管中 2. 加入 180μl Buffer ST1,20μl Foregene Protease, 轻微振荡混匀 3. 将离心管于 65, 放置 30-60min, 其间每间隔 15min 涡旋混匀一次 ( 或用手指用力弹击离心管底部数次 ) 以帮助动物血斑酶解 4. 加入 200μl Buffer ST2, 轻轻颠倒混匀, 瞬时离心以去除管盖及内壁的液滴 5. 将离心管放置于 65 金属浴或水浴中 10min, 其间每间隔 3min 轻摇混匀一次 6. 将所得混合液全部转移至离心柱 (DNA-Only Column) 中,12,000rpm(~13,400 g) 7. 将离心柱放回收集管中, 向离心柱中加入 500μl Buffer PW,12,000rpm(~13,400 g) 8. 将离心柱放回收集管中, 向离心柱中加入 700μl Buffer WB,12,000rpm(~13,400 g) 9. 重复步骤 8 一次 10. 将离心柱放回收集管中,12,000rpm(~13,400 g) 空管离心 2min 11. 将离心柱转移至新的 1.5ml 离心管中, 向膜中央悬空滴加 15-100μl 已于 65 预热的 Buffer EB( 切勿将洗脱液添加到压圈上, 否则会损失较大体积的洗脱液 ), 室温放置 5min,12,000rpm(~13,400 g) 离心 1min 注意 :Buffer EB 的体积不应少于 15μl, 在推荐洗脱体积范围内, 适当增加 Buffer EB 体积, 可提高 DNA 得率 如果希望提高 DNA 的浓度, 可将第 1 次离心得到的溶液重新加回离心柱中,12,000rpm (~13,400 g) 离心 1min Copyright Foregene 2014/03. All rights reserved. 12/21
三 从微量动物组织中提取基因组 DNA( 请严格按照本操作说明进行相 关实验操作 ) 使用前请先在 Buffer WB 中加入无水乙醇, 加入体积请参照瓶上的标签 1. 取不超过 10mg 动物组织到 1.5ml 离心管中 将组织尽量切成小块, 以提高裂解效率 2. 加入 180μl Buffer ST1,20μl Foregene Protease, 涡旋混匀 瞬时离心以收集附着在管盖及内壁的液体 3. 将离心管放置于 65 金属浴或水浴中 30-60 min, 其间每间隔 15min 涡旋混匀一次 ( 或用手指用力弹击离心管底部数次 ) 以帮助动物组织酶解 4. 加入 200μl Buffer ST2, 涡旋混匀, 瞬时离心以收集附着在管盖及内壁的液体 5. 将离心管放置于 65, 放置 10min, 其间每间隔 3min 涡旋混匀一次 6. 将所得混合液全部转移至离心柱 (DNA-Only Column) 中,12,000rpm(~13,400 g) 7. 将离心柱放回收集管中, 向离心柱中加入 500μl Buffer PW,12,000rpm(~13,400 g) 8. 将离心柱放回收集管中, 向离心柱中加入 700μl Buffer WB,12,000rpm(~13,400 g) 9. 重复步骤 8 一次 10. 将离心柱放回收集管中,12,000rpm(~13,400 g) 空管离心 2min 11. 将离心柱转移至新的 1.5ml 离心管中, 向膜中央悬空滴加 15-100μl 已于 65 预热的 Buffer EB( 切勿将洗脱液添加到压圈上, 否则会损失较大体积的洗脱液 ), 室温放置 5min,12,000rpm(~13,400 g) 离心 1min 注意 :Buffer EB 的体积不应少于 15μl, 在推荐洗脱体积范围内, 适当增加 Buffer EB 体积, 可提高 DNA 得率 如果希望提高 DNA 的浓度, 可将第 1 次离心得到的溶液重新加回离心柱中,12,000rpm (~13,400 g) 离心 1min Copyright Foregene 2014/03. All rights reserved. 13/21
四 从漱口水中提取基因组 DNA( 请严格按照本操作说明进行相关实验操 作 ) 使用前请先在 Buffer WB 中加入无水乙醇, 加入体积请参照瓶上的标签 1. 在 50ml 无菌管中加入 10-20ml 漱口水样品,1,800 g 离心 5min, 将上清小心倒掉或用移液器小心吸除上清液 2. 向沉淀中加入 180μl Buffer ST1, 重悬沉淀, 将全部悬液转移至 1.5ml 离心管中 3. 加入 20μl Foregene Protease, 涡旋混匀 瞬时离心以收集附着在管盖及内壁的液体 4. 将离心管放置于 65 金属浴或水浴中 30-60 min, 其间每间隔 15min 涡旋混匀一次 ( 或用手指用力弹击离心管底部数次 ) 以帮助细胞酶解 5. 加入 200μl Buffer ST2, 涡旋混匀, 瞬时离心以收集附着在管盖及内壁的液体 6. 将离心管放置于 65 金属浴或水浴中 10min, 其间每间隔 3min 涡旋混匀一次 7. 将所得混合液全部转移至离心柱 (DNA-Only Column) 中,12,000rpm(~13,400 g) 8. 将离心柱放回收集管中, 向离心柱中加入 500μl Buffer PW,12,000rpm(~13,400 g) 9. 将离心柱放回收集管中, 向离心柱中加入 700μl Buffer WB,12,000rpm(~13,400 g) 10. 重复步骤 9 一次 11. 将离心柱放回收集管中,12,000rpm(~13,400 g) 空管离心 2min 12. 将离心柱转移至新的 1.5ml 离心管中, 向膜中央悬空滴加 15-100μl 已于 65 预热的 Buffer EB( 切勿将洗脱液添加到压圈上, 否则会损失较大体积的洗脱液 ), 室温放置 5min,12,000rpm(~13,400 g) 离心 1min 注意 :Buffer EB 的体积不应少于 15μl, 在推荐洗脱体积范围内, 适当增加 Buffer EB 体积, 可提高 DNA 得率 如果希望提高 DNA 的浓度, 可将第 1 次离心得到的溶液重新加回离心柱中,12,000rpm (~13,400 g) 离心 1min Copyright Foregene 2014/03. All rights reserved. 14/21
五 从毛囊中提取基因组 DNA( 请严格按照本操作说明进行相关实验操作 ) 使用前请先在 Buffer WB 中加入无水乙醇, 加入体积请参照瓶上的标签 需提前准备 1M DTT 溶液 1. 取 1 根含毛囊的毛发 : 在 1.5ml 离心管中加入 250μl Buffer ST1,20μl Foregene Protease,20μl 1M DTT, 混匀 从毛发根部毛囊处取 1cm 长的一段, 与上述溶液涡旋混匀 2. 将离心管放置于 65 金属浴或水浴中 1hr, 其间每间隔 15min 涡旋混匀一次 ; 或者置于水浴振荡仪中消化, 消化至毛发断裂为小段或发生卷曲即可 瞬时离心以收集附着在管壁及管盖的液体 注意 : 裂解时间根据样本不同有所差异, 一般毛发需要 40-60min 羽茎样本不会完全酶解, 对于未酶解完全的羽茎样本, 可以直接以 12,000rpm(~13,400 g) 离心 5min, 取上清液进行后续实验 3. 加入 300μl Buffer ST2, 涡旋混匀, 瞬时离心以收集附着在管壁及管盖的液体 4. 将离心管放置于 65 金属浴或水浴中 10min, 每间隔 3min 涡旋混匀一次 5. 将所得混合液全部转移至离心柱中,12,000rpm(~13,400 g) 6. 将离心柱放回收集管中, 向离心柱中加入 500μl Buffer PW,12,000rpm(~13,400 g) 7. 将离心柱放回收集管中, 向离心柱中加入 700μl Buffer WB,12,000rpm(~13,400 g) 8. 重复步骤 7 一次 9. 将离心柱放回收集管中,12,000rpm(~13,400 g) 空管离心 2min 10. 将离心柱转移至新的 1.5ml 离心管中, 向膜中央悬空滴加 15-100μl 已于 65 预热的 Buffer EB( 切勿将洗脱液添加到压圈上, 否则会损失较大体积的洗脱液 ), 室温放置 5min,12,000rpm(~13,400 g) 离心 1min 注意 :Buffer EB 的体积不应少于 15μl, 在推荐洗脱体积范围内, 适当增加 Buffer EB 体积, 可提高 DNA 得率 如果希望提高 DNA 的浓度, 可将第 1 次离心得到的溶液重新加回离心柱中,12,000rpm (~13,400 g) 离心 1min Copyright Foregene 2014/03. All rights reserved. 15/21
DNA 浓度及纯度检测 得到的基因组 DNA 的质量与操作过程中的多种因素有关 DNA 可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度 DNA 的 OD260 值为 1 相当于大约 50μg/ml 双链 DNA DNA 的 OD260/280 1.7-1.9 如果洗脱时不使用洗脱缓冲液 Buffer EB, 而使用去离子水, 比值会偏低, 因为 ph 值和离子存在会影响光吸收值, 但并不表示纯度低 Copyright Foregene 2014/03. All rights reserved. 16/21
快速操作示意图 Copyright Foregene 2014/03. All rights reserved. 17/21
问题分析指南 以下针对组织样本基因组 DNA 提取中可能遇到的问题进行分析, 希望能对您的实验有所帮助 另外, 对于在操作说明和问题分析以外的其他实验或技术上的问题, 我们设有专门的技术支持帮助您 如有任何需要可联系我们 :028-83360257 或 E-mali: Tech@foregene.com 纯化柱堵塞 本试剂盒在基因组 DNA 提取操作步骤中, 样本酶解后没有离心步骤直接将样本酶解混合物上纯化柱吸附 DNA, 有可能由于酶解不完全 样本粘稠高等因素导致纯化柱堵塞 可能存在的原因如下 : 1. 组织样本酶解不完全 建议 : 可适当延长 Foregene Protease 处理样本时间或者以 12,000rpm (~13,400 g) 离心 5min 后取上清液过柱 2. 组织样本用量过多或者组织较大 建议 : 组织样本最好不要超过 10mg; 如果样本过多请相应增加 Buffer ST1 Foregene Protease Buffer ST2 的用量 3. 样本粘稠度过高 建议 : 可将样本用 10mM 的 Tris-HCl 适当稀释后再进行基因组 DNA 的提取操作 低产量或无 DNA 通常有多种因素会影响基因组 DNA 产量, 包括样本来源 样本保存条件 样本的预处 理 操作等 取过程中无法获得基因组 DNA 1. 组织样本保存不当或保存时间太长, 导致基因组 DNA 已经降解 建议 : 组织样本保存于液氮或者 -80 ; 用甲醛等溶液固定组织时应尽量缩短从样品采集到置于固定液之间的时间 ; 尽量使用新近采集组织样本进行基因组 DNA 的提取 2. 组织用量过少可能导致提取不到相应的基因组 DNA Copyright Foregene 2014/03. All rights reserved. 18/21
建议 : 对于保存时间很长或基因组 DNA 降解比较厉害的组织样本, 可以适当增加组织样本的用量, 以便提取获得可观的基因组 DNA 可以根据 DNA 需要确定样本的用量, 但是不宜超过 10mg 3. Foregene Protease 保存不当, 导致其活性降低或失活 建议 : 确认 Foregene Protease 保存条件或者更换新的 Foregene Protease 进行酶解反应 4. 试剂盒保存不当或存放时间太长, 导致试剂盒里面某些组分失效 建议 : 购置新的通用型基因组 DNA 提取试剂盒进行相关操作 5. 试剂盒使用不当 建议 : 请确认使用的试剂盒为 Genomic DNA Micro Kit 6. Buffer WB 没有添加无水乙醇 建议 : 确认 Buffer WB 中添加正确体积的无水乙醇 7. 洗脱液没有正确滴加到硅胶膜上 建议 : 将 65 预热的洗脱液滴加到硅胶膜的正中间, 并在室温放置 5 分钟增加洗脱效率 提取获得低产量基因组 DNA 1. 样本保存不当或保存时间太长, 导致基因组 DNA 降解 建议 : 组织样本保存于液氮或者 -80 ; 用甲醛等溶液固定组织时应尽量缩短从样品采集到置于固定液之间的时间 ; 尽量使用新近采集组织样本进行基因组 DNA 的提取 2. 组织样本用量过少, 提取到的基因组 DNA 含量会较少 建议 : 对于保存时间过长或基因组 DNA 降解比较厉害的组织样本, 可以适当增加组织样本的用量, 以便提取获得可观的基因组 DNA 可以根据 DNA 需要确定样本的用量, 但是不宜超过 10mg 3. Foregene Protease 保存不当, 导致其活性降低或失活 建议 : 确认 Foregene Protease 保存条件或者更换新的 Foregene Protease 进行酶解反应 4. 洗脱液问题 建议 : 请使用 Buffer EB 进行洗脱 ; 如果使用 ddh 2 O 或其他洗脱液, 确认洗脱液的 ph 值在 7.0-8.5 之间 5. 洗脱液没有正确滴加 Copyright Foregene 2014/03. All rights reserved. 19/21
建议 : 请将洗脱液滴加到硅胶膜的正中间, 并在室温放置 5 分钟增加洗脱效率 6. 洗脱液体积太少 建议 : 请按说明书上要求使用洗脱液进行基因组 DNA 洗脱, 最少不要低于 15μl 提取获得基因组 DNA 纯度低 基因组 DNA 纯度低会导致下游实验的失败或效果不理想, 如 : 酶切不开,PCR 得不到目的基因片段等 1. 杂蛋白污染 RNA 污染 分析 : 没有使用 Buffer PW 洗涤纯化柱 ;Buffer PW 洗涤纯化柱没有使用正确的离心转速 建议 : 在上清液过柱时尽量保证上清液中无沉淀 ; 务必按说明书进行 Buffer PW 洗涤纯化柱, 并且此步骤不能省略 2. 杂质离子污染 分析 : 省略了 Buffer WB 洗涤纯化柱或者只洗涤了一次, 导致残留的离子污染 建议 : 务必按说明书使用 Buffer WB 洗涤 2 次, 以尽量去除残留的离子 3. RNA 酶污染 分析 :Buffer 中添加了外源的 RNA 酶 ;Buffer PW 洗涤操作不正确, 导致 RNA 酶残留, 影响下游 RNA 实验操作, 如 : 体外转录等 建议 :Foregene 系列核酸提取试剂盒无需额外添加 RNA 酶即可去除 RNA, Genomic DNA Micro Kit 里面所有试剂均无需添加 RNA 酶 ; 务必按说明书进行 Buffer PW 洗涤纯化柱, 并且此步骤不能省略 4. 乙醇残留 分析 :Buffer WB 洗涤纯化柱后, 没有进行空管离心操作 建议 : 按说明书进行正确的空管离心操作 5. 其他杂质污染 分析 : 保存样本或特殊样本没有进行预处理 建议 : 按操作说明对样本进行彻底的预处理 Copyright Foregene 2014/03. All rights reserved. 20/21
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