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苗 栗 三 山 國 王 信 仰 及 其 地 方 社 會 意 涵 The Influences and Implications of Local Societies to Three Mountain Kings Belief, in Taiwan Miaoli 研 究 生 : 林 永 恩 指 導

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生物安全学报 2017ꎬ 26(1): 80-86 JOURNAL OF BIOSAFETY http: www.jbscn.org DOI: 10.3969 / j.issn.2095 1787.2017.01.013 南疆红枣产区枣疯病发生现状及主导因子分析 韩剑 1 ꎬ 罗明 1 ꎬ 徐金虹 2 ꎬ 王同仁 2 ꎬ 张祥林 3 4 ꎬ 项雪峰 1 新疆农业大学农学院 ꎬ 新疆乌鲁木齐 830052ꎻ 2 新疆阿瓦提县农技推广中心 ꎬ 新疆阿瓦提 843200ꎻ 3 新疆出入境检验检疫局 ꎬ 新疆乌鲁木齐 830063ꎻ 4 新疆阿克苏地区 农业检验监测中心 ꎬ 新疆阿克苏 843000 摘要 : 目的 枣疯病是枣树生产中的毁灭性病害 ꎮ 研究南疆枣疯病发生危害现状及主导因子 ꎬ 可为该病的预测预报和防 治提供依据 ꎮ 方法 连续 4 年对新疆阿克苏地区 喀什地区枣疯病发生情况进行调查及分子检测 ꎬ 并分析了种植模式与管 理水平 枣树品种与种植年限 传播方式等因素对枣疯病发生的影响 ꎮ 结果 目前 ꎬ 新疆南疆红枣产区枣疯病尚属零星 团 簇状分布 ꎮ 嫁接育苗是多数枣产区病园内苗期和幼树发病以及病害从病区传入无病区的主要原因 ꎬ 酸枣实生苗也是不可 忽视的病害侵染来源 ꎮ 不同枣树品种对枣疯病的田间抗性表现出一定的差异 ꎮ 利用巢氏 PCR 检测及 TaqMan 探针实时荧 光定量 PCR 检测技术对田间样品的检测结果显示 ꎬ 病园内存在着比例不等的无症带菌植株 ꎮ 结论 无症带菌苗的人为传 播是导致南疆地区枣疯病发生和流行的主导因素 ꎮ 关键词 : 枣疯病 ꎻ 植原体 ꎻ 危害现状 ꎻ 传播方式 Damage caused by witches broom and factors of influence at growing areas in southern Xinjiang HAN Jian 1 ꎬ LUO Ming 1 ꎬ XU Jinhong 2 ꎬ WANG Tongren 2 ꎬ ZHANG Xianglin 3 ꎬ XIANG Xuefeng 4 1 College of Agronomyꎬ Xinjiang Agricultural Universityꎬ Urumqiꎬ Xinjiang 830052ꎬ Chinaꎻ 2 Awat Agricultural Technology Extension Centerꎬ Awatꎬ Xinjiang 843200ꎬ Chinaꎻ 3 Xinjiang Entry Exit Inspection and Quarantine Bureauꎬ Urumqiꎬ Xinjiang 830063ꎬ Chinaꎻ 4 Akesu Prefecture Agricultural Test and Inspection Centerꎬ Akesuꎬ Xinjiang 843000ꎬ China Abstract: Aim Jujube witches broom is an destructive disease in the production of ( Zizyphus jujuba Mill.). The major ob jective was to investigate the damage status of witches broomꎬ associated with phytoplasmas and factors of influence at differ ent growing areas in southern Xinjiang. Method A detailed field survey of witches broom was conducted at different growing areas in Akesu and Kashi regions of southern Xinjiang over four yearsꎬ and the effects of factors such as planting pat ternꎬ management levelꎬ varietyꎬ planting years and transmission mode on witches broom were analyzed. Result The results showed that witches broom was spread in a sporadic and clustered way in southern Xinjiang. The wide utilization of grafted seedlings carrying phytoplasmas had spread the disease within orchards and also from diseased areas to disease free ones. Wild ( Z. spinosus Hu) seedlings as important primary sources of the diseaseꎬ should not be neglected. Differences in field re sistance to witches broom disease were detected. Nested polymerase chain reaction ( Nested PCR) and TaqMan probe real time fluorescent quantitative PCR revealed that there were different proportions of symptomless carrier plants ( latent infection) in diseased gardens. Conclusion The asymptomatic germ carrying sapling spread disease by human caused is the dominant factor in the occurrence and epidemic of this disease in southern Xinjiang. Key words: witches broomꎻ phytoplasmaꎻ damage situationꎻ disease spread 枣疯病 ( witches broom disease) 又称 枣 癌症 ꎬ 是由植原体 ( phytoplasma) 侵染引起的在枣 树 Zizyphus jujuba Mill. 生产上危害最严重的毁灭性 病害 ꎬ 几乎分布于所有的枣树栽培产区 ( 田国忠等 ꎬ 收稿日期 (Received): 2016-09-18 接受日期 (Accepted): 2016-12-06 基金项目 : 新疆维吾尔自治区高校科研计划项目 (XJEDU2010S15)ꎻ 新疆维吾尔自治区自然科学基金 (2010211A17) 作者简介 : 韩剑 ꎬ 男 ꎬ 副教授 ꎮ 研究方向 : 农业微生物生物技术 ꎮ E mail: hjwjemail@ 163.com 通信作者 (Author for correspondence)ꎬ E mail: luomingxjau@ sina.com

第 1 期 韩剑等 : 南疆红枣产区枣疯病发生现状及主导因子分析 81 2002)ꎮ 枣疯病传染性极强 ꎬ 可通过带病接穗 砧木 根蘖苗等无性繁殖材料及介体昆虫等方式传播 ꎮ 现有枣树主栽品种普遍对其敏感 ꎬ 感病枣树花器返祖 ꎬ 芽不能正常萌发 ꎬ 枝叶丛枝状 ꎬ 重病树一般不结果或结果少 ꎬ 果肉硬 ꎬ 不能食用 ꎮ 一般枣树发病后 ꎬ 小树 1 ~ 2 年 大树 5 ~ 6 年即死亡 ꎬ 全国每年因枣疯病而死的枣树高达千万株 ꎬ 直接经济损失高达数亿元 ꎬ 严重阻碍了枣树产业的发展 ( 范俊秀 ꎬ 2009ꎻ 郝会娟等 ꎬ2009)ꎮ 近年来 ꎬ 随着新疆维吾尔自治区把建设特色林果基地作为农业结构调整优化 实现优势资源转换的重要战略方针的实施 ꎬ 新疆特色林果业迅猛发展 ꎬ 其中红枣成为南疆地区优先发展的重中之重 ꎬ 枣树的栽培面积和规模迅速扩大 ꎮ 然而 ꎬ 南疆红枣种植规模的快速扩大及品种的改良更新 ꎬ 对苗木的需求激增 ꎮ 在苗木 接穗的调运 ꎬ 嫁接育苗 ꎬ 扦插扩繁等过程中 ꎬ 极易引起枣疯病的感染及迅速传播 ꎮ 目前 ꎬ 枣疯病已在新疆南疆部分地区发生 ( 韩剑等 ꎬ2012)ꎬ 给蓬勃发展的红枣产业带来严重的隐患 ꎮ 但有关新疆枣疯病的分布特点 发生动态 发病因子的研究仍较少 ꎬ 从而严重阻碍了该病害流行预测及防治策略的制定 ꎮ 为此 ꎬ 本研究连续 4 年对新疆南疆阿克苏地区和喀什地区的主要红枣产区开展了枣疯病发生情况调查和分子检测工作 ꎬ 以期为新疆枣疯病的危害评估 流行预测预报 持续控制策略研究奠定基础 ꎮ 1 研究方法 1.1 调查时间及地点 2009 2012 年中每年的 5 8 月分别在南疆主要红枣产区阿克苏地区 ( 阿克苏市 阿瓦提县 温宿县 沙雅县 柯坪县 兵团农一师 ) 和喀什地区 ( 喀什市 疏附县 麦盖提县 伽师县 莎车县 泽普县 岳普湖县 ) 对枣疯病发生情况进行现场普查 ꎬ 并采集疑似枣疯病样品 ꎮ 2012 年 6 月对枣疯病发生较为严重的阿瓦提县 农一师十二团 麦盖提县 莎车县开展了随机调查和定点调查 ꎮ 2014 年对枣疯病发生较为严重的地区进行了复查 ꎮ 1.2 调查方法 1.2.1 枣疯病发生情况随机调查采用五点取样法 ꎬ 每个样点随机取 10 株枣树 ꎬ 采集叶片 根 枝条 叶柄 枣头及枣吊等组织 ꎬ 保存于保鲜袋内 ꎬ 带回实验室检测 ꎮ 统计典型症状病株率和无症带菌株率 ꎮ 1.2.2 枣疯病发生情况定点调查在发现典型病株的周围 ꎬ 分东 南 西 北 4 个方向各取 20 株进行调查 ꎮ 采取分级计数法 ꎬ 分别计算枣疯病发病率及病情指数 ꎬ 并采集样品带回实验室检测 ꎮ 病害分级标准参照刘孟军等 (2006) 提出的枣疯病病情分级体系 ꎮ 1.2.3 调查内容调查内容包括枣园面积 枣产量 质量 周围生态环境 ꎬ 以及发病株率 症状严重度 树龄 品种 ( 骏枣 冬枣 酸枣砧木 ) 种植模式 [ 纯枣林 枣 / 棉 ( 小麦 ) 套作 密植 ] 繁殖方式 ( 嫁接 实生苗 ) 和田间栽培管理方式 ꎮ 1.3 枣疯病植原体检测方法 1.3.1 PCR 检测以提取的供试样品总 DNA 为模板 ꎬ 参照 Lee et al.(2000) 根据植原体 16S rdna 序列设计的通用引物对 R16mF2 / R16mR2 ( 外侧引物 ) 进行直接 PCR 扩增 ꎬ 采用内侧引物 R16F2 / R16R2 进行巢式 PCR 扩增 ꎮ PCR 反应结束后 ꎬ 取扩增产物放入浓度为 10 g L -1 的琼脂糖 1 TAE 缓冲系统中电泳 ꎬ 使用凝胶成像系统检查 1.5 kb ( 直接 PCR) 和 1.2 kb( 巢式 PCR) 特异性条带的有无 ꎬ 以判定被检样本中是否存在植原体 ꎬ 进而通过克隆测序验证其是否为枣疯病植原体 ꎮ 1.3.2 TaqMan 探针实时荧光定量 PCR 检测利用枣疯病植原体特异性引物对 JWB Primer F / JWB Primer R 和特异性探针 JWB Probe( 韩剑等 ꎬ2014) 进行实时荧光定量 PCR 检测 ꎬ 每个样品重复 3 次 ꎮ 反应结束后 ꎬ 根据各样本的扩增曲线和反应 Ct 值判定被检样本中是否存在枣疯病植原体 ꎬ 并通过建立的荧光定量 PCR 反应标准曲线方程 (y = -3.354x +38.27ꎬx 为所测样品中枣疯病植原体 16S rdna 基因片段拷贝数的对数 ꎬy 为 Ct 值 ) 计算出检测样品中枣疯病植原体 16S rdna 基因片段拷贝浓度 ꎬ 从而实现定量检测 ꎮ 2 结果与分析 2.1 枣疯病在新疆发生的症状特点 2009 年首次在阿克苏地区阿瓦提县发现枣疯病 ꎮ 连续 4 年的调查发现 ꎬ 不同地区及不同品种的枣树中枣疯病表现的症状有所差异 ꎬ 主要有 4 种类型 ( 图 1):(1) 整株矮化 ꎬ 呈短疯枝状 ꎬ 叶片变小 变绿 钝圆 ꎻ(2) 植株叶片和枝条稀少 ꎬ 从节间萌发出大量短芽 ꎬ 细弱而萎黄 ꎬ 连续抽生细小 黄绿的枝

８２ 生物安全学报 Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｓａｆｅｔｙ 第 ２６ 卷 叶ꎬ呈丛枝状ꎻ(３) 病根上生出不定芽ꎬ可大量萌发 但枣树叶肉变黄ꎬ叶脉仍绿ꎬ之后整叶逐渐变黄ꎬ叶 出一丛丛短疯枝ꎬ出土后枝叶细小 黄绿ꎬ日晒后全 缘上卷ꎬ暗淡无光ꎬ硬而发脆ꎬ秋后干枯不落ꎮ 除表 部焦枯ꎬ呈 刷状 ꎬ后期病根皮层变褐 腐烂ꎬ最后 现为明显症状的枣疯病植株外ꎬ通过调查和检测还 整株枯死ꎻ(４) 患病植株并未表现出明显的丛枝状ꎬ 发现ꎬ在枣园中有部分枣树为无症带菌植株ꎮ Ａ:整株矮化ꎬ呈短疯枝状ꎻＢ:植株节间萌发出大量短芽ꎬ细弱而萎黄ꎬ呈丛枝状ꎻＣ:病根生出不定芽ꎬ萌发呈短疯枝状ꎻＤ:叶肉变黄ꎬ叶缘上卷ꎮ Ａ: Ｔｈｅ ｊｕｊｕｂｅ ｔｒｅｅｓ ｂｅｃｏｍｅ ｄｗａｒｆ ｌｉｋｅ ａ ｂｕｎｄｌｅ ｏｆ ｔｗｉｇｓ ｏｒ ｗｉｔｃｈ ｓ ｂｒｏｏｍꎻ Ｂ: Ａ ｄｅｎｓｅ ｍａｓｓ ｏｆ ｓｈｏｏｔｓ ｇｒｏｗ ｆｒｏｍ ｎｏｄｅｓꎬ ｗｈｉｃｈ ａｒｅ ｔｈｉｎ ａｎｄ ｙｅｌｌｏｗ ａｓ ｗｅｌｌ ａｓ ｃｌｕｓｔｅｒ ｌｉｋｅꎻ Ｃ: Ａｄｖｅｎｔｉｔｉｏｕｓ ｂｕｄｓ ｄｅｖｅｌｏｐ ｆｒｏｍ ｕｎｈｅａｌｔｈｙ ｒｏｏｔｓꎬ ｗｈｉｃｈ ｌｏｏｋ ｌｉｋｅ ａ ｗｉｔｃｈ ｓ ｂｒｏｏｍꎻ Ｄ: Ｉｎｆｅｃｔｅｄ ｌｅａｖｅｓ ｔｕｒｎ ｙｅｌｌｏｗ ａｎｄ ｌｅａｆ ｍａｒｇｉｎｓ ａｒｅ ｒｏｌｌｅｄ. Ｆｉｇ.１ ２.２ 图１ 枣疯病田间 ４ 种症状 Ｊｕｊｕｂｅ ｐｌａｎｔｓ ｓｈｏｗｉｎｇ ｗｉｔｃｈｅｓ ｂｒｏｏｍ ｄｉｓｅａｓｅ ｓｙｍｐｔｏｍｓ ｉｎ ｔｈｅ ｆｉｅｌｄ 枣疯病在新疆的分布和发生情况 ２００９ ２０１０ 年仅在阿克苏地区阿瓦提县和喀 防范意识明显提高ꎬ发现疑似枣疯病病株会立即清 理ꎮ 因此ꎬ原先枣疯病发生较为严重的几个地区ꎬ 什地区麦盖提县的个别枣园中发现并检测到枣疯 病害发生情况得到了有效控制ꎮ 病的发生ꎻ到 ２０１２ 年ꎬ除喀什地区的岳普湖县 疏 ２.３ 附县和阿克苏地区的沙雅县外ꎬ其他调查地均发现 或检测到枣疯病的发生ꎮ 枣疯病发生主导因子分析 ２.３.１ 种植模式及管理水平对枣疯病发生的影响 目前ꎬ新疆南疆主栽的枣树品种主要为和骏 在大多数发病地区枣疯病尚属个别 零星 团 枣ꎬ采用的种植模式主要有枣棉套种 枣麦套种及 簇状分布ꎻ少部分地区枣疯病的发生已从零星分布 纯枣林 ３ 种ꎮ 分子检测结果表明ꎬ在灰( 骏) 枣 棉 转为成片分布ꎬ 病害发生 有 明 显 加 重 的 趋 势ꎮ 如 ２００９ 年在对阿瓦提县枣树种植区的调查中仅在塔 套种和灰( 骏) 枣 麦套种的果园中ꎬ枣疯病植原体 的阳性检出率最高达到 １８ 和 １４ ꎬ明显高于纯枣 木托拉克乡发现枣疯病零星分布ꎬ但在之后连续 ３ 林( 最高 ４ ) ꎬ并且枣树株距越小 种植密度越大ꎬ 枣疯病的发生ꎻ２０１２ 年在阿瓦提县塔木托拉克乡部 枣园不同的管理水平对枣疯病的发生也有明 分枣园的随机调查中表现为典型症状的病株率最 显影响ꎮ 调查发现ꎬ在疏于管理 杂草丛生 虫害重 高达到 ８ ꎬ定点调查发病率最高达到 １３.３ ꎬ病情 的枣园中常常发现枣疯病的发生ꎬ 且一般较为严 查中发现ꎬ基层植保工作人员及枣农对于枣疯病的 发病较轻ꎮ 年的调查中陆续在多个乡( 镇) 都发现并检测到了 指数达到 ６.７５( 表 １ 表 ２) ꎮ 此外ꎬ在 ２０１４ 年的复 枣疯病的发生越严重ꎮ 重ꎻ而管理精细 基本无杂草的枣园通常不发病或

第 1 期 韩剑等 : 南疆红枣产区枣疯病发生现状及主导因子分析 83 Table 1 表 1 南疆部分地区枣疯病发生情况随机调查结果 Random survey results of witches broom disease in southern Xinjiang 调查地点 Site 立地条件 Stand condition 品种 Cultivar 树龄 Age / a 调查总株数 No. of surveyed plants 典型症状病株率 Percentage of symptoml infected plants/ % 无症带菌株率 Percentage of latent infection plants/ % 阿瓦提县 Awat County 多浪乡 Dolan Township 枣棉套种 ꎬ 株行距 1.5 m 4.0 mꎬ 南北朝向 ꎬ 管理粗放 ꎬ 杂草多 Jujube in tercropping cottonꎬ row spacing 1. 5 m 4. 0 mꎬ south and northꎬ extensive 2~ 3 50 4 4 阿依巴格乡 Aybag Township 枣麦套种 ꎬ 株行距 1.5 m 4.0 mꎬ 南北朝向 ꎬ 管理精细 ꎬ 杂草少 Jujube in tercropping wheatꎬ row spacing 1. 5 m 4. 0 mꎬ south and northꎬ manage ment fineꎬ weeds less 7~ 8 50 0 2 塔木托拉克乡 Tamtolak Township 枣棉套种 ꎬ 株行距 1.5 m 4.0 mꎬ 东西朝向 ꎬ 管理粗放 ꎬ 杂草多 Jujube in tercropping cottonꎬ row spacing 1. 5 m 4. 0 mꎬ east and westꎬ extensive 4~ 5 50 8 4 农一师 First Agricultur al Division 良繁场二连 The Second Com pany of Liang Fan Field 3.0 mꎬ 南北朝向 ꎬ 管理精细 ꎬ 杂草少 Pure forest row spacing 1.0 m 3.0 mꎬ south and northꎬ management fineꎬ weeds less 2~ 3 50 0 0 十二团七连 The Seventh Com pany of Twelfth Mission 3.0 mꎬ 南北朝向 ꎬ 管理精细 ꎬ 杂草少 Pure forestꎬ row spacing 1. 0 m 3.0 mꎬ south and northꎬ management fineꎬ weeds less 1~ 2 50 0 4 良繁场二连 The Second Com pany of Liang Fan Field 3.0 mꎬ 东西朝向 ꎬ 管理精细 ꎬ 杂草少 Pure forestꎬ row spacing 1. 0 m 3. 0 mꎬ east and westꎬ management fineꎬ weeds less 酸枣 Wild 1~ 2 50 2 6 麦盖提县 Markit County 央塔克乡 4.0 mꎬ 东西朝向 ꎬ 管理粗放 ꎬ 杂草多 Pure for estꎬ row spacing 1.0 m 4.0 mꎬ east and westꎬ extensive 7~ 8 50 0 2 央塔克乡 枣棉套种 ꎬ 株行距 0.5 m 4.0 mꎬ 南北朝向 ꎬ 管理粗放 ꎬ 杂草多 ꎬ 枣瘿蚊发生严重 Jujube intercrop ping cottonꎬ row spacing 0.5 m 4.0 mꎬ south and northꎬ extensive manage mentꎬ more weedsꎬ Cont arinia sp. occurs seriously 2~ 3 50 12 6

84 生物安全学报 Journal of Biosafety 第 26 卷 续表 1 调查地点 Site 立地条件 Stand condition 品种 Cultivar 树龄 Age / a 调查总株数 No. of surveyed plants 典型症状病株率 Percentage of symptoml infected plants/ % 无症带菌株率 Percentage of latent infection plants/ % 五乡 Wu Township 枣棉套种 ꎬ 株行距 1.0 m 4.0 mꎬ 南北朝向 ꎬ 管理精细 ꎬ 杂草少 Jujube in tercropping cottonꎬ row spacing 1. 0 m 4. 0 mꎬ south and northꎬ manage ment fineꎬ weeds less 5~ 6 50 0 0 央塔克乡 枣麦套种 ꎬ 株间距 0.5 m 4.0 mꎬ 南北朝向 ꎬ 管理粗放 ꎬ 杂草多 Jujube in tercropping wheatꎬ row spacing 0. 5 m 4. 0 mꎬ south and northꎬ extensive 酸枣 Wild 1~ 2 50 4 10 莎车县 Yarkant County 阿尔斯兰巴格乡 Arslanbag Town ship 枣麦套种 ꎬ 株行间距 1.0 m 4.0 mꎬ 东西朝向 ꎬ 管理粗放 ꎬ 杂草多 ꎬ 周围种植巴旦木 小麦 Jujube in tercropping wheatꎬ row spacing 1.0 m 4.0 mꎬ east and westꎬ extensive man agementꎬ more weedsꎬ a round the planting of al mond with wheat 2~ 3 50 0 0 莎车农场 Yarkant Farm 枣棉套种 ꎬ 株行间距 1.0 m 4.0 mꎬ 南北朝向 ꎬ 管理粗放 ꎬ 杂草多 ꎬ 大田北面有防渗渠 Jujube intercrop ping cottonꎬ row spacing 1.0 m 4. 0 mꎬ south and northꎬ extensive manage mentꎬ more weedsꎬ there are seepage canals on the north of the farmland 3~ 4 50 4 4 莎车农场 Yarkant Farm 纯枣林 ꎬ 株行间距 1.5 m 4.0 mꎬ 南北朝向 ꎬ 管理精细 ꎬ 杂草少 Pure forestꎬ row spacing 1.5 m 4.0 mꎬ south and northꎬ man agement fineꎬ weeds less 5~ 6 50 0 0 2.3.2 枣树品种及种植年限对枣疯病发生的影响在酸枣 骏枣植株中均检测出枣疯病植原体 ꎬ 其中 ꎬ 酸枣中阳性检出率最高达到 14%ꎬ 最高为 18%ꎬ 骏枣最高为 8%ꎮ 纵观其表现的症状及发病率发现 ꎬ 骏枣对枣疯病表现出一定的抗性 ꎬ 而相对更为感病 ꎮ 此外 ꎬ 不同种植年限的枣树发病率存在明显差异 : 幼龄枣树 (1 ~ 5 a) 的发病率一般高于成年枣树 (6 a 以上 )ꎮ 2.3.3 传播方式对枣疯病发生的影响调查发现 ꎬ 嫁接育苗是南疆地区枣疯病传播的重要途径 ꎮ 南疆各枣树栽培区大多采用酸枣实生苗作为砧木 ꎬ 通 过从本地或外地引进枣树品种进行接穗嫁接育苗 ꎮ 在大多数发病地区枣疯病多发生在幼龄枣树上 ꎬ 当年嫁接苗即出现病苗的现象比较普遍 ꎮ 野生酸枣和酸枣实生苗也是许多枣疯病发生区的病害侵染来源 ꎮ 通过对酸枣的调查及检测发现 ꎬ 在不同地区采集到的酸枣样品中也有植原体的存在 ( 韩剑等 ꎬ2013)ꎬ 但大部分带病酸枣苗未表现出明显的症状 ꎮ 这说明酸枣抗病性强于当地栽培的红枣 ꎬ 因而病株存活时间较长 ꎬ 从而使其成为枣疯病的重要初侵染和再侵染来源 ꎮ

第 1 期 韩剑等 : 南疆红枣产区枣疯病发生现状及主导因子分析 85 Table 2 表 2 南疆部分地区枣疯病发生情况定点调查结果 Point survey results of witches broom disease in southern Xinjiang 调查地点 Site 立地条件 Stand condition 品种 Cultivar 树龄 Age / a 调查总株数 No. of surveyed plants 发病率 Disease percentage/ % 病情指数 Disease index 阿瓦提县塔木托拉克乡 Tamtolak Township in Awat County 枣棉套种 ꎬ 复播玉米 ꎬ 株距 1.5 m 4.0 mꎬ 南北朝向 ꎬ 管理粗放 ꎬ 杂草多 ꎬ 东西方向为白杨树防护林 Jujube intercropping cottonꎬ sum mer maize varietiesꎬ row spacing 1.5 m 4.0 mꎬ south and northꎬ extensive managementꎬ more weedsꎬ east west direction for the poplar pro tection forest 3~ 4 60 13.3 6.75 莎车县莎车农场 Yarkant Farm in Yarkant County 枣麦套种 ꎬ 株距 1.0 m 4.0 mꎬ 南北朝向 ꎬ 管理粗放 ꎬ 杂草多 ꎬ 枣瘿蚊发生严重 Jujube in tercropping wheatꎬ row spacing 1.0 m 4.0 mꎬ south and northꎬ extensive managementꎬ more weedsꎬ Contarinia sp. occurs seriously 1~ 2 60 8.3 5.0 麦盖提县央塔克乡 in Markit County 枣棉套种 ꎬ 株间距 1.0 m 4.0 mꎬ 南北朝向 ꎬ 管理粗放 ꎬ 杂草多 ꎬ 枣瘿蚊发生严重 Jujube intercropping cottonꎬ row spacing 1.0 m 4.0 mꎬ south and northꎬ extensive managementꎬ more weedsꎬ Contarinia sp. occurs seriously 4~ 5 60 15.0 5.5 而作为枣疯病的主要传播介体昆虫叶蝉 ꎬ 在南疆各枣树种植区并未占主导地位 ꎮ 调查发现 ꎬ 成年枣园 (6 a 以上 ) 中枣疯病植原体的阳性检出率极低 ꎬ 最高仅为 2%ꎬ 且检出枣树均未表现出任何症状 ꎻ 即使在成年枣树附近种植的幼龄枣树上存在枣疯病 ꎬ 成年枣树的发病率也未增大 ꎮ 此外 ꎬ 在个别枣园中发现母树根系传病给子代枣株的现象 ꎬ 表现为母树未呈现典型的枣疯病症状 ꎬ 而由母树根系萌发出的根蘖苗却表现为典型的全株丛枝症状 ꎬ 并且几株病株常常呈团簇状分布 ꎮ 2.4 田间枣树样品的分子检测结果样品采集后 ꎬ 先进行直接 PCR 扩增 ꎬ 再对直接 PCR 未检出的样品进行巢式 PCR 扩增 ꎮ 结果发现 ꎬ25 个经直接 PCR 未检出的样品 ꎬ 经巢式 PCR 检测结果为阳性 ꎬ 但经过比较发现 ꎬ 其中有 21 个样品未表现出任何症状 ꎮ 这表明在南疆枣树种植区存在着比例不等的无症带菌植株 ꎮ 另外 ꎬ 本研究对巢式 PCR 检测结果为阳性的酸枣实生苗样品以及不同病级的枣疯病样品进行了实时荧光定量 PCR 检测 ꎬ 并对样品中的植原体含量进行了定量分析 ꎮ 结果显示 ꎬ 无明显症状 ( 0 级 ) 的枝叶中植原体 16S rdna 片段拷贝数达到 1.23 10 4 个 g -1 鲜重 ꎬ 而病情级别为 2 和 3 级的枣树枝叶中植原体 16S rdna 片段拷贝数分别为 1.66 10 5 和 1.32 10 7 个 g -1 鲜重 ꎮ 酸枣实生苗枝叶中 植原体 16S rdna 片段拷贝数达到 1.36 10 5 个 g -1 鲜重 ꎮ 该结果是枣树存在无症带菌植株以及酸枣实生苗带菌更为直接的证据 ꎮ 3 讨论从所调查的结果来看 ꎬ 南疆地区枣疯病发生范围不断扩大 ꎬ 但在大多数发病地区枣疯病尚属个别 零星 团簇状分布 ꎬ 发病率不高 ꎮ 究其原因 ꎬ 近年来 ꎬ 新疆大力发展红枣产业 ꎬ 从全国各枣区引进优良品种 ꎬ 民间种苗的交流也十分频繁 ꎬ 很多带菌种苗很难从外观上判断 ꎬ 且当地缺乏有效的检验检疫措施 ꎬ 使病害随种苗和其他营养繁殖材料 ( 主要为接穗 ) 进行长距离传播的机率增大 ꎬ 导致枣疯病的发生范围不断扩大 ꎮ 但南疆绝大多数为新建枣园 ꎬ 原有病株少 ꎬ 病源基数低 ꎮ 此外 ꎬ 枣疯病在南疆地区尚未大面积流行的原因可能与南疆特殊的地域环境条件下缺少枣疯病媒介昆虫有关 ꎮ 南疆的枣树种植区多是盐碱地 ꎬ 研究表明 ꎬ 枣疯病在盐碱地很少发病 ꎬ 并不是盐碱地可以抑制枣疯病的发生 ꎬ 而是与这些地区极少有枣疯病的介体叶蝉有关 ( 陈子文等 ꎬ1984)ꎮ 枣疯病的媒介昆虫主要有中华拟菱纹叶蝉 Hishimonoides chenensis Anufrier 凹纹菱纹叶蝉 H. sellatus Uhler 和红闪小叶蝉 Erynroneura sp.ꎮ 有关新疆枣树种植区枣疯病传播介体及特性方面仍缺乏针对性研究 ꎬ 南疆地区是否分布枣疯病媒介昆虫 ꎬ 值得进一步研究 ꎮ 另外 ꎬ 通过检测发现 ꎬ

86 生物安全学报 Journal of Biosafety 第 26 卷 部分地区用作嫁接砧木直播的酸枣实生苗上携带植原体 ꎬ 并且带菌量较高 ꎬ 达到 1.36 10 5 个 g -1 鲜重 ꎬ 是枣树生产区不可忽视的病害侵染来源 ꎮ 但 La & Woo (1980) 和陈子文等 (1984) 曾报道 ꎬ 枣树和酸枣种子均不传染枣疯病 ꎮ 那么酸枣实生苗中的植原体从何而来 ꎬ 酸枣种子是否带毒 ꎬ 有待进一步研究 ꎮ 本研究表明 ꎬ 枣疯病的发生程度与枣树品种 环境因子 种植模式 种植年限及田间管理水平等都有着密切的关系 ꎮ 酸枣和骏枣病株多表现为无症带菌株 ꎬ 而带菌株则多表现明显症状 ꎬ 说明不同品种对枣疯病的抗性具有一定差异 ꎮ 枣棉套种和枣麦套种的果园中枣疯病的发生情况较纯枣林严重 ꎬ 可能是因为在套种果园中其他作物与枣树竞争水肥 ꎬ 使得枣树长势较弱 ꎬ 抗病性降低 ꎮ 尽管新疆南疆枣树种植区的枣疯病尚属零星分布 ꎬ 发病率较低 ꎬ 但依然存在暴发流行的风险 ꎮ 因此 ꎬ 应坚持 预防为主 ꎬ 综合防治 的原则 ꎬ 主要采取几种措施 : (1) 加强植物检疫 ꎬ 禁止带病种苗进入苗圃和新建枣园 ꎻ(2) 选用抗病品种和优良砧木 ꎬ 培育无病苗木 ꎻ(3) 加强枣园综合管理 ꎬ 增施有机肥 磷钾肥 ꎬ 改善枣园土壤理化性质 ꎬ 提高树体抗病能力 ꎬ 彻底清除杂草及野生灌木 ꎻ(4) 及时铲除病株 ꎬ 防止传染 ꎮ 参考文献陈子文 ꎬ 张凤舞 ꎬ 田旭东 ꎬ 张金歧 ꎬ 王祈楷 ꎬ 史春霖 ꎬ 马俊才 ꎬ 1984. 枣疯病传病途径的研究. 植物病理学报 ꎬ 14 (3): 141-146. 范俊秀 ꎬ 2009. 枣疯病和枣缩果病研究进展. 有害生物防治 ꎬ 37(6): 37-39. 韩剑 ꎬ 罗明 ꎬ 徐金虹 ꎬ 同仁 ꎬ 张祥林 ꎬ 2014. 枣疯病植原体 TaqMan 探针实施荧光定量 PCR 检测方法的建立. 植物保护 ꎬ 40(5): 111-116. 韩剑 ꎬ 徐金虹 ꎬ 王同仁 ꎬ 殷智婷 ꎬ 罗明 ꎬ 董代幸 ꎬ 2012. 枣疯病植原体新疆分离物 16S rdna 基因克隆与序列分析. 西北农业学报 ꎬ 21(4): 176-180. 韩剑 ꎬ 徐金虹 ꎬ 王同仁 ꎬ 张祥林 ꎬ 罗明 ꎬ 2013. 新疆枣疯病植原体 tuf 基因的克隆与序列分析. 新疆农业科学 ꎬ 50 (3): 476-483. 郝会娟 ꎬ 王振东 ꎬ 黄敏 ꎬ 2009. 枣疯病防治技术. 安徽农学通报 ꎬ 15(4): 72-73. 刘孟军 ꎬ 赵锦 ꎬ 周俊义 ꎬ 2006. 枣疯病病情分级体系研究. 河北农业大学学报 ꎬ 29(1): 31-33. 田国忠 ꎬ 张志善 ꎬ 李志清 ꎬ 申艳普 ꎬ 郭加虎 ꎬ 2002. 我国不同地区枣疯病发生动态和主导因子分析. 林业科学 ꎬ 38 (2): 83-91. LA Y J and WOO K Sꎬ 1980. Transmission of jujuhe witches broom mycoplasma by the leafhopper ( Hishimongs sellatus Uhler). Journal of Korean Forestry Societyꎬ 48: 39. LEE I Mꎬ DAVIS R E and GUNDERSEN RINDAL D Eꎬ 2000. Phytoplasma: phytopathogenic mollicutes. Annual Review of Microbiologyꎬ 54: 221-255. ( 责任编辑 : 杨郁霞 )

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