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1 九 七 级 博 士 研 究 生 毕 业 论 文 运 脾 法 治 疗 小 儿 厌 食 症 的 中 枢 作 用 机 制 学 科 专 业 中 医 儿 科 学 研 究 生 张 月 萍 导 师 汪 受 传 南 京 中 医 药 大 学 二 零 零 零 年 五 月

2 1 孔 子

3 目 录 作 者 简 历 4 中 文 摘 要 6 英 文 摘 要 8 Ⅰ 研 究 背 景 10 一 二 三 小 儿 厌 食 症 研 究 现 状 10 摄 食 调 控 的 研 究 进 展 12 对 脾 实 质 的 现 代 认 识 14 Ⅱ 脑 肠 肽 - 食 欲 中 枢 假 说 19 一 二 三 假 说 的 提 出 19 假 说 的 工 作 基 础 20 证 明 假 说 的 途 径 20 Ⅲ 临 床 研 究 21 一 病 因 分 析 22 二 病 机 探 讨 22 三 疗 效 观 察 23 Ⅳ 建 立 动 物 模 型 26 一 二 建 立 小 儿 厌 食 症 动 物 模 型 的 思 路 26 建 立 小 儿 厌 食 症 动 物 模 型 的 方 法 27 Ⅴ 运 脾 复 方 对 模 型 动 物 脑 肠 肽 的 调 节 32 一 运 脾 复 方 对 下 丘 脑 和 血 浆 中 CCK-8 的 调 节 32 二 运 脾 复 方 对 下 丘 脑 垂 体 胃 窦 粘 膜 和 血 浆 β-ep 的 调 节 37 三 运 脾 复 方 对 胃 窦 部 和 血 浆 胃 泌 素 的 调 节 40 Ⅵ 运 脾 复 方 对 模 型 动 物 食 欲 中 枢 神 经 元 单 位 放 电 的 影 响 42 2

4 一 运 脾 复 方 对 厌 食 大 鼠 食 欲 中 枢 神 经 元 放 电 频 率 的 影 响 43 二 刺 激 迷 走 神 经 胃 支 对 厌 食 大 鼠 食 欲 中 枢 神 经 元 放 电 频 率 的 影 响 50 Ⅶ 结 论 和 展 望 53 一 厌 食 症 模 型 评 价 53 二 三 运 脾 法 中 枢 机 制 53 有 待 深 化 的 研 究 53 致 谢 54 3

5 作 者 简 历 姓 性 名 : 张 月 萍 别 : 女 出 生 年 月 :65 年 12 月 24 日 籍 贯 : 山 西 省 闻 喜 县 工 作 学 习 简 历 : 1982 年 9 月 年 7 月 山 西 中 医 学 院 获 医 学 学 士 学 位 1987 年 8 月 年 8 月 山 西 省 闻 喜 县 医 院 住 院 医 师 1991 年 9 月 年 7 月 南 京 中 医 药 大 学 中 医 儿 科 学 专 业 硕 士 研 究 生, 获 医 学 硕 士 学 位 1994 年 8 月 年 8 月 第 四 军 医 大 学 西 京 医 院 小 儿 科 住 院 总 医 师 主 治 医 师 1997 年 9 月 至 今 南 京 中 医 药 大 学 中 医 儿 科 专 业 博 士 研 究 生 4

6 Name: Zhang Yueping RESUME Sex: female Born: December 24,1965 Native place: Wenxi County Shanxi Province Educational and professional Experience: 1982,9-1987,7: Shanxi Institute of Traditional Chinese Medicine collegian 1987,8-1991,8: Wenxi Hospital of Shanxi Province house physician 1991,9-1994,7: Nanjing University of Traditional Chinese Medicine master student 1994,8-1997,8: Paediatric of Xijing Hospital,The Fourth Military Medical University physician 1997,9 - present: Nanjing University of Traditional Chinese Medicine doctor student 5

7 中 文 摘 要 回 顾 小 儿 厌 食 症 和 摄 食 生 理 的 现 代 研 究 以 及 对 脾 实 质 的 现 代 认 识, 本 文 提 出 了 运 脾 法 治 疗 小 儿 厌 食 症 的 中 枢 机 制 假 说 : 即 脑 肠 肽 - 食 欲 中 枢 假 说 认 为 运 脾 法 改 善 食 欲, 增 进 摄 食 的 疗 效 是 通 过 影 响 脑 肠 肽 分 泌 和 调 整 食 欲 中 枢 电 活 动 取 得 的 为 证 实 该 假 说, 本 研 究 在 运 脾 法 治 疗 小 儿 厌 食 症 的 临 床 研 究 基 础 上, 模 拟 主 要 病 因 和 症 状 建 立 了 稳 定 的 小 儿 厌 食 症 动 物 模 型, 用 放 射 免 疫 法 和 免 疫 组 化 法 测 定 了 该 模 型 下 丘 脑 胃 粘 膜 和 血 浆 中 CCK-8 β- 内 啡 肽 和 胃 泌 素 三 种 与 摄 食 行 为 有 关 的 肽 类 激 素 的 含 量 ; 用 细 胞 外 记 录 法 记 录 了 模 型 动 物 摄 食 中 枢 和 饱 中 枢 神 经 元 的 单 位 放 电 频 率 及 对 迷 走 神 经 传 入 性 刺 激 的 反 应 通 过 以 上 实 验 分 析 了 运 脾 复 方 对 三 种 脑 肠 肽 在 中 枢 和 外 周 分 泌 状 态 的 影 响 以 及 对 食 欲 中 枢 神 经 元 电 活 动 的 调 节 作 用 结 果 发 现 运 脾 法 促 进 模 型 摄 食 的 中 枢 机 制 表 现 在 两 个 方 面 : 一 是 调 节 中 枢 和 外 周 脑 肠 肽 的 合 成 和 分 泌, 通 过 增 加 脑 内 和 外 周 促 食 欲 肽 类 (β- 内 啡 肽 ) 的 浓 度, 降 低 减 食 欲 肽 类 (CCK-8) 的 浓 度, 使 模 型 动 物 摄 食 量 增 加 二 是 调 节 下 丘 脑 摄 食 中 枢 和 饱 中 枢 神 经 元 放 电 频 率, 不 仅 改 变 模 型 食 欲 中 枢 神 经 元 的 自 发 电 活 动, 而 且 影 响 其 对 外 来 刺 激 的 反 应 性, 通 过 刺 激 摄 食 中 枢, 抑 制 饱 中 枢, 使 摄 食 中 枢 电 活 动 增 强 而 促 进 动 物 摄 食 本 研 究 显 示 运 脾 法 对 CCK-8 和 β- 内 啡 肽 这 两 种 在 摄 食 调 控 中 相 互 拮 抗 的 物 质 的 调 节, 对 有 相 互 抑 制 作 用 的 摄 食 中 枢 和 饱 中 枢 的 调 节, 均 体 6

8 现 作 用 结 果 的 整 体 性 这 一 结 果 初 步 证 实 了 工 作 假 说 下 丘 脑 CCK-8 和 β- 内 啡 肽 含 量 的 变 化 与 食 欲 中 枢 神 经 元 电 活 动 消 长 之 间 的 关 系 有 待 进 一 步 研 究 中 文 主 题 词 小 儿 厌 食 动 物 模 型 运 脾 法 食 欲 中 枢 下 丘 脑 外 侧 区 下 丘 脑 腹 内 侧 区 CCK-8 β- 内 啡 肽 胃 泌 素 7

9 ABSTRACT Having reviewed the research on anorexia for children and feeding physiology, this paper put forward a hypothesis on the mechanism responsible for curative effect of Yunpi Method to anorexia for children: Brain-gut peptide-feeding center, which suggested that Yunpi Method got curative effect by regulating the secretion of some brain-gut peptides both in central and peripheral areas, and by adjusting the discharges of neurons in lateral hypothalamus (LH) and ventromedial hypothalamus(vmh). TO prove the idea, a model of infantile anorexia was established by simulating the cause of disease after a clinical study had been done. Then, radioimmunoassay and immunohistochemistry were used to examine the concentration of CCK-8,β-Endorphin, gastrin both in hypothalamus, antrum pyloricum and plasma. The discharges of neurons in LH and VMH were recorded by extracellular recording method. The results showed that Yunpi Method got curative effect by two ways. One was decreasing the CCK-8 concentration while increasing β -Endorphin concentration, the other one was simulating the discharges of neurons in LH neurons while repressing satiety neurons. This study proves the hypothesis of brain gut peptide-feeding center preliminarily. 8

10 The relation between the CCK-8 and β-endorphin concentration and the discharges of neurons in feeding and satiety center should be further studied. SUBJECT HEADINGS Children Anorexia Animal model Yunpi Method Feeding center LHA VMH CCK-8 β-endorphin Gastrin 9

11 Ⅰ 研 究 背 景 厌 食 是 儿 科 常 见 病 之 一, 指 小 儿 较 长 时 期 见 食 不 贪, 食 欲 不 振, 厌 恶 进 食 的 病 症 古 代 中 医 文 献 中 无 小 儿 厌 食 病 名, 古 籍 中 恶 食 不 嗜 食, 不 思 食 不 饥 不 纳 等 病 症 的 主 要 临 床 表 现 与 本 病 相 同 1980 年 以 来, 国 内 陆 续 有 辨 证 治 疗 本 病 的 报 道, 高 等 医 学 院 校 教 材 中 医 儿 科 学 1985 年 版 正 式 确 立 厌 食 病 名 [1] 厌 食 是 摄 食 行 为 异 常 的 一 种 表 现, 近 二 十 年 临 床 研 究 表 明 运 脾 法 是 治 疗 厌 食 的 有 效 方 法 为 了 从 摄 食 调 控 方 面 研 究 运 脾 法 治 疗 小 儿 厌 食 症 的 作 用 机 制, 本 文 对 小 儿 厌 食 症 摄 食 生 理 和 脾 实 质 的 研 究 现 状 作 一 回 顾 一 小 儿 厌 食 症 研 究 现 状 本 病 各 年 龄 儿 童 皆 可 发 病 国 外 流 行 病 学 调 查 显 示, 婴 儿 和 学 龄 前 儿 童 进 食 问 题 ( 厌 食 拒 食 ) 的 发 生 率 约 为 12%~34% [2] 因 城 市 儿 童 发 病 率 较 高, 被 认 为 是 富 裕 社 会 儿 童 的 主 要 摄 食 问 题 之 一 [3] 现 对 本 病 的 病 因 临 床 表 现 和 治 疗 方 法 综 述 如 下 1. 病 因 分 析 国 内 外 文 献 报 道 一 致 认 为 本 病 主 要 病 因 是 父 母 缺 乏 科 学 的 喂 养 知 识 因 不 合 理 喂 养 导 致 小 儿 厌 食, 大 多 表 现 在 三 个 方 面 (1) 未 及 时 添 加 辅 食 : 多 年 来 临 床 已 认 可 婴 儿 添 加 辅 食 有 敏 感 期 味 觉 敏 感 期 在 婴 儿 期 4~6 个 月 时, 食 物 质 地 敏 感 期 在 6~7 个 月 Skuse D 等 认 为 如 果 此 期 未 给 予 各 种 味 道 各 种 质 地 的 食 物, 婴 儿 往 往 在 1 岁 后 拒 食 新 口 味 和 不 同 质 地 的 食 物, 因 而 造 成 偏 食 和 食 谱 单 调 [1] 张 历 生 等 分 析 了 传 统 喂 养 与 儿 童 厌 食 症 的 关 系, 指 出 婴 儿 期 日 夜 频 繁 喂 乳, 断 乳 年 龄 过 大, 加 辅 食 年 龄 太 晚, 品 种 和 方 式 不 当 可 使 小 儿 在 1 岁 左 右 发 生 厌 食 [4][5] (2) 强 迫 进 食 : 多 数 父 母 期 望 孩 子 多 食 肉 食 鸡 蛋 饮 料 等 营 养 价 值 高 的 食 品, 常 用 强 迫 进 食 的 方 法 让 孩 子 多 吃, 硬 往 孩 子 嘴 里 塞 10

12 食 物, 使 小 儿 感 到 紧 张, 渐 渐 地 把 进 食 看 成 是 力 图 逃 避 的 一 种 情 境 而 导 致 拒 食 [6], 父 母 对 小 儿 进 食 过 程 的 过 份 关 注 则 强 化 了 孩 子 对 摄 食 的 逃 避 行 为 [7][8], 以 致 于 每 当 食 物 靠 近 时 便 转 过 脸, 嘴 唇 紧 闭, 甚 至 一 坐 在 进 食 的 椅 子 上 就 开 始 反 抗 起 来 (3) 贪 吃 零 食 : 断 乳 后 缺 乏 喂 养 管 理, 因 过 多 进 食 零 食 水 果 饮 料 等 使 小 儿 拒 食 正 餐, 食 量 减 少 [4][9] 2. 临 床 表 现 (1) 症 状 观 察 : 国 外 对 本 病 的 临 床 研 究 较 注 重 观 察 厌 食 患 儿 的 症 状 及 远 期 随 访 文 献 显 示 本 病 主 要 症 状 表 现 为 挑 食, 偏 食, 拒 食, 食 量 少, 不 主 动 进 食, 进 食 时 较 少 咀 嚼, 玩 食 物 多 数 患 儿 伴 有 活 动 较 多, 急 躁 或 内 向 远 期 随 访 表 明 患 儿 没 有 明 显 消 瘦 及 其 他 健 康 问 题 [10][11] 中 医 学 根 据 临 床 表 现 辨 证 论 治, 将 本 病 分 为 脾 运 失 健 脾 胃 气 虚 胃 阴 不 足 等 型, 共 同 点 为 脾 失 健 运 (2) 生 化 检 查 : 国 内 文 献 除 分 析 了 厌 食 患 儿 的 宏 观 症 状 外, 还 对 厌 食 患 儿 的 胃 肠 功 能 状 态 营 养 状 况 及 免 疫 功 能 进 行 了 研 究 认 为 厌 食 患 儿 胃 肠 蠕 动 缓 慢 [12], 消 化 酶 分 泌 减 少, 小 肠 吸 收 功 能 下 降, 体 内 多 种 微 量 元 素 尤 其 是 血 清 锌 水 平 降 低, 免 疫 功 能 低 下 [13][14][15] 3. 治 疗 方 法 国 外 对 本 病 的 治 疗 多 以 合 理 喂 养 和 心 理 引 导 为 主 国 内 治 疗 本 病 有 多 种 方 法 [16], 西 医 多 用 锌 制 剂, 中 医 则 有 中 药 复 方 内 服 药 物 敷 脐 耳 针 推 拿 催 眠 等 疗 法 其 中 以 运 脾 复 方 内 服 应 用 最 多, 近 二 十 年 的 临 床 研 究 表 明 运 脾 法 治 疗 小 儿 厌 食 症 可 明 显 增 进 患 儿 食 欲, 促 进 摄 食, 并 有 促 进 患 儿 对 营 养 物 质 的 吸 收, 增 强 免 疫 功 能 等 作 用 [13][17] 对 运 脾 复 方 的 药 效 学 研 究 结 果 显 示 运 脾 复 方 能 促 进 动 物 肠 蠕 动 及 吸 收 功 能, 增 加 胃 蛋 白 酶 的 活 性, 提 高 动 物 耐 疲 劳 耐 缺 氧 能 力, 提 高 巨 噬 细 胞 吞 噬 能 力 及 血 清 补 体 C3 含 量 [18][19][20] 运 脾 复 方 常 用 药 物 为 苍 术 陈 皮 鸡 内 金 焦 山 楂 等 综 上 所 述, 厌 食 是 一 个 独 立 的 疾 病, 主 要 临 床 表 现 是 摄 食 行 为 的 11

13 改 变, 主 要 病 因 是 喂 养 不 当, 用 运 脾 复 方 治 疗 有 可 靠 疗 效 目 前 存 在 的 问 题 : 一 是 研 究 了 胃 肠 道 局 部 功 能 状 态 对 食 欲 的 影 响, 未 研 究 影 响 摄 食 行 为 的 其 它 因 素 ; 二 是 注 重 运 脾 法 对 消 化 系 统 局 部 的 作 用, 未 研 究 运 脾 法 对 摄 食 调 控 过 程 的 影 响 本 研 究 认 为 影 响 摄 食 的 因 素 很 多, 胃 肠 道 功 能 状 态 仅 是 其 中 之 一, 微 量 元 素 缺 乏 和 免 疫 功 能 低 下 则 更 可 能 是 厌 食 的 后 果 而 非 原 因, 所 以 单 从 胃 肠 道 功 能 状 态 等 方 面 研 究 小 儿 厌 食 症 是 不 全 面 的, 有 必 要 从 摄 食 调 控 的 整 体 水 平 探 讨 厌 食 发 生 的 机 制 和 运 脾 法 的 疗 效 机 理 二 摄 食 调 控 的 研 究 进 展 摄 食 调 控 的 过 程 很 复 杂 因 为 摄 食 既 是 胃 肠 道 生 理 功 能 之 一, 又 是 一 种 精 神 活 动 食 物 气 味 对 感 官 的 刺 激 摄 入 食 物 的 成 份 及 理 化 性 质 对 胃 肠 道 的 刺 激 均 直 接 与 食 欲 有 关 ; 体 内 营 养 状 态 必 需 营 养 物 质 的 耗 竭 程 度 心 理 因 素 环 境 因 素 和 社 会 学 因 素 等 都 影 响 食 欲 显 然, 各 种 与 摄 食 有 关 的 外 周 信 息 汇 集 到 中 枢 神 经 系 统, 然 后 影 响 摄 食 行 为, 所 以 中 枢 神 经 系 统 是 调 控 摄 食 的 主 要 部 位 由 于 实 验 的 相 对 易 操 作 性, 早 期 摄 食 生 理 的 研 究 比 较 侧 重 摄 食 控 制 的 外 周 因 素 如 食 物 的 气 味 和 理 化 性 质 胃 肠 道 扩 张 和 排 空 率 以 及 营 养 物 质 的 吸 收 率 等 对 摄 食 行 为 的 影 响, 食 欲 的 中 枢 控 制 通 常 被 看 作 一 个 黑 箱 [21] 从 本 世 纪 六 十 年 代 开 始, 由 于 神 经 化 学 和 神 经 药 理 学 的 发 展, 人 们 开 始 从 化 学 的 角 度 研 究 摄 食 的 控 制 原 理, 提 出 摄 食 控 制 的 中 枢 神 经 化 学 理 论 [22], 摄 食 调 控 的 黑 箱 逐 渐 打 开 同 时, 在 胃 肠 生 理 学 领 域, 胃 肠 激 素 的 研 究 有 了 惊 人 的 突 破 [23] 研 究 发 现 在 脑 组 织 和 胃 肠 道 双 重 分 布 的 肽 类 物 质 ( 脑 肠 肽 ) 除 了 作 为 经 典 的 胃 肠 激 素, 同 时 也 作 为 肽 类 神 经 调 质 参 与 动 物 的 摄 食 调 控 [24][25] 由 于 肽 类 在 中 枢 内 只 需 经 过 很 短 的 距 离 ( 突 触 间 隙 ) 即 可 到 达 靶 细 胞, 不 存 在 被 血 液 循 环 成 倍 稀 释 的 问 题, 因 而 它 们 的 极 微 量 改 变 就 可 影 响 动 物 的 摄 食 行 为 因 此, 研 究 下 丘 脑 食 欲 中 枢 和 脑 内 肽 类 物 质 对 摄 食 行 为 的 影 响 成 为 摄 食 生 理 研 究 的 热 点 之 一 1. 下 丘 脑 食 欲 中 枢 12

14 Hetherington 和 Ranson 于 1940 年 报 告, 毁 损 下 丘 脑 腹 内 侧 区 (ventromedial hypothalamus,vmh) 使 大 鼠 由 于 改 变 了 调 节 代 谢 的 神 经 内 分 泌 机 制 而 过 量 进 食 引 起 肥 胖 [26] ;10 年 后 Anand 和 Brobeck 报 道, 损 伤 下 丘 脑 外 侧 区 (lateral hypothalamus,lh) 引 起 大 鼠 厌 食 拒 食 [27] 从 此 提 出 了 关 于 调 控 摄 食 行 为 的 双 中 枢 假 说 :VMH 抑 制 摄 食, 为 饱 中 枢 ;LH 促 进 摄 食, 为 饥 饿 中 枢 或 摄 食 中 枢 应 用 埋 藏 电 极 刺 激 饥 饿 中 枢 时, 可 使 已 饱 食 的 动 物 进 食, 当 毁 损 两 侧 饥 饿 中 枢 后, 可 引 起 动 物 拒 食 拒 饮 甚 至 饥 饿 致 死 相 反, 当 刺 激 饱 中 枢 时, 则 使 正 在 进 食 的 动 物 停 止 吃 食, 而 毁 损 其 双 侧 饱 中 枢 后, 动 物 则 丧 失 饱 感 引 起 贪 食 和 肥 胖 [28] 这 些 结 果 对 双 中 枢 假 说 是 强 有 力 的 支 持 电 生 理 学 实 验 还 显 示 动 物 饥 饿 时 饥 饿 中 枢 放 电 频 率 增 高, 饱 中 枢 放 电 频 率 减 少, 饱 食 后 则 相 反 [29] 因 此 认 为 各 种 与 摄 食 有 关 的 信 息 经 相 应 的 神 经 通 路 和 神 经 递 质 作 用 于 饥 饿 中 枢, 激 发 摄 食 行 为 ; 进 食 后 引 起 内 分 泌 和 体 液 等 因 素 的 改 变 再 沿 相 应 通 路 作 用 于 饱 中 枢, 终 止 摄 食 行 为 [23] 2. 与 摄 食 调 节 有 关 的 肽 类 物 质 应 用 脑 内 注 入 的 方 法 进 行 研 究, 发 现 许 多 脑 肠 肽 对 动 物 摄 食 活 动 呈 现 抑 制 作 用 如 胆 囊 收 缩 素 (Cholecystokinin,CCK) 蛙 皮 素 促 甲 状 腺 素 释 放 激 素 等, 其 中 以 对 CCK 的 研 究 资 料 最 为 丰 富 在 多 种 动 物, 中 枢 或 外 周 注 射 CCK 都 能 明 显 抑 制 动 物 摄 食 [30], 但 其 作 用 机 制 尚 未 完 全 阐 明 一 般 认 为 CCK 对 摄 食 的 抑 制, 一 是 脑 组 织 分 泌 的 CCK 的 中 枢 作 用, 二 是 由 腹 迷 走 神 经 介 导 的 外 周 的 肠 CCK 激 素 的 作 用 [31] Stern 等 在 大 鼠 VMH 注 射 CCK 类 似 物 西 洛 林 0.05ug/kg 即 可 抑 制 动 物 摄 食, 注 射 至 LH 则 无 效 ; 3 H 标 记 的 西 洛 林 只 和 VMH 结 合, 不 和 LH 结 合 [22] 表 明 下 丘 脑 饱 中 枢 释 放 的 CCK 与 饱 信 息 有 密 切 关 系 与 抑 制 摄 食 相 反, 脑 内 注 射 阿 片 肽 及 其 类 似 物 则 有 增 加 动 物 摄 食 的 作 用 [32] Grandison 报 道, 向 大 鼠 VMH 内 注 射 微 量 β- 内 啡 肽, 引 起 摄 食 明 显 增 加 [33] Clark 等 还 发 现, 在 下 丘 脑 中 存 在 的 胰 多 肽 和 神 经 肽 Y, 也 有 刺 激 大 鼠 摄 食 的 作 用 [34] 13

15 以 上 研 究 表 明 饥 饿 中 枢 和 饱 中 枢 是 调 控 摄 食 的 重 要 部 位, 二 者 相 互 对 抗 共 同 影 响 食 欲, 在 调 节 动 物 摄 食 行 为 中 起 枢 纽 作 用 ; 同 时 脑 组 织 中 某 些 脑 肠 肽 的 微 量 变 化 对 食 欲 中 枢 的 功 能 活 动 起 着 重 要 的 调 节 作 用 三 对 脾 实 质 的 现 代 认 识 现 代 摄 食 生 理 研 究 认 为 控 制 摄 食 的 主 要 部 位 在 中 枢 神 经 系 统, 而 中 医 学 藏 象 理 论 则 认 为 大 脑 生 理 功 能 的 正 常 有 赖 于 五 脏 生 理 功 能 的 平 衡 协 调 素 问 宣 明 五 气 篇 第 二 十 三 心 藏 神, 肝 藏 魂, 肺 藏 魄, 脾 藏 意, 肾 藏 志 [35] 的 论 述 即 是 对 脑 的 精 神 活 动 与 五 脏 关 系 的 分 类 探 讨 灵 枢 脉 度 篇 第 十 七 说 : 脾 气 通 于 口, 脾 和 则 口 能 知 五 味 矣 [36] 可 见 自 内 经 始, 中 医 学 已 把 摄 食 行 为 与 脾 的 生 理 功 能 联 系 起 来 长 期 的 临 床 观 察 证 实 若 脾 失 健 运 则 出 现 口 淡 无 味, 口 甜 口 腻 口 苦 等 口 味 异 常, 影 响 食 欲 ; 用 运 脾 方 药 治 疗 可 改 善 食 欲, 增 进 食 量 近 年 来 对 脾 的 实 质 进 行 了 多 方 面 探 索, 但 长 期 以 来 脾 开 窍 于 口 的 生 理 功 能 被 涵 盖 于 脾 主 运 化 的 功 能 之 中, 未 被 单 独 研 究 这 一 方 面 是 因 为 中 医 对 脾 解 剖 学 认 识 的 局 限 为 寻 找 中 医 脾 脏 与 摄 食 控 制 的 物 质 联 系, 本 文 在 综 述 脾 实 质 的 研 究 之 前, 首 先 回 顾 一 下 中 医 学 对 脾 的 解 剖 认 识 1. 中 医 学 对 脾 的 解 剖 认 识 黄 帝 内 经 素 问 太 阴 阳 明 论 篇 第 二 十 九 指 出 脾 与 胃 以 膜 相 连 [37] 难 经 第 四 十 二 难 继 内 经 之 后 提 出 : 脾 重 二 斤 三 两, 扁 广 三 寸, 长 五 寸, 有 散 膏 半 斤, 主 裹 血, 温 五 脏 [38] 经 后 世 医 家 探 索, 认 清 扁 长 形 有 散 膏 的 脾 是 指 胃 下 方, 横 贴 胃 底, 扁 长 形 如 犬 舌, 其 味 甜 的 器 官, 俗 名 胰 子, 今 称 胰 腺 如 叶 霖 难 经 正 义 论 藏 腑 中 指 出 胰 附 脾 之 物, 形 长 方, 所 生 之 汁 能 消 化 食 物 [39] 所 以 中 医 学 脾 的 解 剖 概 念, 包 括 了 现 代 解 剖 学 的 脾 和 胰 两 个 器 官 但 长 期 临 床 观 察 和 实 验 研 究 结 果 表 明, 虽 然 在 解 剖 上 中 医 的 脾 指 现 代 医 学 的 胰 和 脾, 在 功 能 上 又 不 是 胰 和 脾 所 能 包 括 无 遗 2. 现 代 医 学 对 脾 实 质 的 研 究 14

16 近 年 来 国 内 运 用 现 代 科 学 技 术, 对 脾 实 质 进 行 了 深 入 探 索 [40] 若 从 脾 病 的 辨 证 依 据, 调 脾 方 药 的 功 能 主 治 以 及 药 效 学 实 验 结 果 多 方 面 分 析, 认 为 脾 的 本 质 包 括 与 消 化 系 统 有 关 的 功 能 结 构 与 能 量 代 谢 和 水 代 谢 相 关 的 器 官 系 统 以 及 免 疫 系 统 造 血 系 统 等 综 合 功 能 单 位 近 年 有 人 提 出 脾 的 功 能 是 胃 肠 胰 内 分 泌 系 统 加 上 迷 走 神 经 功 能 ; 或 是 消 化 系 统 主 要 功 能, 并 涉 及 植 物 神 经 代 谢 免 疫 等 综 合 功 能 单 位 系 统 总 之, 对 脾 的 病 理 生 理 探 索 的 结 果, 从 消 化 道 看, 脾 虚 与 胃 肠 病 变, 胰 腺 分 泌 功 能 和 小 肠 吸 收 功 能 关 系 密 切 [41][42][43] ; 从 整 体 来 看, 与 神 经 代 谢 内 分 泌 免 疫 系 统 功 能 状 态 有 关 [44][45] 文 献 分 析 表 明 现 代 关 于 脾 实 质 的 研 究 中, 对 脾 主 运 化 的 探 索 较 多, 对 脾 的 其 他 功 能 探 索 较 少, 亦 未 有 直 接 研 究 脾 与 摄 食 控 制 的 报 道 由 于 小 儿 厌 食 症 以 摄 食 行 为 改 变 为 主, 所 以 本 课 题 拟 从 摄 食 调 控 的 整 体 水 平 探 讨 小 儿 厌 食 症 的 发 病 机 制 和 运 脾 法 的 疗 效 机 理, 同 时 阐 明 脾 开 窍 于 口 的 生 物 学 基 础 参 考 文 献 1 汪 受 传 主 编. 中 医 儿 科 学. 北 京 : 人 民 卫 生 出 版 社,1998 年 第 1 版,668~676 2 金 星 明, 苏 祖 佑. 婴 儿 和 学 前 儿 童 进 食 问 题 的 原 因 和 治 疗. 国 外 医 学 妇 幼 保 健 分 册.1995;6(3):106 3 Dahi M,Sumdelin C.Feeding problems in an affluent society.follow up at four years of age in children with early refusal to eat.acta-paekiatr.1992,81:575 4 张 历 生, 张 雁 南, 谢 祥 兰, 等. 传 统 喂 养 与 儿 童 厌 食 症 关 系 的 研 究. 济 宁 医 学 院 学 报,1994;17(3):30 5 范 金 连. 谈 父 母 与 小 儿 厌 食. 中 国 儿 童 保 健 杂 志,1997;5( 增 刊 ):122 6 徐 振 华.240 例 厌 食 小 儿 心 理 状 况 调 查. 中 国 心 理 卫 生 杂 志,1994;8(4):159 7 Leung AK, Robson WL. The toddler who does not eat.am-fam-physician.1994;49(8): Singer LT, Ambuel B, Wade S, et al. Cognitive-behavioral treatment of health-impairing food phobias in children.j-am-acad-child-adolesc-psychiatry.1992;31(5):857 15

17 9 王 官 仁, 喻 毅 军, 谢 超 英. 儿 童 拒 食 现 象 的 分 析. 中 国 初 级 卫 生 保 健,1987;(10):21 10 Rydell Am, Dahl M, Sundelin C. Characteristics of school children who are choosy eaters.j-genet-psychol,1995;156(2): Dahl M, Ryedll AM, Sundelin C. Children with early refusal to eat: follow-up during primary school.acta-paediatr,1994;83(1):54 12 徐 宝 珍. 小 儿 长 期 厌 食 对 体 格 发 育 的 影 响 及 原 因 分 析. 安 徽 医 学.1997;18(5);13 13 陈 永 辉. 健 脾 增 食 冲 剂 治 疗 小 儿 厌 食 症 的 临 床 研 究. 中 国 中 西 医 结 合 脾 胃 杂 志,1998;6(1):20 14 李 萍, 郭 健. 微 量 元 素 与 学 龄 儿 童 厌 食 的 相 关 性 分 析. 微 量 元 素 与 健 康 研 究,1997;14(1):28 15 汪 颖, 丰 秀 菊, 谢 华 生, 等. 开 胃 灵 冲 剂 对 小 儿 厌 食 症 患 儿 尿 淀 粉 酶 及 免 疫 球 蛋 白 的 影 响. 黑 龙 江 中 医 药,1992;(2):25 16 万 历 生. 中 医 药 治 疗 小 儿 厌 食 症 的 现 状 与 展 望. 南 京 中 医 药 大 学 学 报,2000;16(1):63 17 汪 受 传, 尤 汝 娣, 郁 晓 维, 等. 运 脾 方 药 治 疗 小 儿 厌 食 症 的 临 床 与 实 验 研 究. 中 国 中 西 医 结 合 杂 志,1991;11(2):75 18 熊 建 平, 万 明, 司 远 平, 等. 消 食 贴 敷 脐 治 疗 小 儿 厌 食 症 的 临 床 与 实 验 研 究. 中 国 中 西 医 结 合 脾 胃 杂 志,1998;6(3): 周 文 光, 蒙 子 卿. 神 效 儿 宝 治 疗 小 儿 厌 食 症 的 临 床 与 实 验 研 究. 中 成 药,1995;17(9):30 20 刘 权, 韩 杨, 李 春 子. 小 儿 速 效 增 食 灵 药 理 实 验 研 究. 吉 林 中 医 药,1996;(2):36 21 John E. Morley, Allen S. Levine. The central control of appetite. The Lancet,1983: 江 连 海, 沈 锷. 摄 食 控 制 的 中 枢 神 经 化 学 机 制. 生 理 科 学 进 展,1984;15(2): 周 吕 主 编. 胃 肠 生 理 学 胃 肠 生 理 功 能 总 论. 第 1 版. 北 京 : 科 学 出 版 社,1991:3 页 24 Sakurai T, Amemiya, Ishii M, et al. Orexin and Orexin recepters:a family of hypothalamic neuropeptides and G protein-coupled receptors that regulate 16

18 feeding behavior. Cell,1998;(92): Mark c. Flynn, Thomas R. Scott, Thomas c. pritchard.mode of action of OB protein (Leptin) on feeding.american Physiological Society,1998:R Hetherington A.W, Ranson, S.W. Hypothalamic lesions and adiposity in the rat.anat.rec,1940;78: Anand B.K, Brobeck J.R. Hypothalamic control of food intake in rats and cats. Yale J.Biol.Med,1951;24: Ganong W.F. Review of medical physiology. California : Lange Medical Publications,1983: John E.M, Allen S.L. The central control of appetite. The lancet,1983;Ⅰ : Della-Fera,M.A.et al.cholecystokinin octapeptide: continuous picomole injections into the cerebral ventricles of sheep suppress feeding.science,1979,206: Reidelberger RD. Cholecystokinin and control of food intake.j-nutr.1994 Aug; 124(8 Suppl):1327S 32 Tseng,L.F,et al.acute and chronic administration of β -endorphin and naltrexone on food and water intake in rats.fed.proc.1980;39: Grandiso,L. Stimulation of food intake by muscimol and β -endorphin.neuropharmocol.1977,16: Clark,J.T.Neuropeptide Y and human pancreatic polypeptide stimulate feeding behavior in rats.endocrinology,1984;115: 高 文 铸 主 编. 医 经 病 源 诊 法 名 著 集 成 黄 帝 内 经 素 问 宣 明 五 气 篇 第 二 十 三. 第 1 版. 北 京 : 华 夏 出 版 社,1997:31 页 36 高 文 铸 主 编. 医 经 病 源 诊 法 名 著 集 成 灵 枢 脉 度 篇 第 十 七. 第 1 版. 北 京 : 华 夏 出 版 社,1997:132 页 37 高 文 铸 主 编. 医 经 病 源 诊 法 名 著 集 成 黄 帝 内 经 素 问 太 阴 阳 明 论 篇 第 二 十 九. 第 1 版. 北 京 : 华 夏 出 版 社,1997:36 页 38 高 文 铸 主 编. 医 经 病 源 诊 法 名 著 集 成 难 经 第 四 十 二 难. 第 1 版. 北 京 : 华 夏 出 版 社,1997:192 页 39 陆 拯 主 编. 近 代 中 医 珍 本 集 医 经 分 册 难 经 正 义 论 藏 腑. 第 1 版. 杭 州 : 浙 江 科 17

19 学 技 术 出 版 社,1990:1042 页 40 王 建 华. 脾 虚 证 证 本 质 研 究 的 途 径 及 其 方 向. 中 医 杂 志,1998;39(1):50 41 马 建 伟, 徐 丽 梅, 王 旭, 等. 医 学 图 象 处 理 系 统 对 脾 虚 证 胃 窦 粘 膜 内 分 泌 细 胞 变 化 的 研 究. 中 国 中 医 基 础 医 学 杂 志.1997;3(1):39 42 张 万 岱, 姚 永 莉, 宋 于 刚. 脾 虚 证 大 鼠 组 织 中 胃 泌 素 组 织 中 胃 泌 素 及 生 长 抑 素 含 量 的 变 化 及 意 义. 中 国 中 西 医 结 合 脾 胃 杂 志,1998;6(4): 刘 健, 刘 春 丽, 方 朝 晖, 等. 脾 气 虚 大 鼠 肝 细 胞 超 微 结 构 动 态 变 化 的 实 验 研 究. 中 国 中 西 医 结 合 脾 胃 杂 志,1998;6(1):32 44 马 建 伟, 王 旭. 脾 虚 证 与 胃 肠 激 素 关 系 的 研 究 概 况. 中 国 中 医 基 础 医 学 杂 志,1996;2(4):61 45 金 敬 善. 中 医 脾 胃 学 说 生 化 研 究 进 展. 北 京 中 医 杂 志,1992;(1):63 18

20 Ⅱ 脑 肠 肽 - 食 欲 中 枢 假 说 一 假 说 的 提 出 饮 食 成 分 影 响 胃 肠 激 素 的 分 泌 在 婴 儿, 母 乳 喂 养 和 人 工 喂 养, 哺 乳 期 长 短 和 哺 乳 量 多 少 对 胃 肠 激 素 的 影 响 均 有 差 异, 这 些 胃 肠 激 素 又 作 为 反 馈 或 负 反 馈 因 素 调 节 摄 食 行 为 [1] 小 儿 厌 食 症 的 主 要 病 因 是 喂 养 不 当, 膳 食 成 份 不 合 理, 所 以 我 们 设 想 其 厌 食 症 状 的 发 生 是 由 于 摄 食 成 份 不 合 理, 引 起 某 些 肽 类 物 质 分 泌 紊 乱, 进 而 作 用 于 食 欲 中 枢 影 响 摄 食 行 为 ; 运 脾 复 方 对 小 儿 厌 食 症 的 治 疗 作 用 可 能 是 通 过 调 节 脑 肠 肽 和 食 欲 中 枢 紊 乱 的 中 枢 机 制 实 现 的 此 即 脑 肠 肽 - 食 欲 中 枢 假 说 [2] 二 假 说 的 工 作 基 础 目 前 尚 未 见 到 从 脑 肠 肽 和 食 欲 中 枢 研 究 小 儿 厌 食 症 的 文 献, 但 有 不 少 有 益 的 提 示 已 知 改 变 小 儿 不 良 饮 食 习 惯, 合 理 喂 养 可 以 逐 渐 培 养 食 欲, 增 加 摄 食 量 [3] 提 示 改 变 膳 食 成 分 后 调 整 了 胃 肠 激 素 的 分 泌 状 态, 从 而 达 到 治 疗 目 的 有 报 道 用 5-HT 拮 抗 剂 赛 更 啶 治 疗 厌 食 症 346 例, 总 有 效 率 达 91.3% [4] 表 明 通 过 影 响 神 经 递 质 可 有 效 地 改 善 食 欲 有 报 道 用 耳 穴 贴 压 法 治 疗 小 儿 厌 食 症 67 例, 显 效 率 达 80% [5] ; 同 时 动 物 实 验 发 现 刺 激 耳 廓 可 调 节 食 欲 中 枢 神 经 元 活 动 [6] 提 示 食 欲 中 枢 的 电 活 动 直 接 控 制 小 儿 的 摄 食 行 为 现 代 医 学 对 脾 实 质 的 研 究 表 明 脾 与 神 经 内 分 泌 功 能 密 切 相 关 [7], 许 多 研 究 证 实 运 脾 复 方 可 影 响 动 物 外 周 和 中 枢 肽 类 激 素 的 水 平 [8][9], 提 示 运 脾 复 方 治 疗 小 儿 厌 食 症 有 可 能 是 通 过 影 响 脑 肠 肽 和 食 欲 中 枢 的 功 能 实 现 的 三 证 明 假 说 的 途 径 在 临 床 研 究 的 基 础 上, 建 立 小 儿 厌 食 症 动 物 模 型, 观 察 该 模 型 下 19

21 丘 脑 与 外 周 CCK-8 β- 内 啡 肽 和 胃 泌 素 的 变 化, 以 及 下 丘 脑 食 欲 中 枢 神 经 元 放 电 频 率 的 变 化 ; 研 究 运 脾 复 方 儿 宝 颗 粒 对 以 上 变 化 的 调 节 作 用 参 考 文 献 1 王 继 山, 陈 俭 红 主 编. 实 用 小 儿 胃 肠 病 学 胃 肠 激 素. 第 1 版. 北 京 : 北 京 医 科 大 学 中 国 协 和 医 科 大 学 联 合 出 版 社,1997:93 页 2 张 月 萍, 杜 永 平, 汪 受 传, 等. 小 儿 厌 食 发 生 发 展 及 运 脾 法 作 用 中 枢 机 制 研 究 的 新 思 路. 中 国 中 医 基 础 医 学 杂 志,1998;4(4):18 3 徐 宝 珍. 小 儿 长 期 厌 食 对 体 格 发 育 的 影 响 及 原 因 分 析. 安 徽 医 学,1997;18(5):13 4. 赛 庚 啶 治 疗 儿 童 厌 食 症 346 例. 温 州 医 学,1994;10(1):24 5 董 卫. 药 物 敷 脐 加 耳 穴 贴 压 治 疗 小 儿 厌 食 症 67 例. 新 中 医,1995;(10):34 6 白 石 武 昌 ( 日 ). 刺 激 耳 廓 可 调 节 与 摄 食 有 关 的 下 丘 脑 神 经 元 活 动. 国 外 医 学 中 医 中 药 分 册,1994;16(6):368 7 金 敬 善. 中 医 脾 胃 学 说 生 化 学 研 究 进 展. 北 京 中 医 杂 志,1992;(1):63 8 张 月 萍, 汪 受 传. 壮 儿 饮 对 小 白 鼠 血 清 胃 泌 素 水 平 的 影 响. 中 医 药 研 究,1994;(1);46 9 马 建 伟, 王 旭. 脾 虚 证 与 胃 肠 激 素 关 系 的 研 究 概 况. 中 国 中 医 基 础 医 学 杂 志,1996;2(4):61 20

22 Ⅲ 临 床 研 究 为 建 立 可 靠 的 动 物 模 型, 深 入 研 究 运 脾 法 治 疗 小 儿 厌 食 症 的 中 枢 机 理, 我 们 首 先 进 行 了 严 密 的 临 床 研 究 我 院 自 1981 年 以 来 开 设 了 小 儿 厌 食 专 科 门 诊, 对 本 病 病 因 病 机 进 行 了 系 统 调 查 和 研 究, 并 以 运 脾 法 为 主 研 制 儿 宝 颗 粒, 进 行 了 临 床 疗 效 观 察 观 察 对 象 为 符 合 小 儿 厌 食 症 诊 断 标 准, 年 龄 在 1~6 岁, 近 1 月 内 未 用 过 治 疗 小 儿 厌 食 的 中 西 药 物 及 其 它 疗 法 者 诊 断 标 准 :(1) 以 厌 食 为 主 症 无 主 动 进 食 欲 望 ; 食 量 较 同 年 龄 健 康 儿 童 显 著 减 少, 每 日 粮 食 进 量,1~3 岁 100g,3~6 岁 150g (2) 厌 食 病 程 在 2 个 月 以 上 (3) 排 除 肝 炎 结 核 等 其 它 慢 性 疾 病 一 病 因 分 析 据 本 组 300 例 临 床 资 料 分 析, 除 75 例 病 因 不 明 外, 其 病 因 可 归 纳 为 喂 养 不 当, 先 天 不 足, 多 病 久 病, 暑 湿 熏 蒸 和 环 境 影 响 5 个 方 面, 分 别 占 50.7% 16.4% 27.6% 4.4% 和 0.89%, 见 表 1 表 例 厌 食 患 儿 病 因 分 析 病 因 喂 养 不 当 先 天 不 足 多 病 久 病 暑 湿 熏 蒸 环 境 影 响 例 数 % 50.7% 16.4% 27.6% 4.4% 0.89% 结 果 表 明 小 儿 厌 食 症 的 主 要 原 因 是 喂 养 不 当, 饮 食 不 节 目 前 婴 幼 儿 及 学 龄 前 儿 童, 绝 大 多 数 为 独 生 子 女 由 于 家 长 缺 乏 育 儿 知 识, 片 面 追 求 高 营 养, 盲 目 投 以 甘 肥 厚 味, 如 过 食 糖 类 煎 炸 粘 腻 炒 香 食 物, 或 滥 服 补 品, 如 巧 克 力 蜂 乳 银 耳 桂 圆 等, 以 致 食 欲 不 振, 长 期 厌 食 先 天 不 足 和 多 病 久 病 的 患 儿 如 能 合 理 喂 养, 亦 能 补 偏 救 弊, 逐 步 达 到 同 龄 健 康 儿 童 的 水 准, 故 这 些 患 儿 厌 食 的 主 要 原 因 仍 在 于 后 天 调 护 失 宜 这 一 结 论 与 文 献 报 道 一 致 [1][2][3] 二 病 机 探 讨 21

23 根 据 辨 证 论 治 原 则, 将 300 例 患 儿 分 为 脾 运 失 健 脾 胃 气 虚 和 胃 阴 不 足 三 型, 见 表 2 表 例 厌 食 患 儿 病 机 分 析 辨 证 分 型 脾 运 失 健 脾 胃 气 虚 胃 阴 不 足 例 数 % 60.3% 34.7% 5% 结 果 显 示 :300 例 患 儿 中 脾 运 失 健 型 181 例, 占 总 数 的 60.3%, 临 床 表 现 为 不 思 纳 谷, 食 而 无 味, 多 食 后 脘 腹 作 胀, 舌 苔 白 或 腻 此 型 患 儿 脾 虚 症 状 不 显 著, 以 运 化 功 能 失 常 为 主 ; 脾 胃 气 虚 型 104 例, 占 34.7%, 临 床 表 现 为 精 神 软 弱, 形 体 偏 瘦, 面 色 萎 黄, 自 汗 盗 汗, 大 便 常 夹 未 消 化 残 渣, 舌 质 偏 淡, 舌 苔 薄 白, 舌 体 胖 嫩 此 型 患 儿 脾 虚 之 象 已 现, 常 易 患 感 冒 肺 炎 等 疾 病 ; 胃 阴 不 足 型 15 例, 占 5% 临 床 表 现 为 口 干 多 饮, 纳 谷 呆 钝, 便 干 溲 黄, 舌 质 红, 少 津, 苔 少 或 苔 光 剥 此 型 患 儿 为 数 不 多 灵 枢 脉 度 篇 云 : 脾 气 通 于 口, 脾 和 则 口 能 知 五 谷 矣 [4] 明 万 全 曰 : 儿 有 少 食 而 易 饱 者, 此 胃 之 不 受, 脾 之 不 消 也 [5] 说 明 脾 气 调 和, 则 知 饥 纳 谷, 食 而 知 味 若 不 思 纳 谷, 食 而 无 味, 其 病 在 脾 当 属 无 疑 幼 科 发 挥 卷 三 说 : 不 嗜 食, 吐 泻, 皆 脾 脏 之 本 病 也 [6] 指 出 不 嗜 食 为 脾 脏 本 脏 病 变, 一 般 不 涉 及 他 脏 本 研 究 病 机 分 析 结 果 显 示 脾 运 失 健 证 为 主 要 证 型, 表 明 厌 食 患 儿 临 床 表 现 以 食 欲 改 变 为 主, 伴 随 症 状 较 少 三 疗 效 观 察 用 运 脾 复 方 儿 宝 颗 粒 治 疗 了 178 例 脾 运 失 健 证 厌 食 患 儿, 并 与 浓 复 合 维 生 素 B 溶 液 治 疗 的 136 例 厌 食 患 儿 对 照 观 察 儿 宝 颗 粒 由 本 校 植 物 药 深 加 工 中 心 制 作, 主 要 成 份 为 苍 术, 陈 皮, 鸡 内 金 和 焦 山 楂, 每 服 10g,1 日 3 次, 温 开 水 冲 服 对 照 组 患 儿 口 服 浓 维 生 素 B 溶 液, 每 服 5ml,1 日 3 次 各 组 在 治 疗 观 察 期 间 均 不 用 其 它 治 疗, 观 察 疗 程 1 个 月 22

24 疗 效 统 计 按 以 下 标 准 评 定 :(1) 显 效 : 食 欲 增 进, 食 量 增 加, 体 重 上 升 0.5kg, 原 有 症 状 基 本 消 失 (2) 有 效 : 食 欲 食 量 及 其 它 症 状 改 善, 和 / 或 体 重 上 升 0.25kg (3) 无 效 : 各 项 指 标 无 明 显 改 善 观 察 结 果 作 卡 方 检 验, 儿 宝 颗 粒 组 疗 效 显 著 优 于 对 照 组 (p< 0.001), 见 表 3 表 3 两 组 患 儿 疗 效 统 计 显 效 有 效 无 效 组 别 例 数 例 数 (%) 例 数 (%) 例 数 (%) 浓 复 B 液 (16.2) 38(27.9) 76(55.9) 儿 宝 颗 粒 (49.4) 75(42.1) 15(8.4) 取 患 儿 枕 部 或 颞 部 近 发 根 部 发 样 1~2g, 长 3~5cm, 用 干 法 测 定 多 种 矿 物 元 素 含 量 结 果 由 计 算 机 处 理 两 组 患 儿 头 发 矿 物 元 素 检 测 结 果, 见 表 4 小 儿 药 证 直 诀 卷 下 诸 方 采 用 益 黄 散 为 治 疗 小 儿 不 思 食 的 主 方, 开 调 脾 助 运 法 治 疗 厌 食 之 先 河 [7] ; 现 代 著 名 中 医 儿 科 学 家 江 育 仁 教 授 针 对 脾 运 失 健 证 的 治 疗 提 出 : 欲 健 脾 者, 旨 在 运 脾, 欲 使 脾 健, 则 不 在 补 而 贵 在 运 也 [8] 我 们 通 过 对 小 儿 厌 食 症 的 病 机 分 析, 发 现 脾 运 失 健 证 是 厌 食 患 儿 的 主 要 证 型, 因 此 确 定 以 运 脾 法 为 主 治 疗 小 儿 厌 食 症 由 于 脾 运 失 健 证 的 临 床 表 现 以 食 欲 低 下, 进 食 量 减 少 为 主, 无 明 显 脾 虚 之 象, 所 以 治 疗 厌 食, 以 和 为 贵, 以 开 胃 运 脾 为 基 本 法 则, 选 用 苍 术 陈 皮 鸡 内 金 焦 山 楂 制 成 儿 宝 颗 粒, 进 行 临 床 观 察 取 得 了 良 好 疗 效 国 内 外 有 多 宗 报 道 提 出, 小 儿 厌 食 与 缺 锌 密 切 相 关 [9][10] 本 研 究 表 明, 厌 食 症 患 儿 不 仅 缺 锌, 其 头 发 大 多 数 微 量 及 宏 量 元 素 含 量 均 较 正 常 儿 童 明 显 低 下 儿 宝 颗 粒 的 临 床 疗 效 主 要 表 现 在 增 进 患 儿 食 欲, 增 加 对 各 种 营 养 素 的 摄 入 及 利 用, 并 且 明 显 改 善 患 儿 各 种 矿 物 23

25 表 4 两 组 患 儿 治 疗 前 后 头 发 矿 物 元 素 检 测 结 果 铁 锌 铜 组 别 治 疗 前 (n) 治 疗 后 (n) 治 疗 前 (n) 治 疗 后 (n) 治 疗 前 (n) 治 疗 后 (n) 正 常 儿 童 34.36± ± ±2.57 (144) (147) (141) 浓 复 B 组 31.33± ± ± ± ± ±3.93 (30) * (30) * (30) * (30) * (30) * (52) *** 儿 宝 颗 粒 25.49± ± ± ± ± ±1.34 (47) *** (36) * (46) ** (38) * (30) *** (38) *** 钙 磷 镁 组 别 治 疗 前 (n) 治 疗 后 (n) 治 疗 前 (n) 治 疗 后 (n) 治 疗 前 (n) 治 疗 后 (n) 正 常 儿 童 597.7± ± ±29.26 (133) (146) (134) 浓 复 B 组 ± ± ± ± ± ±11.59 (29)*** (29)*** (30)** (30)** (27)*** (27)*** 儿 宝 颗 粒 ± ± ± ± ± ±21.89 (46)*** (35)* (46)* (38)* (45)*** (36)* 注 : 与 正 常 儿 童 比,*p>0.05,**p<0.05,***p<0.01; 本 组 治 疗 后 与 治 疗 前 比, p>0.05, p<0.05, p<0.01 质 的 营 养 状 态 24

26 以 上 对 厌 食 患 儿 主 要 病 因 和 主 要 证 候 表 现 的 分 析, 以 及 对 运 脾 复 方 治 疗 效 果 的 肯 定, 为 建 立 小 儿 厌 食 症 动 物 模 型 提 供 了 可 靠 的 工 作 基 础 参 考 文 献 1 张 历 生, 张 雁 南, 谢 祥 兰, 等. 传 统 喂 养 与 儿 童 厌 食 症 关 系 的 研 究. 济 宁 医 学 院 学 报,1994;17(3):30 2 王 官 仁, 喻 毅 军, 谢 超 英, 等. 儿 童 拒 食 现 象 的 观 察 与 分 析. 中 国 初 级 卫 生 保 健,1987,(10):21 3 范 金 连. 谈 父 母 与 小 儿 厌 食. 中 华 儿 童 保 健 杂 志,1997;5( 增 刊 ):122 4 高 文 铸 主 编. 医 经 病 源 诊 法 名 著 集 成 灵 枢 脉 度 篇 第 十 七. 第 1 版. 北 京 : 华 夏 出 版 社,1997:132 页 5 黄 政 德 主 编. 中 华 医 书 集 成 ( 儿 科 类 ) 万 氏 家 传 幼 科 发 挥 卷 之 三. 第 1 版. 北 京 : 中 医 古 籍 出 版 社,1999:55 页 6 郭 君 双 主 编. 中 医 儿 科 名 著 集 成 幼 科 发 挥 卷 三. 第 1 版. 北 京 : 华 夏 出 版 社,1997:471 页 7 郭 君 双 主 编. 中 医 儿 科 名 著 集 成 小 儿 药 证 直 诀 卷 下 诸 方. 第 1 版. 北 京 : 华 夏 出 版 社,1997:36 页 8 江 育 仁. 脾 健 不 在 补 贵 在 运. 中 医 杂 志,1983;24(1):4 9 张 立 夫, 张 新 生, 薛 慧, 等. 单 纯 厌 食 症 儿 童 同 时 测 定 头 发 和 血 清 锌 铁 的 意 义. 中 国 医 科 大 学 学 报,1993;22(5): 李 萍, 郭 健. 微 量 元 素 与 学 龄 儿 童 厌 食 的 相 关 性 分 析. 微 量 元 素 与 健 康 研 究,1997;14(1):28 Ⅳ 建 立 动 物 模 型 25

27 本 研 究 在 临 床 研 究 的 基 础 上 研 制 了 小 儿 厌 食 症 脾 运 失 健 症 大 鼠 模 型 一 建 立 小 儿 厌 食 症 动 物 模 型 的 思 路 有 关 小 儿 厌 食 症 动 物 模 型 的 研 究, 目 前 尚 未 见 文 献 报 道 毁 损 下 丘 脑 外 侧 核 腹 腔 或 脑 室 注 射 八 肽 胆 囊 收 缩 素 均 可 导 致 大 鼠 厌 食 [1][2], 但 这 些 造 模 方 法 均 属 于 极 端 方 法, 所 致 的 厌 食 模 型 属 于 极 端 模 型, 不 适 用 于 小 儿 厌 食 症 的 研 究 一 般 认 为 建 立 中 医 病 证 动 物 模 型 的 方 法 有 两 种, 病 机 摸 拟 和 病 因 摸 拟 病 因, 症 状 和 治 疗 反 证 是 建 立 中 医 证 候 动 物 模 型 的 三 要 素 即 施 以 相 同 的 病 因, 造 成 与 原 型 相 同 的 症 状 群, 有 效 治 疗 方 药 可 以 反 证 是 评 价 模 型 成 功 与 否 的 主 要 依 据 [3] 小 儿 厌 食 症 的 主 要 病 因 是 喂 养 不 当, 膳 食 结 构 不 全 理, 造 模 因 素 容 易 被 摸 拟 ; 小 儿 厌 食 症 的 主 要 证 候 脾 运 失 健 证 以 长 期 食 欲 减 退 为 主 要 临 床 表 现, 不 伴 有 其 他 系 统 的 表 现, 症 状 单 纯, 容 易 评 价 ; 运 脾 复 方 儿 宝 颗 粒 治 疗 小 儿 厌 食 症 已 取 得 可 靠 疗 效 [4], 可 以 作 为 有 效 方 药 反 证 模 型 病 因 摸 拟 造 成 的 动 物 模 型, 与 原 型 病 理 变 化 比 较 接 近 由 此 看 来, 用 病 因 摸 拟 法 制 作 小 儿 厌 食 症 动 物 模 型 是 可 行 的, 合 理 的 因 此 本 研 究 采 用 特 制 饲 料 喂 养 幼 龄 大 鼠 建 立 小 儿 厌 食 症 动 物 模 型 [5] 二 建 立 小 儿 厌 食 症 动 物 模 型 的 方 法 1. 材 料 与 方 法 1.1 饲 料 配 制 特 制 饲 料 采 用 鱼 松 奶 粉 玉 米 粉 黄 豆 粉 白 糖 鲜 鸡 蛋 肥 猪 肉 七 种 市 售 食 品 按 比 例 (1:1:1:2:1:1.8:2) 混 匀, 捏 成 小 饼, 每 块 约 20g, 晾 干, 冷 藏 1.2 动 物 和 喂 养 SD 大 鼠 26 只, 日 龄 40~45 天, 体 重 (70±10)g, 雌 雄 各 半 由 26

28 南 京 中 医 药 大 学 实 验 动 物 中 心 供 给 随 机 分 为 对 照 组 和 模 型 组, 每 组 13 只 对 照 组 用 常 规 饲 料 喂 养, 模 型 组 用 特 制 饲 料 喂 养 所 有 动 物 均 自 由 进 食 饮 水, 单 笼 饲 养 1.3 观 察 及 检 测 内 容 观 察 动 物 外 观 及 活 动 情 况, 记 录 每 日 进 食 量 及 体 重 分 别 于 实 验 第 天 采 血 测 微 量 元 素 ( 原 子 吸 收 光 谱 法 ); 检 测 两 种 饲 料 的 主 要 营 养 成 份 ( 由 南 京 农 业 大 学 中 心 实 验 室 测 试 ) 2. 结 果 2.1 一 般 情 况 实 验 过 程 中, 模 型 组 大 鼠 和 对 照 组 相 比, 未 出 现 腹 泻 蜷 卧 少 动 毛 枯 等 明 显 脾 虚 症 状, 但 有 食 欲 减 退, 体 重 增 长 缓 慢, 易 激 惹 等 脾 运 失 健 肝 火 偏 旺 等 症 状 2.2 进 食 量 实 验 第 1~6 天, 模 型 组 大 鼠 日 平 均 进 食 量 低 于 对 照 组 30% 左 右, 第 7~28 天 模 型 组 大 鼠 日 平 均 进 食 量 低 于 对 照 组 40%~50%, 统 计 学 处 理 有 显 著 性 差 异 见 表 1 表 1 实 验 动 物 摄 食 量 的 变 化 (g, х±s) 组 别 n 第 1 日 第 7 日 第 14 日 第 21 日 第 27 日 对 照 组 ± ± ± ± ±3.26 模 型 组 ± ±1.07 * 11.72±2.06 ** 13.47±1.99 ** 14.32±1.85 ** * 与 对 照 组 比 较,P<0.05 ** p< 体 重 实 验 第 1~7 天, 模 型 组 大 鼠 平 均 体 重 低 于 对 照 组 10% 以 内, 与 对 照 组 比 无 显 著 性 差 异 ; 第 8~28 天, 模 型 组 大 鼠 平 均 体 重 低 于 对 照 组 10%~15%, 有 显 著 性 差 异 见 表 2 表 2 实 验 动 物 体 重 变 化 (g, х±s) 组 别 n 第 1 日 第 3 日 第 7 日 第 14 日 第 21 日 第 28 日 对 照 组 ± ± ± ± ± ±18.3 模 型 组 ± ± ± ± ±13.8 * 130.5±16.4 * 与 对 照 组 比 较, P<

29 2.4 血 清 微 量 元 素 检 测 结 果 见 表 3 表 4 和 表 5 表 3 2 组 大 鼠 血 清 铁 的 含 量 ( - χ±s) 第 7 天 第 21 天 组 别 n ug/ml n ug/ml 对 照 组 ± ±0.485 模 型 组 ±0.712 ** ±1.006 * 注 : 与 对 照 组 比, * p<0.05, ** p<0.01 表 4 2 组 大 鼠 血 清 铜 含 量 ( - χ±s) 组 别 第 7 天 第 14 天 第 21 天 n ug/ml n ug/ml n ug/ml 对 照 组 ± ± ±0.076 模 型 组 ±0.061 ** ±0.168 ** ±0.071 ** 注 : 与 对 照 组 比, ** p<0.001 表 5 2 组 大 鼠 血 清 锌 含 量 ( х±s) 第 14 天 第 21 天 组 别 n ug/ml n ug/ml 对 照 组 ± ±0.134 模 型 组 ± ±0.133 注 : 与 对 照 组 比, p>0.05 由 上 表 可 以 看 出, 实 验 过 程 中 模 型 组 大 鼠 血 清 铁 和 血 清 铜 含 量 均 低 于 对 照 组, 经 统 计 学 处 理 有 显 著 性 差 异 血 清 锌 的 均 值 虽 然 低 于 对 照 组, 但 无 显 著 性 差 异 2.5 两 种 饲 料 成 份 分 析 各 种 成 分 测 定 均 做 平 行 样, 取 平 均 值, 结 果 见 表 6 表 7 和 表 8 表 6 2 种 饲 料 主 要 营 养 成 份 比 较 28

30 组 别 粗 蛋 白 粗 脂 肪 蛋 白 质 氨 基 酸 总 量 总 碳 水 化 合 物 (%) (%) (%) (mg/kg -1 ) 普 通 饲 料 特 制 饲 料 表 7 2 种 饲 料 宏 微 量 元 素 含 量 比 较 组 别 钙 磷 锌 铜 铁 (%) (%) (mg/kg -1 ) (mg/kg -1 ) (mg/kg -1 ) 普 通 饲 料 特 制 饲 料 表 8 2 种 饲 料 各 种 维 生 素 含 量 比 较 (IU/g) 组 别 VA VD3 VB1 VB2 VB6 普 通 饲 料 特 制 饲 料 讨 论 根 据 厌 食 患 儿 的 主 要 病 因, 本 实 验 采 用 市 售 食 品 配 制 特 制 饲 料 喂 养 幼 龄 大 鼠, 模 拟 婴 幼 儿 断 奶 前 后 辅 食 添 加 不 当, 膳 食 搭 配 不 合 理, 挑 食 偏 食 的 状 态, 符 合 此 症 的 自 然 病 因, 实 验 过 程 中 使 动 物 自 由 进 食, 也 与 临 床 情 况 十 分 接 近 ; 中 美 长 期 合 作 课 题 中 国 健 康 与 营 养 调 查 资 料 显 示 : 我 国 2-6 岁 儿 童 膳 食 中 脂 肪 和 蛋 白 质 达 到 了 较 高 水 平, 而 钙 铁 核 黄 素 等 摄 入 量 仍 较 低 [6], 有 关 学 龄 前 厌 食 儿 童 的 膳 食 摄 入 情 况 调 查 得 到 类 似 的 结 果 7 本 实 验 所 用 特 制 饲 料 成 分 分 析 结 果 正 29

31 好 与 此 相 似 : 粗 蛋 白 粗 脂 肪 含 量 高, 多 种 矿 物 质 及 多 种 维 生 素 含 量 低 下, 尤 其 是 钙 铁 核 黄 素 含 量 明 显 低 下, 表 明 本 实 验 造 模 因 素 与 小 儿 厌 食 症 的 主 要 病 因 相 符 厌 食 患 儿 的 主 要 临 床 表 现 为 长 期 食 欲 低 下, 厌 恶 进 食, 进 食 量 减 少, 体 重 增 长 缓 慢 脾 运 失 健 证 是 最 常 见 的 一 种 证 型, 该 证 除 上 述 表 现 外, 一 般 不 伴 有 其 他 症 状 本 实 验 中 模 型 动 物 进 食 量 始 终 显 著 低 于 对 照 组, 体 重 从 第 2 周 开 始 明 显 低 于 对 照 组, 持 续 3 周, 不 伴 有 腹 泻, 毛 枯, 少 动 等 其 他 症 状, 符 合 小 儿 厌 食 症 脾 运 失 健 证 的 临 床 表 现 厌 食 患 儿 无 特 异 的 客 观 诊 断 指 标 许 多 资 料 显 示 厌 食 患 儿 多 种 微 量 元 素 缺 乏 [8][9], 本 文 模 型 动 物 血 清 铁 和 血 清 铜 均 明 显 低 于 对 照 组, 与 临 床 观 察 结 果 一 致, 血 清 锌 虽 然 偏 低, 但 无 显 著 性 差 异, 可 能 与 模 型 组 大 鼠 易 激 惹, 好 啃 鼠 笼, 以 及 低 锌 状 态 下 动 物 通 过 体 内 代 偿 机 制, 使 富 含 锌 的 肌 肉 肝 脏 等 组 织 内 的 锌 释 放 入 血 有 关 综 上 所 述, 特 制 饲 料 喂 养 幼 龄 大 鼠 建 立 小 儿 厌 食 症 模 型, 造 模 因 素 和 模 型 症 状 与 临 床 基 本 符 合 随 后 的 实 验 中 用 有 效 方 药 儿 宝 颗 粒 对 该 模 型 进 行 了 反 证 研 究, 同 时 测 定 了 该 模 型 中 枢 和 外 周 三 种 与 摄 食 有 关 的 脑 肠 肽 含 量 及 饥 饿 中 枢 饱 中 枢 的 神 经 元 放 电 频 率, 观 察 了 运 脾 复 方 对 以 上 变 化 的 影 响 参 考 文 献 1 人 类 疾 病 动 物 模 型 2 周 吕 主 编. 胃 肠 生 理 学 胃 肠 系 统 与 胃 肠 肽 的 关 系. 第 1 版. 北 京 : 科 学 出 版 社,1991:157 页 3 陈 小 野. 中 医 证 候 动 物 模 型 学. 第 1 版. 北 京 : 北 京 医 科 大 学 中 国 协 和 医 科 大 学 联 合 出 版 社,1993:47 页 4 汪 受 传, 尤 汝 娣, 郁 晓 维, 等. 运 脾 方 药 治 疗 小 儿 厌 食 症 的 临 床 及 实 验 研 究. 中 国 中 西 医 结 合 杂 志,1991;11(2):75 5 汪 受 传, 张 月 萍, 陶 勇, 等. 特 制 饲 料 喂 养 幼 龄 大 鼠 建 立 小 儿 厌 食 症 模 型. 南 京 中 医 药 大 学 学 报,1999;15(3):148 6 翟 凤 英, 吕 冰, 金 水 高, 等. 中 国 八 省 学 前 儿 童 的 膳 食 摄 入 和 生 长 发 育 情 况. 营 养 30

32 学 报 ;1998,20(3):245 7 冯 建 英, 庞 文 贞, 唐 方, 等 学 龄 前 厌 食 儿 童 营 养 状 况 及 不 同 治 疗 效 果 分 析. 营 养 学 报,1993;15(1):47 8 张 立 夫, 张 新 生, 白 晓 东, 等. 单 纯 厌 食 症 儿 童 同 时 测 定 头 发 和 血 清 锌 铁 的 意 义. 中 国 医 科 大 学 学 报,1993;22(5):381 9 安 军 强, 李 留 柱, 栗 美 菊. 学 龄 前 儿 童 厌 食 与 缺 锌 关 系. 临 床 儿 科 杂 志,1996;14(3):214 Ⅴ 运 脾 法 对 模 型 动 物 脑 肠 肽 和 摄 食 量 的 调 节 本 研 究 以 动 物 模 型 为 对 象 观 察 了 厌 食 大 鼠 中 枢 和 外 周 三 种 与 摄 食 行 为 密 切 有 关 的 脑 肠 肽 的 含 量 变 化 一 运 脾 复 方 对 下 丘 脑 和 血 浆 中 CCK-8 的 调 节 31

33 CCK 是 从 猪 小 肠 提 取 物 中 分 离 出 来 由 33 个 氨 基 酸 组 成 的 多 肽, 在 脑 组 织 和 胃 肠 道 双 重 分 布, 具 有 刺 激 胰 酶 分 泌 引 起 胆 囊 收 缩 促 进 某 些 激 素 释 放 等 多 种 生 物 作 用 近 年 来 发 现 CCK 在 摄 食 控 制 中 有 重 要 作 用, 其 分 泌 状 态 受 食 物 成 分 的 影 响, 脂 肪 和 蛋 白 质 是 刺 激 CCK 释 放 的 最 有 效 物 质 [1] 有 研 究 表 明 大 鼠 进 餐 后 下 丘 脑 和 血 浆 CCK-8 水 平 立 即 升 高 2 6 倍, 并 在 15min 内 回 到 基 础 水 平 [2] 目 前 公 认 外 源 性 CCK-8 在 中 枢 和 外 周 都 有 抑 制 动 物 摄 食 的 作 用 [3], 但 内 源 性 CCK-8 能 否 增 高 到 足 以 抑 制 摄 食 的 程 度 仍 有 疑 问 [4] 已 有 临 床 研 究 表 明 在 老 年 性 厌 食 和 神 经 性 厌 食 患 者 的 血 浆 和 脑 脊 液 中 CCK-8 浓 度 均 明 显 增 高 [5][6], 为 探 讨 CCK-8 在 小 儿 厌 食 症 发 病 中 的 可 能 作 用 和 意 义, 我 们 检 测 了 厌 食 模 型 下 丘 脑 和 血 浆 中 CCK-8 的 浓 度, 并 观 察 了 运 脾 复 方 对 CCK-8 的 调 节 作 用 1. 材 料 与 方 法 1.1 实 验 动 物 SD 大 鼠 48 只 ( 由 第 四 军 医 大 学 实 验 动 物 中 心 提 供 ), 日 龄 天, 体 重 60±10g, 雌 雄 各 半 1.2 饲 料 及 药 物 饲 料 常 规 鼠 饲 料 ( 由 第 四 军 医 大 学 实 验 动 物 中 心 提 供 ), 喂 特 制 饲 料 用 奶 粉 鸡 蛋 鱼 松 豆 粉 玉 米 粉 等 市 售 食 品 按 一 定 比 例 配 制 [7] 药 物 及 试 剂 儿 宝 颗 粒 流 浸 膏 ( 简 称 儿 宝 颗 粒 ) 由 南 京 中 医 药 大 学 植 物 药 深 加 工 中 心 提 供 ; 抑 肽 酶 : 丽 珠 集 团 丽 宝 生 物 化 学 制 药 有 限 公 司 出 品,500, 000KIU/ 支, 使 用 前 用 生 理 盐 水 稀 释 为 500KIU/20μl;CCK 8 放 免 药 盒 : 美 国 INCSTAR 公 司 产 品 ( 用 于 脑 组 织 ), 第 二 军 医 大 学 神 经 生 物 教 研 室 提 供 ( 用 于 血 浆 ) 1.3 造 模 用 特 制 饲 料 喂 养 法 造 模 将 实 验 动 物 随 机 分 为 对 照 组 模 型 组 小 剂 量 组 和 大 剂 量 组 四 组, 空 白 对 照 组 用 常 规 鼠 饲 料 喂 养, 其 他 三 组 32

34 用 特 制 饲 料 喂 养 所 有 动 物 均 单 笼 饲 养, 自 由 进 食 水 共 饲 养 四 周, 实 验 过 程 中 每 日 记 录 动 物 进 食 量, 造 模 一 周 后, 以 模 型 动 物 摄 食 量 下 降 40-50% 为 模 成 标 志.2 造 模 第 8 天 开 始 灌 胃, 对 照 组 和 模 型 组 灌 生 理 盐 水, 小 剂 量 组 灌 等 效 量 的 儿 宝 颗 粒 (2.7g/100g), 大 剂 量 组 灌 2 倍 等 效 量 的 儿 宝 颗 粒 (5.4g/100g), 第 28 日 晚 8 时 起 禁 食 第 29 日 处 死 1.4 标 本 制 备 血 浆 : 用 1% 肝 素 (10μl/ml 血 样 ) 处 理 试 管, 干 燥 备 用 采 血 前 每 管 加 抑 肽 酶 20μl/ml 血 样, 眼 眶 取 血 后 注 入 肝 素 管 内 充 分 摇 匀 并 立 即 置 4 冰 箱,3hr 内 4000rpm 低 温 离 心 10min, 分 离 血 浆, 于 -70 保 存 待 测 组 织 : 取 血 后 将 大 鼠 迅 速 断 头, 立 即 取 出 全 脑, 分 别 入 沸 生 理 盐 水 中 煮 5min, 分 离 下 丘 脑 ( 沿 正 中 隆 起 四 周 切 下, 高 度 至 前 联 合 水 平 ), 分 别 用 分 析 天 平 称 重 后 置 玻 璃 匀 浆 管 内, 加 入 1N NAC1ml, 充 分 匀 浆 后 倒 入 塑 料 试 管 内, 于 室 温 下 放 置 100min, 加 入 1N NaOH1ml,4000rpm 低 温 离 心 10min, 取 上 清 液 于 -70 保 存 待 测 1.5 放 免 测 定 按 放 免 药 盒 说 明 加 样, 用 美 国 产 16 探 头 Υ 记 数 仪 自 动 绘 制 标 准 曲 线 并 打 印 结 果 2. 结 果 实 验 第 1 周 四 组 动 物 摄 食 量 无 明 显 差 异, 第 7 日 起 模 型 动 物 摄 食 量 显 著 低 于 正 常 组, 持 续 3 周 以 上 (p<0.05), 大 小 剂 量 治 疗 组 摄 食 量 自 第 21 日 起 与 正 常 组 无 明 显 差 异 ( 见 表 1) 表 1 儿 宝 颗 粒 剂 对 幼 龄 厌 食 大 鼠 摄 食 量 的 影 响 ( х±s)g 组 别 n 第 1 日 第 7 日 第 14 日 第 21 日 第 27 日 对 照 组 ± ± ± ± ±3.26 模 型 组 ± ±1.07 * 11.72±2.06 ** 13.47±1.99 ** 14.32±1.85 ** 小 剂 量 组 ± ±2.04 * 13.30±3.22 * 15.66± ±3.07 大 剂 量 组 ± ±2.45 * 13.51±3.17 * 15.83± ±3.76 * 与 对 照 组 比,P<0.05 ** p<

35 模 型 组 下 丘 脑 和 血 浆 CCK 8 浓 度 均 明 显 增 高 (p<0.05,p<0.05), 用 小 剂 量 和 大 剂 量 药 物 治 疗 的 模 型 动 物 下 丘 脑 和 血 浆 CCK-8 浓 度 与 正 常 动 物 无 明 显 差 异 (p>0.05), 大 小 剂 量 组 之 间 无 显 著 性 差 异 ( 见 表 2) 表 2 儿 宝 颗 粒 对 幼 龄 厌 食 大 鼠 CCK 8 含 量 的 影 响 ( х±s) 组 别 下 丘 脑 血 浆 n pmol/g pg/ml 对 照 组 ± ±95.09 模 型 组 ±31.79 * ± ** 小 剂 量 组 ± ±75.63 大 剂 量 组 ± ±66.36 注 : 与 空 白 对 照 组 比, * P<0.05 ** P<0.001 与 模 型 对 照 组 比, p<0.05 p< 讨 论 本 实 验 结 果 显 示 幼 龄 厌 食 大 鼠 模 型 下 丘 脑 和 血 浆 中 CCK-8 浓 度 均 显 著 高 于 正 常 动 物, 同 时 摄 食 量 明 显 下 降, 并 持 续 3 周 以 上, 表 明 用 高 脂 高 蛋 白 饲 料 喂 养 幼 龄 大 鼠, 可 导 致 动 物 内 源 性 CCK-8 的 基 础 浓 度 异 常 增 高, 从 而 长 期 抑 制 动 物 的 摄 食 行 为, 使 摄 食 量 显 著 降 低 这 一 结 果 提 示 小 儿 厌 食 症 的 发 生 发 展 可 能 与 饮 食 过 于 肥 甘 厚 腻 而 导 致 CCK-8 分 泌 增 多 有 关 用 儿 宝 颗 粒 剂 治 疗 的 模 型 动 物, 摄 食 量 显 著 高 于 模 型 组, 下 丘 脑 和 血 浆 中 CCK-8 浓 度 明 显 低 于 模 型 组, 与 正 常 动 物 无 显 著 性 差 异 表 明 儿 宝 颗 粒 剂 对 模 型 动 物 中 枢 和 外 周 的 CCK-8 分 泌 均 有 抑 制 作 用 目 前 认 为 CCK-8 对 摄 食 的 控 制 有 两 种 作 用 方 式 [8], 一 是 脑 组 织 分 泌 的 CCK-8 的 中 枢 作 用, 二 是 腹 迷 走 神 经 传 入 纤 维 介 导 的 外 周 CCK-8 的 作 用 由 此 推 测 儿 宝 颗 粒 剂 可 能 同 时 通 过 这 两 个 途 径 发 挥 了 促 进 动 物 摄 食 的 作 用 外 周 CCK-8 不 能 透 过 血 脑 屏 障, 所 以 本 实 验 中 模 型 动 物 脑 内 34

36 CCK-8 含 量 的 变 化, 是 特 制 饲 料 和 中 药 复 方 直 接 影 响 脑 组 织 CCK-8 分 泌 的 结 果 由 于 脑 内 肽 类 物 质 的 微 量 变 化 即 可 影 响 疾 病 的 发 生 发 展, 因 而 具 有 潜 在 的 治 疗 作 用 [9], 但 中 枢 给 药 在 应 用 上 有 很 大 限 制 本 研 究 提 示 口 服 中 药 能 通 过 改 变 脑 内 肽 类 物 质 的 含 量 达 到 治 疗 目 的, 这 在 肽 类 的 临 床 应 用 中 具 有 重 要 的 意 义 参 考 文 献 1 Liddle R. Cholecystokinin bioactivity in human plasma: Molecular forms, responses tofeeding, and relationship to galladder contraction.j.clin.invest.1985,75: Liddle R.A. Bioassay of plasma cholecystokinin in rats: effects of food trypsin inhibitor,and alcohol.gastroentierology.1984,87:542 3 H Fink A, Rex M, Voits. et al. Major biological actions of cck-8: a critical evaluation of research findings. Brain Res.1998,123: Baldwin BA, Parrott RF, Ebenezer IS.et al. Food for thought: a critique on the hypothesis that endogenous cholecystokinin acts as a physiological satiety factor.prog-neurobiol.1998,55: Brambilla F,Brunetta M,Peirlne A,et al.t-lymphecyte cholocystokinin-8 and beta-endorphin concentrations in eating disorders: Ⅰ.Psychiatry-Res.1995;59: Esther Lee Marcus,M.D,Elliot M,et al. Refusal to Eat in the Elderly. Nutrition Reviews,1998; : 汪 受 传, 张 月 萍, 陶 勇, 等. 特 制 饲 料 喂 养 幼 龄 大 鼠 建 立 小 儿 厌 食 症 模 型. 南 京 中 医 药 大 学 学 报,1999;15(3):140 8 Reidelberger RD. Cholecystokinin and control of food intake.j-nutr.1994,124:1327s-1333s 9 周 吕 主 编. 胃 肠 生 理 学 神 经 系 统 与 胃 肠 肽 的 关 系. 第 1 版. 北 京 : 科 学 出 版 社,1997:162 页 35

37 二 运 脾 法 对 下 丘 脑 垂 体 血 浆 和 胃 窦 部 β-ep 的 调 节 β- 内 啡 肽 是 一 种 内 源 性 阿 片 肽, 参 与 摄 食 的 生 理 调 控, 具 有 强 力 促 食 欲 作 用 [1], 主 要 促 进 蛋 白 和 脂 肪 的 摄 入, 在 病 理 性 摄 食 减 少 中 也 可 能 起 重 要 作 用 [2][3] 我 们 在 运 脾 中 药 治 疗 小 儿 厌 食 症 取 得 可 靠 疗 效 [4], 并 成 功 建 立 小 儿 厌 食 症 大 鼠 模 型 的 基 础 上 [5], 观 察 了 运 脾 复 方 儿 宝 颗 粒 对 该 模 型 下 丘 脑 垂 体 血 浆 和 胃 窦 部 粘 膜 β- 内 啡 肽 的 影 响, 36

38 以 探 讨 β- 内 啡 肽 在 小 儿 厌 食 症 发 病 中 的 意 义 及 运 脾 中 药 的 作 用 机 理 1. 材 料 和 方 法 同 上 一 实 验, 此 略 β- 内 啡 肽 放 免 试 剂 盒 由 第 二 军 医 大 学 神 经 生 物 教 研 室 提 供 2. 结 果 模 型 动 物 下 丘 脑 和 垂 体 的 β- 内 啡 肽 浓 度 无 明 显 变 化, 胃 窦 部 和 血 浆 中 β- 内 啡 肽 浓 度 均 明 显 低 于 对 照 组 (P<0.05) 小 剂 量 和 大 剂 量 运 脾 中 药 对 模 型 大 鼠 各 部 位 β- 内 啡 肽 有 不 同 程 度 的 调 节 见 表 2 表 2 各 组 大 鼠 下 丘 脑 垂 体 胃 窦 和 血 浆 β- 内 啡 肽 的 含 量 ( х±s) 组 别 n 下 丘 脑 (pg/mg) 垂 体 (ng/mg) 胃 窦 (ng/mg) 血 浆 (pg/ml) 对 照 组 ± ± ± ±4.86 模 型 组 ± ± ±0.60 ** 6.26±1.73 * 小 剂 量 组 ± ±0.78 ** 1.38±0.32 ** 8.82±2.86 大 剂 量 组 ±8.74 ** 2.11±0.69 * 16.49±4.07 ** 8.43±1.59 注 :* 与 对 照 组 比 较 P<0.05, ** P<0.001; 与 模 型 组 比 较 P<0.05, P< 讨 论 研 究 表 明 将 微 量 β- 内 啡 肽 注 入 脑 室, 能 使 已 饱 食 的 大 鼠 继 续 进 食, 提 示 中 枢 β- 内 啡 肽 浓 度 增 加 可 促 进 动 物 摄 食 [6] 本 研 究 结 果 显 示, 模 型 组 大 鼠 下 丘 脑 和 垂 体 β- 内 啡 肽 水 平 无 明 显 变 化, 运 脾 中 药 治 疗 的 两 组 大 鼠 下 丘 脑 和 垂 体 β- 内 啡 肽 水 平 均 显 著 升 高, 提 示 运 脾 中 药 能 够 通 过 促 进 中 枢 β- 内 啡 肽 的 分 泌, 使 动 物 摄 食 量 增 加 大 鼠 夜 间 自 发 摄 食 或 运 动 使 摄 食 增 加 时, 均 可 见 到 血 中 β- 内 啡 肽 浓 度 升 高, 提 示 外 周 β- 内 啡 肽 与 摄 食 活 动 也 有 关 [7] 本 研 究 显 示 模 型 动 物 胃 窦 部 和 血 浆 中 β- 内 啡 肽 水 平 明 显 降 低, 用 药 组 增 高, 表 明 模 型 大 鼠 外 周 β- 内 啡 肽 分 泌 减 少 可 能 是 其 摄 食 量 降 低 的 重 要 原 因, 运 脾 中 药 的 促 食 欲 作 用 与 促 进 胃 窦 部 β- 内 啡 肽 分 泌, 并 使 血 浆 β- 内 啡 肽 含 量 增 加 有 关 37

39 本 研 究 还 显 示 运 脾 中 药 对 β- 内 啡 肽 的 调 节 方 式 与 剂 量 有 关 大 剂 量 可 促 进 下 丘 脑 垂 体 和 胃 窦 部 β- 内 啡 肽 分 泌, 增 加 血 浆 中 β- 内 啡 肽 浓 度 小 剂 量 用 药 不 影 响 下 丘 脑 和 胃 窦 部 的 β- 内 啡 肽 分 泌, 仅 使 垂 体 和 血 浆 中 的 β- 内 啡 肽 浓 度 增 高 综 上 所 述, 本 研 究 结 果 表 明 高 蛋 白 高 脂 饲 料 喂 养 幼 龄 大 鼠 造 成 的 厌 食 模 型, 外 周 β- 内 啡 肽 含 量 显 著 减 少, 运 脾 中 药 复 方 治 疗 可 以 明 显 促 进 模 型 动 物 中 枢 和 外 周 β- 内 啡 肽 的 分 泌 这 一 结 果 提 示 β- 内 啡 肽 在 小 儿 厌 食 症 发 病 中 可 能 起 重 要 的 作 用, 促 进 β- 内 啡 肽 分 泌 是 运 脾 复 方 发 挥 临 床 疗 效 的 作 用 机 理 之 一 参 考 文 献 1 Yim,G.K.W. Opioids, feeding, and anorexias. Fed.Froc.1984,43: Morley JE,Levine AS.The central control of appetite.the Lancet,1983; 19:398 3 Martinez M, Hernanz A, Gomez Cerezo-J, et al. Alterations in plasma and cerebrospinal fluid levels of neuropeptides in idiopathic senile anorexia.regul-pept.1993 ;49(2): 汪 受 传, 尤 汝 娣, 郁 晓 维, 等. 运 脾 方 药 治 疗 小 儿 厌 食 症 的 临 床 及 实 验 研 究. 中 西 医 结 合 杂 志,1991;11(2):75 5 汪 受 传, 张 月 萍, 陶 勇, 等. 特 制 饲 料 喂 养 幼 龄 大 鼠 建 立 小 儿 厌 食 症 模 型. 南 京 中 医 药 大 学 学 报,1999;15(3):140 6 Tseng LF. Acute and chronic administration of β -Endorphin and naltrexone on food and water intake in rats. Fed.Proc.1980;39:606 7 Wallace,M.Naloxone,adrenalectomy,and steroid replacement:evidence against a role for circulating β -endorphin in food intake.endocrinology,1981;210:21 38

40 三 运 脾 复 方 对 胃 窦 部 和 血 浆 胃 泌 素 的 调 节 胃 泌 素 主 要 分 布 于 胃 肠 道, 在 中 枢 神 经 系 统 也 发 现 有 胃 泌 素 神 经 细 胞 和 神 经 纤 维 用 放 射 免 疫 法 测 定 胃 肠 道 粘 膜 的 胃 泌 素 含 量, 发 现 80% 胃 泌 素 存 在 于 胃 粘 膜, 并 以 胃 窦 部 粘 膜 的 胃 泌 素 活 性 最 高 胃 泌 素 的 生 物 作 用 较 广 泛, 主 要 作 用 是 刺 激 胃 酸 分 泌 继 1982 年 金 敬 善 [1] 首 开 脾 虚 证 与 胃 泌 素 关 系 研 究 的 先 河 之 后, 大 量 文 献 报 道 了 脾 虚 病 39

41 人 或 脾 虚 动 物 模 型 血 清 和 组 织 中 胃 泌 素 的 含 量 变 化 [2][3][4], 对 于 厌 食 症 脾 运 失 健 证 与 胃 泌 素 关 系 的 研 究 很 少, 国 外 有 文 献 报 道 神 经 性 厌 食 患 者 血 中 胃 泌 素 浓 度 显 著 降 低 [5] 由 于 胃 泌 素 是 食 物 入 胃 后 刺 激 胃 粘 膜 释 放 的 主 要 激 素 之 一, 与 脾 胃 功 能 紊 乱 有 一 定 关 系, 所 以 我 们 检 测 了 厌 食 模 型 胃 窦 部 下 丘 脑 和 血 清 中 胃 泌 素 的 浓 度, 以 探 讨 其 在 小 儿 厌 食 症 发 病 中 的 作 用 和 运 脾 法 的 作 用 机 理 1. 材 料 与 方 法 胃 泌 素 放 免 药 盒 为 中 国 原 子 能 科 学 研 究 院 产 品 其 它 同 上 2. 结 果 模 型 组 胃 窦 部 胃 泌 素 含 量 明 显 低 于 对 照 组 (p<0.05), 血 清 胃 泌 素 无 明 显 变 化 ; 小 剂 量 大 剂 量 治 疗 组 胃 窦 部 胃 泌 素 含 量 回 升, 与 正 常 组 无 显 著 性 差 异 (p>0.05), 见 表 1 表 1 儿 宝 颗 粒 对 胃 窦 和 血 浆 胃 泌 素 含 量 的 影 响 ( х±s) 组 别 n 胃 窦 pg./mg 血 清 pg./ml 下 丘 脑 对 照 组 ± ± 模 型 组 ±13.28 * ± 小 剂 量 组 ± ± 大 剂 量 组 ± ± 注 : 与 对 照 组 比, * P<0.05; 与 模 型 组 比, P< 讨 论 胃 泌 素 对 消 化 道 的 运 动 和 分 泌 有 重 要 的 调 节 作 用 近 年 来 胃 泌 素 与 脾 虚 失 运 的 关 系 得 到 了 充 分 的 研 究, 认 为 血 清 及 组 织 中 胃 泌 素 水 平 [6] 紊 乱 是 脾 胃 运 化 功 能 障 碍 的 重 要 因 素, 但 胃 泌 素 与 食 欲 改 变 有 无 关 系 尚 未 见 有 专 门 研 究. 本 研 究 结 果 显 示 模 型 动 物 摄 食 量 显 著 减 少, 胃 窦 部 胃 泌 素 浓 度 显 著 降 低 ; 用 儿 宝 颗 粒 治 疗 的 大 小 剂 量 组 动 物 摄 食 量 回 升, 胃 窦 部 胃 泌 素 浓 度 也 恢 复 正 常 因 此 推 测 该 模 型 胃 窦 部 胃 泌 素 分 泌 减 少 可 能 与 摄 食 量 减 少 有 直 接 或 间 接 关 系 ; 运 脾 复 方 促 进 胃 窦 部 胃 泌 素 分 泌 可 能 是 促 进 动 物 摄 食 的 作 用 途 径 之 一 40

42 实 验 结 果 显 示 各 组 间 血 清 胃 泌 素 水 平 无 显 著 差 异, 说 明 造 模 因 素 和 儿 宝 颗 粒 对 胃 泌 素 的 内 分 泌 途 径 无 明 显 影 响, 但 影 响 了 胃 泌 素 的 旁 分 泌 途 径 目 前 对 胃 肠 激 素 内 分 泌 作 用 研 究 较 多, 对 其 他 途 径 的 作 用 了 解 较 少, 胃 泌 素 旁 分 泌 的 生 理 意 义 尚 不 清 楚 [7] 本 研 究 结 果 表 明 胃 泌 素 的 旁 分 泌 机 制 参 与 动 物 摄 食 行 为 的 调 节 下 丘 脑 胃 泌 素 浓 度 未 测 出 本 研 究 结 果 提 示 胃 泌 素 分 泌 状 态 与 小 儿 厌 食 症 的 发 生 发 展 也 有 一 定 关 系, 促 进 胃 泌 素 分 泌 可 能 是 运 脾 复 方 的 临 床 疗 效 机 理 之 一 参 考 文 献 1. 金 敬 善, 王 广 才, 张 绳 祖, 等. 血 清 中 胃 泌 素 水 平 与 脾 虚 证 的 关 系. 中 西 医 结 合 杂 志,1982;2(1):25 2. 涂 福 音, 曾 志 德, 吴 耀 南, 等. 慢 性 萎 缩 性 胃 炎 103 例 中 医 证 型 与 胃 泌 素 尿 胃 蛋 白 酶 关 系 探 讨. 福 建 中 医 药,1990;21(2):21 3. 马 建 伟, 王 旭. 脾 虚 证 与 胃 肠 激 素 关 系 的 研 究 概 况. 中 国 中 医 基 础 医 学 杂 志,1996;2(4):61 4. 王 秀 琴. 大 鼠 实 验 性 脾 虚 证 胃 粘 膜 内 分 泌 细 胞 变 化 的 免 疫 组 织 化 学 研 究. 中 国 组 织 化 学 与 细 胞 化 学 杂 志,1992;1(1):49 5.Uhe AM,Szmukler GI, Collier GR,et al. Potential regulators of feeding behavior in anorexia nervosa.am-j-clin-nutr.1992;55(1):28 6. 聂 克, 王 建 华, 王 汝 俊, 等. 胃 泌 素 与 脾 虚 证 的 研 究 进 展. 广 州 中 医 药 大 学 学 报,1999;16(1): 周 吕 主 编. 胃 肠 生 理 学 胃 肠 激 素. 第 1 版. 北 京 : 科 学 出 版 社,1991:101 页 41

43 Ⅵ 运 脾 复 方 对 模 型 动 物 下 丘 脑 食 欲 中 枢 神 经 元 单 位 放 电 的 影 响 厌 食 模 型 研 究 表 明 特 制 饲 料 喂 养 幼 龄 大 鼠 可 导 致 摄 食 量 下 降, 同 时 用 运 脾 复 方 灌 胃 可 抑 制 特 制 饲 料 喂 养 引 起 的 摄 食 量 下 降 本 研 究 在 常 规 饲 料 喂 养 的 正 常 动 物 特 制 饲 料 喂 养 的 模 型 动 物 和 药 物 治 疗 的 模 型 动 物 三 种 不 同 摄 食 状 态 的 动 物 身 上, 用 细 胞 外 记 录 方 法, 记 录 LH 和 VMH 的 神 经 元 单 位 放 电, 试 分 析 不 同 摄 食 状 态 的 动 物 LH 和 VMH 神 经 元 电 活 动 的 差 异, 以 及 运 脾 复 方 对 厌 食 大 鼠 LH VMH 神 经 元 自 发 放 电 的 影 响 一 运 脾 复 方 对 厌 食 大 鼠 食 欲 中 枢 神 经 元 自 发 放 电 的 影 响 1. 材 料 和 方 法 1.1 造 模 和 用 药 采 用 特 制 饲 料 喂 养 法 造 模, 以 造 模 大 鼠 摄 食 量 下 降 40%-60% 为 模 成 标 准 造 模 同 时 开 始 灌 胃 实 验 用 刚 断 奶 的 雄 性 SD 大 鼠 45 只, 体 重 80±10g( 本 校 实 验 动 物 中 心 提 供 ), 随 机 分 为 对 照 组 模 型 组 和 运 脾 组, 每 组 15 只 对 照 组 喂 常 规 鼠 饲 料, 用 等 容 积 自 来 水 灌 胃 ; 模 型 组 喂 自 制 的 特 制 饲 料, 用 等 容 积 自 来 水 灌 胃 ; 运 脾 组 喂 特 制 饲 料, 用 运 脾 复 方 儿 宝 颗 粒 浸 膏 灌 胃 (3.76g/kg, 为 2 倍 临 床 等 效 量 南 京 中 医 药 大 学 植 物 药 深 加 工 中 心 提 供, 主 要 成 分 为 苍 术 陈 皮 茯 苓 炙 鸡 金 等 ) 所 有 动 物 分 笼 饲 养, 自 由 进 食 水 1.2 引 导 LH 和 VMH 神 经 元 放 电 实 验 第 22 天 引 导 神 经 元 放 电, 于 21:00 0:00 时 记 录 神 经 元 电 活 动 手 术 时 动 物 体 重 g, 术 前 禁 食 8h, 在 10% 氨 基 甲 酸 乙 酯 和 1% 氯 醛 糖 混 合 液 (10ml/kg 体 重 ip) 麻 醉 下 作 气 管 插 管, 俯 卧 位 固 定 在 脑 立 体 定 位 仪 上 ( 日 本 成 茂 产 品 ), 根 据 Paxinos 和 Watson 大 鼠 脑 图 谱 定 位 坐 标, 在 颅 骨 表 面 钻 孔, 并 除 去 硬 脑 膜 VMH 定 位 坐 标 为 Bregma-2.56mm, 中 线 旁 开 0.5mm, 深 8mm;LH 为 Bregma-2.56mm, 中 线 旁 开 2mm, 深 7mm( 脑 表 面 下 ), 如 图 1 所 示 用 微 电 极 操 纵 器 将 玻 璃 微 电 极 插 入 VMH 和 LH 引 导 神 经 元 42

44 放 电 电 极 尖 端 直 径 为 μm, 用 含 2% 滂 胺 天 蓝 的 0.5mol/L 醋 酸 钠 溶 液 充 灌, 电 极 电 阻 为 10-30MΩ 微 电 极 引 导 的 信 号 经 放 大 器 ( 日 本 光 电 产 品 ) 放 大 后 显 示 于 VC-10( 日 本 光 电 产 品 ) 示 波 器 上, 并 输 入 计 算 机 自 动 绘 制 成 频 率 直 方 图, 并 用 X-Y 记 录 仪 记 录 原 始 波 形 实 验 结 束 后 电 泳 滂 胺 天 蓝 标 定, 经 心 脏 灌 流 后 做 脑 组 织 切 片, 检 查 微 电 极 尖 端 位 置, 定 位 不 准 确 的 结 果 舍 去 实 验 结 果 以 х±s 表 示 2 实 验 结 果 2.1 运 脾 复 方 对 模 型 大 鼠 摄 食 量 ( 单 位 :g) 的 影 响 实 验 过 程 中 模 型 组 摄 食 量 显 著 低 于 对 照 组, 运 脾 组 摄 食 量 明 显 高 于 模 型 组, 表 明 造 模 成 功, 运 脾 复 方 能 有 效 治 疗 特 制 饲 料 引 起 的 厌 食 症 状 结 果 见 表 1 表 1 三 组 大 鼠 实 验 过 程 中 摄 食 量 的 变 化 (g, х±s) 组 别 例 数 第 1d 第 7d 第 14d 第 21d 对 照 组 ± ± ± ±3.2 模 型 组 ± ± ± ±2.5 运 脾 组 ± ± ± ±2.7 注 : 与 对 照 组 比,p<0.05; 与 模 型 组 比,P< VMH 和 LH 神 经 元 的 单 位 放 电 在 三 组 动 物 的 VMH 和 LH 内 均 可 记 录 到 神 经 元 的 自 发 放 电, 节 律 不 规 则 正 常 动 物 LH 神 经 元 的 单 位 放 电 频 率 为 5~10 次 / 秒,VMH 的 单 位 放 电 频 率 为 2~5 次 / 秒, 无 明 显 的 增 加 或 减 少 现 象, 可 持 续 60 分 钟 以 上 图 2 示 神 经 元 的 单 位 放 电 原 始 波 形 2.3 运 脾 复 方 对 模 型 大 鼠 VMH 和 LH 神 经 元 单 位 放 电 频 率 的 影 响 引 导 出 神 经 元 单 位 放 电 后 稳 定 5 分 钟, 然 后 连 续 记 录 4 分 钟 的 自 发 放 电 频 率, 计 算 4 分 钟 内 的 平 均 放 电 频 率 在 13 只 正 常 大 鼠 的 LH 内 记 录 了 35 个 神 经 元 自 发 放 电, 平 均 放 电 频 率 为 5.4±1.9; 在 15 只 正 常 大 鼠 的 VMH 内 共 记 录 了 35 个 神 经 元 的 自 发 放 电, 平 均 放 电 频 率 为 3.2±1.1; 在 11 只 模 型 组 大 鼠 的 LH 和 VMH 内 分 别 记 录 了 37 个 43

45 和 32 个 神 经 元 自 发 放 电, 平 均 放 电 频 率 为 1.3±0.5 和 2.5±0.8; 在 10 只 用 药 组 大 鼠 的 LH 和 VMH 内 分 别 记 录 了 36 个 和 38 个 神 经 元 自 发 放 电, 平 均 放 电 频 率 分 别 为 3.8±1.2 和 1.5±0.4 其 中 模 型 组 LH 的 放 电 频 率 显 著 低 于 正 常 组 (p<0.05); 用 药 组 LH 较 模 型 组 升 高, 有 显 著 性 差 异 (p<0.05); 用 药 组 VMH 的 放 电 频 率 减 少, 与 正 常 组 比 较 有 显 著 性 差 异 (p<0.05), 如 表 2 示 各 组 典 型 的 神 经 元 放 电 频 率 直 方 图 见 图 3 各 组 LH 和 VMH 之 间 放 电 频 率 比 较 见 图 4 表 2 三 组 大 鼠 VMH 和 LH 放 电 频 率 ( х±s 单 位 :Hz) 组 别 LH (n) VMH(n) LH - χ/vmh - χ 正 常 组 5.4±1.9(35) 3.2±1.1(35) 1.69 模 型 组 1.3±0.5(37) 2.5±0.8(32) 0.25 用 药 组 3.8±1.2(36) 1.5±0.4(38) 2.53 注 : 与 正 常 组 比 p<0.05; 与 模 型 组 比 P< 讨 论 Hetherington 和 Ranson 于 1940 年 报 告, 毁 损 VMH 使 大 鼠 由 于 改 变 了 调 节 代 谢 的 神 经 内 分 泌 机 制 而 过 量 进 食 引 起 肥 胖 [1] ;10 年 后 Anand 和 Brobeck 报 道, 损 伤 LH 引 起 大 鼠 厌 食 拒 食 [2] 从 此 提 出 了 关 于 调 控 摄 食 行 为 的 双 中 枢 假 说 :VMH 抑 制 摄 食,LH 促 进 摄 食 应 用 埋 藏 微 电 极 刺 激 LH 可 使 已 饱 食 的 动 物 继 续 进 食 ; 刺 激 VMH 却 使 正 在 进 食 的 动 物 停 止 进 食 [3], 这 一 结 果 对 双 中 枢 假 说 是 强 有 力 的 支 持 本 研 究 结 果 显 示 模 型 大 鼠 LH 神 经 元 放 电 频 率 显 著 减 少, 用 药 组 大 鼠 LH 神 经 元 放 电 频 率 明 显 增 高 提 示 特 制 饲 料 喂 养 幼 龄 大 鼠 抑 制 了 大 鼠 摄 食 中 枢 神 经 元 的 电 活 动, 使 动 物 缺 乏 饥 饿 感 而 导 致 摄 食 量 减 少 ; 运 脾 复 方 能 刺 激 LH 放 电, 从 而 增 加 模 型 动 物 的 摄 食 量 电 生 理 学 实 验 表 明, 动 物 饥 饿 时 LH 神 经 元 发 放 频 率 升 高,VMH 发 放 减 少, 饱 食 后 则 相 反 [4] 用 微 电 泳 的 方 法 将 葡 萄 糖 导 入 VMH 和 图 1 脑 定 位 图 44

46 图 2 原 始 放 电 波 形 45

47 图 3 典 型 放 电 图 46

48 LH, 前 者 细 胞 放 电 增 加, 后 者 细 胞 放 电 减 少 [5] 这 些 研 究 表 明 LH 和 VMH 有 相 互 抑 制 的 作 用 本 实 验 结 果 显 示 正 常 大 鼠 饥 饿 状 态 下 LH 放 电 频 率 高 于 VMH; 模 型 大 鼠 LH 放 电 受 到 抑 制, 低 于 无 明 显 变 化 47

49 的 VMH 放 电 频 率 ; 用 药 组 大 鼠 LH 放 电 增 加,VMH 放 电 减 少, 使 LH 放 电 频 率 明 显 高 于 VMH 由 表 2 可 看 出, 模 型 组 LH 与 VMH 的 比 值 低 于 正 常 组, 用 药 组 二 者 比 值 高 于 正 常 组, 提 示 LH 和 VMH 神 经 元 电 活 动 的 消 长 影 响 大 鼠 的 长 期 摄 食 行 为 Control Model Yunpi Discharges(Hz) 图 1 各 组 大 鼠 LH 与 VMH 放 电 频 率 比 较 VMH LH 以 往 关 于 运 脾 复 方 治 疗 小 儿 厌 食 症 的 药 效 学 研 究 表 明, 运 脾 复 方 可 促 进 大 鼠 消 化 液 分 泌, 增 强 小 鼠 肠 蠕 动 功 能, 促 进 兔 离 体 肠 管 对 葡 萄 糖 氨 基 酸 的 吸 收, 并 能 提 高 动 物 耐 疲 劳 耐 缺 氧 能 力, 提 高 巨 噬 细 胞 吞 噬 率 及 血 清 补 体 C 3 含 量 [6][7] 本 研 究 初 步 表 明 运 脾 复 方 可 以 通 过 调 节 摄 食 中 枢 和 饱 中 枢 神 经 元 的 电 活 动 促 进 摄 食, 达 到 治 疗 厌 食 的 目 的 关 于 特 制 饲 料 和 运 脾 复 方 影 响 中 枢 神 经 元 放 电 的 生 化 基 础, 估 计 可 能 与 某 些 脑 肠 肽 的 分 泌 有 关 [8][9], 尚 待 进 一 步 研 究 参 考 文 献 1 Hetherington A.W, Ranson, S.W. Hypothalamic lesions and adiposity in the rat.anat.rec,1940;78:149 2 Anand B.K, Brobeck J.R. Hypothalamic control of food intake in rats and cats. 48

50 Yale J.Biol.Med,1951;24:123 3 Ganong W.F. Review of medical physiology. California : Lange Medical Publications,1983:185, 4 John E.M, Allen S.L. The central control of appetite. The lancet,1983;Ⅰ:389 5 Oomura Y, Ono T, Ooyama, H, et al. Glucose and osmosensitive neurones of the rat hypothalamus.nature,1969;222:282 6 汪 受 传, 尤 汝 娣, 郁 晓 维, 等. 运 脾 方 药 治 疗 小 儿 厌 食 症 的 临 床 及 实 验 研 究. 中 国 中 西 医 结 合 杂 志,1991;11(2):75 7 刘 权, 韩 杨, 李 春 子. 小 儿 速 效 增 食 灵 药 理 实 验 研 究. 吉 林 中 医 药,1996;(2):36 8 Heidrun F,Andre R,Mechthild V,et al.major biological actions of CCK a critical evaluation of research findings.brain Res,1998;123:77 9 张 月 萍, 汪 受 传, 杜 永 平, 等. 儿 宝 颗 粒 对 幼 龄 厌 食 大 鼠 模 型 CCK-8 的 调 节 作 用. 南 京 中 医 药 大 学 学 报,2000;16(2):88 49

51 二 刺 激 迷 走 神 经 胃 支 对 厌 食 大 鼠 食 欲 中 枢 神 经 元 放 电 频 率 的 影 响 饱 中 枢 和 饥 饿 中 枢 的 神 经 冲 动 通 过 迷 走 神 经 的 传 出 神 经 纤 维 支 配 着 胃 的 分 泌 和 运 动, 并 接 受 胃 迷 走 神 经 传 入 纤 维 传 递 的 来 自 胃 肠 壁 的 信 息 [1][2] 显 然, 摄 食 的 启 动 和 终 止 与 胃 肠 壁 传 入 食 欲 中 枢 的 信 息 密 切 相 关 我 们 在 上 述 研 究 中 发 现 不 同 摄 食 行 为 的 大 鼠 饱 中 枢 和 饥 饿 中 枢 的 神 经 元 电 活 动 有 差 异, 本 研 究 刺 激 大 鼠 迷 走 神 经 胃 前 支, 观 察 饱 中 枢 和 饥 饿 中 枢 神 经 元 放 电 频 率 的 变 化, 分 析 幼 龄 厌 食 大 鼠 饱 中 枢 和 饥 饿 中 枢 神 经 元 对 胃 迷 走 神 经 传 入 性 冲 动 的 反 应 与 正 常 动 物 有 无 差 异 1. 材 料 与 方 法 30 只 SD 幼 龄 雄 性 大 鼠, 分 组, 喂 养 和 灌 胃 同 前 记 录 神 经 元 放 电 的 时 间 为 20:00~5:00 大 鼠 麻 醉, 气 管 插 管, 颅 骨 表 面 定 位 钻 孔, 微 电 极 引 导 放 电 均 同 前 颅 骨 钻 孔 前, 先 将 大 鼠 仰 卧 位 固 定, 于 剑 突 下 沿 腹 中 线 切 开 1.5cm 切 口, 将 肝 脏 推 至 膈 膜 一 侧, 用 小 弯 镊 挑 出 食 管 与 贲 门 联 接 处, 在 显 微 镜 下 找 到 迷 走 神 经 前 干, 在 贲 门 部 游 离 迷 走 神 经 胃 前 支 约 0.5cm, 挂 于 双 极 金 属 微 电 极 上, 在 电 极 附 近 穿 一 根 线 将 电 极 固 定 在 贲 门 周 围 的 结 缔 组 织 上, 缝 合 腹 壁 将 微 电 极 末 端 留 于 腹 腔 外 一 侧, 通 过 隔 离 器 联 接 在 刺 激 仪 上 引 出 神 经 元 放 电 并 稳 定 5 分 钟 后, 刺 激 迷 走 神 经 胃 支, 观 察 饱 中 枢 和 饥 饿 中 枢 神 经 元 放 电 频 率 的 变 化 刺 激 电 流 强 度 1mA, 刺 激 频 率 20Hz, 波 宽 1ms, 给 予 连 续 刺 激 20 秒 2. 结 果 三 组 动 物 饱 中 枢 和 饥 饿 中 枢 神 经 元 放 电 频 率 对 刺 激 迷 走 神 经 胃 前 支 的 反 应, 见 表 1 表 1 VMH 和 LH 神 经 元 放 电 频 率 对 刺 激 迷 走 神 经 胃 前 支 的 反 应 正 常 对 照 组 模 型 对 照 组 模 型 用 药 组 50

52 VMH LH 由 上 表 看 出, 刺 激 迷 走 神 经 后 正 常 大 鼠 LH 神 经 元 仅 有 5/14 放 电 频 率 增 加,5/14 无 变 化 ; 而 模 型 组 LH 神 经 元 有 17/26 放 电 频 率 增 加, 3/26 无 变 化 ; 用 药 组 LH 有 16/21 神 经 元 放 电 增 加,3/21 减 少,2 /21 无 反 应 VMH 对 刺 激 迷 走 神 经 的 反 应, 正 常 动 物 有 5/9 神 经 元 放 电 增 加,3/9 无 变 化,1/9 减 少 ; 模 型 对 照 组 6/8 神 经 元 放 电 增 加,2/8 减 少 ; 模 型 用 药 组 2/4 增 加,2/4 减 少 刺 激 迷 走 神 经 后 食 欲 中 枢 神 经 元 放 电 变 化 的 形 式 见 图 1-6 图 1-2 显 示 刺 激 后 的 放 电 抑 制 状 态, 图 3-4 显 示 刺 激 后 放 电 增 加, 图 5-6 显 示 反 复 刺 激 后 放 电 增 加 的 现 象 可 以 重 复 3. 讨 论 动 物 饥 饿 时,LH 神 经 元 发 放 频 率 升 高,VMH 发 放 减 少, 饱 食 后 则 相 反, 两 者 相 互 抑 制, 共 同 控 制 摄 食 [3] 本 研 究 显 示 刺 激 迷 走 神 经 时, 正 常 对 照 组 大 鼠 LH 神 经 元 5/14 放 电 增 加,VMH 神 经 元 5/9 放 电 增 加, 提 示 大 鼠 胃 迷 走 神 经 兴 奋 使 VMH 神 经 元 兴 奋 性 开 始 增 强, 为 发 出 终 止 进 食 的 信 号 做 准 备 在 模 型 组 和 用 药 组, 大 鼠 LH 神 经 元 对 刺 激 胃 迷 走 神 经 的 反 应 相 似, 分 别 有 17/26 和 16/21 的 神 经 元 发 放 频 率 增 加 估 计 刺 激 迷 走 神 经 使 模 型 组 和 用 药 组 大 鼠 LH 神 经 元 兴 奋 性 增 强 的 原 因 可 能 与 这 两 组 动 物 LH 神 经 元 放 电 频 率 较 正 常 动 物 低 有 关 但 模 型 组 和 用 药 组 大 鼠 VMH 神 经 元 对 刺 激 迷 走 神 经 的 反 应 不 同, 模 型 组 6/8 神 经 元 发 放 频 率 增 加, 用 药 组 仅 2/4 神 经 元 发 放 增 加 该 结 果 提 示 模 型 动 物 胃 迷 走 神 经 兴 奋 对 食 欲 中 枢 的 影 响 与 正 常 动 物 不 同 刺 激 迷 走 神 经 后 模 型 动 物 LH 神 经 元 发 放 增 加 的 百 分 数 高 于 正 常 动 物, 但 摄 食 量 却 低 于 正 常 动 物, 这 可 能 是 由 于 尽 管 模 型 动 物 51

53 LH 发 放 增 加 的 神 经 元 较 多, 但 其 净 增 值 并 不 高, 增 加 后 的 LH 发 放 频 率 仍 低 于 正 常 动 物, 尚 不 能 引 起 动 物 的 食 欲, 有 待 于 继 续 研 究 运 脾 复 方 治 疗 的 大 鼠 LH 神 经 元 对 刺 激 迷 走 神 经 的 反 应 与 模 型 对 照 组 一 致, 但 VMH 的 反 应 不 同 模 型 对 照 组 大 鼠 VMH 神 经 元 以 兴 奋 性 变 化 为 主, 而 用 药 组 VMH 无 明 显 兴 奋 或 抑 制 表 现 因 此 在 LH 和 VMH 相 互 作 用 下, 用 药 组 摄 食 量 较 模 型 组 高 提 示 运 脾 法 可 以 调 节 LH 和 VMH 对 刺 激 迷 走 神 经 胃 支 关 系 以 增 加 动 物 摄 食 参 考 文 献 1 周 吕 主 编. 胃 肠 生 理 学 胃 肠 运 动 的 神 经 控 制. 第 1 版. 北 京 : 科 学 出 版 社,.1991:290 页 2 李 在 琉, 中 山 沃. 刺 激 饱 中 枢 和 摄 食 中 枢 对 迷 走 神 经 胃 支 传 出 性 活 动 和 胃 运 动 的 影 响. 中 华 消 化 杂 志,1983;3(4):247 3 John E.M, Allen S.L. The central control of appetite. The lancet,1983;Ⅰ:389 52

54 Ⅶ 结 论 和 展 望 一 厌 食 症 模 型 评 价 本 研 究 建 立 在 临 床 观 察 基 础 上 的 造 模 方 法 是 病 因 和 症 状 摸 拟, 不 是 病 理 变 化 的 局 部 摸 拟, 所 以 模 型 产 生 厌 食 的 综 合 病 理 变 化 与 原 型 整 体 相 似, 可 在 该 模 型 动 物 上 进 行 影 响 摄 食 行 为 的 各 个 环 节 各 个 系 统 功 能 状 态 的 观 察, 如 各 种 神 经 肽 的 分 泌, 食 欲 中 枢 神 经 元 电 活 动, 以 及 与 摄 食 调 控 相 关 的 其 他 因 素 由 此 得 出 的 研 究 结 果 中 最 终 可 发 现 小 儿 厌 食 症 的 基 本 病 理 变 化 和 关 键 的 病 理 环 节 二 运 脾 法 中 枢 机 制 研 究 初 步 证 实 了 本 研 究 提 出 的 脑 肠 肽 - 食 欲 中 枢 假 说 运 脾 法 治 疗 小 儿 厌 食 症 的 中 枢 机 制 表 现 在 两 个 方 面 一 是 调 节 中 枢 和 外 周 脑 肠 肽 的 合 成 和 分 泌, 通 过 增 加 脑 内 和 外 周 促 食 欲 肽 类 的 浓 度, 降 低 减 食 欲 肽 类 的 浓 度, 使 模 型 动 物 摄 食 量 增 加 二 是 调 节 下 丘 脑 摄 食 中 枢 和 饱 中 枢 神 经 元 放 电 频 率, 通 过 刺 激 摄 食 中 枢, 抑 制 饱 中 枢, 使 摄 食 中 枢 电 活 动 增 强 而 促 进 动 物 摄 食 本 研 究 显 示 运 脾 法 对 CCK-8 和 β- 内 啡 肽 这 两 种 在 摄 食 调 控 中 相 互 拮 抗 的 物 质 的 调 节, 对 有 相 互 抑 制 作 用 的 摄 食 中 枢 和 饱 中 枢 的 调 节, 均 体 现 两 因 素 间 的 相 互 性 和 作 用 结 果 的 整 体 性 研 究 提 示 运 脾 法 不 仅 能 改 变 食 欲 中 枢 神 经 元 的 自 发 电 活 动, 而 且 影 响 其 对 外 来 刺 激 的 反 应 性 三 有 待 深 入 的 研 究 本 研 究 中 食 欲 中 枢 电 活 动 消 长 与 CCK-8 和 β- 内 啡 肽 含 量 增 减 之 间 的 关 系 有 待 探 索 运 脾 复 方 影 响 模 型 动 物 食 欲 中 枢 对 刺 激 迷 走 神 经 的 反 应 有 待 增 加 实 验 例 数 进 行 研 究 运 脾 复 方 对 模 型 CCK-8 和 β- 内 啡 肽 饱 食 后 分 泌 情 况 的 影 响 尚 属 未 知 53