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1 Journal of Medical Science in Central South China,Sep 2012,Vol. 40,No 基础医学 文章编号: (2012) 金樱子对实验性糖尿病大鼠肾脏氧化应激反应的影响 周钰娟1,罗玉萍2,廖前进3,张秋菊4 (1. 南华大学护理学院,湖南 衡阳 ;2. 南华大学附属第二医院, 3. 南华大学病理学教研室,4. 南华大学生物化学与分子生物学教研室) 摘摇 要:摇 目的摇 探讨金樱子对链脲佐菌素( STZ) 诱导的糖尿病大鼠肾脏氧化应激反应的影响,并探讨其作用 机理 摇 方法摇 STZ 腹腔注射诱导建立 SD( Sprague鄄Dawley) 大鼠糖尿病模型后,随机分为糖尿病模型组和金樱子 干预组,同时另设正常对照组和金樱子对照组 测定大鼠肾组织总抗氧化能力( T鄄AOC) 超氧化物歧化酶( SOD) 活性 丙二醛( MDA) 含量 免疫组织化学 Western blot,real鄄time PCR 检测各组肾组织核转录因子 资B( NF鄄资B) 表 达情况 摇 结果摇 与正常对照组相比,糖尿病模型组大鼠肾组织 T鄄AOC,SOD 活性明显减弱,MDA 含量明显增强 ( P < 0. 01),而糖尿病大鼠经金樱子处理后,肾组织 T鄄AOC,SOD 的活性显著增强,MDA 含量显著降低( P < 0. 05), 且能在 mrna 和蛋白水平显著下调肾组织中 NF鄄资B 的表达 摇 结论摇 金樱子可通过降低糖尿病大鼠肾脏中 NF鄄 资B 表达,抑制氧化应激,增强抗氧化酶活性起到保护肾脏的作用 关键词:摇 金樱子;摇 糖尿病肾病;摇 氧化应激;摇 核转录因子 资B 中图分类号:R587. 1摇 摇 摇 摇 文献标识码:A Effect of Rosa Laevigata Mickx on Oxitative Stress in Streptozotocin鄄Induced Diabetic Rats ZHOU Yujuan,LUO Yuping,LIAO Qianjin,et al ( Nursing School,University of South China,Hengyang,Hunan ,China) Abstract:摇 Objective摇 To investigate the effect of Rosa Laevigata Mickx( RLM) on oxidative stress in diabetic ne鄄 phropathy rats,and explore the mechanism of action. 摇 Methods摇 The Sprague鄄Dawley ( SD) rats induced by STZ were di鄄 vided into the diabetic model group and the RLM intervention group,and the normal control group and the RLM control group were set up. The ability of anti鄄oxidant capacity ( T鄄AOC),the activity of superoxide dismutase ( SOD),the amount of malondialdehyde ( MDA) in renal tissues were determined. The expression of nuclear factor鄄kappa B ( NF鄄资B) in the four groups were detected by immunohistochemistrcey,western blot and real鄄time PCR. 摇 Results摇 Compared to the nor鄄 mal group,the activity of SOD and T鄄AOC were significantly decreased,and the level of MDA were significantly increased in the diabetic rats ( P < 0. 01). However,RLM significantly increased the activity of SOD and T鄄AOC,decreased the level of MDA ( P < 0. 05),and inhibited the expression of nuclear factor鄄kappa B ( NF鄄资B) at both the protein and mrna levels. Conclusions摇 Rosa Laevigata Mickx. can inhibit the oxidative stress,increase the activity of antioxidase,decrease the oxi鄄 dative damage of diabetic nephropathy,thereby protect the kidney in diabetic,which may be related to decreasing the ex鄄 pression of NF鄄资B. Key words:摇 Rosa Laevigata;摇 diabetic nephropathy;摇 oxidative stress;摇 nuclear factor鄄kappa B 摇 摇 糖尿病肾病( diabetic nephropathy,dn) 是糖尿 病最常见的并发症和引起糖尿病死亡的主要原因, 收稿日期: 因 [1] 最新的研究显示 2011 年全球罹患糖尿病人 基金项目: 湖 南 省 科 技 厅 课 题 ( 2010FJ6025 ), 衡 阳 市 科 技 局 课 题 (2011KS1),湖南省卫生厅资助课题( B ). 通讯作者:张秋菊,电话: ,E鄄mail:jqz0907@ 163. com. 亦是 引 起 终 末 期 肾 功 能 衰 竭 ( ESRD ) 的 主 要 原 数近 3. 7 亿,预计到 2030 年全世界将有 5. 5 亿糖尿 病患者,而且 30% ~ 50% 的糖尿病患者将发生糖尿

2 中 南 医 学 科 学 杂 志 2012 年 9 月 第 40 卷 第 5 期 病 肾 病 [2] 因 此, 有 效 控 制 糖 尿 病 肾 病 的 发 生 发 展 具 有 重 要 的 现 实 意 义 糖 尿 病 肾 病 的 发 病 机 制 错 综 复 杂, 涉 及 多 种 因 素 和 多 条 途 径 的 参 与 然 而 目 前 大 量 研 究 认 为 氧 化 应 激 (oxitative stress,os) 在 糖 尿 [3 鄄 病 肾 病 的 发 生 和 发 展 中 起 关 键 性 作 用 4] 金 樱 子 (Rosa Laevigata Mickx) 又 名 山 鸡 头 子 槟 榔 果 等, 有 消 食 补 益 之 功 能, 治 消 渴, 而 糖 尿 病 在 祖 国 传 统 医 学 上 就 称 为 消 渴 症 金 樱 子 除 具 有 明 显 的 降 低 血 清 胆 固 醇 和 茁 2 脂 蛋 白, 减 少 肝 脏 心 肌 中 的 脂 肪 沉 积, 止 尿 失 禁 和 抗 衰 老 等 作 用 外, 还 具 有 明 显 的 抗 氧 化 作 用 [5] 前 期 研 究 发 现 : 金 樱 子 果 能 明 显 改 善 实 验 性 糖 尿 病 SD 大 鼠 的 血 糖 血 脂 紊 乱, 下 调 肾 组 织 中 转 化 生 长 因 子 茁 1( TGF 鄄 茁 1) 郁 胶 原 和 单 核 细 胞 趋 化 蛋 白 鄄 1(MCP 鄄 1) 的 表 达, 对 糖 尿 病 大 鼠 肾 脏 具 有 一 定 的 保 护 作 用 8] 因 此, 在 此 基 础 上 本 研 究 探 讨 了 金 樱 子 果 对 实 验 性 糖 尿 病 SD 大 鼠 肾 脏 氧 化 应 激 反 应 的 影 响, 为 金 樱 子 防 治 糖 尿 病 肾 病 提 供 实 验 依 据 1 摇 材 料 与 方 法 1. 1 摇 材 料 与 试 剂 摇 摇 本 部 分 主 要 与 前 期 研 究 一 致 8],90 只 健 康 雄 性 SD 大 白 鼠, 约 2 月 龄, 体 重 为 250 依 20 g, 南 华 大 学 实 验 动 物 部 提 供, 动 物 使 用 许 可 证 号 为 SYXK ( 湘 )2004 ~ 0011 适 应 性 喂 养 1 周 后 用 于 实 验 金 樱 子 干 果 购 于 衡 阳 市 药 材 公 司, 去 籽 后 碾 成 粉 末 状, 按 每 只 鼠 每 天 40 克 鼠 普 通 饲 料 加 生 药 粉 ( 每 天 5 g / kg) 制 成 颗 粒 饲 料 链 脲 佐 菌 素 ( STZ) 购 自 美 国 Sigma 公 司, 临 用 前 用 枸 橼 酸 钠 缓 冲 液 (0. 1 mol / L,pH 4. 2) 配 制,10 min 内 用 完 核 转 录 因 子 资 B ( nuclear factor 鄄 kappa B, NF 鄄 资 B ) p65 (BA0610) 购 自 博 士 德 生 物 工 程 有 限 公 司 RNA 提 取 试 剂 Trizol 反 转 录 试 剂 盒 为 promega 公 司 产 品, 蛋 白 定 量 检 测 试 剂 盒 ( BCA 法 ) 购 自 Pierce 公 司, NF 鄄 资 Bp65 特 异 性 引 物 由 Invitrogen 公 司 合 成 1. 2 摇 动 物 模 型 及 分 组 与 前 期 研 究 一 致 8],90 只 雄 性 SD 大 白 鼠 饲 养 在 恒 温 自 然 昼 夜 光 照 的 环 境 中, 适 应 性 喂 养 1 周 后, 50 只 雄 性 SD 大 白 鼠 禁 食 不 禁 水 12 h 后, 按 60 mg / kg 左 下 腹 腔 内 一 次 性 注 射 STZ 制 作 DM 大 鼠 模 型 STZ 临 用 前 用 枸 橼 酸 钠 缓 冲 液 (0. 1 mol / L, ph 4. 2) 配 制,10 min 内 用 完 注 射 STZ 后, 于 第 天 禁 食 不 禁 水 过 夜 后 测 血 糖,3 次 血 糖 值 均 大 于 mmol / L 为 造 模 成 功 造 模 成 功 后, 随 机 分 为 两 组, 即 糖 尿 病 模 型 组 和 金 樱 子 干 预 组 余 40 只 雄 性 SD 大 白 鼠, 设 正 常 对 照 组 和 金 樱 子 对 照 组 ( 每 组 20 只 ), 腹 腔 内 注 射 等 量 枸 橼 酸 钠 溶 液 正 常 对 照 组 及 模 型 对 照 组 用 普 通 饲 料 喂 养, 而 金 樱 子 干 预 组 和 金 樱 子 对 照 组 用 添 加 金 樱 子 果 粉 ( 每 天 5 g / kg) 的 颗 粒 饲 料 喂 养, 连 续 给 药 24 周 1. 3 摇 肾 组 织 总 抗 氧 化 能 力 超 氧 化 物 歧 化 酶 活 性 及 丙 二 醛 含 量 检 测 用 药 24 周 后 处 死 动 物, 剖 取 双 肾, 生 理 盐 水 冲 洗 去 血 迹, 剥 离 包 膜 后 称 肾 重 后, 取 部 分 肾 组 织 加 冰 冷 生 理 盐 水 制 成 10% 的 组 织 匀 浆, 低 温 离 心 机 离 心, 取 上 清 液 待 测 采 用 南 京 建 成 生 物 工 程 研 究 所 相 应 试 剂 盒, 分 光 光 度 法 检 测 肾 组 织 匀 浆 总 抗 氧 化 能 力 (T 鄄 AOC) 超 氧 化 物 歧 化 酶 ( SOD) 的 活 性 和 脂 质 过 氧 化 产 物 丙 二 醛 (MDA) 的 含 量, 操 作 步 骤 严 格 参 照 试 剂 盒 说 明 书 执 行 1. 4 摇 实 时 荧 光 定 量 PCR 于 - 80 益 超 低 温 冰 箱 内 取 各 组 新 鲜 肾 组 织, TRIZOL 法 提 取 肾 组 织 总 RNA, 并 测 定 总 RNA 提 取 质 量, 参 照 Promega 公 司 逆 转 录 试 剂 盒 说 明 书 合 成 cdna, 随 后 将 样 品 cdna 样 品 加 入 到 含 SYBR Green 的 Real 鄄 time PCR 反 应 体 系 中, 采 用 Bio 鄄 Rad IQ5 实 时 定 量 PCR 仪 进 行 记 录 和 分 析 与 内 参 基 因 GAPDH 标 化 后, 以 2 - 驻 驻 CT 值 表 示 各 目 的 基 因 的 相 对 表 达 量 引 物 序 列 为 : NF 鄄 资 B 正 义 : 5 忆 鄄 CAT GGG TGT TTG GTG GTA TTG A 鄄 3 忆, 反 义 :5 忆 鄄 TCC AAA GCT CCT CAC AAT TTC A 鄄 3 忆, 扩 增 片 断 长 度 为 71 bp,gapdh 正 义 : 5 忆 鄄 CCG AGG GCC CAC TAA AGG 鄄 3 忆, 反 义 : 5 忆 鄄 GCT GTT GAA GTC ACA GGA GAC AA 鄄 3 忆, 扩 增 片 断 长 度 为 68 bp 1. 5 摇 免 疫 组 织 化 学 法 与 前 期 研 究 一 致 8] 将 石 蜡 切 片 常 规 脱 蜡, 水 化 后,30% H 2 O 2 1 份 和 蒸 馏 水 10 份 混 合, 室 温 下 孵 育 10 min, 用 蒸 馏 水 冲 洗 3 次, 每 次 5 min; 热 修 复 抗 原 : 切 片 浸 入 mol / L 枸 盐 酸 盐 缓 冲 液, 加 热 致 沸 腾 5 ~ 10 min, 冷 却 后 PBS 冲 洗 3 次, 每 次 3 min; 每 张 切 片 加 1 滴 5% BSA 封 闭 液, 室 温 下 孵 育 20 min, 甩 去 多 余 液 体 ; 滴 加 一 抗,4 益 过 夜 ;PBS 洗 3 次 后 再 滴 加 二 抗,37 益 孵 育 20 min;pbs 洗 3 次 后 滴 加 试 剂 SABC,37 益 孵 育 20 min;pbs 洗 4 次 后, 用 新 鲜 配 制 的 DAB 显 色 液 显 色, 显 微 镜 下 观 察 2 ~

3 454 Journal of Medical Science in Central South China,Sep 2012,Vol. 40,No. 5 5 min; 自 来 水 冲 洗, 苏 木 素 浅 染, 自 来 水 冲 洗 返 蓝, 梯 度 酒 精 脱 水, 二 甲 苯 透 明, 中 性 树 胶 封 片 利 用 图 像 分 析 系 统 进 行 灰 度 扫 描 分 析 1. 6 摇 Western blot 同 前 期 研 究 相 同 8], 于 - 80 益 超 低 温 冰 箱 中 称 取 肾 组 织 0. 2 g, 以 先 预 冷 的 PBS 洗 3 次 并 用 眼 科 剪 将 组 织 剪 碎 于 EP 管 中, 再 加 入 适 量 的 组 织 裂 解 液 (100 mmol / L NaCl 10 mmol / L Tris 鄄 Hcl ph mmol / L EDTA ph 8 郾 0 1 滋 g / ml Aprotinin, 100 滋 g / ml PMSF) 于 4 益 裂 解 30 min, r / min 离 心 10 min, 吸 出 上 清 液, 即 为 细 胞 总 蛋 白, 用 BCA 蛋 白 定 量 试 剂 盒 进 行 蛋 白 定 量 调 节 每 份 样 品 浓 度, 以 每 孔 30 滋 g 的 蛋 白 量 加 样, 样 品 加 入 等 体 积 的 2 伊 SDS 加 样 缓 冲 液, 沸 水 煮 沸 8 min, 经 SDS 鄄 PAGE 胶 电 泳 后 转 膜, 膜 用 TBST ( Tris 鄄 HCL 20 mmol / L, NaCl 137 mmol / L, 含 体 积 分 数 为 1% Tween20) 配 置 的 5% 脱 脂 牛 奶 封 闭 2 h, 加 入 一 抗 (NF 鄄 资 Bp65, 用 封 闭 液 稀 释 ), 4 益 孵 育 过 夜 ; TBST 洗 3 次, 每 次 15 min; 加 相 应 的 二 抗 ( 用 封 闭 液 稀 释 ) 室 温 孵 育 1 h,tbst 洗 3 次, 每 次 15 min; 用 ECL 发 光 法 检 测 不 同 样 品 NF 鄄 资 B p65 蛋 白 表 达 状 况, 薄 层 扫 描 仪 测 定 印 迹 区 带 的 相 对 灰 度 值 为 了 确 保 每 组 所 加 蛋 白 为 等 量, 同 一 张 膜 显 影 后 重 新 封 闭 再 孵 一 抗 茁 鄄 ac 鄄 tin, 余 后 操 作 同 前 1. 7 摇 统 计 学 处 理 采 用 SPSS 统 计 学 软 件 进 行 分 析 数 值 用 x 依 s 表 示, 组 间 比 较 采 用 One 鄄 way ANOVA 分 析, 如 方 差 齐 时 用 LSD 法, 如 方 差 不 齐 时 采 用 Tamhane 爷 s T2 法,P < 表 示 差 异 有 统 计 学 意 义 0 郾 05) 其 结 果 说 明 金 樱 子 能 够 增 强 肾 组 织 抗 氧 化 酶 活 性, 提 高 总 抗 氧 化 能 力, 减 少 脂 质 过 氧 化 产 物 产 生, 降 低 氧 化 应 激 反 应, 从 而 减 轻 糖 尿 病 对 肾 脏 的 氧 化 应 激 损 伤 表 1 摇 Table 1 摇 各 组 大 鼠 肾 组 织 T 鄄 AOC SOD 活 性 MDA 含 量 的 变 化 The changes of T 鄄 AOC,SOD and MDA in the re 鄄 nal tissues of every group rats 组 别 n T 鄄 AOC(nu / mg prot) SOD(nu / mg prot) MDA( 滋 mol / mg prot) 正 常 对 照 组 依 依 依 糖 尿 病 模 型 组 依 a 依 a 依 a 金 樱 子 干 预 组 依 bc 依 bc 依 bc 金 樱 子 对 照 组 依 依 依 摇 摇 与 正 常 对 照 组 比 较 :a:p < 0. 01,b:P < 0. 05; 与 糖 尿 病 模 型 组 比 较 :c:p < 摇 各 组 肾 组 织 NF 鄄 资 B mrna 的 表 达 糖 尿 病 模 型 组 大 鼠 肾 组 织 NF 鄄 资 B mrna 表 达 明 显 较 正 常 对 照 组 增 加 ( P < 0. 01), 而 经 金 樱 子 干 预 处 理 后, 其 mrna 表 达 明 显 下 降 (P < 0. 05), 但 仍 高 于 正 常 对 照 组 ( P < 0. 05) 如 图 1 所 示, 糖 尿 病 模 型 组 肾 组 织 NF 鄄 资 B mrna 的 相 对 表 达 量 较 正 常 对 照 组 上 升 了 倍, 而 金 樱 子 干 预 组 NF 鄄 资 B mr 鄄 NA 的 相 对 表 达 量 较 糖 尿 病 模 型 组 下 降 了 %, 但 仍 较 正 常 对 照 组 高 (1. 71 倍 ),NF 鄄 资 B mrna 表 达 在 金 樱 子 对 照 组 与 正 常 对 照 组 无 明 显 变 化 ( P > 0 郾 05) 2 摇 结 摇 摇 果 2. 1 摇 各 组 糖 尿 病 肾 病 大 鼠 肾 组 织 T 鄄 AOC SOD 活 性 及 MDA 含 量 50 只 SD 大 鼠 用 于 造 模, 有 9 只 造 模 未 成 功 实 验 过 程 中, 糖 尿 病 模 型 组 死 亡 4 只, 金 樱 子 干 预 组 死 亡 1 只 如 表 1 所 示, 与 正 常 对 照 组 相 比, 糖 尿 病 模 型 组 大 鼠 肾 组 织 T 鄄 AOC 和 SOD 活 性 明 显 减 弱, MDA 含 量 明 显 增 强 (P < 0. 01); 糖 尿 病 大 鼠 经 金 樱 子 处 理 后, 肾 组 织 T 鄄 AOC SOD 的 活 性 显 著 增 强 (P < 0. 05), 而 MDA 含 量 显 著 降 低 ( P < 0. 05), 但 上 述 指 标 仍 未 恢 复 至 正 常 水 平 ( P < 0. 05); 金 樱 子 对 正 常 大 鼠 的 T 鄄 AOC SOD MDA 影 响 不 大 ( P > 图 1 摇 各 组 大 鼠 肾 组 织 NF 鄄 资 B mrna 表 达 摇 A: 正 常 对 照 组 ; B: 模 型 对 照 组 ;C: 金 樱 子 干 预 组 ;D: 金 樱 子 对 照 组. **:P < 0. 01; *:P < Fig. 1 摇 The mrna expression of NF 鄄 资 B in renal tissues of every group rats

4 中南医学科学杂志 2012 年 9 月第 40 卷第 5 期 摇 各组肾组织 NF鄄资B p65 蛋白表达 模型组 NF鄄资B p65 蛋白表达明显上调( P < 0. 05), 管及肾间质细胞胞浆和胞核内 NF鄄资B p65 蛋白有少 蛋白表达明显下调( P < 0. 05),但仍较正常对照组 结果显示( 图 2) :正常对照组中肾小球或肾小 量表达,糖尿病模型组中上述细胞 NF鄄资B p65 蛋白 表达明显增强,并以细胞核表达为主,而糖尿病大鼠 经金樱子干预处理后,NF鄄资B p65 蛋白表达显著减 弱 灰度扫描分析显示,与正常对照组比较,糖尿病 而金樱子干预组与糖尿病模型组相比,NF鄄资B p65 蛋白表达增强( P < ) ;NF鄄资B p65 蛋白在金樱 子对照组与正常对照组中表达差异无显著性( P > 0. 05) 图 2摇 免疫组化检测各组大鼠肾组织 NF鄄资B 蛋白的表达( 伊40)摇 A:正常对照组;B:模型对照组;C:金樱子干预组;D:金樱子对照组 Fig. 2摇 The protein expression of NF鄄资B in renal tissues of every group rats detected by immunohistochemistry( 伊 40) 2. 4摇 各组肾组织 NF鄄资B 蛋白表达 如图 3 所示,糖尿病模型组 NF鄄资B 蛋白较正常 对照组表达明显上调( P < 0. 05),而金樱子干预处 3摇 讨摇 摇 论 糖尿 病 肾 病 是 糖 尿 病 三 大 微 血 管 并 发 症 之,是终末期肾功能衰竭( ESRD) 和糖尿病( DM) 理后,NF鄄资B 蛋白表达明显下调( P < 0. 05),但仍较 一 组与正常对照组比较,NF鄄资B 蛋白表达有所降低,但 达到 万 [10],且发病率逐年上升,给社会和个 正常对照组蛋白表达增强( P < 0. 05),金樱子对照 差异无显著性( P > 0. 05) [9] 患者死亡的主要原因 目前在国内糖尿病患者已经 人均造成了巨大经济负担 因此,寻找广泛 低廉和 疗效好的防治糖尿病及其并发症的药物倍受人们关 注,具有重要的现实意义 越来越多的体内外实验证实,糖尿病时氧化应 激( OS) 反应明显增强,是导致糖尿病并发症发生的 根本原因之一 [11] 研究认为糖尿病并发症发生机 制的经典途径是由于高糖环境下线粒体呼吸链中活 性氧自由基生成过多所致,即高糖引起机体损伤的 共同基础是氧化应激 [12] 由此表明,氧化应激促进 了糖尿病及其并发症的发生和发展 [13] 肾脏是对 氧化应激损伤敏感的器官,研究表明氧化应激是糖 尿病肾病发生发展的关键因素,抑制氧化应激反应 图 3摇 各组大鼠肾组织 NF鄄资B 蛋白表达摇 A:正常对照组;B: 可明显减轻糖尿病对肾脏的损害 [14] 此外,高糖可 Fig. 3摇 The protein expression of NF鄄资B in renal tissues of 抗 氧 化 酶 糖 基 化 或 氧 化, 致 使 超 氧 化 物 歧 化 酶 模型对照组;C:金樱子干预组;D:金樱子对照组. *:P < every group rats detected by Western blot 直接破坏组织细胞正常的清除能力 [15],即通过引起 ( SOD) 谷胱甘肽过氧化物酶 ( GPX) 过氧化氢酶

5 456 Journal of Medical Science in Central South China,Sep 2012,Vol. 40,No. 5 (CAT) 等 抗 氧 化 酶 活 性 降 低, 削 弱 机 体 清 除 自 由 基 能 力, 进 而 促 进 DN 的 发 生 发 展 丙 二 醛 ( MDA) 是 体 内 脂 质 过 氧 化 反 应 的 终 产 物, 活 性 十 分 活 跃, 通 常 用 来 评 价 机 体 氧 化 应 激 水 平,MDA 含 量 越 高 说 明 氧 化 应 激 反 应 就 强 有 研 究 认 为 肾 组 织 中 MDA 含 量 的 高 低 是 评 价 糖 尿 病 肾 损 害 严 重 程 度 的 有 力 指 标 [16] 作 为 生 物 体 内 对 抗 自 由 基 的 第 一 道 防 线, SOD 活 性 的 强 弱 体 现 了 机 体 清 除 自 由 基 能 力 的 强 弱, 即 反 映 了 机 体 抗 氧 化 能 力 的 强 弱, 而 总 抗 氧 化 能 力 T 鄄 AOC 则 直 接 体 现 了 机 体 的 抗 氧 化 能 力 金 樱 子 (Rosa Laevigata Mickx) 是 双 子 叶 常 绿 攀 缘 植 物, 属 蔷 薇 科, 分 布 广 泛, 来 源 丰 富, 易 于 获 取, 具 有 治 消 渴 症 之 功 效 前 期 研 究 发 现 金 樱 子 果 可 明 显 改 善 糖 尿 病 大 鼠 血 糖 和 血 脂 紊 乱, 对 糖 尿 病 大 鼠 肾 脏 具 有 一 定 的 保 护 作 用 8] 本 研 究 进 一 步 探 讨 了 金 樱 子 果 对 实 验 性 糖 尿 病 SD 大 鼠 肾 脏 氧 化 应 激 反 应 的 影 响 结 果 发 现, 与 正 常 对 照 组 相 比, 糖 尿 病 模 型 组 大 鼠 肾 组 织 T 鄄 AOC 和 SOD 活 性 明 显 减 弱, MDA 含 量 明 显 增 强, 而 糖 尿 病 大 鼠 经 金 樱 子 处 理 后, 肾 组 织 T 鄄 AOC SOD 的 活 性 显 著 增 强,MDA 含 量 显 著 降 低 其 结 果 说 明 金 樱 子 能 够 增 强 肾 组 织 抗 氧 化 酶 活 性, 提 高 总 抗 氧 化 能 力, 减 少 脂 质 过 氧 化 产 物 产 生, 降 低 氧 化 应 激 反 应, 从 而 减 轻 糖 尿 病 对 肾 脏 的 氧 化 应 激 损 伤, 延 缓 或 阻 止 糖 尿 病 肾 病 发 生 发 展, 对 糖 尿 病 肾 脏 起 保 护 作 用 核 转 录 因 子 NF 鄄 资 B(NF 鄄 资 B) 是 细 胞 内 具 有 多 向 调 节 作 用 的 核 转 录 因 子, 参 与 多 种 细 胞 因 子 及 其 受 体 趋 化 因 子 受 体 粘 附 因 子 等 表 达 的 调 控 [17] 越 来 越 多 的 研 究 显 示 NF 鄄 资 B 的 激 活 在 各 种 肾 脏 疾 病 尤 其 是 糖 尿 病 肾 病 发 生 发 展 中 起 着 核 心 作 用 [18] NF 鄄 资 B 在 糖 尿 病 大 鼠 肾 组 织 活 性 明 显 增 加, 抑 制 NF 鄄 资 B 的 激 活 则 能 延 缓 DN 的 发 展, 糖 尿 病 肾 病 患 者 外 周 血 单 核 细 胞 NF 鄄 资 B 的 活 性 明 显 较 糖 尿 病 患 [19 鄄 者 增 强, 且 与 尿 蛋 白 浓 度 密 切 相 关 20], 这 就 说 明 NF 鄄 资 B 的 激 活 与 糖 尿 病 肾 病 的 发 生 发 展 密 切 相 关 NF 鄄 资 B 是 最 早 发 现 的 氧 化 应 激 敏 感 性 转 录 因 子 之 一 [21] 糖 尿 病 时,NF 鄄 资 B 是 高 血 糖 和 氧 化 应 激 反 应 的 主 要 调 节 靶 点, 抑 制 NF 鄄 资 B 通 路 激 活 可 明 显 减 轻 高 糖 诱 导 的 氧 化 应 激 反 应 [22] 本 研 究 发 现, 糖 尿 病 模 型 组 大 鼠 肾 组 织 NF 鄄 资 B 无 论 在 mrna 水 平 还 是 蛋 白 水 平, 其 表 达 明 显 较 正 常 对 照 组 增 强, 而 经 金 樱 子 干 预 处 理 后, 其 表 达 明 显 降 低 其 结 果 说 明, 金 樱 子 可 以 明 显 抑 制 糖 尿 病 肾 组 织 NF 鄄 资 B 的 激 活, 延 缓 糖 尿 病 肾 病 的 发 生 发 展 综 上 所 述, 氧 化 应 激 在 糖 尿 病 肾 病 发 生 发 展 中 起 着 重 要 的 作 用, 与 NF 鄄 资 B 的 活 化 有 关 ; 金 樱 子 可 明 显 增 强 糖 尿 病 肾 组 织 抗 氧 化 酶 活 性, 提 高 总 抗 氧 化 能 力, 减 少 脂 质 过 氧 化 产 物 产 生, 降 低 氧 化 应 激 反 应, 从 而 减 轻 糖 尿 病 对 肾 脏 的 氧 化 应 激 损 伤, 延 缓 或 阻 止 糖 尿 病 肾 病 发 生 发 展, 可 能 与 抑 制 糖 尿 病 肾 组 织 中 NF 鄄 资 B 的 激 活 有 关, 但 确 切 的 机 制 有 待 进 一 步 研 究 参 考 文 献 : [1] 摇 Cooper ME. Is diabetic nephropathy disappearing from clinical practice [ J ]? Pediatr Diabetes, 2006, 7 ( 5 ): 237 鄄 238. [2] 摇 Whiting DR,Guariguata L,Weil C,et al. IDF diabetes at 鄄 las: global estimates of the prevalence of diabetes for 2011 and 2030 [ J]. Diabetes Res Clin Pract,2011,94 (3):311 鄄 321. [3] 摇 Singh DK,Winocour P,Farrington K. Oxidative stress in early diabetic nephropathy:fueling the fire[ J]. Nat Rev Endocrinol,2011,7(3):176 鄄 184. [4] 摇 Kashihara N, Haruna Y, Kondeti VK, et al. Oxidative stress in diabetic nephropathy [ J]. Curr Med Chem, 2010,17(34):4256 鄄 [5] 摇 Choi SJ,Kim MJ,Heo HJ,et al. Protective effect of Rosa laevigata against amyloid beta peptide 鄄 induced oxidative stress[j]. Amyloid,2006,13(1):6 鄄 12. [6] 摇 周 钰 娟, 廖 前 进, 张 秋 菊, 等. 金 樱 子 对 糖 尿 病 大 鼠 肾 MCP 鄄 1 表 达 的 影 响 [ J]. 现 代 生 物 医 学 进 展,2009,9 (23):4425 鄄 [7] 摇 周 钰 娟. 金 樱 子 对 糖 尿 病 大 鼠 肾 脏 氧 化 应 激 的 影 响 研 究 [D]. 衡 阳 : 南 华 大 学, 鄄 12. [8] 摇 周 钰 娟, 廖 前 进, 张 秋 菊, 等. 金 樱 子 对 大 鼠 糖 尿 病 肾 脏 的 实 验 研 究 [J]. 南 华 大 学 学 报 ( 医 学 版 ),2007,35 (3):332 鄄 335. [9] 摇 颜 斌, 谢 巍, 曹 仁 贤. 替 米 沙 坦 联 合 依 那 普 利 对 2 型 糖 尿 病 早 期 肾 病 的 临 床 观 察 [ J]. 中 南 医 学 科 学 杂 志, 2011,39(5):529 鄄 530,543. [10] 摇 Yang W,Lu J,Weng J,et al. Prevalence of diabetes a 鄄 mong men and women in China [ J]. N Engl J Med, 2010,362(12):1090 鄄 [11] 摇 Abe M,Maruyama N,Okada K,et al. Effects of lipid 鄄 lowering therapy with rosuvastatin on kidney function and oxidative stress in patients with diabetic nephropathy [J]. J Atheroscler Thromb,2011,18(11):1018 鄄 ( 下 转 第 483 页 )

6 摇 摇 ( 上 接 第 456 页 ) [12] 摇 Rytter E, Vessby B, Asgard R, et al. Supplementation with a combination of antioxidants does not affect gly 鄄 caemic control,oxidative stress or inflammation in type 2 diabetes subjects[ J]. Free Radic Res,2010,44(12): 1445 鄄 [13] 摇 Giacco F,Brownlee M. Oxidative stress and diabetic com 鄄 plications[j]. Circ Res,2010,107(9):1058 鄄 [14] 摇 Ogawa S,Nako K,Okamura M,et al. Aliskiren reduces albuminuria and oxidative stress,and elevates glomerular filtration rates in Japanese patients with advanced dia 鄄 betic nephropathy [ J]. Hypertens Res,2011,34 (3): 400 鄄 401. [15] 摇 Matough FA,Budin SB,Hamid ZA,et al. The role of ox 鄄 idative stress and antioxidants in diabetic complications [J]. Sultan Qaboos Univ Med J,2012,12(1):5 鄄 18. [16] 摇 Chang JM,Kuo MC,Kuo HT,et al. Increased glomerular and extracellular malondialdehyde levels in patients and rats with diabetic nephropathy [ J]. J Lab Clin Med, 2005,146(4):210 鄄 215. [17] 摇 Vallabhapurapu S,Karin M. Regulation and function of NF 鄄 kappab transcription factors in the immune system [J]. Annu Rev Immunol,2009,27:693 鄄 733. [18] 摇 Guijarro C,Egido J. Transcription factor 鄄 kappa B ( NF 鄄 kappa B) and renal disease[ J]. Kidney Int,2001,59 (2):415 鄄 424. [19] 摇 丁 鹤 林, 黎 锋, 徐 明 彤. 抑 制 核 因 子 鄄 资 B 对 糖 尿 病 肾 病 的 作 用 [J]. 中 华 内 科 杂 志,2002,41(9):605 鄄 609. [20] 摇 Hofmann MA,Schiekofer S,Kanitz M,et al. Insufficient glycemic control increases nuclear factor 鄄 资 B binding ac 鄄 tivity in peripheral blood mononuclear cells isolated frompatients with type 1 diabetes [ J]. Diabetes Care, 1998,21:1310 鄄 [21] 摇 Mohamede AK,Bierhaus A,Schiekofer S,et al. The role of oxidative stress and NF 鄄 资 B activation in late diabetic complications[j]. Biofactors,1999,10:157 鄄 167. [22] 摇 Yin H,Miao J,Ma C,et al. beta 鄄 Casomorphin 鄄 7 cause decreasing in oxidative stress and inhibiting NF 鄄 kappab 鄄 inos 鄄 NO signal pathway in pancreas of diabetes rats [J]. J Food Sci,2012,77(2):C278 鄄 282.

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