30 解放军医学杂志 2014 年 1 月 1 日第 39 卷第 1 期论著 PI3K/AKT/mTOR 信号传导通路在姜黄素抑制人肝癌细胞 Cox-2 表达中的作用李帅帅, 孙军 [ 摘要 ] 目的探讨 MAPK 和 PI3K 信号传导通路在姜黄素调节的环氧合酶 2(Cox-2) 表达中的作

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1 30 解放军医学杂志 2014 年 1 月 1 日第 39 卷第 1 期论著 PI3K/AKT/mTOR 信号传导通路在姜黄素抑制人肝癌细胞 Cox-2 表达中的作用李帅帅, 孙军 [ 摘要 ] 目的探讨 MAPK 和 PI3K 信号传导通路在姜黄素调节的环氧合酶 2(Cox-2) 表达中的作用方法分别加入 25 50μmol/L LY294002,10 20μmol/L U0126,5 10ng/ml 西罗莫司 ( 雷帕霉素,rapamycin) 处理人肝癌细胞 BEL- 7402,30min 后加入 10μmol/L 姜黄素, 对照组单独加入 0 10μmol/L 姜黄素, 培养 6h 后, 采用 RT-PCR 和 Western blotting 方法检测 BEL-7402 细胞中 Cox-2 mrna 和蛋白的表达以不同浓度 ( μmol/L) 姜黄素或 25μmol/L LY 处理 BEL-7402 细胞, 培养 6h 后, 采用 Western blotting 检测总 AKT 蛋白和磷酸化 AKT 蛋白的表达 ; 以不同浓度 ( μmol/L) 姜黄素或 10μmol/L U0126 处理 BEL-7402 细胞, 培养 6h 后, 采用 Western blotting 检测总 ERK 蛋白和磷酸化 ERK 蛋白的表达结果与仅加入 10μmol/L 姜黄素的 BEL-7402 细胞比较, 分别加入 25 50μmol/L LY294002,5 10ng/ml 西罗莫司后,BEL-7402 细胞中的 Cox-2 mrna 和蛋白表达均明显降低, 差异有统计学意义 (P<0.01), 而加入 10 20μmol/L U0126 后表达无明显变化 (P>0.05) 采用不同浓度姜黄素或 25μmol/L LY 处理后,BEL-7402 细胞磷酸化 AKT 蛋白表达逐渐降低, 与对照组相比差异有统计学意义 (P<0.01), 但总 AKT 蛋白表达与对照组相比无明显变化 (P>0.05) 不同浓度姜黄素或 10μmol/L U0126 处理后,BEL-7402 细胞磷酸化 ERK 蛋白和总 ERK 蛋白表达与对照组相比均无明显变化 (P>0.05) 结论姜黄素可能通过 PI3K/AKT/mTOR 信号传导通路抑制人肝癌细胞 BEL-7402 中 Cox-2 的表达 [ 关键词 ] 姜黄素 ; 肝肿瘤 ; 环氧化酶 2 [ 中图分类号 ] R735.7 [ 文献标志码 ] A [ 文章编号 ] (2014) [DOI] /j.issn Role of PI3K/AKT/mTOR pathway in the expression of Cox-2 in inhibition of human hepatocellular carcinoma cells by curcumin LI Shuai-shuai 1, SUN Jun 2 1 Liaoning Medical University, Jingzhou, Liaoning , China 2 Department of Gastroenterology, Jingzhou Central Hospital, Jingzhou, Liaoning , China [Abstract] Objective To investigate the roles of MAPK and PI3K signal transduction pathway in the expression of Cox-2 regulated by curcumin in human hepatocellular carcinoma BEL-7402 cells. Methods BEL-7402 cells were pretreated with 20 or 50μmol/L of LY294002, 10 or 20μmol/L of U0126, and 5 or 10ng/ml of rapamycin for 30 minutes, followed by treatment with 10μmol/L of curcumin. The BEL-7402 cells in control group were treated with 0 or 10μmol/L of curcumin alone. After being cultured for 6 hours, the expression of Cox-2 mrna and protein were determined by RT-PCR and Western blotting. BEL-7402 cells were treated with different concentrations of curcumin (0, 2.5, 5, 10, 15, 20μmol/L) or 25μmol/L of LY for 6 hours, and phosphorylated AKT and total AKT were detected by Western blotting. BEL-7402 cells were treated with different concentrations of curcumin (0, 2.5, 5, 10, 15, 20μmol/L) or 10 μmol/l of U0126 for 6 hours, then the phosphorylated ERK and total ERK were also assessed by Western blotting. Results Compared with the BEL-7402 cells treated with 10μmol/L curcumin alone, the expression of Cox-2 mrna and protein decreased significantly in the BEL-7402 cells treated with 25, 50μmol/L of LY294002, and 5, 10ng/ml of rapamycin respectively (P<0.01), but no difference was found when 10 or 20μmol/L of U0126 was added (P>0.05). Compared with control group, the expression of phosphorylated AKT protein decreased gradually in BEL-7402 cells treated with different concentrations of curcumin or 25μmol/L of LY (P<0.01), but there was no significant difference in the expression of total AKT protein (P>0.05). There was no significant difference in the expression of phosphorylated ERK protein and total ERK protein in BEL-7402 cells treated with different concentrations of curcumin or 10μmol/L of U0126 (P>0.05). Conclusion Curcumin may inhibit the expression of Cox-2 in human hepatocellular carcinoma BEL-7402 cells through PI3K/AKT/mTOR signal transduction pathway. [Key words] curcumin; liver neoplasms; cyclooxygenase 2 [ 作者简介 ] 李帅帅, 硕士研究生主要从事中药抗肿瘤机制的研究 [ 作者单位 ] 辽宁锦州辽宁医学院研 ( 李帅帅 ); 辽宁锦州锦州市中心医院消化内科 ( 孙军 )

2 Med J Chin PLA, Vol. 39, No. 1, January 1, 姜黄素是从姜科植物姜黄中提取的一种色素, 具有抑制炎症反应抗氧化抗类风湿等作用近年研究表明, 姜黄素具有明确的抗肿瘤作用, 能够通过多种途径抑制肿瘤血管的新生 [1-3] PI3K/AKT/ mtor 信号传导通路是人类癌症中一条重要的信号传导通路, 在大多数癌症中都处于激活状态, 在癌组织的血管生成中发挥着重要作用 [4-5], 针对 PI3K/ AKT/mTOR 信号通路的治疗是抗癌治疗的关键之一人肝癌组织中也存在 PI3K/AKT/mTOR 信号的激活, 且与肿瘤血管的新生密切相关我们前期的研究发现, 姜黄素能够抑制人肝癌细胞 BEL 中环氧合酶 2(Cox-2) 的表达, 从而抑制肿瘤血管新生, 但这种抑制作用是否是通过 PI3K/AKT/mTOR 途径目前尚不清楚, 本研究即探讨 P I 3 K / A K T / mtor 信号传导通路在姜黄素抑制人肝癌细胞 Cox-2 表达中的作用 1 材料与方法 1.1 细胞及主要试剂人肝癌细胞 BEL 由江阴康众康民生物医药技术有限公司提供姜黄素 (Sigma 公司产品, 溶于少量 DMSO 中, 加双蒸水配制成 500μmol/L 水溶液, 用培养液稀释成所需浓度,DMSO 终浓度小于 0.1%) 兔抗人 Cox-2 AKT 磷酸化 AKT(p-AKT) ERK 磷酸化 ERK(p- ERK) 单克隆抗体,GAPDH 单抗 (Enogene 公司 ) MEK/ERK 抑制剂 U0126 mtor/frap 抑制剂西罗莫司 ( 雷帕霉素,rapamycin, 上海伟晶生物科技有限公司 );PI3K/AKT 抑制剂 LY294002( 北京启维益成科技有限公司 );RT-PCR 试剂盒 ( 碧波公司 ) 引物由大连宝生物工程有限公司合成 1. 2 细胞活力测定将不同浓度 ( μmol/L) 姜黄素作用于人肝癌细胞 B E L , 用 0.4% 台盼蓝染色 5min, 在显微镜下观察染成蓝色的死亡细胞, 计数染色细胞和总细胞数目细胞活性为未染色细胞占总细胞的百分率 1.3 WST-8 法检测细胞增殖情况将人肝癌细胞 B E L 按 / m l 密度接种于 9 6 孔板, 每孔 100μl,37 5%CO 2 孵育 24h; 分别加入 μmol/L 的姜黄素, 培养 6h; 每孔加入 10μl CCK-8 溶液, 孵育 2h 以不加姜黄素的孔作为对照用酶标仪检测各孔在 450nm 处的吸光度 (A) 值 1.4 不同通路抑制剂对姜黄素诱导的 Cox-2 表达抑制的影响 BEL 细胞按常规胰蛋白酶消化法传代, 取对数生长期细胞, 按 /ml 密度接种于 6 孔板, 培养 24h 细胞贴壁后, 将细胞分为 8 组, 分别加入 25 50μmol/L 的 PI3K 抑制剂 LY294002, 10 20μmol/L 的 MEK 抑制剂 U0126,5 10ng/ml 的 mto R / F R A P 抑制剂西罗莫司, 3 0 m i n 后加入 10μmol/L 姜黄素空白对照和阴性对照细胞单独加入 0 10μmol/L 姜黄素将上述各组细胞置于 37 5%CO 2 饱和湿度培养箱中培养 6h, 收集细胞, 待测 Cox-2 mrna 及蛋白表达变化 1.5 不同浓度姜黄素及 LY 对 p-akt 及总 AKT 蛋白表达的影响取对数生长期细胞, 按 / ml 密度接种于 6 孔板, 培养 24h 细胞贴壁后, 分别加入 0( 对照组 ) μmol/L 的姜黄素或 25μmol/L 的 LY294002, 置 37 5%CO 2 饱和湿度培养箱中培养 6h, 收集细胞, 待测 p-akt 及总 AKT 蛋白表达水平 1.6 不同浓度姜黄素及 U0126 对 p-erk 和总 ERK 蛋白表达的影响取对数生长期细胞, 按 /ml 密度接种于 6 孔板, 培养 24h 细胞贴壁后, 分别加入 0( 对照组 ) μmol/L 的姜黄素或 10μmol/L U0126, 置 37 5%CO 2 饱和湿度培养箱中培养 6h, 收集细胞, 待测 p-erk 及总 ERK 蛋白表达水平 1. 7 RT-P CR 检测 Co x- 2 m R N A 表达情况采用 Tr i z o l 法提取上述各组细胞总 R N A, 取 5 μ g 总 RNA 进行反转录反应合成 cdna Cox-2 上游引物 5'-TCA A ATGAGATTGTGGGA A A ATTG -3', 下游引物 5'-TCTAGTAG AG ACGG ACTCATAG A A-3', 扩增产物长度 b p [ 2 ] ; β - a c t i n 上游引物 5'- C AG AG C A AG AG AG G C ATCCT-3', 下游引物 5'-GCATAGCACAGCCTGGATAG-3', 扩增产物长度 250bp PCR 反应条件如下 Cox-2:94 3min; 94 30s,54 30s,72 1min,30 个循环 ;72 10min β-actin:94 3min;94 30s,52 30s, 72 1min,30 个循环 ;72 10min 1.5% 琼脂糖凝胶电泳观察, 应用 Fluorchem 2.01 软件进行分析, 以 Cox-2 条带与内参 β-actin 条带的吸光度 (A) 值比值作为 Cox-2 基因的相对表达量实验重复 3 次 1.8 Western blotting 检测蛋白表达情况提取蛋白, 行 10% SDS-PAGE 电泳, 转至 PVDF 膜 ; 加入含 5% 脱脂奶粉的 TBS 缓冲液封闭 ; 加入兔抗人 Cox-2 单克隆抗体兔抗人 AKT 单克隆抗体兔抗人 ERK 单克隆抗体,4 过夜 ; 洗膜 30min, 加入辣根过氧化物酶标记的羊抗兔二抗孵育 ; 在新鲜配制的 NBT/BCIP 底物溶液中显色 20min, 流水冲洗, 终止显色, 照相内参采用 GAPDH 采用 Fluorchem 2.01 软件分析蛋白条带积分 A 值以目的条带与内参条带的比值代表目的蛋白的表达水平实验重复 3 次 1.9 统计学处理采用 SPSS 17.0 软件进行统计学

32 解放军医学杂志 2014 年 1 月 1 日第 39 卷第 1 期分析, 计量资料以 x±s 表示, 多组间的比较采用单因素方差分析, 进一步两两比较采用 Dunnett-t 检验,P<0.05 为差异有统计学意义 2 结果 2.1 细胞活力测定不同剂量 (2.

3 6 % 89.38%±0.36% 85.13%±0.51% 79.32%±0.49%, 与对照组 (98.94%±0.57%) 比较明显降低 (P<0.01) 2.3 不同信号通路抑制剂对姜黄素抑制 Cox-2 表达作用的影响 2.3.1 PT-PCR 检测 Cox-2 mrna 表达情况加入 25 50μmol/L LY294002 后,Cox-2 mrna 表达量分别为 0.23±0.

80±0.01, 与阴性对照组比较差异无统计学意义 (P>0.05, 图 1) M 1 2 3 4 5 6 7 8 Density 2.50 2.00 1.50 1.00 0.50 0.00 1 2 3 4 5 6 7 8 Group 图 1 RT-PCR 检测 Cox-2 mrna 表达情况 (x±s,n=3) Fig.

3 32 解放军医学杂志 2014 年 1 月 1 日第 39 卷第 1 期分析, 计量资料以 x±s 表示, 多组间的比较采用单因素方差分析, 进一步两两比较采用 Dunnett-t 检验,P<0.05 为差异有统计学意义 2 结果 2.1 细胞活力测定不同剂量 ( μmol/L) 姜黄素处理的人肝癌细胞 BEL-7402 的细胞活性均 >95%, 与对照组比较差异无统计学意义 (P>0.05) 2. 2 细胞增殖情况分析 μ m o l / L 姜黄素处理的 B E L 细胞增殖率分别为 % ± % % ± % 89.38%±0.36% 85.13%±0.51% 79.32%±0.49%, 与对照组 (98.94%±0.57%) 比较明显降低 (P<0.01) 2.3 不同信号通路抑制剂对姜黄素抑制 Cox-2 表达作用的影响 PT-PCR 检测 Cox-2 mrna 表达情况加入 25 50μmol/L LY 后,Cox-2 mrna 表达量分别为 0.23± ±0.04, 明显低于阴性对照组 (0.79±0.02), 差异有统计学意义 (P<0.01) 加入 5 10ng/ml 西罗莫司后,Cox-2 mrna 表达量分别为 0.22± ±0.01, 亦明显低于阴性对照组, 差异有统计学意义 (P<0.01) 加入 10 20μmol/L U0126 后,Cox-2 mrna 表达量分别为 0.81± ±0.01, 与阴性对照组比较差异无统计学意义 (P>0.05, 图 1) M Density Group 图 1 RT-PCR 检测 Cox-2 mrna 表达情况 (x±s,n=3) Fig.1 Expression of Cox-2 mrna detected by RT-PCR (x±s, n=3) 1. Blank control; 2. Negative control; 3, 4. U , 20μmol/L; 5, 6. LY , 50μmol/L; 7, 8. Rapamycin 5, 10ng/ml. (1)P<0.01 compared with negative control group (1)(1)(1)(1) -Cox-2(310bp) -β-actin(250bp) Western blotting 检测 Cox-2 蛋白表达情况加入 25 50μmol/L LY 后,Cox-2 蛋白表达量分别为 0.31± ±0.01, 明显低于阴性对照组 (1.20±0.04), 差异有统计学意义 (P<0.01) 加入 5 10ng/ml 西罗莫司后,Cox-2 蛋白表达量分别为 0.33± ±0.02, 亦明显低于阴性对照组, 差异有统计学意义 (P<0.01) 加入 10 20μmol/L U0126 后,Cox-2 蛋白表达量分别为 1.08± ±0.04, 与阴性对照组比较差异无统计学意义 (P>0.05, 图 2) Cox-2 GAPDH 图 2 Western blotting 检测 Cox-2 蛋白表达 (x±s, n=3) Fig.2 Expression of Cox-2 protein detected by Western blotting (x±s, n=3) 1. Blank control; 2. Negative control; 3, 4. U , 20μmol/L; 5, 6. LY , 50μmol/L; 7, 8. Rapamycin 5, 10ng/ml 2.4 不同剂量姜黄素及 LY 对 p-akt 及总 AKT 蛋白表达的影响 μmol/L 姜黄素或 2 5μmol/L LY 处理的人肝癌细胞 B E L 中, p - A K T 蛋白表达分别为 ± ± ± ± ± ±0.0 2, 与对照组 ( ±0.03) 相比差异有统计学意义 (P<0.01), 而总 A KT 蛋白表达分别为 1.69± ± ± ± ± ±0.04, 与对照组 (1.73±0.06) 相比差异无统计学意义 (P>0.05, 图 3) p-akt -Total AKT -GAPDH 图 3 Western blotting 检测 p-akt 和总 AKT 蛋白表达情况 Fig.3 Expression of phosphorylated AKT and total AKT protein detected by Western blotting , 2.5, 5, 10, 15, 20μmol/L curcumin; 7. 25μmol/L LY 不同剂量姜黄素及 U0126 对 p -ERK 和总 ERK 蛋白表达的影响 μmol/L 姜黄素处理的人肝癌细胞 BEL 中,p-ERK 蛋白表达分别为 1.00± ± ± ± ±0.02, 与对照组 (1.01±0.02) 相比差异无统计学意义 (P>0.05), 而 10μmol/L U0126 处理的人肝癌细胞 BEL 中 p-erk 蛋白表达为 ±0.01, 与对照组相比显著降低 ( P<0.01) μmol/L 姜黄素或 10μmol/L U0126 处理的人肝癌细胞 BEL 中, 总 ERK 蛋白表达分别为 1.12± ± ± ± ±0.01, 与对照组 (1.11±0.02) 相比差异均无统计学意 (P>0.05, 图 4)

Med J Chin PLA, Vol. 39, No. 1, January 1, 2014 33 图 4 Fig.

4 Med J Chin PLA, Vol. 39, No. 1, January 1, 图 4 Fig p-erk -Total ERK -GAPDH Western blotting 检测 p-erk 和总 ERK 蛋白表达情况 Expression of phosphorylated ERK and total ERK protein detected by Western blotting , 2.5, 5, 10, 15, 20μmol/L curcumin; 7. 10μmol/L U 讨论近年来, 随着对肿瘤研究的不断深入, 关于肿瘤细胞促血管生成能量代谢途径的研究逐渐增多, 特异性阻断肿瘤的促血管生成能量代谢途径已成为肿瘤治疗研究的新热点 PI3K/AKT/mTOR 信号传导通路与癌症的血管新生密切相关, 在肿瘤的发生发展中具有重要地位 [6] 肝细胞癌是我国最常见的恶性肿瘤之一, 其对血管的依赖性强, 而 PI3K/ AKT/mTOR 途径参与了肝癌的血管新生迁移黏附等 [7-8] PI3K/AKT/mTOR 通过级联反应, 共同调节肿瘤的血管新生大量研究发现, 姜黄素作为一种非常有应用前景的天然化合物, 在多种肿瘤中对 PI3K/AKT/mTOR 信号传导通路均有抑制作用 [9-11] Cox-2 是花生四烯酸代谢途径中的关键酶, 可促进细胞增殖抑制细胞凋亡促进肿瘤血管生成等, 在肿瘤的发生发展中扮演着重要角色近年来有研究发现, 特异性地沉默人肝癌细胞中的 Cox-2 基因具有抑制细胞增殖促进细胞凋亡和细胞周期阻滞降低胞内抗凋亡蛋白 Bcl-2 水平的作用 [12] 我们的前期研究发现, 姜黄素能够抑制人肝癌细胞中 [13] Cox-2 的表达, 起到抗肿瘤血管生成的作用 Xu 等研究发现,PI3K/AKT 信号传导途径参与了 Cox-2 的表达调节, 但同时也有研究证实 MEK/ERK 信号途径参与了 Cox-2 的表达调节 [14-15] 为了探讨人肝癌细胞 BEL 中姜黄素通过抑制 Cox-2 而实现抗血管生成作用的机制, 本实验应用 PI3K/AKT 抑制剂 LY mtor/frap 抑制剂西罗莫司及 MEK/ERK 抑制剂 U0126 作用于姜黄素处理的人肝癌细胞 BEL -7402, 结果发现,PI3K 抑制剂 LY 和 mtor/frap 抑制剂西罗莫司能够抑制姜黄素作用的人肝癌细胞 BEL 中 Cox-2 mrna 和蛋白的表达, 而 MEK/ERK 抑制剂 U0126 不能抑制其表达, 提示在人肝癌细胞 BEL-7402 中, 姜黄素抑制 Cox-2 的表达是通过 PI3K/AKT/mTOR 信号传导通路实现的, 而不通过 MEK/ERK 信号途径同时, 我们还通过使用不同剂量的姜黄素或 PI3K/ A K T 抑制剂 M E K / E R K 抑制剂处理人肝癌细胞 BEL-7402, 然后检测磷酸化 AKT 总 AKT 磷酸化 ERK 总 ERK 的表达, 结果发现, 姜黄素可抑制人肝癌细胞 BEL-7402 中的磷酸化 AKT, 而对总 AKT 磷酸化 ERK 以及总 ERK 均无明显影响, 进一步说明姜黄素在 PI3K/AKT/mTOR 通路中通过磷酸化途径激活 AKT, 与 MEK/ERK 途径无关综上所述,PI3K/AKT/mTOR 信号传导通路参与调控人肝癌细胞 BEL 中 Cox-2 的表达, 姜黄素可以通过 PI3K/AKT/mTOR 信号传导通路抑制 Cox-2 的表达, 从而抑制肿瘤血管的生成当前癌症的发病率逐年增加, 通过抑制肿瘤血管新生达到抑癌目的已经成为肿瘤治疗的新靶点, 姜黄素作为第三代癌化学预防药, 能够抑制肿瘤的生长和血管生成, 同时具有原材料充足靶向作用强对正常组织不良反应小等特点, 具有良好的临床应用前景, 值得更进一步研究参考文献 [1] Zhang B, Ye LH. The research progress of curcumin in anticancer mechanisms[ J]. Acta Chin Med Pharm, 2013, 41(1): [ 张博, 叶丽红. 姜黄素抗癌机制研究进展 [ J]. 中医药学报, 2013, 41(1): ] [2] Wu DY, Guo WY, Zhang HJ, et al. Curcumin attenuates renal ischemia reperfusion injury in mice by inhibiting the activation of toll-like receptor 4 signaling[ J]. Med J Chin PL A, 2012, 37(7): [ 吴迪英, 郭闻渊, 张豪杰, 等. 姜黄素对小鼠肾脏再灌注损伤的保护作用及其机制研究 [ J]. 解放军医学杂志, 2012, 37(7): ] [3] Liu L, Tan BT, Li Y, et al. Protective effect and its mechanism of curcumin on ischemia-reperfusion injury of cerebral cortex in rats[ J]. Med J Chin PLA, 2013, 38(3): [ 刘莉, 谭波涛, 李昱, 等. 姜黄素对大鼠大脑皮质缺血再灌注损伤的保护作用及其机制研究 [ J]. 解放军医学杂志, 2013, 38(3): ] [4] Karar J, Maity A. PI3K/AKT/mTOR pathway in angiogenesis[ J]. Front Mol Neurosci, 2011, 4(51): 1-8. [5] Long S, Shen Y, Xie YS, et al. Effects of exosomes derived from MDA-MB-231 on proliferation of endothelial cells and the role of MAPK/ERK and PI3K/Akt pathways[ J]. Med J Chin PLA, 2012, 37(11): [ 隆霜, 沈宜, 谢莹珊, 等. 乳腺癌 MDA-MB-231 细胞源 Exosomes 对内皮细胞增殖的影响及 MAPK/ERK 和 PI3K/Akt 信号通路的作用 [ J]. 解放军医学杂志, 2012, 37(11): ] [6] Liu F, Tan BZ. Effect of PI3K/AKT/GSK3βpathway on the proliferation and drug-resistant of epithelial ovarian carcinoma cells[ J]. Tianjin Med J, 2013, 41(6): [ 刘斐, 谭布珍. PI3K/AKT/GSK3β 信号通路在上皮性卵巢癌细胞增殖与耐药中的作用 [ J]. 天津医药, 2013, 41(6): ] [7] Kruse JP, Gu W. Modes of p53 regulation[ J]. Cell, 2009, 137(4): [8] Sun LJ, Fu Q, Li HY, et al. Relationship of EGFR, KRAS, BRAF,

5 34 解放军医学杂志 2014 年 1 月 1 日第 39 卷第 1 期 PI3K gene mutation and nonsmall-cell lung cancer treated by targeted drug[ J]. Chin J Pract Intern Med, 2013, 48(1): [ 孙丽娟, 付群, 李宏云, 等. EGFR KR AS BRAF PI3K 基因突变与非小细胞肺癌靶向药物治疗的关系 [ J]. 中国实用内科杂志, 2013, 48(1): ] [9] Mao S, He MS, Liu GY, et al. The role of curcumin for the medulloblastoma PI3K/AKT signaling pathway[ J]. J Third Mil Med Univ, 2013, 35(6): [ 毛蜀, 何密斯, 刘桂元, 等. 姜黄素对髓母细胞瘤 PI3K/AKT 信号通路的作用 [ J]. 第三军医大学学报, 2013, 35(6): ] [10] Wang JY, Wang ZP, Zhao JL, et al. Curcumin induces apoptosis via PTEN/PI3K/AKT pathway in human bladder careinoma EJ cells[ J]. Pharm Clin Chin Mater Med, 2011, 27(1): [ 王晶宇, 王志平, 赵俊丽, 等. 姜黄素作用 PTEN/PI3K/AKT 通路诱导膀胱癌 EJ 细胞凋亡 [ J]. 中药药理与临床, 2011, 27(1): ] [11] Min M, Gao QP. The effect of curcumin on HL60 cells PI3K/ AKT signaling pathways[ J]. Hainan Med J, 2012, 23(6): 3-5. [ 闵旻, 高清平. 姜黄素对 HL60 细胞 PI3K/AKT 信号传导通路的影响 [ J]. 海南医学, 2012, 23(6): 3-5.] [12] Guo D, Chen NN, Wu SG, et al. Cyclooxygenase-2 gene silence induces apoptosis of human hepatocellular carcinoma cells[ J]. Med J Chin PLA, 2012, 37(7): [ 郭丹, 陈娜娜, 吴曙光, 等. 环氧合酶 2 基因沉默诱导人肝癌细胞凋亡的作用观察 [ J]. 解放军医学杂志, 2012, 37(7): ] [13] X u W, C h e n G S, S h a o Y, e t a l. G a s t r i n a c t i n g o n t h e cholecystokinin2 receptor induces cyclooxygenase-2 expression through JAK2/STAT3/PI3K/AKT pathway in human gastric cancer cells[ J]. Cancer Lett, 2013, 332(1): [14] Wang ZL, Fan ZQ, Jiang HD, et al. Selective Cox-2 inhibitor celecoxib induces epithelial-mesenchymal transition in human lung cancer cel l s v ia activat ing MEK-ERK signaling[ J]. Carcinogenesis, 2013, 34(3): [15] Parente R, Trifiro E, Cuozzo F, et al. Cyclooxygenase-2 is induced by P38 MAPK and promotes cell survival[ J]. Oncol Rep, 2013, 29(5): ( 收稿日期 : ; 修回日期 : ) ( 责任编辑 : 熊晓然 )

TGF-β AngⅡ B SD ~ 220g SPF. SCXK No SYXK ~ 25 40% ~ 70% OR37G-C

TGF-β AngⅡ B SD ~ 220g SPF. SCXK No SYXK ~ 25 40% ~ 70% OR37G-C 2017 7 43 4 Journal of Southwest Minzu University Natural Science Edition Jul. 2017 Vol. 43 No. 4 doi10. 11920 /xnmdzk. 2017. 04. 008 1 1 1 2 1 1 3 1. 610212 2. 6100413. 610031 AngⅡ TGF-β. SD 60 180 ~

30 解放军医学杂志 2014 年 1 月 1 日第 39 卷第 1 期 论 著 PI3K/AKT/mTOR 信号传导通路在姜黄素抑制人肝癌细胞 Cox-2 表达中的作用 李帅帅, 孙军 [ 摘要 ] 目的探讨 MAPK 和 PI3K 信号传导通路在姜黄素调节的环氧合酶 2(Cox-2) 表达中的作

30 解放军医学杂志 2014 年 1 月 1 日第 39 卷第 1 期论著 PI3K/AKT/mTOR 信号传导通路在姜黄素抑制人肝癌细胞 Cox-2 表达中的作用李帅帅, 孙军 [ 摘要 ] 目的探讨 MAPK 和 PI3K 信号传导通路在姜黄素调节的环氧合酶 2(Cox-2) 表达中的作