中国现代医学杂志 第 29 卷 可能是影响乳腺癌发病率的主要原因 [1] 在晚期乳腺 癌中, 骨转移的发生率为 65% ~ 75%, 而首发症状为 骨转移者占 27% ~ 50% [2] ORLANDI 等 [3] 发现, 相对于健康对照组, 乳腺 恶性肿瘤和乳腺良性病变患者的 Hepcidin 均

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1 第 29 卷第 1 期中国现代医学杂志 Vol. 29 No 年 1 月 China Journal of Modern Medicine Jan DOI: /j.issn 文章编号 : (2019) Hepcidin 蛋白与乳腺癌骨转移的关系 蒋舒娜 1 1 2, 蒋丽娟, 邵小南 ( 江苏省常州市第一人民医院 1. 检验科,2. 核医学科, 江苏常州 ) 摘要 : 目的分析乳腺癌及乳腺癌骨转移患者的 Hepcidin 蛋白及相关指标, 探讨 Hepcidin 在乳腺癌发生 发展中的作用 方法回顾性分析江苏省常州市第一人民医院乳腺癌骨转移患者 25 例 乳腺癌无骨转移患者 30 例及乳腺增生患者 30 例 比较 3 组患者 Hb Hepcidin BMP-6 IL-6 stfr 的差异 用 ROC 曲线分析评价 Hepcidin BMP-6 IL-6 对乳腺癌骨转移的诊断价值 多因素 Logistic 回归分析比较各指标在乳腺癌骨转移的作用 结果 3 组患者 Hb Hepcidin BMP-6 IL-6 stfr 差异有统计学意义 (P <0.05) 对 Hepcidin 及 BMP-6, 乳腺癌骨转移组 > 乳腺癌无骨转移组 > 乳腺增生组 ; 对 IL-6, 乳腺癌骨转移组 > 乳腺癌无骨转移组及乳腺增生组, 但后两组比较差异无统计学意义 (P >0.05); 对 Hb, 乳腺癌骨转移组 < 乳腺癌无骨转移组 < 乳腺增生组 ; 对于 stfr, 乳腺癌骨转移组 < 乳腺癌无骨转移组 < 乳腺增生组 ROC 曲线分析发现 Hepcidin 对于乳腺癌骨转移均有较高诊断价值, 且优于 BMP-6 IL-6 多因素分析发现 Hepcidin 是乳腺癌骨转移的独立危险因素 结论 Hepcidin 与乳腺癌骨转移有较好的相关性, 其诊断价值有待进一步研究 关键词 : 乳腺肿瘤 ; 骨转移 / 肿瘤转移 ;Hepcidin 中图分类号 : R737.9 文献标识码 : A Role of Hepcidin in bone metastasis of breast cancer Shu-na Jiang 1, Li-juan Jiang 1, Xiao-nan Shao 2 (1. Department of Laboratory Medicine, 2. Department of Nuclear Medicine, the First People s Hospital of Changzhou, Changzhou, Jiangsu , China) Abstract: Objective To investigate role of Hepcidin in bone metastases of breast cancer and its clinical significance. Methods A retrospective analysis of 25 breast cancer patients with bone metastases, 30 breast cancer patients without bone metastases, and 30 patients with breast hyperplasia was conducted. Levels of Hb, Hepcidin, BMP-6, IL-6, and stfr were measured. Statistical analysis was performed to evaluate the diagnostic value of Hepcidin, BMP-6 and IL-6 in bone metastasis in breast cancer. Results Patients with bone metastasis experienced highest levels of Hepcidin, BMP-6 and IL-6, followed by patients without bone metastasis and patients with breast hyperplasia (P < 0.05). Patients with breast hyperplasia experienced highest levels of Hb and stfr, followed by patients without bone metastasis and patients with breast hyperplasia (P < 0.05). ROC analysis showed that Hepcidin was superior to BMP-6 and IL-6 as a diagnostic marker for breast cancer with bone metastasis. Multivariate analysis showed that Hepcidin was an independent risk factor for breast cancer with bone metastasis. Conclusion Hepcidin may be a promising diagnostic biomarker for bone metastasis of breast cancer. Keywords: breast neoplasms; bone metastasis/neoplasm metastasis; Hepcidin 最新的癌症统计发现, 乳腺癌占女性新发癌症的 15%, 在 30 ~ 59 岁女性中, 乳腺癌是最常见的癌症, 乳腺癌是 45 岁以上女性癌症死亡的主要原因, 其次 是肺癌 中国近几十年来肥胖和缺乏活动发生率增加, 收稿日期 : [ 通信作者 ] 蒋丽娟, czyyjlj@126.com 55

2 中国现代医学杂志 第 29 卷 可能是影响乳腺癌发病率的主要原因 [1] 在晚期乳腺 癌中, 骨转移的发生率为 65% ~ 75%, 而首发症状为 骨转移者占 27% ~ 50% [2] ORLANDI 等 [3] 发现, 相对于健康对照组, 乳腺 恶性肿瘤和乳腺良性病变患者的 Hepcidin 均增高 [4] CINISELLI 等也发现, 与良性乳腺疾病比较, 乳腺癌 的 Hepcidin 明显升高, 证实了 Hepcidin 在乳腺癌诊断 的潜在作用 然而,Hepcidin 与乳腺癌骨转移的相关 研究较少 本研究通过分析乳腺癌及乳腺癌骨转移患 者的 Hepcidin 骨形态发生蛋白 6(bone morphogenetic protein 6, BMP-6) 白细胞介素 6(Interleukin 6, IL-6) 可溶性转铁蛋白受体 (human soluble transferrin receptor, stfr) 及血红蛋白 (Hemoglobin, Hb) 等相关指标, 探 讨 Hepcidin 在乳腺癌发生 发展中的作用, 以指导临 床决策 1 资料与方法 1.1 研究对象 选取 2013 年 6 月 2014 年 3 月江苏省常州市第 一人民医院乳腺癌骨转移患者 25 例, 乳腺癌无骨转 移患者 30 例及乳腺增生患者 30 例 3 组患者年龄匹 配, 年龄 55 ~ 75 岁, 平均 66 岁 所有患者均经手术 或病理确诊, 所有乳腺癌患者均经过放射性核素扫描 (ECT) 初筛, 并 X 射线 CT 或 MRI 明确有无骨转移 排除影响因素 : 骨代谢疾病 急性炎症反应 (CRP> 6 mg/l) 肝功能异常 ( 凝血酶原时间和谷丙转氨酶 异常 ) 及心肺疾病病史 1.2 试剂及仪器 Sysmex XE2100 血细胞分析仪及试剂购自日本 Sysmex 公司, 血清 Hepcidin BMP-6 IL-6 及 stfr 检测试剂盒购自美国 R&D 公司, 酶标仪 洗板机购 自美国 Biorad 公司 1.3 血常规 血清 Hepcidin BMP-6 IL-6 stfr 的检测 隔夜空腹, 于 8 00 ~ 收集血样, 防 止 Hepcidin 的昼夜波动 [5], 分别注入 EDTA 抗凝管 (2 ml) 和血清管 (3 ml) 血常规在 2 h 内检测 ; 血清 管 r/min 离心 30 min 分离血清, 置入 -80 冰箱冷 冻保存 按试剂盒说明书操作, 采用酶联免疫吸附测 定 (ELISA) 分别检测血清标本中 Hepcidin BMP-6 IL-6 stfr 的含量 (Hepcidin 检测范围 15.6 ~ pg/ ml,bmp-6 检测范围 ~ pg/ml,il-6 检测 范围 3.1 ~ 300 pg/ml,stfr 检测范围 3.0 ~ 80 nmol/l) 1.4 统计学方法 数据分析采用 SPSS 13.0 统计软件, 各组数据做 正态性检验及方差齐性检验, 计量资料以均数 ± 标 准差 (x±s) 表示, 符合正态分布且方差齐的数据比 较采用单因素方差分析, 组内两两比较用 LSD-t 检验, 方差不齐的数据比较用非参数 Mann-Whitney U 检验 ; ROC 曲线比较各指标对乳腺癌骨转移的诊断价值, 多 因素 Logistic 回归分析比较各指标在乳腺癌骨转移的 作用,P <0.05 为差异有统计学意义 2 结果 组患者年龄 Hepcidin IL-6 Hb BMP-6 stfr 比较 3 组患者平均年龄比较差异无统计学意义 (P > 0.05);3 组患者 Hepcidin IL-6 Hb BMP-6 stfr 比较差异有统计学意义 (P <0.05)( 见表 1) 3 组患者 Hepcidin IL-6 及 Hb 比较差异有统计学 意义 (P <0.05) 进一步两两比较后发现, 对 Hepcidin, 乳腺癌骨转移组 > 乳腺癌无骨转移组 > 乳腺增生组 ; 对 IL-6, 乳腺癌骨转移组 > 乳腺癌无骨转移组及乳腺 增生组, 但乳腺癌无骨转移组与乳腺增生组比较, 差 表 1 3 组患者年龄 Hepcidin IL-6 Hb BMP-6 stfr 的比较 (x±s) 组别 n 年龄 / 岁 Hepcidin/(pg/ml) IL-6/(pg/ml) Hb/(g/L) BMP-6/(pg/ml) stfr/(nmol/l) 乳腺癌骨转移组 ± ± ± ± ± ±0.69 乳腺癌无骨转移组 ± ± ± ± ± ±0.70 乳腺增生组 ± ± ± ± ± ±5.35 F/H 值 P 值 注 :3 组患者 Hepcidin IL-6 Hb 比较采用单因素方差分析,BMP-6 stfr 因不符合方差齐性, 采用非参数检验 56

3 第 1 期 蒋舒娜, 等 :Hepcidin 蛋白与乳腺癌骨转移的关系 异无统计学意义 (t =0.834,P =0.406); 对 Hb, 乳腺癌骨转移组 < 乳腺癌无骨转移组 < 乳腺增生组 3 组患者 BMP-6 stfr 比较差异有统计学意义 (P < 0.05) 对 BMP-6, 根据平均秩次 (59.08 VS VS 33.83), 乳腺癌骨转移组 > 乳腺癌无骨转移组 > 乳腺增生组 ; 对 stfr, 根据平均秩次 (23.50 VS VS stfr/(nmol/l) 乳腺癌骨转移组乳腺癌无骨转移组乳腺增生组 57.73), 乳腺癌骨转移组 < 乳腺癌无骨转移组 < 乳腺增生组 见图 图 2 3 组患者的 stfr 比较 (x±s) 乳腺癌骨转移组乳腺癌无骨转移组乳腺增生组 骨转移 Y=0),Hepcidin BMP-6 IL-6 stfr 及 Hb 赋值后为自变量进行多因素 Logistic 回归分析 在回归方程中有意义的指标有两项, 为 Hepcidin 和 stfr ; BMP-6/(pg/ml) Hepcidin 为骨转移危险因素,sTfR 为保护因素 主要影响因素结果见表 图 1 3 组患者的 BMP-6 比较 (x±s) 2.2 Hepcidin BMP-6 IL-6 对乳腺癌骨转移的诊断价值 Hepcidin BMP-6 IL-6 对乳腺癌骨转移的诊断 ROC 曲线见图 3, 各项参数见表 2,Hepcidin 用于乳腺 癌骨转移的诊断价值最高 2.3 乳腺癌骨转移的影响因素 以乳腺癌是否骨转移为应变量 ( 骨转移 Y=1, 无 敏感性 图 特异性 Hepcidin BMP-6 IL-6 用于乳腺癌骨转移诊断的 ROC 曲线 Hepcidin BMP-6 IL-6 Reference Line 表 2 Hepcidin BMP-6 IL-6 用于乳腺癌骨转移诊断的各项参数 指标 AUC P 值 下限 95%CI 上限 界值敏感性 /% 特异性 /% Hepcidin BMP IL 表 3 乳腺癌骨转移多因素 Logistic 回归分析参数 指标 b S b Wald χ 2 P 值 Ol^R 下限 95%CI 上限 Hepcidin BMP IL stfr Hb

4 中国现代医学杂志 第 29 卷 3 讨论 既往研究发现,Hepcidin 升高与多种癌症有关, 如多发性骨髓瘤 前列腺癌 肾细胞癌 等 [10] [6-9] PINNIX 的研究突出了膜铁转运蛋白 (FPN) 和 Hepcidin 在乳腺癌细胞铁稳态失衡起重要作用 这些作者第 一次表明, 在培养的乳腺癌细胞,Hepcidin 通过转 录后机制负调控 FPN 表达 ; 此外, 在肿瘤细胞中的 Hepcidin 浓度高于正常细胞 近期的相关研究发现, 乳腺癌患者与健康对照组比较, 血浆 Hepcidin 浓度更 高 [3,11],Hepcidin 可以负性调节癌细胞 FPN 的表达 CINISELLI 等 [4] 也发现, 与良性乳腺疾病相比, 乳腺 癌的 Hepcidin 明显升高 本组资料中, 乳腺癌患者无 论有无骨转移,Hepcidin 水平均高于乳腺增生组, 与 上述观点相符 为什么乳腺癌患者血浆 Hepcidin 升高? 由铁状 态 促红细胞生成活性 炎症, 以及每个独立信号的 相对强度形成相互作用的通路来决定肝脏 Hepcidin 表达上调 ( 包括 BMP-6/SMAD4 通路和 IL-6/ STAT3 通路 ) [3] Hepcidin 升高可能是由于炎症刺激或肿瘤 分泌物 IL-6 升高了血清铁或依赖 BMPs 提供的信号 机制研究也发现, 增加铁 BMP-6 和 IL-6 能共同促 进肝脏 Hepcidin 的合成 [11] BMP-6 是 BMPs 家族成员, 属于转化生长因子 β BMP 已经被发现与多种癌症如乳腺癌 前列腺癌 多 发性骨髓瘤和卵巢癌相关 特别是多发性骨髓瘤的血 [7] 清 BMP-2 水平会升高 先前研究已经表明,BMP-6 在原发性乳腺癌标本和细胞株表达, 是癌细胞生长和 [12] 迁移的抑制剂 本组资料中, 乳腺癌 BMP-6 水平高 于乳腺增生组, 且有骨转移组更高, 说明 BMP-6 不仅 与乳腺疾病的良恶性相关, 与骨转移也有很大关系 IL-6 作为细胞因子的核心成员, 由淋巴细胞 单 核细胞 血管内皮细胞 成纤维细胞以及某些肿瘤细 [13] 胞产生, 对肿瘤细胞的增殖有重要影响 杨士军等 的研究结果显示,IL-6 在健康对照组和无骨转移组患 者血清中都具有一定水平, 但都没有超过 150 pg/ml( 试 剂盒提供的正常上限 ), 而骨转移组患者血清 IL-6 水 平明显高于无骨转移组和健康对照组, 推测转移的肿 瘤细胞自身产生 IL-6, 提示 IL-6 参与乳腺癌骨转移的 病理过程 本组资料中, 乳腺癌骨转移组 IL-6 高于无 骨转移组和乳腺增生组, 支持上述观点 在晚期乳腺癌中, 骨转移的发生率为 65% ~ 75% [14-15], 而首发症状为骨转移者占 27% ~ 50%, 一旦 发生骨转移, 疾病进入不可治愈的阶段, 因此骨转移 [16] 决定乳腺癌患者的预后 薛东等发现血清 Hepcidin 可以作为诊断前列腺癌骨转移的敏感指标, 同时可以 作为预后随访指标, 判断治疗疗效 PINNIX 等 发现在乳腺癌人群中伴随高 FPN 和低 Hepcidin 表达 的患者预后较好,95% 存活 5 年无复发 相反, 高 Hepcidin 表达与预后差相关, 较低的肿瘤 FPN 水平也 有类似结果 Pinnix 用无转移生存率的多因素分析证 实了 FPN 和 Hepcidin 独立的预后价值 然而, 国内外缺乏对 Hepcidin 与乳腺癌骨转移的 [13] 直接研究 杨士军等发现 IL-6 与乳腺癌骨转移相 关 本组资料 ROC 曲线分析发现 Hepcidin 对乳腺癌骨 转移诊断有较高的价值, 且优于 BMP-6 及 IL-6 进一 步多因素分析结果,Hepcidin 为乳腺癌骨转移危险因 素,sTfR 为保护因素 上述结果证实 Hepcidn 不仅可 以诊断乳腺癌骨转移, 还可以作为乳腺癌预后随访指 标 通过 BMP-6 拮抗剂和 IL-6 单抗能降低 Hepcidin 的表达, 也许可作为治疗手段, 改善体内微炎症状态 和铁代谢, 延缓乳腺癌骨转移的进展, 纠正肿瘤晚期 [17] 贫血 综上所述,Hepcidin 与乳腺癌骨转移有较好的相 关性, 但由于本研究为小样本回顾性研究, 其诊断价 值还需要进一步研究 同时期待 Hepcidin 对于乳腺癌 及乳腺癌骨转移有潜在的治疗价值 参考文献 : [1] CHEN W, ZHENG R, BAADE P D, et al. Cancer statistics in China, 2015[J]. CA Cancer J Clin, 2016, 66(2): [2] 江泽飞, 陈佳艺, 牛晓辉, 等. 乳腺癌骨转移和骨相关疾病临床 诊疗专家共识 (2014 版 )[J]. 中国肺癌杂志, 2014, 95(4): [3] ORLANDI R, de BORTOLI M, CINISELLI C M, et al. Hepcidin and ferritin blood level as noninvasive tools for predicting breast cancer[j]. Ann Oncol, 2014, 25(2): [4] CINISELLI C M, de BORTOLI M, TAVERNA E, et al. Plasma hepcidin in early-stage breast cancer patients: no relationship with interleukin-6, erythropoietin and erythroferrone[j]. Expert Rev Proteomics, 2015, 12(6): [5] TROUTT J S, RUDLING M, PERSSON L, et al. Circulating human hepcidin-25 concentrations display a diurnal rhythm, increase with prolonged fasting, and are reduced by growth hormone administration[j]. Clin Chem, 2012, 58(8): [6] GANZ T, OLBINA G, GIRELLI D, et al. Immunoassay for human hepcidin[j]. Blood, 2008, 112(10): [7] MAES K, NEMETH E, ROODMAN G D, et al. In anemia of multiple myeloma, hepcidin is induced by increased bone [10] 也 58

5 第 1 期 蒋舒娜, 等 :Hepcidin 蛋白与乳腺癌骨转移的关系 morphogenetic protein 2[J]. Blood, 2010, 116(18): [8] TANNO T, RABEL A, ALLEYNE M, et al. Hepcidin, anaemia, and prostate cancer[j]. BJU Int, 2011, 107(4): [9] KAMAI T, TOMOSUGI N, ABE H, et al. Increased serum hepcidin-25 level and increased tumor expression of hepcidin mrna are associated with metastasis of renal cell carcinoma[j]. BMC Cancer, 2009, (9): 270. [10] PINNIX Z K, MILLER L D, WANG W, et al. Ferroportin and iron regulation in breast cancer progression and prognosis[j]. Sci Transl Med, 2010, 2(43): 43ra56. [11] ZHANG S, CHEN Y, GUO W, et al. Disordered hepcidinferroportin signaling promotes breast cancer growth[j]. Cell Signal, 2014, 26(11): [12] ALARMO E L, KALLIONIEMI A. Bone morphogenetic proteins in breast cancer: dual role in tumourigenesis[j]. Endocr Relat Cancer, 2010, 17(2): R [13] 杨士军, 谭维琴, 鲍艳梅. CA153 IL-6 及 IL-8 与乳腺癌骨转移相关性探讨 [J]. 重庆医学, 2011, 40(4): [14] FUTAKUCHI M, SINGH R K. Animal model for mammary tumor growth in the bone microenvironment[j]. Breast Cancer, 2013, 20(3): [15] AKHTARI M, MANSURI J, KA, GUISE T, et al. Biology of breast cancer bone metastasis[j]. Cancer Biology & Therapy, 2008, 7(1): 3-9. [16] 薛冬, 何小舟, 许贤林, 等. Hepcidin 蛋白与前列腺癌骨转移的相关性研究 [J]. 中华泌尿外科杂志, 2013, 34(1): [17] PIETRANGELO A. Hepcidin in human iron disorders: therapeutic implications[j]. J Hepatol, 2011, 54(1): ( 张西倩编辑 ) 59

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