标题

Size: px

Start display at page:

Download "标题"

赈唐
5 years ago
Views:

1 1362 中华放射肿瘤学杂志 2016 年 12 月第 25 卷第 12 期 Chin J Radiat Oncol,December 2016,Vol.25,No.12 靶向沉默 BMI 1 表达对食管癌细胞放射增敏实验研究物理生物技术杨兴肖马鸣张魏丽王璇刘志坤祝淑钗石家庄, 河北医科大学第四医院放疗科通信作者 : 祝淑钗, sczhu1965@ 163.com DOI: / cma.j.issn 摘要目的采用 sirna 干扰技术降低食管癌 ECA109 细胞 BMI 1 基因表达, 观察其对放射线照射后细胞增殖迁移能力及周期和凋亡影响方法针对 BMI 1 mrna 序列, 设计合成有效的干扰序列命名为 BMI 1 sirna 组, 阴性对照序列命名为 NC 组, 未转染组命名为对照组采用 RT PCR 和蛋白印迹法检测 ECA109 中 BMI 1 在 mrna 和蛋白水平的表达 ;Transwell 小室实验检测 sirna 干扰 BMI 1 基因对 ECA109 迁移能力的影响 ;MTT 流式细胞术和克隆形成实验检测 BMI 1 对 ECA109 放射敏感性的研究结果照射后 BMI 1 sirna 组 BMI 1 基因 mrna 和蛋白水平显著低于对照组和空载组, 且细胞增殖和迁移能力显著降低 ( P = ) 克隆形成实验显示对照组 NC 组放射敏感性相近 (P = 0 569), 而 BMI 1 sirna 组细胞放射敏感性高于对照组和空载组 ( P = 0 000) 流式细胞术分析显示照射后, BMI 1 sirna 组 G 2 + M 期显著低于对照组和空载组 ( P = 0 000); 且细胞凋亡显著增加 (P = 0 000), 而未照射组之间未见明显差异 ( P = 0 350) 结论 sirna 干扰联合 X 线照射有效降低食管癌细胞 ECA109 中 BMI 1 基因表达, 进而抑制亚致死性损伤修复而增加放射致死效率关键词 BMI 1 基因 ; RNA 干扰 ; DNA 损伤 ; 放射敏感性基金项目 : 国家自然科学基金资助项目 ( ); 河北省中医药管理局资助项目 ( ); 河北省医学科学研究所资助项目 ( , ) Effect of specific knockdown of BMI 1 on radiosensitivity enhancement in esophageal carcinoma cells Yang Xingxiao,Ma Ming,Zhang Weili,Wang Xuan,Liu Zhikun,Zhu Shuchai Department of Radiation Oncology,Fourth Hospital of Hebei Medical University,Shijiazhuang ,China Corresponding author:zhu Shuchai, sczhu1965@ 163.com Abstract Objective To inhibit the expression of B cell specificmiv integration site 1( BMI 1) in esophageal cancer ECA109 cells by sirna interference, and to observe the effects of BMI 1 knockdown on cell proliferation, migration, cell cycle, and apoptosis after exposure to radiation. Methods Effective BMI 1 sirna was designed and synthesized based on the sequence of the BMI 1 mrna. ECA109 cells transfected with BMI 1 sirna and negative control (NC) sirna were assigned to BMI 1 sirna group and NC group, while ECA109 cells without transfection were set as a control. Real time PCR and Western blot were used to determine the mrna and protein expression of BMI 1 in ECA109 cells, respectively. The Transwell chamber assay was used to evaluate the migration ability of BMI 1 knockdown ECA109 cells. The MTT assay, flow cytometry, and colony formation assay were used to evaluate the effects of BMI 1 knockdown on the radiosensitivity of ECA109 cells. Results Compared with the NC group and the control group, the BMI 1 sirna group had significantly lower mrna and protein expression of BMI 1 and significantly reduced cell proliferation and migration after exposure ( P = 0 024,P = 0 000). According to the results of the colony formation assay, there was no significant difference in radiosensitivity between the control group and the NC group (P = 0 025,P = 0 031), while the BMI 1 sirna group had significantly higher radiosensitivity than the control group and the NC group ( P = 0 000). According to the results of flow cytometry, the BMI 1 sirna group had a significantly lower percentage of G 2 / M cells and significantly increased apoptosis after exposure than the control group and the NC group ( P = 0 000,0 000);however, there was no significant difference in apoptosis between the three groups before radiation ( P = 0 350). Conclusions SiRNA mediated BMI 1 knockdown and X ray radiation effectively reduce the expression of BMI 1, inhibit sublethal

2 中华放射肿瘤学杂志 2016 年 12 月第 25 卷第 12 期 Chin J Radiat Oncol,December 2016,Vol.25,No damage repair, and increase the radiation lethality in esophageal cancer ECA109 cells. Key words BMI 1 gene; RNA interference; DNA damage; Radiosensitivity Fund programs:national Natural Science Foundation of China ( ); Funded by the Hebei Provincial Administration of traditional Chinese Medicine ( ); Funded by the Institute of medical science of Hebei Province ( , ) BMI 1 作为多梳基因家族成员之一, 在多种恶性肿瘤中高表达, 如 B 细胞非霍奇金淋巴瘤非小细胞肺癌结肠癌乳腺癌和前列腺癌胃癌等 [1 2] 有研究报道,BMI 1 在食管癌中高表达, 并可引起食管癌的放射抵抗 [3] 然而,BMI 1 在放疗后的损伤修复中如何发挥调控作用仍需解决, 以阐明控制 DNA 损伤反应的重要机制为了鉴定调控 BMI 1 在放射损伤修复中功能的重要作用, 本研究通过 sirna 抑制 BMI 1 的表达以观察其对食管癌 ECA109 细胞增殖迁移等生物学行为的影响, 并探讨了相关机制, 为食管癌的临床治疗提供新的依据材料与方法 1. 细胞系与照射 : 食管癌 ECA109 细胞系河北医科大学第四医院科研中心提供小片段 sirna 为美国 Invitrogen 生产脂质体转染试剂 Lipofectamine RNAiMAX 为美国 Invitrogen 公司生产兔抗人 BMI 1 单克隆抗体为美国 Abcam 公司生产 ; 碱性磷酸酶标记的 IgG 羊抗兔二抗为北京博奥森生物公司生产 ;BCIP / NBT 底物显色试剂盒为美国 Ameresco 公司生产 ; 单克隆抗体 β actin 购自美国 Abcam 公司应用 6 MV X 线直线加速器室温下照射 6 Gy, 机架角 180, 源皮距 100 cm, 照射面积 20 cm 20 cm, 培养瓶下置 0 5 cm 组织补偿膜 2. 细胞转染 : 当人食管癌 ECAl09 细胞贴壁生长达到 80% ~ 90% 融合时, 脂质体 Lipofectamine RNAiMAX 包裹小片段 sirna, 转染 ECAl09 细胞细胞分为对照组空载对照组 BMI 1 sirna 实验组对照组 + 照射组空载对照组 + 照射组及 BMI 1 sirna 实验组 + 照射组细胞转染 24 h 后照射细胞, 照射后 1 h 收集细胞提取总 RNA 和蛋白,RT PCR 和蛋白印迹法分别检测基因和蛋白表达, 取干扰效果最佳序列的小片段 sirna 进行后续实验 3.RT PCR 检测 : 由上海生工生物技术服务有限公司负责设计合成引物,BMI 1 引物序列正义链为 :5 ATGATAAAAGATACTTACGATGCCCAG 3, 负义链为 : 5 GAACTCTGTATTTCAATGGAAGTGGAC 3, 扩增大小 207 bp GAPDH 基因引物序列 : 上游引物 : 5 CGCTGAGTACGTCGTGGAGTC 3, 下游引物 :5 GCTGATGATCTTGAGGCTGTTGTC 3, 拟扩增的片段长度为 172 bp PCR 反应条件为 s 94 5 s s s 进行 40 个循环 ;2% 琼脂糖凝胶电泳, 紫外线下观察拍照 4. 蛋白印迹检测相关蛋白表达 : 根据蛋白提取试剂盒说明提取细胞总蛋白, 用 BCA 法测定蛋白浓度,10% 的 SDS PAGE 分离, 转膜封闭, 加入一抗 BMI 1( 稀释 ),4 温度过夜, 碱性磷酸酶标记 IgG 二抗 ( ) 于 37 oc 摇床温育 1 h, TBST 洗 3 次,5 min / 次, 然后 Odyssey 红外成象系统拍照 β actin 为内参 5.MTT 法检测照射前后降低 BMI 1 基因表达后细胞的增殖能力 : 取指数生长期细胞调整浓度为 / ml 接种 96 孔培养板,200 μl / 孔,37 5% CO 2 饱和湿度条件下过夜, 次日转染沉默 BMI 1 的小片段 RNA, 并将转染空载体及未转染的 ECA109 作为阴性对照和空白对照, 转染 24 h 后 X 线照射 6 Gy, 分别在照射后 h 收集细胞,MTT 法检测各组细胞的增殖活性, 每组设 3 个复孔 6.Transwell 转移实验检测照射前后降低 BMI 1 蛋白表达对癌细胞迁移能力影响 : 取上述各组细胞在照射后 1 h, 用 0 25% 胰酶消化, 离心后沉淀用无胎牛血清的 RPMI 1640 培养基重悬, 调整细胞密度至 / ml 取 200 μl 细胞悬液加入 Transwell 小室, 下室加 500 μl 含 10% 胎牛血清的 RPMI 1640 培养基将放有小室的培养板置于 37 5% CO 2 饱和湿度培养箱内培养 3 5 h 移去 Transwell 小室, 棉签擦去上室内的细胞, 将小室倒置风干然后用 0 1% 结晶紫染色小室底膜下室侧 8 min, 流水小心冲洗后风干将小室放入 24 孔板, 用倒置显微镜进行观察和拍片在 200 倍下随机计数 5 个视野, 计数每个视野内穿过微孔膜的细胞数 ( 细胞被染成紫色 ), 以迁移细胞的相对数目来表示肿瘤细胞的迁移能力 7. 细胞克隆形成实验检测细胞放射敏感性 : 取指数生长期的各组细胞, 消化后计数, 稀释后得到不同浓度细胞, 根据不同细胞数目给予不同剂量照射细胞个数分别为个, 相应照射剂量分别为 Gy, 每组照射剂量设 3

1364 中华放射肿瘤学杂志 2016 年 12 月第 25 卷第 12 期 Chin J Radiat Oncol,December 2016,Vol.25,No.12 个平行孔照射后培养 14 d, 甲醛固定, 结晶紫染色, 显微镜下计数 50 个细胞数的克隆数 PE = 对照组克隆数 / 细胞接种数 100%,SF = 实验组克隆数 / ( 细胞接种数 PE) 实验重复 3 次 8.

histogram ststistic 分析软件测定各实验组食管癌细胞周期的变化收集照射后 24 h 的 ECA109 食管癌细胞, 用 PBS 洗涤 3 遍弃上清, 加 100 μl 1 buffer 再加入 Annexin V 2 5 μl,4 静置 5 min; 加入 PI10 μl,4 静置 5 min, 然后加入 1 buffer 400 μl,

3 1364 中华放射肿瘤学杂志 2016 年 12 月第 25 卷第 12 期 Chin J Radiat Oncol,December 2016,Vol.25,No.12 个平行孔照射后培养 14 d, 甲醛固定, 结晶紫染色, 显微镜下计数 50 个细胞数的克隆数 PE = 对照组克隆数 / 细胞接种数 100%,SF = 实验组克隆数 / ( 细胞接种数 PE) 实验重复 3 次 8. 流式细胞术分析各实验组照射前后食管癌细胞周期和凋亡变化 : 取上述各组细胞在照射后 24 h 收集, 用 PBS 洗涤 3 遍, 并重新悬浮于预冷的 70% 乙醇中,4 固定 2 h; 离心弃固定液, 用 PBS 悬浮细胞 5 min 后于 300 目筛网过滤 ; 加入 PI 染液, 室温反应 10 min,4 避光染色 30 min 用流式细胞仪 (Beckman) 应用 Single histogram ststistic 分析软件测定各实验组食管癌细胞周期的变化收集照射后 24 h 的 ECA109 食管癌细胞, 用 PBS 洗涤 3 遍弃上清, 加 100 μl 1 buffer 再加入 Annexin V 2 5 μl,4 静置 5 min; 加入 PI10 μl,4 静置 5 min, 然后加入 1 buffer 400 μl, 轻晃混匀上机检测各实验组食管癌细胞的凋亡分布 9. 统计方法 : 在 Graph Pad Prism 5 0 软件中, 使用单击多靶模型计算放射生物学参数并拟合剂量存活曲线采用 SPSS 13 0 软件对组间比较行重复测量设计资料方差分析 P<0 05 差异有统计学意义图 1 照射前后食管癌细胞 ECA109 在不同实验组中 BMI 1 mrna 表达情况 (1A 为照射前,1B 为照射后 ;1 为对照组,2 为空载组,3 为 BMI 1 sirna 实验组 ;3 与 1 2 比较 P = ; 照射后与照射前比较 P = ) 结果 1. 食管癌细胞 ECA109 照射前后 BMI 1 基因和蛋白的表达 :RT PCR 检测结果显示, 照射后 BMI 1 sirna 组细胞中 BMI 1 mrna 的表达明显低于对照组和空载组 ; 而未照射时, 三组中 BMI 1mRNA 的表达差异无统计学意义 ( 图 1) 此外, 照射后各组 BMI 1mRNA 的表达显著高于相应各组照射前的水平 (P = ) 同时, 蛋白印迹检测结果显示, 照射后 BMI 1 sirna 组细胞中 BMI 1 蛋白表达水平较对照组空载组分别下降了 73 5%(0.215± ± 0 041) 和 73 6% ( 0.215± ± 0 042)(P = ), 而空载组与对照组相比无统计学意义 ( 0.811± ± ) ( P = 0 288); 而未照射时, 三组中 BMI 1 蛋白的表达差异无统计学意义 ( 图 2) 此外, 照射后对照组与空载组 BMI 1 蛋白的表达较其相应照射前的水平明显增加 (P = ), 而与照射前相比, 照射后 BMI 1 sirna 组 BMI 1 蛋白的表达水平显著下降 ( P = 0 028) 2.BMI 1 sirna 转染对 ECA109 细胞照射前后增殖能力的影响 : 如图 3 所示, 与对照组和空载组相比, BMI 1 sirna 组中细胞的增殖水平在照射后图 2 照射前后食管癌细胞 ECA109 在不同实验组中 BMI 1 蛋白表达情况 (2A 为照前,2B 为照后 ;1 为对照组,2 为空载组,3 为 BMI 1 sirna 实验组 ;3 与 1 2 比较 P = ; 照后与照前比较 P = ) 24 ~ 72 h 明显降低 ( P = ), 而对照组与空载组相比差异无统计学意义 ( P = ) 此外, 未照射时, 各组细胞增殖水平未见统计学差异 (P = 0 207) 并且, 各组在照射后 h 增殖水平明显高于相应照射前水平 ( P = ), 而照射后 24 h 增殖水平与照射前没

BMI 1 sirna 转染对食管癌细胞照射前后迁移能力影响 :Transwell 侵袭小室模型检测结果显示照后 BMI 1 sirna 组穿膜细胞数明显低于对照组和空载组 ( P = 0 031 0 026) 对照组和空载组相比穿膜细胞数相近 (P = 0 621) 此外, 对照组和空载组穿膜细胞数明显高于相应未照射组 ( P = 0 034 0 036), 而 BMI 1

4 中华放射肿瘤学杂志 2016 年 12 月第 25 卷第 12 期 Chin J Radiat Oncol,December 2016,Vol.25,No 有明显差异 (P = 0 675) 图 3 照射前后食管癌细胞 ECA109 在不同时间的增殖水平 (3A 为照射前,3B 为照射后 ;1 为对照组,2 为空载组,3 为 BMI 1 sirna 实验组 ;3 与 1 2 比较 P = ; 照射后与照射前比较 P = ) 3.BMI 1 sirna 转染对食管癌细胞照射前后迁移能力影响 :Transwell 侵袭小室模型检测结果显示照后 BMI 1 sirna 组穿膜细胞数明显低于对照组和空载组 ( P = ) 对照组和空载组相比穿膜细胞数相近 (P = 0 621) 此外, 对照组和空载组穿膜细胞数明显高于相应未照射组 ( P = ), 而 BMI 1 sirna 组穿膜细胞数显著低于其未照射组 (P = 0 029) 余见图 4 图 5 4. 克隆形成实验 : 克隆形成实验结果显示对照组空载组干扰组的 D 0 值分别为 Gy;D q 值分别为 Gy;SF 2 值分别为放射增敏比 SER 为对照组 SF 2 与干扰组 SF 2 的比值, 为对照组和空载组放射敏感性未见明显差异, 而干扰组的放射敏感性显著高于对照组和空载组 ( 图 6) 5.BMI 1 sirna 转染对照射前后食管癌细胞周期的影响 : 未照射组的对照组空载组 BMI 1 sirna 组细胞中处于 G 0 +G 1 期 G 2 +M 期和 S 期的比例未见明显差异 (P = ) 而照射后处于 G 0 +G 1 期细胞的比例均明显低于相应未照射组图 4 显微镜下照射前后食管癌细胞 ECA109 的迁移能力图示 ( 200, 上为照射前, 下为照射后 )

1366 中华放射肿瘤学杂志 2016 年 12 月第 25 卷第 12 期 Chin J Radiat Oncol,December 2016,Vol.25,No.

= 0 031 0 026; 照射后与照射前比较 P = 0 034 0 036 0 029) 图 8 照射前后食管癌 ECA109 细胞凋亡的影响 (1 为对照组,2 为空载组,3 为 BMI 1 sirna 实验组 ;3 与 1 2 比较 P = 0 000 0 000; 照射后与照射前比较 P = 0 023 0 027 0 000) 讨论 [4 5] BMI 1 在各种肿瘤中高表达,

sirna 组 G 2 +M 期的比例稍高于未照射组 (P = 0 341), 且 BMI 1 sirna 组处于 G 2 + M 期的比例均明显低于照射后的对照组空载组 (P = 0 000) 照射前后各组处于 S 期的细胞比例相近 (P = 0 534, 图 7) 图 7 照射前后食管癌细胞 ECA109 周期分布 ( 3 与 1 2 比较 P = 0 000 0 000;

5 1366 中华放射肿瘤学杂志 2016 年 12 月第 25 卷第 12 期 Chin J Radiat Oncol,December 2016,Vol.25,No ), 而照射前 BMI 1 sirna 组细胞凋亡率较对照组和空载组稍高 ( P = 0 350); 照射后, BMI 1 sirna 组细胞凋亡率明显高于对照组空载组 (P = , 图 8) 图 5 照射前后食管癌细胞 ECA109 的迁移能力 (1 为对照组,2 为空载组,3 为 BMI 1 sirna 实验组 ;3 与 1 2 比较 P = ; 照射后与照射前比较 P = ) 图 8 照射前后食管癌 ECA109 细胞凋亡的影响 (1 为对照组,2 为空载组,3 为 BMI 1 sirna 实验组 ;3 与 1 2 比较 P = ; 照射后与照射前比较 P = ) 讨论 [4 5] BMI 1 在各种肿瘤中高表达, 如恶性淋巴瘤图 6 克隆形成实验检测 BMI 1 对食管癌细胞 ECA109 放射敏感性影响 (P = ), 且 BMI 1 sirna 组处于 G 0 +G 1 期的比例均明显高于照射后的对照组和空载组 (P = 0 000); 照射后对照组和空载组处于 G 2 +M 期的比例均明显高于相应未照射组 ( P = ), 而 BMI 1 sirna 组 G 2 +M 期的比例稍高于未照射组 (P = 0 341), 且 BMI 1 sirna 组处于 G 2 + M 期的比例均明显低于照射后的对照组空载组 (P = 0 000) 照射前后各组处于 S 期的细胞比例相近 (P = 0 534, 图 7) 图 7 照射前后食管癌细胞 ECA109 周期分布 ( 3 与 1 2 比较 P = ; 照射后与照射前比较 P = ) 6.BMI 1 sirna 转染对照射前后食管癌细胞凋亡的影响 : 流式细胞术检测结果显示, 照射后各组细胞凋亡率均明显高于相应未照射组 ( P = 和各种实体瘤 [6 8] 本研究设计了 sirna 靶向沉默 BMI 1 以检测 X 线照射前后其在蛋白和 mrna 水平的表达, 结果发现未照射时各组之间 BMI 1 的表达无差异, 而照射后对照组和空载组中 BMI 1 mrna 和蛋白的表达均明显高于相应未照射组, 但 BMI 1 sirna 实验组蛋白的表达显著低于其未照射组, 表明 BMI 1 在基因和蛋白的表达水平上不完全一致此外, 更重要的是, 在 BMI 1 sirna 组中 X 线照射后 BMI 1 蛋白和基因的表达均明显低于对照组和空载组, 表明电离辐射可能有利于 sirna 靶向降低 BMI 1 的表达, 这为食管癌的综合治疗提供了一种新的思路有研究报道,siRNA 下调 BMI 1 的表达降低了肺癌细胞生长侵袭和迁移能力 [9] 我们也研究了 X 线照射前后 BMI 1 对食管癌细胞增殖影响, 结果发现食管癌 ECA109 细胞中各组在 X 线照射后 h, 细胞增殖水平明显高于相应未照射组, 而 BMI 1 sirna 组在 X 线照射后不同时间细胞增殖水平均明显低于对照组和空载组 ; 然而, 未照射时各组之间差异并不明显, 这表明 X 线照射联合 sirna 能有效的抑制肿瘤细胞增殖此外, 在迁移能力方面, 我们观察到未照射时各组的迁移细胞数无差异, 而照射后 BMI 1 sirna 组迁移细胞数显著低于对照组和空载组 ; 对照组和空载组穿膜细胞数明显高于相应未照射组, 而照射后 BMI 1 sirna 组穿膜细胞数显著低于其未照射组, 由此显示 X 线照射后沉默 BMI 1 基因明显降低了食管癌 ECA109 细胞增殖和

6 中华放射肿瘤学杂志 2016 年 12 月第 25 卷第 12 期 Chin J Radiat Oncol,December 2016,Vol.25,No 迁移能力, 但其调控增殖和迁移的机制可能不同本研究克隆形成实验结果表明,BMI 1 sirna 组细胞增殖受到明显抑制,SF 值显著低于对照组与空载组, 而空载组与对照组未见差异 ; 干扰组细胞 D q 值明显小于对照组和空载组的, 且放射增敏比为确实有放射增敏作用 ; 而 BMI 1 sirna 组中 D q 值变小, 提示沉默 BMI 1 表达增加 ECA109 放射致死效率是通过抑制亚致死性损伤修复来实现的细胞的放射敏感性与细胞周期关系密切, 而细胞周期阻滞和凋亡在照射后 DNA 损伤修复中起重要作用有研究发现 BMI 1 的高表达会引起 G 2 +M 期增加 [10 11] 本研究数据显示, 照射后 BMI 1 sirna 组细胞凋亡明显高于对照组和空载组, 而照射时三组差异并不明显, 且照射后各组细胞的凋亡率明显增加此外, 照射后 BMI 1 sirna 组中 G 2 +M 期的比例显著低于对照组和空载组, 表明采用 sirna 降低 BMI 1 的表达后进行 X 线照射消除了细胞 G 2 +M 期阻滞并增加了细胞凋亡, 与以往食管癌和宫颈癌相关的报道一致 [12 14] 总之, 我们探讨了照射前后 sirna 沉默 BMI 1 的表达对食管癌增殖和迁移能力的影响结果证实照射后抑制 BMI 1 的表达, 降低了食管癌 ECA109 细胞增殖和迁移能力, 消除了 G 2 +M 周期的阻滞, 增加了细胞凋亡和放射敏感性为了更深入的阐释 BMI 1 与放射敏感性之间的关系, 将来我们将进一步从临床标本中研究 BMI 1 与肿瘤的临床分期和淋巴结转移等的关系, 以便为食管癌的临床靶向治疗提供科学研究参考文献 [1] Kimura M,Takenobu H,Akita N,et al. Bmi1 regulates cell fate via tumor suppressor WWOX repression in small cell lung cancer cells [J].Cancer Sci,2011,102 ( 5): DOI: / j x. [2] Chen YT, Lian GD, Zhang QB, et al. Overexpression of bmi 1 induces the malignant transformation of gastric epithelial cells in vitro [J]. Oncol Res, 2013, 21 ( 1 ): DOI: / X [3] Dong QH, Sharma S, Liu H, et al. HDAC inhibitors reverse acquired radio resistance of KYSE 150R esophageal carcinoma cells by modulating Bmi 1 expression [ J]. Toxicology Letters, 2014,224(1): DOI: / j.toxlet [4] Bhattacharyya J, Mihara K, Ohtsubo M, et al. Overexpression of BMI 1 correlates with drug resistance in B cell lymphoma cells through the stabilization of survivin expression [ J]. Cancer Sci, 2012,103(1):34 41.DOI: / j x. [5] Raaphorst FM. Deregulated expression of Polycomb group oncogenes in human malignant lymphomas and epithelial tumors [J].Hum Mol Genet, 2005, 14 ( Suppl 1): R93 R100. DOI: / h mg / ddi111. [6] He X, Dong Y, Wu CW, et al. Microrna 218 inhibits cell cycle progression and promotes apoptosis in colon cancer by downregulating bmi1 polycomb ring finger oncogene [ J].Mol Med, 2012,18: DOI: / molmed [7] Guo BH, Feng Y, Zhang R, et al. Bmi 1 promotes invasion and metastasis, and its elevated expression is correlated with an advanced stage of breast cancer [ J]. Mol Cancer, 2011, 10: 10. DOI: / [8] Song WJ,Tao KS,Li HM,et al. Bmi 1 is related to proliferation, survival and poor prognosis in pancreatic cancer [ J]. Cancer Sci, 2010, 101 ( 7 ): DOI: / j x. [9] Liang W, Zhu DJ, Cui XJ, et al. Knockdown bmi1 expression inhibits proliferation and invasion in human bladder cancer t24 cells [J]. Mol Cell Biochem, 2013, 382 ( 1): DOI: / s [10] Xu Z, Liu H, Lv X, et al. Knockdown of the BMI 1 oncogene inhibits cell proliferation and induces cell apoptosis and is involved in the decrease of Akt phosphorylation in the human breast carcinoma cell line MCF 7 [ J].Oncol Rep,2011,25(2): DOI: / or [11] Yao XB,Wang XX, Liu H, et al. Silencing Bmi 1 expression by RNA interference suppresses the growth of laryngeal carcinoma cells [ J].Int J Mol Med,2013,31(5): DOI: / ijmm [12] Liu WL,Guo XZ,Zhang LJ,et al. Prognostic relevance of BMI 1 expression and autoantibodies in esophageal squamous cell carcinoma [ J]. BMC Cancer,2010,10:467. DOI: / [13] Min L,Dong Xiang S,Xiao Tong G,et al. Clinicopathological and prognostic significance of bmi 1 expression in human cervical cancer [J]. Acta Obstet Gynecol Scand,2011,90 ( 7): DOI: / j x. [14] Wang GY, Liu LY, Sharma S, et al. Bmi 1 confers adaptive radioresistance to KYSE 150R esophageal carcinoma cells [ J]. Biochem Biophys Res Commun,2012,425( 2): DOI: / j.bbrc ( 收稿日期 : )

12 (autophagy),imagej,,, 3 [1-4] (self-eating) Transwelinvasion, 20μmol L -1 LY A549 [5] PI3K/AKT 24h,PBS, [6-8],, ml -1 ( ) 600μL

12 (autophagy),imagej,,, 3 [1-4] (self-eating) Transwelinvasion, 20μmol L -1 LY A549 [5] PI3K/AKT 24h,PBS, [6-8],, ml -1 ( ) 600μL ( )2017 57 5JournalofNanchangUniversity(MedicalSciences)2017,Vol.57No.5 11 LY294002, (, 330006) : LY294002 PI3K/AKT 0 10 15 20 25 30μmol L -1 LY294002(LY294002 ) A549,PBS CCK8 LY294002 A549 ; Westernblot