肺癌患者教育万人行

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郊萌洪
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1 中国医药教育协会肺部肿瘤专业委员会肺癌靶向治疗相关靶点的检测 L o g o Academic Committee of Thoracic Oncology Society of CMEA

2 声明 Centre of Excellence 本专委会 ( ) 制作的幻灯以学术交流为目的, 所有幻灯著作权均为本专委会所拥有, 本专委会拥有所有法定权利任何个人或组织不得未经本专委会许可转载或挪作他用 ; 如需转载或他用, 需征得本专委会许可, 并在转载时请保持相关内容完整性, 并标注出处 ( 专委会幻灯出处编辑者署名等 )

3 NSCLC 驱动基因信号通路及靶向药物 Centre of Excellence 理论上, 信号通路中基因都有检测需要 Zer and Leighl.frontiers in oncology Volume 4.Article 329

$8% 21% 25% 36% 3% 3%3% 10% 81% 无突变 P53 KRAS EGFR PI3K 肺腺癌 :EGFR\KRAS\BRAF\ALK-ROS1\RET 等检测已是共识 ; 肺鳞癌发生模式不同, 检测靶标以扩增为主, 同时 EGFR ALK\ROS1 某些病例也有必要检测 Aisner DL, et$

4 肺癌驱动基因的突变谱 : 腺癌 & 鳞癌 Centre of Excellence 肺腺癌肺鳞癌 0.7% 2.2% 0.8% 0.7% 2.6% 0.1% 3.3% 7.8% 21% 25% 36% 3% 3%3% 10% 81% 无突变 P53 KRAS EGFR PI3K 肺腺癌 :EGFR\KRAS\BRAF\ALK-ROS1\RET 等检测已是共识 ; 肺鳞癌发生模式不同, 检测靶标以扩增为主, 同时 EGFR ALK\ROS1 某些病例也有必要检测 Aisner DL, et al ASCO Abstract Gadgeel SM, et al ASCO Abstract 7592.

6 EGFR 篇

7 ARMS 法检测 EGFR 突变已成临床常规 Centre of Excellence 2013 年院内 EGFR 检测平台 2014 年新建的院内 EGFR 检测平台截至 2014 年 12 月全国共有 110 家医院建立了院内 EGFR 基因突变检测平台采用的大多为 ARMS 检测方法 7 Data form AstraZeneca China internal 7

8 关于 EGFR-T790M 位点突变及检测 Centre of Excellence T790M 位点突变在 NSCLC 致癌过程中的地位 driver gene or weak oncogene or regulator only? De novo T790M 位点突变的频率? T790M 仅仅是一个 SNV, 为什么在检测中会出现同时或异时检测结果的异质性? 为什么组织学与血液配对检测一致性较低? 当出现检测结果不一致的情况时, 对策?

9 Table 1 C oncordance of E G FR m utations detection by plasm a cs M A R T assay and tum or sam ples A R M S -P C R test in advanced LA D C patients M utation S ensitivity* S pecificity** L858R 91.7% (22/24) 100.0% (76/76) 19del 79.2% (19/24) 100.0% (76/76) T790M 50.0% (2/4) 72.9% (70/96) * S ensitivity = A /(A +C ) 100% ** S pecificity = D /(B +D ) 100% W here A = tum or sam ples positive/ plasm a positive true positives; B = tum or sam ples negative/ plasm a positive - false positives; C = tum or sam ples positive / plasm a negative - false negatives; D = tum or sam ples negative/ plasm a negative - true negatives

10 Figure 1 E G FR m utation profile of plasm a sam ples from healthy people and advanced LA D C patients A Log 2 (M ut D N A ) NC:50 H ealthy vonlunteers A dvanced LA D C plasm a sam ples B Log 2 (M ut D N A ) NC:50 H ealthy vonlunteers A dvanced LA D C plasm a sam ples C Log 2 (M ut D N A ) NC:50 H ealthy vonlunteers A dvanced LA D C plasm a sam ples

12 结果 Centre of Excellence

13 结果 Centre of Excellence

14 在 NSCLC 患者中 T790M 位点突变几乎总与其他基因改变同时发生, 很少单独被检测到, 所以有文献认为 T790M 位点突变是一个 weak oncogene NSCLC 患者 De novo T790M 位点突变频率为 30% 左右检测同时及异时的异质性, 以及同时不同标本的异质性, 说明该基因位点的 Variable 的特点血液检测出现部分所谓的假阳性对于 T790M 位点的特点, 金标准的检测标本及检测方法?

15 香港 Tony Mok 教授的讲稿 T790M 位点检测可能不存在所谓金标准的检测方法及检材

16 ALK 篇

17 ALK 检测方法 Centre of Excellence Northern blot IHC [Ventana IHC ALK(D5F3), 手动 IHC] RT-PCR+Sanger sequencing RT-PCR(Reverse transcription PCR) ISH [FISH, SISH,CISH,RNAscope] NGS

18 CFDA 获批的三种诊断方法 Centre of Excellence Isolated red Split ALK IHC (Roche Ventana) ALK break-apart FISH assay (Abbott Molecular, Vysis probes) Amoy Dx EML4-ALK 融合基因检测试剂盒 RT-PCR ( 厦门艾德 )

19 Ventana IHC 与 FISH 检测结果比较 Centre of Excellence FISH 总数敏感性特异性一致率阳性阴性 Ventana IHC(1) 阳性 % 98.20% 98.40% 阴性 Ventana IHC(2) 阳性 % 100% 99.10% 阴性 Ventana IHC(2) 阳性 % 100% 100% 阴性 Ventana IHC(3) 阳性 % 96% 94% 阴性 Ventana IHC(4) 阳性 % 100% 99.60% 阴性 Ventana IHC(5) 阳性 % 98.4% 98.9% 阴性 (1)Jinghui Wang,et al. PLoS ONE (7): e (2) Eugen C. Minca,et al. J Mol Diagn 2013, 15: (3) Murry W. Wynes,et al. J Thorac Oncol. 2014;9: (4) Greta,et al. Arch Pathol Lab Med. doi: /arpa OA (5)J.Ying;et al. Annals of oncology.2013,24:

20 0 CST-IHC Neg Ventana-IHC Ventana-IHC 原理 : 在常规 IHC 之后加入扩增信号, 并且通过充分洗涤一抗避免假阳性 ---- 创建一个二元的判读系统 1+ Pos Pos 2+ Pos 3+ Pos J.Ying,et al. Annals of Oncology 2013;

21 Log 2 (2mL 血浆中突变片段 ) csmart ALK 血液检测 Centre of Excellence 2mL 血浆检测 csmar T 组织样本 ARMS 检测阳性 (+) 阴性 (-) 合计 50.0% 灵敏度 / 阳性符合率 100% 特异性 / 阴性符合率阳性 (+) 阴性 (-) 合计 % 总符合率 48.5% Kappa 值 NC:50 例未患肿瘤正常人对照

22 ALK rearrangement on circulating tumor cells from NSCLC 分析了 87 例 NSCLC 患者的肿瘤组织和血液样本 5 例 ALK 阳性样本被鉴定出来, 没有发现组织阳性,CTC 阴性的患者采用 FISH 和免疫组化进行 ALK 融合的检测 Annals of Oncology 23: , 2012

23 Detection of EML4-ALK by RT-PCR in plasma and platelets EML4-ALK Rearrangement detected in Plasma NSCLC patients N = 32* N = 67* EML4-ALK-rearranged tumor EML4-ALK rearrangement not detected in tumor 3/14 22/34 0/18 0/33 Healthy controls nd 0/21 Sensitivity 21% 65% Specificity 100% 100% Accuracy 66% 86% 相对于血浆, 血小板检测的灵敏度更高, 准确性也更高 EML4-ALK Rearrangement detected in Platelets Oncotarget, 2016 Vol. 7, No. 1

24 ALK 融合组织阳性, 血小板检测阴性的患者,PFS 更长 Centre of Excellence Oncotarget, 2016 Vol. 7, No. 1 Platelets are a valuable source for the non-invasive detection of EML4-ALK rearrangements and may prove useful for predicting and monitoring outcome to crizotinib

25 Exosomal RNA-based liquid biopsy detection of EML4-ALK in plasma from NSCLC patients Centre of Excellence IASLC Presentation 2591

26 其他低频突变基因检测

27 ROS1 检测方法及试剂 : IHC ROS1(D4D6);RT-PCR(Amoy);FISH(Abbott/ZytoLight); IHC 结果判读 :0-3+ 0: no staining; 1+:faint cytoplasmic reactivity without any background staining; 2+:moderate cytoplasmic reactivity; 3+:granular cytoplasmic reactivity of strong intensity in 10% of tumor cell 0:no staining or nuclear expression only; 1+:faint cytoplasmic staining not exceeding background in any cells; 2+: cytoplasmic staining exceeding background in 0% 50% of tumor cells; 3+:cytoplasmic staining exceeding background in >50% of tumor cells Detection of ROS1 Gene Rearrangement in Lung Adenocarcinoma;Dongmei Lin;Plos One,2015,Mar Detection of lung adenocarcinoma with ROS1 rearrangement;bing Cao,OncoTargets and Therapy;2015,Dec

28 IHC 法与 RT-PCR 检测 ROS1 结果对比 Centre of Excellence IHC(+) vs. RT-PCR(-) vs. FISH(-) IHC(-) vs. RT-PCR(+) Zhou X, et al. Onco Targets Ther Lin D, et al. PLoS One IHC 检测结论 : 筛选方法 28 28

29 FISH 结果判读 : The rearrangement positive cells were defined as those with split signals or isolated green signals. The specimen was considered as ROS1-rearranged if the rearrangement-positive cells constituted 15% of the enumerated tumor cells

30 细胞学 ROS1 检测数据分享 Centre of Excellence 2015 年 1 月年 4 月 227 例胸水细胞学标本制作细胞学蜡块常规进行 ROS1(CST-D4D6)IHC 染色抗体稀释 1:200 并对其中 182 例进行了 RT-PCR 对比试验

31 ROS1+(IHC) ROS1-(IHC) 总数 ROS1+(RT-PCR) ROS1-(RT-PCR) 总数 ROS1(D4D6)IHC: 灵敏性 100%; 特异性 99.44% ROS1 一致性 :99.45%(181/182)

32 ROS1(D4D6) Centre of Excellence

33 ROS1(D4D6) Centre of Excellence

34 胸水细胞学标本 ROS1 (D4D6)IHC 染色结果判断标准不同于组织学标本, 绝大部分病例为或阴或阳的判读结果, 似乎不用进行 0-3+ 的判读形式本观察研究中, 仅有 2 例出现疑似阳性信号, 但与真正阳性病例染色模式不同

(3F8/mouse monoclonal/clone C-Terminus) RET expression and detection of KIF5B/RET gene rearrangements in Japanese

35 正在研发的 RET 融合 IHC 检测抗体 Centre of Excellence The report suggested IHC test was sensitive but not specific IHC-positivity for RET protein in ADC was not correlated with RET rearrangements and/ormrna overexpression. (3F8/mouse monoclonal/clone C-Terminus) RET expression and detection of KIF5B/RET gene rearrangements in Japanese lc Cancer Medicine 2012; 1(1) Diagnostic method for the detection of KIF5B-RET transformation in lung ADC Lung Cancer 82 (2013) 44 50

36 Modern Pathology (2015) 28,

38 细胞学标本 RET 基因蛋白表达检测 Centre of Excellence 在 202 个肺腺癌胸水标本中应用 RT-PCR 方法检测 RET 基因融合发现 6 例阳性患者, 阳性率 3.96%(8/202) 其中男性 5 例, 女性 3 例, 年龄岁应用 abcam 的 RET 抗体 [EPR2871,ab134100] 进行 IHC 染色, 以证实该抗体筛选 RET 基因融合的可靠性抗体稀释 1:200

39 RET 基因重排阳性病例

40 RET 基因重排阳性病例

41 RET 基因重排阴性患者

42 结果判读中的问题

43 如何实现 NSCLC 最优化精准检测策略 Centre of Excellence 1. 被测基因选择完全满足国内已上市靶向药物的靶点需求 EGFR ALK ROS1 1. 检测平台选择 CFDA 批准用于临床检测的试剂 / 方法项目 RT-PCR FISH IHC NGS EGFR 突变 ALK 融合 ROS1 融合 43 43

44 总结 Centre of Excellence 临床检测强调试剂的高灵敏度高特异性及稳定性, 要采用权威机构批准使用的试剂应用好我们传统的分子病理检测技术, 不忘老朋友积极学习掌握新技术更好为临床患者服务

45 致谢 : 白冲第二军医大学附属长海医院曾瑄北京协和医院常建华复旦大学附属肿瘤医院陈公琰哈尔滨医科大学附属肿瘤医院丁翠敏河北医科大学第四医院丁礼仁浙江大学医学院附属第二医院姚烽 / 方文涛上海交通大学附属胸科医院傅小龙上海交通大学附属胸科医院高蓓莉上海交通大学附属瑞金医院谷伟南京医科大学第一附属医院姜丽岩上海交通大学附属胸科医院李达浙江大学医学院附属邵逸夫医院刘莉华中科技大学同济医学院附属协和医院刘士远第二军医大学附属长征医院孙加源上海交通大学附属胸科医院王凯浙江大学医学院附属第二医院王征北京医院徐建芳同济大学附属上海市肺科医院颜美琼上海交通大学附属胸科医院张杰上海交通大学附属胸科医院张晓菊河南省人民医院张新复旦大学附属中山医院赵快乐复旦大学附属肿瘤医院肺部肿瘤专委会秘书处按首字母排名, 不分先后

46 谢谢!

肺癌患者教育万人行

肺癌患者教育万人行中国医药教育协会肺部肿瘤专业委员会肺癌分子检测进展 L o g o Academic Committee of Thoracic ncology Society of CMEA 声明本专委会 ( ) 制作的幻灯以学术交流为目的, 所有幻灯著作权均为本专委会所拥有, 本专委会拥有所有法定权利任何个人或组织不得未经本专委会许可转载或挪作他用 ; 如需转载或他用, 需征得本专委会许可, 并在转载时请保持相关内容完整性,