242 滨州医学院学报 2012 年 8 月第 35 卷第 4 期 BMU Journal,Aug. 2012,Vol. 35,No. 4 树花多糖 ( 浙江方格药业有限公司 ), 顺铂 ( 南京制药有限公司 ),RPMI-1 640( 美国 GIBCO 公司 ),MTT [3-( 3,4 - 二甲

Size: px

Start display at page:

Download "242 滨州医学院学报 2012 年 8 月第 35 卷第 4 期 BMU Journal,Aug. 2012,Vol. 35,No. 4 树花多糖 ( 浙江方格药业有限公司 ), 顺铂 ( 南京制药有限公司 ),RPMI-1 640( 美国 GIBCO 公司 ),MTT [3-( 3,4 - 二甲"

顷余
5 years ago
Views:

1 241 论著灰树花多糖治疗卵巢癌体外实验观察 1 吕耀凤 2 霍颖倩 1 滨州医学院妇产科学教研室滨州 ; 2 滨州医学院附属医院神经内科摘要目的体外实验探讨灰树花多糖治疗卵巢癌的作用方法以不同浓度灰树花多糖 ( 终浓度为和 500 μg / ml) 处理人 SKOV3 细胞, 台盼蓝染色和 MTT 检测对细胞增殖的抑制作用,Annexin V /PI 双标记流式细胞术检测与荧光显微镜观察检测细胞凋亡另设阴性对照组, 仅用培养液 ; 10 μg /ml 顺铂 ( DDP) 作为阳性对照结果台盼蓝排染和 MTT 检测证实, 灰树花多糖明显抑制 SKOV3 细胞增殖 ; Annexin V /PI 双染流式细胞术检测显示, 灰树花多糖 μg /ml 作用细胞 h 均能诱导细胞凋亡, 凋亡率与时间剂量存在依赖关系 ; Annexin V /PI 双染荧光显微镜观察检查细胞凋亡率显示了与流式细胞术检测类似结果结论灰树花多糖显著抑制卵巢癌 SKOV3 细胞增殖并诱导细胞凋亡关键词灰树花多糖 ; SKOV3 细胞 ; 细胞增殖 ; 细胞凋亡中图分类号 R 文献标志码 A 文章编号 ( 2012) Preliminary investigation on treatment of ovarian cancer by grifola frondosa polysaccharide,in vitro LV Yaofeng 1 HUO Yingqian 2 1 Department of Obstetrics and Gynecology,Binzhou Medical University,Binzhou Department of Neurology,Affiliated Hospital of Binzhou Medical University Abstract Objective The research is to investigate the effects on human ovarian cancer cell line SKOV3 by grifola frondosa polysaccharide( or grifolan,gfp) in vitro. Methods SKOV3 cells were treated by a variety of concentrations of GFP. Trypan blue exclusion test and MTT were used to detect inhibitory effect on the cell proliferation. Flow cytometry and fluorescence microscopy stained by an Annexin V / PI kit were employed to identify the apoptotic cells. Results The proliferation in SKOV3 cells was inhibited by GFP detected by trypan blue exclusion assay and MTT. GFP in concentrations of 100μg /ml,250μg /ml and 500μg /ml significantly induced apoptosis in the cells at the checkpoints of 24 h,48h and 72 h,in a time - and dose-dependent manner. The rates of apoptosis were verified by fluorescence microscopy. Conclusion GFP significantly inhibited proliferation and induced apoptosis in SKOV3 cells. Key Words Grifola frondosa polysaccharide,skov3 cell,proliferation,apoptosis 妇科恶性肿瘤中, 卵巢癌患病率位于第三位, 其死亡率却居首位, 且患者五年生存率一直在 25% ~ 30% 左右 [1] 卵巢癌发病隐匿, 早期症状不明显, 目前尚无特异性的肿瘤标记物用于早期诊断因此, 卵巢癌难以早期发现早期诊断早期治疗卵巢癌治疗方法首选手术, 其次为化疗和放疗由于明确诊断时大多已是中晚期, 卵巢癌患者手术效果往往不理想, 化疗即成为卵巢癌治疗的重要手段紫杉醇及其衍生物顺铂一直是卵巢癌的首选化疗药物, 但耐药现象使其应用受到很大限制因此探索低毒高效的抗卵巢癌新药是国内外研究的热点之一国内外研究显示, 灰树花多糖及其制剂能抑制多种乳腺癌细胞增殖, 诱导凋亡, 并阻止癌细胞浸润 [1-4], 能提高树突状细胞的抗瘤活性 [5] 体内实验中, 灰树花多糖抑制结肠癌的生长 [6] 另有报道, 灰树花多糖还能抑制许多其它癌细胞生长, 诱导细胞凋亡, 其中包括膀胱癌胃癌等 [7,8] 然而, 至今为止, 我们尚未查阅见到有关灰树花多糖治疗卵巢癌的文献最近, 我们利用人卵巢癌 SKOV3 细胞, 体外观察了灰树花多糖抑制癌细胞增殖和诱导凋亡的效应初步研究结果显示, 灰树花多糖有望能用于卵巢癌的治疗 1 材料与方法 1. 1 主要材料与试剂人卵巢癌 SKOV3 细胞 ( 中国医学科学院基础医学研究所细胞资源中心 ), 灰吕耀凤, lyfhyq@ hotmail. com

2 242 滨州医学院学报 2012 年 8 月第 35 卷第 4 期 BMU Journal,Aug. 2012,Vol. 35,No. 4 树花多糖 ( 浙江方格药业有限公司 ), 顺铂 ( 南京制药有限公司 ),RPMI-1 640( 美国 GIBCO 公司 ),MTT [3-( 3,4 - 二甲基噻唑 - 2) -2,5- 二苯基四氮唑溴盐 ]( 北京 BIOTOP 公司 ),AnnexinⅤ 细胞凋亡检测试剂盒 ( 南京凯基生物科技发展有限公司 ), 荧光倒置显微镜 ( 日本 Olympus 公司,IX-71), 全自动酶标仪 ( Labsystems Multiskan MS), 流式细胞仪 ( MECK- MAN COUTER,COUTER EPICS XL) 1. 2 实验方法细胞培养人卵巢癌 SKOV3 细胞, 于含 10% 新生牛血清的 RPMI 培养液中,37 5% CO 2 条件下进行常规培养, 每 1 ~ 2 d 更换新鲜培养液实验阴性对照组 : 仅用培养液 ; 实验组 : 培养液内加不同浓度的灰树花多糖 ; 阳性对照组 : 10 μg /ml 顺铂 ( DDP) 细胞增殖抑制率的测定 1 台盼蓝染色 : 取对数生长期细胞, 收获细胞并制成细胞悬液, 调整细胞浓度为个 /ml, 以每孔 500 ul( 即个细胞 / 孔 ) 接种于 24 孔培养板于 37 5% CO 2 条件下常规培养细胞处理 : 当培养细胞达到亚融合状态后, 弃去旧培养液, 随机, 分别加入新鲜无血清培养液实验组 : 每孔使用不同浓度的灰树花多糖, 终浓度分别为和 500 μg /ml; 阳性对照组 : 加用 DDP( 5 μg /ml) ; 阴性对照组 : 仅用培养液每组均设 3 个复孔在 37 5% CO 2 条件下, 分别培养 h 细胞存活率检测: 细胞培养至预定时间, 吸尽培养液, 每孔加 1 滴 0. 25% 胰蛋白酶 ( 含 0. 2% EDTA) 消化液消化 3 ~ 5 min, 加入含 10% 新生牛血清的 RPMI 培养液终止消化, 收获细胞并制成细胞悬液取 9 滴细胞悬液移入 EP 管中, 加 1 滴 0. 4% 台盼蓝染液充分混匀, 染色 2 min 后光镜下计数活细胞数和死细胞数, 计算细胞总数, 其方法同前细胞存活率为活细胞数 ( 台盼蓝拒染细胞 ) 与细胞总数的百分比值 2 MTT 实验 : 取对数生长期细胞, 收获细胞并制成细胞悬液, 调整细胞浓度为个 /ml 以每孔 200 ul( 即个细胞 / 孔 ) 接种于 96 孔培养板, 常规培养培养细胞达到亚融合状态后, 弃去旧培养液,PBS 洗涤 2 次, 每孔按分别加入含有灰树花多糖 ( 终浓度为和 500 μg /ml) 或 DDP( 5 μg /ml) 的新鲜无血清培养液, 每组设 5 个复孔阴性对照仅用新鲜的无血清培养液常规培养 h 呈色 : 培养细胞到预定时间点后, 各组孔内均分别加入 20 ul MTT( 5 mg /ml), 继续培养 4 h 然后, 小心吸去上清, 加 150 ul DMSO / 孔, 培养板置摇床上, 37 低速摇匀 10 min, 使结晶充分溶解利用全自动酶标仪在 560 nm 波长下检测各孔 OD 值按下式计算细胞增殖抑制率 ( IR) : IR( % ) = ( 1- 实验组平均 OD 值 / 对照组平均 OD 值 ) 100% 实验重复 3 次, 取均值细胞凋亡检测 1Annexin V /PI 双标流式细胞术检测 : 取对数期生长细胞, 收获细胞并制成细胞悬液, 调整细胞浓度为个 /2 ml, 以 2 ml / 孔接种于 6 孔板, 浓度为个细胞 / 孔, 常规培养根据 MTT 实验, 实验组选择和 500 μg /ml 灰树花多糖作为流式细胞术检测剂量培养细胞生长铺满孔底 70% ~ 80% 时, 弃去旧培养液, 用 PBS 洗 2 次, 实验组和阳性对照组每孔按分别加入含终浓度为和 500 μg /ml 灰树花多糖和含 DDP( 5 μg /ml) 的无血清新鲜培养液 2 ml / 孔, 分别培养 h Annexin V /PI 双标记法检测 : 培养和处理细胞至预定的时间点, 严格按试剂盒说明书操作, 主要步骤 : a. 悬浮细胞,2 000 rpm 离心 5 min, 收集细胞 ; b. 细胞用 PBS 洗 2 次,2 000 rpm 离心 5 min, 收集细胞 ( 约个 ) ; c. 加 500 μl 1 Binding Buffer, 悬浮细胞 ; d. 加 5 μl Annexin V-EGFP, 轻轻混匀, 再加 5 μl PI, 轻轻混匀 ; e. 室温下避光反应 10 min; f. 荧光显微镜观察或流式细胞术检测, 均需在 1 h 内完成流式细胞仪检测时, 激发波长 Ex = 488 nm; 发射波长 Em = 530 nm Annexin V-EGFP 的绿色荧光通过 FITC 通道检测使用未凋亡诱导处理的阴性对照细胞作为对照, 进行荧光补偿调节以除去光谱重叠和设定十字门的位置 2Annexin V /PI 双染色荧光显微镜观察凋亡细胞 : 取上述 Annexin V /PI 双染的各组细胞悬液, 分别滴于载玻片上, 盖玻片盖上细胞, 双色滤光片 ( FITC 和罗丹明 ) 荧光显微镜观察 Annexin V-EG- FP 荧光呈绿色, 为早期凋亡细胞 ; PI 荧光呈红色, 为晚期凋亡细胞 1. 3 统计学处理运用 SPSS13. 0 统计软件进行统计学分析所有数据, 以 x ± s 表示, 采用单因素方差分析和 LSD-t 检验, 重复测量资料采用单因素方差分析,P < 为差异有统计学意义 2 结果 2. 1 光镜观察灰树花多糖对 SKOV3 细胞形态改变影响光镜观察结果, 见图 1

243 A B A 阴性对照 ( 200), 其细胞呈多角形或宽梭形, 大小较均一, 生长旺盛 ; B 500 μgl /ml 灰树花多糖作用 48 h( 200), 其细胞皱缩透明度增加, 核浓缩, 细胞数量减少图 1 500μgl /ml 灰树花多糖处理组与阴性对照组 SKOV3 细胞形态观察比较光镜下, 阴性对照组细胞各时间点观察均生长旺盛, 多呈多角形, 形态大小比较一致

3 243 A B A 阴性对照 ( 200), 其细胞呈多角形或宽梭形, 大小较均一, 生长旺盛 ; B 500 μgl /ml 灰树花多糖作用 48 h( 200), 其细胞皱缩透明度增加, 核浓缩, 细胞数量减少图 1 500μgl /ml 灰树花多糖处理组与阴性对照组 SKOV3 细胞形态观察比较光镜下, 阴性对照组细胞各时间点观察均生长旺盛, 多呈多角形, 形态大小比较一致实验组, 用药后 12 h, 和 500 μg /ml 剂量组可见细胞皱缩变圆大小不一, 细胞质内出现数量不等的泡状结增加此时, 显微镜下观察 250 和 500 μg /ml 组仅见少量细胞贴壁, 细胞大小不一, 形状更加不规则, 出现巨大细胞核的细胞处理 72 小时,250 和 500 μg /ml 剂量组培养液中漂浮细胞明显增多构, 部分细胞染色质凝聚核浓缩, 少量细胞漂浮在 2. 2 灰树花多糖对 SKOV3 细胞增殖的抑制作用 : 培养中, 其中尤以 250 和 500 μg /ml 剂量组明显 MTT 法检测灰树花多糖对 SKOV3 细胞增殖培养时间延长,100 μg /ml 剂量组中少量细胞亦出现上述现象处理 24 h, 和 500 μg /ml 各组培养液中均见数量不等的漂浮细胞, 其中以 500 μg /ml 剂量组最明显, 随着剂量加大漂浮细胞逐渐的抑制结果 SKOV3 细胞用不同浓度的灰树花多糖处理, 分别作用和 72 h 后进行 MTT 实验, 实验结果见表 1 表 1 MTT 检测不同浓度灰树花多糖作用和 72 h 后 SKOV3 细胞生长抑制率 ( x ± s,n = 4) 浓度抑制率 / % /( μg /ml) 24 h 48 h 72 h 阴性对照灰树花多糖 ± a ± a ± a ± a ± ab ± ab ± acd ± acd ± acd DDP ± ac ± ac ± ac 用灰树花多糖处理细胞 24 h, 细胞增殖开始抑制处理 24 h, 各剂量组细胞抑制率均比阴性对照组明显增加 ( P < 0. 01),500 μg /ml 组接近 30% 组间比较, 各实验组细胞增殖抑制率随着作用时间延长均出现不同程度增加与 DDP 组比较,500 μg /ml 灰树花多糖组对 SKOV3 细胞的增殖抑制率接近 DDP 组 ( P > 0. 05), 其余 2 组均小于 DDP 组说明灰树花多糖对肿瘤抑制率会明显增加 h 时间点各实验组间比较,250 μg /ml 组细胞增殖抑制率明显大于 100 μg / ml 组 ( P < 0. 05) ; 500 与 100 μg /ml 组间比较, 细胞增殖抑制率的差异更有统计学意义 ( P < 0. 01) 不同时间点相同浓度组间细胞抑制率比较, 各实验组内 48 与 72 h 细胞增殖抑制率间差异有统计学意义 ( P < 0. 05) 说明, 随着作用时间的延长, 灰树花多糖对细胞的抑制逐渐增强细胞有较强的抑制作用, 但也提示今后实验的剂量灰树花多糖对 SKOV3 细胞活力的影响台不能太低通过表 1 结果分析, 灰树花多糖在 100 μg /ml 盼蓝染色, 检测了灰树花多糖对 SKOV3 细胞活力的影响结果见表 2 时即抑制细胞增殖, 随着剂量增加和时间延长细胞

4 244 滨州医学院学报 2012 年 8 月第 35 卷第 4 期 BMU Journal,Aug. 2012,Vol. 35,No. 4 表 2 台盼蓝染法检测不同浓度灰树花多糖作用和 72 h 后 SKOV3 细胞生长抑制率 ( x ± s,n = 4) 浓度抑制率 / % /( μg /ml) 24 h 48 h 72 h 阴性对照灰树花多糖 ± a ± a ± a ± a ± ab ± ab ± acd ± acd ± acd DDP ± ac ± ac ± ac 检测结果显示, 台盼蓝染色所得灰树花多糖对 SKOV3 细胞活力的影响与 MTT 检测结果相似, 结果可以相互印证灰树花多糖各实验组于各个时间点的细胞凋亡率均明显增加 ( P < 0. 01) ; 与 100 μg /ml 组比较,250 和 500 μg /ml 组细胞凋亡率均明显增加 ( P < 0. 01) 2. 3 灰树花多糖对 SKOV3 细胞凋亡的影响 : 灰树花多糖作用 h, 各实验组细胞凋亡率 Annexin V /PI 流式细胞术检测灰树花多糖与阴性对照组比较均明显增加 ( P < 0. 01) ; 作用 48 诱导细胞凋亡结果 : 用 Annexin V 和 PI 双标记后, 进行流式细胞术检测结果见表 3 及图 2 流式细胞术检测结果显示, 与阴性对照组比较, 72 h, 各实验组细胞凋亡率与 24 h 组比较均明显增加 ( P < 0. 01) 随着灰树花多糖用量增加和作用时间延长, 各实验组细胞凋亡率相应增加, 亦有时间 - 剂量依赖倾向表 3 Annexin V /PI 流式细胞术检测不同浓度灰树花多糖诱导 SKOV3 细胞凋亡率 ( x ± s,n = 3) 浓度凋亡率 / % /( μg /ml) 24 h 48 h 72 h 阴性对照 ± ± ± 灰树花多糖 ± a ± a ± a ± a ± ab ± ab ± acd ± acd ± acd DDP ± ac ± ac ± ac A B A 阴性对照组 : 2. 46% ; B 500 μg /ml 灰树花多糖组 : % 图 2 Annexin V /PI 标记 FCM 检测灰树花多糖作用 72 h SKOV3 细胞凋亡率 Annexin V /PI 双标记流式细胞术检测表明, 灰细胞结果 Annexin V /PI 双染色后, 荧光显微镜观树花多糖对 SKOV3 细胞诱导的凋亡细胞主要可诱导早期凋亡, 也能诱导晚期凋亡从流式细胞术扫描图看出, 诱导早期凋亡比诱导晚期凋亡更明显结果见图 2 察结果 : 本实验所用凋亡检测试剂盒中,Annexin V 携带有 EGFP 标记探针, 与 PI 同时染色可用于荧光显微镜观察凋亡细胞荧光显微镜下观察,Annexin V 阳性细胞呈绿色荧光, 主要位于细胞膜两侧, 少量 Annexin V /PI 双染色荧光显微镜观察凋亡萎缩变小的细胞出现细胞膜与细胞核同时呈较强绿

245 色荧光 Annexin V 与 PI 双染细胞呈红色或深黄绿色等荧光, 这些细胞于 PI 发射波长荧光下观察, 呈

阴性对照,24 h( 荧光 ) C 100 μg /ml 灰树花多糖,24 h ( 普通光 + 荧光 ) D 100 μg /ml

/ml 灰树花多糖作用 48 h( 荧光 ) G 500 μg /ml 灰树花多糖,24 h( FITC 滤光片 ) H 500

5 245 色荧光 Annexin V 与 PI 双染细胞呈红色或深黄绿色等荧光, 这些细胞于 PI 发射波长荧光下观察, 呈现深浅不一的红色或橘红色荧光, 为凋亡晚期细胞 ( 见图 3) A 阴性对照,24 h ( 普通光 + 荧光 ) B 阴性对照,24 h( 荧光 ) C 100 μg /ml 灰树花多糖,24 h ( 普通光 + 荧光 ) D 100 μg /ml 灰树花多糖,24 h( 荧光 ) E 250 μg /ml 灰树花多糖,48 h ( 普通光 + 荧光 ) F 250 μg /ml 灰树花多糖作用 48 h( 荧光 ) G 500 μg /ml 灰树花多糖,24 h( FITC 滤光片 ) H 500 μg /ml 灰树花多糖,24 h( 罗丹明滤光片 ) 图 3 Annexin V / PI 双染荧光显微镜观察 SKOV3 细胞凋亡形态 ( 400)

6 246 滨州医学院学报 2012 年 8 月第 35 卷第 4 期 BMU Journal,Aug. 2012,Vol. 35,No. 4 表 4 为 Annexin V /PI 标记荧光显微镜检测不同浓度灰树花多糖诱导 SKOV3 细胞凋亡率的结果统计结果分析, 各组在各时间点的凋亡细胞数均稍微小于流式细胞术检测结果, 可以考虑是因为荧光显微镜下观察存在显色差异, 也与观察者的观察经验和选取的视野有关表 4 Annexin V /PI 标记荧光显微镜检测灰树花多糖诱导 SKOV3 细胞凋亡率 ( x ± s,n = 3) 浓度 /( μg /ml) 凋亡率 / % 24 h 48 h 72 h 阴性对照 ± ± ± 灰树花多糖 ± a ± a ± a ± a ± ab ± ab ± acd ± acd ± acd DDP ± ac ± ac ± ac 3 讨论灰树花 ( Grifola frondosa) 又名贝叶多孔菌, 俗称亡细胞, 保证了凋亡检测结果的可靠性凋亡检测证明, 树花多糖能明显诱导 SKOV3 细胞凋亡, 且有云蕈, 日本人称舞茸 ( Maitake), 因其突出的营养和药用价值, 正引起广泛关注其药用价值之一, 即抗肿瘤效应体内外研究证实, 灰树花多糖 ( Maitake Polysaccharide,Grifolan) 具有明显的抗多种肿瘤作用最近报道, 灰树花诱导人乳腺癌 MCF-7 细胞凋亡, 其作用机制与 BAK-1 基因和细胞色素 C 转录上调等细胞凋亡通路有关 [1] 灰树花多糖抑制人高浸润性乳腺癌 MDA-MB-231 细胞增殖并使其停止在细胞周期的 G2 /M 期通过抑制细胞周期调控基因 ANAPC2,ANAPC2,BIRC5,Cyclin B1,Cyclin H,CDC20,CDK2,CKS1B,Cullin 1,E2F1,KP- NA2,PKMYT1 和 TFDP1 表达, 发挥抗肿瘤作用抑制 MDA-MB-231 细胞黏着细胞迁移和细胞浸润而抑制其恶性行为其抗癌细胞浸润, 与抑制 MDA-MB-231 细胞分泌 upa ( urokinase plasminogen activator) 有关 [2] Martin 等报告, 灰树花浸出液处理 MCF-7 细胞能明显抑制细胞增殖, 并能诱导细胞凋亡 [3] 灰树花浸出液处理结肠癌 26-L5 细胞, 能抑制癌细胞肺转移, 促使 T 细胞和 B 细胞分裂, 增加 CD3,CD19,CD4 和 CD8 阳性细胞, 存在剂量依赖性 [4] 本研究采用台盼蓝染色和 MTT 实验, 检测了灰树花多糖抑制 SKOV3 细胞增殖作用结果显示, 灰树花多糖能明显抑制 SKOV3 细胞增殖 Annexin V /PI 双标记荧光显微镜观察和流式细胞术检测灰树花多糖诱导癌细胞凋亡作用, 荧光显微镜观察凋剂量依赖性本研究结果与上述报道基本一致这说明, 灰树花多糖具有比较广泛的抗肿瘤谱, 如开发成为临床用药应用前景广阔关于灰树花多糖的作用机制, 国内外均有报道灰树花多糖增强骨髓源性树突状细胞抗结肠癌的抗瘤活性, 其 Z 成分以剂量依赖方式上调骨髓源性树突状细胞 CD80,CD86,CD83 和 MHC II 表达, 明显增加 IL-12 和 TNF-α 分泌 Z 成分增加 DC 细胞产生 IL-12 诱导 DC 成熟以及抗原特异性 Th1 反应 [5] 灰树花低分子量蛋白组分 ( MLP-Fraction), 在 colon- 26 荷瘤鼠模型能增强脾细胞 IL-12 和 IFN-γ 产生, 从而抑制肿瘤生长 [6] 灰树花多糖 D 成分与 IFN-α 合用, 通过激活 DNA-PK, 抑制膀胱癌细胞生长 [7] 灰树花水溶提取物, 诱导胃癌 TMK-1 凋亡, 依赖于和不依赖于 caspase-3 通路, 具有抗胃癌作用 [8] 体内试验, 灰树花 MD 成分刺激粒细胞系产生 G-CSF, 调控 CXCR4 /SDF-1 表达, 发挥抗癌作用 [9] MD 成分与顺铂合用, 在鼠模型增加顺铂的抗肿瘤和抗转移作用, 并减轻骨髓抑制和肾脏毒性 [10] 国外报道, 乳腺癌病人 I /II 期临床实验口服灰树花制剂, 可增加免疫功能并抑制肿瘤生长 [11] 灰树花 D 成分能抑制前列腺癌 PC-3 细胞生长, 导致细胞周期 G1 期停止 [12] 国内报道, 灰树花多糖促进 S180 肉瘤荷瘤鼠血清内 TNF-α IL-2 释放, 具有抗肿瘤作用 [13] 顺铂与灰树花多糖联合应用, 有效地抑制 H22 肿瘤细胞增殖, 导致细胞凋亡, 具有协同作用, 提高综合治疗效果 [14] 体内实验证实, 灰树花多糖

7 247 具有抗肿瘤活性, 能增加小鼠脾脏的重量, 增加巨噬细胞的数量和吞噬功能, 从而提高机体的免疫力 [15] 由于时间所限, 我们尚未深入探讨灰树花多糖抗卵巢癌的作用机制上述资料, 为我们的深入研究提供了实验依据根据文献和我们的初步观察, 可以认为, 灰树花多糖除了增强免疫和保健功能外, 还有明显的抗肿瘤活性如能开发成治疗卵巢癌新药, 无疑会具有明显的理论意义和实用价值, 值得深入研究参考文献 [1] Soares R,Meireles M,Rocha A,et al. Maitake ( D fraction) mushroom extract induces apoptosis in breast cancer cells by BAK-1 gene activation[j]. J Med Food,2011,14( 6) : [2] Jiang J,Sliva D. Novel medicinal mushroom blend suppresses growth and Invasiveness of human breast cancer cells[j]. Int J Oncol, 2010,37( 6) : [3] Martin KR,Brophy SK. Commonly consumed and specialty dietary mushroomsreduce cellular proliferation in MCF-7 human breast cancer cells[j]. Exp Biol Med ( Maywood),2010,235( 11) : [4] Han SS,Cho CK,Lee YW,et al. Antimetastatic and immunomodulating effect of water extracts from various mushrooms[j]. J Acupunct Meridian Stud,2009,2( 3) : [5] Masuda Y,Ito K,Konishi M,et al. A polysaccharide extracted from Grifola frondosa enhances the anti-tumor activity of bone marrow-derived dendritic cell-based immunotherapy against murine colon cancer[j]. Cancer Immunol Immunother,2010,59( 10) : [6]Kodama N,Mizuno S,Nanba H,et al. Potential antitumor activity of a low-molecular-weight protein fraction from Grifola frondosa through enhancement of cytokine production[j]. J Med Food,2010,13( 1) : [7] Louie B,Rajamahanty S,Won J,et al. Synergistic potentiation of interferon activity with maitake mushroom d-fraction on bladder cancer cells[j]. BJU Int,2010,105( 7) : [8] Shomori K,Yamamoto M,Arifuku I,et al. Antitumor effects of a water-soluble extract from Maitake ( Grifola frondosa) on human gastric cancer cell lines[j]. Oncol Rep,2009,22( 3) : [9] Ito K,Masuda Y,Yamasaki Y,et al. Maitake beta-glucan enhances granulopoiesis and mobilization of granulocytes by increasing G-CSF production and modulating CXCR4 / SDF-1 expression[j]. Int Immunopharmacol,2009,9( 10) : [10] Masuda Y,Inoue M,Miyata A,et al. Maitake beta-glucan enhances therapeutic effect and reduces myelosupression and nephrotoxicity of cisplatin in mice[j]. Int Immunopharmacol,2009,9 ( 5) : [11] Deng G,Lin H,Seidman A,Fornier M,et al. A phase I /II trial of a polysaccharide extract from Grifola frondosa ( Maitake mushroom) in breast cancer patients: immunological effects[j]. J Cancer Res Clin Oncol,2009,135( 9) : [12] Pyo P,Louie B,Rajamahanty S,et al. Possible immunotherapeutic potentiation with D-Fraction in prostate cancer cells[j]. J Hematol Oncol,2008 Dec 4; 1: 25. [13] 侯晓青, 程桂芝. 灰树花多糖抗荷瘤小鼠 S180 肉瘤的实验研究 [J]. 中国药房,2007,18( 3) : [14] 吕冬霞, 杜伟, 范晓艳, 等. 灰树花多糖联合顺铂对 H22 荷瘤小鼠肿瘤细胞凋亡的影响 [J]. 黑龙江医药科学,2011,34 ( 3) : 72. [15] 孙震, 陈石起, 谷文英, 等. 灰树花多糖体内抗肿瘤作用的实验研究 [J]. 药物生物技术,2001,8( 5) : ( 收稿日期 : ) 作者书写统计学符号须知论文中统计学符号应按 GB 统计学名词及符号的有关规定书写, 常用如下 : ( 1) 样本的算术平均数用英文小写 x; ( 2) 标准差用英文小写 s; ( 3) 标准误用英文小写 s x ; ( 4) t 检验用英文小写 t; ( 5) F 检验用英文大写 F; ( 6) 卡方检验用希文小写 χ 2 ; ( 7) 相关系数用英文小写 r; ( 8) 自由度用希文小写 υ; ( 9) 概率用英文大写 P( P 值前应给出具体检验值, 如 t 值 χ 2 值 q 值等 ) 以上符号均用斜体本刊编辑部