2010年第8期-新

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岭封
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1 中国农学通报,(8):- Chinese Agricultural Science Bulletin 咖啡因和维生素 E 对小尾寒羊精液冷冻保存的影响崔旭罗桂河李卫东李复煌孟丹娜吕建伟穆笛倪和民北京农学院动物科学技术系北京北京市昌平区动物卫生监督管理局北京北京市昌平区动物卫生防疫站北京北京市畜牧兽医总站北京摘要研究冷冻稀释液中分别添加不同浓度的咖啡因和维生素 E 后对小尾寒羊精液冷冻保存的影响将不同浓度的咖啡因和维生素 E 分别添加于冷冻前的小尾寒羊精液稀释液中用精子活率顶体完整率和畸形率作为判定精子冷冻品质的指标初步确定种稀释液添加成分对小尾寒羊精液品质的影响当添加维生素 E 的浓度为. mg/ml 时冷冻后的精子活率较高畸形率较低且精子顶体完整率也较高添加 mg/ml 咖啡因能显著提高精子的解冻后活率其活率为. 对精子畸形率和顶体完整率无显著影响在冷冻精液稀释液中添加适当浓度维生素 E 可以减缓冷冻对精子的伤害提高小尾寒羊冷冻精子活率改善冷冻精液的品质当添加 mg/ml 的咖啡因于稀释液中冷冻时解冻后精液活率显著提高但不影响精子畸形率和顶体完整率关键词咖啡因维生素 E 精液小尾寒羊中图分类号 S8.8 文献标志码 A 论文编号 9- Effect of Different Concentrations of Caffeine, VE on the Freezing Semen of Small-tailed Han Sheep Cui Xu, Luo Guihe, Li Weidong, Li Fuhuang, Meng Danna, Lü Jianwei, Mu Di, Ni Hemin Department of Animal Science & Technology, Beijing University of Agriculture, Beijing ; Animal Health and Hygiene Administration Bureau of Beijing Changping District, Beijing ; Animal Health and Hygiene Administration Station of Beijing Changping District, Beijing ; Beijing General Station of Animal Husbandry and Veterinary Medicine, Beijing Abstract: This study was aimed to investigate the effect of different concentrations of caffeine, vitamin E (VE) on the freezing semen of small tailed Han sheep. The different concentrations of caffeine and VE were added to the pre-frozen sheep semen diluent in small-tailed Han sheep, then the motility rate of their post-thawed se men, the percentage of sperms with intact acrosome, and the percentage of their abnormality, were respectively estimated to detect the quality of their frozen semen. The results were shown as following: While the concentra tion of VE was.mg/ml, after freezing and thawing, the livability rate of the semen from small tailed Han sheep is high, whereas their abnormality rate is low, but the apical body percentage of sperm head is still high. Meanwhile, adding with mg/ml caffeine in their freezing diluents, can also obviously improve their sperm liva bility rate(.), but not affect their abnormal rate and the apical body rate. Adding appropriate concentrations of vitamin E to the frozen semen diluent, can slow the freezing of sperm damage and improve small-tailed Han sheep frozen sperm viability, improve the quality of frozen semen; When adding caffeine dilution of mg/ml so lution, after frozeing, the motility rate was significantly increased, but does not affect the sperm deformity rate and the rate of acrosome intactness. Key words: caffeine; vitamin E; freezing semen; small-tailed Han sheep 基金项目国家十一五 8 计划重点项目家畜卵泡高效诱导发育技术研究与应用项目批准号 8AA 国家十一五科技支撑计划项目肉羊高效育种关键技术的研究与应用项目批准号 8BADBB- 第一作者简介崔旭女 98 年出生北京农学院在读硕士研究生主要从事动物产科及胚胎工程通信地址北京市德胜门外朱辛庄北农路号北京农学院 cuixu@.com 通讯作者倪和民男 9 年出生北京农学院副教授硕士生导师主要从事动物产科及胚胎工程方面的研究通信地址北京市德胜门外朱辛庄北农路号北京农学院 nihemin@yahoo.com.cn 收稿日期 9-- 修回日期 9--

2 中国农学通报引言生素 E 时睾丸变性萎缩精子运动异常乃至不能产加快畜禽良种化工程是发展现代畜牧业的一个重生正常精子[] Vamawskij A N 等首次将维生素 E 添加要环节其中良种的生产和供给是畜禽良种化工程到绵羊冷冻精液中发现维生素 E 对精子有较明显的任务中的核心冷冻精液作为一种覆盖面广成本低保护作用冻后活率明显提高此后又有许多研究表收效快的特殊商品对畜禽良种化进程有着重要而现明维生素 E 能提高羊冻精解冻后精子活率在研究羊实的意义冷冻精液配种以其经济方便易操作等特的精液冻存时还发现维生素 E 能防止精子发生冷休 [] 点而被广泛接受克提高精子顶体完整率和降低精子畸形率绵羊冷冻精液研究是在世纪年代开始的精有鉴于此试验旨在通过向稀释液中分别添加不液冷冻保存是为了充分发挥优良种公畜的遗传潜力延同浓度的咖啡因和维生素 E 的对比试验筛选出保存长精子的贮存时间及维持其受精能力便于长途运输降效果较好的稀释液配方以利于延长精子存活时间提低传染病的传播机率加快畜群品种改良步伐同时也是高其活率和受精率促进绵羊人工授精和体外授精技建立动物精液基因库不可缺少的手段特别是对珍稀和术的开展濒危雄性动物的保种具有重要意义但是目前羊的精液材料和方法冷冻技术依然存在很多局限性例如冻精的体外活率和. 试验动物解冻后的受精能力在不同的种公羊个体之间存在很大的采精所用公羊为位于北京市顺义区的沃德尔牧业差异在小尾寒羊的发情季节鲜精活率普遍在.8 左科技有限公司羊场的只山东小尾寒羊种公羊身体右冷冻精液后能够到. 但当发情期过后精液量以状况良好由于其要提供精液所以每天除正常饲喂饮及品质都有所下降鲜精活率只能达到.左右已知影水外每只公羊每天补饲精料一次鸡蛋一枚配种母响绵羊冻精受胎率的主要因素有绵羊精液的质量冻精羊亦选自顺义沃德尔羊场小尾寒羊母羊生产过程中的各个环节及发情母羊的准确识别和输精方. 主要药品和试剂法等而冻精制作过程中的影响因素较主要的有稀释液 [] 的种类冷冻及解冻方法解冻液等冷冻和解冻导致维生素 E 注射液 ml X 北京市兽药厂京兽药字()X 精子膜损坏从而导致酰胺酶底物到达顶体的通路增加咖啡因 %的安钠咖注射液精子的酰胺酶催化反应增加从而损坏了顶体膜的完整葡萄糖北京化学试剂公司批号性所以冷冻精液品质下降用冻精配种受胎率不高且乳糖北京奥博星生物技术有限责任公司批号 [] 很不稳定有许多科学家还在稀释液中添加了维生素类物质如咖啡因维生素 B C E 等他们通过多次试验证明了添加某些维生素类物质对精子冷冻后活 -9 双蒸水青链霉素新鲜卵黄.9% NaCl 溶液甘油香柏油封口粉染液 SCHOTT DVRAN ml made in German 性有着很好的影响咖啡因有兴奋中枢神经的作用是一种精子活性物质 Barkay 等将咖啡因用于精液冷冻保存中发现具有激发精子活力的作用 98 年徐章龙吴石坚等将其应用于猪的精液冷冻 Anle 等在 98 年将其应用于绵羊的精液冷冻金穗华等在 99 年将其应用于牛的精液冷冻保存中均取得较为理想的效果此后 [] 咖啡因作为体外精子促活剂的研究也越来越多维生素 E 又称生育酚或抗不育因子已有大量试验证明维生素 E 对提高动物的免疫力改善动物肉质提高动物的繁殖性能缓解畜禽应激反应等有良好的应用效果维生素 E 是机体中重要的抗氧化剂对 [] 线粒体网状组织或浆膜的磷脂有着特殊的亲和性在这些膜的特定部位通过抑制自由基的形成预防或阻止诱发的脂质过氧化通过垂体前叶分泌促性腺激素促进精子的形成与活动提高生殖机能当动物缺乏维. 主要仪器与设备 LDZX-BI 型立式自动电热压力蒸汽灭菌器上海申安医疗器械厂 DK-S 型电热恒温水浴锅上海精宏实验设备有限公司产 DHG-9A 型电热恒温鼓风干燥箱上海精宏实验设备有限公司产 KQ-DB 型数控超声波清洗器昆山市超声仪器有限公司产一次性使用无菌注射器 ( ml) 天津哈娜好医疗有限公司一次性使用无菌注射器 ( ml) 汕头华尔怡医疗仪器有限公司显微镜显微镜温控仪 KE- ZX- 加样器农业部种畜质检中心

3 崔旭等咖啡因和维生素 E 对小尾寒羊精液冷冻保存的影响神燕载玻片江苏省海门市神鹰实验器材厂 ⑵ 稀释液的配制 Cover Glass 8X 8 MM. X. mm 稀释液 I 液的制备 ①用分析天平称量. g 的葡 pcs boxes 萄糖和 8. g 的乳糖放入一锥形瓶中用锡纸盖好称计数器 XQ- 细管数只滤纸等量时应注意分析天平的调平气泡是否在中间称量的. 咖啡因和维生素 E 的添加浓度物品尽可能轻拿轻放再将 ml 的双蒸水倒入放.. 试验初选咖啡因和维生素 E 的添加浓度有葡萄糖乳糖的锥形瓶中将锥形瓶瓶口用锡纸封好为了筛选出咖啡因和维生素 E 的合适浓度试验中先放入的水浴锅中 ~ ml 使之溶解再放置到在较大浓度范围内进行筛选再进一步细化具体分冷水中冷却至手背感觉不到热度为止 ②制备青链霉组如表所示素用.9%的 NaCl 溶剂溶解青链霉素混匀后待用.. 试验进一步筛选咖啡因和维生素 E 的添加 ③卵黄的制备选取两个新鲜的鸡蛋分别用酒精擦拭表在常规精液稀释液中添加不同浓度咖啡因和维生素 E 再用清水冲洗并用纸擦干用手将鸡蛋轻轻敲开将蛋稀释液中咖啡因稀释液中维生素 E 试验细管壳拉开倒出蛋清把蛋黄轻轻倒在滤纸上用另一张数量/支滤纸轻擦卵黄表面用针管吸取 ml 卵黄两个鸡蛋共取 ml 卵黄 ④清冷却后的溶液过滤到量筒中 ml 即可将 ml 的溶液倒回锥形瓶中在此锥形瓶中在加入 ml 卵黄和青链霉素各. ml 取一个振子放入此溶液中将其放到振荡器上震荡 ~ min 将震荡后的溶液取出 ml 放入一锥形瓶中用锡纸封好放入冰箱作为 I 液使用浓度试验一的结果显示当添加咖啡因浓度超过 mg/ml 以后解冻后活力大幅度降低大剂量维生素 E 组的精子大量死亡而维生素 E 浓度较低组( mg/ml) 的精子活力比其他几组高进一步筛选得知微量添加稀释液 II 液的制备在剩下的 ml 溶液中加入 ml 甘油用锡纸封好并再次震荡 ~ min 放入冰箱作为 II 液.. 采精 ⑴ 采精前器具消毒采精前一天用肥皂水清洗维生素 E 才能提高小尾寒羊冻后精液的品质所以在各种器具再用清水冲洗几次最有用蒸馏水冲洗一此浓度基础上设计如下试验表遍用干燥箱烘干消毒用于采精的集精杯假阴道等表在常规精液稀释液中添加不同浓度咖啡因和维生素 E 器械应用紫外灯进行照射消毒 ⑵ 用假阴道采精法在显微镜下观看鲜精活力稀释液中咖啡因稀释液中维生素 E 试验细管数量/支. 稀释液Ⅰ液混合稀释比是放入冷藏柜降温 h... 精液品质的检测在显微镜下观察鲜精的密度及. 活力看是否达到标准并将其活力记录下来... 精液的稀释与分装在分装前将稀释液 I 液从冰. 箱取出放入的水浴锅中保温并取出需要用到的.8 试管标号并放在水浴锅中一起预热用 I 液将鲜精稀. 释倍再平均分装到 8 个试管中轻轻混匀. 试验方法.. 稀释液配方及配制 ⑴ 稀释液配方试验过程中所用配方是试验基地经反复验证得到的最适宜的配方具体如下葡萄糖. g 乳糖. g 双蒸 ml 蛋黄 ml 甘油 ml 青霉素 IU 链霉素 IU 记录取出保存的稀释液Ⅰ液加热至将精液和.. 一次平衡将稀释后的 8 个试管放入装有清水的烧杯中并在烧杯中加入一只温度计将其放入冰箱平衡 h 左右直至其温度降至以下若其温度下降太慢则可在其周围放一两个冰瓶时期降温.. 二次平衡在冰箱中用稀释液 II 液分别将 8 个试管的精液再次进行倍稀释之后分别用移液枪向个试管中加入相对种浓度的维生素 E 试剂轻轻混

4 中国农学通报匀将冰箱门关好使其平衡 h 左右温度降至以摆放整齐用针管吸取染色液缓慢的向片子下面推挤下染色液使所有片子的下方都被染色液侵住方可染色.. 吸管法冷冻精液 h 后冲片将片子正面朝下细水流冲洗冲洗时左右 ⑴ 装管装管前应先准备一个人工的低温环境摇晃使之能冲洗干净洗净后放在通风处晾干取出细管对其进行标记将细管预冷并准备好封口.. 畸形率的鉴定和记录将染好的片子放在显微粉之后将平衡后的精液取出平摇匀分别将 8 个试管镜下的倍镜下观察看精子的头部是否正常尾部中的精液分装到细管中保证每个浓度有 ~ 只细是否无断尾和卷曲利用计数器记录其畸形率管装好每只管时都要用封口粉封口注意要留有空.. 顶体完整率的鉴定和记录将染好的片子滴上气防止漏出.将装好的管放在熏蒸架上等待熏蒸一滴香柏油在显微镜倍镜下观察看精子的顶体 ⑵ 熏蒸将液氮倒入塑料泡沫箱中控制其温度是否正常是否出现顶体膨胀顶体脱落并利用计数在- 到-8 的范围内将细管放在液氮表面熏器记录其顶体完整率蒸 8~ min 熏蒸时严格控制温度在- 到-8. 数据处理的范围内 ⑶ 冷冻精液熏蒸后将细管快速投入到液氮中所有试验组和对照组数据之间采用方差分析进行显著性检验冷冻.在此过程中可以在显微镜下观看平衡后精液的试验结果活率并作出记录. 不同浓度的 VE 和咖啡因添加组在平衡和冷冻后..8 解冻解冻前将水浴锅调到用镊子快速夹其活率起细管放入水浴锅中轻轻摇晃 s 左右取出细管用如表所示在稀释液中添加不同浓度的维生素 E 纸擦干用剪刀剪掉细管的两端将前两滴精液滴弃对平衡后精子活率没有显著影响但解冻后第并将随后滴出的精液滴到载玻片上随后盖上盖玻片组精子活率极显著高于对照组(P.) 第组精子在显微镜下预热并观察记录其活率活率极显著低于对照组(P.) 其余几组与对照组..9 冷冻保存为了保种和日后染色的需要要将剩差异不显著但组之间的精子活率差异不显下的细管冷冻保存于液氮灌中准备一只塑料试管标记上日期等重要信息将细管装入塑料试管中用棉花封口防止细管散落在将试管放入纱布袋子中系好袋口(以上过程必须要在液氮液面下操作) 将纱布袋子快速放入液氮灌中.. 涂片准备若干个小试管和载玻片进行标记向塑料泡沫箱中倒入液氮将纱布袋取出分别解冻细管将解冻后的精液滴入小试管中在分别向其中加入. ml 的 NaCl 溶液之后用移液枪分别移取精液到载玻片上用一只手持有精液的载玻片另一只手持一载玻片成进行涂片将涂好的片子放在通风处晾干.. 固定和染色 ⑴ 固定液的制备表加入不同浓度的 VE 后精子平衡后活率和冷冻后活率组别 VE/(mg/mL) 平衡后活率冷冻后活率对照组.a.8 a.. a.8ab.. a.ac.. a.c.. a. c.. a. c.8. a.8ab.. a.b 注相同字母表示差异不显著不同字母表示差异显著以下同著第组的解冻后活率最高固定与冲片将片子正面朝下放在固定板上在稀释液中添加 mg/ml mg/ml 咖啡因解冻摆放整齐用针管吸取固定液缓慢的向片子下面推挤后活力显著优于其他各组 P. mg/ml 和固定液使所有片子的下方都被固定液侵住方可固定 mg/ml 组间差异不显著 mg/ml 对 mg/ml 不显著 min 后冲片将片子正面朝下细水流冲洗冲洗时左所以 mg/ml 显著优于其他组见表右摇晃使之能冲洗干净洗净后放在通风处晾干. 不同浓度的 VE 和咖啡因添加组在平衡和冷冻后 ⑵ ⑶ 染色液的配制将染色剂取出使其与双蒸水以 9 的比例混合混匀即可注意染色剂应避光保其精子畸形率和完整率在稀释液中添加不同浓度的维生素 E 后试验组的精子畸形率均与对照组无显著差异第组存 ⑷ 染色与冲片将片子正面朝下放在染色板上精子的畸形率显著低于第组(.<P.) 但这四

5 崔旭等 : 咖啡因和维生素 E 对小尾寒羊精液冷冻保存的影响表加入不同浓度的咖啡因后精子平衡后活率和冷冻后活率组别对照组咖啡因 /(mg/ml) 平衡后活率. a. a.9 a.9 a. a. a. a 冷冻后活率. cde. bc. a.9 ab. cd. de. de 组之间差异不显著但其中第组的精子畸形率最低 ; 在稀释液中添加不同浓度的维生素 E 后, 第组精子的顶体完整率极显著高于对照组 (P<.), 其他组与对照组差异不显著 ( 见表 ) 在稀释液中添加不同浓度的咖啡因后, 试验组的精子畸形率和顶体完整率均与对照组无显著差异 ( 见表 ) 表加入不同浓度的 V E 后精液的精子畸形率和顶体完整率组别对照组组别对照组 VE/(mg/mL) 畸形率 /% 顶体完整率 /% a a a 8 a 表加入不同浓度的咖啡因后精液的精子畸形率和顶体完整率咖啡因 /(mg/ml) 畸形率 /%.8 a. a. a. a.9 a.9 a.8 a 顶体完整率 /%. a. a. a. a. a. a. a 讨论精子形态正常与受胎率关系密切精子形态检查有畸形率和顶体完整率检查种在正常精液中常有畸形精子出现, 一般不超过 %, 对受精力影响不大精子顶体是一个相当不稳定的部分, 对精子入卵关系 ab ab ab ab a a ac 9 a 9 a b 8 a a 很大, 它在受精过程中能释放多种蛋白质酶, 消化卵丘细胞间的粘合基质, 使精子与卵子结合而受精 ( 米娜瓦. 阿木提,99) 一般要求解冻后精子顶体完整率不低于 % 一般认为维生素 E 不足, 公羊的睾丸生殖上皮变性, 精子品质下降, 数量减少, 无受精能力, 最后完全丧失性机能 ; 母羊会因缺乏维生素 E 造成不孕流产或丧失生殖能力, 也会造成胎盘与胚胎血管破坏, 胚胎容易被吸收 ; 在雄鼠中, 维生素 E 不足可引 [] 起生殖上皮萎缩冷冻和解冻导致精子膜损坏, 从而导致酰胺酶底物到达顶体的通路增加, 精子的酰胺酶催化反应增加从而损坏了顶体膜的完整性, 所以冷冻精液品质下降 ; [] 用冻精配种, 受胎率不高且很不稳定试验中, 冻精活率第组极显著高于对照组, 则表明当添加维生素 E 的浓度为.-.mg/mL 时可以显著提高精液品质但组之间差异不显著试验结果证明添加维生素 E 的浓度为.mg/mL 时效果较好此结果与维生素 E 促进精子的形成与活动, 提高生殖机能的机理相符而第组精子活率极显著低于对照组, 这应该与维生素 E 的毒性有关, 浓度较高时会抑制精子的活率由于季节和羊本身体质等不可改变因素的影响致使试验的冻后精子活率普遍较低赵晓娥等 (999) [8] 报道, 在羊冻精的稀释液添加维生素 E, 解冻后精子的活率由原来的 % 提高到 %, 该试验的结果与此结论相一致精子受精能力与精子形态及其顶体有极为密切的关系正常的精子顶体及顶体反应是精卵结合的必要条件冷冻和解冻过程中精子膜和顶体完整性受到损害, 细胞内结构完整性的破坏会导致冻精受精能力降低添加维生素 E 的试验组中精子的畸形率与对照组无显著差异, 第组精子的顶体完整率极显著高于对照组, 这是由于添加维生素 E 后, 增强了精子的抗氧化能力, 降低了顶体脱落程度, 增强顶体的完整性由于精子膜含有高浓度的不饱和脂肪酸, 而且精子自身的抗氧化能力很弱, 在过量活性氧的作用下, 精子细胞膜的过氧化反应对精子活动性畸形率精卵融合有负面影响因为脂质过氧化物反应可能改变了精子质膜在跨膜反应和卵黄膜穿越反应中所要求的流动性, 而维生素 E 却对膜的磷脂有着特殊的亲合性, 在这些膜的特定部位, 能预防或阻止诱发的脂质过氧化, 使作为老化因子的过氧化脂质无法生成, 保护精子细胞膜防止氧化反应的发生, 从而提高了精子的完整性由此可见, 适量添加维生素 E 后可以极显著地减

6 中国农学通报缓精子顶体畸形率的发生, 增加顶体完整率, 所以有效地减缓了冷冻对精子的伤害作用, 显著提高冷冻精子活率, 明显改善精液品质试验添加咖啡因对小尾寒羊精子的解冻活率的影响, 添加 mg/ml 的咖啡因使小尾寒羊精子的解冻活率达., 均显著高于对照组, 说明咖啡因能显著提高精子解冻后的活力, 并不影响精子畸形率及顶体完整率试验中, 当咖啡因浓度较低或平衡时间过短时, 它对精子的兴奋作用有限, 可能降低精子的解冻活力, 且只能在短时间内维持对精子的作用 ; 而当咖啡因浓度过大或平衡时间过长, 对精子的刺激作用虽较强, 加剧咖啡因对精子的毒害作用, 而且还会增加精子冷冻之前生命物质的代谢消耗, 影响精子冷冻解冻后的存活力和受精能力, 因而制冻效果差, 和之前参阅的资料报道相符高浓度 ( 大于 mg/ml) 的咖啡因则会抑制精子运动, 这符合咖啡因作用的内在规律精子的复苏率是精子耐冻性的重要标志咖啡因不仅对机体中枢神经产生兴奋作用, 而且对精细胞具有类似的影响, 使不运动的精子产生活力更重要的是, 咖啡因作为环状核苷酸二脂酶的一种抑制剂, 通过抑制该酶分解而使细胞内累积充分的环状磷酸腺苷 (camp), 而 camp 能在 ATP 酶活性低的情况下维持精子活力 (Shannon 和 Curson.98.EL-Gaafary 等 99) 添加咖啡因对小尾寒羊精子顶体形态的影响, 两组差异不显著, 说明添加咖啡因对小尾寒羊冻精精子顶体影响不大此次试验有很多地方需要改进, 由于不是羊正常发情采精的时间, 所以活力相应较低, 当羊鲜精活力不高时, 加入咖啡因也能相应提高羊精子活力, 提高精液存储价值, 能满足冻精储精的生产需要, 可以在后期工作中, 提高采精周期如果在羊正常采精周期时节采精, 加入咖啡因, 能达到., 试验中个别组能体现出结论 () 在冷冻精液稀释液中添加适当浓度维生素 E 可以减缓冷冻对精子的伤害, 提高小尾寒羊冷冻精子活率, 改善冷冻精液的品质 ; () 常规稀冷冻释液中添加维生素 E 的最佳浓度为. mg/ml () 小尾寒羊精液在添加咖啡因 mg/ml 的稀释液中冷冻时, 解冻后精液活力显著提高, 并且不影响精子的率和顶体完整率参考文献 [] 王军. 加强种公羊的综合管理, 优质高效的生产冻精 [J]. 草食家畜,,():-. [] 徐振军, 闫长亮, 郭成等. 小尾寒羊精液保存技术研究 [J] 中国畜牧杂志,,():9-. [] 李晓强, 陈兴平, 贾永红等. 牛精液冷冻技术应用研究进展 [J]. 中国牛业科学,,():9-. [] 罗海玲, 贾志海等. 稀释液中添加维生素 E 对绵羊冷冻精液品质的影响 [J]. 中国畜牧杂志,, ():-9. [] 安立龙, 黄志毅, 冯嘉颖等. 不同浓度咖啡因对三黄鸡精液冷冻 [J]. 甘肃畜牧兽医,, 8():-. [] 肖雄. 维生素 E 的研究与应用, 饲料与添加剂 [J]. 畜禽业,, ():-. [] 罗海玲, 贾志海等.. 维生素 E 对绵羊鲜精及冻精精液品质的影响 [J]. 中国草食动物,,():-. [8] 赵晓娥, 王光亚, 王希朝. 波尔山羊精液保存条件的研究 [J]. 动物医学进展,999,():-.

5月15期

5月15期中国农学通报 2012,28(15):106-111 Chinese Agricultural Science Bulletin 旱地小麦休闲期不同耕作措施对土壤水分蓄纳利用与产量形成的影响贺立恒, 高志强, 孙敏, 李青 ( 山西农业大学农学院, 山西太谷 030801) 摘要 : 为了提