钝头蛇类系统学研究进展

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1 动 物 学 杂 志 Chinese Journal of Zoology 2015, 50(4): 591 ~ 599 牛 蛙 外 周 血 细 胞 的 形 态 学 特 点 龚 小 玲 王 米 雪 汪 德 海 鲍 宝 龙 * 上 海 海 洋 大 学 省 部 共 建 水 产 种 质 资 源 发 掘 与 利 用 教 育 部 重 点 实 验 室 上 海 摘 要 : 本 研 究 对 雌 雄 牛 蛙 (Rana catesbeiana) 外 周 血 细 胞 的 组 成 形 态 大 小 和 数 量 进 行 了 观 察 和 统 计 牛 蛙 外 周 血 细 胞 由 红 细 胞 白 细 胞 以 及 血 栓 细 胞 组 成, 其 中 红 细 胞 体 积 最 大, 平 均 大 小 ( 长 径 短 径 ) 为 (25.68 ± 1.88)μm (16.49 ± 1.53)μm, 扫 描 电 镜 下 发 现 红 细 胞 表 面 光 滑 ; 血 栓 细 胞 呈 卵 圆 形 或 纺 锤 形, 其 体 积 最 小, 平 均 大 小 为 (8.62 ± 1.04)μm (7.47 ± 1.11)μm; 白 细 胞 由 淋 巴 细 胞 单 核 细 胞 浆 细 胞 嗜 中 性 粒 细 胞 嗜 酸 性 粒 细 胞 和 嗜 碱 性 粒 细 胞 组 成, 扫 描 电 镜 下 白 细 胞 表 面 粗 糙 不 平, 有 许 多 不 规 则 的 凸 起 白 细 胞 中 淋 巴 细 胞 最 多, 其 中 小 淋 巴 细 胞 约 占 白 细 胞 的 32.66% ± 4.29%, 大 淋 巴 细 胞 约 占 6.03% ± 1.54%; 嗜 碱 性 粒 细 胞 最 少, 只 占 4.78% ± 0.83%; 浆 细 胞 胞 体 大 小 不 一, 常 呈 椭 圆 形, 平 均 大 小 为 (23.51 ± 0.59)μm (22.86 ± 0.67)μm; 此 外, 牛 蛙 外 周 血 细 胞 中 单 核 细 胞 淋 巴 细 胞 和 嗜 碱 性 粒 细 胞 的 数 量 比 例 以 及 淋 巴 细 胞 和 嗜 碱 性 粒 细 胞 的 大 小 均 有 性 别 的 差 异 (P < 0.05) 关 键 词 : 牛 蛙 ; 外 周 血 细 胞 ; 形 态 ; 数 量 中 图 分 类 号 :Q952 文 献 标 识 码 :A 文 章 编 号 : (2015) The Morphological Characteristics of the Peripheral Hematocytes in Bullfrog (Rana catesbeiana) GONG Xiao-Ling WANG Mi-Xue WANG De-Hai BAO Bao-Long * Key Laboratory of Aquatic Genetic Resources and Aquacultural Ecology, Certificated by the Ministry of Agriculture, Shanghai Ocean University, Shanghai , China Abstract: The bullfrog (Rana catesbeiana), which belongs to Anura, Ranidae and Rana, is one of the important economic farmed animals in China. The morphological of the peripheral hematocytes in the bullfrog has not yet well known. In this study, we observed the composition and morphology of the peripheral blood cells from 20 individuals (each for male and female) using Wright's staining under the light microscope or the scanning electron microscopy (SEM). The diameters of various hematocytes and their nuclei in shortest and longest axes were measured using routine methods, and the experimental data were analyzed by SPSS19.0. The results showed that the peripheral hematocytes of the bullfrog were composed of erythrocytes, leukocytes, and thrombocytes. The mean size of erythrocytes in length width was ± 1.88 μm ± 1.53 μm (Table 1). The surface of erythrocyte was smooth under the SEM (PlateⅡ). 基 金 项 目 国 家 自 然 科 学 基 金 项 目 (No ) 和 上 海 教 委 创 新 重 点 项 目 (No. 14ZZ145); * 通 讯 作 者, [email protected]; 第 一 作 者 介 绍 龚 小 玲, 女, 副 教 授 ; 研 究 方 向 : 进 化 生 物 学 ; [email protected] 收 稿 日 期 : , 修 回 日 期 : DOI:.13859/j.cjz

2 592 动 物 学 杂 志 Chinese Journal of Zoology 50 卷 Typically, thrombocyte was ovoid or spindle-like in shape (PlateⅠ) and it was the smallest blood cell with a mean size of 8.62 ± 1.04 μm 7.47 ± 1.11 μm (Table 1). Leukocytes consisted of lymphocytes, monocytes, plasmacyts, neutrophils, eosinophils and basophils. Under the SEM, the surfaces of various leukocytes were rough with many irregular protrusions (PlateⅡ). Lymphocytes including small and large lymphocytes occupied a high percent, small lymphocytes were found to consist of approximately 32.66% ± 4.29% of the total leukocytes, while large lymphocytes accounted for about 6% (Table 1). The number of the basophils were the least in the leukocytes, only accounting for about 4.78% ± 0.83% (Table 1). Plasmacytes were typically elliptical in shape (PlateⅠ), and their sizes varied obviously, with the mean size ± 0.59 μm ± 0.67 μm (Table 1). In addition, the quantitative proportion of the lymphocytes, basophils and plasmacytes and the size of lymphocytes and basophils were influenced by gender (P < 0.05). Keyword: Bullfrog (Rana catesbeiana); Peripheral hematocytes; Morphology; Quantity 血 液 是 动 物 体 内 循 环 流 动 的 液 体 组 织, 它 在 动 物 机 体 的 生 命 活 动 中 起 着 非 常 重 要 的 作 用 ( 周 贤 君 等 2008) 作 为 组 成 血 液 的 重 要 成 分 和 有 形 成 分, 血 细 胞 是 动 物 体 内 对 自 身 生 理 状 态 变 化 和 外 界 环 境 因 子 刺 激 非 常 敏 感 的 细 胞, 在 气 体 运 输 和 机 体 免 疫 中 起 着 重 要 作 用 (Ellis 1977) 因 此, 血 液 学 经 常 被 用 来 作 为 评 估 低 等 脊 椎 动 物 ( 鱼 类 两 栖 类 爬 行 类 ) 健 康 程 度 的 指 标 (Campbell 2004) 目 前, 关 于 低 等 脊 椎 动 物 血 液 学 方 面 的 文 献 报 道 已 有 许 多, 主 要 集 中 在 在 鱼 类 和 爬 行 类 (Work et al. 1998, 袁 仕 取 等 1998,Fijan 2002, Azevedo et al. 2003, 张 海 发 等 2004,Rough et al. 2005,Tavares-Dias 2006,Casal et al. 2007), 在 两 栖 动 物 血 细 胞 的 形 态 和 数 量 方 面 也 有 一 定 的 研 究, 如 长 趾 蛙 (Rana macrodactyla,arserim et al. 2008) 印 度 树 蛙 (Polypedates maculates Gray,Mahapatra et al. 2012) 和 中 华 大 蟾 蜍 (Bufo bufogargarizans, 周 庆 萍 等 2012) 等, 牛 蛙 (R. catesbeiana) 作 为 我 国 引 进 的 水 产 养 殖 品 种 之 一, 周 贤 君 等 (20) 对 其 血 细 胞 做 了 一 定 的 研 究, 但 并 未 进 行 系 统 的 分 类 以 及 积 累 相 应 的 形 态 学 数 据 本 文 通 过 光 镜 和 扫 描 电 镜 技 术, 较 为 系 统 地 调 查 了 雌 雄 牛 蛙 外 周 血 细 胞 的 组 成 形 态 和 大 小 等, 丰 富 了 两 栖 类 血 液 学 研 究 的 内 容, 为 牛 蛙 养 殖 产 业 和 病 害 防 治 提 供 理 论 基 础 1 材 料 与 方 法 1.1 材 料 2014 年 6 月, 实 验 用 牛 蛙 从 上 海 农 工 商 超 市 购 买, 为 江 苏 省 金 坛 市 永 乐 牛 蛙 养 殖 专 业 合 作 社 饲 养, 体 重 为 (0.23 ± 0.28)kg 的 健 康 牛 蛙 20 只, 雌 雄 各 只, 其 中 雄 蛙 平 均 体 重 为 (0.22 ± 0.46)kg, 雌 蛙 平 均 体 重 为 (0.24 ± 0.12)kg 1.2 方 法 血 细 胞 染 色 观 察 用 毁 髓 针 破 坏 牛 蛙 脊 髓, 昏 迷 后 打 开 心 腔, 取 心 血 收 集 的 血 液 立 即 转 入 加 有 柠 檬 酸 钠 溶 液 (0.190 mol/l) 的 离 心 管 中, 血 液 与 柠 檬 酸 钠 溶 液 的 体 积 比 为 8.. 1, 用 移 液 抢 吹 打 均 匀, 置 于 4 冰 箱 备 用 将 新 鲜 血 液 即 刻 制 作 血 涂 片 涂 片 在 空 气 中 干 燥 后 用 瑞 氏 染 液 染 色 5 min, 再 滴 加 ph 6.8 的 磷 酸 缓 冲 溶 液, 静 置 5 ~ 8 min 后 用 蒸 馏 水 轻 轻 冲 洗 干 净, 晾 干 封 片 Nikon E200 显 微 镜 观 察, 拍 照 扫 描 电 镜 观 察 向 血 液 中 加 入 2.5% 戊 二 醛 固 定 2 h 左 右, 用 PBS 缓 冲 液 清 洗 ; 乙 醇 梯 度 脱 水 :30% 50% 70% 85% 95% 各 1 次,0% 乙 醇 2 次, 每 次 15 ~ 20 min; 醋 酸 异 戊 酯 置 换 2 次, 每 次 20 min; 放 入 临 界 点 干 燥 仪 干 燥 2 h 左 右 ; 用 导 电 胶 将 干 燥 后 的 样 品 粘 在 样 品 台 上, 放 入 离 子 溅 射 仪 中 镀 金 膜, 最 后

3 4 期 龚 小 玲 等 : 牛 蛙 外 周 血 细 胞 的 形 态 学 特 点 593 进 行 扫 描 电 镜 观 察 ( 日 立 扫 描 电 子 显 微 镜 SU3500) 各 类 细 胞 大 小 及 白 细 胞 分 类 计 数 在 Nikon Eclipse 40 倍 镜 下 分 别 对 雌 雄 个 体 的 30 张 涂 片 的 300 个 视 野 进 行 观 察 拍 照 并 测 量 细 胞 大 小 其 中, 雌 雄 性 个 体 的 30 张 涂 片 分 别 是 个 体 的 涂 片,30 张 涂 片 总 计 300 个 视 野 每 种 细 胞 从 所 有 涂 片 的 所 有 视 野 随 机 测 量 50 个 细 胞, 求 其 平 均 值 与 标 准 差 (Mean ± SD), 对 外 周 血 涂 片 的 视 野 中 白 细 胞 进 行 分 类 计 数 (differential leukocyte counts,dlc) 实 验 数 据 用 Excel 软 件 与 SPSS19.0 软 件 进 行 统 计 分 析, 对 雌 雄 牛 蛙 间 血 细 胞 的 有 关 性 状 进 行 t 检 验 2 结 果 2.1 血 细 胞 形 态 特 征 红 细 胞 (erythrocyte) 红 细 胞 是 牛 蛙 的 外 周 血 中 最 主 要 的 组 成 部 分, 包 括 成 熟 红 细 胞 ( 图 版 Ⅰ:1) 和 未 成 熟 的 晚 幼 红 细 胞 ( 图 版 Ⅰ:1) 成 熟 的 红 细 胞 表 面 光 滑, 细 胞 核 居 中 且 呈 椭 圆 形 或 圆 形, 核 外 周 细 胞 质 包 围, 染 色 质 较 为 紧 密, 着 色 深, 染 色 质 被 染 成 深 紫 红 色 细 胞 质 丰 富, 着 色 淡, 呈 灰 蓝 色 晚 幼 红 细 胞 胞 体 比 成 熟 红 细 胞 略 大, 核 较 成 熟 红 细 胞 的 大, 呈 圆 形, 位 于 细 胞 中 央, 染 色 质 结 构 疏 松, 着 色 较 浅 另 外, 还 见 到 正 在 分 裂 的 红 细 胞 ( 图 版 Ⅰ:2), 多 为 从 核 开 始 分 裂, 细 胞 质 还 是 一 个 整 体 血 涂 片 中 往 往 可 以 看 到 大 量 的 核 影 ( 图 版 Ⅰ:3), 其 形 状 不 规 则, 比 成 熟 红 细 胞 大, 染 色 较 浅, 呈 粉 红 色, 染 色 质 极 为 疏 松 在 扫 描 电 镜 下, 红 细 胞 呈 椭 圆 形 或 扁 圆 形, 表 面 光 滑 ( 图 版 Ⅱ:1) 血 栓 细 胞 (thrombocyte) 在 牛 蛙 血 涂 片 上 明 显 可 见 2 种 形 态 的 血 栓 细 胞,Ⅰ 型 胞 体 为 梭 形 或 纺 锤 形, 胞 核 与 胞 体 形 态 相 似, 中 间 处 核 膜 与 细 胞 膜 相 切, 仅 胞 体 长 轴 两 端 有 少 量 胞 质, 胞 核 占 细 胞 体 积 比 例 极 大, 染 色 质 为 深 紫 色, 致 密 ( 图 版 Ⅰ:4);Ⅱ 型 胞 体 呈 圆 形, 核 质 比 较 大, 染 色 质 致 密, 被 染 成 深 蓝 色 ( 图 版 Ⅰ:5) 另 外 图 片 中 还 发 现 正 在 分 裂 的 血 栓 细 胞 ( 图 版 Ⅰ:6) 白 细 胞 (leukocyte) 白 细 胞 数 量 较 红 细 胞 少, 根 据 细 胞 质 有 无 染 色 颗 粒 分 为 有 粒 白 细 胞 和 无 粒 白 细 胞 在 有 粒 白 细 胞 中, 根 据 染 色 反 应 不 同 及 大 小 不 等 的 各 种 颗 粒, 可 分 为 嗜 中 性 粒 细 胞 嗜 酸 性 粒 细 胞 和 嗜 碱 性 粒 细 胞 无 粒 白 细 胞 包 括 单 核 细 胞 淋 巴 细 胞 及 浆 细 胞 嗜 中 性 粒 细 胞 (neutrophil) 牛 蛙 的 嗜 中 性 粒 细 胞 ( 图 版 Ⅰ:7,8) 多 呈 圆 形, 胞 核 较 小, 偏 位, 呈 肾 形 卵 圆 形 等, 常 常 一 侧 扁 平 或 凹 陷, 染 色 质 聚 集 成 紧 密 的 索 块 状, 呈 深 紫 红 色, 核 膜 清 楚, 无 核 仁 胞 质 量 多, 染 灰 红 色 或 淡 蓝 色, 内 含 中 等 量 细 小 大 小 较 一 致 分 布 密 集 的 中 性 颗 粒, 呈 淡 紫 红 色 或 淡 红 色 血 涂 片 中 可 见 许 多 中 性 分 叶 核 粒 细 胞 ( 图 版 Ⅰ: 9 ~ 13), 其 胞 核 呈 分 叶 状, 叶 与 叶 之 间 有 细 核 丝 相 连 或 完 全 断 开, 或 虽 未 断 开 但 有 明 显 的 折 痕, 核 常 分 2 ~ 5 叶 扫 描 电 镜 下 嗜 中 性 粒 细 胞 表 面 凹 凸 不 平, 折 痕 明 显 ( 图 版 Ⅱ:2) 嗜 酸 性 粒 细 胞 (eosinophil) 嗜 酸 性 粒 细 胞 胞 体 呈 圆 形, 胞 核 小, 呈 肾 形 或 椭 圆 形, 位 于 细 胞 中 央 或 偏 向 细 胞 一 侧 ; 胞 质 中 充 满 着 橘 红 色 的 嗜 酸 性 颗 粒, 有 少 量 褐 色 或 紫 黑 色 的 颗 粒 夹 杂 在 其 中 另 外, 其 胞 核 或 分 叶, 中 间 由 核 细 丝 连 接, 如 三 叶 核 的 嗜 酸 性 粒 细 胞 ( 图 版 Ⅰ:14) 在 扫 描 电 镜 下, 嗜 酸 性 粒 细 胞 呈 簇 状, 折 痕 较 嗜 中 性 粒 细 胞 紧 凑 致 密 ( 图 版 Ⅱ: 3) 嗜 碱 性 粒 细 胞 (basophil) 胞 体 较 嗜 中 性 粒 细 略 小, 圆 形, 表 面 伸 出 细 小 的 伪 足, 胞 核 轮 廓 不 清 楚, 核 染 色 质 较 模 糊 胞 质 及 胞 核 上 有 数 量 不 多 形 态 不 一 大 小 不 等 排 列 凌 乱 的 嗜 碱 性 颗 粒, 该 颗 粒 呈 深 紫 黑 色 或 深 紫 红 色 ( 图 版 Ⅰ:15) 在 扫 描 电 镜 下, 嗜 碱 性 粒 细 胞 表 面 起 伏 不 平, 有 层 次 感 ( 图 版 Ⅱ:4) 淋 巴 细 胞 (lymphocyte) 牛 蛙 的 淋 巴 细 胞 包 括 大 淋 巴 细 胞 ( 图 版 Ⅰ:16) 和 小 淋 巴

4 594 动 物 学 杂 志 Chinese Journal of Zoology 50 卷 细 胞 ( 图 版 Ⅰ:17), 其 中 小 淋 巴 细 胞 的 数 量 要 多 于 大 淋 巴 细 胞 小 淋 巴 细 胞 胞 体 较 小, 呈 圆 形 或 椭 圆 形, 胞 核 大, 几 乎 占 细 胞 的 全 部, 呈 圆 形 或 有 小 切 迹, 染 色 质 聚 集 紧 密 呈 不 清 晰 的 大 块 状, 染 深 紫 色 胞 质 较 少, 似 裸 核 或 仅 有 一 抹 染 淡 蓝 色 或 灰 蓝 色 胞 质, 一 般 无 颗 粒, 有 时 可 见 胞 质 突 起 大 淋 巴 细 胞 胞 体 与 小 淋 巴 细 胞 相 似, 胞 核 圆 形 或 椭 圆 形, 常 偏 位, 偶 有 小 的 凹 陷, 核 染 色 质 呈 隐 约 多 块 状, 排 列 紧 密 胞 质 较 多, 染 透 明 淡 蓝 色 或 灰 蓝 色, 偶 有 少 许 深 紫 红 色 嗜 苯 蓝 颗 粒 在 扫 描 电 镜 下, 淋 巴 细 胞 分 二 种 :T 淋 巴 细 胞 ( 图 版 Ⅱ:5,6), 细 胞 表 面 凹 凸 不 平, 有 微 绒 毛 状 突 起 ;B 淋 巴 细 胞 ( 图 版 Ⅱ:7), 表 面 相 对 光 滑 单 核 细 胞 (monocyte) 胞 体 呈 圆 形 或 不 规 则 形, 常 可 见 大 的 假 钝 足 或 小 突 起 胞 核 较 大, 常 呈 肾 形 马 蹄 形 S 形 分 叶 型 或 花 瓣 状 等 不 规 则 型, 可 见 明 显 的 扭 曲 折 叠 凹 陷 或 切 迹, 核 染 色 质 较 细 致, 疏 松 呈 丝 网 状 或 条 索 状, 表 面 有 凹 凸 起 伏 的 不 平 感, 呈 淡 紫 红 色 胞 质 多, 染 灰 蓝 色 或 略 带 红 色, 半 透 明 如 毛 玻 璃 样, 有 时 在 胞 质 边 缘 部 分 染 色 较 深, 呈 不 甚 明 显 的 裙 边 样 结 构, 胞 质 中 可 见 许 多 细 小 分 散 灰 尘 样 的 紫 红 色 嗜 苯 胺 蓝 颗 粒, 并 常 见 有 少 许 细 小 空 泡 ( 图 版 Ⅰ:18 ~ 22) 涂 片 中 还 发 现 了 幼 稚 单 核 细 胞 ( 图 版 Ⅰ:23) 在 扫 描 电 镜 下, 单 核 细 胞 表 面 粗 糙 不 平, 有 许 多 不 规 则 的 突 起 和 伪 足 ( 图 版 Ⅱ:8,9) 浆 细 胞 (plasmacyte) 在 牛 蛙 血 涂 片 上 还 发 现 了 浆 细 胞 ( 图 版 Ⅰ:24), 其 胞 体 大 小 不 一, 常 呈 椭 圆 形, 边 缘 不 规 则, 可 有 刺 状 突 出 胞 核 呈 圆 形 或 不 规 则 形, 多 偏 于 细 胞 一 侧 或 部 分 位 于 胞 外, 染 色 质 浓 密 成 块 胞 质 丰 富, 染 深 蓝 色 或 深 紫 色, 不 透 明, 常 有 较 多 小 空 泡, 呈 泡 沫 状 2.2 各 类 细 胞 大 小 及 白 细 胞 分 类 计 数 由 表 1 可 知, 牛 蛙 血 细 胞 中 红 细 胞 最 大, 平 均 大 小 ( 长 径 短 径 ) 为 (25.68 ± 1.88)μm (16.49 ± 1.53)μm, 雌 雄 蛙 的 红 细 胞 大 小 差 异 不 显 著 白 细 胞 中, 淋 巴 细 胞 数 量 最 多, 其 中 小 淋 巴 细 胞 约 占 32.66% ± 4.29%, 大 淋 巴 细 胞 约 占 6.03% ± 1.54%; 其 次 为 单 核 细 胞 嗜 中 性 粒 细 胞 和 嗜 酸 性 粒 细 胞, 嗜 碱 性 粒 细 胞 数 量 最 少, 只 占 4.78% ± 0.83% 淋 巴 细 胞 中 小 淋 巴 细 胞 的 数 量 要 多 于 大 淋 巴 细 胞 小 淋 巴 细 胞 数 量 为 雌 蛙 高 于 雄 蛙 (P < 0.05), 但 雌 蛙 的 小 淋 巴 细 胞 及 其 胞 核 的 长 径 和 短 径 均 显 著 小 于 雄 蛙 (P < 0.05); 大 淋 巴 细 胞 数 量 为 雌 蛙 高 于 雄 蛙 (P < 0.05), 雌 蛙 的 大 淋 巴 细 胞 及 其 胞 核 的 长 径 和 短 径 均 显 著 大 于 雄 蛙 (P < 0.05); 雌 蛙 的 单 核 细 胞 数 量 要 低 于 雄 蛙 (P < 0.05), 但 细 胞 大 小 无 显 著 性 差 异 ; 雌 雄 蛙 嗜 中 性 粒 细 胞 和 嗜 酸 性 粒 细 胞 的 数 量 以 及 细 胞 大 小 均 无 显 著 性 差 异 ; 雌 蛙 的 嗜 碱 性 粒 细 胞 少 于 雄 蛙 (P < 0.05), 但 雌 蛙 的 嗜 碱 性 粒 细 胞 长 径 和 短 径 均 显 著 大 于 雄 蛙 (P < 0.05); 相 比 于 其 他 类 型 的 血 细 胞, 血 栓 细 胞 最 小, 雌 蛙 的 血 栓 细 胞 长 径 和 短 径 均 显 著 大 于 雄 蛙 (P < 0.05); 雌 雄 蛙 的 浆 细 胞 大 小 无 显 著 性 差 异 3 讨 论 红 细 胞 是 牛 蛙 外 周 血 细 胞 中 数 量 最 多 的 血 细 胞, 在 涂 片 中 发 现 大 量 核 影 存 在, 核 影 的 形 成 过 程 多 数 与 红 细 胞 有 关, 红 细 胞 核 扩 散, 同 时 细 胞 形 态 由 椭 圆 变 为 不 规 则, 出 现 细 胞 膜 破 裂, 细 胞 质 扩 散, 最 后 只 剩 下 逐 渐 扩 散 的 细 胞 核 对 脊 椎 动 物 而 言, 进 化 程 度 越 高 等 的 种 类, 其 红 细 胞 体 积 越 小, 数 量 也 越 多 ( 周 庆 萍 等 2011) 实 验 测 得 的 牛 蛙 红 细 胞 大 于 绝 大 多 数 爬 行 动 物 的 红 细 胞 ( 吴 孝 兵 等 1998), 而 爬 行 动 物 的 红 细 胞 又 比 哺 乳 动 物 的 红 细 胞 大 ( 周 贤 君 等 2008)( 人 类 成 熟 红 细 胞 直 径 7 μm 左 右, 唐 锦 治 1984), 符 合 进 化 规 律 由 于 两 栖 类 动 物 体 内 缺 乏 像 哺 乳 动 物 体 内 的 骨 髓 和 淋 巴 结 那 样 完 善 的 造 血 器 官, 因 此 在 牛 蛙 外 周 血 涂 片 中, 可 以 发 现 成 熟 的 红 细 胞 和 未 成 熟 的 晚 幼 红 细 胞, 甚 至 直 接 分 裂 的 红 细 胞,

5 4 期 龚 小 玲 等 : 牛 蛙 外 周 血 细 胞 的 形 态 学 特 点 595 表 1 牛 蛙 白 细 胞 分 类 计 数 和 各 类 细 胞 大 小 ( 平 均 值 ± 标 准 差 ) Table 1 Differential leukocyte counts (DLC) and the sizes of different blood cells of bullfrog (Mean ± SD) 性 别 Gender 样 本 量 (n) Sample size 白 细 胞 分 类 计 数 (%) Differential leukocyte counts (DLC) 细 胞 大 小 Cell size 长 径 (μm) 短 径 (μm) Long diameter (μm) short diameter (μm) 核 大 小 Nucleus size 长 径 (μm) 短 径 (μm) Long diameter (μm) short diameter (μm) 红 细 胞 Erythrocyte (26.18 ± 2.00) (16.93 ± 1.39) (25.17 ± 1.70) (16.06 ± 1.67) (9.23 ± 0.83) (5.93 ± 0.65) (9.22 ± 0.60) (5.94 ± 0.77) 小 淋 巴 细 胞 Small lymphocyte ± 4.12 * (.01 ± 0.83) (9.34 ± 0.92) * ± 4.46 * (11.11 ± 0.66) (9.69 ± 1.31) * 大 淋 巴 细 胞 Large lymphocyte 6.54 ± 1.76 * (14.45 ± 1.02) (12.68 ± 1.43) * (14.09 ±0.82) (11.98 ±1.20) * 5.40 ± 1.32 * (13.41 ± 0.94) (11.87 ± 0.74) * (13.13 ±0.96) (.91 ±0.86) * 嗜 中 性 细 胞 Neutrobphil ± ± 2.06 (17.31 ± 0.87) (16.02 ± 0.76) (16.06 ± 0.91) (15.41 ± 0.61) (14.57 ± 0.64) (9.78 ± 0.73) (14.51 ± 0.71) (9.79 ± 0.64) 嗜 酸 性 粒 细 胞 Eosinophil ± ± 2.24 (17.72 ± 1.07) (15.87 ± 0.91) (18.21 ± 0.97) (16.93 ± 1.01) 嗜 碱 性 粒 细 胞 Basophil 4.51 ± 0.76 * (13.16 ± 0.51) (11.9 ± 0.34) * 5.05 ± 0.91 * (12.60 ± 0.55) (.76 ± 0.64) * 单 核 细 胞 Monocyte ± 2.87 * (15.81 ± 0.92) (14.34 ± 0.90) ± 3.11 * (14.01 ± 0.77) (11.87 ± 0.81) (12.14 ± 0.58) (7.06 ± 0.88) (11.92 ± 0.83) (7.56 ± 0.94) 血 栓 细 胞 Thrombocyte (9.14 ± 1.17) (8.14 ± 1.03) * (8.11 ± 0.91) (6.81 ± 1.19) * 浆 细 胞 Plasmacyte (23.58 ± 0.56) (22.97 ± 0.71) (23.43 ± 0.62) (22.76 ± 0.62) (18.51 ± 0.48) (15.97 ± 0.52) (17.98 ± 0.73) (15.34 ± 0.47) 单 核 细 胞 和 血 栓 细 胞 由 于 形 态 各 异, 以 数 量 最 多 的 算 雌 雄 蛙 血 细 胞 各 参 数 相 比, 代 表 P < 0.05 Due to different patterns of monocytes and thrombocytes, we calculated with the largest number. A symbol * means P < 这 种 血 细 胞 在 外 周 血 液 继 续 成 熟 的 现 象, 在 许 多 硬 骨 鱼 类 如 齐 口 裂 腹 鱼 ( Schizothorax prenanti)( 杨 淞 等 2011) 和 黑 鲷 (Sparus macrocephalus)( 梅 景 良 等 2008) 等 中 也 有 报 道, 这 说 明 外 周 血 液 不 仅 是 牛 蛙 等 两 栖 动 物 及 硬 骨 鱼 类 血 液 执 行 功 能 的 场 所, 也 是 血 细 胞 发 育 和 继 续 成 熟 的 场 所 与 印 度 树 蛙 (Mahapatra et al. 2012) 长 趾 蛙 (Arserim et al. 2008) 和 中 华 大 蟾 蜍 ( 周 庆 萍 等 2012) 等 两 栖 动 物 相 似, 牛 蛙 白 细 胞 分 为 无 粒 型 白 细 胞 和 有 粒 型 白 细 胞 无 粒 型 白 细 胞 包 括 淋 巴 细 胞 和 单 核 细 胞 及 浆 细 胞 ; 有 粒 型 白 细 胞 包 括 嗜 酸 性 粒 细 胞 嗜 碱 性 粒 细 胞 和 嗜 中 性 粒 细 胞 淋 巴 细 胞 是 牛 蛙 外 周 血 中 最 常 见 的 白 细 胞 之 一, 其 细 胞 大 小 变 化 较 大 通 常 根 据 其 细 胞 形 态 和 大 小 将 其 分 为 大 淋 巴 细 胞 和 小 淋 巴 细 胞 2 种, 小 淋 巴 细 胞 胞 体 呈 圆 形, 胞 质 较 少, 细 胞 表 面 有 伪 足 虽 然 不 同 淋 巴 细 胞 之 间 大 小 存 在 着 较 大 差 异, 但 外 形 却 基 本 一 致, 而 且 与 其 他 脊 椎 动 物 的 淋 巴 细 胞 极 为 相 似 可 见 淋 巴 细 胞 作 为 免 疫 防 御 的 基 础, 其 结 构 在 动 物 物 种 的 系 统 发 生 过 程 中 变 化 不 大 ( 郭 宪 光 等 2002) 浆 细 胞 是 牛 蛙 血 液 中 比 较 少 见 的 一 类 白 细 胞, 它 是 机 体 受 到 抗 原 刺 激 后, 由 淋 巴 细 胞 增 殖 产 生, 具 有 参 与 机 体 的 体 液 免 疫 反 应 与 合 成 贮 存 和 分 泌 抗 体 的 功 能 ( 楼 允 东 2000) 一 般 认 为 浆 细 胞 多 见 于 消 化 道 和 呼 吸 道 固 有 膜 的 结 缔 组 织 中 牛 蛙 的 血 栓 细 胞 又 称 凝 血 细 胞, 类 似 于 哺

6 596 动 物 学 杂 志 Chinese Journal of Zoology 50 卷 乳 动 物 的 血 小 板, 是 一 种 非 常 不 稳 定 的 成 分, 在 流 出 的 血 液 里 它 们 会 很 快 地 解 体, 因 此 它 们 的 大 小 和 形 状 很 不 一 致 ( 周 庆 萍 等 20) 由 于 其 染 色 结 果 跟 红 细 胞 很 相 似, 并 且 胞 质 中 未 出 现 白 细 胞 中 颗 粒 状 物, 因 此 有 学 者 认 为 血 栓 细 胞 保 留 了 红 细 胞 的 结 构 特 点, 但 有 了 功 能 的 分 化, 具 有 凝 血 作 用 ( 郭 宪 光 等 2002) 根 据 观 察 到 的 血 栓 细 胞 的 形 态 特 点, 笔 者 认 为 牛 蛙 血 栓 细 胞 是 红 细 胞 的 衍 生 物 性 别 不 同 的 牛 蛙 外 周 血 细 胞 的 形 态 相 似, 但 是 其 中 部 分 细 胞 的 大 小 以 及 所 占 的 比 例 却 略 有 差 别, 这 说 明 牛 蛙 的 部 分 血 细 胞 的 数 量 及 大 小 受 到 性 别 的 影 响, 但 具 体 原 因 还 有 待 进 一 步 研 究 参 考 文 献 Arserim S K, Mermer A Hematology of the Uludağ Frog, Rana macrocnemis Boulenger, 1885 in Uludağ National Park (Bursa, Turkey). Journal of Fisheries & Aquatic Sciences, 25(1): Azevedo A, Lunardi L O Cytochemical characterization of eosinophilic leukocytes circulating in the blood of turtle (Chrysemys dorbignih). Acta Histochemica, 5(1): Campbell T W Hematology of lower vertebrates Proceedings of the 55th Annual Meeting of the American College of Veterinary Pathologists & 39th Annual Meeting of the American Society of Clinical Pathology. Madison. Middleton WI, USA: American College of Veterinary Pathologists & American Society for Veterinary Clinical Pathology, Casal A B, Orós J Morphologic and cytochemical characteristics of blood cells of juvenile loggerhead sea turtles (Caretta caretta). Research in Veterinary Science, 82(2): Ellis A E The leucocytes of fish: a review. Journal of Fish Biology, 11(5): Fijan N Morphogenesis of blood cells lineages in channel catfish. Journal of Fish Biology, 60(4): Mahapatra B B, Das M, Dutta S K, et al Hematology of Indian rhacophorid tree frog Polypedates maculatus Gray, 1833 (Anura: Rhacophoridae). Comparative Clinical Pathology, 21(4): Rough K M, Nowak B F, Reuters R E Haematology and leukocyte morphology of wild caught Thunnus maccoyii. Journal of Fish Biology, 66(6): Tavares-Dias M A A morphological and cytochemical study of erythrocytes, thrombocytes and leukocytes in four freshwater teleosts. Journal of Fish Biology, 68(6): Work T M, Raskin R E, Balazs G H, et al Morphologic and cytochemical characteristics of blood cells from Hawaiian green turtles. American Journal of Veterinary Research, 59(): 郭 宪 光, 张 耀 光, 王 志 坚, 等 中 华 蟾 蜍 血 细 胞 的 观 察. 四 川 动 物, 21(4): 楼 允 东 组 织 胚 胎 学. 北 京 : 中 国 农 业 出 版 社, 梅 景 良, 王 寿 昆, 祁 保 民, 等 黑 鲷 外 周 血 细 胞 的 显 微 和 超 微 结 构 观 察. 热 带 海 洋 学 报, 27(2): 唐 锦 治 如 何 正 确 观 察 和 分 析 周 围 血 涂 片. 中 级 医 刊, 19(9): 吴 孝 兵, 杨 红 种 爬 行 动 物 血 细 胞 形 态 学 参 数 研 究. 动 物 学 杂 志, 33(1): 杨 淞, 杨 世 勇, 肖 拉, 等 养 殖 齐 口 裂 腹 鱼 外 周 血 细 胞 显 微 观 察. 四 川 动 物, 30(2): 袁 仕 取, 张 永 安, 姚 卫 建, 等 鳜 鱼 外 周 血 细 胞 显 微 和 亚 显 微 结 构 的 观 察. 水 生 生 物 学 报, 22(1): 张 海 发, 王 云 新, 林 蠡, 等 斜 带 石 斑 鱼 血 液 性 状 及 生 化 指 标 的 研 究. 华 南 师 范 大 学 学 报 : 自 然 科 学 版, (1): 2 7. 周 庆 萍, 黄 倩 环 颈 雉 红 细 胞 的 显 微 结 构 观 察. 河 南 师 范 大 学 学 报 : 自 然 科 学 版, 39(1): 周 庆 萍, 李 松, 黄 倩. 20. 双 团 棘 胸 蛙 血 细 胞 的 显 微 观 察. 西 北 师 范 大 学 学 报 : 自 然 科 学 版, 46(4): 周 庆 萍, 周 雪 林, 韦 国 彬 水 城 产 中 华 大 蟾 蜍 血 细 胞 的 显 微 观 察. 河 南 师 范 大 学 学 报 : 自 然 科 学 版, 39(4): 周 贤 君, 代 应 贵, 王 开 功, 等 低 等 脊 椎 动 物 血 细 胞 研 究 概 况. 水 利 渔 业, 28(2): 周 贤 君, 代 应 贵, 王 开 功, 等. 20. 不 同 季 节 牛 蛙 血 细 胞 变 化 的 研 究. 贵 州 农 业 科 学, 38(7):

7 4 期 龚 小 玲 等 : 牛 蛙 外 周 血 细 胞 的 形 态 学 特 点 597 图 版 Ⅰ 说 明 牛 蛙 外 周 血 细 胞 的 显 微 图 1. 红 细 胞 (Er) 和 晚 幼 红 细 胞 (Ore)( 200);2. 正 在 分 裂 的 红 细 胞 (Die)( 200);3. 核 影 (Ns)( 200);4. 梭 形 血 栓 细 胞 (Th)( 200);5. 血 栓 细 胞 (Th)( 400);6. 正 在 分 裂 的 血 栓 细 胞 (Th)( 400);7. 嗜 中 性 粒 细 胞 (Ne)( 400);8 ~ 13. 嗜 中 性 粒 细 胞 ( 分 叶 )(Sne)( 400);14. 嗜 酸 性 粒 细 胞 (Eo)( 400);15. 嗜 碱 性 粒 细 胞 (Ba)( 400);16. 大 淋 巴 细 胞 (Ll) ( 200);17. 小 淋 巴 细 胞 (Sl)( 400);18 ~ 20. 单 核 细 胞 ( 分 叶 )(Sm)( 400);21 ~ 22. 单 核 细 胞 (M)( 200);23. 幼 稚 单 核 细 胞 (Pr)( 400);24. 浆 细 胞 (P)( 400); 标 尺 = μm Explanation of PlateⅠ Microstructure of the peripheral hematocytes in bullfrog 1. Erythrocyte (Er) and Orthochromatic normoblase (Ore) ( 200); 2. Diving erythrocyte (Die) ( 200); 3. Nuclear shadow (Ns) ( 200); 4. Spindle- shaped thrombocyte (Th) ( 200 ); 5. Thrombocyte (Th) ( 400); 6. Diving thrombocyte (Th) ( 400); 7. Neutrophil (Ne) ( 400); Neutrophilic segmented granulocyte (Sne) ( 400); 14. Eosinophil (Eo) ( 400); 15. Basophil (Ba) ( 400); 16. Large lymphocyte (Ll) ( 200); 17. Small lymphocyte (Sl) ( 400); Monocytic segmented granulocyte (Sm) ( 400); Monocyte (M) ( 200); 23. Promonocyte (Pr) ( 400); 24. Plasmacyte (P) ( 400); Bar = μm. 图 版 Ⅱ 说 明 牛 蛙 外 周 血 细 胞 的 扫 描 电 镜 图 1. 红 细 胞 (Er)( 2 000);2. 嗜 中 性 粒 细 胞 (Ne)( 3 000);3. 嗜 酸 性 粒 细 胞 (Eo)( 2 000);4. 嗜 碱 性 粒 细 胞 (Ba)( 3 000); 5. T 淋 巴 细 胞 (Tl)( 3 000);6. T 淋 巴 细 胞 (Tl)( 5 000);7. B 淋 巴 细 胞 (Bl)( 5 000);8. 单 核 细 胞 (M)( 5 000); 9. 单 核 细 胞 (M)( 2 000); 标 尺 = μm Explanation of PlateⅡ SEM figure of the peripheral hematocytes in bullfrog 1. Erythrocyte (Er) ( 2 000); 2. Neutrophil (Ne) ( 3 000); 3. Eosinophil (Eo) ( 2 000); 4. Basophil (Ba) ( 3 000); 5. Thymus-dependent lymphocyte (Tl) ( 3 000); 6. Thymus-dependent lymphocyte (Tl) ( 5 000); 7. Bursa oriented cells (Bl) ( 5 000); 8. Monocyte (M) ( 5 000); 9. Monocyte (M) ( 2 000); Bar = μm.

8 598 动 物 学 杂 志 Chinese Journal of Zoology 50 卷 龚 小 玲 等 : 牛 蛙 外 周 血 细 胞 的 形 态 学 特 点 图 版 Ⅰ GONG Xiao-Ling et al.:the Morphological Characteristics of the Peripheral Hematocytes in Bullfrog (Rana catesbeiana) Plate Ⅰ 图 版 说 明 见 文 后

9 4 期 龚 小 玲 等 : 牛 蛙 外 周 血 细 胞 的 形 态 学 特 点 599 龚 小 玲 等 : 牛 蛙 外 周 血 细 胞 的 形 态 学 特 点 图 版 Ⅱ GONG Xiao-Ling et al.:the Morphological Characteristics of the Peripheral Hematocytes in Bullfrog (Rana catesbeiana) Plate Ⅱ 图 版 说 明 见 文 后