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1 406 药 学 学 报 Acta Pharmaceutica Sinica 2011, 46 (4): 泊 洛 沙 姆 407 诱 发 金 黄 地 鼠 脂 质 代 谢 紊 乱 模 型 及 其 初 步 机 制 * 刘 泉, 刘 率 男, 李 林 忆, 陈 致 瑜, 雷 蕾, 张 宁, 申 竹 芳 ( 中 国 医 学 科 学 院 北 京 协 和 医 学 院 药 物 研 究 所, 中 草 药 物 质 基 础 与 资 源 利 用 教 育 部 重 点 实 验 室, 北 京 ) 摘 要 : 采 用 泊 洛 沙 姆 (poloxamer 407, P-407) 诱 导 金 黄 地 鼠 形 成 脂 质 代 谢 紊 乱 实 验 动 物 模 型, 并 对 其 脂 质 代 谢 紊 乱 机 制 进 行 初 步 探 讨 ; 同 时 评 价 该 模 型 对 两 类 市 售 调 脂 药 物 的 反 应 性 选 择 6 周 龄 的 雄 性 金 黄 地 鼠 腹 腔 注 射 P-407, 首 剂 量 为 300 mg kg 1, 之 后 每 72 h 以 200 mg kg 1 的 维 持 剂 量 腹 腔 注 射 与 正 常 对 照 组 相 比, 模 型 组 血 清 中 TG TC free-cho CE FFA 及 apob 的 水 平 均 显 著 升 高, LDL-C 也 有 明 显 升 高 趋 势 ; 另 外, 模 型 组 血 清 MDA 和 NO 的 含 量 显 著 增 加 考 察 肝 脏 中 脂 质 转 运 相 关 酶 基 因 的 转 录 水 平 变 化, 发 现 该 模 型 肝 脏 中 LCAT 及 SR-BⅠ 的 mrna 表 达 水 平 降 低, HMG-CoA 还 原 酶 mrna 表 达 水 平 显 著 增 加, 以 上 3 种 酶 的 基 因 表 达 差 异 可 能 参 与 导 致 了 该 模 型 血 脂 代 谢 紊 乱 在 该 脂 质 代 谢 紊 乱 模 型 中, 分 别 给 予 非 诺 贝 特 (100 mg kg 1 ) 和 阿 托 伐 他 汀 (50 mg kg 1 ), 每 日 灌 胃 1 次, 连 续 2 周, 两 种 药 物 均 可 显 著 改 善 其 血 清 脂 质 代 谢 紊 乱 和 机 体 氧 化 应 激 及 炎 症 状 态 研 究 提 示, 雄 性 金 黄 地 鼠 通 过 连 续 多 次 腹 腔 注 射 P-407 可 形 成 持 续 性 高 血 脂 症, 方 法 简 便 形 成 时 间 短, 且 对 药 物 的 反 应 性 良 好 关 键 词 : 血 脂 异 常 ; 金 黄 地 鼠 ; 脂 质 代 谢 ; 调 脂 药 物 中 图 分 类 号 : R965 文 献 标 识 码 : A 文 章 编 号 : (2011) A dyslipidemia animal model induced by poloxamer 407 in golden hamsters and pilot study on the mechanism LIU Quan, LIU Shuai-nan, LI Lin-yi, CHEN Zhi-yu, LEI Lei, ZHANG Ning, SHEN Zhu-fang * (Institute of Materia Medica, Chinese Academy of Medical Sciences & Peking Union Medical College, Key Laboratory of Bioactive Substances and Resources Utilization of Chinese Herbal Medicine, Ministry of Education of PRC, Beijing , China) Abstract: The aim of this study is to establish a simple and stable model like poloxamer 407 (P-407)-induced dyslipidemia of golden hamster model, and investigate the mechanism of lipid metabolism disturbance in this model. PPARα agonist and HMG-CoA reductase inhibitor were administrated to validate the efficacy on regulating lipid metabolism in the dyslipidemia golden hamster model. Six weeks male golden hamsters were chosen to inject P-407 intraperitoneally at a bolus dose of 300 mg kg 1, an intermittent injection at a dose of 200 mg kg 1 every 72 hours after the bolus. The results showed that P-407-induced golden hamster model characterized as increased serum triglyceride (TG), total cholesterol (TC), free cholesterol (free-cho), cholesteryl ester (CE), free fatty acids (FFA) and apob levels, and the hyperlipidemia state maintained at a stable level persistently. Meanwhile, augmented malondialdehyde (MDA) and nitric oxide (NO) level was observed. LCAT and SR-BⅠ mrna levels in liver of model group were down-regulated (expression ratio is 0.426; 0.783), while HMG-CoA reductase mrna level was up-regulated (expression ratio is 1.493) compared with those of the normal group. The serum cholesterol and triglyceride levels were significantly lower in P-407-induced dyslipidemia hamster model after treated with atorvastatin (Ato) at a dose of 50 mg kg 1 or fenofibrate (Fen) at 100 mg kg 1 for two 收 稿 日 期 : 基 金 项 目 : 国 家 重 大 新 药 创 制 科 技 重 大 专 项 (2009ZX ); 中 央 级 公 益 性 科 研 院 所 基 本 科 研 业 务 费 专 项 基 金 (2006QN30). * 通 讯 作 者 Tel / Fax: , shenzhf@imm.ac.cn

2 刘 泉 等 : 泊 洛 沙 姆 407 诱 发 金 黄 地 鼠 脂 质 代 谢 紊 乱 模 型 及 其 初 步 机 制 407 weeks. These findings suggest that serum lipid distribution in dyslipidemia golden hamster is similar to that of human, and which may be relevant to the disturbance of the enzymes expression involved in lipid metabolism in liver. Results obtained from this study support the concept that dyslipidemia golden hamster may be an adequate animal model to evaluate the efficacy of lipid-lowering agents. Key words: dyslipidemia; golden hamster; lipid metabolism; lipid-lowering agent 脂 质 代 谢 紊 乱 是 动 脉 粥 样 硬 化 (AS) 冠 心 病 2 型 糖 尿 病 等 多 种 疾 病 的 主 要 诱 发 因 素 之 一 [1] 在 调 脂 药 物 的 研 发 和 评 价 中, 选 择 理 想 实 用 的 动 物 模 型 是 关 键 目 前 常 用 的 脂 质 代 谢 异 常 模 型 分 为 自 发 性 化 学 物 质 诱 导 和 转 基 因 等 3 类, 常 选 择 的 动 物 种 类 主 要 有 家 兔 大 鼠 小 鼠 豚 鼠 等 但 研 究 发 现 家 兔 大 鼠 和 小 鼠 形 成 的 高 血 脂 动 物 模 型 与 人 类 脂 质 代 谢 特 点 存 在 一 定 差 异 [2 5], 特 别 是 血 浆 胆 固 醇 及 载 脂 蛋 白 成 分 多 样, 没 有 胆 固 醇 酯 转 移 蛋 白 的 活 性, 且 其 血 脂 较 低 而 不 稳 定, 血 清 TG 和 TC 不 能 同 时 升 高, 不 能 [6, 很 好 地 模 拟 人 类 的 高 脂 血 症 状 态 7] 近 年, 国 外 曾 有 研 究 报 道 了 金 黄 地 鼠 (golden hamster, Mesocricetus auratus) [8, 9] 的 脂 质 代 谢 与 人 类 更 为 相 近, 可 能 更 适 合 于 建 立 类 似 人 类 脂 质 代 谢 紊 乱 特 征 的 高 血 脂 动 物 模 型 以 往 多 以 高 脂 饲 料 喂 养 或 小 剂 量 多 次 注 射 链 脲 霉 素 等 方 法 形 成 高 血 脂 动 物 模 型, 但 模 型 的 形 成 时 间 长, 且 费 用 较 高 近 10 年 来, 采 用 泊 洛 沙 姆 407 (P-407) 诱 导 形 成 高 血 脂 实 验 动 物 模 型 的 方 法 逐 渐 增 多, 主 要 因 其 具 有 毒 性 小 模 型 形 成 时 间 短 等 特 点, 但 并 未 见 采 用 P-407 和 金 黄 地 鼠 形 成 脂 质 代 谢 紊 乱 模 型 的 相 关 报 道 本 研 究 将 选 择 药 用 辅 料 P-407 作 为 诱 导 剂, 采 用 金 黄 地 鼠 建 立 简 单 快 速 类 似 人 类 脂 质 代 谢 紊 乱 特 点 且 经 济 实 用 的 金 黄 地 鼠 脂 质 代 谢 紊 乱 模 型, 并 从 血 清 和 肝 脏 的 脂 质 转 运 代 谢 相 关 酶 的 转 录 水 平 变 化 等 方 面 探 讨 该 模 型 初 步 机 制 材 料 与 方 法 实 验 动 物 雄 性 金 黄 地 鼠 (6 周 龄 ), SPF 级, 体 重 120~130 g, 购 自 北 京 维 通 利 华 实 验 动 物 技 术 有 限 公 司, 许 可 证 编 号 SCXK ( 京 ) 药 品 与 试 剂 泊 洛 沙 姆 (poloxamer 407, P-407) 购 自 Sigma 公 司 ; 甘 油 三 酯 (TG) 总 胆 固 醇 (TC) 低 密 度 脂 蛋 白 胆 固 醇 (LDL-C) 高 密 度 脂 蛋 白 胆 固 醇 (HDL-C) 等 测 定 试 剂 盒 ( 北 京 中 生 北 控 生 物 科 技 股 份 有 限 公 司 ); 游 离 胆 固 醇 (free-cho) 胆 固 醇 酯 (CE) 等 测 定 试 剂 盒 ( 北 京 普 利 莱 基 因 技 术 有 限 公 司 ); 游 离 脂 肪 酸 (FFA) 测 定 试 剂 盒 ( 日 本 第 一 化 学 药 品 株 式 会 社 ); 载 脂 蛋 白 A-Ⅰ (apoa-Ⅰ) 载 脂 蛋 白 B (apob) 测 定 试 剂 盒 ( 北 京 利 德 曼 生 化 技 术 有 限 公 司 ); 超 氧 化 物 歧 化 酶 (SOD) 丙 二 醛 (MDA) 一 氧 化 氮 (NO) 等 测 定 试 剂 盒 ( 南 京 建 成 生 物 工 程 研 究 所 ); 反 转 录 试 剂 Real-time PCR 试 剂 盒 [ 宝 生 物 工 程 ( 大 连 ) 有 限 公 司 ] 引 物 由 上 海 英 骏 生 物 技 术 有 限 公 司 合 成 非 诺 贝 特 (fenofibrate, Fen) 片 剂 由 北 京 益 民 药 业 有 限 公 司 提 供 ; 阿 托 伐 他 汀 (atorvastatin, Ato) 购 自 辉 瑞 制 药 有 限 公 司 主 要 仪 器 μ-quant 酶 标 仪 ( 美 国 Bio-Tek 公 司 ); JY-92 II 型 超 声 破 碎 仪 ( 宁 波 新 芝 科 技 股 份 有 限 公 司 ); 3-18K 型 低 温 高 速 离 心 机 ( 德 国 Sigma 公 司 ); HZQ-C 空 气 浴 振 荡 器 ( 哈 尔 滨 东 明 医 疗 仪 器 厂 ); PTC-200 多 功 能 型 热 循 环 仪 (Bio-Rad 公 司 ); ABI7000 型 荧 光 定 量 PCR 仪 ( 美 国 应 用 生 物 系 统 公 司 ) 模 型 形 成 及 动 物 分 组 选 择 6 周 龄 雄 性 金 黄 地 鼠 40 只, 其 中 10 只 作 为 正 常 对 照, 另 30 只 动 物 用 于 形 成 脂 质 代 谢 紊 乱 模 型 于 实 验 第 天, 分 别 以 和 200 mg kg 1 剂 量 腹 腔 注 射 P-407 溶 液, 正 常 对 照 组 (normal, n = 10) 腹 腔 注 射 等 体 积 生 理 盐 水, 注 射 前 动 物 均 禁 食 4 h, 于 每 次 注 射 后 第 24 和 48 h 测 定 血 TG 和 TC 水 平, 用 于 考 察 模 型 脂 质 代 谢 随 时 间 的 变 化 趋 势 及 脂 质 代 谢 紊 乱 特 点 ; 依 据 第 1 次 注 射 至 第 7 天 后 模 型 组 血 脂 的 变 化 趋 势 和 特 点, 于 第 8 天 依 据 TG 和 TC 水 平, 将 模 型 组 金 黄 地 鼠 均 分 为 3 组, 每 组 10 只 : 分 别 为 模 型 组 (model), 非 诺 贝 特 治 疗 组 (Fen, 100 mg kg 1 ) 和 阿 托 伐 他 汀 治 疗 组 (Ato, 50 mg kg 1 ), 灌 胃 给 药, 每 日 1 次 同 时 为 了 维 持 模 型 的 高 血 脂 水 平, 其 后 仍 然 为 每 72 h 注 射 P-407 维 持 剂 量 200 mg kg 1 给 药 至 第 15 天 时, 处 死 动 物, 收 集 血 样, 保 留 肝 脏 组 织, 测 定 相 关 血 液 及 肝 脏 生 化 指 标, 并 考 察 该 模 型 肝 脏 脂 代 谢 相 关 酶 活 性 及 转 录 水 平 的 改 变 血 清 和 肝 脏 生 化 指 标 测 定 动 物 血 样 标 本 离 心 10 min (6 000 r min 1 ), 取 血 清 测 定 其 脂 质 含 量 和 氧 化 应 激 相 关 指 标, 包 括 TG TC free-cho CE FFA LDL-C HDL-C apoa-Ⅰ apob SOD MDA 和

3 408 药 学 学 报 Acta Pharmaceutica Sinica 2011, 46 (4): NO 等 取 肝 脏 在 冰 冷 的 生 理 盐 水 中 漂 洗, 除 去 血 液, 滤 纸 拭 干, 称 重 约 100 mg, 超 声 破 碎 (200 W, 8 s, 4 次 ), 匀 浆 介 质 是 预 冷 的 生 理 盐 水, 用 低 温 高 速 离 心 机 r min 1 离 心 10 min, 取 上 清 液, 根 据 试 剂 盒 说 明 书 进 行 肝 脏 脂 质 含 量 测 定 肝 脏 脂 质 代 谢 相 关 基 因 表 达 水 平 的 变 化 采 用 实 时 荧 光 定 量 PCR (real-time PCR) 方 法, 研 究 该 模 型 及 给 药 组 肝 脏 中 脂 质 代 谢 转 运 相 关 酶 在 基 因 水 平 的 变 化, 主 要 包 括 羟 甲 戊 二 酰 辅 酶 A 还 原 酶 (HMG- CoA reductase) 卵 磷 脂 胆 固 醇 酰 基 转 移 酶 (LCAT) 高 密 度 脂 蛋 白 受 体 清 道 夫 受 体 BⅠ (SR-BⅠ) 过 氧 化 物 酶 体 增 殖 物 激 活 受 体 (PPARα) 基 因 各 组 随 机 取 3 只 动 物 的 肝 脏 组 织 100 mg 左 右, 按 照 总 RNA 提 取 试 剂 盒 和 反 转 录 试 剂 盒 操 作 步 骤 提 取 纯 化 RNA, 并 反 转 录 为 cdna, 进 行 PCR 反 应, 实 验 重 复 3 次 引 物 序 列 为 HMG-CoA reductase: 5'-AACACCTGAAG GGTTTGCAG-3' (sense), 5'-TATAGAGGTTGCGTC CTGCC-3' (antisense), 产 物 长 度 104 bp; LCAT: 5'- TGGATGTGCTACCGTAAGACA-3' (sense), 5'-TGT GGTTGTAGACAATCCTGGT-3' (antisense), 产 物 长 度 115 bp; SR-BⅠ: 5'-TTTGGAGTGGTAGTAAAAA GGGC-3' (sense), 5'-TGACATCAGGGACTCAGAGT AG-3' (antisense), 产 物 长 度 71 bp; PPARα: 5'-AGAG CCCCATCTGTCCTCTC-3' (sense), 5'-ACTGGTAGT CTGCAAAACCAAA-3' (antisense), 产 物 长 度 153 bp; β-actin: 5'-GGCTGTATTCCCCTCCATCG-3' (sense), 5'-CCAGTTGGTAACAATGCCATGT-3' (antisense), 产 物 长 度 154 bp 扩 增 采 用 两 步 法 进 行, 条 件 为 第 1 步 : 预 变 性, s; 第 2 步 : PCR 反 应, 95 5 s s; 融 解 曲 线, 共 40 个 循 环 将 各 组 样 本 的 C t 值 通 过 与 其 内 参 基 因 β-actin 的 C t 值 进 行 处 理 计 算 出 2 ΔΔCt, 以 消 除 各 个 样 本 量 的 误 差, 使 数 据 统 一 化, 并 比 较 各 实 验 组 不 同 基 因 的 表 达 差 异 统 计 学 分 析 实 验 数 据 以 x ± s 表 示, 组 间 差 异 的 比 较 采 用 t 检 验 Real-time PCR 数 据 采 用 2 ΔΔCt 法 处 理 结 果 1 泊 洛 沙 姆 407 诱 发 金 黄 地 鼠 形 成 脂 质 代 谢 紊 乱 金 黄 地 鼠 腹 腔 注 射 P-407 后, 其 血 清 TG 和 TC 随 时 间 变 化 的 曲 线 如 图 1 所 示, 正 常 对 照 组 (normal) 的 血 清 TG 和 TC 分 别 约 为 150 和 50 mg dl 1 模 型 组 (model) 的 血 清 TG 和 TC 峰 值 分 别 出 现 在 注 射 P-407 后 第 24 和 48 h, 水 平 分 别 维 持 在 600 和 150 mg dl 1 左 右, 与 正 常 对 照 组 相 比 分 别 升 高 4 倍 和 3 倍, 并 且 上 升 幅 度 适 中 在 第 2 次 注 射 维 持 剂 量 后 即 可 形 成 血 脂 水 平 稳 定 在 一 定 范 围 内 的 较 理 想 的 脂 质 代 谢 紊 乱 模 型 2 非 诺 贝 特 和 阿 托 伐 他 汀 可 改 善 脂 质 代 谢 紊 乱 金 黄 地 鼠 血 清 和 肝 脏 中 脂 质 代 谢 相 关 指 标 由 表 1 结 果 可 见, 已 形 成 的 脂 质 代 谢 紊 乱 金 黄 地 鼠 模 型 组 (model) 与 正 常 对 照 组 (normal) 相 比, 血 清 TG 和 FFA 水 平 显 著 增 加 (P < 0.001); 血 清 TC 和 free-cho 水 平 显 著 升 高 (P < 0.001), 且 CE 水 平 减 少 (P < 0.01); 同 时 发 现 LDL-C/HDL-C 比 率 增 加, 载 脂 蛋 白 apob (LDL-C 重 要 组 成 之 一 ) 水 平 显 著 升 高 (P < 0.001), HDL-C 和 apoa-Ⅰ 水 平 未 见 显 著 变 化 脂 质 代 谢 紊 乱 金 黄 地 鼠 模 型 的 肝 组 织 TG 含 量 显 著 增 加, 但 肝 组 织 TC 含 量 变 化 不 明 显 ( 表 2) Figure 1 The serum lipid profile in P-407 induced dyslipidemia golden hamster. A: Serum triglyceride (TG) level; B: Total cholesterol (TC) level. n = 10, x ± s. * P < 0.05, ** P < 0.01, *** P < vs normal group. Arrow represents the day of injection

4 刘 泉 等 : 泊 洛 沙 姆 407 诱 发 金 黄 地 鼠 脂 质 代 谢 紊 乱 模 型 及 其 初 步 机 制 409 Table 1 Serum lipid responses to marketed lipid-lowering agents in P-407-induced dyslipidemia golden hamster. n = 10, x ± s. ** P < 0.01, *** P < vs normal group; # P < 0.05, ## P < 0.01, ### P < vs model group Parameter Normal Model Fen (100 mg kg 1 ) Ato (50 mg kg 1 ) TG /mg dl ± ± *** ± ## ± ### TC /mg dl ± ± 51.4 *** ± 52.6 ## ± 59.2 ## LDL-C /mg dl ± ± ± 30.6 # 67.8 ± 22.7 ## free-cho /mg dl ± ± 63.8 *** ± 63.9 ## 86.7 ± 71.6 ## CE /mg dl ± ± 22.6 ** 30.6 ± ± 15.1 FFA /μeq L ± ± 23.4 *** ± 18.7 ### ± 27.1 ## apob /mg dl ± ± 9.3 *** 32.6 ± ± 12.1 # Table 2 Hepatic lipid responses to marketed lipid-lowering agents in P-407-induced dyslipidemia golden hamster. n = 10, x ± s. ** P < 0.01 vs normal group; ## P < 0.01 vs model group Group Dose/mg kg 1 TG/mg g 1 (liver) TC/mg g 1 (liver) Normal 7.02 ± ± 0.34 Model 9.58 ± 1.51 ** 1.51 ± 0.21 Fen ± ± 0.17 Ato ± ± 0.25 ## 给 予 市 售 调 脂 药 物 非 诺 贝 特 和 阿 托 伐 他 汀 治 疗 2 周 后, 脂 质 代 谢 紊 乱 金 黄 地 鼠 模 型 血 清 TG TC free-cho LDL-C FFA 水 平 显 著 降 低 (P < 0.05 P < 0.01 P < 0.001), 脂 质 代 谢 紊 乱 得 到 明 显 改 善 上 述 研 究 表 明, PPARα 激 动 剂 类 和 HMG-CoA 还 原 酶 抑 制 剂 类 降 脂 药 物 在 该 模 型 上 均 有 明 显 调 脂 作 用, 进 一 步 说 明 此 模 型 可 用 于 这 两 类 药 物 的 研 究 及 药 效 评 价 3 脂 质 代 谢 紊 乱 金 黄 地 鼠 血 清 中 抗 氧 化 指 标 的 改 变 及 调 脂 药 物 的 影 响 由 表 3 可 见, 脂 质 代 谢 紊 乱 金 黄 地 鼠 模 型 (model) 与 正 常 对 照 组 (normal) 相 比, 其 血 清 SOD 活 力 显 著 降 低 (P < 0.001), 且 MDA 和 NO 含 量 明 显 增 加 (P < 0.01 P < 0.05), 说 明 该 模 型 机 体 抗 氧 化 能 力 下 降, 氧 自 由 基 和 硝 基 自 由 基 含 量 增 加 ; 非 诺 贝 特 和 阿 托 伐 他 汀 治 疗 后, 其 血 清 SOD 活 性 一 定 程 度 增 加, MDA 及 NO 含 量 显 著 降 低 (P < 0.05 P < 0.01), 机 体 氧 化 应 激 状 态 得 到 一 定 程 度 改 善 Table 3 Effects of fenofibrate (Fen) and atorvastatin (Ato) on serum SOD, MDA and NO levels in P-407-induced dyslipidemia golden hamster treated for two weeks. n = 10, x ± s. * P < 0.05, ** P < 0.01, *** P < vs normal group; # P < 0.05, ## P < 0.01 vs model group Group Dose /mg kg 1 SOD/U ml 1 MDA/μmol L 1 NO/μmol L 1 Normal ± ± ± 9.2 Model 73.7 ± 20.0 *** 24.1 ± 12.0 ** 64.3 ± 34.0 * Fen ± ± 5.3 # 25.3 ± 18.8 # Ato ± 30.5 ## 8.1 ± 2.3 ## 14.6 ± 9.0 ## 4 脂 质 代 谢 紊 乱 金 黄 地 鼠 肝 脏 中 脂 质 代 谢 相 关 基 因 变 化 及 调 脂 药 物 的 影 响 脂 质 代 谢 紊 乱 金 黄 地 鼠 模 型 组 肝 脏 中 LCAT 和 SR-BⅠ 的 转 录 水 平 较 正 常 对 照 组 显 著 降 低, HMG- CoA 还 原 酶 的 转 录 水 平 明 显 升 高, 但 是 PPARα 的 表 达 水 平 未 见 显 著 变 化 给 予 市 售 调 脂 药 物 阿 托 伐 他 汀 和 非 诺 贝 特 后, 脂 质 代 谢 紊 乱 模 型 肝 脏 中 LCAT SR-BⅠ 和 PPARα 的 表 达 水 平 显 著 上 调, 且 不 同 程 度 下 调 肝 脏 中 HMG-CoA 还 原 酶 的 表 达 水 平 ( 图 2) 讨 论 本 研 究 中 证 实, 腹 腔 注 射 P-407 后 金 黄 地 鼠 的 血 清 TC TG 能 够 同 时 较 长 期 稳 定 地 维 持 在 较 高 水 平, 并 且 血 清 free-cho LDL-C apob FFA 等 脂 质 相 关 指 标 也 均 显 著 升 高, 血 清 CE 活 性 减 低, 其 血 脂 异 常 变 化 确 实 与 人 类 高 血 脂 病 症 较 接 近 另 外, 此 模 型 还 具 有 高 氧 化 应 激 低 炎 症 特 点, 如 果 长 期 维 持 该 状 态 可 能 会 进 一 步 导 致 其 发 生 胰 岛 素 抵 抗 血 管 内 皮 功 能 紊 乱 以 及 动 脉 粥 样 硬 化 斑 块 的 形 成 发 生 和 发 展 等 [10] 在 建 立 该 模 型 的 方 法 研 究 过 程 中, 发 现 以 下 几 种 因 素 对 模 型 的 形 成 存 在 显 著 影 响 1 在 给 药 途 径 选 择 上, P-407 腹 腔 注 射 引 起 血 脂 升 高 的 幅 度 较 灌 胃 给 药 显 著 ; 2 在 动 物 性 别 选 择 上, P-407 诱 导 雄 性 金 黄 地 鼠 血 脂 异 常 较 雌 性 明 显, 并 且 周 龄 小 (6 周 ) 的 金 黄 地 鼠 血 脂 异 常 个 体 差 异 较 周 龄 大 (24 周 ) 的 动 物 小 ; 3 在 选 择 合 适 的 维 持 剂 量 及 给 药 间 隔 时 间 方 面, 血 清 TG 和 TC 稳 定 峰 值 时 间 分 别 出 现 在 首 剂 量 注 射 后 的 第 24 和 48 h, 而 在 血 脂 水 平 下 降 阶 段 给 予 维 持 注 射 剂 量 P-407, 可 使 血 脂 水 平 稳 定 在 一 定 范 围 P-407 是 一 种 高 分 子 非 离 子 型 表 面 活 性 剂, 在 家 兔 的 静 脉 注 射 毒 性 试 验 中, 500 mg kg 1 以 内 均 属 安 全 范 围, 并 且 大 鼠 和 小 鼠 的 静 脉 注 射 半 数 致 死 剂 量 为 1~7.5 g kg 1, 因 此 具 有 毒 性 低 刺 激 性 小, 且 诱 发 血

5 410 药 学 学 报 Acta Pharmaceutica Sinica 2011, 46 (4): Figure 2 Hepatic enzyme mrna expressions involved in lipid metabolism in P-407-induced dyslipidemia golden hamster, treated separately with fenofibrate (Fen, 100 mg kg 1 ) and atorvastatin (Ato, 50 mg kg 1 ) for two weeks. A comparative threshold cycle (CT) method was used for relative quantification of gene expression using β-actin for normalization. Measurements were carried out in triplicate for each sample. Data represents the mean of at least three independent experiments [11, 脂 升 高 时 间 短 等 特 点 12], 但 目 前 对 其 诱 导 血 脂 升 高 的 具 体 机 制 还 并 不 十 分 清 楚 因 此, 本 研 究 考 察 了 P-407 刺 激 后 金 黄 地 鼠 肝 脏 中 脂 质 代 谢 相 关 酶 的 基 因 表 达 变 化 P-407 能 够 显 著 上 调 金 黄 地 鼠 肝 脏 中 HMG-CoA 还 原 酶 的 mrna 表 达 水 平, 并 下 调 LCAT 的 表 达 水 平 其 中 HMG-CoA 还 原 酶 是 胆 固 醇 合 成 过 程 中 的 限 速 酶, 卵 磷 脂 胆 固 醇 酰 基 转 移 酶 (LCAT) 是 催 化 胆 固 醇 酯 (CE) 合 成 的 关 键 酶, 这 两 种 蛋 白 主 要 参 与 胆 固 醇 的 合 成 和 酯 化, 是 影 响 机 体 胆 固 醇 水 平 的 关 键 酶 因 此, P-407 升 高 血 清 胆 固 醇 的 作 用 可 能 是 通 过 对 这 两 个 酶 的 调 节 实 现 的 生 化 指 标 测 定 时 作 者 并 未 发 现 肝 脏 内 胆 固 醇 含 量 增 加, 这 可 能 与 肝 脏 内 与 胆 固 醇 转 运 相 关 其 他 酶 活 性 的 变 化 有 关, 本 研 究 并 未 发 现 关 键 改 变 所 在, 这 也 提 示 P-407 在 引 起 肝 脏 脂 质 合 成 发 生 改 变 时, 也 可 能 对 其 摄 取 和 分 泌 环 节 产 生 影 响 另 外, 在 观 察 肝 脏 生 化 指 标 时 发 现, P-407 能 够 诱 导 肝 脏 中 甘 油 三 酯 的 堆 积, 并 引 起 血 清 甘 油 三 酯 升 高, 但 模 型 肝 脏 中 PPARα 的 基 因 表 达 并 未 发 生 显 著 变 化, 因 此 P-407 对 甘 油 三 酯 水 平 的 影 响 可 能 不 依 赖 于 PPARα 途 径 通 过 考 察 该 模 型 对 已 有 常 用 调 血 脂 药 物 的 反 应 性, 发 现 非 诺 贝 特 能 够 明 显 上 调 肝 脏 中 PPARα LCAT 和 SB-RⅠ 的 基 因 表 达, 同 时 对 HMG-CoA 还 原 酶 的 基 因 表 达 具 有 一 定 的 抑 制 作 用 ; HMG-CoA 还 原 酶 抑 制 剂 阿 托 伐 他 汀 除 对 HMG-CoA 还 原 酶 具 有 显 著 抑 制 作 用 外, 对 PPARα LCAT 和 SB-RⅠ 的 基 因 表 达 也 具 有 一 定 的 上 调 作 用 因 此, 两 种 调 脂 药 物 作 预 防 给 药 和 治 疗 性 给 药, 在 该 脂 质 代 谢 紊 乱 金 黄 地 鼠 模 型 中 均 具 有 较 好 的 降 血 脂 效 果, 且 重 复 性 较 好, 这 与 两 种 药 物 针 对 肝 脏 中 上 述 脂 质 代 谢 相 关 酶 的 表 达 调 节 有 关 综 上 研 究 表 明, 选 用 P-407 诱 发 金 黄 地 鼠 脂 代 谢 异 常 与 其 他 形 成 模 型 方 法 比 较, 具 有 简 便 省 时 和 稳 定 性 好 等 优 点, 将 成 为 一 种 建 立 脂 质 代 谢 异 常 模 型 的 较 理 想 的 手 段 同 时, 该 模 型 的 建 立 也 为 研 究 与 脂 代 谢 异 常 相 关 疾 病 如 动 脉 粥 样 硬 化 肥 胖 高 血 脂 高 血 压 冠 心 病 糖 尿 病 等 提 供 一 个 强 有 力 的 技 术 平 台 References [1] Derosa G, Salvadeo S, Cicero AF. Prospects for the development of novel anti-hyperlipidemic drugs [J]. Curr Opin Investig Drugs, 2006, 7: [2] Blonder JM, Baird L, Fulfs JC, et al. Dose-dependent hyperlipidemia in rabbits following administration of poloxamer 407 gel [J]. Life Sci, 1999, 65: [3] Elahi MM, Cagampang FR, Mukhtar D, et al. Long-term maternal high-fat feeding from weaning through pregnancy and lactation predisposes offspring to hypertension, raised plasma lipids and fatty liver in mice [J]. Br J Nutr, 2009,

6 刘 泉 等 : 泊 洛 沙 姆 407 诱 发 金 黄 地 鼠 脂 质 代 谢 紊 乱 模 型 及 其 初 步 机 制 : [4] Lloyd DJ, McCormick J, Helmering J, et al. Generation and characterization of two novel mouse models exhibiting the phenotypes of the metabolic syndrome: Apob48-/-Lepob/ob 75; discussion [8] Xie XY, Fu J, Gong YH. Characterization of main biological features of SPF syria golden hamster [J]. Acta Lab Anim Sci Sin ( 中 国 实 验 动 物 学 报 ), 2007, 15: mice devoid of ApoE or Ldlr [J]. Metab, 2008, 294: E Am J Physiol Endocrinol [9] Zhang L, Perdomo G, Kim DH, et al. Proteomic analysis of fructose-induced fatty liver in hamsters [J]. Metabolism, [5] Zhang Z, Wang H, Jiao R, et al. Choosing hamsters but not rats as a model for studying plasma cholesterol-lowering activity of functional foods [J]. Mol Nutr Food Res, 2009, 53: [6] Knopp RH, Paramsothy P, Atkinson B, et al. Comprehensive lipid management versus aggressive low-density lipoprotein 2008, 57: [10] Jang EM, Choi MS, Jung UJ, et al. Beneficial effects of curcumin on hyperlipidemia and insulin resistance in high-fatfed hamsters [J]. Metabolism, 2008, 57: [11] Thomas PJ. The P-407-induced murine model of dosecontrolled hyperlipidemia and atherosclerosis [J]. J Cardiovasc lowering to reduce cardiovascular risk [J]. 2008, 101: 48B 57B. Am J Cardiol, Pharmacol, 2004, 43: [12] Tanaka H, Ishida T, Johnston TP, et al. Role of endothelial [7] Jargin SV. Discussion of evaluation of cholesterol-lowering and antioxidant properties of sugar cane policosanols in hamsters and humans [J]. Appl Physiol Nutr Metab, 2009, 34: lipase in plasma HDL levels in a murine model of hypertriglyceridemia [J]. J Atheroscler Thromb, 2009, 16: 第 十 届 全 国 药 用 植 物 及 植 物 药 学 术 研 讨 会 第 十 届 全 国 药 用 植 物 及 植 物 药 学 术 研 讨 会 定 于 2011 年 8 月 10 日 至 12 日 在 云 南 省 昆 明 市 举 行 本 次 会 议 由 中 国 植 物 学 会 药 用 植 物 及 植 物 药 专 业 委 员 会 中 国 科 学 院 昆 明 植 物 研 究 所 联 合 主 办, 由 中 国 科 学 院 昆 明 植 物 研 究 所 植 物 化 学 与 西 部 植 物 资 源 持 续 利 用 国 家 重 点 实 验 室 承 办 会 议 主 题 是 多 学 科 交 叉, 产 学 研 联 合, 实 现 西 部 药 用 植 物 资 源 的 可 持 续 利 用, 涉 及 药 用 植 物 资 源 现 状 与 展 望 药 用 植 物 与 植 物 药 资 源 调 查 及 品 质 鉴 定 药 用 植 物 与 植 物 药 生 物 活 性 物 质 及 其 作 用 机 制 药 用 植 物 资 源 保 护 与 可 持 续 利 用 药 用 植 物 资 源 与 新 药 研 发 中 药 材 GAP 种 植 问 题 与 对 策 民 族 民 间 药 研 发 及 产 业 化 西 部 药 用 植 物 资 源 实 地 考 察 等 方 面 内 容 会 议 将 邀 请 国 内 外 相 关 领 域 院 士 和 知 名 专 家 学 者 就 国 内 外 药 用 植 物 植 物 药 中 药 民 族 药 和 民 间 药 等 方 面 研 究 的 最 新 进 展 发 展 趋 势 及 热 点 等 作 大 会 报 告 会 议 详 细 信 息 请 参 见 会 议 网 址 : 联 系 人 : 李 丽 玲 单 位 : 中 国 科 学 院 昆 明 植 物 研 究 所 地 址 : 云 南 省 昆 明 市 蓝 黑 路 132 号 ( 邮 编 : ) 电 子 邮 件 : nhtan2011@mail.kib.ac.cn 办 公 电 话 ( 兼 传 真 ):